CN110106064B - 一种微藻快速筛选装置及微藻快速筛选方法 - Google Patents
一种微藻快速筛选装置及微藻快速筛选方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110106064B CN110106064B CN201910477896.5A CN201910477896A CN110106064B CN 110106064 B CN110106064 B CN 110106064B CN 201910477896 A CN201910477896 A CN 201910477896A CN 110106064 B CN110106064 B CN 110106064B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- culture
- microalgae
- algae
- algae liquid
- tube
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 238000012216 screening Methods 0.000 title claims abstract description 58
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 22
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 claims abstract description 112
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 claims abstract description 42
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims abstract description 23
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims abstract description 21
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 8
- 239000005338 frosted glass Substances 0.000 claims description 4
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 abstract description 16
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 15
- 241000195649 Chlorella <Chlorellales> Species 0.000 description 14
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 13
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 11
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 7
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N heavy water Substances [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 description 4
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 4
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 4
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 4
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 4
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 229910015667 MoO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- FRHBOQMZUOWXQL-UHFFFAOYSA-L ammonium ferric citrate Chemical compound [NH4+].[Fe+3].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O FRHBOQMZUOWXQL-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 230000007797 corrosion Effects 0.000 description 2
- 238000005260 corrosion Methods 0.000 description 2
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 2
- 229960004642 ferric ammonium citrate Drugs 0.000 description 2
- 239000005337 ground glass Substances 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 239000004313 iron ammonium citrate Substances 0.000 description 2
- 235000000011 iron ammonium citrate Nutrition 0.000 description 2
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- UGFAIRIUMAVXCW-UHFFFAOYSA-N Carbon monoxide Chemical compound [O+]#[C-] UGFAIRIUMAVXCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000003245 coal Substances 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000004134 energy conservation Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000003546 flue gas Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 239000011435 rock Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 1
- 239000010865 sewage Substances 0.000 description 1
- 238000012807 shake-flask culturing Methods 0.000 description 1
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/02—Form or structure of the vessel
- C12M23/08—Flask, bottle or test tube
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/38—Caps; Covers; Plugs; Pouring means
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M29/00—Means for introduction, extraction or recirculation of materials, e.g. pumps
- C12M29/06—Nozzles; Sprayers; Spargers; Diffusers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/12—Unicellular algae; Culture media therefor
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Clinical Laboratory Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Botany (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
本发明提供了一种微藻快速筛选装置及微藻快速筛选方法,解决传统筛选不能实现藻株与外界气质交换且效率低的问题,该装置包括培养缸、浮力装置、孔板和藻液培养管;培养缸设有玻璃盖,玻璃盖上方设置进气口和出气口,浮力装置设置于孔板下方,孔板上设置至少1个微藻培养孔,微藻培养孔用于放置藻液培养管,藻液培养管底部设有微孔;微藻快速筛选方法包括:将培养缸中添加培养液;采用橡皮套圈将藻液培养管固定在微藻培养孔内;将藻菌落接入藻液培养管中进行培养,将目的藻株通过酶标仪检测筛选出来。本发明能够实现藻株与外界的气质交换,并可以确保生长环境的稳定性,提高培养效率。
Description
技术领域
本发明属于藻种培养领域,尤其涉及一种微藻快速筛选装置及微藻快速筛选方法。
背景技术
近年来,随着科技的进步,许多工厂已经慢慢完成了从高污染向清洁生产的转变,节能减排的观念也日益深入人心,但在多年来的社会经济发展过程中,传统的生产生活方式还是使环境污染成为目前人类面临的重要问题。且由于我国目前的科技发展水平不足以改变能源利用结构,煤炭等化石能源依然是我国能源结构的主体,寻求更有效的环境治理方法是许多科研工作者致力解决的问题。而由于微藻能快速吸收空气中的二氧化碳等气体,且能同化水体中的无机盐并能有效吸附水中的重金属离子,这使其能同时实现对空气和污水的净化,且因其细胞结构简单、便于研究的特点,成为许多环境治理研究的对象。
除此之外,微藻对外界环境有很强的适应能力,当一个种群的微藻受到外界环境的胁迫时,在一定的胁迫程度下,部分微藻可以通过自身突变等形式适应新的环境,使种群向有利的方向进化。因此,改变微藻生存的外在条件,就有可能得到适合需求的微藻藻株;另外,通过诱变育种等方式也能直接得到符合要求的微藻藻株,这样一来,培养符合特定要求的微藻藻株,使其在环境、医药、食品等领域的利用更高效,就具有至关重要的意义。
传统的藻种培养方法主要是将藻种置于摇瓶中进行光照通气或者光照摇床培养,根据藻种的生长情况及脂含量、蛋白质含量等指标挑选出符合要求的藻株,但这种培养方法效率低下,存在大量人力物力的浪费,且在通气培养条件下,由于通气效果较难控制,较难保证每种藻株生长环境的一致性。
目前为止,已有一些微藻微型培养技术用于特定藻株的培养,以提高实验效率,但目前的微藻微型培养技术大多采用封闭式培养,不能进行通气培养,不能实现藻株与外界的气质交换,也不能确保其生长环境的稳定性,也不适于实现对烟道气耐受藻株的培养。
发明内容
本发明的目的是提供一种微藻快速筛选装置及微藻快速筛选方法,解决传统微藻培养装置不能实现藻株与外界的气质交换且效率低的问题。
具体的,本发明提供了一种微藻快速筛选装置,该装置包括培养缸、浮力装置、孔板和藻液培养管;培养缸设有玻璃盖,玻璃盖上方设置进气口和出气口,浮力装置设置于孔板下方,孔板上设置至少1个微藻培养孔,微藻培养孔用于放置藻液培养管,藻液培养管底部设有微孔。
进一步的,微孔的直径小于待培养的微藻的藻细胞直径。
进一步的,微藻培养孔的数量为32-100个。
进一步的,培养缸与玻璃盖的接合处设有磨砂玻璃。
进一步的,孔板与浮力装置可拆卸连接。
进一步的,藻液培养管可拆卸固定在微藻培养孔内。
进一步的,孔板中部设置通气孔,进气口通过玻璃管道与通气孔相连。
进一步的,培养缸、玻璃盖和藻液培养管均采用透明玻璃材质。
另外,本发明还提供了一种微藻快速筛选方法,包括如下步骤:
步骤1:将培养缸中添加培养液,将整个快速筛选装置在高压锅中灭菌、冷却备用;
步骤2:采用橡皮套圈将藻液培养管固定在孔板的微藻培养孔内,使橡皮套圈以下的藻液培养管浸入培养液,橡皮套圈以上的藻液培养管部分露在空气中;
步骤3:将藻菌落接入藻液培养管中进行培养后,将目的藻株通过酶标仪检测筛选出来。
进一步的,步骤3开始培养前,将藻株培养所需的气体通过进气口通入培养缸中。
与现有技术相比,本发明至少能实现以下有益效果之一:
(1)本发明提供的微藻快速筛选装置通过设置带有多孔的孔板,在筛选特定环境下的藻种时,能同时完成多种藻株的筛选,大大节约人力物力和实验材料,且只使用一个培养缸,大大节省空间。
(2)本发明提供的装置通过设置进气口、出气口和通气孔,可以实现藻株与外界的气质交换问题;通过在藻液培养管底部设有微孔,微孔的直径小于待培养的微藻的藻细胞直径,可以将藻细胞截留在管内,同时又能与培养液最大限度地进行物质交换;利用培养缸中大量的培养液避免藻种的通气培养时出现的水分散失严重问题,确保生长环境的稳定性,提高培养效率。
附图说明
附图仅用于示出具体实施例的目的,而并不认为是对本发明的限制,在整个附图中,相同的参考符号表示相同的部件。
图1是本发明的微藻快速筛选装置的整体结构示意图;
图2是本发明的孔板的俯视图;
图3是本发明的快速筛选装置装置的浮力装置、孔板与藻液培养管沿对称轴切开后的切面示意图;
图4a是本发明的实施例3中10个样本的生长曲线;
图4b是本发明的实施例3中10个样本的生物量数据两两进行T-检验分析的分析结果;
图5a是本发明的实施例4中藻株1在本发明的快速筛选装置、通气锥形瓶和通气试管中的生长曲线;
图5b是本发明的实施例4中藻株2在本发明的快速筛选装置、通气锥形瓶和通气试管中的生长曲线;
图5c是本发明的实施例4中藻株3在本发明的快速筛选装置、通气锥形瓶和通气试管中的生长曲线。
图中:1-玻璃盖;2-浮力装置;3-孔板;4-磨砂玻璃;5-进气口;6-培养缸;7-通气孔;8-微藻培养孔;9-出气口;10-藻液培养管;11-橡皮套圈。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。
实施例1
本实施例提供了一种微藻快速筛选装置,如图1-3所示,包括:培养缸6、浮力装置2、孔板3和藻液培养管10;培养缸6设有玻璃盖1,玻璃盖1上方设置进气口5和出气口9,浮力装置2设置于孔板3下方,孔板3上设置至少1个微藻培养孔8,微藻培养孔8用于放置藻液培养管10,藻液培养管10为上部开口的圆柱状,藻液培养管10的底部采用微孔玻璃材质。
具体的,微孔的直径小于待培养的微藻的藻细胞直径,可以将藻细胞截留在管内,同时又能与培养液最大限度地进行物质交换。
与现有技术相比,本实施例提供的微藻快速筛选装置通过设置带有多孔的孔板,在筛选特定环境下的藻种时,能同时完成多种藻株的筛选,大大节约人力物力和实验材料,且只使用一个培养缸,大大节省空间;通过设置进气口、出气口和通气孔,可以实现藻株与外界的气质交换问题;通过在藻液培养管底部设有微孔,微孔的直径小于待培养的微藻的藻细胞直径,可以将藻细胞截留在管内,同时又能与培养液最大限度地进行物质交换;实施时,利用培养缸中大量的培养液避免藻种的通气培养时出现的水分散失严重问题,确保生长环境的稳定性,提高培养效率。
具体的,微藻培养孔的数量为32-100个,例如96个,通过设置多个孔可以实现多种藻株的同时培养,大大节约人力物力和实验材料,大大降低成本。
具体的,孔板3的材料可以为耐高温、不易变形、比强度高、耐蚀性好的轻质材料,例如轻质铝板,轻质铝板密度小、耐高温、不易变形、比强度高、耐蚀性好,使用寿命长。
为了减少杂菌对培养缸中环境的污染,在培养缸与玻璃盖的接合处设置磨砂玻璃4,保证磨砂玻璃与培养缸与玻璃盖的接合处的气密性,同时磨砂玻璃也不易碎,安全可靠。
具体的,孔板3与浮力装置2可以通过连接装置可拆卸连接,例如通过螺栓连接,采用可拆卸连接方式可以保证在对孔板或浮力装置使用时直接进行连接,安装方便快捷,实施过程中,保证藻液培养管与下方培养液始终良好的接触;在对孔板或浮力装置进行更换时也方便快捷,节省时间,降低成本。
具体的,藻液培养管10可拆卸固定在微藻培养孔8内,例如采用橡皮套圈11将藻液培养管10固定在孔板微藻培养孔8内,这样可以根据使用需要选择合适的藻液培养管数量即可,不必造成实验材料的浪费,同时将藻液培养管10固定在微藻培养孔8内,可以避免实施过程中藻液培养管晃动,有利于实验的进行。
具体的,孔板3中部设置通气孔7,进气口5通过玻璃管道与通气孔7相连,实施时,微藻培养所需气体从进气口5进入,通过通气孔7进入到培养缸中,为微藻培养提供所需气体。
值得注意的是,为了实现微藻的光照培养,培养缸6、玻璃盖1和藻液培养管10均采用透明玻璃材质。
具体的,培养缸6的尺寸和大小没有特别限制,培养缸6内可根据需要盛放适宜体积的微藻培养液。为了适应通气搅拌及藻液培养的需要,培养缸6内培养液的体积应占其容积的1/2到2/3之间。
实施例2
本实施例提供了一种微藻快速筛选方法,采用上述实施例1的筛选装置,具体包括如下步骤:
步骤1:将培养缸中添加一定体积的培养液后,将整个快速筛选装置在高压锅中灭菌、冷却备用;
步骤2:采用橡皮套圈将藻液培养管固定在孔板的微藻培养孔内,使橡皮套圈以下的藻液培养管浸入培养液,而橡皮套圈以上的藻液培养管部分露在空气中;
步骤3:将藻菌落接入藻液培养管中进行培养后,将目的藻株通过酶标仪检测筛选出来。
具体的,步骤3开始培养前,将藻株培养所需的气体通过进气口通入培养缸中。
实施例3
本实施例提供了一种微藻快速筛选方法,通过对孔板不同部位微藻生长情况的测定,来评价本装置中孔板中的样本是否具有平行性,本实施例中选用的藻种是小球藻,采用上述实施例1的筛选装置,具体包括如下步骤:
步骤1:标准曲线的绘制:先将小球藻藻种植于摇瓶中预培养7天,再离心去上清,将得到的藻细胞沉淀在-40℃下冷冻干燥24小时制得干藻粉;将干藻粉用蒸馏水稀释至一定的浓度梯度,于570nm波长处测量吸光值,建立干重与OD570值的一元线性回归方程,其线性回归方程为:y=1105.1x+0.0038(R2=0.9983),其中x表示细胞干重(g/mL),y表示OD570,R2为斜率系数。
步骤2:培养基的配制:本实施例中小球藻的培养采用BG-11培养基,每升培养基中含有1.5gNaNO3、0.04gK2HPO4、0.075gMgSO4·7H2O、0.036gCaCl2·2H2O、0.006g柠檬酸、0.006g柠檬酸铁铵、0.001gEDTANa2、1.0mL微量元素A5和999mL蒸馏水;其中,每升A5微量元素含有2.86gH3BO4、1.81gMnCl2·4H2O、0.222gZnSO4、0.39gNa2MoO4·2H2O、0.079gCuSO4·5H2O、0.049gCo(NO3)2·6H2O。
步骤3:小球藻的预培养:将小球藻接种于200毫升BG-11培养基中在光照条件下进行摇瓶培养,温度为28℃,转速为180r/min。
步骤4:孔板样本平行性的验证:本实施例中空板上设置96个孔,在孔板不同位置均匀选取10个样本,每相邻4个藻液培养管为一个样本并分别编号;将BG-11培养液倒入培养缸中至2/3容积处,分别吸取步骤3中预培养至第六天(对数期)的小球藻50微升(根据藻液培养管的装液量保证10%左右的接种量)接种至藻液培养管中,每隔一天吸取每个样本中的一个培养管中的藻液200微升于酶标板中,测量其在570nm波长处的吸光值。
步骤5:数据分析:利用步骤1中作的标准曲线,将步骤4中所测得的吸光值换算为细胞干重,绘制不同样本中小球藻的生长曲线,如图4a所示,从图中可以看出,在孔板不同位置选的10个样本中的小球藻,其生长情况有较小的差异性;再对这10组数据两两进行T-检验分析,分析结果见图4b,可以发现其中p<0.05的个数为2个,小于总共T-检验次数(45)的5%。因此,孔板的平行样本之间不存在显著性差异,绝大部分微藻培养孔对应的藻液培养管都可以用于微藻的培养。
实施例4
在本实施例中,通过对本发明装置与传统的通气锥形瓶、通气试管对不同藻种筛选结果的比较,评定本装置对不同藻种的筛选结果是否具有可靠性,具体实施步骤如下:
步骤1:标准曲线的绘制与原始藻株的预培养:本步骤与实施例3中的步骤1-3相同,以小球藻作为原始藻株,培养基选用BG-11培养基。
步骤2:原始藻株的诱变培养:吸取步骤1中预培养至第六天(对数期)的原始藻株5mL左右于培养皿上,使藻液平铺在培养皿底部并敞口置于紫外灯下照射20min左右,再将诱变后的藻液稀释100倍后涂布在含有固体培养基的培养皿上(固体培养基的配方为:每升固体培养基含有1.5gNaNO3、0.04gK2HPO4、0.075gMgSO4·7H2O、0.036gCaCl2·2H2O、0.006g柠檬酸、0.006g柠檬酸铁铵、0.001gEDTANa2、20g琼脂粉、1.0mL微量元素A5和999mL蒸馏水;其中,每升A5微量元素含有2.86gH3BO4、1.81gMnCl2·4H2O、0.222gZnSO4、0.39gNa2MoO4·2H2O、0.079gCuSO4·5H2O、0.049gCo(NO3)2·6H2O),原始藻株稀释10000倍后涂布在固体培养基上,将其在温度为28℃的光照条件下进行培养。
步骤3:诱变藻株的扩培:将步骤2中的诱变藻株和原始藻株培养一周左右,能观察到明显的单菌落时,用接种环挑取诱变藻株中长势不同的两种菌落及原始藻株的菌落,并分别将其接种到含有BG-11培养基的摇瓶中进行扩培,设置温度为28℃,转速为180r/min。
步骤4:利用本发明实施例1中的装置培养考察不同藻种的生物量变化:将步骤3中的3种扩培后的藻株(藻株1、藻株2和藻株3)每种藻株做三个平行样本,为了测量的需要,每个样本设置六根藻液培养管,将BG-11培养液倒入培养缸中至2/3容积处,分别吸取步骤3中培养至第六天(对数期)的3种藻株的藻液50微升(根据藻液培养管的装液量保证10%左右的接种量)接种至藻液培养管中进行光照及通气培养,并设置温度为28℃;每天吸取每个样本中的一个培养管中的藻液200微升于酶标板中,测量其在570nm波长处的吸光值,共测量6天。
具体的,作为对比例,本实施例中利用通气锥形瓶及通气试管培养考察不同藻种的生物量变化:将步骤3中培养至第六天(对数期)的3种藻的藻液按照10%的接种量分别接种到通气锥形瓶及通气试管中进行光照及通气培养,控制一定的通气速率,并设置温度为28℃,每种藻株做三个平行样本,每天吸取每个样本中的藻液200微升于酶标板中,测量其在570nm波长处的吸光值,共测量六天。
步骤5:数据分析:利用步骤1中所作标准曲线的一元线性回归方程将步骤4中测量得到的OD值换算成细胞干重,并分别绘制藻株1、藻株2和藻株3在通气锥形瓶、通气试管及本发明快速筛选装置中的细胞生长曲线,如图5a-5c所示。数据取平行样本的平均值。
从图5a-5c中可以看出3种藻株在本发明快速筛选装置及通气锥形瓶、通气试管中的生长情况具有较好的一致性,利用本装置进行不同藻株的筛选,其结果具有可靠性。
综上所述,本发明的装置在筛选特定环境下的藻种时,能同时完成多种藻株的筛选,大大节约人力物力和实验材料;例如,若筛选适应烟道气生长的诱变藻株,在每种藻做三个平行样的情况下,利用传统的通气锥形瓶筛选方法则需要9个锥形瓶,每次取样测量完还要分别重新连接管道进行通气,而若利用本装置进行筛选,则只需要一个孔板和相应数量的藻液培养管,大大节省占用的空间,且取样测量完之后只需要连接一个通气管道即可,大大节省了实验时间,同时保证了每种藻株在筛选过程中生长环境的一致性。
由于在进行藻种的通气培养时会出现水分散失严重,从而影响藻细胞生长的情况,而本发明装置则利用培养缸中大量的培养液很好地解决了这一问题;目前的微藻微型培养装置大多是封闭型的,在对不同种类或浓度的气体适应性微藻进行筛选时,只能将气体封存在微孔板中,而本装置则实现了能直接与外界进行气体交换的微藻微型培养。
综上所述,本发明装置可通过对微藻的微型培养,快速筛选出特定环境下的多种微藻株,筛选结果可靠,同时,与传统的通气锥形瓶、通气试管的筛选方法相比,大大节约了人力物力,能有效提高筛选效率。
尽管已经结合优选的实施例对本发明进行了详细地描述,但是本领域技术人员应当理解的是在不违背本发明精神和实质的情况下,各种修正都是允许的,它们都落入本发明的权利要求的保护范围之中。
Claims (9)
1.一种微藻快速筛选装置,其特征在于,包括培养缸(6)、浮力装置(2)、孔板(3)和藻液培养管(10);所述培养缸(6)设有玻璃盖(1),所述玻璃盖(1)上方设置进气口(5)和出气口(9),所述浮力装置(2)设置于孔板(3)下方,所述孔板(3)上设置至少1个微藻培养孔(8),所述微藻培养孔(8)用于放置藻液培养管(10),所述藻液培养管(10)底部设有微孔;所述微孔的直径小于待培养的微藻的藻细胞直径。
2.根据权利要求1所述的微藻快速筛选装置,其特征在于,所述微藻培养孔(8)的数量为32-100个。
3.根据权利要求1所述的微藻快速筛选装置,其特征在于,所述培养缸(6)与玻璃盖(1)的接合处设有磨砂玻璃(4)。
4.根据权利要求1所述的微藻快速筛选装置,其特征在于,所述孔板(3)与浮力装置(2)可拆卸连接。
5.根据权利要求4所述的微藻快速筛选装置,其特征在于,所述藻液培养管(10)可拆卸固定在微藻培养孔(8)内。
6.根据权利要求5所述的微藻快速筛选装置,其特征在于,所述孔板(3)中部设置通气孔(7),所述进气口(5)通过玻璃管道与通气孔(7)相连。
7.根据权利要求1-6任一项所述的微藻快速筛选装置,其特征在于,所述培养缸(6)、玻璃盖(1)和藻液培养管(10)均采用透明玻璃材质。
8.一种微藻快速筛选方法,其特征在于,采用如权利要求1至7任一项所述的微藻快速筛选装置,所述方法包括如下步骤:
步骤1:将培养缸中添加培养液,将整个快速筛选装置在高压锅中灭菌、冷却备用;
步骤2:采用橡皮套圈将藻液培养管固定在孔板的微藻培养孔内,使橡皮套圈以下的藻液培养管浸入培养液,橡皮套圈以上的藻液培养管露在空气中;
步骤3:将藻菌落接入藻液培养管中进行培养后,将目的藻株通过酶标仪检测筛选出来。
9.根据权利要求8所述的微藻快速筛选方法,其特征在于,所述步骤3开始培养前,将藻株培养所需的气体通过进气口通入培养缸中。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201910477896.5A CN110106064B (zh) | 2019-06-03 | 2019-06-03 | 一种微藻快速筛选装置及微藻快速筛选方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201910477896.5A CN110106064B (zh) | 2019-06-03 | 2019-06-03 | 一种微藻快速筛选装置及微藻快速筛选方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN110106064A CN110106064A (zh) | 2019-08-09 |
CN110106064B true CN110106064B (zh) | 2020-06-16 |
Family
ID=67493684
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201910477896.5A Expired - Fee Related CN110106064B (zh) | 2019-06-03 | 2019-06-03 | 一种微藻快速筛选装置及微藻快速筛选方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN110106064B (zh) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111592979A (zh) * | 2020-06-05 | 2020-08-28 | 鄂尔多斯市琢成生物科技有限责任公司 | 一种对藻类悬浮充气连续培养的藻体进行分级的筛选装置 |
Family Cites Families (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8628948B2 (en) * | 2009-06-02 | 2014-01-14 | Coastal Waters Biotechnology Group Llc | Systems and methods for cultivating, harvesting and processing biomass |
CN102115776B (zh) * | 2010-01-04 | 2013-03-27 | 新奥科技发展有限公司 | 一种微藻筛选方法及*** |
WO2012000056A1 (en) * | 2010-07-01 | 2012-01-05 | Mbd Energy Limited | Harvesting microorganisms |
CN102212471B (zh) * | 2011-03-15 | 2013-08-21 | 新奥科技发展有限公司 | 微藻高通量培养设备 |
US9345208B2 (en) * | 2013-12-10 | 2016-05-24 | Mark Randall | System for recycling flue gas |
FR3029209B1 (fr) * | 2014-12-02 | 2018-02-09 | Sunoleo | Dispositif de production d'une culture photosynthetique au moyen d'un photo-bioreacteur et d'au moins un distributeur de lumiere. |
CN204434602U (zh) * | 2015-01-23 | 2015-07-01 | 中国科学院重庆绿色智能技术研究院 | 一种浮游藻类细胞微孔阵列培养装置 |
CN204981878U (zh) * | 2015-09-25 | 2016-01-20 | 通威股份有限公司 | 一种微藻筛选和培养装置 |
FR3056600B1 (fr) * | 2016-09-27 | 2020-10-02 | Suez Groupe | Dispositif d'exposition a la lumiere d'une solution algale, photobioreacteur et procede de demarrage associes |
CN106399056A (zh) * | 2016-11-29 | 2017-02-15 | 天津农学院 | 一种用于藻类培养的无菌通气装置 |
CN106706909B (zh) * | 2016-12-26 | 2019-04-19 | 中国科学院水生生物研究所 | 一种应用于评估微藻二氧化碳耐受力的方法及装置 |
-
2019
- 2019-06-03 CN CN201910477896.5A patent/CN110106064B/zh not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
Establishment of control parameters for in situ, automated screening of sustained hydrogen photoproduction by individual algal colonies.;Graves DA, et al.;《Plant Physiol.》;19880731;第87卷(第3期) * |
Optical microplates for photonic high throughput screening of algal photosynthesis and biofuel production.;Mertiri T. et al.;《Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc.》;20111231 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN110106064A (zh) | 2019-08-09 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Wang et al. | The difference in effective light penetration may explain the superiority in photosynthetic efficiency of attached cultivation over the conventional open pond for microalgae | |
Ji et al. | Biofilm cultivation of the oleaginous microalgae Pseudochlorococcum sp. | |
CN104611227B (zh) | 一种耐受高ph的斜生栅藻及其选育方法 | |
Khan et al. | Potential of wastewater treating Chlorella minutissima for methane enrichment and CO2 sequestration of biogas and producing lipids | |
BRPI0613487A2 (pt) | processo hìbrido em batelada contìnua para produção de óleo e outros produtos úteis de micróbios fotossintéticos | |
CN110684667B (zh) | 一种能同时提高生物质和油脂产量的微藻生物膜培养方法 | |
CN106399109A (zh) | 一株用于废水废气联合处理同步实现固碳脱硝的小球藻 | |
CN106467896A (zh) | 一种耐受高ph的凯氏拟小球藻及其培养应用 | |
CN105734040B (zh) | 生物改性竹炭的制备方法 | |
Mortensen et al. | The growth of Chlorella sorokiniana as influenced by CO 2, light, and flue gases | |
CN110106064B (zh) | 一种微藻快速筛选装置及微藻快速筛选方法 | |
CN106635909A (zh) | 一种原油降解混合菌、菌剂及其应用 | |
CN104328030A (zh) | 夹心结构的表面生长式培养板、***及培养方法 | |
CN204298380U (zh) | 夹心结构的表面生长式培养板、培养单元及培养*** | |
CN116555039B (zh) | 一种蛋白核小球藻的快速养殖方法 | |
CN104328032A (zh) | 表面生长式光合微生物培养单元、培养***及培养方法 | |
CN114763516B (zh) | 烟气汞胁迫下利用植物激素促进微藻固碳和生产脂肪酸的方法 | |
JP3181237B2 (ja) | 微細藻クロレラ及び微細藻クロレラを用いたco2固定化法 | |
CN104498361A (zh) | 一株微小拟双孢藻及其应用和培养方法 | |
CN109046271B (zh) | 一种基于复合生物质基材料的水处理吸附剂的制备方法 | |
CN104560720A (zh) | 一株海洋拟双孢藻及其应用和培养方法 | |
CN106706909A (zh) | 一种应用于评估微藻二氧化碳耐受力的方法及装置 | |
CN213977664U (zh) | 一种高效产氧的微藻固定装置及一种空气净化器 | |
CN109928508A (zh) | 一种利用单星藻生物膜贴壁培养处理含金属沼液的方法 | |
CN216445080U (zh) | 一种用于处理畜禽粪污厌氧发酵废水的光生物反应器 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20200616 Termination date: 20210603 |
|
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |