CN110105442B - 一种具有抗肿瘤作用的宿主因子hPRDX5、编码基因及其应用 - Google Patents

一种具有抗肿瘤作用的宿主因子hPRDX5、编码基因及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种具有抗肿瘤作用的宿主因子hPRDX5、编码基因及其应用，属于癌症治疗技术领域。所述宿主因子hPRDX5为单一蛋白组分，具有制备重复性好、质量可控的优点，同时对人使用不产生免疫原性，与ACBPs相比具有不可比拟的优势。同时宿主因子hPRDX5能明显抑制原位胰腺癌肿瘤生长，同时通过研究hPRDX5对胰腺癌小鼠肿瘤免疫微环境中CD4、CD8、NKT、MDSCs细胞的调控作用发现，与对照组相比，hPRDX5治疗后胰腺肿瘤组织中的CD4+T细胞，CD8+T细胞和NKT细胞比例均明显升高。因此，宿主因子hPRDX5在制备抗肿瘤药物中的应用，能有效降低肿瘤负荷，延长带瘤生存期。

Description

一种具有抗肿瘤作用的宿主因子hPRDX5、编码基因及其应用
技术领域
本发明属于癌症治疗技术领域，具体涉及一种具有抗肿瘤作用的宿主因子hPRDX5、编码基因及其应用。
背景技术
胰腺癌是癌中之王，世界范围内的统计资料显示，胰腺癌的发病率和致死率呈逐年上升的趋势。由于胰腺的特殊解剖部位，致使胰腺癌早期症状隐匿，缺乏特异性，诊断困难。而且胰腺癌恶性程度高，进展快，转移早，因此，病人确诊时往往已进入癌症晚期。胰腺癌患者5年的生存率低于5％，且预后较差。除了手术治疗，对不能切除的中晚期胰腺癌患者，化疗是主要的治疗手段。传统的化疗多采用单一或多药物联合治疗，然而胰腺癌患者确诊后六个月内的死亡率接近100％，可见化疗对胰腺癌治疗效果并不理想。胰腺癌化疗失败主要归因于多重抗药性及严重的全身不良反应，因此，发现新的治疗药物及其机制，将为胰腺癌提供更为有效、不良反应更少的治疗方法，同时为了提高临床胰腺癌的治疗效果，癌症的免疫治疗正在成为国际上癌症治疗和研究的新焦点。
肿瘤微环境是包含参与肿瘤发生和发展的非肿瘤性的支持细胞和细胞外基质的复杂***。肿瘤微环境中的细胞成分包括内皮细胞和它们的前体细胞、平滑肌细胞、多种表型的成纤维细胞以及免疫炎症相关细胞，如淋巴细胞、巨噬细胞、树突状细胞等。肿瘤微环境中的免疫细胞在抑制或促进肿瘤的发生发展中发挥至关重要的作用。肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)包括几个不同的淋巴细胞亚群，如CD4+T细胞、CD8+CTL细胞、γδT细胞、NKT细胞等。这些细胞在肿瘤组织内的浸润和活化比例的升高不仅可抑制包括胰腺癌等多种癌症的发生发展，还可能在机体的抗瘤免疫监视功能中发挥作用。另一方面肿瘤免疫微环境中还存在一群具有免疫抑制功能的细胞，如Treg细胞、髓性来源的抑制性细胞(MDSCs)和肿瘤相关单核巨噬细胞(TAM)，它们可能通过抑制具有抗瘤功能的免疫细胞来促进肿瘤的发展。在胰腺癌的研究中发现，胰腺癌组织内免疫细胞的组成约占50％，其中免疫抑制性细胞，如Treg细胞和髓系来源的抑制性细胞占主导，而细胞毒性T细胞在肿瘤内却无明显浸润。肿瘤微环境内的各种细胞和分子均可通过改变肿瘤内抑制性免疫细胞和细胞毒性免疫细胞的平衡来影响疾病的发展。因此，若能激活和维持肿瘤微环境内的抗瘤免疫反应和有效抑制促瘤免疫反应将非常有利于临床肿瘤病人的预后，这可作为药物治疗胰腺癌的一个有效靶点。
骨髓来源的抑制性细胞，又称为未成熟的骨髓细胞或髓系抑制性细胞，是一群未成熟的髓系细胞，包括未成熟的树突状细胞(DC)、巨噬细胞和中性粒细胞。研究发现，在肿瘤细胞和/或宿主细胞及其分泌的多种因子构成的肿瘤微环境各因素的诱导下，存在髓系抑制性细胞的募集。研究表明，MDSCs的扩增、募集活化有多种因子介入，大致可分为两类。一类是来自肿瘤细胞、肿瘤基质细胞、T细胞产生的炎症细胞因子，如GM-CSF、IL-6等，通过刺激骨髓并阻滞髓系前体细胞成熟进而诱导MDSCs扩增、活化，多数细胞因子通过JAK蛋白家族和细胞信号激活及转录因子3(STAT3)信号通路调节MDSCs扩增。另一类是来自肿瘤细胞释放的趋化因子，研究发现MDSCs可能受多种细胞趋化因子的作用而向肿瘤部位聚集，从而发挥免疫抑制作用帮助肿瘤逃避机体的免疫监视，如CCL2、CXCL5和CXCL12等。炎症细胞因子和趋化因子可募集骨髓MDSCs至外周血或肿瘤组织，MDSCs再被肿瘤细胞、肿瘤基质细胞等分泌的细胞因子刺激扩增、活化并抑制免疫应答，在这一过程中还有多种信号通路参与，包括STAT6、STAT1和NF-κB信号通路等。
MDSCs参与肿瘤免疫逃逸的方式可概括为两个方面，一方面MDSCs可以表达多种促血管形成因子直接促进肿瘤血管的形成，如VEGF和MMPs。另一方面MDSCs可以通过表达高水平的ARG1、iNOS和ROS抑制T细胞介导的天然抗肿瘤免疫。髓系抑制性细胞可通过促进炎症，促进肿瘤血管生成和抑制固有免疫和获得性免疫反应来促进肿瘤生长。因此，髓系抑制性细胞也被认为是导致癌症患者出现免疫功能紊乱和肿瘤负担的主要因素。
在胰腺癌的研究中发现，与正常胰腺组织相比，髓系抑制性细胞可明显聚集于胰腺癌腺管区和基质内。髓系抑制性细胞在胰腺癌病人外周血中也明显升高，这与病人高的死亡风险相关，同时，髓系抑制性细胞的升高伴随着细胞因子IL-13的升高。髓系抑制性细胞的浸润也往往伴随着T细胞特别是CD8+细胞毒性T细胞数量的减少，这与髓系抑制性细胞通过产生ROS和NO阻断CD8+T细胞的反应相关。在小鼠胰腺癌细胞内的髓系抑制性细胞还可高表达Bcl-2基因和过磷酸化的Akt，抑制CD8+T细胞的反应。因此，如果能有效抑制髓系抑制性细胞在胰腺癌肿瘤免疫微环境的扩增、募集和活化，可能对胰腺癌的治疗发挥重要作用。
抗肿瘤活性肽(anticancer bioactive peptide，ACBPs)，以下简称“ACBPs”；是用人胃癌细胞碎片免疫山羊，从其脾脏中分离获得的具有良好抗肿瘤活性的肽类、蛋白及细胞因子类混合物，研究初期因应用传统的多肽提取方式获取，固命名为“肽”，该项目开始于1996年，研究历经20余年。科研人员经动物体内实验证实ACBPs是一种无毒副作用，可长期反复使用并有明显的抑制肿瘤细胞增殖作用，同时，体外实验表明有较强的杀伤癌细胞、抑制肿瘤细胞DNA合成的生物功能。但ACBPs为混合物形式存在，存在重复性差、质量可控性低、获取方式周期冗长的问题，而且由于来源的问题存在免疫原性的束缚，使其在抗肿瘤的应用方面存在较大的限制。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种单组分、具有抗肿瘤作用的宿主因子hPRDX5、编码基因及其应用，所述宿主因子hPRDX5不仅具有制备重复性好、质量可控的优点外还能降低肿瘤负荷，延长带瘤生存期。
本发明提供的一种具有抗肿瘤作用的宿主因子hPRDX5，所述宿主因子hPRDX5的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
本发明提供了编码所述宿主因子hPRDX5的基因，所述宿主因子hPRDX5的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。
本发明提供了一种包含所述基因的重组载体。
本发明提供了一种包含所述宿主因子hPRDX5或所述基因的重组细胞。
本发明提供了一种用于扩增所述宿主因子hPRDX5的基因的引物对，所述引物对包括正向引物和反向引物；
所述正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；所述反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。
本发明提供了所述宿主因子hPRDX5的制备方法，包括以下步骤：
1)以所述基因为模板，用所述引物对进行PCR反应扩增，得到带有双酶切位点的DNA片段；
2)将所述带有双酶切位点的DNA片段和载体分别采用EcoRI和HindIII进行双酶切，将得到的酶切后的DNA片段和载体连接，得到重组载体；
3)将所述重组载体导入原核生物表达载体中，培养，诱导，分离纯化，得到重组表达的宿主因子hPRDX5。
优选的，所述PCR反应的扩增体系为2×PCR mix10μL，ddH2O 8μL，50～200ng/μLDNA模板1μL，20μmol/L正向引物0.5μL和20μmol/L反向引物0.5μL。
优选的，所述PCR反应的扩增程序为：96℃，预变性2min；96℃，变性1min，56℃，退火30s，72℃延伸40s，30个循环；72℃延伸5min。
本发明提供了所述宿主因子hPRDX5、所述基因、所述重组载体、所述重组细胞、所述引物对或所述制备方法制备得到的宿主因子hPRDX5在制备抗肿瘤药物中的应用。
优选的，所述肿瘤的种类包括胰腺癌。
本发明提供的一种具有抗肿瘤作用的宿主因子hPRDX5，属于PRDX5超家族，其编码基因经过密码子优化，克服了免疫原性问题，同时所述宿主因子hPRDX5为单一组分蛋白，经过外源表达能够重复稳定的得到宿主因子hPRDX5。同时重组表达的宿主因子hPRDX5抑瘤效果显著，试验结果表明，hPRDX5能明显抑制原位胰腺癌肿瘤生长；研究hPRDX5对胰腺癌小鼠肿瘤免疫微环境中CD4、CD8、NKT、MDSCs细胞的调控作用发现，与对照组相比，hPRDX5治疗后胰腺肿瘤组织中的CD4+T细胞，CD8+T细胞和NKT细胞比例均明显升高，MDSCs细胞明显降低；而在脾脏中几种细胞比例则无明显变化，G-MDSCs细胞比例明显下降，而M-MDSCs比例变化不明显。
附图说明
图1为hPRDX5蛋白的SDS-PAGE电泳分析；
图2为hPRDX5明显抑制原位胰腺癌肿瘤生长，其中图2-A为hPRDX5处理组和对照组对原位胰腺癌肿瘤体积的比较图，图2-B为hPRDX5处理组和对照组对原位胰腺癌肿瘤生长的柱形图；
图3为hPRDX5上调胰腺癌小鼠原位肿瘤组织中CD4+/CD8+T细胞比例，其中图3-A为hPRDX5处理组和空白对照组的小鼠肿瘤细胞中CD4+/CD3+的细胞比例；图3-B为hPRDX5处理组和空白对照组的小鼠肿瘤细胞中CD8+/CD3+的细胞比例；图3-C为hPRDX5处理组和空白对照组的小鼠脾脏细胞中CD4+/CD3+的细胞比例；图3-D为hPRDX5处理组和空白对照组的小鼠脾脏细胞中CD8+/CD3+的细胞比例；
图4为hPRDX5上调胰腺癌小鼠原位肿瘤组织中NKT细胞比例，其中图4-A为hPRDX5处理组和空白对照组的小鼠肿瘤细胞中NK/CD3-的细胞比例；图4-B为hPRDX5处理组和空白对照组的小鼠肿瘤细胞中NKT/CD3+的细胞比例；图4-C为hPRDX5处理组和空白对照组的小鼠脾脏细胞中NK/CD3-的细胞比例；图4-D为hPRDX5处理组和空白对照组的小鼠脾脏细胞中NKT/CD3+的细胞比例；
图5为hPRDX5抑制胰腺癌小鼠肿瘤组织中MDSCs细胞比例，其中图5-A为hPRDX5处理组和空白对照组的小鼠肿瘤细胞中Ly6C+/Ly6G+的细胞比例；图5-B为hPRDX5处理组和空白对照组的小鼠脾脏细胞中Ly6C+/Ly6G+的细胞比例。
具体实施方式
本发明提供的一种具有抗肿瘤作用的宿主因子hPRDX5，所述宿主因子hPRDX5的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。宿主因子hPRDX5属于PRDX5超家族，属于人源蛋白，因此制备成药物后对人用药不会免疫原性。
本发明提供了编码所述宿主因子hPRDX5的基因，所述宿主因子hPRDX5的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。所述基因是在宿主因子hPRDX5一级结构的基础经过密码子优化得到。所述基因的长度优选包括489bp。所述基因的来源优选为采用人工合成的方法获得。在本发明实施例中，所述基因委托华大基因公司合成。
本发明提供了一种用于扩增所述宿主因子hPRDX5的基因的引物对，所述引物对包括正向引物和反向引物；所述正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；所述反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。在本发明中，所述引物对的来源优选为人工合成。所述引物对的序列分别带有两个酶切位点序列。
本发明提供了所述宿主因子hPRDX5的制备方法，包括以下步骤：
1)以所述基因为模板，用所述引物对进行PCR反应扩增，得到带有双酶切位点的DNA片段；
2)将所述带有双酶切位点的DNA片段和载体分别采用EcoRI和HindIII进行双酶切，将得到的酶切后的DNA片段和载体连接，得到重组载体；
3)将所述重组载体导入原核生物表达载体中，培养，诱导，分离纯化，得到重组表达的宿主因子hPRDX5。
在本发明中，所述PCR反应的扩增体系优选为2×PCR mix 10μL，ddH2O 8μL，50～200ng/μLDNA模板1μL，20μmol/L正向引物0.5μL和20μmol/L反向引物0.5μL。
在本发明中，所述PCR反应的扩增程序优选为：96℃，预变性2min；96℃，变性1min，56℃，退火30s，72℃延伸40s，30个循环；72℃延伸5min。
在本发明中，所述载体没有特殊限制，采用本领域所熟知的含有EcoRI和HindIII酶切位点的载体即可。在本发明实施例中，所述载体为pET28a(+)，所述pET28a(+)购自Novagen公司。所述双酶切的程序和体系采用本领域所熟知的程序和体系即可。
在本发明中，所述连接的方法没有特殊限制，采用本领域所熟知的连接方法即可。在本发明实施例中，所述连接用连接酶为T4连接酶。本发明对所述连接时程序没有特殊限制，采用本领域所熟知的连接程序即可。
在本发明中，在将所述重组载体导入原核生物表达载体前，优选还包括对所述重组载体进行验证。所述验证的方法优选将所述重组载体转入大肠杆菌DH5a感受态细胞中，在含卡那霉素抗生素的LB平板上筛选，筛选单菌落后提取重组子，用限制性内切酶EcoRI和HindIII进行双酶切重组子，酶切产物的片段大小分别为480bp左右的片段和5300bp左右的载体即为阳性质粒，用于后续实验。本发明对所述大肠杆菌DH5a感受态细胞没有特殊限制，采用本领域所熟知的购买来源即可。在本发明实施例中，所述大肠杆菌DH5a感受态细胞购自北京全式金生物技术有限公司。所述提取重组子所用试剂盒优选为北京康为世纪生物科技有限公司的质粒提取试剂盒。
验证后，本发明将所述重组载体导入原核生物表达载体中，培养，诱导，分离纯化，得到重组表达的宿主因子hPRDX5。
在本发明中，所述原核生物表达载体优选为E.coliBL21(DE3)，本发明对所述E.coliBL21(DE3)的来源没有特殊限制，采用本领域所熟知的来源即可。在本发明实施例中，所述E.coliBL21(DE3)购自北京全式金生物技术有限公司。所述导入原核生物表达载体的方法也没有特殊限制，采用本领域常规方法转化即可。
在本发明中，所述培养的温度优选为37℃；所述培养优选为摇床过夜培，所述培养用培养基优选为LB培养基。诱导的时机为在37℃培养5h，待OD600为0.5时进行诱导。所述诱导的方式优选为向培养基中加入IPTG至终浓度为1mmol/L，在18℃诱导表达18h后进行分离纯化。本发明对所述分离纯化的方法没有特殊限制，采用本领域所熟知的分离纯化方法即可。
本发明提供了一种包含所述基因的重组载体。所述重组载体中表达载体优选为pET28a(+)。本发明对所述pET28a(+)的来源没有特殊限制，采用本领域所熟知的质粒来源即可。在本发明实施例中，所述pET28a(+)购自Novagen公司。所述重组载体的方法见上述制备方法中得到的重组载体方法。
本发明提供了一种包含所述宿主因子hPRDX5或所述基因的重组细胞。所述重组细胞的制备方法优选见上述制备方法中制备的导入有重组载体的原核生物表达载体。
本发明提供了所述宿主因子hPRDX5、所述基因、所述重组载体、所述重组细胞、所述引物对或所述制备方法制备得到的宿主因子hPRDX5在制备抗肿瘤药物中的应用。
在本发明中，所述肿瘤的种类优选为胰腺癌。所述抗肿瘤药物用于抗肿瘤时，hPRDX5的用量优选为10mg/kg。该用量可以用于人也可以用于小鼠。所述抗肿瘤药物的剂型优选为注射液。
下面结合实施例对本发明提供的一种具有抗肿瘤作用的宿主因子hPRDX5、编码基因及其应用进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
依据hPRDX5序列设计扩增引物hPRDX5-正向引物和hPRDX5-反向引物。扩增所用的DNA模板是经密码子优化的DNA序列(SEQ ID No.2)，PCR扩增是为了引入所需的酶切位点。
引物序列如下:
hPRDX5-正向引物：ggaattcatggctccgatcaaagttggtgacg(SEQ ID No.3)；
hPRDX5-反向引物cccaagcttttacagctgagagatgatgttcgga(SEQ ID No.4)。
PCR扩增体系为：2×PCRmix 10μl，ddH2O 8μl，模板DNA 1μl(约50ng-200ng)，20μM正反向引物各0.5μl。PCR反应条件为：96℃，2min预变性；96℃，1min变性，56℃，30s退火，72℃延伸40s(30个循环)；最后72℃延伸5min，4℃下保存。
实施例2
表达蛋白hPRDX5重组质粒的构建方法
实施例1中PCR扩增结束后，先使用1％的琼脂糖凝胶进行电泳，电压为120伏，割胶后，用胶回收试剂盒(北京康为世纪生物科技有限公司)回收480bp左右的目的DNA片段，接着用EcoRI和HindIII进行双酶切，将所获得的DNA片段和载体pET28a(+)连接，然后将连接产物转化入大肠杆菌DH5a感受态细胞中，在含卡那霉素抗生素的LB平板上筛选。
重组子用限制性内切酶EcoRI和HindIII进行双酶切验证。酶切产物在此进行电压为120伏的琼脂糖凝胶电泳，验证片段大小分别为480bp左右的片段和5300bp左右的载体。
实施例3
表达蛋白hPRDX5单克隆细胞株的获得
用质粒提取试剂盒提取实施例2中筛选的阳性菌中重组质粒，然后按常规方法转化入表达宿主E.coliBL21(DE3)，即获得蛋白hPRDX5基因的大肠杆菌工程菌。
实施例4
蛋白hPRDX5的纯化与富集
将实施例3构建的大肠杆菌工程菌接种于LB培养基中，在37℃摇床过夜培养，再以4％的接种量转接至LB培养基中，37℃培养5h，待OD600为0.5时，加入1M的IPTG使其终浓度为1mM，18℃诱导表达18h。发酵液经4000rpm离心40min，去上清，菌体用50mM Tris-HCl(pH值为8.0)重悬，经高压均质破碎仪破碎后，12000rpm离心40min，获得含酶的上清液。随后，通过Ni柱纯化获得单一的蛋白，进行SDS-PAGE电泳分析，并对其含量进行测定。SDS-PAGE电泳图见图1。经过定量检测发现1L菌液获得14.1mg蛋白。
实施例5
hPRDX5对胰腺癌Panc02荷瘤小鼠的抑瘤效果。
实验动物：C57BL/6小鼠，购自中国医学科学院医学实验动物研究所；小鼠胰腺癌Panc02瘤细胞悬液，源自中国医学科学院肿瘤医院
实验方法：选用4～6周龄C57BL/6雌性小鼠，培养小鼠胰腺癌细胞系Panc02细胞。胰腺原位注射50μL 2×107/mL的Panc02细胞。
分组给药：根据随机数字表将造模成功小鼠随机分成2组，每组6只：蛋白hPRDX5治疗组；空白对照组。术后第三天，每天腹腔注射10mg/kg ACBPs单组分蛋白hPRDX5或溶剂PBS，持续2周。
实验处理及结果分析：待最后一次给药结束后第二天，分离肿瘤、脾脏，测定瘤重，最后计算平均抑瘤率。
结果如图2所示。图2为hPRDX5明显抑制原位胰腺癌肿瘤生长，其中图2-A为hPRDX5处理组和对照组对原位胰腺癌肿瘤体积的比较图，图2-B为hPRDX5处理组和对照组对原位胰腺癌肿瘤生长的柱形图。结果表明，蛋白hPRDX5对胰腺癌具有明显的抑制效果。
实施例6
hPRDX5对胰腺癌小鼠肿瘤免疫微环境中CD4、CD8、NKT、MDSCs细胞的调控作用。
实验方法：将小鼠采用颈椎脱臼法处死后，分别取小鼠肿瘤组织和脾脏，经处理后获得的细胞用流式细胞仪进行收集和分析。
在确定hPRDX5对胰腺癌抗肿瘤作用的基础上，分析小鼠原位肿瘤组织中免疫细胞的比例。结果如图3～图5所示。其中图3为hPRDX5上调胰腺癌小鼠原位肿瘤组织中CD4+/CD8+T细胞比例，其中图3-A为hPRDX5处理组和空白对照组的小鼠肿瘤细胞中CD4+/CD3+的细胞比例；图3-B为hPRDX5处理组和空白对照组的小鼠肿瘤细胞中CD8+/CD3+的细胞比例；图3-C为hPRDX5处理组和空白对照组的小鼠脾脏细胞中CD4+/CD3+的细胞比例；图3-D为hPRDX5处理组和空白对照组的小鼠脾脏细胞中CD8+/CD3+的细胞比例。
图4为hPRDX5上调胰腺癌小鼠原位肿瘤组织中NKT细胞比例，其中图4-A为hPRDX5处理组和空白对照组的小鼠肿瘤细胞中NK/CD3-的细胞比例；图4-B为hPRDX5处理组和空白对照组的小鼠肿瘤细胞中NKT/CD3+的细胞比例；图4-C为hPRDX5处理组和空白对照组的小鼠脾脏细胞中NK/CD3-的细胞比例；图4-D为hPRDX5处理组和空白对照组的小鼠脾脏细胞中NKT/CD3+的细胞比例；
图5为hPRDX5抑制胰腺癌小鼠肿瘤组织中MDSCs细胞比例，其中图5-A为hPRDX5处理组和空白对照组的小鼠肿瘤细胞中Ly6C+/Ly6G+的细胞比例；图5-B为hPRDX5处理组和空白对照组的小鼠脾脏细胞中Ly6C+/Ly6G+的细胞比例。
结果分析：与对照组相比，hPRDX5治疗后肿瘤组织中的CD4+T、CD8+T、NKT细胞比例均明显升高，相应的MDSCs细胞比例明显下降；而在脾脏中几种细胞比例则无明显变化，G-MDSCs细胞比例明显下降，而M-MDSCs比例变化不明显。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 中国医学科学院医药生物技术研究所
<120> 一种具有抗肿瘤作用的宿主因子hPRDX5、编码基因及其应用
<160> 4
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 162
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Met Ala Pro Ile Lys Val Gly Asp Ala Ile Pro Ala Val Glu Val Phe
1 5 10 15
Glu Gly Glu Pro Gly Asn Lys Val Asn Leu Ala Glu Leu Phe Lys Gly
20 25 30
Lys Lys Gly Val Leu Phe Gly Val Pro Gly Ala Phe Thr Pro Gly Cys
35 40 45
Ser Lys Thr His Leu Pro Gly Phe Val Glu Gln Ala Glu Ala Leu Lys
50 55 60
Ala Lys Gly Val Gln Val Val Ala Cys Leu Ser Val Asn Asp Ala Phe
65 70 75 80
Val Thr Gly Glu Trp Gly Arg Ala His Lys Ala Glu Gly Lys Val Arg
85 90 95
Leu Leu Ala Asp Pro Thr Gly Ala Phe Gly Lys Glu Thr Asp Leu Leu
100 105 110
Leu Asp Asp Ser Leu Val Ser Ile Phe Gly Asn Arg Arg Leu Lys Arg
115 120 125
Phe Ser Met Val Val Gln Asp Gly Ile Val Lys Ala Leu Asn Val Glu
130 135 140
Pro Asp Gly Thr Gly Leu Thr Cys Ser Leu Ala Pro Asn Ile Ile Ser
145 150 155 160
Gln Leu
<210> 2
<211> 489
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
atggctccga tcaaagttgg tgacgctatc ccggctgttg aagttttcga aggtgaaccg 60
ggtaacaaag ttaacctggc tgaactgttc aaaggtaaaa aaggtgttct gttcggtgtt 120
ccgggtgctt tcaccccggg ttgctctaaa acccacctgc cgggtttcgt tgaacaggct 180
gaagctctga aagctaaagg tgttcaggtt gttgcttgcc tgtctgttaa cgacgctttc 240
gttaccggtg aatggggtcg tgctcacaaa gctgaaggta aagttcgtct gctggctgac 300
ccgaccggtg ctttcggtaa agaaaccgac ctgctgctgg acgactctct ggtttctatc 360
ttcggtaacc gtcgtctgaa acgtttctct atggttgttc aggacggtat cgttaaagct 420
ctgaacgttg aaccggacgg taccggtctg acctgctctc tggctccgaa catcatctct 480
cagctgtaa 489
<210> 3
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
ggaattcatg gctccgatca aagttggtga cg 32
<210> 4
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
cccaagcttt tacagctgag agatgatgtt cgga 34

Claims (1)

1.宿主因子hPRDX5、编码宿主因子hPRDX5的基因、包含所述基因的 重组载体、包含所述重组载体的重组细胞或引物对在制备抗胰腺癌的药物中的应用；
所述宿主因子hPRDX5的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；
所述编码宿主因子hPRDX5的基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；
所述引物对包括正向引物和反向引物；所述正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；所述反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。
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The identification of goat peroxiredoxin-5 and the evaluation and enhancement of its stability by nanoparticle formation;Xiaozhou Feng等;《Scientific Reports》;20160414;第2016卷(第6期);DOI: 10.1038/srep24467 *

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