CN110121507B - 抗sez6l2抗体和抗体药物缀合物 - Google Patents

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Abstract

本文公开了抗癫痫相关6同源物样2(SEZ6L2)抗体和抗体药物缀合物(ADC)，包括使用所述抗体和ADC的组合物和方法。

Description

抗SEZ6L2抗体和抗体药物缀合物
相关申请
本申请要求2016年12月23日提交的美国临时申请No.62/438,943的优先权，其全部内容通过引用明确地以其整体并入本文。
序列表
本申请包含已经以ASCII格式电子提交的序列表，并且其全部内容通过引用并入本文。在2017年12月22日创建的所述ASCII拷贝命名为127913-00120_SL.txt，且大小为133,786字节。
背景技术
癫痫相关基因6(SEZ6)家族有三个成员：SEZ6、SEZ6L和SEZ6L2(也称为癫痫相关6同源物(小鼠)-样2和癫痫6-样蛋白2)。SEZ6L2是～155kDa的1型跨膜糖蛋白，其具有N-末端信号肽、5个SUSHI结构域、3个CUB结构域和C-末端跨膜结构域，并且SEZ6L2与两个其他家族成员具有约41％的序列同一性。具体地，SEZ6L2基因在用戊四唑(一种癫痫诱导药物)处理后筛选cDNA文库时鉴定(Shimizu-Nishikawa K等1995Brain Res Mol Brain Res 28：201-210；Shimizu-Nishikawa K等1995Biochem Biophys Res Commun 216：382-389)。通过可变剪接产生6种SEZ6L2亚型。人SEZ6L2与小鼠/大鼠和食蟹猴同源物之间的序列同源性分别为96％和99％。
尽管尚未完全了解SEZ6L2的正常生理作用，但SEZ6家族的遗传变异与热性癫痫、双相情感障碍I和可能地孤独症有关(Yu ZL等2007J Neurosci Res 85：166-172；Kumar RA等2009.PLoS One 4:e4582；Mulley JC等2011Neurol Res Int 2011:917565；Konyukh M等2011PLoS One 6:e17289；Xu C，2013J Affect Disord 145：95-99)。对于所有三个SEZ6家族成员缺陷的小鼠具有运动失调、认知缺陷和异常神经元神经支配(Miyazaki T等2006FEBS Lett 580：4057-4064)。还有人提出SEZ6调节小鼠的神经元分支(Gunnersen JM等，2007Neuron 56：621-639)。
在鼠神经元中，已显示SEZ6L2结合天冬氨酸蛋白酶组织蛋白酶D并促进其从反面高尔基体网络运输至内体(Boonen M，等人2016J Cell Sci 129：557-568)。还显示组织蛋白酶D对正常神经元功能至关重要，因为其突变或错误定位与神经退行性疾病密切相关(Siintola E等2006Brain 129：1438-1445；Steinfeld R等2006Am J Hum Genet78：988-998；Tyynela J等2000EMBO J 19：2786-2792)。此外，显示组织蛋白酶D对SEZ6L2的蛋白水解切割释放调节神经元分化的可溶性N-末端片段(Boonen M等2016J Cell Sci 129：557-568)。SEZ6L2也已分别在胰腺细胞和原代神经元中被鉴定为BACE2和BACE1(称为脱落酶的蛋白酶)的底物(Stutzer I，S等2013J Biol Chem 288：10536-10547；Hemming ML等2009PLoS One 4：e8477)。
几个蛋白质组学和转录组学数据库表明SEZ6L2在某些肿瘤中差异性地上调。此外，Ishikawa等(2006Cancer Sci 97：737-745)对原发性肺癌样本进行的调查发现SEZ6L2在比较肿瘤与正常组织时差异表达。Ishikawa还发现78％的非小细胞肺癌(NSCLC)和65％的小细胞肺癌(SCLC)样本对SEZ6L2表达呈阳性。
抗体药物缀合物(ADC)代表一个新的治疗剂种类，其包含通过化学接头与细胞毒性药物缀合的抗体。ADC的治疗概念是将抗体的结合能力与药物结合，其中抗体用于通过结合靶表面抗原而将药物递送至肿瘤细胞。
因此，本领域仍需要抗SEZ6L2特异性抗体和ADC，其可用于治疗癌症的治疗目的。
发明内容
在某些方面，本公开提供抗SEZ6L2抗体和抗体药物缀合物(ADC)。
在一个方面，本公开提供抗人癫痫相关6同源物样2(抗hSEZ6L2)抗体、ADC或其抗原结合片段，其在体内人小细胞肺癌(SCLC)异种移植分析中相对于对SEZ6L2非特异性的人IgG抗体以至少约50％的肿瘤生长抑制％(TGI％)抑制肿瘤生长，其中人IgG抗体在SCLC异种移植分析中以与抗hSEZ6L2抗体、ADC或其抗原结合片段相同的剂量和频率施用。
在本公开的再其他方面，抗体、ADC或其抗原结合片段在体内人SCLC异种移植分析中相对于对SEZ6L2非特异性的人IgG抗体抑制肿瘤生长至少约60％。在某些实施方案中，本公开特征为在体内人SCLC异种移植分析中相对于对SEZ6L2非特异性的人IgG抗体抑制肿瘤生长至少约70％的抗体、ADC或其抗原结合片段。在某些实施方案中，抗体、ADC或其抗原结合片段在体内人SCLC异种移植分析中相对于对SEZ6L2非特异性的人IgG抗体抑制肿瘤生长至少约80％。
在本公开的某些实施方案中，抗体或其抗原结合部分以约1pM(0.001nM)-50nM、约500pM(0.5nM)-20nM、约1nM-10nM或约1nM-5nM的Kd结合huSEZ6L2。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含：包含具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的CDR3的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的CDR3的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的CDR3的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的CDR3的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的CDR3的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的CDR3的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:28的氨基酸序列的CDR3的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:31的氨基酸序列的CDR3的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的CDR3的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的CDR3的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:43的氨基酸序列的CDR3的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:46的氨基酸序列的CDR3的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的CDR3的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的CDR3的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:54的氨基酸序列的CDR3的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的CDR3的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的CDR3的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的CDR3的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的CDR3的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:72的氨基酸序列的CDR3的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的CDR3的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:78的氨基酸序列的CDR3的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的CDR3的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:83的氨基酸序列的CDR3的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的CDR3的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:89的氨基酸序列的CDR3的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:93的氨基酸序列的CDR3的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:95的氨基酸序列的CDR3的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:99的氨基酸序列的CDR3的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的CDR3的轻链可变区；包含具有SEQ IDNO:107的氨基酸序列的CDR3的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:89的氨基酸序列的CDR3的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:112的氨基酸序列的CDR3的重链可变区和包含具有SEQID NO:58的氨基酸序列的CDR3的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的CDR3的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:119的氨基酸序列的CDR3的轻链可变区；包含具有SEQID NO:236的氨基酸序列的CDR3的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:238的氨基酸序列的CDR3的轻链可变区；或包含具有SEQ ID NO:242的氨基酸序列的CDR3的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:245的氨基酸序列的CDR3的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含含有如本文所述的CDR3的重链可变区和如本文所述的CDR3的轻链可变区，且进一步包含：包含具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR2的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的CDR2的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的CDR2的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的CDR2的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的CDR2的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的CDR2的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:27的氨基酸序列的CDR2的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的CDR2的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的CDR2的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR2的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:42的氨基酸序列的CDR2的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR2的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的CDR2的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:49的氨基酸序列的CDR2的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的CDR2的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:57的氨基酸序列的CDR2的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的CDR2的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:65的氨基酸序列的CDR2的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:69的氨基酸序列的CDR2的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:65的氨基酸序列的CDR2的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的CDR2的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:49的氨基酸序列的CDR2的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的CDR2的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:49的氨基酸序列的CDR2的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的CDR2的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR2的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:92的氨基酸序列的CDR2的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR2的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:98的氨基酸序列的CDR2的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:102的氨基酸序列的CDR2的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:106的氨基酸序列的CDR2的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR2的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:111的氨基酸序列的CDR2的重链可变区和包含具有SEQ IDNO:57的氨基酸序列的CDR2的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:69的氨基酸序列的CDR2的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:118的氨基酸序列的CDR2的轻链可变区；包含具有SEQID NO:235的氨基酸序列的CDR2的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR2的轻链可变区；或包含具有SEQ ID NO:241的氨基酸序列的CDR2的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR2的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含含有如本文所述的CDR3和CDR2的重链可变区和含有如本文所述的CDR3和CDR2的轻链可变区。且进一步包含：包含具有SEQID NO:2的氨基酸序列的CDR1的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的CDR1的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的CDR1的重链可变区和包含具有SEQID NO:14的氨基酸序列的CDR1的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的CDR1的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的CDR1的轻链可变区；包含具有SEQID NO:26的氨基酸序列的CDR1的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:30的氨基酸序列的CDR1的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的CDR1的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:37的氨基酸序列的CDR1的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:41的氨基酸序列的CDR1的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:45的氨基酸序列的CDR1的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的CDR1的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:48的氨基酸序列的CDR1的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的CDR1的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:56的氨基酸序列的CDR1的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:60的氨基酸序列的CDR1的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:64的氨基酸序列的CDR1的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的CDR1的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:64的氨基酸序列的CDR1的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:74的氨基酸序列的CDR1的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:48的氨基酸序列的CDR1的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的CDR1的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:48的氨基酸序列的CDR1的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的CDR1的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:37的氨基酸序列的CDR1的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的CDR1的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:37的氨基酸序列的CDR1的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:97的氨基酸序列的CDR1的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:101的氨基酸序列的CDR1的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:105的氨基酸序列的CDR1的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:37的氨基酸序列的CDR1的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:110的氨基酸序列的CDR1的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:114的氨基酸序列的CDR1的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的CDR1的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:117的氨基酸序列的CDR1的轻链可变区；包含具有SEQ ID NO:234的氨基酸序列的CDR1的重链可变区和包含具有SEQ IDNO:37的氨基酸序列的CDR1的轻链可变区；或包含具有SEQ ID NO:240的氨基酸序列的CDR1的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:244的氨基酸序列的CDR1的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQID NO:12的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ IDNO:15的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQID NO:23的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQ ID NO:28的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:27的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ ID NO:31的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQID NO:15的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:30的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQID NO:38的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:37的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQ ID NO:43的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:42的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:41的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ ID NO:46的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQID NO:38的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:45的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQID NO:49的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:48的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQ ID NO:54的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQID NO:57的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:56的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:60的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQID NO:65的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:64的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:69的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ ID NO:72的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQID NO:65的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:64的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:74的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ ID NO:78的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQID NO:49的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:48的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ ID NO:83的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQID NO:49的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:48的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ ID NO:89的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQID NO:38的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:37的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQ ID NO:93的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:92的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ ID NO:95的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQID NO:38的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:37的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQ ID NO:99的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:98的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:97的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQID NO:102的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:101的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQ ID NO:107的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:106的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:105的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ ID NO:89的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQID NO:38的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:37的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQ ID NO:112的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:111的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:110的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQID NO:57的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:114的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:69的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ ID NO:119的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQID NO:118的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:117的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQ ID NO:236的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:235的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:234的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ ID NO:238的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:37的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQ ID NO:242的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:241的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:240的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ ID NO:245的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:244的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:79的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:82的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:84的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:90的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:94的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:96的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:100的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:的氨基酸序列的重链可变区104和包含SEQ ID NO:的氨基酸序列的轻链可变区108。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:109的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:113的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:115的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:116的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:233的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:237的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:239的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:243的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，本公开提供与如本文所述的那些的抗体或其抗原结合部分结合相同表位的抗体或其抗原结合部分。
在其他实施方案中，抗体或其抗原结合部分不结合SEZ6或SEZ6L。
在一个实施方案中，抗体或其抗原结合部分是双特异性抗体或多特异性抗体。
在某些实施方案中，本公开还提供编码本公开的抗体或其抗原结合部分的分离的核酸。
在本公开的一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含选自人IgG恒定结构域、人IgM恒定结构域、人IgE恒定结构域和人IgA恒定结构域的重链免疫球蛋白恒定结构域。在一些实施方案中，IgG恒定结构域选自IgG1恒定结构域、IgG2恒定结构域、IgG3恒定结构域和IgG4恒定结构域。在其他实施方案中，抗体是多特异性抗体。
在本公开的其他实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含Fab、Fab'、F(ab’)、Fv、二硫键连接的Fv、scFv、单结构域抗体和双体抗体。
在其他实施方案中，本公开提供包含如本文所述的抗体或其抗原结合部分和药学上可接受的载体的药物组合物。
在其他实施方案中，本公开提供与至少一种药物缀合的如本文所述的抗体或其抗原结合部分。
在一些实施方案中，至少一种药物选自抗凋亡剂、有丝***抑制剂、抗肿瘤抗生素、免疫调节剂、用于基因疗法的核酸、抗血管生成剂、抗代谢物、含硼药剂、化疗保护剂、激素剂、抗激素剂、皮质类固醇、光活性治疗剂、寡核苷酸、放射性核素剂、放射致敏剂、拓扑异构酶抑制剂和酪氨酸激酶抑制剂。在一个实施方案中，抗肿瘤抗生素是吡咯并苯并二氮杂(PBD)。
在其他实施方案中，至少一种药物选自澳瑞他汀、美登素类和DNA烷化剂。在一个实施方案中，澳瑞他汀是单甲基澳瑞他汀E(MMAE)。在另一实施方案中，美登素类是4-甲基-(4-巯基-1-氧代戊基)-美登素(DM4)。在另一实施方案中，DNA烷化剂是吲哚啉并-苯并二氮杂(IGN)。在一个实施方案中，至少一种药物是吡咯并苯并二氮杂/>(PBD)。
在一些实施方案中，至少一种药物通过接头与抗体或其抗原结合部分缀合，例如，可切割接头或不可切割接头。
在一些实施方案中，澳瑞他汀是单甲基澳瑞他汀E(MMAE)和接头是马来酰亚胺基-己酰基-缬氨酸-瓜氨酸(MC-VC)。在一些实施方案中，美登素类是4-甲基-(4-巯基-1-氧代戊基)-美登素(DM4)和接头是D-Ala-L-dpa或sSPDB。在一些实施方案中，DNA烷化剂是吲哚啉并-苯并二氮杂(IGN)和接头是D-Ala-L-dpa。
在其他方面，本公开提供包含与至少一种药物缀合的抗体或其抗原结合部分的抗体药物缀合物(ADC)，所述药物例如吡咯并苯并二氮杂(PBD)、澳瑞他汀、至少一种美登素类或至少一种DNA烷化剂，其中抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ IDNO:7的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区。
在其他方面，本公开提供提供包含与至少一种药物缀合的抗体或其抗原结合部分的抗体药物缀合物(ADC)，所述药物例如吡咯并苯并二氮杂(PBD)、澳瑞他汀、至少一种美登素类或至少一种DNA烷化剂，其中抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区。
在其他方面，本公开提供提供包含与至少一种药物缀合的抗体或其抗原结合部分的抗体药物缀合物(ADC)，所述药物例如吡咯并苯并二氮杂(PBD)、澳瑞他汀、至少一种美登素类或至少一种DNA烷化剂，其中抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区。
在其他方面，本公开提供提供包含与至少一种药物缀合的抗体或其抗原结合部分的抗体药物缀合物(ADC)，所述药物例如吡咯并苯并二氮杂(PBD)、澳瑞他汀、至少一种美登素类或至少一种DNA烷化剂，其中抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQ ID NO:28的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:27的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ ID NO:31的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:30的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区；
在其他方面，本公开提供提供包含与至少一种药物缀合的抗体或其抗原结合部分的抗体药物缀合物(ADC)，所述药物例如吡咯并苯并二氮杂(PBD)、澳瑞他汀、至少一种美登素类或至少一种DNA烷化剂，其中抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:37的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区。
在其他方面，本公开提供提供包含与至少一种药物缀合的抗体或其抗原结合部分的抗体药物缀合物(ADC)，所述药物例如吡咯并苯并二氮杂(PBD)、澳瑞他汀、至少一种美登素类或至少一种DNA烷化剂，其中抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQ ID NO:43的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:42的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:41的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ ID NO:46的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:45的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区。
在其他方面，本公开提供提供包含与至少一种药物缀合的抗体或其抗原结合部分的抗体药物缀合物(ADC)，所述药物例如吡咯并苯并二氮杂(PBD)、澳瑞他汀、至少一种美登素类或至少一种DNA烷化剂，其中抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:49的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:48的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区。
在其他方面，本公开提供提供包含与至少一种药物缀合的抗体或其抗原结合部分的抗体药物缀合物(ADC)，所述药物例如吡咯并苯并二氮杂(PBD)、澳瑞他汀、至少一种美登素类或至少一种DNA烷化剂，其中抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQ ID NO:54的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:57的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:56的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区。
在其他方面，本公开提供提供包含与至少一种药物缀合的抗体或其抗原结合部分的抗体药物缀合物(ADC)，所述药物例如吡咯并苯并二氮杂(PBD)、澳瑞他汀、至少一种美登素类或至少一种DNA烷化剂，其中抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:60的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ ID NO:66的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:65的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:64的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区。
在其他方面，本公开提供提供包含与至少一种药物缀合的抗体或其抗原结合部分的抗体药物缀合物(ADC)，所述药物例如吡咯并苯并二氮杂(PBD)、澳瑞他汀、至少一种美登素类或至少一种DNA烷化剂，其中抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:69的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ ID NO:72的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:65的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:64的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区。
在其他方面，本公开提供提供包含与至少一种药物缀合的抗体或其抗原结合部分的抗体药物缀合物(ADC)，所述药物例如吡咯并苯并二氮杂(PBD)、澳瑞他汀、至少一种美登素类或至少一种DNA烷化剂，其中抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:74的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ ID NO:78的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:49的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:48的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区。
在其他方面，本公开提供提供包含与至少一种药物缀合的抗体或其抗原结合部分的抗体药物缀合物(ADC)，所述药物例如吡咯并苯并二氮杂(PBD)、澳瑞他汀、至少一种美登素类或至少一种DNA烷化剂，其中抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ ID NO:83的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:49的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:48的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区。
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在其他方面，本公开提供提供包含与至少一种药物缀合的抗体或其抗原结合部分的抗体药物缀合物(ADC)，所述药物例如吡咯并苯并二氮杂(PBD)、澳瑞他汀、至少一种美登素类或至少一种DNA烷化剂，其中抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQ ID NO:99的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:98的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:97的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:102的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:101的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区。
在其他方面，本公开提供提供包含与至少一种药物缀合的抗体或其抗原结合部分的抗体药物缀合物(ADC)，所述药物例如吡咯并苯并二氮杂(PBD)、澳瑞他汀、至少一种美登素类或至少一种DNA烷化剂，其中抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQ ID NO:107的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:106的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:105的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ ID NO:89的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:37的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区。/>
在其他方面，本公开提供提供包含与至少一种药物缀合的抗体或其抗原结合部分的抗体药物缀合物(ADC)，所述药物例如吡咯并苯并二氮杂(PBD)、澳瑞他汀、至少一种美登素类或至少一种DNA烷化剂，其中抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQ ID NO:112的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:111的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:110的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:57的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:114的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区。
在其他方面，本公开提供提供包含与至少一种药物缀合的抗体或其抗原结合部分的抗体药物缀合物(ADC)，所述药物例如吡咯并苯并二氮杂(PBD)、澳瑞他汀、至少一种美登素类或至少一种DNA烷化剂，其中抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:69的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ ID NO:119的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:118的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:117的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区。
在其他方面，本公开提供a提供包含与至少一种药物缀合的抗体或其抗原结合部分的抗体药物缀合物(ADC)，所述药物例如吡咯并苯并二氮杂(PBD)、澳瑞他汀、至少一种美登素类或至少一种DNA烷化剂，其中抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQ ID NO:236的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:235的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:234的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ ID NO:238的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:37的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区。
在其他方面，本公开提供提供包含与至少一种药物缀合的抗体或其抗原结合部分的抗体药物缀合物(ADC)，所述药物例如吡咯并苯并二氮杂(PBD)、澳瑞他汀、至少一种美登素类或至少一种DNA烷化剂，其中抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQ ID NO:242的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:241的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:240的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ ID NO:245的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:244的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区。
在其他实施方案中，ADC的抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链可变区。
在其他实施方案中，ADC的抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链可变区。
在其他实施方案中，ADC的抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的轻链可变区。
在其他实施方案中，ADC的抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列的轻链可变区。
在其他实施方案中，ADC的抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的轻链可变区。
在其他实施方案中，ADC的抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的轻链可变区。
在其他实施方案中，ADC的抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的轻链可变区。
在其他实施方案中，ADC的抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的轻链可变区。
在其他实施方案中，ADC的抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的轻链可变区。
在其他实施方案中，ADC的抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的轻链可变区。
在其他实施方案中，ADC的抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区。
在其他实施方案中，ADC的抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:79的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:82的氨基酸序列的轻链可变区。
在其他实施方案中，ADC的抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:的氨基酸序列的重链可变区84和包含SEQ ID NO:的氨基酸序列的轻链可变区88。
在其他实施方案中，ADC的抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:90的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:94的氨基酸序列的轻链可变区。
在其他实施方案中，ADC的抗体或其抗原结合部分含有包含SEQID NO:96的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:100的氨基酸序列的轻链可变区。
在其他实施方案中，ADC的抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:108的氨基酸序列的轻链可变区。
在其他实施方案中，ADC的抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:109的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:113的氨基酸序列的轻链可变区。
在其他实施方案中，ADC的抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:115的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:116的氨基酸序列的轻链可变区。
在其他实施方案中，ADC的抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:233的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:237的氨基酸序列的轻链可变区。
在其他实施方案中，ADC的抗体或其抗原结合部分含有包含SEQ ID NO:239的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:243的氨基酸序列的轻链可变区。
在一个实施方案中，ADC包含澳瑞他汀，其中澳瑞他汀是单甲基澳瑞他汀E(MMAE)。在另一实施方案中，ADC包含美登素类，其中美登素类是4-甲基-(4-巯基-1-氧代戊基)-美登素(DM4)。在另一实施方案中，ADC包含DNA烷化剂，其中DNA烷化剂是吲哚啉并-苯并二氮杂(IGN)。在一个实施方案中，ADC包含吡咯并苯并二氮杂/>(PBD)。
在一些实施方案中，至少一种药物通过接头与抗体或其抗原结合部分缀合，例如，可切割接头或不可切割接头。
在一些实施方案中，澳瑞他汀是单甲基澳瑞他汀E(MMAE)和接头是马来酰亚胺基-己酰基-缬氨酸-瓜氨酸(MC-VC)。在一些实施方案中，美登素类是4-甲基-(4-巯基-1-氧代戊基)-美登素(DM4)和接头是D-Ala-L-dpa或sSPDB。在一些实施方案中，DNA烷化剂是吲哚啉并-苯并二氮杂(IGN)和接头是D-Ala-L-dpa。
在一个实施方案中，本公开提供包含含有多种本公开的ADC的ADC混合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
在一个实施方案中，ADC混合物具有0-8的平均药物-抗体比率(DAR)。
在另一方面，本公开提供用于治疗患有SEZ6L2相关障碍的受试者的方法，包括施用有效量的包含与至少一种药物(例如，吡咯并苯并二氮杂(PBD)、美登素类或至少一种DNA烷化剂)缀合的抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分的ADC，其中抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分包含：包含含有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ IDNO:8的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区；
包含含有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ IDNO:16的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ IDNO:14的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区；
包含含有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ IDNO:24的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ IDNO:22的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区；
包含含有SEQ ID NO:28的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:27的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ IDNO:31的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ IDNO:30的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区；
包含含有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ IDNO:39的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ IDNO:37的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区；
包含含有SEQ ID NO:43的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:42的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:41的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ IDNO:46的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ IDNO:45的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区；
包含含有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ IDNO:50的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:49的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ IDNO:48的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区；
包含含有SEQ ID NO:54的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ IDNO:58的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:57的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ IDNO:56的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区；
包含含有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:60的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ IDNO:66的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:65的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ IDNO:64的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区；
包含含有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:69的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ IDNO:72的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:65的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ IDNO:64的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区；
包含含有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:74的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ IDNO:78的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:49的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ IDNO:48的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区；
包含含有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ IDNO:83的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:49的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ IDNO:48的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区；
包含含有SEQ ID NO:87的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:85的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ IDNO:89的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ IDNO:37的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区；
包含含有SEQ ID NO:93的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:92的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ IDNO:95的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ IDNO:37的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区；
包含含有SEQ ID NO:99的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:98的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:97的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ IDNO:103的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:102的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ IDNO:101的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区；
包含含有SEQ ID NO:107的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:106的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:105的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQID NO:89的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ IDNO:37的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区；
包含含有SEQ ID NO:112的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:111的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:110的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQID NO:58的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:57的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ IDNO:114的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区；
包含含有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:69的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQ IDNO:119的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:118的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ IDNO:117的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区；
包含含有SEQ ID NO:236的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:235的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:234的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQID NO:238的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQID NO:37的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区；或
包含含有SEQ ID NO:242的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:241的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO:240的氨基酸序列的CDR1域的重链可变区，和包含含有SEQID NO:245的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQID NO:244的氨基酸序列的CDR1域的轻链可变区。
在一个实施方案中，SEZ6L2相关障碍是癌症，例如，小细胞肺癌、***癌(例如，去势抵抗性***癌)和神经内分泌肿瘤。在另一实施方案中，癌症特征为具有SEZ6L2过表达。
在另一方面，本公开提供用于治疗患有SEZ6L2相关障碍的受试者的方法，包括向需要的受试者施用治疗有效量的本公开的ADC。
在另一方面，本公开提供用于抑制或减少患有实体肿瘤的受试者中的实体肿瘤生长的方法，所述方法包括向患有实体肿瘤的受试者施用有效量的本公开的ADC，使得实体肿瘤生长被抑制或减少。
在一个实施方案中，实体肿瘤是小细胞肺癌。在另一实施方案中，实体肿瘤是***肿瘤。在另一实施方案中，实体肿瘤是神经内分泌肿瘤。在一个实施方案中，实体肿瘤特征为具有SEZ6L2过表达。
在一个实施方案中，ADC与另外的药剂或另外的疗法(例如，放疗或化疗剂)组合施用。在一个实施方案中，另外的疗法是PARP抑制剂，例如，奥拉帕尼、卢卡帕尼、尼拉帕尼或iniparib。
附图说明
图1A-1B.抗SEZ6L2抗体在SCLC细胞系中显示体外ADC功效。NCI-H524细胞用10ng/ml的单独抗SEZ6L2单克隆抗体(黑色条)或与小鼠Fab-ZAP第二抗体组合(灰色条；0.4μg/ml)处理。三天后，定量活细胞的百分比并与阳性对照(抗转铁蛋白受体抗体(TR)(图1A)或人抗体1A1(图1B))和阴性对照(小鼠IgG(mIgG)(图1A)或非结合抗体3B5(图1B))进行比较。图1A显示了鼠抗体2E4、3E2、16H8和20C4的结果；图1B显示人抗体1A1、3A1、3A2、3A3、3A4、3B1、3B2、2B3、3B6和人源化抗体2E4、3E2、16H8和20C4的结果。
图2A-2B.抗SEZ6L2抗体在SCLC细胞肿瘤模型中显示体内ADC功效。NCI-H524细胞衍生的肿瘤在裸鼠的侧腹中皮下生长。当肿瘤体积达到250mm3时，将小鼠随机分配到治疗组，并腹膜内注射与MMAE缀合的小鼠亲本克隆mu16H8(mu16H8-MMAE)、与MMAE缀合的mu16H8(16H8)的人源化后代(16H8-MMAE)、裸16H8、与MMAE缀合的小鼠IgG对照(mIgG-MMAE)或单独的PBS。小鼠在10天的时间内给予4次5mg/kg的注射，且小鼠在肿瘤达到1200mm3或变成病态时处死。图2A描绘了缀合的SEZ6L2抗体延缓SCLC肿瘤体内生长的能力，图2B描绘了用缀合的抗SEZ6L2抗体治疗的小鼠的存活增加。
图3A-3F.SEZ6L2ADC调节剂介导SCLC和***癌细胞系中细胞毒性剂的递送。测试与吡咯并苯并二氮杂(PBD)缀合的抗体3E2和1A1对小细胞肺癌和***细胞系细胞的作用。描绘了小细胞肺癌细胞系H524(图3A)、DMS79(图3B)、H209(图3C)和H1048(图3D)及***腺癌细胞系LNCaP(图3E)和22Rv1(图3F)的结果。如图3A-3F所示，当用抗SEZ6L2ADC处理细胞时，与对照hIgG相比，在几种细胞系中观察到更大的活细胞百分比降低。虽然hIgGIgG-PBD在高浓度下可能对细胞是细胞毒性的，但所测试的抗SEZ6L2ADC更有效，指示对SEZ6L2的免疫特异性反应而不是对PBD细胞毒素的一般反应。
图4A-4B.SEZ6L2ADC调节剂抑制体内肿瘤生长。图4A是显示与MMAE缀合的抗SEZ6L2抗体3E2和3A1相对于溶媒或同种型对照抑制小鼠中的NCI-H524肿瘤生长的图。图4B是Kaplan-Meier存活曲线，其显示抗原特异性的存活增加。
图5A-5M.工程化HEK-293细胞上SEZ6L2表面表达的检测。图5A-5L描绘了评估SEZ6L2抗体调节剂是否与人SEZ6L2免疫特异性结合和确定相同的调节剂是否与SEZ6和SEZ6L交叉反应的流式细胞术分析的结果。更特别地，测试本文公开的抗体对过表达SEZ6(293-SEZ6)、SEZ6L(293-SEZ6L)和SEZ6L2(293-SEZ6L2)的人同源物的细胞系的交叉反应性。图5A-5L右侧的曲线图代表293-SEZ6L2。图5A-5L左侧的曲线图代表293-SEZ6L和293-SEZ6。以下抗体的结果在图5A-5L中列出：1A1(图5A)、1C6(图5B)、3A1(图5C)、3A2(图5D)、3A3(图5E)、3B1(图5F)、3B3(图5G)、3B6(图5H)、2E4:4D2(图5I)、3E2:7D4(图5J)、16H8:A3F5(图5K)、20C4:red(图5L)。图5M表示仅含有第二抗体的对照。如通过图5A-M中所示的数据所证明的，SEZ6L2抗体识别过表达SEZ6L2的细胞系，但与其他两个家族成员SEZ6L和SEZ6没有可检测的结合。
图6.SEZ6L2ADC与PARP抑制剂组合显示增强的体外功效。测试与PBD缀合的人源化SEZ6L2抗体3E2(3E2-PBD)以确定当与PARP抑制剂组合时是否发生细胞活力的额外降低。如图6所示，用PARP抑制剂奥拉帕尼单独处理的小细胞肺癌细胞系NCI-209细胞以剂量依赖性方式响应，因为随着抑制剂浓度的增加观察到活细胞百分比的更大降低。与PARP抑制剂和3E2-PBD(10pM)一起孵育的细胞显示更多的活细胞减少，从而证明了累加效应。相反，当IgG-PBD(10pM)与抑制剂组合时，细胞死亡没有可测量的差异，表明对SEZ6L2的免疫特异性反应而不是对PBD细胞毒素的一般反应。
具体实施方式
本公开的各个方面涉及抗SEZ6L2抗体和抗体片段、抗SEZ6L2ADC及其药物组合物，以及用于制备此类抗体和片段的核酸、重组表达载体和宿主细胞。使用本文所述的抗体和ADC检测人SEZ6L2，抑制人SEZ6L2活性(体外或体内)和治疗SEZ6L2相关病症(例如癌症，包括但不限于小细胞肺癌(SCLC)、神经内分泌肿瘤(NETs)和***癌，例如，去势抵抗性***癌)的方法。
I.定义
为了更容易理解本发明，首先定义某些术语。另外，应当注意，每当列举参数的值或值范围时，意图是所述值中间的值和范围成为本发明的部分。
本文可互换使用的术语“癫痫相关6同源物样2抗体”或“抗SEZ6L2抗体”是指特异性结合SEZ6L2的抗体。“结合”目的抗原，即SEZ6L2，的抗体是能够以足够的亲和力结合该抗原的抗体，使得该抗体可用于靶向表达该抗原的细胞。在优选的实施方案中，抗体特异性结合人SEZ6L2(hSEZ6L2)。在另一个优选的实施方案中，抗体不结合SEZ6。在另一个优选的实施方案中，抗体不结合SEZ6L。抗SEZ6L2抗体的实例公开于下面的实施例3和4中。除非另有说明，术语“抗SEZ6L2抗体”意指结合野生型SEZ6L2或SEZ6L2的变体或亚型的抗体。
有六种SEZL2亚型，其通过可变剪接产生。包含910个氨基酸的野生型人SEZ6L2的示例性氨基酸序列在下文提供为SEQ ID NO：167(Uniprot登录号Q6UXD5)，其中信号肽(氨基酸残基1-27)加下划线。野生型SEZ6L2的成熟形式对应于不含信号肽的蛋白质，即SEQ IDNO：167的氨基酸残基28至910。
MGTPRAQHPPPPQLLFLILLSCPWIQGLPLKEEEILPEPGSETPTVASEALAELLHGALLRRGPEMGYLPGSDRDPTLATPPAGQTLAVPSLPRATEPGTGPLTTAVTPNGVRGAGPTAPELLTPPPGTTAPPPPSPASPGPPLGPEGGEEETTTTIITTTTVTTTVTSPVLCNNNISEGEGYVESPDLGSPVSRTLGLLDCTYSIHVYPGYGIEIQVQTLNLSQEEELLVLAGGGSPGLAPRLLANSSMLGEGQVLRSPTNRLLLHFQSPRVPRGGGFRIHYQAYLLSCGFPPRPAHGDVSVTDLHPGGTATFHCDSGYQLQGEETLICLNGTRPSWNGETPSCMASCGGTIHNATLGRIVSPEPGGAVGPNLTCRWVIEAAEGRRLHLHFERVSLDEDNDRLMVRSGGSPLSPVIYDSDMDDVPERGLISDAQSLYVELLSETPANPLLLSLRFEAFEEDRCFAPFLAHGNVTTTDPEYRPGALATFSCLPGYALEPPGPPNAIECVDPTEPHWNDTEPACKAMCGGELSEPAGVVLSPDWPQSYSPGQDCVWGVHVQEEKRILLQVEILNVREGDMLTLFDGDGPSARVLAQLRGPQPRRRLLSSGPDLTLQFQAPPGPPNPGLGQGFVLHFKEVPRNDTCPELPPPEWGWRTASHGDLIRGTVLTYQCEPGYELLGSDILTCQWDLSWSAAPPACQKIMTCADPGEIANGHRTASDAGFPVGSHVQYRCLPGYSLEGAAMLTCYSRDTGTPKWSDRVPKCALKYEPCLNPGVPENGYQTLYKHHYQAGESLRFFCYEGFELIGEVTITCVPGHPSQWTSQPPLCKVTQTTDPSRQLEGGNLALAILLPLGLVIVLGSGVYIYYTKLQGKSLFGFSGSHSYSPITVESDFSNPLYEAGDTREYEVSI
SEZ6L2是癫痫相关基因(SEZ)蛋白家族的成员，该家族包括癫痫蛋白6同源物(SEZ6)和癫痫6样蛋白(SEZ6L)。SEZ6L2与SEZ6和SEZ6L具有约41％的序列同一性。SEZ6L2是1型跨膜糖蛋白，其具有N-末端信号肽、5个SUSHI结构域(SCR重复)、3个CUB(前三个鉴定的含有这样的结构域的蛋白质的首字母：补体因子C1r/C1s、胚胎海胆蛋白uEGF和骨形态发生蛋白1)结构域和C-末端跨膜结构域(Ishikawa等Cancer Sci 2006；97:737-745)。三个CUB结构域包括氨基酸残基173-286(CUB 1)、349-459(CUB 2)和527-638(CUB 3)。五个SUSHI结构域分别包括氨基酸残基288-347、462-525、642-701、703-766和769-830。
如本文所用，术语“特异性结合”或“特异性地结合”是指SEZ6L2抗体或ADC与第二化学物质的相互作用，意指相互作用依赖于化学物质上的特定结构(例如，抗原决定簇或表位)的存在；例如，抗体通常识别并结合具体蛋白质结构而不是一般地结合蛋白质。如果抗体或ADC对表位“A”具有特异性，则含有表位A的分子(或游离的、未标记的A)在含有标记的“A”和抗体的反应中的存在将减少与抗体或ADC结合的标记的A的量。
在一个实施方案中，对SEZ6L2“特异性”的抗体或其抗原结合部分不结合SEZ6。在一个实施方案中，对SEZ6L2“特异性”的抗体或其抗原结合部分不结合SEZ6L。在一个实施方案中，对SEZ6L2“特异性”的抗体或其抗原结合部分不结合SEZ6或SEZ6L。
在一个实施方案中，如本文所用，短语“特异性结合hSEZ6L2”或“与hSEZ6L2特异性结合”是指抗SEZ6L2抗体或ADC以200nM或更小、100nM或更小、75nM或更小、26nM或更小、24nM或更小、12nM或更小、7nM或更小、3nM或更小、2nM或更小、1nM或更小、0.5nM或更小、0.3nM或更小、0.1nM或更小或者0.01nM或更小的解离常数(KD)与hSEZ6L2相互作用的能力。在另一实施方案中，如本文所用，短语“特异性结合hSEZ6L2”或“与hSEZ6L2特异性结合”是指抗SEZ6L2抗体或ADC与hSEZ6L2以约1pM(0.001nM)至50nM、约500pM(0.5nM)至20nM、约1nM至10nM或约1nM至5nM的解离常数(KD)相互作用的能力。在一个实施方案中，KD由表面等离子体共振测定。在另一实施方案中，KD如本文实施例4中所述测定。
术语“抗体”广泛地指免疫球蛋白(Ig)分子(其通常由四条多肽链(两条重(H)链和两条轻(L)链)组成)或其任何功能片段、突变体、变体或衍生物(其保留Ig分子的必要靶标结合特征)。此类突变体、变体或衍生物抗体形式是本领域已知的。下面讨论其非限制性实施方案。
在全长抗体中，每个重链由重链可变区(在本文中缩写为HCVR或VH)和重链恒定区组成。重链恒定区由三个结构域CH1、CH2和CH3组成。每个轻链由轻链可变区(在此缩写为LCVR或VL)和轻链恒定区组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。VH和VL区可以进一步细分为散布有更保守的区域(称为框架区(FR))高变区(称为互补决定区(CDR))。每个VH和VL由三个CDR和四个FR组成，其按照以下顺序从氨基末端到羧基末端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。免疫球蛋白分子可以是任何类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)和类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚类。
如本文所用，术语抗体的“抗原结合部分”(或简称“抗体部分”)是指抗体的一个或多个片段，其保留特异性结合抗原(例如，hIL-13)的能力。已经显示抗体的抗原结合功能可以通过全长抗体的片段执行。此类抗体实施方案还可以是双特异性的、双重特异性的或多特异性的形式；其特异性结合两种或多种不同的抗原。包含在术语抗体的“抗原结合部分”内的结合片段的实例包括(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，包含在铰链区通过二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段；(v)dAb片段(Ward等，(1989)Nature 341:544-546,Winter等，PCT公开WO 90/05144A1，其通过引用并入本文)，其包含单个可变域；(vi)分离的互补决定区(CDR)。此外，尽管Fv片段的两个结构域VL和VH由单独的基因编码，但它们可以通过合成接头使用重组方法接合，使得它们能够作为其中VL和VH区配对以形成单价分子(称为单链Fv(scFv)；参见例如，Bird等(1988)Science 242:423-426；和Huston等(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883)的单个蛋白质链制备。此类单链抗体也旨在包括在术语抗体的“抗原结合部分”内。在某些实施方案中，scFv分子可以并入融合蛋白中。还包括其他形式的单链抗体，例如双体抗体。双体抗体是二价的双特异性抗体，其中VH和VL结构域在单个多肽链上表达，但使用的接头太短而不允许在同一链上的两个结构域之间配对，从而迫使结构域与另一条链的互补结构域配对并产生两个抗原结合位点(参见例如，Holliger,P.等(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448；Poljak,R.J.等(1994)Structure 2:1121-1123)。此类抗体结合部分是本领域已知的(Kontermann和Dubel编辑，Antibody Engineering(2001)Springer-Verlag.NewYork.790pp.(ISBN 3-540-41354-5)。
如本文所用的术语“抗体构建体”是指包含一个或多个本文公开的抗原结合部分的多肽，其与接头多肽或免疫球蛋白恒定结构域连接。接头多肽包含通过肽键连接的两个或更多个氨基酸残基，并用于连接一个或多个抗原结合部分。此类接头多肽是本领域熟知的(参见例如，Holliger,P.等(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448；Poljak,R.J.等(1994)Structure 2:1121-1123)。免疫球蛋白恒定域是指重链或轻链恒定结构域。示例性的人IgG重链和轻链恒定结构域氨基酸序列是本领域已知的并且如下所示。
人IgG重链恒定结构域和轻链恒定结构域的序列
抗体部分，如Fab和F(ab')2片段，可以使用常规技术从完整抗体制备，例如完全抗体的分别木瓜蛋白酶或胃蛋白酶的消化。此外，如本文所述，抗体、抗体部分和免疫粘附分子可以使用标准重组DNA技术获得。
如本文所用，“分离的抗体”意指基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体(例如，特异性结合SEZ6L2的分离的抗体基本上不含特异性结合SEZ6L2以外的抗原的抗体)。然而，特异性结合SEZ6L2的分离的抗体可能具有对其他抗原(例如来自其他物种的SEZ6L2分子)的交叉反应性。此外，分离的抗体可以基本上不含其他细胞物质和/或化学物质。
术语“人源化抗体”是指包含来自非人物种(例如，小鼠)的重链和轻链可变区序列，但其中至少一部分VH和/或VL序列被改变为更“类人”(即更类似于人类种系可变序列)的抗体。特别地，术语“人源化抗体”是免疫特异性地结合目标抗原并且包含基本上具有人抗体的氨基酸序列的框架(FR)区和基本上具有非人抗体的氨基酸序列的互补决定区(CDR)的抗体或其变体、衍生物、类似物或片段。如本文所用，术语“基本上”在CDR的上下文中是指与非人抗体CDR的氨基酸序列具有至少80％、优选至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％相同的CDR。人源化抗体包含至少一个和通常两个可变结构域的基本上全部(Fab、Fab'、F(ab')2、FabC、Fv)，其中所有或基本上所有CDR区对应于非人免疫球蛋白(即，供体抗体)的那些和所有或基本上所有框架区是人免疫球蛋白共有序列的那些。优选地，人源化抗体还包含免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分，通常是人免疫球蛋白的一部分。在一些实施方案中，人源化抗体含有轻链以及至少重链的可变域。抗体还可包括重链的CH1、铰链、CH2、CH3和CH4区。在一些实施方案中，人源化抗体仅含有人源化轻链。在其他实施方案中，人源化抗体仅含有人源化重链。在具体的实施方案中，人源化抗体仅含有人源化轻链可变域和/或人源化重链。
人源化抗体可选自任何类别的免疫球蛋白，包括IgM、IgG、IgD、IgA和IgE，以及任何同种型，包括但不限于IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。人源化抗体可包含来自一种以上类别或同种型的序列，并且特定的恒定结构域可选择以使用本领域熟知的技术优化所需的效应子功能。
术语“Kabat编号”、“Kabat定义”和“Kabat标记”在本文中可互换使用。在本领域中公认的这些术语是指对比抗体的重链和轻链区中的其他氨基酸残基更可变(即，高变)的氨基酸残基或其抗原结合部分编号的***(Kabat等(1971)Ann.NY Acad,Sci.190:382-391和Kabat,E.A.等(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,FifthEdition,U.S.Department of Health and Human Services,NIH Publication No.91-3242)。对于重链可变区，高变区的范围对于CDR1为氨基酸位置31至35，对于CDR2为氨基酸位置50至65，以及对于CDR3为氨基酸位置95至102。对于轻链可变区，高变区的范围对于CDR1为氨基酸位置24到34，对于CDR2为氨基酸位置50到56，以及对于CDR3为氨基酸位置89到97。
如本文所用，术语“CDR”是指抗体可变序列内的互补决定区。在重链(HC)和轻链(LC)的每个可变区中存在三个CDR，其对于每个可变区被称为CDR1、CDR2和CDR3(或特别地HC CDR1、HC CDR2、HC CDR3、LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3)。如本文所用的术语“CDR组”是指在能够结合抗原的单个可变区中存在的三个CDR的组。根据不同的***，这些CDR的确切边界被不同地定义。Kabat描述的***(Kabat等，Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest(National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1987)和(1991))不仅提供了适用于任何抗体可变区域的明确的残基编号***，但也提供限定三个CDR的精确残基边界。这些CDR可以称为Kabat CDR。Chothia和同事(Chothia&Lesk,J.Mol.Biol.196:901-917(1987)及Chothia等，Nature 342：877-883(1989))发现Kabat CDR中的某些子部分采取几乎相同的肽骨架构象，尽管在氨基酸序列水平上具有很大的多样性。这些子部分被命名为L1、L2和L3或H1、H2和H3，其中“L”和“H”分别指定轻链和重链区域。这些区域可称为ChothiaCDR，其边界与Kabat CDR重叠。定义与Kabat CDR重叠的CDR的其他CDR边界由Padlan(FASEBJ.9:133-139(1995))和MacCallum(J Mol Biol262(5):732-45(1996))描述。再其他的CDR边界定义可能不严格遵循上述***之一，但仍然与Kabat CDR重叠，尽管根据特定残基或残基组或甚至整个CDR不显著影响抗原结合的预测或实验发现，它们可以缩短或延长。本文使用的方法可以利用根据任何这些***定义的CDR，虽然优选的实施方案使用Kabat或Chothia定义的CDR。
如本文所用，术语“框架”或“框架序列”是指可变区减去CDR的其余序列。因为CDR序列的确切定义可以通过不同***确定，以框架序列的含义具有相应不同的解释。六个CDR(轻链的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3以及重链的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3)也将轻链和重链的框架区划分为每条链上有四个亚区(FR1、FR2、FR3和FR4)，其中CDR1位于FR1和FR2之间，CDR2位于FR2和FR3之间，和CDR3位于FR3和FR4之间。在没有将特定亚区指定为FR1、FR2、FR3或FR4的情况下，另外所指的框架区表示在单个天然存在的免疫球蛋白链的可变区内的组合FR。如本文所用，FR表示四个亚区中的一个，并且FRs表示构成框架区的四个亚区中的两个或更多个。
人源化抗体的框架和CDR区不需要精确对应于亲本序列，例如，供体抗体CDR或共有框架可以通过至少一个氨基酸残基的置换、***和/或缺失来诱变，使得该位点处的CDR或框架残基不对应供体抗体或共有框架。然而，在优选的实施方案中，这些突变不会是广泛的。通常，至少80％，优选至少85％，更优选至少90％和最优选至少95％的人源化抗体残基对应于亲本FR和CDR序列的那些。如本文所用，术语“共有框架”是指共有免疫球蛋白序列中的框架区。如本文所用，术语“共有免疫球蛋白序列”是指由相关免疫球蛋白序列家族中最常存在的氨基酸(或核苷酸)形成的序列(参见例如，Winnaker,From Genes to Clones(Verlagsgesellschaft,Weinheim,Germany 1987)。在免疫球蛋白家族中，共有序列中的每个位置被该家族中该位置处最常存在的氨基酸占据。如果两个氨基酸以同样频率存在，则任一个可以包含在共有序列中。
关于肽或多肽序列的“百分(％)氨基酸序列同一性”定义为在比对序列和(如果需要)引入空位以实现最大百分序列同一性并且不考虑任何保守置换作为序列同一性的部分后，候选序列中与特定肽或多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。用于确定百分氨基酸序列同一性目的的比对可以以本领域技术范围内的各种方式实现，例如，使用公众可获得的计算机软件，例如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可以确定用于测量比对的适当参数，包括在所比较的序列的全长上实现最大比对所需的任何算法。在一个实施方案中，本公开包括与SEQ ID NO:1-119和156-166任一中所示的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列。
术语“多价抗体”在本文中用于表示包含两个或更多个抗原结合位点的抗体。在某些实施方案中，可以将多价抗体工程化为具有三个或更多个抗原结合位点，并且通常不是天然存在的抗体。
术语“多特异性抗体”是指能够结合两种或更多种不相关抗原的抗体。
如本文中可互换使用的术语“双重可变结构域”或“DVD”是包含两个或更多个抗原结合位点的抗原结合蛋白，并且是四价或多价结合蛋白。这种DVD可以是单特异性的，即能够结合一种抗原，或是多特异性的，即能够结合两种或更多种抗原。包含两个重链DVD多肽和两个轻链DVD多肽的DVD结合蛋白称为DVD Ig。DVD Ig的每一半包含重链DVD多肽和轻链DVD多肽，以及两个抗原结合位点。每个结合位点包含重链可变域和轻链可变域，其中总共6个CDR涉及到每个抗原结合位点的抗原结合中。在一个实施方案中，本文所述的CDR用于抗SEZ6L2DVD中。
术语“活性”包括诸如抗体或ADC对抗原的结合特异性/亲和力(例如，结合hSEZ6L2抗原的抗hSEZ6L2抗体，例如，在体外与野生型SEZ6L2结合、与表达SEZ6L2的癌细胞(例如，神经内分泌肿瘤细胞、肺癌细胞或***癌细胞)上的野生型SEZ6L2结合)和减少或抑制肿瘤细胞增殖或肿瘤生长的活性。
如本文所用的术语“神经内分泌肿瘤”或“NET”或“神经内分泌癌”包括包含神经内分泌特征(基因型或表型)的肿瘤。真或“经典神经内分泌肿瘤(canonical neuroendocrinetumor)”源自内分泌***的细胞并且通常是高度侵袭性的。神经内分泌肿瘤可发生在肾脏、泌尿生殖道(膀胱、***、卵巢、子宫颈和子宫内膜)、胃肠道(胃、结肠)、甲状腺(甲状腺髓样癌)和肺(小细胞肺癌和大细胞神经内分泌癌)。表现出神经内分泌特征的肿瘤也被认为是NET，且包括神经母细胞瘤、甲状腺髓样癌和类癌肿瘤。本文公开的抗体还可有利地用于治疗、预防或诊断基因型或表型模拟、包含、类似或表现出与经典神经内分泌肿瘤的共同性状的假神经内分泌肿瘤(pNET)。“假神经内分泌肿瘤”是由弥漫神经内分泌***的细胞或其中在致癌过程中神经内分泌分化级联异常重新激活的细胞产生的肿瘤。此类pNET通常共有传统定义的神经内分泌肿瘤的某些基因型、表型或生化特征，包括产生生物活性胺、神经递质和肽激素的子集的能力。因此，短语“神经内分泌肿瘤”、“NET”、“神经内分泌癌”、“包含神经内分泌特征的肿瘤”或“表现出神经内分泌特征的肿瘤”应被认为包括神经内分泌肿瘤和假神经内分泌肿瘤两者。
术语“表位”是指抗体、抗体片段或ADC结合的抗原区域。在某些实施方案中，表位决定簇包括分子如氨基酸、糖侧链、磷酰基或磺酰基的化学活性表面组群，并且在某些实施方案中，可以具有特定的三维结构特征和/或特定的电荷特征。在某些实施方案中，当抗体在蛋白质和/或大分子的复杂混合物中优先识别其靶抗原时，抗体被称为特异性地结合抗原。
如本文所用，术语“表面等离子共振”是指通过检测生物传感器基质内蛋白质浓度的变化来分析实时生物特异性相互作用的光学现象，例如使用BIAcore***(PharmaciaBiosensor AB,Uppsala,Sweden and Piscataway,NJ)。对于进一步说明，参见U.等(1993)Ann.Biol.Clin.51:19-26；/>U.等(1991)Biotechniques 11:620-627；Johnsson,B.等(1995)J.Mol.Recognit.8:125-131；和Johnnson,B.等(1991)Anal.Biochem.198:268-277。
如本文所用，术语“kon”或“ka”意指抗体与抗原结合以形成抗体/抗原复合物的结合速率常数。
如本文所用，术语“koff”或“kd”意指抗体从抗体/抗原复合物解离的解离速率常数。
如本文所用，术语“KD”意指特定抗体-抗原相互作用的平衡解离常数。KD通过ka/kd计算。在一个实施方案中，本公开的抗体具有大约10-8M或更小、10-9M或更小、10-10M或者10-11M或更小的KD。
如本文所用，术语“竞争性结合”是指其中第一抗体与第二抗体竞争第三分子(例如抗原)上的结合位点的情况。在一个实施方案中，使用FACS分析确定两种抗体之间的竞争性结合。
术语“竞争性结合测定”是用于确定两种或更多种抗体是否结合相同表位的分析。在一个实施方案中，竞争性结合测定是竞争荧光激活细胞分选(FACS)分析，其用于通过确定标记抗体的荧光信号是否由于引入非标记抗体而减少来确定两种或更多种抗体是否结合相同表位，其中对相同表位的竞争将降低荧光水平。
如本文所用的术语“标记的抗体”是指具有加入的标记的抗体或其抗原结合部分，该标记用于鉴定结合蛋白，例如抗体。优选地，标记是可检测的标记，例如，放射性标记的氨基酸的掺入或可以通过标记的抗生物素蛋白检测(例如，含荧光标记或可以通过光学或比色法检测的酶活性的链霉抗生物素蛋白)的生物素基部分连接到多肽。用于多肽的标记的实例包括但不限于以下：放射性同位素或放射性核素(例如，3H、14C、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I、177Lu、166Ho或153Sm)；荧光标记(例如，FITC、罗丹明、镧系元素荧光团)、酶标记(例如，辣根过氧化物酶、荧光素酶、碱性磷酸酶)；化学发光标记；生物素基团；由第二报告体识别的预定多肽表位(例如，亮氨酸拉链对序列、第二抗体的结合位点、金属结合结构域、表位标签)；和磁性剂，如钆螯合物。
术语“抗体-药物缀合物”或“ADC”是指与一种或多种化学药物(在本文中也称为药剂)化学连接的结合蛋白如抗体或其抗原结合片段)，其可以任选地是治疗剂或细胞毒性剂。在优选的实施方案中，ADC包括抗体、细胞毒性或治疗药物，以及能够使药物与抗体连接或缀合的接头。ADC通常具有与抗体缀合的1至8个中任一值的药物，包括2、4、6或8的载药物质。可以包含在ADC中的药物的非限制性实例是有丝***抑制剂、抗肿瘤抗生素、免疫调节剂、用于基因治疗载体、烷化剂、抗血管生成剂、抗代谢药、含硼药剂、化疗保护剂、激素、抗激素剂、皮质类固醇、光活性治疗剂、寡核苷酸、放射性核素剂、拓扑异构酶抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂和放射致敏剂。
本文中可互换使用的术语“抗癫痫相关6同源物样2抗体药物缀合物”、“抗SEZ6L2抗体药物缀合物”或“抗SEZ6L2ADC”是指包含特异性结合SEZ6L2的抗体的ADC，其中抗体与一种或多种化学药剂或有效负载缀合。在一个实施方案中，化学药剂通过接头与抗体连接。
在一个实施方案中，抗SEZ6L2ADC与DNA烷化剂缀合，例如吲哚啉并-苯并二氮杂(IGN)。在一个实施方案中，DNA烷化剂例如IGN通过接头与抗体缀合，例如可切割的肽接头(D-Ala-L-dpa)。在一个实施方案中，抗SEZ6L2ADC与吡咯并苯并二氮杂/>(PBD)缀合。
在另一实施方案中，抗SEZ6L2ADC与微管抑制剂缀合，例如澳瑞他汀，例如单甲基澳瑞他汀E(MMAE)。在另一实施方案中，抗SEZ6L2ADC与微管抑制剂缀合，例如美登素类，例如DM4。在一个实施方案中，澳瑞他汀(例如，MMAE)通过接头，例如马来酰亚胺基-己酰基-缬氨酸-瓜氨酸(MC-VC)，与抗体缀合。在另一实施方案中，美登素类(例如，DM4)通过接头与抗体缀合，例如可切割的肽接头(D-Ala-L-dpa)或带电的位阻二硫化物N-琥珀酰亚胺基-4-(2-吡啶基二硫代)丁酸酯(sSPDB)接头。
如本文所用，术语“DNA烷化剂”是指DNA烷化剂家族，包括吲哚啉并-苯并二氮杂(IGN)，其是可用于ADC中的细胞毒性小分子。可以用作ADC中的细胞毒性有效负载的IGNDNA烷化剂的实例描述于Miller等(2016)Molecular Cancer Therapeutics,vol.15(8)中。在一个实施方案中，本文所述的抗SEZ6L2抗体与IGN缀合以形成抗SEZ6L2ADC。
本文所用的术语“美登素类”是指美登素及其类似物，它们是有效的微管靶向化合物，其在有丝***时抑制细胞增殖。美登素类包括DM1、DM2、DM3和DM4，并通过涉及微管动态不稳定性抑制的共同机制发挥其抗有丝***作用(参见，例如，Emin Oroudjev等(2010)Molecular Cancer Therapeutics,Vol.9(10))。在一个实施方案中，本文所述的抗SEZ6L2抗体与DM4缀合以形成抗SEZ6L2ADC。
如本文所用，术语“澳瑞他汀”是指起抗微管抑制剂作用的抗有丝***剂家族。澳瑞他汀衍生物也包括在术语“澳瑞他汀”的定义内。澳瑞他汀的实例包括但不限于澳瑞他汀E(AE)、单甲基澳瑞他汀E(MMAE)、单甲基澳瑞他汀F(MMAF)以及多拉司他汀的合成类似物。在一个实施方案中，本文所述的抗SEZ6L2抗体与澳瑞他汀(例如MMAE)缀合以形成抗SEZ6L2ADC。
术语“药物-抗体比率”或“DAR”是指与ADC的抗体连接的药物(例如，IGN、澳瑞他汀或美登素)的数量。ADC的DAR可以在1到8的范围内，尽管较高的负载例如10也是可能的，这取决于抗体上的连接位点的数量。术语DAR可以用于指加载到单个抗体上的药物的数量，或者，可以用于指一组ADC的平均或均值DAR。
如本文所用，术语“SEZ6L2相关障碍”包括通过在疾病或病症的病因学过程中SEZ6L2遗传组分或表达的表型或基因型异常而标记、诊断、检测或鉴定的任何病症或疾病(包括增殖性病症，例如癌症)。在这方面，SEZ6L2表型异常或决定子可以例如包括SEZ6L2蛋白表达水平的增加或降低、某些可定义细胞群体上的异常SEZ6L2蛋白表达或细胞生命周期的不适当时期或阶段的异常SEZ6L2蛋白表达。应当理解，SEZ6L2的基因型决定子(例如，mRNA转录水平)的类似表达模式也可用于分类或检测SEZ6L2相关障碍。在一个实施方案中，SEZ6L2相关障碍是SCLC。在一个实施方案中，SEZ6L2相关障碍是***癌，例如去势抵抗性***癌(CRPC)。在另一实施方案中，SEZ6L2相关障碍是神经内分泌肿瘤。
术语“癌症”意指或描述哺乳动物中通常以不受调节的细胞生长为特征的生理状况。癌症的实例包括但不限于癌瘤、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴系恶性肿瘤。此类癌症的更具体的实例包括神经内分泌肿瘤、小细胞肺癌(SCLC)、***癌(例如，去势抵抗性***癌(CRPC))、结肠癌、结肠直肠癌、头颈癌、乳腺癌(例如，三联阴性乳腺癌(TNBC)、Her2阳性乳腺癌)、胰腺癌、鳞状细胞瘤、鳞状细胞癌(如鳞状细胞肺癌或鳞状细胞头颈癌)、肾细胞癌、甲状腺髓样癌、非小细胞肺癌(NSCLC)(例如鳞状NSCLC、大细胞NSCLC、肺类癌NSCLC)、***癌、皮肤癌、浆液性卵巢癌和外阴癌。
在一个实施方案中，抗体或ADC施用于患有可能过表达SEZ6L2的实体肿瘤的患者。在一个实施方案中，抗体或ADC施用于患有小细胞肺癌(SCLC)的患者。在另一实施方案中，抗体或ADC施用于患有***癌例如去势抵抗性***癌(CRPC)的患者。在另一个实施方案中，抗体或ADC施用于患有神经内分泌肿瘤的患者。在一个实施方案中，抗体或ADC施用于患有实体肿瘤(包括晚期实体肿瘤)的患者。在另一实施方案中，抗体或ADC施用于患有表达SEZ6L2的肿瘤的患者。
如本文所用的术语“表达SEZ6L2的肿瘤”是指表达SEZ6L2蛋白的肿瘤。在一个实施方案中，使用肿瘤细胞膜的免疫组织化学染色测定肿瘤中的SEZ6L2表达，其中肿瘤样品中高于背景水平的任何免疫组织化学染色表明肿瘤是表达SEZ6L2的肿瘤。用于检测肿瘤中的SEZ6L2表达的方法是本领域已知的。例如，使用原位杂交(ISH)分析显示SEZ6L2在66％的SCLC肿瘤和53％的***癌样品中高表达，在正常样品中具有低水平或不可检测的水平(参见实施例1)。相反，“SEZ6L2阴性肿瘤”定义为通过免疫组织化学技术测定的在肿瘤样品中缺乏高于背景的SEZ6L2膜染色的肿瘤。
术语“过表达”、“超表达”或“过表达的”可互换地指与正常细胞相比，通常在癌细胞中以可检测的更高水平转录或翻译的基因。因此，过表达是指蛋白质和RNA的过表达(由于增加的转录、转录后加工、翻译、翻译后加工、改变的稳定性和改变的蛋白质降解)，以及由于改变的蛋白质转运模式(增加的核定位)引起的局部过表达和增强的功能活性，例如，在增加的酶底物水解中的功能活性。因此，过表达是指蛋白质或RNA水平。与正常细胞或比较细胞相比，过表达也可以是50％、60％、70％、80％、90％或更多。在某些实施方案中，抗SEZ6L2抗体或ADC用于治疗可能过表达SEZ6L2的实体肿瘤。
本文所用的术语“施用”是指物质(例如，抗SEZ6L2抗体或ADC)的递送以实现治疗目的(例如，治疗SEZ6L2相关障碍或肿瘤的抑制或减少)。施用方式可以是肠胃外、肠内和局部。肠胃外施用通常通过注射，且包括但不限于静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、被膜下、蛛网膜下、脊柱内和胸骨内注射和输注。
如本文所用，术语“组合疗法”是指施用两种或更多种治疗物质，例如，抗SEZ6L2抗体或ADC和另外的治疗剂。另外的治疗剂可以与抗SEZ6L2抗体或ADC的施用同时施用、之前施用或之后施用。
如本文所用，术语“有效量”或“治疗有效量”是指药物(例如，抗体或ADC)足以减轻或改善障碍(例如，癌症)或其一种或多种症状的严重性和/或持续时间，预防障碍的进展，引起障碍的消退，预防与障碍相关的一种或多种症状的复发、发展、发作或进展，检测障碍或者增强或改善另一种疗法的预防或治疗效果(例如，预防或治疗剂)的量。例如，抗体或ADC的有效量可以抑制肿瘤生长(例如，抑制肿瘤体积的增加)、减少肿瘤生长(例如，减小肿瘤体积)、减少癌细胞的数量和/或在某种程度上减轻与癌症相关的一种或多种症状。有效量可以例如改善无病生存(DFS)、改善总体存活(OS)或降低复发的可能性。
如本文所用，术语“异种移植分析”是指人肿瘤异种移植分析，其中人肿瘤细胞，如人小细胞肺癌肿瘤细胞，在皮肤下或在肿瘤所起源的器官类型中移植到不排斥人细胞的免疫低下小鼠中。
在以下小节中更详细地描述了本发明的各个方面。
II.抗SEZ6L2抗体
本文公开的一个方面提供人源化抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分。本文公开的另一方面提供人抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分。在一个实施方案中，本文公开的抗体结合人SEZ6L2。在另一实施方案中，本文公开的抗体结合食蟹猴SEZ6L2。在另一实施方案中，本文公开的抗体不结合SEZ6或SEZ6L。在另一实施方案中，本文公开的抗体结合在肿瘤细胞上表达的人SEZ6L2。
本文公开的另一方面的特征为包含本文所述的抗SEZ6L2抗体和至少一种药物的抗体药物缀合物(ADC)，例如，但不限于，DNA烷化剂如IGN、微管抑制剂如澳瑞他汀(例如MMAE)或美登素类(例如DM4)，或吡咯并苯并二氮杂(PBD)。本文公开的抗体或ADC具有包括但不限于在体外与人或食蟹猴野生型SEZ6L2结合、与表达SEZ6L2的肿瘤细胞(例如，肺癌或***癌肿瘤细胞，例如，去势抵抗性***癌(CRPC))上的野生型SEZ6L2结合和减少或抑制肿瘤细胞增殖或肿瘤生长(例如肺肿瘤或***瘤生长)的特征。
在一个实施方案中，公开了抗SEZ6L2人源化和人抗体，其具有在体内抑制SCLC肿瘤细胞增殖的能力，如下文实施例中所述。这些新型抗体在本文中统称为“SEZ6L2抗体”。抗SEZ6L2抗体、ADC或其抗原结合片段能够抑制或减少体内肿瘤生长，例如，在裸鼠中的NCI-H524人小细胞肺癌(SCLC)异种移植分析中，如实施例6中所述。在各种实施方案中，抗SEZ6L2抗体、ADC或其抗原结合片段能够调节SEZ6L2的生物学功能。在前述方面的其它实施方案中，抗SEZ6L2抗体、ADC或其抗原结合片段结合过表达SEZ6L2的细胞上的SEZ6L2。在进一步的实施方案中，抗SEZ6L2抗体、ADC或其抗原结合片段不结合SEZ6或SEZ6L。
因此，本公开包括抗SEZ6L2抗体、ADC或其抗原结合片段，其有效抑制或减少肿瘤生长。在一个实施方案中，抗SEZ6L2抗体、ADC或其抗原结合片段不结合SEZ6或SEZ6L。
在一个实施方案中，抗SEZ6L2抗体、ADC或其抗原结合片段能够在体内异种移植小鼠模型中抑制或减少肿瘤生长，例如在裸鼠的NCI-H524人小细胞肺癌(SCLC)异种移植分析中。例如，抗体或其抗原结合部分能够在体内人小细胞肺癌(SCLC)异种移植分析中相对于对SEZ6L2不是特异性的人IgG抗体抑制肿瘤生长至少约50％。在某些实施方案中，当以相同剂量和给药周期施用时，抗SEZ6L2抗体、ADC或其抗原结合片段能够在体内人小细胞肺癌(SCLC)异种移植分析中相对于对SEZ6L2不是特异性的人IgG抗体抑制或减少肿瘤生长至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％或至少约80％。在某些实施方案中，当以相同剂量和给药周期施用时，抗SEZ6L2抗体、ADC或其抗原结合片段能够在体内人小细胞肺癌(SCLC)异种移植分析中相对于对SEZ6L2不是特异性的人IgG抗体抑制或减少肿瘤生长约80％至约90％或约84％至约90％或约88％至约90％。在一些实施方案中，当以相同剂量和给药周期施用时，抗SEZ6L2抗体、ADC或其抗原结合片段能够在体内人小细胞肺癌(SCLC)异种移植分析中相对于对SEZ6L2不是特异性的人IgG抗体抑制或减少肿瘤生长超过7天、超过14天、超过1个月、超过2个月、超过3个月、超过4个月、超过5个月、超过6个月或超过1年，或者超过30、40、50、60、70、80、90、100或110天。
具有任何前述特征的组合的抗体被考虑作为本公开的方面。下面更详细描述的ADC也可以具有任何前述特征。
本公开的一个方面特征为抗人SEZ6L2(抗hSEZ6L2)抗体药物缀合物(ADC)，其包含通过接头与药物缀合的抗hSEZ6L2抗体。本文描述了可用于ADC中的示例性抗SEZ6L2抗体(及其序列)。
本文所述的抗SEZ6L2抗体为ADC提供结合SEZ6L2的能力，使得连接于抗体的细胞毒性分子(例如，DNA烷化剂，例如IGN，微管抑制剂如澳瑞他汀(例如，MMAE)或美登素类(例如，DM4))可以递送至表达SEZ6L2的细胞，特别是表达SEZ6L2的癌细胞。
尽管在全文中使用术语“抗体”，但应注意抗体片段(即抗SEZ6L2抗体的抗原结合部分)也包括在本公开中并且可包括在全文中描述的实施方案(方法和组合物)中。例如，抗SEZ6L2抗体片段可以与药物(例如，DNA烷化剂，例如IGN，微管抑制剂如澳瑞他汀(例如，MMAE)或美登素类(例如，DM4))缀合，如本文所述。在某些实施方案中，抗SEZ6L2抗体结合部分是Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、二硫键连接的Fv、scFv、单结构域抗体或双体抗体。
II.A.人源化抗体
在如下实施例2中所述产生17种抗hSEZ6L2鼠抗体后，选择鼠抗体mu16H8、mu3E2、mu20C4和Mu2E4用于人源化(如下文实施例3中所述)，导致产生四种人源化抗体(16H8、3E2、20C4和2E4)。这些人源化抗体的重链和轻链可变区氨基酸序列示于表6中。
因此，在一个实施方案中，人源化抗hSEZ6L2抗体或其抗原结合部分包含含有选自1、9、17和25的氨基酸序列的重链可变区；和包含含有选自5、13、21和29的氨基酸序列的轻链可变区。
在一个实施方案中，人源化抗hSEZ6L2抗体或其抗原结合部分包含选自SEQ IDNO：2、3和4；SEQ ID NO：10、11和12；SEQ ID NO：18、19和20及SEQ ID NO：26、27和28的HCCDR组(CDR1、CDR2和CDR3)；和选自SEQ ID NO：6、7和8；SEQ ID NO：14、15和16；SEQ ID NO：22、23和24及SEQ ID NO：30、15和31的LC轻链CDR组(CDR1、CDR2和CDR3)。
在一个实施方案中，抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分是人源化抗体16H8。16H8抗体包含重链可变区，其包含含有SEQ ID NO：4的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO：3的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：2的氨基酸序列的CDR1域；和轻链可变区，其包含含有SEQ ID NO：8的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO：7的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：6的氨基酸序列的CDR1域。在进一步的实施方案中，本文公开了具有包含SEQ IDNO：1的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列的轻链可变区的抗体。
在一些实施方案中，抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分包含含有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：1具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的重链，和/或含有SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：5具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的轻链。
在一个实施方案中，本公开特征为抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分，其是人源化抗体3E2。3E2抗体包含重链可变区，其包含含有SEQ ID NO：12的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO：11的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：10的氨基酸序列的CDR1域；和轻链可变区，其包含含有SEQ ID NO：16的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO：15的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：14的氨基酸序列的CDR1域。在进一步的实施方案中，本文公开了具有包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列的轻链可变区的抗体。
在一些实施方案中，抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分包含含有SEQ ID NO：9所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：9具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的重链，和/或含有SEQ ID NO：13所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：13具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的轻链。
在一个实施方案中，本公开特征为抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分，其是人源化抗体20C4。20C4抗体包含重链可变区，其包含含有SEQ ID NO：20的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO：19的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：18的氨基酸序列的CDR1域；和轻链可变区，其包含含有SEQ ID NO：24的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO：23的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：22的氨基酸序列的CDR1域。在进一步的实施方案中，本文公开了具有包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：21的氨基酸序列的轻链可变区的抗体。
在一些实施方案中，抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分包含含有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：1具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的重链，和/或含有SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：5具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的轻链。
在一个实施方案中，本公开特征为抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分，其是人源化抗体2E4。2E4抗体包含重链可变区，其包含含有SEQ ID NO：28的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO：27的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：26的氨基酸序列的CDR1域；和轻链可变区，其包含含有SEQ ID NO：31的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO：15的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：30的氨基酸序列的CDR1域。在进一步的实施方案中，本文公开了具有包含SEQ ID NO：25的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：29的氨基酸序列的轻链可变区的抗体。
在一些实施方案中，抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分包含含有SEQ ID NO：25所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：25具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的重链，和/或含有SEQ ID NO：29所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：29具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的轻链。
II.B.人抗体
实施例4描述了如实施例2中所述通过接种由人SEZ6L2蛋白的细胞外部分(SEZ6L2-his)组成的蛋白质来产生人SEZ6L2抗体。转基因小鼠用于产生高亲和力的全人单克隆抗体，其结合和/或抑制SEZ6L2。这些人抗体的重链和轻链可变区氨基酸序列列示于表9中。
因此，在一个实施方案中，本公开包括人抗hSEZ6L2抗体或其抗原结合部分，其包含含有选自SEQ ID NO：32、40、51、59、67、73、79、84、90、96、104、109、115、233和239的氨基酸序列的重链可变区；和含有选自SEQ ID NO：36、44、47、55、63、71、77、82、88、94、100、108、113、116、237和243的氨基酸序列的轻链可变区。
在一个实施方案中，本公开包括人抗hSEZ6L2抗体或其抗原结合部分，其包含选自SEQ ID NO：33、34和35；SEQ ID NO：41、42和42；SEQ ID NO：52、53和54；SEQ ID NO：60、61和62；SEQ ID NO：68、69和70；SEQ ID NO：74、75和76；SEQ ID NO：80、75和81；SEQ ID NO：85、86和87；SEQ ID NO：91、92和93；SEQ ID NO：97、98和99；SEQ ID NO：105、106和107；SEQ IDNO：110、111和112；SEQ ID NO：234、235和236；和SEQ ID NO：240、241和242的HC CDR组(CDR1、CDR2和CDR3)；
和包含选自SEQ ID NO：37、38和39；SEQ ID NO：45、38和46；SEQ ID NO：48、49和50；SEQ ID NO：56、57和58；SEQ ID NO：64、65和66；SEQ ID NO：64、65和72；SEQ ID NO：48、49和78；SEQ ID NO：48、49和83；SEQ ID NO：37、38和89；SEQ ID NO：37、38和95；SEQ ID NO：101、102和103；SEQ ID NO：37、38和89；SEQ ID NO：114、57和58；SEQ ID NO：117、118和119；SEQ ID NO：37、38和238；和SEQ ID NO：244、38和245的LC轻链CDR组(CDR1、CDR2和CDR3)。
在一个实施方案中，本公开特征为抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分，其为人抗体1A1。1A1抗体包含重链可变区，其包含含有SEQ ID NO：35的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQID NO：34的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：33的氨基酸序列的CDR1域；和轻链可变区，其包含含有SEQ ID NO：39的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO：38的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：37的氨基酸序列的CDR1域。在进一步的实施方案中，本公开提供了具有包含SEQ ID NO：32的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：36的氨基酸序列的轻链可变区的抗体。
在一些实施方案中，抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分包含含有SEQ ID NO：32所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：32具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的重链，和/或含有SEQ ID NO：36所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：36具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的轻链。
在一个实施方案中，本公开特征为抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分，其为人抗体1D2。1D2抗体包含重链可变区，其包含含有SEQ ID NO：43的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQID NO：42的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：41的氨基酸序列的CDR1域；和轻链可变区，其包含含有SEQ ID NO：46的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO：38的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：45的氨基酸序列的CDR1域。在进一步的实施方案中，本公开提供了具有包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：44的氨基酸序列的轻链可变区的抗体。
在一些实施方案中，抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分包含含有SEQ ID NO：40所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：40具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的重链，和/或含有SEQ ID NO：44所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：44具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的轻链。
在一个实施方案中，本公开特征为抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分，其为人抗体1E4。1E4抗体包含重链可变区，其包含含有SEQ ID NO：35的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQID NO：34的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：33的氨基酸序列的CDR1域；和轻链可变区，其包含含有SEQ ID NO：50的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO：49的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：48的氨基酸序列的CDR1域。在进一步的实施方案中，本公开提供了具有包含SEQ ID NO：32的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：47的氨基酸序列的轻链可变区的抗体。
在一些实施方案中，抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分包含含有SEQ ID NO：32所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：32具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的重链，和/或含有SEQ ID NO：47所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：47具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的轻链。
在一个实施方案中，本公开特征为抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分，其为人抗体3A1。3A1抗体包含重链可变区，其包含含有SEQ ID NO：54的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQID NO：53的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：52的氨基酸序列的CDR1域；和轻链可变区，其包含含有SEQ ID NO：58的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO：57的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：56的氨基酸序列的CDR1域。在进一步的实施方案中，本公开提供了具有包含SEQ ID NO：51的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列的轻链可变区的抗体。
在一些实施方案中，抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分包含含有SEQ ID NO：51所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：51具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的重链，和/或含有SEQ ID NO：55所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：55具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的轻链。
在一个实施方案中，本公开特征为抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分，其为人抗体3B1。3B1抗体包含重链可变区，其包含含有SEQ ID NO：62的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQID NO：61的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：60的氨基酸序列的CDR1域；和轻链可变区，其包含含有SEQ ID NO：66的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO：65的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：64的氨基酸序列的CDR1域。在进一步的实施方案中，本公开提供了具有包含SEQ ID NO：59的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：63的氨基酸序列的轻链可变区的抗体。
在一些实施方案中，抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分包含含有SEQ ID NO：59所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：59具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的重链，和/或含有SEQ ID NO：63所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：63具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的轻链。
在一个实施方案中，本公开特征为抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分，其为人抗体3B3。3B3抗体包含重链可变区，其包含含有SEQ ID NO：70的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQID NO：69的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：68的氨基酸序列的CDR1域；和轻链可变区，其包含含有SEQ ID NO：72的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO：65的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：64的氨基酸序列的CDR1域。在进一步的实施方案中，本公开提供了具有包含SEQ ID NO：67的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：71的氨基酸序列的轻链可变区的抗体。
在一些实施方案中，抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分包含含有SEQ ID NO：67所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：67具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的重链，和/或含有SEQ ID NO：71所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：71具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的轻链。
在一个实施方案中，本公开特征为抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分，其为人抗体3A2。3A2抗体包含重链可变区，其包含含有SEQ ID NO：76的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQID NO：75的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：74的氨基酸序列的CDR1域；和轻链可变区，其包含含有SEQ ID NO：78的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO：49的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：48的氨基酸序列的CDR1域。在进一步的实施方案中，本公开提供了具有包含SEQ ID NO：73的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：77的氨基酸序列的轻链可变区的抗体。
在一些实施方案中，抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分包含含有SEQ ID NO：73所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：73具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的重链，和/或含有SEQ ID NO：77所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：77具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的轻链。
在一个实施方案中，本公开特征为抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分，其为人抗体3A3。3A3抗体包含重链可变区，其包含含有SEQ ID NO：81的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQID NO：75的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：80的氨基酸序列的CDR1域；和轻链可变区，其包含含有SEQ ID NO：83的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO：49的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：48的氨基酸序列的CDR1域。在进一步的实施方案中，本公开提供了具有包含SEQ ID NO：79的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：82的氨基酸序列的轻链可变区的抗体。
在一些实施方案中，抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分包含含有SEQ ID NO：79所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：79具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的重链，和/或含有SEQ ID NO：82所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：82具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的轻链。
在一个实施方案中，本公开特征为抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分，其为人抗体3A4。3A4抗体包含重链可变区，其包含含有SEQ ID NO：87的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQID NO：86的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：85的氨基酸序列的CDR1域；和轻链可变区，其包含含有SEQ ID NO：89的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO：38的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：37的氨基酸序列的CDR1域。在进一步的实施方案中，本公开提供了具有包含SEQ ID NO：84的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：88的氨基酸序列的轻链可变区的抗体。
在一些实施方案中，抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分包含含有SEQ ID NO：84所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：84具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的重链，和/或含有SEQ ID NO：88所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：88具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的轻链。
在一个实施方案中，本公开特征为抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分，其为人抗体1C6。1C6抗体包含重链可变区，其包含含有SEQ ID NO：93的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQID NO：92的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：91的氨基酸序列的CDR1域；和轻链可变区，其包含含有SEQ ID NO：95的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO：38的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：37的氨基酸序列的CDR1域。在进一步的实施方案中，本公开提供了具有包含SEQ ID NO：90的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：94的氨基酸序列的轻链可变区的抗体。
在一些实施方案中，抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分包含含有SEQ ID NO：90所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：90具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的重链，和/或含有SEQ ID NO：94所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：94具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的轻链。
在一个实施方案中，本公开特征为抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分，其为人抗体1C1。1C1抗体包含重链可变区，其包含含有SEQ ID NO：99的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQID NO：98的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：97的氨基酸序列的CDR1域；和轻链可变区，其包含含有SEQ ID NO：103的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO：102的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：101的氨基酸序列的CDR1域。在进一步的实施方案中，本公开提供了具有包含SEQ ID NO：96的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：100的氨基酸序列的轻链可变区的抗体。
在一些实施方案中，抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分包含含有SEQ ID NO：96所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：96具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的重链，和/或含有SEQ ID NO：100所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：100具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的轻链。
在一个实施方案中，本公开特征为抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分，其为人抗体1D5。1D5抗体包含重链可变区，其包含含有SEQ ID NO：107的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQID NO：106的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：105的氨基酸序列的CDR1域；和轻链可变区，其包含含有SEQ ID NO：89的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO：38的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：37的氨基酸序列的CDR1域。在进一步的实施方案中，本公开提供了具有包含SEQ ID NO：104的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：108的氨基酸序列的轻链可变区的抗体。
在一些实施方案中，抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分包含含有SEQ ID NO：104所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：104具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的重链，和/或含有SEQ ID NO：108所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：108具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的轻链。
在一个实施方案中，本公开特征为抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分，其为人抗体3B6。3B6抗体包含重链可变区，其包含含有SEQ ID NO：112的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQID NO：111的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：110的氨基酸序列的CDR1域；和轻链可变区，其包含含有SEQ ID NO：58的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO：57的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：114的氨基酸序列的CDR1域。在进一步的实施方案中，本公开提供了具有包含SEQ ID NO：109的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：113的氨基酸序列的轻链可变区的抗体。
在一些实施方案中，抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分包含含有SEQ ID NO：109所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：109具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的重链，和/或含有SEQ ID NO：113所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：113具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的轻链。
在一个实施方案中，本公开特征为抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分，其为人抗体3B2。3B2抗体包含重链可变区，其包含含有SEQ ID NO：68的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQID NO：69的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：70的氨基酸序列的CDR1域；和轻链可变区，其包含含有SEQ ID NO：117的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO：118的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：119的氨基酸序列的CDR1域。在进一步的实施方案中，本公开提供了具有包含SEQ ID NO：115的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：116的氨基酸序列的轻链可变区的抗体。
在一些实施方案中，抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分包含含有SEQ ID NO：115所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：115具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的重链，和/或含有SEQ ID NO：116所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：116具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的轻链。
在一个实施方案中，本公开特征为抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分，其为人抗体2M5_10A1。2M5_10A1抗体包含重链可变区，其包含含有SEQ ID NO：236的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO：235的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：234的氨基酸序列的CDR1域；和轻链可变区，其包含含有SEQ ID NO：238的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO：38的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：37的氨基酸序列的CDR1域。在进一步的实施方案中，本公开提供了具有包含SEQ ID NO：233的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO：237的氨基酸序列的轻链可变区的抗体。
在一些实施方案中，抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分包含含有SEQ ID NO：233所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：233具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的重链，和/或含有SEQ ID NO：237所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：237具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的轻链。
在一个实施方案中，本公开特征为抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分，其为人抗体2M22_10A6。2M22_10A6抗体包含重链可变区，其包含含有SEQ ID NO：242的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ ID NO：241的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：240的氨基酸序列的CDR1域；和轻链可变区，其包含含有SEQ ID NO：245的氨基酸序列的CDR3域、含有SEQ IDNO：38的氨基酸序列的CDR2域和含有SEQ ID NO：244的氨基酸序列的CDR1域。在进一步的实施方案中，本公开提供了具有包含SEQ ID NO：239的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQID NO：243的氨基酸序列的轻链可变区的抗体。
在一些实施方案中，抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分包含含有SEQ ID NO：239所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：239具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的重链，和/或含有SEQ ID NO：243所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：243具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列的轻链。
前述抗SEZ6L2抗体CDR序列建立了根据本公开分离的，并且包含抗原结合多肽(其包括表6和9以及序列总结中列出的CDR序列)的新的SEZ6L2结合蛋白家族。
为了产生和选择对于hSEZ6L2具有优选的SEZ6L2结合和/或中和活性的CDR，可以使用本领域已知的用于产生抗体或其抗原结合部分以及评估那些抗体或其抗原结合部分的SEZ6L2结合和/或中和特征的标准方法，包括但不限于本文具体描述的那些。
在某些实施方案中，抗体包含重链恒定区，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD恒定区。在某些实施方案中，抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分包含选自人IgG恒定域、人IgM恒定域、人IgE恒定域和人IgA恒定域的重链免疫球蛋白恒定域。在进一步的实施方案中，抗体或其抗原结合部分具有IgG1重链恒定区、IgG2重链恒定区、IgG3恒定区或IgG4重链恒定区。优选地，重链恒定区是IgG1重链恒定区或IgG4重链恒定区。此外，抗体可以包含轻链恒定区，或者κ轻链恒定区或者λ轻链恒定区。优选地，抗体包含κ轻链恒定区。或者，抗体部分可以是例如Fab片段或单链Fv片段。
在某些实施方案中，抗SEZ6L2抗体结合部分是Fab、Fab'、F(ab’)2、Fv、二硫键连接的Fv、scFv、单结构域抗体或双体抗体。
在某些实施方案中，抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分是多特异性抗体，例如双特异性抗体。
已经描述了Fc部分中氨基酸残基的替换以改变抗体效应子功能(Winter等，美国专利号5,648,260和5,624,821，通过引用并入本文)。抗体的Fc部分介导几种重要的效应子功能，例如细胞因子诱导、ADCC、吞噬作用、补体依赖性细胞毒性(CDC)及抗体和抗原-抗体复合物的半衰期/清除率。在一些情况下，这些效应子功能对于治疗性抗体是理想的，但在其他情况中可能是不必要的或甚至是有害的，这取决于治疗目的。某些人IgG同种型，特别是IgG1和IgG3，分别通过与FcγR和补体C1q的结合介导ADCC和CDC。新生儿Fc受体(FcRn)是决定抗体循环半衰期的关键组分。在再另一个实施方案中，至少一个氨基酸残基在抗体的恒定区中被替换，例如抗体的Fc区，从而改变抗体的效应子功能。
一个实施方案包括标记的抗SEZ6L2抗体或其抗体部分，其中抗体衍生化或连接至一个或多个功能分子(例如，另一种肽或蛋白质)。例如，标记的抗体可以通过将本公开的抗体或抗体部分(通过化学偶联、遗传融合、非共价结合或其他)功能性连接至一个或多个其他分子实体(如另一种抗体，(例如，双特异性抗体或双体抗体)、可检测试剂、药剂、蛋白质或可介导抗体或抗体部分与另一分子(如链霉抗生物素蛋白核心区或多组氨酸标签)的结合的肽)和/或细胞毒性或治疗剂而衍生，细胞毒性或治疗剂选自有丝***抑制剂、抗肿瘤抗生素、免疫调节剂、用于基因治疗的载体、烷化剂、抗血管生成剂、抗代谢物、含硼药剂、化疗保护剂、激素、抗激素剂、皮质类固醇、光活性治疗剂、寡核苷酸、放射性核素剂、拓扑异构酶抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂、放射剂致敏剂及其组合。
可以衍生化抗体或其抗体部分的有用的可检测试剂包括荧光化合物。示例性荧光可检测试剂包括荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、5-二甲基胺-1-萘磺酰氯、藻红蛋白等。抗体也可以用可检测的酶衍生化，例如碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶、葡萄糖氧化酶等。当抗体用可检测的酶衍生化时，它通过添加酶用于产生可检测的反应产物的额外试剂来检测。例如，当存在可检测试剂辣根过氧化物酶时，过氧化氢和二氨基联苯胺的加入产生可检测的有色反应产物。抗体也可以用生物素衍生化，并通过间接测量抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白结合来检测。
在一个实施方案中，抗体与成像剂缀合。可用于本文所述组合物和方法中的成像剂的实例包括但不限于放射性标记(例如，铟)、酶、荧光标记、发光标记、生物发光标记、磁性标记和生物素。
在一个实施方案中，抗体或ADC与放射性标记连接，例如但不限于铟(111In)。111铟可用于标记本文所述的抗体和ADC以用于鉴定SEZ6L2阳性肿瘤。在某个实施方案中，本文所述的抗SEZ6L2抗体(或ADC)通过双功能螯合剂用111I标记，所述双功能螯合剂是双官能环己基二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)螯合物(参见美国专利号5,124,471、5,434,287和5,286,850，其中每一个在此引入作为参考)。
本公开的另一个实施方案提供糖基化结合蛋白，其中抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分包含一个或多个糖残基。新生体内蛋白质产生可能经历进一步加工，称为翻译后修饰。特别地，糖(糖基)残基可以酶促添加，该过程称为糖基化。带有共价连接的寡糖侧链的所得蛋白质被称为糖基化蛋白质或糖蛋白。抗体是Fc结构域以及可变结构域中具有一个或多个碳水化合物残基的糖蛋白。Fc结构域中的碳水化合物残基对Fc结构域的效应子功能具有重要影响，对抗体的抗原结合或半衰期具有最小影响(R.Jefferis,Biotechnol.Prog.21(2005),pp.11-16)。相反，可变结构域的糖基化可能对抗体的抗原结合活性产生影响。可变结构域中的糖基化可能对抗体结合亲和力具有负面影响，可能是由于空间位阻(Co,M.S.等,Mol.Immunol.(1993)30:1361-1367)，或导致对抗原的亲和力提高(Wallick,S.C.等,Exp.Med.(1988)168:1099-1109；Wright,A.等,EMBO J.(1991)10:2717-2723)。
本公开的一个方面涉及产生糖基化位点突变体，其中结合蛋白的O-或N-连接的糖基化位点已经突变。本领域技术人员可以使用标准的公知技术产生这种突变体。保留生物活性但具有增加或降低的结合活性的糖基化位点突变体是本公开的另一个目的。
在再另一个实施方案中，抗SEZ6L2抗体或抗原结合部分的糖基化改变。例如，可以制备无糖基化的抗体(即，抗体缺乏糖基化)。糖基化可以改变以例如增加抗体对抗原的亲和力。这种碳水化合物修饰可以通过例如改变抗体序列内的一个或多个糖基化位点来实现。例如，可以进行一个或多个氨基酸置换，其导致一个或多个可变区糖基化位点的消除，从而消除该位点的糖基化。这种无糖基化可以增加抗体对抗原的亲和力。这种方法在PCT公开WO2003016466A2和美国专利号5,714,350和6,350,861中进一步详细描述，其各自通过引用整体并入本文。
另外或可选地，可以制备具有改变的糖基化类型的修饰的抗SEZ6L2抗体，例如具有减少的岩藻糖基残基量的低岩藻糖基化抗体或具有增加的二分GlcNAc结构的抗体。已经证明这种改变的糖基化模式增加了抗体的ADCC能力。这种碳水化合物修饰可以通过例如在具有改变的糖基化机制的宿主细胞中表达抗体来实现。具有改变的糖基化机制的细胞已在本领域中描述，并且可用作在其中表达重组抗体的宿主细胞，从而产生具有改变的糖基化的抗体。参见，例如，Shields,R.L.等(2002)J.Biol.Chem.277:26733-26740；Umana等(1999)Nat.Biotech.17:176-1以及欧洲专利号EP 1,176,195；PCT公开WO03/035835；WO99/5434280，其各自通过引用整体并入本文。
蛋白质糖基化取决于目标蛋白质的氨基酸序列，以及其中表达蛋白质的宿主细胞。不同的生物体可以产生不同的糖基化酶(例如，糖基转移酶和糖苷酶)，并且具有可用的不同的底物(核苷酸糖)。由于这些因素，蛋白质糖基化模式和糖基残基的组成可根据其中表达特定蛋白质的宿主***而不同。可用的糖基残基可包括但不限于葡萄糖、半乳糖、甘露糖、岩藻糖、n-乙酰葡糖胺和唾液酸。优选地，糖基化的结合蛋白包含糖基残基，使得糖基化模式是人的。
不同的蛋白质糖基化可能导致不同的蛋白质特征。例如，与在哺乳动物细胞(例如CHO细胞系)中表达的相同蛋白质相比，在微生物宿主(例如酵母)中产生并且利用酵母内源途径糖基化的治疗性蛋白质的功效可能降低。此类糖蛋白在人体中也可能是免疫原性的，并且在施用后显示体内半衰期减少。人和其他动物中的特异性受体可识别特定的糖基残基并促进蛋白质从血流中快速清除。其他不利影响可包括蛋白质折叠、溶解度、对蛋白酶的易感性、运输、转运、区室化、分泌、其他蛋白质或因子的识别、抗原性或变应原性的变化。因此，从业者可能优选具有特定组成和糖基化模式的治疗性蛋白质，例如糖基化组成和模式与人细胞或预期受试动物的物种特异性细胞中产生的相同或至少相似。
表达不同于宿主细胞的糖基化蛋白质可以通过遗传修饰宿主细胞以表达异源糖基化酶来实现。使用重组技术，实施者可以产生表现出人蛋白质糖基化的抗体或其抗原结合部分。例如，酵母菌株已被遗传修饰以表达非天然存在的糖基化酶，使得在这些酵母菌株中产生的糖基化蛋白质(糖蛋白)表现出与动物细胞，特别是人类细胞相同的蛋白质糖基化(美国专利公开号20040018590和20020137134和PCT公开WO2005100584A2)。
抗体可以通过许多技术中的任何一种产生。例如，从宿主细胞表达，其中通过标准技术将编码重链和轻链的表达载体转染到宿主细胞中。术语“转染”的各种形式旨在涵盖通常用于将外源DNA引入原核或真核宿主细胞中的多种技术，例如，电穿孔、磷酸钙沉淀、DEAE-葡聚糖转染等。尽管可以在原核或真核宿主细胞中表达抗体，但优选在真核细胞中表达抗体，并且最优选在哺乳动物宿主细胞中，因为这样的真核细胞(和特别是哺乳动物细胞)比原核细胞更可能组装并分泌正确折叠的和免疫活性的抗体。
用于表达本文公开的重组抗体的优选哺乳动物宿主细胞包括中国仓鼠卵巢(CHO细胞)(包括dhfr-CHO细胞，描述于Urlaub和Chasin,(1980)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216-4220，其与DHFR选择标记一起使用，例如，如R.J.Kaufman和P.A.Sharp(1982)Mol.Biol.159:601-621中所述)、NS0骨髓瘤细胞、COS细胞和SP2细胞。当将编码抗体基因的重组表达载体引入哺乳动物宿主细胞中时，抗体通过将宿主细胞培养足以允许抗体在宿主细胞中表达或更优选地，分泌抗体到宿主细胞生长的培养基中的一段时间来产生。可以使用标准蛋白质纯化方法从培养基回收抗体。
宿主细胞也可用于产生功能性抗体片段，例如Fab片段或scFv分子。应当理解，上述过程的变化在本公开的范围内。例如，可能需要用编码抗体的轻链和/或重链的功能片段的DNA转染宿主细胞。重组DNA技术也可用于除去编码轻链和重链中任一或两者的DNA中对于结合目标抗原不必需的的一些或全部。由这种截短的DNA分子表达的分子也包括在本公开的抗体中。此外，可以产生其中一个重链和一个轻链是本公开的抗体并且另一个重链和轻链通过使用标准化学交联方法将本公开的抗体与第二抗体交联而对除目标抗原之外的抗原特异性的双功能抗体。
在用于重组表达抗体或其抗原结合部分的优选***中，通过磷酸钙介导的转染将编码抗体重链和抗体轻链的重组表达载体引入dhfr-CHO细胞中。在该重组表达载体内，抗体重链和轻链基因各自与CMV增强子/AdMLP启动子调控元件可操作地连接以驱动基因的高水平转录。重组表达载体还携带DHFR基因，其允许使用甲氨蝶呤选择/扩增选择已经用载体转染的CHO细胞。培养选择的转化体宿主细胞以允许抗体重链和轻链的表达，并从培养基中回收完整的抗体。标准分子生物学技术用于制备重组表达载体、转染宿主细胞、选择转化体、培养宿主细胞和从培养基中回收抗体。本公开还提供了一种通过在合适的培养基中培养宿主细胞直至合成重组抗体来合成重组抗体的方法。可以使用对应于本文公开的氨基酸序列的核酸分子产生重组抗体。在一个实施方案中，SEQ ID NO：120-155和246-249(如序列总结中示出的)中所示的核酸分子用于产生重组抗体。该方法可以进一步包括从培养基分离重组抗体。
III.抗SEZ6L2抗体药物缀合物(ADC)
本文所述的抗SEZ6L2抗体可以与药物部分缀合以形成抗SEZ6L2抗体药物缀合物(ADC)。抗体-药物偶联物(ADC)可以增加抗体治疗疾病(例如癌症)的治疗功效，这是由于ADC选择性地将一种或多种药物部分递送至靶组织如肿瘤相关抗原(例如，表达SEZ6L2的肿瘤)的能力。因此，在某些实施方案中，本公开提供用于治疗用途(例如治疗癌症，包括但不限于肺癌、***癌和神经内分泌肿瘤)的抗SEZ6L2ADC。
抗SEZ6L2ADC包含与一个或多个药物部分连接的抗SEZ6L2抗体，即特异性结合SEZ6L2的抗体。ADC的特异性由抗体的特异性定义，即抗SEZ6L2。在一个实施方案中，抗SEZ6L2抗体与一种或多种细胞毒性药物连接，其内部递送至表达SEZ6L2的癌细胞。
以下提供可用于抗SEZ6L2ADC的药物的实例，以及可用于缀合抗体和一种或多种药物的接头。术语“药物”、“药剂”和“药物部分”在本文中可互换使用。术语“连接的”和“缀合的”在本文中也可互换使用，且表明抗体和部分是共价连接的。
在一些实施方案中，ADC具有下式(式I)：
Ab-(L-D)n(I)
其中Ab是本文所述的抗SEZ6L2抗体，和(L-D)是接头-药物部分。接头-药物部分由作为接头的L-和具有例如对靶细胞(例如，表达SEZ6L2的细胞)的细胞生长抑制、细胞毒性或其他治疗活性的药物部分-D制备；和n为1至20的整数。在一些实施方案中，n的范围为1至8、1至7、1至6、1至5、1至4、1至3、1至2或者为1。ADC的DAR等同于式I中提及的“n”。
在一个实施方案中，ADC具有式Ab-(L-D)n，其中Ab是抗SEZ6L2抗体，L是接头，例如，马来酰亚胺基-己酰基-缬氨酸-瓜氨酸(MC-VC)，D是药物，例如，澳瑞他汀如MMAE，和n为2、4、6或8(相当于2、4、6或8的DAR)。在另一实施方案中，n为0-8(相当于0-8的DAR)。在一个实施方案中，ADC用于治疗神经内分泌肿瘤。
在一个实施方案中，ADC具有式Ab-(L-D)n，其中Ab是抗SEZ6L2抗体，L是接头，例如带电位阻二硫化物(sSPDB)或可切割肽接头(D-Ala-L-dpa)，D是药物，例如美登素类如DM4，n是2、4、6或8(相当于2、4、6或8的DAR)。在另一实施方案中，n为0-8(相当于0-8的DAR)。在一个实施方案中，ADC用于治疗神经内分泌肿瘤。
在一个实施方案中，ADC具有式Ab-(L-D)n，其中Ab是抗SEZ6L2抗体，L是接头，例如可切割肽接头(D-Ala-L-dpa)，D是药物，例如DNA烷化剂如IGN，和n是2、4、6或8(相当于2、4、6或8的DAR)。在另一实施方案中，n为0-8(相当于0-8的DAR)。在一个实施方案中，ADC用于治疗小细胞肺癌(SCLC)。
关于可以在ADC中使用的药物(式I的D)和接头(式I的L)以及替代的ADC结构的其他细节描述如下。
A.抗SEZ6L2ADC：用于缀合的示例性的药物
抗SEZ6L2抗体可以在ADC中用于将一种或多种药物靶向于目标细胞，例如，表达SEZ6L2的癌细胞。本文公开的抗SEZ6L2ADC提供靶向治疗，其可以例如减少抗癌治疗中经常看到的副作用，因为一种或多种药物递送至特定细胞。
澳瑞他汀
抗SEZ6L2抗体可与至少一种澳瑞他汀缀合。澳瑞他汀表示通常显示为通过干扰微管动力学和GTP水解，从而抑制细胞***而具有抗癌活性的一组多拉司他汀类似物。例如，澳瑞他汀E(美国专利号5,635,483)是海洋天然产物多拉司他汀10的合成类似物，该化合物通过与抗癌药长春新碱结合微管蛋白上的相同位点来抑制微管蛋白聚合(G.R.Pettit,Prog.Chem.Org.Nat.Prod,70:1-79(1997))。多拉司他汀10、澳瑞他汀PE和澳瑞他汀E是具有四个氨基酸的线性肽，其中三个是多拉司他汀类化合物所特有的。有丝***抑制剂的澳瑞他汀亚类的示例性实施方案包括但不限于单甲基澳瑞他汀D(MMAD或澳瑞他汀D衍生物)、单甲基澳瑞他汀E(MMAE或澳瑞他汀E衍生物)、单甲基澳瑞他汀F(MMAF或澳瑞他汀F衍生物)、澳瑞他汀F苯二胺(AFP)、澳瑞他汀EB(AEB)、澳瑞他汀EFP(AEFP)和5-苯甲酰基戊酸-AE酯(AEVB)。澳瑞他汀衍生物的合成和结构描述于美国专利申请公开号2003-0083263、2005-0238649和2005-0009751；国际专利公开号WO 04/010957、国际专利公开号WO 02/088172和美国专利号6,323,315；6,239,104；6,034,065；5,780,588；5,665,860；5,663,149；5,635,483；5,599,902；5,554,725；5,530,097；5,521,284；5,504,191；5,410,024；5,138,036；5,076,973；4,986,988；4,978,744；4,879,278；4,816,444；和4,486,414中，它们中的每一个通过引用结合到本文中。
在一个实施方案中，抗SEZ6L2抗体与至少一个MMAE(单甲基澳瑞他汀E)缀合。单甲基澳瑞他汀E(MMAE，vedotin)通过阻断微管蛋白的聚合来抑制细胞***。由于其超毒性，它本身也不能用作药物。在最近的癌症治疗开发中，它与识别癌细胞中特定标志物的表达并将MMAE引导至癌细胞的单克隆抗体(mAb)连接。在一个实施方案中，连接MMAE与抗SEZ6L2抗体的接头在细胞外液(即细胞外的介基或环境)中是稳定的，但一旦ADC与特定癌细胞抗原结合和进入癌细胞，就会被组织蛋白酶切割，从而释放出毒性的MMAE并激活有效的抗有丝***机制。
MMAE的结构如下。
在一个实施方案中，抗体与单一药物偶联，且因此DAR为1。在某些实施方案中，ADC的DAR为2至8，或者可选地，2至4。
美登素类
抗SEZ6L2抗体可以与至少一个美登素类缀合以形成ADC。美登素类是有效的抗肿瘤剂，其最初是从高等植物科卫矛科(Celastraceae)、鼠李科(Rhamnaceae)和大戟科(Euphorbiaceae)的成员以及一些苔藓物种中分离出来的(Kupchan等,J.Am.Chem.Soc.94:1354-1356[1972]；Wani等,J.Chem.Soc.Chem.Commun.390:[1973]；Powell等,J.Nat.Prod.46:660-666[1983]；Sakai等,J.Nat.Prod.51:845-850[1988]；和Suwanborirux等,Experientia 46:117-120[1990])。证据表明，美登素类通过抑制微管蛋白质微管蛋白的聚合，从而阻止微管的形成来抑制有丝***(参见，例如，美国专利号6,441,163和Remillard等，Science，189,1002-1005(1975))。美登素类已经使用细胞培养模型显示出在体外和使用实验室动物***显示出在体内抑制肿瘤细胞生长。此外，美登素类的细胞毒性比常规化疗剂(例如甲氨蝶呤、柔红霉素和长春新碱)高1,000倍(参见，例如，美国专利号5,208,020)。
美登素类包括美登素、美登醇、美登醇的C-3酯和其他美登醇类似物和衍生物(参见，例如，美国专利号5,208,020和6,441,163，其中各自引入本文作为参考)。美登醇的C-3酯可以是天然存在的或合成衍生的。此外，天然存在的和合成的C-3美登醇酯可分类为简单羧酸的C-3酯或N-甲基-L-丙氨酸衍生物的C-3酯，后者比前者细胞毒性更强。合成美登素类似物描述于例如Kupchan等,J.Med.Chem.,21,31-37(1978)中。
适用于ADC的美登素类可从天然来源分离、合成产生或半合成产生。此外，只要在最终的缀合物分子中保留足够的细胞毒性，美登素可以以任何合适的方式修饰。在这方面，美登素缺乏抗体可与之连接的合适的官能团。期望的是使用连接部分将美登素与抗体连接以形成缀合物。
以下提供示例性美登素类4-甲基-(4-巯基-1-氧代戊基)-美登素(DM4)的结构。
美登素的代表性实例包括但不限于DM1(N2'-脱乙酰基-N2'-(3-巯基-1-氧代丙基)-美登素；也称为mertansine、药物美登素1；ImmunoGen,Inc.；参见Chari等(1992)Cancer Res 52:127)、DM2、DM3(N2'-脱乙酰基-N2'-(4-巯基-1-氧代戊基)-美登素)、DM4(4-甲基)-(4-巯基-1-氧代戊基)-美登素)和美登醇(一种合成的美登素类似物)。美登素类的其他实例描述于美国专利号8,142,784中，其通过引用并入本文。
安丝菌素类是一组美登素抗生素，其从各种细菌来源中分离。这些化合物具有有效的抗肿瘤活性。代表性实例包括但不限于：安丝菌素P1、安丝菌素P2、安丝菌素P3和安丝菌素P4。
在本发明的一个实施方案中，抗SEZ6L2抗体与至少一个DM1缀合。在一个实施方案中，抗SEZ6L2抗体与至少一个DM2缀合。在一个实施方案中，抗SEZ6L2抗体与至少一个DM3缀合。在一个实施方案中，抗SEZ6L2抗体与至少一个DM4缀合。
DNA烷化剂
如本文所用，术语“DNA烷化剂”包括DNA烷化剂家族，其包括吲哚啉-苯并二氮杂(IGN)。IGN代表对癌细胞具有高的体外效力(在低pmol/L范围内的IC50值)的细胞毒性分子的化学类别。可以在ADC中用作细胞毒性有效负载的IGN DNA烷化剂的实例描述于Miller等(2016)Molecular Cancer Therapeutics,15(8)中。Miller等描述的IGN化合物结合DNA的小沟，然后鸟嘌呤残基与分子中的两个亚胺官能团共价反应，导致DNA的交联。以下提供示例性IGN的结构。
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用于缀合的其它药物
可以在ADC中使用的药物(即可以与抗SEZ6L2抗体缀合的药物)的实例在下面提供，且包括有丝***抑制剂、抗肿瘤抗生素、免疫调节剂、基因治疗载体、烷化剂、抗血管生成剂、抗代谢物、含硼药剂、化疗保护剂、激素剂、糖皮质激素、光活性治疗剂、寡核苷酸、放射性同位素、放射致敏剂、拓扑异构酶抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂及其组合。
1.有丝***抑制剂
在一个方面，抗SEZ6L2抗体可以与一种或多种有丝***抑制剂缀合以形成用于治疗癌症的ADC。如本文所用，术语“有丝***抑制剂”是指阻断有丝***或细胞***(一种对癌细胞特别重要的生物学过程)的细胞毒性剂和/或治疗剂。有丝***抑制剂破坏微管，使得通常通过影响微管聚合(例如，抑制微管聚合)或微管解聚来阻止细胞***。因此，在一个实施方案中，抗SEZ6L2抗体与一种或多种通过抑制微管蛋白聚合而破坏微管形成的有丝***抑制剂缀合。在一个实施方案中，ADC中使用的有丝***抑制剂是Ixempra(伊沙匹隆)。可用于抗SEZ6L2ADC中的有丝***抑制剂的实例包括包括多拉司他汀类，例如多拉司他汀10和多拉司他汀15，和植物生物碱，例如紫杉烷和长春花生物碱，例如硫酸长春地辛(indesine)、长春新碱、长春花碱和长春瑞滨。如上所述，有丝***抑制剂类别包括澳瑞他汀和美登素类。
本文所述的抗SEZ6L2抗体可与至少一种紫杉烷缀合。如本文所用的术语“紫杉烷”是指具有微管作用机制并具有包括紫杉烷环结构和细胞生长抑制活性所需的立体定向侧链的结构的抗肿瘤剂类别。术语“紫杉烷”还包括多种已知衍生物，包括亲水性衍生物和疏水性衍生物。紫杉烷衍生物包括但不限于国际专利申请No.WO 99/18113中描述的半乳糖和甘露糖衍生物；WO 99/14209中描述的哌嗪子基和其他衍生物；WO 99/09021、WO 98/22451和美国专利号5,869,680中描述的紫杉烷衍生物；WO 98/28288中描述的6-硫代衍生物；美国专利号5,821,263中描述的亚磺酰胺衍生物；和美国专利号5,415,869中描述的紫杉酚衍生物，其每一篇通过引用结合到本文中。紫杉烷化合物之也已在美国专利号5,641,803、5,665,671、5,380,751、5,728,687、5,415,869,5、407,683、5,399,363、5,424,073、5,157,049、5,773,464、5,821,263、5,840,929、4,814,470、5,438,072、5,403,858、4,960,790、5,433,364、4,942,184、5,362,831、5,705,503和5,278,324中描述，其全部明确通过引用并入。紫杉烷的其他实例包括但不限于多西紫杉醇(Taxotere；Sanofi Aventis)、紫杉醇(Abraxane或Taxol；Abraxis Oncology)和纳米颗粒紫杉醇(ABI-007/Abraxene；AbraxisBioscience)。
2.抗肿瘤抗生素
抗SEZ6L2抗体可与一种或多种抗肿瘤抗生素缀合以治疗癌症。如本文所用，术语“抗肿瘤抗生素”是指通过干扰DNA来阻断细胞生长并且由微生物产生的抗肿瘤药物。通常，抗肿瘤抗生素破坏DNA链或者减慢或停止DNA合成。可以包含在抗SEZ6L2ADC中的抗肿瘤抗生素的实例包括但不限于放线菌素类(例如，吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮杂)、蒽环类、卡利奇霉素和duocarmycins。除上述之外，可用于抗SEZ6L2ADC中的另外的抗肿瘤抗生素包括博来霉素(Blenoxane，Bristol-Myers Squibb)、丝裂霉素和普卡霉素(也称为光神霉素)。
3.免疫调节剂
在一个方面，抗SEZ6L2抗体可以与至少一个免疫调节剂缀合。如本文所用，术语“免疫调节剂”是指可以刺激或改变免疫反应的药剂。在一个实施方案中，免疫调节剂是增强受试者免疫反应的免疫刺激剂。在另一实施方案中，免疫调节剂是预防或降低受试者的免疫反应的免疫抑制剂。免疫调节剂可以调节骨髓细胞(单核细胞、巨噬细胞、树突细胞、巨核细胞和粒细胞)或淋巴细胞(T细胞、B细胞和自然杀伤(NK)细胞)及其任何进一步分化的细胞。代表性实例包括但不限于卡介苗(BCG)和左旋咪唑(Ergamisol)。可用于ADC中的免疫调节剂的其他实例包括但不限于癌症疫苗和细胞因子。
如本文所用，术语“癌症疫苗”是指引发肿瘤特异性免疫反应的组合物(例如，肿瘤抗原和细胞因子)。通过施用癌症疫苗，或者在本公开的情况下，施用包含抗SEZ6L2抗体和癌症疫苗的ADC，从受试者自身的免疫***引发响应。在优选的实施方案中，免疫反应导致体内肿瘤细胞的根除(例如，原发性或转移性肿瘤细胞)。癌症疫苗的使用通常涉及施用特定抗原或抗原组，其例如存在于特定癌细胞的表面上，或存在于显示为促进癌症形成的特定感染剂的表面上。在一些实施方案中，癌症疫苗的使用是用于预防目的，而在其他实施方案中，其使用是用于治疗目的。可用于抗SEZ6L2ADC中的癌症疫苗的非限制性实例包括重组二价人***瘤病毒(HPV)疫苗16型和18型疫苗(Cervarix，GlaxoSmithKline)、重组四价人***瘤病毒(HPV)6、11、16和18型疫苗(Gardasil，Merck&Company)和sipuleucel-T(Provenge，Dendreon)。因此，在一个实施方案中，抗SEZ6L2抗体与至少一种作为免疫刺激剂或免疫抑制剂的癌症疫苗缀合。
抗SEZ6L2抗体可与至少一种细胞因子缀合。术语“细胞因子”通常是指由一个细胞群体释放的蛋白质，其作为细胞间介质作用于另一细胞。细胞因子直接刺激免疫效应细胞和肿瘤部位的基质细胞，并通过细胞毒性效应细胞增强肿瘤细胞识别(Lee和Margolin(2011)Cancers 3:3856)。许多动物肿瘤模型研究已经证明细胞因子具有广泛的抗肿瘤活性，并且这已经转化为许多基于细胞因子的癌症治疗方法(Lee和Margoli，同上)。近年来已经看到许多细胞因子，包括GM-CSF、IL-7、IL-12、IL-15、IL-18和IL-21，进入晚期癌症患者的临床试验(Lee和Margoli，同上)。
可用于ADC中的细胞因子的实例包括但不限于甲状旁腺激素；甲状腺素；胰岛素；胰岛素原；松弛素；松弛素原；糖蛋白激素如促卵泡激素(FSH)、促甲状腺激素(TSH)和***(LH)；肝生长因子；成纤维细胞生长因子；催乳素；胎盘催乳素；肿瘤坏死因子；苗勒抑制物质；小鼠***相关肽；抑制素；激活素；血管内皮生长因子；整联蛋白；血小板生成素(TPO)；神经生长因子如NGF；血小板生长因子；转化生长因子(TGF)；***-I和-II；***(EPO)；骨诱导因子；干扰素如干扰素α、β和γ；集落刺激因子(CSF)；粒细胞-巨噬细胞-C-SF(GM-CSF)；和粒细胞-CSF(G-CSF)；白介素(IL)如IL-1、IL-1α、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-11、IL-12；肿瘤坏死因子；和其他多肽因子，包括LIF和kit配体(KL)。如本文所用，术语细胞因子包括来自天然来源或来自重组细胞培养物的蛋白质和天然序列细胞因子的生物活性等同物。因此，在一个实施方案中，本公开提供包含本文所述的抗SEZ6L2抗体和细胞因子的ADC。
抗SEZ6L2抗体可以与至少一种集落刺激因子(CSF)缀合。集落刺激因子(CSF)是帮助骨髓制造红细胞的生长因子。因为一些癌症治疗(例如，化疗)可以影响白细胞(其有助于抵抗感染)，因此可以引入集落刺激因子以帮助支持白细胞水平并增强免疫***。在骨髓移植后也可以使用集落刺激因子来帮助新骨髓开始产生白细胞。可用于抗SEZ6L2ADC中的CSF的代表性实例包括但不限于***(Epoetin)、非格司亭(Neopogen(也称为粒细胞集落刺激因子(G-CSF)；Amgen，Inc.)、沙格司亭(leukine(粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和GM-CSF)；Genzyme Corporation)、promegapoietin和奥普瑞白介素(重组IL-11；Pfizer，Inc.)。因此，在一个实施方案中，ADC可以包含本文所述的抗SEZ6L2抗体和CSF。
4.烷化剂
抗SEZ6L2抗体可以与一种或多种烷化剂缀合。烷化剂是一类将烷基连接到DNA上的抗肿瘤化合物。可用于ADC中的烷基化剂的实例包括但不限于烷基磺酸盐、乙烯亚胺类、甲胺衍生物、环氧化物、氮芥、亚硝基脲、三嗪类和肼类。
5.抗血管生成剂
在一个方面，本文所述的抗SEZ6L2抗体与至少一种抗血管生成剂缀合。抗血管生成剂抑制新血管的生长。抗血管生成剂以多种方式发挥作用。在一些实施方案中，这些药剂干扰生长因子达到其靶标的能力。例如，血管内皮生长因子(VEGF)是通过与细胞表面上的特定受体结合而参与启动血管生成的主要蛋白质之一。因此，阻止VEGF与其同源受体的相互作用的某些抗血管生成剂阻止VEGF启动血管生成。在其他实施方案中，这些药剂干扰细胞内信号传导级联。例如，一旦细胞表面上的特定受体被触发，则启动其他化学信号的级联以促进血管的生长。因此，已知促进造成例如细胞增殖的细胞内信号传导级联的某些酶(例如一些酪氨酸激酶)是癌症治疗的靶标。在其他实施方案中，这些药剂干扰细胞间信号传导级联。然而，在其他实施方案中，这些药剂使激活和促进细胞生长的特定靶标失能或直接干扰血管细胞的生长。已经在具有许多直接和间接抑制作用的超过300种物质中发现了血管生成抑制特性。
可用于ADC中的抗血管生成剂的代表性实例包括但不限于血管抑素、ABX EGF、C1-1033、PKI-166、EGF疫苗、EKB-569、GW2016、ICR-62、EMD 55900、CP358、PD153035、AG1478、IMC-C225(Erbitux)、ZD1839(易瑞沙)、OSI-774、厄洛替尼(特罗凯)、血管抑制素、阻遏蛋白、内皮抑素、BAY 12-9566和w/氟尿嘧啶或多柔比星、血管能抑素、羧基酰胺***和紫杉醇联用、EMD121974、S-24、vitaxin、二甲基呫吨酮乙酸、IM862、白介素-12、白介素-2、NM-3、HuMV833、PTK787、RhuMab、核酶(angiozyme)(核酶(ribozyme))、IMC-1C11、Neovastat、marimstat、普马司他、BMS-275291、COL-3、MM1270、SU101、SU6668、SU11248、SU5416、紫杉醇联用、吉西他滨和顺铂联用、和伊立替康和顺铂联用及辐射联用、tecogalan、替莫唑胺和PEG干扰素α2b、四硫代钼酸盐、TNP-470、沙利度胺、CC-5013和泰索帝联用、tumstatin、2-甲氧基***、VEGF阱、mTOR抑制剂(雷帕霉素、依维莫司(Afinitor,NovartisPharmaceutical Corporation)和替西罗莫司(Torisel,Pfizer,Inc.))、酪氨酸激酶抑制剂(例如，厄洛替尼(Tarceva，Genentech，Inc.)、伊马替尼(Gleevec，NovartisPharmaceutical Corporation)、吉非替尼(易瑞沙，AstraZeneca Pharmaceuticals)、达沙替尼(Sprycel，Brystol-Myers Squibb)、舒尼替尼(Sutent，Pfizer，Inc.)、尼罗替尼(Tasigna，Novartis Pharmaceutical Corporation)、拉帕替尼(Tykerb，GlaxoSmithKlinePharmaceuticals)、索拉非尼(Nexavar，Bayer和Onyx)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)。
6.抗代谢物
抗SEZ6L2抗体可以与至少一种抗代谢物缀合。抗代谢物是与细胞内的正常物质非常相似的化学治疗类型。当细胞将抗代谢物并入细胞代谢中时，结果对细胞是负面的，例如，细胞不能***。抗代谢物根据它们干扰的物质进行分类。可用于ADC中的抗代谢物的实例包括但不限于叶酸拮抗剂(例如，甲氨蝶呤)、嘧啶拮抗剂(例如，5-氟尿嘧啶、氟尿苷、阿糖胞苷，卡培他滨和吉西他滨)、嘌呤拮抗剂(例如，6-巯基嘌呤和6-硫鸟嘌呤)和腺苷脱氨酶抑制剂(例如，克拉屈滨、氟达拉滨、奈拉宾和喷司他丁)，如下文更详细描述的。
7.含硼药剂
抗SEZ6L2抗体可以与至少一种含硼药剂缀合。含硼药剂包括干扰细胞增殖的一类癌症治疗化合物。含硼药剂的代表性实例包括但不限于硼磷蛋白(borophycin)和硼替佐米(Velcade，Millenium Pharmaceuticals)。
8.化疗保护剂
抗SEZ6L2抗体可与至少一种化疗保护剂缀合。化疗保护药物是有助于保护身体免受化疗的特定毒性作用的一类化合物。化疗保护剂可以与各种化学疗法一起施用以保护健康细胞免受化疗药物的毒性作用而同时使得癌细胞被施用的化学治疗剂处理。代表性的化疗保护剂包括但不限于氨磷汀(Ethyol，Medimmune，Inc.)(其用于降低与顺铂、右雷佐生(Totect，Apricus Pharma；Zinecard)的累积剂量相关的肾毒性)，其用于治疗由蒽环类(Totect)施用引起的外渗，以及用于治疗由抗肿瘤抗生素多柔比星(Zinecard)和美司纳(Mesnex，Bristol-Myers Squibb)的施用引起的心脏相关并发症，这用于预防异环磷酰胺(ifocfamide)化疗治疗期间的***。
9.光活性治疗剂
抗SEZ6L2抗体可与至少一种光活性治疗剂缀合。光活性治疗剂包括可以在暴露于特定波长的电磁辐射时用于杀死处理的细胞的化合物。治疗相关化合物吸收穿透组织的波长的电磁辐射。在优选的实施方案中，化合物以无毒形式施用，其能够在充分激活时产生对细胞或组织毒性的光化学作用。在其他优选的实施方案中，这些化合物被癌组织保留并易于从正常组织中清除。非限制性实例包括各种发色团和染料。
10.放射性核素剂(放射性同位素)
抗SEZ6L2抗体可以与至少一种放射性核素剂缀合。放射性核素剂包括以不稳定的核为特征的能够进行放射性衰变的试剂。成功的放射性核素治疗的基础取决于足够的浓度和放射性核素被癌细胞的长期保留。其他考虑的因素包括放射性核素半衰期、发射粒子的能量以及发射粒子可以行进的最大范围。在优选的实施方案中，治疗剂是选自111In、177Lu、212Bi、213Bi、211At、62Cu、64Cu、67Cu、90Y、I25I、I31I、32P、33P、47Sc、111Ag、67Ga、142Pr、153Sm、161Tb、166Dy、166Ho、186Re、188Re、189Re、212Pb、223Ra、225Ac、59Fe、75Se、77As、89Sr、99Mo、105Rh、I09Pd、143Pr、149Pm、169Er、194Ir、198Au、199Au和211Pb的放射性核素。还优选的是基本上以俄歇发射粒子衰变的放射性核素。例如，Co-58、Ga-67、Br-80m、Tc-99m、Rh-103m、Pt-109、In-111 1、Sb-119、I-125、Ho-161、Os-189m和Ir-192。有用的β粒子发射核素的衰变能量优选为Dy-152、At-211、Bi-212、Ra-223、Rn-219、Po-215、Bi-211、Ac-225、Fr-221、At-217、Bi-213和Fm-255。有用的α粒子发射放射性核素的衰变能量优选为2,000-10,000keV，更优选为3,000-8,000keV，最优选为4,000-7,000keV。其他潜在的有用放射性同位素包括11C、13N、150、75Br、198Au、224Ac、126I、133I、77Br、113mIn、95Ru、97Ru、I03Ru、105Ru、107Hg、203Hg、121mTe、122mTe、125mTe、165Tm、I67Tm、168Tm、197Pt、109Pd、105Rh、142Pr、143Pr、161Tb、！66Ho、199Au、57Co、58Co、51Cr、59Fe、75Se、201Tl、225Ac、76Br、I69Yb等。
11.放射致敏剂
抗SEZ6L2抗体可与至少一种放射致敏剂缀合。如本文所用，术语“放射致敏剂”定义为以治疗有效量施用于动物以提高对细胞对电磁辐射放射增敏的敏感性和/或促进可用电磁辐射治疗的疾病的治疗的分子，优选低分子量分子。放射致敏剂是使癌细胞对放射疗法更敏感，而对正常细胞具有小得多的影响的药剂。因此，放射致敏剂可与放射性标记的抗体或ADC组合使用。与单独用放射性标记的抗体或抗体片段治疗相比，添加放射致敏剂可以导致增强的功效。放射致敏剂描述于D.M.Goldberg(ed.),Cancer Therapy withRadiolabeled Antibodies,CRC Press(1995)中。放射致敏剂的实例包括吉西他滨、5-氟尿嘧啶、紫杉烷和顺铂。
放射致敏剂可以通过X射线的电磁辐射激活。X射线激活的放射致敏剂的代表性实例包括但不限于以下：甲硝唑、米索硝唑、去甲基米索硝唑、哌莫硝唑、依他硝唑、尼莫拉唑、丝裂霉素C、RSU 1069、SR 4233、E09、RB 6145、烟酰胺、5-溴脱氧尿苷(BUdR)、5-碘脱氧尿苷(IUdR)、溴脱氧胞苷、氟脱氧尿苷(FUdR)、羟基脲、顺铂及其治疗有效的类似物和衍生物。或者，放射致敏剂可以使用光动力疗法(PDT)激活。光动力学放射致敏剂的代表性实例包括但不限于血卟啉衍生物、卟吩姆钠(r)、苯并卟啉衍生物、NPe6、锡初卟啉(SnET2)、pheoborbide a、细菌叶绿素a、萘酞菁、酞菁类、锌酞菁及其治疗有效的类似物及其衍生物。
12.拓扑异构酶抑制剂
抗SEZ6L2抗体可以与至少一种拓扑异构酶抑制剂缀合。拓扑异构酶抑制剂是设计用于干扰拓扑异构酶(拓扑异构酶I和II)的作用的化疗剂，拓扑异构酶是通过在正常的细胞周期中催化并随后断裂和重新接合DNA链的磷酸二酯骨架来控制DNA结构的变化的酶。DNA拓扑异构酶I抑制剂的代表性实例包括但不限于喜树碱及其衍生物伊立替康(CPT-11，Camptosar，Pfizer，Inc.)和托泊替康(Hycamtin，GlaxoSmithKline Pharmaceuticals)。DNA拓扑异构酶II抑制剂的代表性实例包括但不限于安吖啶、柔红霉素、多柔比星、表鬼臼毒素、玫瑰树碱、表柔比星、依托泊苷、雷佐生和替尼泊苷。
13.酪氨酸激酶抑制剂
抗SEZ6L2抗体可以与至少一种酪氨酸激酶抑制剂缀合。酪氨酸激酶是在细胞内起到将磷酸基团连接到氨基酸酪氨酸上的功能的酶。通过阻断蛋白质酪氨酸激酶起作用的能力，可以抑制肿瘤生长。可以在ADC上使用的酪氨酸激酶的实例包括但不限于阿西替尼、博舒替尼、西地尼布、达沙替尼、厄洛替尼、吉非替尼、伊马替尼、拉帕替尼、来他替尼、尼罗替尼、司马沙尼、舒尼替尼和凡德他尼。
14.其他药剂
可用于ADC中的其他药剂包括但不限于相思豆毒素(例如相思豆毒素A链)、α毒素、油桐蛋白、鹅膏毒素、巴豆毒蛋白、麻疯树毒蛋白、石竹素蛋白、白喉毒素(例如白喉A链和白喉毒素的非结合活性片段)、脱氧核糖核酸酶(Dnase)、白树毒素、mitogellin、modeccin A链、苦瓜抑制剂、新霉素、豹蛙酶、酚霉素、美洲商陆蛋白(PAPI、PAPII和PAP-S)、商陆抗病毒蛋白、假单胞菌内毒素、假单胞菌外毒素(例如，外毒素A链(来自铜绿假单胞菌))、局限曲菌素、蓖麻毒素A链、核糖核酸酶(Rnase)、sapaonaria officinalis抑制剂、皂草素、α-八叠球菌素、葡萄球菌肠毒素-A、破伤风毒素、顺铂、卡铂和奥沙利铂(Eloxatin，SanofiAventis)、蛋白酶体抑制剂(如PS-341[硼替佐米或Velcade])、HDAC抑制剂(伏立诺他(Zolinza，Merck&Company，Inc.))、贝利司他、恩替司他、mocetinostat和帕比司他)、COX-2抑制剂、取代尿素、热休克蛋白抑制剂(例如，格尔德霉素及其众多类似物)、肾上腺皮质抑制剂和单端孢霉烯类(参见，例如，WO 93/21232)。其他药剂还包括天冬酰胺酶(Espar，Lundbeck Inc.)、羟基脲、左旋咪唑、米托坦(Lysodren，Bristol-Myers Squibb)和维甲酸(Renova，Valeant Pharmaceuticals Inc.)。
在一个实施方案中，药剂是吡咯并苯并二氮杂(PBD)。在一个实施方案中，药剂是PARP抑制剂。例如，奥拉帕尼、卢卡帕尼、尼拉帕尼或iniparib。在一个实施方案中，PARP抑制剂是奥拉帕尼。在一个实施方案中，PARP抑制剂是卢卡帕尼。在一个实施方案中，PARP抑制剂是尼拉帕尼。在一个实施方案中，PARP抑制剂是iniparib。在一个实施方案中，药剂是皂草素毒素。
应该注意的是，可以在抗SEZ6L2ADC中使用的上述药物部分的组并不是排他的，因为药物的某些实例可以在一个以上的类别中存在，例如，安丝菌素类同时是有丝***抑制剂和抗肿瘤抗生素。
本文考虑使用上述药物部分的所有立体异构体，即在D的手性碳处R和S构型的任何组合。
上述药剂(即未与抗体偶联的裸药剂)也可与本文所述的抗SEZ6L2抗体一起用于联合治疗。在一个实施方案中，抗SEZ6L2抗体或ADC与任何前述药剂一起用于联合治疗以治疗癌症，其中药剂在抗SEZ6L2抗体或ADC施用于受试者之前、同时或之后施用。
B.抗SEZ6L2ADC：示例性接头
抗SEZ6L2ADC包含抗SEZ6L2抗体和至少一种药物，其中抗体和至少一种药物通过接头缀合。如本文所用，术语“接头”是指可以是双功能或多功能的化学部分，并且用于将抗体连接于药物部分。接头可包括一个缀合组分或可包括多个组分。
例如，接头可以包括间隔物，其是延伸药物连接以避免例如屏蔽抗体的活性位点或改善ADC的溶解度的部分。接头组分的其他实例包括担架(stretcher)单元和氨基酸单元。
通常使用两种方法将药物与抗体缀合：通过不可酶促切割的马来酰亚胺或简单和可切割的二硫键接头对还原的链间半胱氨酸二硫化物进行烷基化，及通过可切割的线性氨基酸的赖氨酸酰化。
在一个方面，接头将抗体共价连接到药物部分。使用具有用于将抗体和药物结合的反应性官能团的接头制备ADC。例如，抗体的半胱氨酸硫醇或胺，例如，N-末端或氨基酸侧链如赖氨酸，可以与接头的官能团形成键。
在一个方面，接头具有能够与抗体上存在的游离半胱氨酸反应以形成共价键的官能性。非限制性示例性的这种反应性官能团包括马来酰亚胺、卤代乙酰胺、α-卤代乙酰基、活化酯如琥珀酰亚胺酯、4-硝基苯酯、五氟苯酯、四氟苯酯、酸酐、酰氯、磺酰氯、异氰酸酯和异硫氰酸酯。参见，例如，Klussman等(2004),Bioconjugate Chemistry15(4):765-773第766页的缀合方法。
在一些实施方案中，接头具有能够与抗体上存在的亲电子基团反应的官能团。示例性的这种亲电子基团包括但不限于醛和酮羰基。在一些实施方案中，接头的反应性官能团的杂原子可以与抗体上的亲电子基团反应并与抗体单元形成共价键。非限制性的这种示例性的反应性官能团包括但不限于酰肼、肟、氨基、肼、缩氨基硫脲、肼羧酸酯和芳基酰肼。
在一个方面，抗SEZ6L2抗体通过包含马来酰亚胺己酰基(“mc”)、缬氨酸瓜氨酸(val-cit或“vc”)的接头与澳瑞他汀(例如MMAE)缀合。马来酰亚胺己酰基起到抗SEZ6L2抗体的接头的作用并且是不可切割的。Val-cit是作为接头的氨基酸单元且允许接头通过蛋白酶(特别是蛋白酶组织蛋白酶B)切割的二肽。因此，接头的val-cit组分提供了在暴露于细胞内环境时从ADC释放澳瑞他汀的手段。在一个实施方案中，在接头内，对氨基苄醇(PABA)充当间隔物并且是自我牺牲的，从而允许释放MMAE。
在另一方面，抗SEZ6L2抗体通过带电位阻二硫化物N-琥珀酰亚胺基-4-(2-吡啶基二硫代)丁酸酯(sSPDB)接头与美登素类(例如DM4)缀合。sSPDB是可切割接头，其允许缀合物靶细胞内由于还原性细胞内环境而在细胞溶质中被切割。
在另一方面，抗SEZ6L2抗体通过可切割肽接头如D-Ala-L-dpa与美登素类(例如DM4)缀合。
在另一方面，抗SEZ6L2抗体通过可切割的肽接头如D-Ala-L-dpa与IGN缀合。
合适的接头包括例如可切割和不可切割的接头。接头可以是“可切割的接头”，从而促进药物的释放。非限制性的示例性可切割接头包括酸不稳定接头(例如，包含腙)、蛋白酶敏感(例如，肽酶敏感)的接头、光不稳定接头或含二硫键的接头(Chari等，CancerResearch 52：127-131(1992)；美国专利号5,208,020)。可切割的接头通常易于在细胞内条件下裂解。合适的可切割接头包括，例如，可被细胞内蛋白酶切割的肽接头，如溶酶体蛋白酶或内体蛋白酶。在示例性实施方案中，接头可以是二肽接头，例如缬氨酸-瓜氨酸(Val-Cit)或苯丙氨酸-赖氨酸(phe-lys)接头。
接头优选以足够治疗有效的方式在细胞外稳定。在转运或递送到细胞中之前，ADC优选是稳定的并且保持完整，即抗体保持与药物部分缀合。在靶细胞外稳定的接头一旦在细胞内可以以有效的速率切割。因此，有效的接头：(i)维持抗体的特异性结合特性；(ii)允许药物部分的递送，例如，细胞内递送；和(iii)维持药物部分的治疗作用，例如细胞毒性作用。
在一个实施方案中，接头在细胞内条件下是可切割的，使得接头的切割在细胞内环境中从抗体充分释放药物以具有治疗效果。在一些实施方案中，可切割接头是pH敏感的，即在某些pH值下对水解敏感。通常，pH敏感性接头在酸性条件下是可水解的。例如，可以使用在溶酶体中可水解的酸不稳定接头(例如，腙、缩氨基脲、缩氨基硫脲、顺式乌头酰胺、原酸酯、缩醛、缩酮等)(参见，例如，美国专利号5,122,368；5,824,805；5,622,929；Dubowchik和Walker，1999,Pharm.Therapeutics 83:67-123；Neville等,1989,Biol.Chem.264:14653-14661)。这类接头在中性pH条件(例如血液中的那些)下相对稳定，但在低于pH 5.5或5.0(溶酶体的近似pH)下不稳定。在某些实施方案中，可水解的接头是硫醚接头(例如，通过酰基腙键与治疗剂连接的硫醚(参见，例如，美国专利号5,622,929))。
在其他实施方案中，接头在还原条件下是可切割的(例如，二硫化物接头)。本领域已知多种二硫化物接头，包括例如可使用SATA(N-琥珀酰亚胺基-5-乙酰硫代乙酸酯)、SPDP(N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶二硫代)丙酸酯、SPDB(N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶二硫代)丁酸酯)和SMPT(N-琥珀酰亚胺基氧羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基-二硫代)甲苯)、SPDB和SMPT(参见，例如，Thorpe等，1987，Cancer Res.47：5924-5931；Wawrzynczak等，InImmunoconjugates：Antibody Conjugates in Radioimagery and Therapy of Cancer(CWVogel ed.，Oxford U.Press，1987。还参见美国专利号4,880,935)。
在一些实施方案中，接头可被存在于细胞内环境中(例如，在溶酶体或内体或小窝内)的切割剂例如酶切割。接头可以是例如肽基接头，其被细胞内肽酶或蛋白酶切割，包括但不限于溶酶体或内体蛋白酶。在一些实施方案中，肽基接头至少两个氨基酸长或至少三个氨基酸长。切割剂可包括组织蛋白酶B和D以及纤溶酶，已知所有这些水解二肽药物衍生物，导致活性药物在靶细胞内释放(参见例如，Dubowchik和Walker，1999，Pharm.Therapeutics 83：67-123)。最典型的是可被存在于表达SEZ6L2的细胞中的酶切割的肽基接头。这种接头的实例描述于例如美国专利号6,214,345中，其全部内容并入本文作为参考。在具体实施方案中，可被细胞内蛋白酶切割的肽基接头是Val-Cit接头或Phe-Lys接头(参见，例如，美国专利号6,214,345，其描述了用val-cit接头合成多柔比星)。使用治疗剂的细胞内蛋白水解释放的一个优点是药剂地缀合时通常减弱并且缀合物的血清稳定性通常很高。
在其他实施方案中，接头是丙二酸接头(Johnson等，1995，Anticancer Res.15：1387-93)、马来酰亚胺基苯甲酰基接头(Lau等，1995，Bioorg-Med-Chem.3(10)：1299-1304)或3'-N-酰胺类似物(Lau等，1995，Bioorg-Med-Chem.3(10)：1305-12)。
在再其他实施方案中，接头单元不是可切割的，并且药物例如通过抗体降解释放。参见美国公开号20050238649，其全部内容通过引用并入本文。可以设计包含不可切割接头的ADC，使得ADC基本上保持在细胞外并与靶细胞表面上的某些受体相互作用，以使得ADC的结合启动(或阻止)特定的细胞信号传导途径。
在一些实施方案中，接头是基本上亲水性的接头(例如，PEG4Mal和sulfo-SPDB)。亲水性接头可用于降低药物通过MDR(多重耐药性)或功能相似的转运蛋白从抗性癌细胞中泵出的程度。
在其他实施方案中，在切割时，接头起到直接或间接抑制细胞生长和/或细胞增殖的作用。例如，在一些实施方案中，接头在切割时可以起嵌入剂的作用，从而抑制大分子生物合成(例如DNA复制、RNA转录和/或蛋白质合成)。
在其他实施方案中，接头被设计成通过接头-药物和/或药物单独扩散到邻近细胞来促进旁观者杀伤(杀死相邻细胞)。在其他实施方案中，接头促进细胞内化。
空间位阻二硫化物的存在可以增加特定二硫键的稳定性，从而增强ADC的效力。因此，在一个实施方案中，接头包括空间位阻的二硫化物连接。空间位阻二硫化物是指存在于特定分子环境中的二硫键，其中环境特征在于原子的特定空间排列或取向(通常在同一分子或化合物内)，其防止或至少部分地抑制二硫键的还原。因此，在二硫键近端存在大体积的(或空间位阻的)化学部分和/或大体积的氨基酸侧链阻止或至少部分地抑制二硫键发生导致二硫键还原的潜在相互作用。
值得注意的是，上述接头类型不是互斥的。例如，在一个实施方案中，本文所述的抗SEZ6L2ADC中使用的接头是促进细胞内化的不可切割的接头。
在一些实施方案中，ADC具有下式(式I)：
Ab-(L-D)n(I)
或其药学上可接受的盐或溶剂化物；其中Ab是抗体，例如，抗SEZ6L2抗体，和(L-D)是接头-药物部分。接头-药物部分由作为接头的L-和作为具有例如对靶细胞(例如，表达SEZ6L2的细胞)的细胞生长抑制，细胞毒性或其他治疗活性的药物部分的-D形成；和n是1至20的整数。
在一些实施方案中，n的范围为1至8、1至7、1至6、1至5、1至4、1至3、1至2或者为1。
在一些实施方案中，-D部分是相同的。在另一个实施方案中，-D部分是不同的。
在一些实施方案中，接头组分包含“氨基酸单元”。在一些这样的实施方案中，氨基酸单元允许蛋白酶切割接头，从而在暴露于细胞内蛋白酶如溶酶体酶时促进药物从免疫缀合物释放(Doronina等人(2003)Nat.Biotechnol.21:778-784)。示例性氨基酸单元包括但不限于二肽、三肽、四肽和五肽。示例性的二肽包括但不限于缬氨酸-瓜氨酸(vc或val-cit)、丙氨酸-苯丙氨酸(af或ala-phe)；苯丙氨酸-赖氨酸(fk或phe-lys)；苯丙氨酸-高赖氨酸(phe-homolys)；和N-甲基-缬氨酸-瓜氨酸(Me-val-cit)。示例性的三肽包括但不限于甘氨酸-缬氨酸-瓜氨酸(gly-val-cit)和甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸(gly-gly-gly)。氨基酸单元可以包含天然和/或次要氨基酸和/或非天然存在的氨基酸类似物的氨基酸残基，例如瓜氨酸氨基酸单元可以被设计和优化用于特定酶的酶促切割，例如，肿瘤相关蛋白酶、组织蛋白酶B、C和D或纤溶酶蛋白酶。
在一个实施方案中，氨基酸单元是缬氨酸-瓜氨酸(vc或val-cit)。在另一方面，氨基酸单元是苯丙氨酸-赖氨酸(即，fk)。在氨基酸单元的再一个方面，氨基酸单元是N-甲基缬氨酸-瓜氨酸。在又一方面中，氨基酸单元是5-氨基戊酸、高苯丙氨酸赖氨酸、四异喹啉羧酸赖氨酸、环己基丙氨酸赖氨酸、isonepecotic酸赖氨酸、β-丙氨酸赖氨酸、甘氨酸丝氨酸缬氨酸谷氨酰胺和isonepecotic酸。
用于产生ADC的另一种方法涉及使用异双功能交联剂，其将抗SEZ6L2抗体与药物部分连接。可以使用的交联剂的实例包括N-琥珀酰亚胺基4-(5-硝基-2-吡啶二硫代)-戊酸酯或高度水溶性的类似物N-磺基琥珀酰亚胺基4-(5-硝基-2-吡啶二硫代)-戊酸、N-琥珀酰亚胺基-4-(2-吡啶二硫代)丁酸酯(SPDB)、N-琥珀酰亚胺基-4-(5-硝基-2-吡啶二硫代)丁酸酯(SNPB)和N-磺基琥珀酰亚胺基-4-(5-硝基-2-吡啶二硫代)丁酸酯(SSNPB)、N-琥珀酰亚胺基-4-甲基-4-(5-硝基-2-吡啶二硫代)戊酸酯(SMNP)、N-琥珀酰亚胺基-4-(5-N,N-二甲基甲酰胺基-2-吡啶二硫代)丁酸酯(SCPB)或N-磺基琥珀酰亚胺基4-(5-N,N-二甲基甲酰胺基-2-吡啶二硫代)丁酸酯(SSCPB)。抗体可以用交联剂N-琥珀酰亚胺基4-(5-硝基-2-吡啶二硫代)-戊酸酯、N-磺基琥珀酰亚胺基4-(5-硝基-2)-吡啶二硫代)-戊酸酯、SPDB、SNPB、SSNPB、SMNP、SCPB或SSCPB修饰，然后可以与少量过量的含有硫醇部分的特定药物反应以获得优良的ADC产率(也参见美国专利号6,913,748，其在此引入作为参考)。
在一个实施方案中，带电的接头(也称为前带电接头)用于将抗SEZ6L2抗体与药物缀合以形成ADC。带电接头包括在细胞加工后变为带电的接头。在特定ADC的接头中或在细胞处理后的药物上存在带电基团提供了若干优点，例如(i)ADC的水溶性更高，(ii)在水溶液中以更高浓度操作的能力，(iii)每个抗体连接更多药物分子的能力，可能导致更高的效能，(iv)带电的缀合物种类保留在靶细胞内的潜力，导致更高的效能，和(v)提高多药耐药细胞的敏感性，其不能从细胞中输出带电荷的药物物质。一些合适的带电或前带电交联剂的实例及其合成显示于美国专利号8,236,319的图1至10中，并且通过引用结合到本文中。优选地，带电或前带电交联剂是含有磺酸酯、磷酸酯、羧基或季胺取代基的那些，其显著增加ADC的溶解度，特别是对于具有2-20个缀合药物的ADC。在缀合物在细胞中代谢后，由含有前带电部分的接头制备的缀合物产生一个或多个带电的部分。
可与所述组合物和方法一起使用的接头的其他实例包括缬氨酸-瓜氨酸；马来酰亚胺己酰基；氨基苯甲酸；对氨基苄基氨基甲酰基(PAB)；溶酶体酶可切割的接头；马来酰亚胺己酰基-聚乙二醇(MC(PEG)6-OH)；N-甲基-缬氨酸瓜氨酸；N-琥珀酰亚胺基4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸酯(SMCC)；N-琥珀酰亚胺基4-(2-吡啶二硫代)丁酸酯(SPDB)；和N-琥珀酰亚胺基4-(2-吡啶硫基)戊酸酯(SPP)(也参见US 2011/0076232)。对于使用的另一种接头包括抗生物素蛋白-生物素连接，以提供含抗生物素蛋白-生物素的ADC(还参见美国专利号4,676,980，PCT公开号WO1992/022332A2,WO1994/016729A1,WO1995/015770A1,WO1997/031655A2,WO1998/035704A1,WO1999/019500A1,WO2001/09785A2,WO2001/090198A1,WO2003/093793A2,WO2004/050016A2,WO2005/081898A2,WO2006/083562A2,WO2006/089668A1,WO2007/150020A1,WO2008/135237A1,WO2010/111198A1,WO2011/057216A1,WO2011/058321A1,WO2012/027494A1和EP77671B1)，其中一些这样的接头对生物素酶切割具有抗性。可以使用的另外的接头包括粘连蛋白/dockerin对以提供含粘连蛋白-dockerin的ADC(参见PCT公开号WO2008/097866A2、WO2008/097870A2、WO2008/103947A2和WO2008/103953A2)。
另外的接头可以包含非肽聚合物(实例包括但不限于聚乙二醇、聚丙二醇、聚氧乙烯化多元醇、聚乙烯醇、多糖、葡聚糖、聚乙烯乙基醚、PLA(聚(乳酸))、PLGA(聚(乳酸-乙醇酸)及其组合，其中优选的聚合物是聚乙二醇)(也参见PCT公开号WO2011/000370)。另外的接头也描述于WO 2004-010957、美国公开号20060074008、美国公开号20050238649和美国公开号20060024317中，其各自通过引用整体并入本文。
对于包含美登素类的ADC，美登素上的许多位置可用作化学连接连接部分的位置。在一个实施方案中，包含含有反应性化学基团的连接部分的美登素类是美登醇的C-3酯及其类似物，其中连接部分含有二硫键，且化学反应性基团包含N-琥珀酰亚胺基或N-磺基琥珀酰亚胺基酯。例如，具有羟基的C-3位、用羟甲基修饰的C-14位、用羟基修饰的C-15位和具有羟基的C-20位都是有用的。连接部分最优选与美登醇的C-3位连接。
药物与抗体通过接头的缀合可以通过本领域已知的任何技术完成。许多不同的反应可用于药物和接头与抗体的共价连接。这可以通过抗体的氨基酸残基(包括赖氨酸的胺基团、谷氨酸和天冬氨酸的游离羧酸基团、半胱氨酸的巯基和芳族氨基酸的各种部分)的反应来完成。最常用的共价连接的非特异性方法之一是碳二亚胺反应以将化合物的羧基(或氨基)连接到抗体的氨基(或羧基)基团。另外，已经使用双功能试剂如二醛或亚氨酸酯将化合物的氨基与抗体的氨基连接。Schiff碱反应也可用于将药物与抗体的连接。该方法涉及含有二醇或羟基的药物的高碘酸盐氧化，从而形成醛，其然后与结合剂反应。通过形成Schiff碱发生与抗体氨基的连接。异硫氰酸酯也可用作偶联剂用于将药物共价连接到抗体上。其他技术是本领域技术人员已知的并且在本公开的范围内。
在某些实施方案中，作为接头前体的中间体在适当条件下与药物反应。在某些实施方案中，使用药物或中间体上的反应性基团。药物与中间体之间的反应产物或衍生化的药物随后在适当的条件下与抗SEZ6L2抗体反应。在美国专利申请公开号20030083263、20050238649和20050009751中描述了示例性接头、担架单元、氨基酸单元、自我牺牲的间隔物单元的合成和结构，其各自通过引用并入本文。
ADC的稳定性可以通过标准分析技术测量，例如质谱、HPLC和分离/分析技术LC/MS。
IV.抗SEZ6L2抗体和抗SEZ6L2ADC的用途
抗体和抗体部分(和ADC)优选能够在体内和体外中和人SEZ6L2活性。因此，此类抗体和抗体部分可用于抑制hSEZ6L2活性，例如，在含有hSEZ6L2的细胞培养物中、在人受试者或具有与本文公开的抗体交叉反应的SEZ6L2的其他哺乳动物受试者中。在一个实施方案中，本公开提供了一种抑制hSEZ6L2活性的方法，包括使hSEZ6L2与抗体或抗体部分接触，从而抑制hSEZ6L2活性。例如，在含有或怀疑含有hSEZ6L2的细胞培养物中，可以向培养基中加入抗体或抗体部分以抑制培养物的hSEZ6L2活性。
在另一实施方案中，本文公开了一种降低受试者中hSEZ6L2活性的方法，有利地患有SEZ6L2相关病症或其中SEZ6L2活性有害的病症的受试者。本公开提供用于降低患有这种疾病或病症的受试者中的SEZ6L2活性的方法，该方法包括向受试者施用本公开的抗体或抗体部分，使得受试者中的SEZ6L2活性降低。优选地，SEZ6L2是人SEZ6L2，并且受试者是人受试者。或者，受试者可以是表达本公开的抗体能够与其结合的SEZ6L2的哺乳动物。此外，受试者可以是已经引入SEZ6L2的哺乳动物(例如，通过施用SEZ6L2或通过表达SEZ6L2转基因)。可以将本公开的抗体施用于人受试者用于治疗目的。此外，本发明的抗体可以施用于表达该抗体能够与其结合的SEZ6L2的非人哺乳动物用于兽医目的或作为人类疾病的动物模型。关于后者，此类动物模型可用于评估本公开的抗体的治疗功效(例如，剂量和施用时间过程测试)。
如本文所用，术语“其中SEZ6L2活性有害的病症”旨在包括其中已经显示或已怀疑患有该病症的受试者中SEZ6L2的存在负责该病症的病理生理学或是导致病症恶化的因素的疾病或其它病症。因此，其中SEZ6L2活性有害的病症是预期SEZ6L2活性的降低可减轻病症的症状和/或进展的病症。例如，可以通过患有该病症的受试者的生物细胞、液体或组织中的SEZ6L2浓度的增加(例如，肿瘤、血清、血浆、滑液等中SEZ6L2浓度的增加)来证明这种病症，例如，可以使用如上所述的抗SEZ6L2抗体检测这种浓度的增加。可以用抗体或其抗原结合片段治疗的病症的非限制性实例包括下面讨论的那些病症。例如，合适的病症包括但不限于多种癌症，包括但不限于小细胞肺癌(SCLC)、神经内分泌肿瘤(NET)和***癌。例如去势抵抗性***癌(CRPC)。
可使用本文公开的组合物和方法治疗的癌症的其他实例包括乳腺癌、肺癌、神经胶质瘤、胰腺癌、结肠癌、头颈癌、肾癌、鳞状细胞癌(例如，鳞状细胞肺癌或鳞状细胞头颈癌)、三阴性乳腺癌、非小细胞肺癌、结肠直肠癌和间皮瘤。在一个实施方案中，本文公开的抗体和ADC用于治疗过表达SEZ6L2或SEZ6L2阳性的实体瘤，例如抑制实体肿瘤的生长或减小其大小。在一个实施方案中，本文公开的抗体和ADC用于治疗SCLC(小细胞肺癌)。在另一实施方案中，本文公开的抗体和ADC用于治疗***癌。本文所述的疾病和病症可以通过抗SEZ6L2抗体或ADC以及包含这种抗SEZ6L2抗体或ADC的药物组合物来治疗。
在某些实施方案中，将本文公开的抗体和ADC施用于需要的受试者以治疗可能表现出升高水平的SEZ6L2的晚期实体瘤类型。此类肿瘤的实例包括但不限于小细胞肺癌(SCLC)、神经内分泌肿瘤(NET)和***肿瘤。
在某些实施方案中，本发明包括抑制或减少患有实体肿瘤的受试者中的实体肿瘤生长的方法，所述方法包括向患有实体肿瘤的受试者施用本文所述的抗SEZ6L2抗体或ADC，使得实体肿瘤生长受到抑制或减少。在某些实施方案中，实体肿瘤是小细胞肺癌(SCLC)、神经内分泌肿瘤(NET)或***瘤瘤。在进一步的实施方案中，实体肿瘤是过表达SEZ6L2的实体肿瘤。在某些实施方案中，本文所述的抗SEZ6L2抗体或ADC单独或与另外的药剂或另外的疗法结合施用于患有小细胞肺癌(SCLC)、神经内分泌肿瘤(NET)或***癌(例如，去势抵抗性***癌(CRPC))的受试者。在一个实施方案中，另外的药剂或疗法是放疗和/或化疗。在另一实施方案中，另外的药剂或疗法是PARP抑制剂，例如奥拉帕尼、卢卡帕尼、尼拉帕尼或iniparib。
在某些实施方案中，本公开包括在患有鉴定为表达SEZ6L2或过表达SEZ6L2的肿瘤的实体肿瘤的受试者中抑制或减少实体肿瘤生长的方法，所述方法包括向患有实体肿瘤的受试者施用本文所述的抗SEZ6L2抗体或ADC，使得实体肿瘤生长受到抑制或降低。用于鉴定SEZ6L2表达肿瘤(过表达SEZ6L2的肿瘤)的方法是本领域已知的，并且包括FDA批准的测试和验证分析。例如，这些测定可以使用对SEZ6L2基因和/或cDNA特异性的引物，并导致SEZ6L2基因/cDNA或其部分的扩增。随后可以使用本领域已知的标准方法，例如通过凝胶电泳确定PCR产物的大小来分析扩增的PCR产物。此类测试可用于鉴定可用本文所述的方法和组合物治疗的肿瘤。
在另一方面，本申请特征为在受试者中治疗(例如，治愈、抑制、改善、延迟或预防其发作或者预防再发或复发)或预防SEZ6L2相关病症的方法。该方法包括：以足以治疗或预防SEZ6L2相关病症的量向受试者施用SEZ6L2结合剂(特别是拮抗剂)，例如，如本文所述的抗SEZ6L2抗体或其片段。SEZ6L2拮抗剂，例如抗SEZ6L2抗体或其片段，可以单独或与本文所述的其他治疗方式组合施用于受试者。
抗体或ADC或其抗原结合部分可以单独使用或组合使用以治疗这些疾病。应当理解，抗体或其抗原结合部分可以单独使用或与另外的药剂(例如，治疗剂)组合使用，这些另外的药剂由技术人员选择用于其预期目的。例如，另外的药剂可以是本领域公认可用于治疗由抗体治疗的疾病或病症的治疗剂。另外的药剂也可以是赋予治疗组合物有益属性的试剂，例如影响组合物粘度的试剂。
还应该理解，包括在本公开中的组合是可用于其预期目的的那些组合。下面列出的药剂是出于说明目的而不旨在是限制性的。作为本公开的部分的组合可以是本公开的抗体和至少一种选自以下列表的另外的药剂。如果组合使得形成的组合物可以执行其预期的功能，则该组合还可以包括一种以上的另外的药剂，例如，两种或三种另外的试剂。
组合疗法可包括一种或多种SEZ6L2拮抗剂，例如，抗SEZ6L2抗体或其片段，其与一种或多种另外的治疗剂(例如，一种或多种细胞因子和生长因子抑制剂、免疫抑制剂、抗炎剂(例如，全身性抗炎剂)、抗纤维化剂、代谢抑制剂、酶抑制剂和/或细胞毒性或细胞生长抑制剂、有丝***抑制剂、抗肿瘤抗生素、免疫调节剂、用于基因治疗的载体、烷化剂、抗血管生成剂、抗代谢物、含硼药剂、化疗保护剂、激素、抗激素剂、皮质类固醇、光活性治疗剂、寡核苷酸、放射性核素剂、拓扑异构酶抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂或放射致敏剂，如本文更多描述的)一起配制和/或共同施用。
在特定实施方案中，本文公开的抗SEZ6L2抗体与抗癌剂或抗肿瘤剂组合使用。术语“抗癌剂”和“抗肿瘤剂”是指用于治疗恶性肿瘤如癌性生长的药物。药物治疗可以单独使用，或与其他治疗如手术或放疗联合使用。根据所涉及器官的性质，可以在癌症治疗中使用几类药物。例如，乳腺癌通常由***刺激，并且可以用使性激素失活的药物治疗。类似地，***癌可以用灭活雄激素(雄性性激素)的药物治疗。
在特定实施方案中，抗SEZ6L2抗体或ADC可以单独施用或与另一种抗癌剂一起施用，所述抗癌剂与抗体结合或协同以治疗与SEZ6L2活性相关的疾病。这种抗癌剂包括，例如，本领域熟知的药剂(例如，细胞毒素、化疗剂、小分子和辐射)。抗癌剂的实例包括但不限于Panorex(Glaxo-Welcome)、Rituxan(IDEC/Genentech/Hoffman la Roche)、Mylotarg(Wyeth)、Campath(Millennium)、Zevalin(IDEC和Schering AG)、Bexxar(Corixa/GSK)、Erbitux(Imclone/BMS)、Avastin(Genentech)和Herceptin(Genentech/Hoffman laRoche)。其他抗癌剂包括但不限于美国专利号7,598,028和国际公开号WO2008/100624中公开的那些，其内容通过引用结合到本文中。一种或多种抗癌剂可以在施用抗体或其抗原结合部分的同时或之前或之后施用。
在本公开的具体实施方案中，本文所述的抗SEZ6L2抗体或ADC可用于与NAMPT抑制剂的组合疗法中(参见US2013/0303509；AbbVie,Inc.中的抑制剂的实例，通过引用并入本文)以治疗需要的受试者。NAMPT(也称为前B细胞集落增强因子(PBEF)和内脂素)是催化烟酰胺的磷酸核糖基化的酶，并且是救援NAD的两种途径之一中的限速酶。在一个实施方案中，本文所述的抗SEZ6L2抗体和ADC与NAMPT抑制剂组合施用用于治疗受试者的癌症。
在具体的实施方案中，本文所述的抗SEZ6L2抗体或ADC可以与SN-38一起用于联合疗法中，SN-38是拓扑异构酶抑制剂伊立替康的活性代谢产物。
药物组合物可包括“治疗有效量”或“预防有效量”的抗体或抗体部分。“治疗有效量”是指在必要的剂量和时间内有效实现所需治疗结果的量。治疗有效量的抗体或抗体部分可以由本领域技术人员确定，并且可以根据诸如疾病状态、个体的年龄、性别和体重以及抗体或抗体部分在个体中引起期望的反应的能力等因素而变化。治疗有效量也是治疗有益效果超过抗体或抗体部分的任何毒性或有害作用的量。“预防有效量”是指在必要的剂量和时间内有效实现所需预防结果的量。通常，由于在疾病之前或疾病的早期阶段在受试者中使用预防剂量，预防有效量将小于治疗有效量。
可以调整剂量方案以提供最佳的所需反应(例如，治疗或预防反应)。例如，可以施用单次浓注，可以随时间施用几个分开的剂量，或者可以根据治疗情况的紧急程度按比例减少或增加剂量。以单位剂量形式配制肠胃外组合物以利于施用和剂量均匀是特别有利的。本文所用的单位剂量形式是指适合作为用于待治疗的哺乳动物受试者的单一剂量的物理上离散的单位；每个单元含有预定量的活性化合物，其经计算以与所需药物载体相关联而产生所需治疗效果。单位剂量形式的规格由(a)活性化合物的独特特征和要实现的特定治疗或预防效果和(b)配制这种活性化合物用于处理个体敏感性的技术中固有的局限性决定并且直接取决于该方面。
治疗或预防有效量的ADC、抗体或抗体部分的示例性的非限制性范围是0.1-20mg/kg，更优选1-10mg/kg。应注意，剂量值可随待缓解的病症的类型和严重程度而变化。应进一步理解，对于任何特定受试者，特定剂量方案应根据个体需要和施用或监督组合物施用的人的专业判断随时间调整，并且本文所述的剂量范围仅是示例性的，且不旨在限制所要求保护的组合物的范围或实践。
在另一方面，本申请提供了一种用于检测体外样品(例如，生物样品，例如血清、血浆、组织、活组织检查)中SEZ6L2的存在的方法。所述方法可用于诊断疾病，例如癌症。该方法包括：(i)使样品或对照样品与本文所述的抗SEZ6L2抗体或其片段接触；(ii)检测抗SEZ6L2抗体或其片段与样品或对照样品之间复合物的形成，其中样品中复合物形成相对于对照样品的统计学显著变化指示样品中存在SEZ6L2。
鉴于它们结合人SEZ6L2的能力，抗人SEZ6L2抗体或其部分(及其ADC)可使用常规免疫测定如酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)或组织免疫组织化学用于检测人SEZ6L2(例如，在生物样品如血清或血浆中)。在一个方面，本公开提供一种检测生物样品中人SEZ6L2的方法，包括使生物样品与抗体或抗体部分接触，并检测与人SEZ6L2结合的抗体(或抗体部分)或未结合的抗体(或抗体部分)，从而检测生物样品中的人SEZ6L2。抗体用可检测物质直接或间接标记以便于检测结合或未结合的抗体。合适的可检测物质包括各种酶、辅基、荧光材料、发光材料和放射性材料。合适的酶的实例包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙酰胆碱酯酶；合适的辅基复合物的实例包括链霉抗生物素蛋白/生物素和抗生物素蛋白/生物素；合适的荧光材料的实例包括伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、二氯三嗪基胺荧光素、丹磺酰氯或藻红蛋白；发光材料的实例包括鲁米诺；合适的放射性物质的实例包括3H、14C、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I、177Lu、166Ho或153Sm。
替代标记抗体，可以利用用可检测物质标记的rhSEZ6L2标准物和未标记的抗人SEZ6L2抗体通过竞争免疫测定法在生物体液中测定人SEZ6L2。在该测定中，将生物样品、标记的rhSEZ6L2标准物和抗人SEZ6L2抗体组合，并测定与未标记的抗体结合的标记的rhSEZ6L2标准品的量。生物样品中人SEZ6L2的量与结合抗SEZ6L2抗体的标记的rhSEZ6L2标准物的量成反比。类似地，人SEZ6L2也可以利用用可检测物质标记的rhSEZ6L2标准物和未标记的抗人SEZ6L2抗体通过竞争免疫测定法在生物体液中进行测定。
在又一方面中，本申请提供了一种用于检测体内SEZ6L2的存在的方法(例如，在受试者体内成像)。所述方法可用于诊断病症，例如SEZ6L2相关病症。该方法包括：(i)在允许抗体或片段与SEZ6L2结合的条件下，对受试者或对照受试者施用如本文所述的抗SEZ6L2抗体或其片段；(ii)检测抗体或片段与SEZ6L2之间复合物的形成，其中受试者中复合物形成相对于对照受试者的统计学显著变化表明存在SEZ6L2。
V.药物组合物
本公开还提供了药物组合物，其包含抗体或其抗原结合部分或者ADC和药学上可接受的载体。包含抗体或ADC的药物组合物用于诊断、检测或监测病症，预防、治疗、控制或改善病症或其一种或多种症状，和/或用于研究中，但不限于此。在具体实施方案中，组合物包含一种或多种抗体。在另一实施方案中，药物组合物包含一种或多种抗体或ADC和除抗体或ADC之外的一种或多种预防或治疗剂，用于治疗其中SEZ6L2活性有害的病症。优选地，已知预防或治疗剂可用于或者已经或目前用于预防、治疗、控制或改善病症或其一种或多种症状。根据这些实施方案，组合物可进一步包含载体、稀释剂或赋形剂。
抗体和抗体部分或ADC可以掺入适合施用于受试者的药物组合物中。通常，药物组合物包含抗体或抗体部分和药学上可接受的载体。如本文所用，“药学上可接受的载体”包括生理上相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。药学上可接受的载体的实例包括水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、右旋糖、甘油、乙醇等中的一种或多种，以及它们的组合。在许多情况下，优选在组合物中包含等渗剂(例如糖)、多元醇如甘露醇、山梨糖醇或氯化钠。药学上可接受的载体可以进一步包含少量辅助物质，例如润湿剂或乳化剂、防腐剂或缓冲剂，其增强抗体或抗体部分或ADC的保质期或有效性。
各种递送***是已知的并且可用于施用一种或多种抗体或ADC或一种或多种抗体与用于预防、控制、治疗或改善病症或其一种或多种症状的预防剂或治疗剂的组合，例如，包封在脂质体中、微粒、微胶囊、能够表达抗体或抗体片段的重组细胞、受体介导的内吞作用(参见，例如，Wu和Wu，J.Biol.Chem.262：4429-4432(1987))、核酸作为逆转录病毒或其他载体的部分的构建，等等。施用预防或治疗剂的方法包括但不限于肠胃外施用(例如，皮内、肌肉内、腹膜内、静脉内和皮下)、硬膜外施用、肿瘤内施用和粘膜盘旋(例如，鼻内和口腔途径)。此外，可以使用肺部施用，例如，通过使用吸入器或喷雾器以及具有雾化剂的制剂。参见，例如，美国专利号6,019,968、5,985,320、5,985,309、5,934,272、5,874,064、5,855,913、5,290,540和4,880,078；和PCT公开号WO 92/19244、WO 97/32572、WO97/44013、WO 98/31346和WO 99/66903，它们各自通过引用整体并入本文。在一个实施方案中，使用Alkermes肺部药物递送技术(Alkermes，Inc.，Cambridge，MA)施用抗体、组合疗法或组合物。在一个具体实施方案中，预防或治疗剂肌肉内、静脉内、肿瘤内、口服、鼻内、肺部或皮下施用。预防或治疗剂可以通过任何方便的途径施用，例如通过输注或浓注、通过上皮或粘膜皮肤内层(例如，口腔粘膜、直肠和肠粘膜等)吸收，并且可以与其他生物活性剂一起施用。施用可以是***的或局部的。
在具体实施方案中，可能需要将预防或治疗剂局部施用于需要治疗的区域；这可以通过例如但不限于局部输注、通过注射或通过植入物来实现，所述植入物是多孔或无孔材料，包括膜和基质，如，sialastic膜、聚合物、纤维基质(例如，)或胶原蛋白基质。在一个实施方案中，将有效量的一种或多种抗体拮抗剂局部施用于受试者的受影响区域以预防、治疗、控制和/或改善病症或其症状。在另一实施方案中，将有效量的一种或多种抗体局部与抗体之外的有效量的一种或多种疗法(例如，一种或多种预防剂或治疗剂)结合施用于受试者的受影响区域以预防、治疗、控制和/或改善病症或其一种或多种症状。
药物组合物配制为与其预期的施用途径相容。施用途径的实例包括但不限于肠胃外(例如，静脉内、皮内、皮下)、口腔、鼻内(例如，吸入)、透皮(例如，局部)、经粘膜和直肠施用。在一个具体实施方案中，组合物按照常规方法配制成适合于对人类进行静脉内、皮下、肌肉内、口服、鼻内或局部施用的药物组合物。通常，用于静脉内施用的组合物是无菌等渗水性缓冲液中的溶液。必要时，组合物还可包含增溶剂和局部麻醉剂如利多卡因以缓解注射部位的疼痛。
如果本公开的方法包括口服施用，则组合物可以以片剂、胶囊、扁囊剂、凝胶帽、溶液、悬浮液等形式口服配制。片剂或胶囊可以通过常规方法用药学上可接受的赋形剂如粘合剂(例如，预胶化的玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素)；填充剂(例如，乳糖、微晶纤维素或磷酸氢钙)；润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石粉或二氧化硅)；崩解剂(例如，马铃薯淀粉或羟基乙酸淀粉钠)；或润湿剂(例如十二烷基硫酸钠)制备。片剂可以通过本领域熟知的方法包衣。用于口服施用的液体制剂可以采取但不限于溶液、糖浆或悬浮液的形式，或者它们可以作为干燥产品存在用于在使用前用水或其他合适的溶媒构建。这些液体制剂可以通过常规方法用药学上可接受的添加剂如悬浮剂(例如山梨糖醇糖浆、纤维素衍生物或氢化食用脂肪)；乳化剂(例如，卵磷脂或***胶)；非水性溶媒(例如，杏仁油、油性酯、乙醇或分馏植物油)；和防腐剂(例如，对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸)制备。制剂也可以适当地含有缓冲盐、调味剂、着色剂和甜味剂。口服施用的制剂可以适当地配制用于预防或治疗剂的缓释、控释或持续释放。
该方法可包括施用配制用于通过注射(例如，通过推注或连续输注)进行肠胃外施用的组合物。用于注射的制剂可以以具有添加的防腐剂的单位剂型(例如，在安瓿中或在多剂量容器中)提供。组合物可以采取诸如油性或水性溶媒中的悬浮液、溶液或乳液的形式，并且可以含有配制剂如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。或者，活性成分可以是粉末形式，用于在使用前用合适的溶媒(例如无菌无热原水)构建。
通常，组合物的成分单独或以单位剂量形式混合在一起在标明活性剂的量的密封容器如安瓿或小药囊中提供，例如，作为干燥的冻干粉末或无水浓缩物。在施用方式为输注的情况下，组合物可以用含有无菌药用级水或盐水的输液瓶分配。在施用方式是通过注射的情况下，可以提供一安瓿的无菌注射用水或盐水以便可以在施用前混合各成分。
特别地，本公开还提供了一种或多种包装在标明药剂的量的密封容器中的预防或治疗剂或药物组合物，例如安瓿或小药囊。在一个实施方案中，将一种或多种预防或治疗剂或药物组合物作为干燥的灭菌冻干粉末或无水浓缩物提供在密封容器中并且可以重构(例如，用水或盐水)至对于施用于受试者适当的浓度。
抗体和抗体部分或ADC可以通过本领域已知的多种方法施用，虽然对于许多治疗应用，优选的施用途径/方式是皮下注射，静脉内注射或输注。如本领域技术人员所理解的，施用途径和/或方式将根据所需结果而变化。在某些实施方案中，活性化合物可以用载体制备，其保护化合物免于快速释放，例如控释制剂，包括植入物、透皮贴剂和微囊化递送***。可以使用可生物降解的、生物相容的聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。用于制备此类制剂的许多方法是授予专利的或本领域技术人员通常已知的。参见，例如，Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems，J.R.Robinson，ed.，Marcel Dekker，Inc.，New York，1978。
对于本领域技术人员来说清楚的是，本文描述的本发明方法的其他合适的修改和改编是显而易见的，并且可以使用合适的等同物来进行而不脱离本发明或本文公开的实施方案的范围。现在已经详细描述了本发明，通过参考以下实施例将更清楚地理解本发明，这些实施例仅用于说明的目的而不是限制性的。
实施例
实施例1.癌组织中的SEZ6L2表达。
对原发性小细胞肺癌(SCLC)样本、肿瘤邻近组织和正常组织进行靶向抗原发现研究。具体地，通过总和膜LC-MS/MS蛋白质组学分析对18个SCLC原发性肿瘤进行谱分析，并与正常肺和肿瘤相邻组织进行比较。在这些研究中发现SEZ6L2在SCLC原发性肿瘤中显著上调，从而将其确定为随后的鉴定研究的可行候选抗原。
RNAseq数据表明SEZ6L2表达特别地在具有神经内分泌特征的肿瘤(例如神经母细胞瘤、甲状腺髓样癌、类癌瘤、大细胞神经内分泌癌(肺)和小细胞肺癌)中上调。蛋白质印迹分析还显示源自神经内分泌肿瘤的各种细胞系中的高表达水平。
为了进一步研究SEZ6L2肿瘤表达，还使用针对SEZ6L2的探针通过ISH评估了一组33种不同的癌症类型。发现SEZ6L2mRNA在胃肠道、神经内分泌***、生殖***、脑和肺的肿瘤中过表达(参见下表1)。
表1.各种肿瘤中的SEZ6L2表达。
组织和病理 评分:
小肠腺癌 +++
肺小细胞未分化癌 +++
子宫透明细胞癌 +++
甲状腺髓样癌 +++
***腺癌 +++
脑胶质母细胞瘤 +++
直肠腺癌 +++
网膜转移性腺癌 +++
乳腺浸润性小叶癌 ++
卵巢浆液性囊腺癌 ++
脑恶性室管膜瘤 ++
胃腺癌 ++
胰腺腺癌 ++
用针对SEZ6L2的探针对小细胞肺癌和***癌特异性阵列的进一步ISH分析显示SEZ6L2分别在66％和53％的小细胞肺癌和***癌样品中高表达(++或+++)，在正常样品中具有低或检测不到的水平。见下表2。SCLC阵列由32个癌和5个正常或相邻正常肺样品组成，一式两份，而***肿瘤微阵列由69例***腺癌和6个正常组织组成。
表2.SEZ6L2转录物在SCLC和***微阵列中上调。
组织类型 正常或肿瘤 阴性 + ++ +++
肺 SCLC肿瘤 - 11 16 5
肺 正常 5 - - -
*** 肿瘤 4 28 26 11
*** 正常 2 3 1 -
靶向蛋白质组学发现SEZ6L2在人SCLC肿瘤中的最大拷贝数表达在人肿瘤中为每个细胞大约14,000个拷贝，与基于细胞系表达的抗原密度测量一致。已经观察到SEZ6L2在癌细胞系中被酪氨酸磷酸化和泛素化(参见PhosphoSitePlusTM网站)。
为了确定接受化疗的患者中SEZ6L2的蛋白质表达，获得16个化疗难治性SCLC样本，并比较原发性肿瘤与化疗难治性肿瘤中的SEZ6L2表达。发现与原发性肿瘤相比，化疗难治性样品中SEZ6L2的表达相似。
为了比较其他肿瘤类型中的SEZ6L2表达，分析了内部产生的其他适应症中的蛋白质组学数据集。发现SEZ6L2在几种适应症中强烈过表达，并且在大多数肿瘤类型中至少中度过表达，如表3所示。
表3.通过蛋白质组学分析确定的在其他肿瘤类型中的SEZ6L2表达。
适应症/表达
+++表示在>50％的分析样本中过表达(>5倍)。
++表示在至少25％的分析样本中过表达(>5倍)。
+表示在至少10％的分析样本中过表达。
–表示在未发现蛋白质过表达。
实施例2.抗SEZ6L2鼠抗体的产生。
鼠抗体形式的SEZ6L2调节剂按照本文的教导通过用由与6个C-末端组氨酸标签重复序列融合的人SEZ6L2蛋白(Uniprot No.Q6UXD5-1；SEQ ID NO：167)的细胞外部分组成的蛋白质(SEZ6L2-his)接种来产生。三个小鼠品系用于产生高亲和力的、鼠单克隆抗体调节剂，其与SEZ6L2的作用相关和/或抑制SEZ6L2的作用而用于预防和/或治疗各种增殖性疾病。具体地，SJL、NZBW和Balbc小鼠品系用人重组SEZ6L2-his免疫并用于产生杂交瘤。
从表达SEZ6L2-his构建体的293细胞的上清液纯化SEZ6L2-his抗原。将50μg纯化的SEZ6L2-his免疫原用于第一次和第二次免疫，然后用25μg用于最终免疫。通过用变性佐剂(弗氏)腹膜内注射对15只小鼠免疫来产生鼠抗体。在单独的途径中，编码含有C-末端FLAG标签的完全成熟人SEZ6L2蛋白的cDNA购自Origene(目录号#RC220064L1)，且也用于免疫小鼠。每个品系(SJL、NZBW和Balb/c)5只小鼠在5次免疫中用50μg的cDNA进行免疫，然后接受表达SEZ6L2构建体的1000万个293细胞的加强免疫。
流式细胞术用于筛选小鼠血清中对人SEZ6L2特异性的小鼠IgG抗体。高于背景的阳性信号指示对SEZ6L2特异性的抗体。简而言之，用人SEZ6L2转染的1x105个HEK 293细胞(阳性)或1x105个未转染的HEK 293细胞(阴性对照)在冰上与100μl在PBS+1％BSA中以1：100、1：1000和1：10,000稀释的杂交瘤上清液孵育1小时。用PBS+1％BSA洗涤细胞，然后与100μl在PBS+1％BSA中1：1000稀释的与Alexa 488偶联的抗小鼠IgG Fc片段特异性二抗在冰上孵育30分钟。将细胞在PBS+1％BSA中洗涤，并重悬于具有碘化丙锭的相同缓冲液中，和使用MACSquant(Miltenyi Biotec)按照制造商的说明通过流式细胞术进行分析。
处死血清阳性的免疫小鼠。切割脾脏并用作产生抗体的细胞的来源。将脾细胞的单细胞悬液与非分泌性P3x63Ag8.653骨髓瘤细胞以1：1的比率融合。将细胞离心5分钟(1,200rpm)，除去培养基，和将细胞重悬于50ml的I-DMEM中。将细胞再次离心并重悬于1ml PEG中，然后加入4ml I-DMEM并转移至37℃水浴中5分钟。离心后，除去培养基，并将细胞转移到含有200ml Med-E/HAT的温热烧瓶中和分配到40×96孔板中，并转移到含有5％CO2和95％空气的湿润37℃培养箱中。在生长10至11天后，通过免疫荧光和FACS测定法测定来自每个接种细胞的孔的上清液中与SEZ6L2反应性的抗体。
高含量免疫荧光用于鉴定含有优先结合SEZ6L2的免疫球蛋白的孔。简言之，用人SEZ6L2转染的HEK 293细胞(阳性)或未转染的HEK 293细胞(阴性对照)在37℃下与在DMEM+10％FBS中2倍稀释的杂交瘤上清液孵育1小时。孵育后，将细胞在4％甲醛中固定，用PBS洗涤，用0.3％Triton-X-100渗透，并用抗小鼠Alexa 488二抗在室温下标记1小时。用PBS洗涤除去未结合的二抗，并用DNA染料(碘化丙啶和Hoechst 33342)染色细胞。命中使用TTPLabtech Acumen eX3通过低分辨率高通量筛选鉴定，定量阳性和阴性细胞系上每个样品的荧光差异。随后验证这些命中并使用Thermo ArrayScan VTi表征每个样品的亚细胞定位以获得两种细胞系的高分辨率图像。将含有优先结合SEZ6L2的免疫球蛋白的孔转移并扩增。通过流式细胞术确认得到的SEZ6L2特异性克隆杂交瘤。
流式细胞术分析证实来自大多数或所有这些杂交瘤的纯化抗体以浓度依赖性方式结合SEZ6L2。将含有结合SEZ6L2阳性细胞的免疫球蛋白的孔转移并扩增。将得到的克隆杂交瘤在冷冻介质中冷冻保存并储存在液氮中。如通过高于背景的信号确定的含有优先结合人SEZ6L2的免疫球蛋白的孔被转移和扩增。来自DNA和重组蛋白质免疫两者的这种筛选产生了17种与人SEZ6L2相关的鼠抗体。
用于产生本文所述重组抗体的测序和克隆方法如下所述。
从杂交瘤克隆VH和VL序列
为了测定CDR序列，使用试剂盒(Qiagen，Hilden，Germany)从杂交瘤细胞分离总RNA。使用/>One-Step RT-PCR试剂盒(New England BioLabs，Ipswich，MA)进行第一和第二链cDNA合成。使用了几个引物组(表4)。通过琼脂糖电泳分离PCR产物，并切下片段和通过/>凝胶提取试剂盒(Qiagen，Hilden，Germany)纯化。通过Golden Gate克隆技术将片段直接克隆到具有BspQI的表达载体(New England BioLabs，Ipswich，MA)中。通过/>DNA纯化试剂盒(Aline Biosciences，Woburn，MA)将来自每个反应的四个集落放大用于小型制备规模的质粒纯化。
表4.用于产生人抗体的寡核苷酸序列。
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功能性重组VH和VL序列的鉴定
对于每个杂交瘤，将每个质粒发送用于Sanger测序。对这些质粒进行DNA序列测定和分析。
对于每种杂交瘤，独特的重组重链与独特的重组轻链配对。将这些质粒对转染到24孔板中的CHO细胞中。十天后，通过FLOW或Octet筛选来自每个配对的条件培养基的靶标结合。
瞬时表达***
使用ExpiCHO***(Invitrogen，Carlsbad，CA)的推荐转染和培养基组分在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达SEZ6L2重组蛋白和抗SEZ6L2抗体。转染后14天收获细胞培养物上清液，离心，并过滤(0.22μm)。
重组his-标记蛋白的纯化
将来自CHO细胞培养物的条件培养基澄清，过滤，并加载到具有5mL HisTrapTM FF柱(GE Healthcare)的 plus***上。收集级分，通过SDS-PAGE分析，合并，并针对PBS透析。
抗体纯化
将来自CHO细胞培养物的条件培养基澄清，过滤，并通过加载到具有5mLMabSelect柱的/>***(GE Healthcare)上进行纯化。用pH 3.5的100mM甘氨酸洗脱抗体，并用1M Tris-Cl，pH 8.5中和。
重组抗体分析
浓度：使用蛋白A尖端和用于标准曲线的人IgG1抗体在Fortebio Octet上测定重组抗体的浓度。
通过SDS-PAGE的纯度测试：通过还原和非还原样品的十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行纯度测试。将样品(10μg)与上样缓冲液(+/-β-巯基乙醇)混合，加热，并在4-20％凝胶(Invitrogen)上电泳。条带通过Coomassie InstantBlue(Expedeon)染色显现。
通过内毒素的纯度测试：使用Endosafe-PTS***(Charles River Laboratories)通过鲎变形细胞裂解物(LAL)动态浊度法测量内毒素浓度。
通过HPLC-SEC的纯度测试：使用TSKgel UltraSW聚集物保护柱和HPLC柱(TosohBioscience)在1260Infinity***(Agilent)上对样品进行抗体的聚集或其他形式的筛选。通过280nm处的吸光度检测样品和标准品。与标准曲线的比较提供了样品组分的摩尔质量。
亲和力：在Octet Red(Pall，ForteBio)仪器上测定抗体对各种重组SEZ6L2分子的亲和力。将试剂加载到96孔板中后，将具有蛋白A偶联的生物传感器的Octet Red编程如下：基线#1 30秒；120秒以固定抗体；基线#2 30秒；将抗体与重组SEZ6L2结合300秒；和重组SEZ6L2从抗体解离300-600秒。
实施例3.鼠抗体的人源化。
使用互补决定区(CDR)移植将如实施例2中所述产生的四种鼠抗体(mu16H8、mu3E2、mu20C4和mu2E4)人源化。四种鼠抗体的重链和轻链可变区氨基酸序列如下：
mu16H8
重链:
QIQLQQPGTVLARPGASVKMSCKASGYTFTSYWMYWVKQRPGQGLEWIGAIYPRDSDTSYNQKFKGKAKLTAVTSASTAYMELSSLTNEDSAVYYCTRGDYYYGSSYYAMDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO:156)
轻链:
DIVITQAAFSNPVTLGTSASISCSCSKSLLHSNGITYLYWYLQRPGQSPQLLIYRMSNLASGVPDRFSGSGSGTDFTLRISRVEAEDVGVYYCAQMLERPYTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:158)
mu3E2
重链:
EVLLVESGGRLVQPKGSLKLSCAASGFSFNTITMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKSNNYATYYADAVKDRFTISRDDSQSMLYLQMNNLKTEDTAMYFCVRGIFSGYVYAMDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO:160)
轻链:
DVVMTQSPLSLPVSVGDQASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKVLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPYTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:161)
mu20C4
重链:
EVLLVESGGRLVQPKGSLKLSCAASGFSFNTITMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKSNNYATYYADAVKDRFTISRDDSQSMLYLQMNNLKTEDTAMYFCVRGIFSGYVYAMDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO:162)
轻链:
DVVMTQSPLSLPVSVGDQASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKVLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPYTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:164)
mu2E4
重链:
EVKLVESGGVLVKPGGSLKLSCAASGFTFSKYAMSWVRQTPEKRLEWVATISSGGSYTYYPDSVKGRFTISRDNARNTLYLQMSSLRSEDTAIYYCTREGGYDEGYAMDYWGQGTTLTVS(SEQ ID NO:165)
轻链:
DVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHSYGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHFRTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:166)
基于相对于功能性人种系基因的序列相似性选择重链和轻链的人框架。使用Bioluminate( LLC)选择鼠抗体的人结构同源物或人对应物。该软件使用可从公众可得的蛋白质数据库(www.rcsb.org/pdb)获得的经实验确定的抗体结构。
具体地，使用计算机辅助的CDR-移植方法和标准分子工程技术将四种鼠抗体人源化以提供人对应物。通过将鼠抗体的轻链和重链可变区或框架区与具有现有结构的可得的人轻链和重链可变区或框架区进行比较来选择人对应物。出于人源化分析的目的，氨基酸分配到每个CDR结构域是按照Kabat编号。
使用本领域公认的技术进行分子工程过程。为此，从杂交瘤中提取总mRNA并使用本领域公认的技术进行扩增。从核苷酸序列信息，获得关于所述鼠抗体的重链和轻链的V、D和J基因区段的数据。基于序列数据，设计了对抗体的IgVh和Vk轻链的信号肽序列特异性的新引物组用于重组单克隆抗体的克隆。随后，将V-D-J序列与小鼠IgG种系序列比对。四种人源化构建体16H8、3E2、20C4和2E4中每一个的所得遗传排列示于下表5中。
表5.人源化构建体的遗传排列。
表5进一步显示，几乎没有框架改变是维持抗体的有利特性所必需的。在这方面，框架变化或反向突变仅在三个重链可变区中进行，并且在轻链可变区中仅进行了两个框架修饰。
人源化抗体16H8、3E2、20C4和2E4对应于下表6中所示的轻链和重链序列。
表6.人源化抗体16H8、3E2、20C4和2E4的可变区序列
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注意到，对于一些人源化轻链和重链可变区，在CDR中引入保守氨基酸突变以解决稳定性问题而同时保持抗原结合。在每种情况下，发现具有修饰的CDR的抗体的结合亲和力等同于相应的嵌合或鼠抗体。
在通过CDR移植对所有选择的抗体进行人源化后，分析所得的轻链和重链可变区氨基酸序列以确定它们关于鼠供体和人受体轻链和重链可变区的同源性。如下表7所示的结果显示，与人源化可变区序列与供体杂交瘤蛋白质序列的同源性(83％-91％)相比，人源化构建体始终表现出与人种系基因的最接近匹配的等同百分同源性(83％-91％)。
表7.与CDR受体(人)和供体(鼠亲本)的百分同源性
无论是人源化还是鼠的，一旦确定了可变区的核酸序列，抗体使用本领域公认的技术进行表达和分离。为此，将所选重链(人源化或鼠)可变区的合成DNA片段克隆到人IgG1表达载体中。类似地，将可变区轻链DNA片段(再次，人源化或鼠的)克隆到人轻链表达载体中。
然后通过衍生的重链和轻链核酸构建体共转染到ExpiCHO细胞中来表达所选择的抗体。更具体地，一种相容的抗体产生方法包括将鼠或人源化可变区基因定向克隆(使用PCR扩增)到选定的人免疫球蛋白表达载体中。用于Ig基因特异性PCR中的所有引物包括允许直接克隆到含有人IgG1重链和轻链恒定区的表达载体中的限制性位点。引物列于下表8中。
表8.
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根据制造商的推荐，使用Expifectamine(Thermo#A29129)通过用适当的质粒转染ExpiCHO细胞来生成产生所选择抗体的细胞。使用Qiagen’s CompactPrep质粒midi试剂盒(#12843)纯化质粒DNA。将ExpiCHO细胞(Thermo#A29127)在摇瓶中标准条件下在ExpiCHO表达培养基(Thermo#A2910001)中培养。将等量的IgH和相应的IgL链载体DNA(各40μg)加入到4ml的OptiPRO SFM(Thermo#12309019)中。将该混合物与320μl Expifectamine，4mlOptiPRO SFM组合，并伴随轻轻旋转缓慢加入细胞中。转染后14天收获上清液，然后通过以4000×g离心清除细胞碎片，无菌过滤(0.2μm)，并在4℃下储存。然后用蛋白A mAb SelectSure(GE LifeSciences)纯化重组人抗体并在合适的条件下储存。
实施例4.人抗体的产生。
如实施例2中所述，通过接种由人SEZ6L2蛋白的细胞外部分组成的蛋白质(SEZ6L2-his)根据本文的教导产生人SEZ6L2抗体。H2L2小鼠用于产生高亲和力的、完全人单克隆抗体，其可以与SEZ6L2的活性相关和/或抑制SEZ6L2的活性。
使用了两种免疫途径。在第一种途径中，四只H2L2小鼠每两周在足垫中给药用非变性佐剂(Alhydrogel)乳化的5-10μg纯化的重组SEZ6L2-his蛋白4周，随后在几天后进行最后强化。四周后将两只小鼠融合，且另外两只小鼠继续另外两周的每两周免疫，之后融合。在第二个免疫途径中，6只H2L2小鼠通过IP途径每周一次给药在变性佐剂(Freund's)中的50μg重组SEZ6L2-his蛋白9周。
处死血清阳性免疫小鼠，切割脾脏和/或引流***，并用作产生抗体的细胞的来源。使用本领域公认的技术，使用PEG/HAT方法进行融合。将融合细胞在T75烧瓶中培养，并通过ELISA和使用过表达293细胞的流分析测试与SEZ6L2的结合。然后将来自含有结合SEZ6L2的IgG的***单个细胞分选到30X 96孔板中以分离克隆。对这些孔进行培养，然后通过高通量流分析再次筛选，并且转移并扩增含有优先结合人SEZ6L2的免疫球蛋白的孔，如通过高于背景的信号确定的。
人抗体1A1、1D2、1E4、3A1、3B1、3B3、3A2、3A3、3A4、1C6、1C1、1D5、3B6、3B2、2M5-10A1和2M22_10A6对应于下表9中示出的轻链和重链序列。
表9.人抗体的可变区序列
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下表10显示人抗体1A1、3A1、3A2和3A3以及人源化抗体16H8、3E2、20C4和2E4对于人SEZ6L2和食蟹猴SEZL2两者的KD、Kon和Koff值，如通过ForteBio Data Analysis9.0Kinetics软件确定的。简言之，在ForteBio Octet red96仪器中，将蛋白A生物传感器与固定量的测试抗体一起孵育。然后冲洗具有结合的抗体的生物传感器并浸入含有不同浓度的重组靶蛋白的孔中。独立测试了大约5种不同浓度。一段时间后，将生物传感器浸入缓冲液中以使靶蛋白与抗体解离。ForteBio软件包为不同浓度的目标蛋白质的每个分布生成了最佳拟合曲线。分析计算的亲和力测量值，并选择线性范围中间的速率常数值。
表10.人和人源化SEZ6L2抗体的结合亲和力。
实施例5.SEZ6L2抗体在体外促进细胞毒性剂递送至SEZ6L2-表达小细胞肺肿瘤细胞。
为了证明本文公开的SEZ6L2抗体能够介导细胞毒性剂向活癌细胞的递送，使用与皂草素毒素结合的所选择SEZ6L2抗体调节剂进行体外细胞杀伤测定。皂草素通过使细胞质中的核糖体失活来杀死细胞。因此，使用以下测定的细胞死亡表明本文公开的SEZ6L2抗体能够内化并将细胞毒性剂递送至靶细胞的细胞质。
将与皂草素共价连接的抗小鼠或抗人IgG Fab片段(“Fab-Saporin；AdvancedTargeting Systems，分别为#IT-48和#IT-51”)与未标记的SEZ6L2抗体组合，并与表达人SEZ6L2的人SCLC NCI-H524细胞一起孵育。72小时后通过测量细胞存活力测量所得皂草素复合物内化和杀死细胞的能力。
具体地，在添加抗体和毒素前一天，将补充有10％胎牛血清的RPMI中的每孔5,000个NCI-H524细胞接种到96孔组织培养物处理的平板中。表达人SEZ6L2的NCI-H524细胞用对照(IgG1)或纯化的鼠、人源化或人SEZ6L2抗体以0.01μg/ml和0.4μg/ml Fab-Saporin的浓度处理。将细胞培养72小时，之后根据制造商的说明使用Cell Titer GloTM(Promega)计数活细胞数。使用含有细胞与皂草素Fab片段的培养物的原始发光单位(RLU)设定为100％参考值，并相应地计算所有其他计数(称为“活细胞百分比”)。
图1A-1B显示许多测试的SEZ6L2抗体介导了NCI-H524细胞的杀伤。图1A显示鼠抗体2E4、3E2、16H8和20C4；图1B显示人抗体1A1、3A1、3A2、3A3、3A4、3B1、3B2、2B3、3B6及人源化抗体2E4、3E2、16H8和20C4。在图1A中，小鼠IgG(mIgG)用作阴性对照，和抗转铁蛋白受体抗体(TR)用作阳性对照。在图1B中，非结合人抗体(3B5)用作阴性对照，且显示强SEZ6L2结合的人抗体(抗体1A1)用作阳性对照。这些结果表明，在SEZ6L2特异性抗体与细胞表面结合时发生内化，而不需要额外的交联或二聚化。
这些结果不仅证明本文所述的示例性SEZ6L2抗体能够结合在细胞表面上的SEZ6L2抗原和促进细胞毒性有效负载的递送而导致细胞死亡，而且上述数据还证明多种抗SEZ6L2抗体可介导SCLC肿瘤细胞的杀伤。
实施例6.缀合的SEZ6L2抗体在体内抑制肿瘤生长。
鉴于用鼠、人和人源化抗SEZ6L2ADC抗体获得的结果，如实施例5中所述，进行另外的实验以证明示例性鼠和人源化抗SEZ6L2ADC抗体在体内治疗SCLC肿瘤的功效。选择完全鼠抗SEZ6L2抗体(抗体mu16H8)和人源化后代(抗体16H8)并与微管蛋白抑制剂单甲基澳瑞他汀E(MMAE)缀合，以及未缀合的人源化16H8(如实施例2和3中所述产生的)。与MMAE缀合的人IgG1同种型对照(huIgG-MMAE)和PBS包括作为对照组，并施用于携带SCLC细胞衍生的肿瘤的免疫缺陷小鼠。
使用本领域公认的技术，将来源于人SCLC细胞系NCI-H524的肿瘤在受体裸鼠的侧腹中皮下生长。每周监测肿瘤体积和小鼠重量两次。当肿瘤体积达到平均250mm3时，将小鼠随机分配到7或8只小鼠的治疗组中，并腹膜内注射mu16H8-MMAE、16H8-MMAE、16H8(裸)、mIgG-MMAE和PBS。在10天的时间内小鼠给予四次5mg/kg的注射。治疗后，监测肿瘤体积和小鼠重量直至肿瘤超过1200mm3或小鼠变成病态。
这些实验的结果显示在图2A-2B中。通过在NCI-H524细胞衍生的肿瘤中施用鼠和人源化抗SEZ6L2抗体实现肿瘤团块的持久减小(图2A)。在该研究中观察到超过60天没有肿瘤生长。还计算了Kaplan-Meier存活曲线并显示在图2B中。这些结果表明，本文公开的SEZ6L2抗体能够有效减缓或抑制体内小细胞肺癌肿瘤的生长。
实施例7.人抗体与吡咯并苯并二氮(PBD)的缀合(PBD)
如前所述(Stefano J.E.,Busch M.,Hou L.,Park A.,Gianolio D.A.(2013)Micro-and Mid-Scale Maleimide-Based Conjugation of Cytotoxic Drugs toAntibody Hinge Region Thiols for Tumor Targeting.In:Ducry L.(eds)Antibody-Drug Conjugates.Methods in Molecular Biology(Methods and Protocols),vol1045.Humana Press,Totowa,NJ)，人单克隆抗体3A1和1A1及人源化抗体3E2与吡咯并苯并二氮杂(PBD)缀合。简言之，每种抗体用适当摩尔量的TCEP在37℃下部分还原2小时。孵育后，将抗体冷却至室温，并向部分还原的抗体中加入6倍摩尔过量的PBD 1小时。在该孵育后，将整个混合物在凝胶过滤柱上运行以除去游离药物。然后分别使用A280和疏水相互作用色谱(HIC)将一部分洗脱液用于浓缩和DAR测定。
实施例8.与PBD缀合的SEZ6L2对SCLC和***癌细胞的体外杀灭活性
测试实施例7中产生的ADC以确定它们是否能够在体外介导毒素内化和人肿瘤细胞的细胞杀伤。测试与PBD缀合的人抗体3A1和1A1以及人源化抗体3E2对小细胞肺癌和***细胞系细胞的作用。小细胞肺癌细胞系H524、DMS79和H209以及***癌细胞系22Rv1和LNCaP(其全部表达SEZ6L2)，以及小细胞肺癌细胞系H1048(其具有少于500拷贝的SEZ6L2)以1000-5000个细胞/孔接种到96孔板上。
接种SCLC细胞系后，立即将分别具有1.7、1.7和2.5的药物抗体比率(DAR)的3E2-PBD、3A1-PBD(或1A1-PBD)和同种型对照hIgG-PBD在完全培养基中加入到孔中，使得孔中的最终Ab-PBD浓度为0至6.7nM(1μg/ml)。使用NCI-H524细胞，测试具有1.7的DAR的1A1-PBD来代替3A1-PBD。每个处理在2个孔中重复。六天后，通过使用Cell Titer GloTM定量剩余的活细胞数来评估调节剂介导的PBD细胞毒性。使用测试条件的细胞存活率与仅用生长培养基处理的对照孔的细胞存活率的比率通过PrismTM绘制细胞存活力的图。在***癌细胞系中在相同条件下测试和评估缀合的抗体3E2-PBD、3A1-PBD和同种型对照hIgG-PBD，直至67nM(10ug/ml)的终浓度。
当用抗SEZ6L2ADC处理细胞时，与几种细胞系中的对照hIgG相比，观察到更大的活细胞百分比降低(参见图3A-NCI-H524；图3B-DMS79；图3C-NCI-H209；图3D-H1048；图3E–LNCaP；和图3F-22Rv1)。虽然hIgG IgG-PBD可以在高浓度下对细胞具有细胞毒性，但所测试的抗SEZ6L2ADC更有效，表明对SEZ6L2的免疫特异性反应而不是对PBD细胞毒素的一般反应。
实施例9.缀合的SEZ6L2调节剂抑制体内肿瘤生长
进行实验以证明示例性完全人或人源化抗SEZ6L2ADC调节剂在体内治疗SCLC肿瘤中的功效。携带皮下肿瘤的无胸腺小鼠从小细胞肺癌细胞系NCI-H524建立。将小鼠随机分成七或八只小鼠的四组，并通过静脉注射试剂进行治疗。一种完全人抗SEZ6L2抗体(3A1)、一种人源化抗SEZ6L2抗体(3E2)和非结合同种型对照(hIgG)与抗有丝***剂单甲基澳瑞他汀E(MMAE)缀合。两个测试组，同种型对照和单独的溶媒，用于每周两次以5mg/kg剂量给药两周；此后每周测量肿瘤体积两次。
如图4A中所示，该分析证明，与溶媒或同种型对照相比，与MMAE缀合的抗SEZ6L2抗体抑制小鼠中的NCI-H524肿瘤生长。该研究还产生了Kaplan-Meier存活曲线，其清楚地显示了抗原特异性的存活率增加(图4B)。如前所述，用抗SEZ6L2处理的小鼠除了有表现出超出荷瘤裸鼠中通常见到的那些之外的不利健康影响，在测试组和对照组之间没有体重趋势的可辨别的差异。这些结果表明针对SEZ6L2的抗体可用作SCLC的ADC疗法。
实施例10.SEZ6L2表面表达和特异性通过流式细胞术的检测
为了评估SEZ6L2抗体调节剂是否与人SEZ6L2免疫特异性结合和确定相同的调节剂是否与SEZ6和SEZ6L交叉反应，使用MACSquantTM按照制造商的说明书进行流式细胞分析。更具体地，测试调节剂对过表达SEZ6(293-SEZ6)、SEZ6L(293-SEZ6L)和SEZ6L2(293-SEZ6L2)的人同源物的细胞系的交叉反应性。
简而言之，流式细胞术的染色在含有0.5％BSA的1x冷PBS中进行。将一抗(1ug/ml)与活细胞在冰上孵育1小时。在相同缓冲液中洗涤后，将细胞与Alexa488-缀合的抗人IgG二抗@1：1000(709-546-149，Jackson ImmunoResearch)在黑暗中在冰上孵育。孵育30分钟后，将细胞在相同的缓冲液中洗涤，并重悬于缓冲液加碘化丙锭(PI)中以鉴定活细胞。作为阴性对照，将细胞与仅二抗一起孵育。在/>流式细胞仪(MiltenyiBiotec)上进行数据采集并用FlowJo软件进行分析。
图5A-M显示了流式细胞术的结果。图5A-5L右侧的曲线图代表293-SEZ6L2。图5A-5L左侧的曲线图代表293-SEZ6L和293-SEZ6。图5A-5L描绘了以下抗体的结果：1A1(图5A)、1C6(图5B)、3A1(图5C)、3A2(图5D)、3A3(图5E)、3B1(图5F)、3B3(图5G)、3B6(图5H)、2E4:4D2(图5I)、3E2:7D4(图5J)、16H8:A3F5(图5K)和20C4:red(图5L)。图5M表示仅含二抗的对照。
如图5A-M所示，SEZ6L2调节剂识别过表达SEZ6L2的细胞系，但与其他两个家族成员SEZ6L和SEZ6没有可检测的结合。
实施例11.SEZL2ADC与PARP抑制剂组合显示增强的体外功效
最近的临床研究表明使用与PARP抑制剂组合的细胞毒素的益处。考虑到公开出版物已显示PARP 1和2转录物水平在SCLC中相对于非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系高度表达，测试了实施例7中产生的SEZ6L2ADC以确定是否在与PARP抑制剂结合使用时发生细胞存活力的额外降低。将与PBD缀合的人源化SEZ6L2调节剂(3E2-PBD)与PARP抑制剂组合进行测试，以确定对小细胞肺癌细胞系是否存在累加效应。
简而言之，在细胞表面上表达约10,000拷贝的SEZ6L2的小细胞肺癌细胞系NCI-H209以5000个细胞/孔接种到96孔板上。接种后，立即将10pM的3E2-PBD或同种型对照hIgG-PBD(分别具有1.7和2.5的药物抗体比率(DAR))在完全培养基中加入到孔中。然后将PARP抑制剂(奥拉帕尼)加入到这些孔中，使得最终浓度范围为10nM至10uM。PARP抑制剂也在没有ADC的细胞上进行测试。每个处理在2个孔中重复，并且在6天后，通过使用Cell Titer GloTM定量剩余的活细胞数来评估PARP抑制剂加调节剂介导的PBD细胞毒性。使用测试条件的细胞存活率与仅用生长培养基处理的对照孔的细胞存活率的比率，通过PrismTM绘制细胞存活力的图。
如图6所示，单独用PARP抑制剂处理的NCI-209细胞以剂量依赖性方式响应，因为随着抑制剂浓度的增加，观察到更大的活细胞百分比降低。与PARP抑制剂和SEZ6L2ADC(10pM)两者一起孵育的细胞显示更多的活细胞减少，从而证明了累加效应。相反，当IgG-PBD(10pM)与抑制剂组合时，细胞死亡没有可测量的差异，指示了对SEZ6L2的免疫特异性反应而不是对PBD细胞毒素的一般反应。在表达SEZ6L2的SCLC细胞系DMS79、CORL279和NCI-H524中也观察到这种累加效应。
序列总结
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通过引用并入
本申请全文中引用的所有参考文献、专利、未决专利申请和公开专利的内容在此明确引入作为参考。
等同
本领域技术人员将认识到或能够使用不超过常规的实验确定本文所述的本发明具体实施方案的许多等同物。这些等同物旨在由以下权利要求涵盖。

Claims (9)

1.一种抗人癫痫相关6同源物样2(抗hSEZ6L2)抗体或其抗原结合部分，其包含：
包含由SEQ ID NO:35的氨基酸序列组成的CDR3域、由SEQ ID NO:34的氨基酸序列组成的CDR2域和由SEQ ID NO:33的氨基酸序列组成的CDR1域的重链可变区，和包含由SEQ IDNO:39的氨基酸序列组成的CDR3域、由SEQ ID NO:38的氨基酸序列组成的CDR2域和由SEQID NO:37的氨基酸序列组成的CDR1域的轻链可变区，
其中所述抗原结合部分为Fab片段、F(ab’)2片段、由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段、二硫键连接的Fv、scFv或双体抗体。
2.如权利要求1的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或其抗原结合部分包含：
由SEQ ID NO:32的氨基酸序列组成的重链可变区和由SEQ ID NO:36的氨基酸序列组成的轻链可变区。
3.如权利要求1或2的抗体或其抗原结合部分，其与至少一种药物缀合。
4.如权利要求3的抗体或其抗原结合部分，其中所述至少一种药物选自微管蛋白抑制剂、美登素类、澳瑞他汀、DNA烷化剂、吡咯并苯并二氮杂(PBD)、吲哚啉并-苯并二氮杂/>(IGN)、拓扑异构酶抑制剂和拓扑异构酶-I抑制剂。
5.如权利要求3的抗体或其抗原结合部分，其中所述至少一种药物通过接头与所述抗体或其抗原结合部分缀合。
6.一种药物组合物，其包含权利要求1-5任一项的抗体或其抗原结合部分。
7.根据权利要求1-5任一项的抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分或根据权利要求6的药物组合物在制备用于治疗患有小细胞肺癌或***癌的受试者的药物中的用途。
8.根据权利要求1-5任一项的抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分或根据权利要求6的药物组合物在制备用于抑制或减少患有小细胞肺癌或***癌的受试者中的实体肿瘤生长的药物中的用途。
9.如权利要求7或8的用途，其中所述抗SEZ6L2抗体或其抗原结合部分或者所述药物组合物与另外的药剂或另外的疗法组合施用。
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