CN110100733B - 一种以杜鹃兰组培根为外植体快速诱导杜鹃兰再生植株的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种以杜鹃兰组培根为外植体快速诱导杜鹃兰再生植株的方法，该方法包括如下步骤：组培根预培养→类原球茎诱导培养→类原球茎增殖培养→类原球茎上幼芽的诱导培养→再生植株快速培育。本发明以杜鹃兰组培根为外植体诱导类原球茎，进一步在类原球茎上诱导幼芽，再将带幼芽的类原球茎直接移载形成再生植株，可大大缩短杜鹃兰种苗的培养时间，为杜鹃兰大规模繁殖提供了一种新途径，有效地解决了当前杜鹃兰植物资源和药材资源短缺的问题。
Description
技术领域
本发明涉及一种杜鹃兰再生植株的培养方法，特别是涉及一种以杜鹃兰组培根为外植体快速诱导杜鹃兰再生植株的方法。
背景技术
杜鹃兰(Cremastra appendiculata(D.Don.)Makion)又名毛慈菇、算盘七，以假鳞茎入药，味辛、甘，性寒，有小毒。有清热解毒、润肺止咳、活血止痛、消肿散结等功效，内用可抗肝癌、乳腺癌、子宫癌等，外用治疮毒、蛇虫咬伤、皮肤烫伤或烧伤等。杜鹃兰不仅是珍稀药用植物，而且是我国Ⅱ级珍稀濒危野生保护植物。
杜鹃兰植物自然贮存量极少，加之无计划的人为采挖，野生资源濒临枯竭。杜鹃兰喜冷凉阴湿环境，对生态环境要求较严，目前主要依靠分株繁殖，其繁殖系数极低；另外，因杜鹃兰植物种子非常细小且无胚乳，所以在自然环境下其种子繁殖成功率极低。然而药材市场对杜鹃兰的需求量非常大，致使人们进行地毯式的采挖，野生资源濒临枯竭，导致药材价格节节攀升。为挽救这一珍稀物种，确保其资源的永续利用，同时也为满足该药材的市场需求，急需提供一种杜鹃兰快速成苗的方法。
近年来，人们已开展了对杜鹃兰植物组织培养的研究，取得了一些成果。如专利号为200610050919.7的发明专利公开的“杜鹃兰的组织培养与快速繁殖方法”，该方法采用杜鹃兰种子和假球茎上的芽眼作为外植体，获得完整的再生植株。目前还未见以杜鹃兰组培根为外植体成功诱导出杜鹃兰再生植株的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种以杜鹃兰组培根为外植体快速诱导杜鹃兰再生植株的方法。
本发明提供的一种以杜鹃兰组培根为外植体快速诱导杜鹃兰再生植株的方法包括如下步骤：
(1)组培根预培养：切取杜鹃兰组培苗上长度为3.0～5.0cm的幼根，接入B5+IBA0.1～0.3mg/L+2,4-D 0.1～0.3mg/L+核黄素5～15mg/L+活性炭1.0～2.0g/L+土豆泥20～40g/L+蔗糖10～30g/L培养基中，在温度15～22℃、每天光照15～24小时，光照强度为1500～2500lx的条件下进行预培养，杜鹃兰组培根产生明显膨大；
(2)类原球茎诱导培养：选取步骤(1)中膨大直径为1.5～2.5mm的组培根，切除其根冠后，将去除根冠的组培根接入B5+TDZ 1.0～3.0mg/L+NAA 2.0～4.0mg/L+IBA1.0～3.0mg/L+2,4-D 1.0～3.0mg/L+壳聚糖10～20mg/L+活性炭0.2～0.4g/L+土豆泥10～30g/L+蔗糖10～30g/L培养基中，在温度15～22℃、每天光照15～24小时，光照强度为100～800lx的条件下进行类原球茎诱导培养；
(3)类原球茎增殖培养：切取步骤(2)中产生的颜色为乳白色的类原球茎转入B5+6-BA 0.3～0.5mg/L+NAA1.0～3.0mg/L+2,4-D 1.0～2.0mg/L+活性炭0.3～0.5g/L+土豆泥20～40g/L+头孢曲松钠300～500mg/L+蔗糖20～40g/L培养基中，在温度为22～26℃、每天光照10～14小时、光照强度为2000～3000lx的条件下进行增殖培养；
(4)类原球茎上幼芽的诱导培养：将步骤(3)中产生的类原球茎切割成质量为1.0～1.5g的块状后，转入改良MS+TDZ 2.0～4.0mg/L+IAA 0.2～0.4mg/L+IBA 0.1～0.3mg/L+活性炭0.5～1.0g/L+燕麦浆10～20g/L+蔗糖10～30g/L培养基中，在温度为22～26℃、每天光照18～24小时、光照强度为2000～3000lx的条件下进行类原球茎上幼芽的诱导培养，所述燕麦浆由发芽10～20天的燕麦破碎成浆制成；所述改良MS由KNO3 380～480mg/L、NH4NO3330～420mg/L、MgSO4·7H2O 70～90mg/L、KH2PO4 34～45mg/L、CaCl2·2H2O 90～110mg/L、KI 0.8～1.0mg/L、MnSO4·4H2O 22～25mg/L、ZnSO4·7H2O 8.0～10.0mg/L、NaMoO4·2H2O0.25～0.35mg/L、CuSO4·5H2O 0.025～0.05mg/L、CoCl4·6H2O 0.0250～0.05mg/L、H3BO36.0～8.0mg/L、Na2-EDTA 37.0～40.0mg/L、FeSO4·7H2O 27.0～29.0mg/L、肌醇100～140mg/L、甘氨酸2.0～4.0mg/L、盐酸硫胺素0.5～1.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5～0.8mg/L和烟酸0.5～1.0mg/L配制而成。
(5)再生植株快速培育：选取步骤(4)中幼芽生长长度为2.0～3.0cm的类原球茎，洗去表面培养基后，放入激素配比为IBA 0.2～0.4mg/L+IAA 0.1～0.3mg/L的液体中浸泡30～60min，取出阴干表面水分以后，移栽至基质中培养，每培养5～8天喷洒一次营养液；
上述所有培养基的pH值为5.5～6.2、琼脂6.5～7.0g/L。
进一步地，步骤(2)中所述将去根冠组培根接入培养基是指将去根冠组培根以形态学上端斜***培养基中。
进一步地，所述壳聚糖是平均分子量为10000的低聚壳聚糖。
进一步地，步骤(5)中所述基质是由珍珠岩、营养土、蛭石、碎杉木皮和碎花生壳按珍珠岩：营养土：蛭石：碎杉木皮:碎花生壳＝3：1：1：1：1的重量比混合而成。
进一步地，步骤(5)中营养液由(NH4)2SO4 130～150mg/L+MgSO4·7H2O 350～400mg/L+CaCl2·2H2O 120～140mg/L+NaH2PO4 130～150mg/L+KNO3 2500～2800mg/L配制而成。
本发明以杜鹃兰组培根为外植体诱导类原球茎，进一步在类原球茎上诱导幼芽，再将带幼芽的类原球茎直接移载形成再生植株，可大大缩短杜鹃兰种苗的培养时间，为杜鹃兰大规模繁殖提供了一种新途径，有效地解决了当前杜鹃兰植物资源和药材资源短缺的问题。
具体实施方式
实施例1
本实施例提供的以杜鹃兰组培根为外植体快速诱导杜鹃兰再生植株的方法包括如下步骤：
(1)组培根预培养：切取杜鹃兰组培苗上长度为3.0cm的幼根，接入B5+IBA 0.1mg/L+2,4-D 0.1mg/L+核黄素5.0mg/L+活性炭1.0g/L+土豆泥20g/L+蔗糖10g/L培养基中，在温度15℃、每天光照15小时，光照强度为1500lx的条件下预培养30天，杜鹃兰组培根产生明显膨大；
(2)类原球茎诱导培养：选取步骤(1)中膨大直径为1.5mm的组培根，切除其根冠后，将去除根冠的组培根以形态学上端斜***培养基的方式接入B5+TDZ 1.0mg/L+NAA2.0mg/L+IBA 1.0mg/L+2,4-D 1.0mg/L+壳聚糖10mg/L+活性炭0.2g/L+土豆泥10g/L+蔗糖10g/L培养基中，在温度15℃、每天光照15小时，光照强度为100lx的条件下进行类原球茎诱导培养，培养35天统计类原球茎诱导率为75％，所述壳聚糖采用平均分子量为10000的低聚壳聚糖；
(3)类原球茎增殖培养：切取步骤(2)中产生的颜色为乳白色的类原球茎转入B5+6-BA 0.3mg/L+NAA1.0mg/L+2,4-D 1.0mg/L+活性炭0.3g/L+土豆泥20g/L+头孢曲松钠300mg/L+蔗糖20g/L培养基中，在温度为22℃、每天光照10小时、光照强度为2000lx的条件下进行类原球茎增殖培养，培养40天统计类原球茎增殖倍数为5.3倍；
(4)类原球茎上幼芽的诱导培养：将步骤(3)中产生的类原球茎切割成质量为1.0g的块状，转入改良MS+TDZ 2.0mg/L+IAA 0.2mg/L+IBA 0.1mg/L+活性炭0.5g/L+燕麦浆10g/L+蔗糖10g/L培养基中，在温度为22℃、每天光照18小时、光照强度为2000lx的条件下进行类原球茎上幼芽的诱导培养，培养35天统计幼芽诱导率为69％；所述改良MS由KNO3 380mg/L、NH4NO3 330mg/L、MgSO4·7H2O 70mg/L、KH2PO4 34mg/L、CaCl2·2H2O 90mg/L、KI 0.8mg/L、MnSO4·4H2O 22mg/L、ZnSO4·7H2O 8.0mg/L、NaMoO4·2H2O 0.25mg/L、CuSO4·5H2O0.025mg/L、CoCl4·6H2O 0.0250mg/L、H3BO3 6.0mg/L、Na2-EDTA 37.0mg/L、FeSO4·7H2O27.0mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L 和烟酸0.5mg/L配制而成；所述燕麦浆由发芽10天的燕麦破碎成浆制成；
(5)再生植株快速培育：选取步骤(4)中幼芽生长长度为2.0cm的类原球茎，洗去表面培养基后，放入激素配比为IBA 0.2mg/L+IAA 0.1mg/L的液体中浸泡30min，取出阴干表面水分以后，移栽至基质中培养，每培养5天喷洒一次营养液，培养25天统计生根率为72％；所述基质由珍珠岩、营养土、蛭石、碎杉木皮和碎花生壳按珍珠岩：营养土：蛭石：碎杉木皮:碎花生壳＝3：1：1：1：1的重量比混合而成；所述营养液由(NH4)2SO4 130mg/L+MgSO4·7H2O350mg/L+CaCl2·2H2O 120mg/L+NaH2PO4 130mg/L+KNO3 2500mg/L配制而成；
上述所有培养基的pH值为5.5、琼脂6.5g/L。
实施例2
本实施例提供的以杜鹃兰组培根为外植体快速诱导杜鹃兰再生植株的方法包括如下步骤：
(1)组培根预培养：切取杜鹃兰组培苗上长度为4.0cm的幼根，接入B5+IBA 0.2mg/L+2,4-D 0.2mg/L+核黄素10mg/L+活性炭1.5g/L+土豆泥30g/L+蔗糖20g/L培养基中，在温度18℃、每天光照20小时，光照强度为2000lx的条件下预培养30天，杜鹃兰组培根产生明显膨大；
(2)类原球茎诱导培养：选取步骤(1)中膨大直径为2.0mm的组培根，切除其根冠后，将去除根冠的组培根以形态学上端斜***培养基的方式接入B5+TDZ 2.0mg/L+NAA3.0mg/L+IBA 2.0mg/L+2,4-D 2.0mg/L+壳聚糖15mg/L+活性炭0.3g/L+土豆泥20g/L+蔗糖20g/L培养基中，在温度18℃、每天光照18小时，光照强度为500lx的条件下进行类原球茎诱导培养，培养35天统计类原球茎诱导率为100％，所述壳聚糖采用平均分子量为10000的低聚壳聚糖；
(3)类原球茎增殖培养：切取步骤(2)中产生的颜色为乳白色的类原球茎转入B5+6-BA 0.4mg/L+NAA 2.0mg/L+2,4-D 1.5mg/L+活性炭0.4g/L+土豆泥30g/L+头孢曲松钠400mg/L+蔗糖30g/L培养基中，在温度为24℃、每天光照12小时、光照强度为2500lx的条件下进行类原球茎增殖培养，培养40天统计类原球茎增殖倍数为8.4倍；
(4)类原球茎上幼芽的诱导培养：将步骤(3)中产生的类原球茎切割成质量为1.3g的块状，转入改良MS+TDZ 3.0mg/L+IAA 0.3mg/L+IBA 0.2mg/L+活性炭0.8g/L+燕麦浆15g/L+蔗糖20g/L培养基中，在温度为24℃、每天光照20小时、光照强度为2500lx的条件下进行类原球茎上幼芽的诱导培养，培养35天统计幼芽诱导率为100％；所述改良MS由KNO3430mg/L、NH4NO3 380mg/L、MgSO4·7H2O 80mg/L、KH2PO4 40mg/L、CaCl2·2H2O 100mg/L、KI0.9mg/L、MnSO4·4H2O 23mg/L、ZnSO4·7H2O 9.0mg/L、NaMoO4·2H2O 0.3mg/L、CuSO4·5H2O0.04mg/L、CoCl4·6H2O 0.04mg/L、H3BO3 7.0mg/L、Na2-EDTA 38.0mg/L、FeSO4·7H2O28.0mg/L、肌醇120mg/L、甘氨酸3.0mg/L、盐酸硫胺素0.75mg/L、盐酸吡哆醇0.65mg/L和烟酸0.75mg/L配制而成，所述燕麦浆由发芽15天的燕麦破碎成浆制成；
(5)再生植株快速培育：选取步骤(4)中幼芽生长长度为2.5cm的类原球茎，洗去表面培养基后，放入激素配比为IBA 0.3mg/L+IAA 0.2mg/L的液体中浸泡45min，取出阴干表面水分以后，移栽至基质中培养，每培养6天喷洒一次营养液，培养25天统计生根率为100％；所述基质由珍珠岩、营养土、蛭石、碎杉木皮和碎花生壳按珍珠岩：营养土：蛭石：碎杉木皮:碎花生壳＝3：1：1：1：1的重量比混合而成；所述营养液由(NH4)2SO4 140mg/L+MgSO4·7H2O 370mg/L+CaCl2·2H2O 130mg/L+NaH2PO4 140mg/L+KNO3 2600mg/L配制而成；
上述所有培养基的pH值为5.8、琼脂6.8g/L。
实施例3
本实施例提供的以杜鹃兰组培根为外植体快速诱导杜鹃兰再生植株的方法包括如下步骤：
(1)组培根预培养：切取杜鹃兰组培苗上长度为5.0cm的幼根，接入B5+IBA 0.3mg/L+2,4-D 0.3mg/L+核黄素15mg/L+活性炭2.0g/L+土豆泥40g/L+蔗糖30g/L培养基中，在温度22℃、每天光照24小时，光照强度为2500lx的条件下预培养30天，杜鹃兰组培根产生明显膨大；
(2)类原球茎诱导培养：选取步骤(1)中膨大直径为2.5mm的组培根，切除其根冠后，将去除根冠的组培根以形态学上端斜***培养基的方式接入B5+TDZ 3.0mg/L+NAA4.0mg/L+IBA 3.0mg/L+2,4-D 3.0mg/L+壳聚糖20mg/L+活性炭0.4g/L+土豆泥30g/L+蔗糖30g/L培养基中，在温度22℃、每天光照24小时，光照强度为800lx的条件下进行类原球茎诱导培养，培养35天统计类原球茎诱导率为89％，所述壳聚糖采用平均分子量为10000的低聚壳聚糖；
(3)类原球茎增殖培养：切取步骤(2)中产生的颜色为乳白色的类原球茎转入B5+6-BA 0.5mg/L+NAA 3.0mg/L+2,4-D 2.0mg/L+活性炭0.5g/L+土豆泥40g/L+头孢曲松钠500mg/L+蔗糖40g/L培养基中，在温度为26℃、每天光照14小时、光照强度为3000lx的条件下进行类原球茎增殖培养，培养40天统计类原球茎增殖倍数为6.8倍；
(4)类原球茎上幼芽的诱导培养：将步骤(3)中产生的类原球茎切割成质量为1.5g的块状，转入改良MS+TDZ 4.0mg/L+IAA 0.4mg/L+IBA 0.3mg/L+活性炭1.0g/L+燕麦浆20g/L+蔗糖30g/L培养基中，在温度为26℃、每天光照24小时、光照强度为3000lx的条件下进行类原球茎上幼芽的诱导培养，培养35天统计幼芽诱导率为76％；所述改良MS由KNO3 480mg/L、NH4NO3 420mg/L、MgSO4·7H2O 90mg/L、KH2PO4 45mg/L、CaCl2·2H2O 110mg/L、KI 1.0mg/L、MnSO4·4H2O 25mg/L、ZnSO4·7H2O 10.0mg/L、NaMoO4·2H2O 0.35mg/L、CuSO4·5H2O0.05mg/L、CoCl4·6H2O 0.05mg/L、H3BO3 8.0mg/L、Na2-EDTA 40.0mg/L、FeSO4·7H2O29.0mg/L、肌醇140mg/L、甘氨酸4.0mg/L、盐酸硫胺素1.0mg/L、盐酸吡哆醇0.8mg/L和烟酸1.0mg/L配制而成；所述燕麦浆由发芽20天的燕麦破碎成浆制成；
(5)再生植株快速培育：选取步骤(4)中幼芽生长长度为3.0cm的类原球茎，洗去表面培养基后，放入激素配比为IBA 0.4mg/L+IAA 0.3mg/L的液体中浸泡60min，取出阴干表面水分以后，移栽至基质中培养，每培养8天喷洒一次营养液，培养25天统计生根率为83％；所述基质由珍珠岩、营养土、蛭石、碎杉木皮和碎花生壳按珍珠岩：营养土：蛭石：碎杉木皮:碎花生壳＝3：1：1：1：1的重量比混合而成；所述营养液由(NH4)2SO4 150mg/L+MgSO4·7H2400mg/L+CaCl2·2H2O 140mg/L+NaH2PO4 150mg/L+KNO3 2800mg/L配制而成；
上述所有培养基的pH值为6.2、琼脂7.0g/L。
比较实施例1
在实施例2中，取消步骤(1)组培根预培养，其它步骤同实施例2，类原球茎诱导率为0％。
比较实施例2
在实施例2步骤(2)中，不切除根冠，其它步骤同实施例2，培养35天统计类原球茎诱导率为0％。
比较实施例3
在实施例2步骤(2)中，将类原球茎诱导培养基改为B5+TDZ 2.0mg/L+NAA 3.0mg/L+IBA 2.0mg/L+2,4-D 2.0mg/L+活性炭0.3g/L+土豆泥20g/L+蔗糖20g/L，其它步骤同实施例2，培养35天统计类原球茎诱导率为34.7％。
比较实施例4
在实施例2步骤(3)中，将类原球茎增殖培养基改为B5+6-BA 0.4mg/L+NAA 2.0mg/L+2,4-D 1.5mg/L+活性炭0.4g/L+土豆泥30g/L+蔗糖30g/L，其它步骤同实施例2，培养40天统计类原球茎增殖倍数为2.5倍。
比较实施例5
在实施例2步骤(4)中，将类原球茎切割成质量低于1.0g的块状转入类原球茎幼芽诱导培养基中，其它步骤同实施例2，培养35天统计幼芽诱导率为25％，且观察发现部分类原球茎有褐化死亡的现象。
比较实施例6
在实施例2步骤(4)中，将类原球茎幼芽诱导培养基中的基本培养基改为MS，其它步骤同实施例2，培养35天幼芽诱导率为30％。
比较实施例7
在实施例2步骤(4)中，将类原球茎幼芽诱导培养基改为改良MS+TDZ 3.0mg/L+IAA0.3mg/L+IBA 0.2mg/L+活性炭0.8g/L+蔗糖20g/L，其它步骤同实施例2，培养35天统计幼芽诱导率为34％。
比较实施例8
在实施例2步骤(5)中，取消将幼芽长度为2.5cm的类原球茎浸泡在配制的液体中这个步骤，其它步骤同实施例2，培养25天统计再生植株的生根率为0％。
比较实施例9
在实施例2步骤(5)中，将移栽的基质改为全营养土，其它步骤同实施例2，培养25天观察发现移栽后的材料全部死亡。
比较实施例10
在实施例2步骤(5)中，将喷洒的营养液改为纯化水，其它步骤同实施例2，培养25天统计生根率为23.8％。
Claims (5)
1.一种以杜鹃兰组培根为外植体快速诱导杜鹃兰再生植株的方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)组培根预培养：切取杜鹃兰组培苗上长度为3.0～5.0cm的幼根，接入B5+IBA 0.1～0.3mg/L+2,4-D 0.1～0.3mg/L+核黄素5～15mg/L+活性炭1.0～2.0g/L+土豆泥20～40g/L+蔗糖10～30g/L培养基中，在温度15～22℃、每天光照15～24小时，光照强度为1500～2500lx的条件下进行预培养，组培根产生明显膨大；
(2)类原球茎诱导培养：选取步骤(1)中膨大直径为1.5～2.5mm的组培根，切除其根冠后，将去除根冠的组培根接入B5+TDZ 1.0～3.0mg/L+NAA 2.0～4.0mg/L+IBA 1.0～3.0mg/L+2,4-D 1.0～3.0mg/L+壳聚糖10～20mg/L+活性炭0.2～0.4g/L+土豆泥10～30g/L+蔗糖10～30g/L培养基中，在温度15～22℃、每天光照15～24小时，光照强度为100～800lx的条件下进行类原球茎诱导培养；
(3)类原球茎增殖培养：切取步骤(2)中产生的颜色为乳白色的类原球茎转入B5+6-BA0.3～0.5mg/L+NAA 1.0～3.0mg/L+2,4-D 1.0～2.0mg/L+活性炭0.3～0.5g/L+土豆泥20～40g/L+头孢曲松钠300～500mg/L+蔗糖20～40g/L培养基中，在温度为22～26℃、每天光照10～14小时、光照强度为2000～3000lx的条件下进行增殖培养；
(4)类原球茎上幼芽的诱导培养：将步骤(3)中产生的类原球茎切割成质量为1.0～1.5g的块状，转入改良MS+TDZ 2.0～4.0mg/L+IAA 0.2～0.4mg/L+IBA 0.1～0.3mg/L+活性炭0.5～1.0g/L+燕麦浆10～20g/L+蔗糖10～30g/L培养基中，在温度为22～26℃、每天光照18～24小时、光照强度为2000～3000lx的条件下进行类原球茎上幼芽的诱导培养，所述燕麦浆由发芽10～20天的燕麦破碎成浆制成；所述改良MS由KNO3 380～480mg/L、NH4NO3 330～420mg/L、MgSO4·7H2O 70～90mg/L、KH2PO4 34～45mg/L、CaCl2·2H2O 90～110mg/L、KI0.8～1.0mg/L、MnSO4·4H2O 22～25mg/L、ZnSO4·7H2O 8.0～10.0mg/L、NaMoO4·2H2O 0.25～0.35mg/L、CuSO4.·5H2O 0.025～0.05mg/L、CoCl4·6H2O 0.0250～0.05mg/L、H3BO3 6.0～8.0mg/L、Na2-EDTA 37.0～40.0mg/L、FeSO4·7H2O 27.0～29.0mg/L、肌醇100～140mg/L、甘氨酸2.0～4.0mg/L、盐酸硫胺素0.5～1.0mg/L、盐酸吡哆醇0.5～0.8mg/L和烟酸0.5～1.0mg/L配制而成；
(5)再生植株快速培育：选取步骤(4)中幼芽生长长度为2.0～3.0cm的类原球茎，洗去表面培养基后，放入激素配比为IBA 0.2～0.4mg/L+IAA 0.1～0.3mg/L的液体中浸泡30～60min，取出阴干表面水分以后，移栽至消毒基质中培养，每培养5～8天喷洒一次营养液；
上述所有培养基的pH值为5.5～6.2、琼脂6.5～7.0g/L。
2.根据权利要求1所述的以杜鹃兰组培根为外植体快速诱导杜鹃兰再生植株的方法，其特征在于：步骤(2)中所述将去根冠组培根接入培养基是指将去根冠组培根以形态学上端斜***培养基中。
3.根据权利要求1或2所述的以杜鹃兰组培根为外植体快速诱导杜鹃兰再生植株的方法，其特征在于：步骤(2)中所述壳聚糖是平均分子量为10000的低聚壳聚糖。
4.根据权利要求1所述的以杜鹃兰组培根为外植体快速诱导杜鹃兰再生植株的方法，其特征在于：步骤(5)中所述基质是由珍珠岩、营养土、蛭石、碎杉木皮和碎花生壳按珍珠岩：营养土：蛭石：碎杉木皮： 碎花生壳＝3：1：1：1：1的重量比混合而成。
5.根据权利要求1或4所述的以杜鹃兰组培根为外植体快速诱导杜鹃兰再生植株的方法，其特征在于：步骤(5)中营养液由(NH4)2SO4 130～150 mg/L+MgSO4·7H2O 350～400mg/L+CaCl2·2H2O 120～140mg/L+NaH2PO4 130～150mg/L+KNO3 2500～2800mg/L配制而成。
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