CN110179810B - 一种具有抗肿瘤作用的药物组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种以壳寡糖和盐酸阿霉素为活性成分的药物组合物。采用将壳寡糖与受试细胞孵育一定时间后再给予盐酸阿霉素的给药方式，可显著降低达到同等肿瘤细胞抑制率的盐酸阿霉素单独用药浓度。该药物组合物在MDA‑MB‑231人乳腺癌细胞，PATU‑8988人胰腺癌细胞，HepG2人肝癌细胞上具有良好的抗肿瘤作用。其制备方法简单，成本低廉，易于在各种药物剂型中应用推广。

Description

一种具有抗肿瘤作用的药物组合物
技术领域
本发明涉及医药领域，具体涉及一种壳寡糖作为药用辅剂的抗肿瘤用途。
背景技术
盐酸阿霉素(Doxorubicin Hydrochloride)是一种广谱抗肿瘤药物，可作用于细胞周期各个时期而诱导细胞凋亡。使用盐酸阿霉素的弊端是其具有强烈的细胞毒性，易致使正常细胞死伤，长期使用还会引发耐药性。因此，临床上常与其他药物联合使用。
壳寡糖(chitosan oligosaccharides)是由来源于虾蟹壳的壳聚糖降解得到的小分子寡糖，聚合度2～10。其具有良好的水溶性，易被分散吸收，还具有广泛生物活性，如抗氧化、抑菌、神经保护、抗凝血、抗肿瘤、降血脂等。壳寡糖作为自然界中唯一带阳离子的天然糖类，不仅可直接通过静电作用靶向改变肿瘤细胞膜通透性，且对正常细胞无毒性作用。也能通过增强免疫***功能，间接起到抗肿瘤作用。
由此，我们设计开发一种含有壳寡糖与盐酸阿霉素的药物组合物，减少单独使用盐酸阿霉素的剂量，减轻其副作用，并改善抗肿瘤效果。
发明内容
本发明目的在于提供一种壳寡糖辅助抗肿瘤的药物组合物及其给药方案，开拓壳寡糖作为功能糖的延伸活性，为医学、食品科学等领域开发天然抗肿瘤制剂提供新资源。为实现上述目的，本发明所采取的技术方案是：
一种以壳寡糖与盐酸阿霉素为活性成分的抗肿瘤组合物，作用于不同肿瘤细胞。以壳寡糖与受试细胞孵育一定时间后再给药盐酸阿霉素，优选时间为0.5～18h。壳寡糖浓度优选范围2～128μg/mL。
该发明的优点在于显著降低肿瘤细胞生存率，与单独给药半数致死量的盐酸阿霉素组相比，肿瘤细胞生存率降低20～30％，并减少对正常细胞的伤害。
附图说明
图1为壳寡糖对正常细胞的生存率曲线。受试细胞为MRC-5
图2为优化壳寡糖浓度及其与受试细胞孵育时间的细胞生存率曲线。受试细胞为MDA-MB-231
具体实施方式
通过以下具体实施方式对实现对本发明的进一步说明。
实施例1壳寡糖对正常细胞生存率影响
选用人胚肺成纤维细胞MRC-5，给与不同浓度壳寡糖24、48、72h，由图1可知，细胞生存率随作用时间延长无显著性差异，说明壳寡糖未抑制正常细胞生存率。
实验过程：接种细胞：细胞生长至90％，进行细胞传代操作，用完全培养基将消化完全的细胞配成单细胞悬液，以5×103个/mL的密度铺板至96孔板，每孔200μL，为防止溶液挥发，边缘孔每孔加150μL DPBS，组别设定为空白组及药物组，每组3个复孔。
培养细胞：将96孔板放入37℃、5％CO2细胞培养箱中贴壁培养24h。
给药：药物组每孔加入含有不同浓度壳寡糖，每孔100μL，对照组每孔加100μL完全培养基，放入培养箱中孵育24、48、72h。
检测：吸取原液，每孔加100μL CCK-8与完全培养基1:10稀释的混合液，孵育1-2h后检测450nm处吸光值。
通过公式计算细胞存活率(％)＝(药物组OD值－空白组OD值)/(对照组OD值－空白组OD值)×100％。
实施例2给药方式考察
比较单独给予受试细胞壳寡糖或盐酸阿霉素，以及联合盐酸阿霉素给药的方式，确定给药方案。
检测盐酸阿霉素对于不同受试细胞的IC50，由表1结果可知，盐酸阿霉素作用于MDA-MB-231细胞的IC50最低，为2.5μg/mL。
在盐酸阿霉素对各受试细胞的IC50浓度下，复配壳寡糖并改变不同给药方式，评价其对各肿瘤细胞的抑制效果。结果如表2所示，壳寡糖单独给药，以及盐酸阿霉素于壳寡糖同时孵育，均未对各受试肿瘤细胞生存率产生显著抑制作用，当以壳寡糖预先孵育再给药盐酸阿霉素后，各肿瘤细胞生存率均显著下降50％以上，其中，MDA-MB-231的细胞生存率降低了83.9％。
细胞培养及检测与计算方法同实施例1。给药评价时，药物组每孔加入含有不同浓度壳寡糖或盐酸阿霉素的培养基，每孔100μL，对照组每孔加100μL完全培养基，放入培养箱中孵育。同时孵育是将一定浓度壳寡糖与盐酸阿霉素同时加入受试细胞中进行孵育。壳寡糖预先孵育是以壳寡糖先与受试细胞孵育一定时间后再加入盐酸阿霉素。盐酸阿霉素用药浓度与其他组终浓度一致。不同细胞株的盐酸阿霉素用药浓度为其IC50值。
表1盐酸阿霉素作用于各受试细胞的IC50
Figure BDA0002105216150000021
表2不同给药方式对肿瘤细胞生存率的影响
Figure BDA0002105216150000022
注：与各细胞株IC50的阳性药物组相比，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。
实施例3壳寡糖预孵时间与浓度优化
以实施例2中具有最佳抗肿瘤效果的MDA-MB-231细胞为受试细胞，进行壳寡糖孵育时间和浓度优化，评价细胞生存率。由图2可知，生存率呈剂量依赖性下降，起效浓度2μg/mL，而128μg/mL以上生存率持平，推测浓度趋向饱和。预孵时间有显著性差异的时间段在0.5～24h，而24h与18h生存率持平，故不选择18～24h。因此，优化的孵育时间0.5～18h，浓度范围为2～128μg/mL。
实验与检测过程同实施例1。给药时，药物组每孔加入含有壳寡糖浓度0.5，2，8，32，128，256μg/mL的培养基，每孔100μL，间隔0.2，0.5，3，18，24h后加盐酸阿霉素(终浓度为MDA-MB-231细胞上的IC50值)。对照组每孔加100μL完全培养基，放入培养箱中孵育。
实施例4盐酸阿霉素用药浓度优化
以不同受试肿瘤细胞的IC50为基础，固定壳寡糖浓度为2μg/mL，依次递减盐酸阿霉素用药浓度，记录细胞生存率50％所需盐酸阿霉素浓度。结果如表3所示，采用壳寡糖预先孵育再给药盐酸阿霉素的方式，各受试肿瘤细胞生存率为50％所对应的盐酸阿霉素浓度均比单独用药时有所降低，其中，MDA-MB-231细胞的盐酸阿霉素用药浓度降低了40％。
实验过程同实施例1。
表3不同给药方式下细胞生存率50％(IC50)对应的盐酸阿霉素用药浓度
Figure BDA0002105216150000031

Claims (2)

1.壳寡糖作为药用辅剂在提高盐酸阿霉素对肿瘤细胞体外抑制效果中的应用，其特征在于，所述应用是以壳寡糖与肿瘤细胞孵育一段时间后再加入盐酸阿霉素，孵育时间为0.5～18h；所述壳寡糖浓度为2μg/mL；且当所述肿瘤细胞为MDA-MB-231人乳腺癌细胞时，盐酸阿霉素的浓度为1.5μg/mL，当所述肿瘤细胞为PATU-8988人胰腺癌细胞时，盐酸阿霉素的浓度为3.5μg/mL、当所述肿瘤细胞为HepG2人肝癌细胞时，盐酸阿霉素的浓度为5.5μg/mL。
2.如权利要求1所述壳寡糖作为药用辅剂在提高盐酸阿霉素对肿瘤细胞体外抑制效果中的应用，其特征在于，壳寡糖聚合度为2～10。
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