CN109996559A - ExPEC糖缀合物疫苗配制品 - Google Patents
ExPEC糖缀合物疫苗配制品 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109996559A CN109996559A CN201780065201.1A CN201780065201A CN109996559A CN 109996559 A CN109996559 A CN 109996559A CN 201780065201 A CN201780065201 A CN 201780065201A CN 109996559 A CN109996559 A CN 109996559A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- escherichia coli
- antigen polysaccharide
- composition
- antigen
- polysaccharide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
- A61K47/646—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the entire peptide or protein drug conjugate elicits an immune response, e.g. conjugate vaccines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/025—Enterobacteriales, e.g. Enterobacter
- A61K39/0258—Escherichia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/02—Inorganic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/20—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing sulfur, e.g. dimethyl sulfoxide [DMSO], docusate, sodium lauryl sulfate or aminosulfonic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
- A61K47/6415—Toxins or lectins, e.g. clostridial toxins or Pseudomonas exotoxins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/65—Peptidic linkers, binders or spacers, e.g. peptidic enzyme-labile linkers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55583—Polysaccharides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
- A61K2039/6037—Bacterial toxins, e.g. diphteria toxoid [DT], tetanus toxoid [TT]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6087—Polysaccharides; Lipopolysaccharides [LPS]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/70—Multivalent vaccine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
描述了用于诱导针对肠外致病性大肠杆菌(ExPEC)的免疫应答的组合物和方法。具体地,描述了可以禁得起多种环境胁迫的包含共价结合至铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)载体蛋白的大肠杆菌抗原多糖的多价疫苗。
Description
技术领域
本发明涉及用于诱导针对肠外致病性大肠杆菌(ExPEC)的免疫应答的组合物。具体地,本发明的实施例涉及包含共价结合至载体蛋白的大肠杆菌多糖抗原的缀合物的多价疫苗,其可以禁得起多种环境胁迫。
背景技术
肠外致病性大肠杆菌(ExPEC)是人类中最常见的革兰氏阴性病原体,并且可以引起胃肠道外的不同感染,这会导致多样并且严重的疾病,从而引起显著的发病率和死亡率。在ExPEC菌株中不断增加的多元抗药性是治疗的障碍物并且导致不断增加数量的住院治疗和死亡,以及不断增加的与ExPEC感染相关的医疗保健成本。
因此,迫切需要针对ExPEC的疫苗。O-抗原,表面脂多糖的组分,已经被鉴定为有希望的疫苗靶,并且被用作目前在研制阶段的糖缀合物疫苗种的抗原(参见例如Poolman和Wacker,2016,J.Infect.Dis.[传染病杂志]213:6-13)。
目前在研制阶段的针对ExPEC的糖缀合物疫苗包括ExPEC的不同血清型的O-聚糖,每一者都偶联至载体蛋白,例如铜绿假单胞菌的胞外蛋白A(EPA)(参见例如WO 2015/124769、和WO 2017/035181)。包含大肠杆菌血清型O25B、O1A、O2和O6A的O-聚糖的此种疫苗例如是在正在进行的2期试验中(临床试验政府标识符:NCT02546960)。
本发明的诸位发明人发现,尽管现有ExPEC疫苗配制品(25mM Tris pH 7.4,2.7mMKcl,137mM NaCl)对于在2℃-8℃下的短期储存和使用中的稳定性而言是可接受的,但是它在冷冻/融化时和在搅拌胁迫下不是稳健的。偶然冷冻、偶然加热、和搅拌(例如,在储存或运输期间)对ExPEC配制品的产品完整性具有不利影响。对于旨在用于大群体中使用的药用产品,例如针对ExPEC的糖缀合物疫苗而言,有益的是具有以下配制品:该配制品可以在低温下成批冷冻,并且在使用前,在融化后可以储存在约2℃-8℃下(即其中药品是大规模冷冻的并且长期储存,但是药物产品在使用时时储存在约2℃-8℃下,所以对于产品而言,至少一个冷冻-融化循环是不可避免的。此外,该配制品将优选还与不同材料相容,这样使得产品(例如糖缀合物)可以按不同规格储存(例如袋、瓶、小瓶、载药注射器、和/或可应用的装置)。
在本领域存在对于针对ExPEC的疫苗的配制品的需求,其可以禁得起多种环境胁迫(例如冷冻/融化、搅拌、高温、曝光、金属氧化剂暴露、等)并且导致组合物的更大稳定性和更长保质期,并且优选与多重处理的(例如容器)材料相容。源自环境胁迫的降解途径的任一种会导致降低的生物活性,并且还会潜在地导致形成配制品的组分的副产物或衍生物,因此导致ExPEC疫苗的增加的毒性和/或改变的免疫原性。因此,需要专门定制的方法来找到糖缀合物疫苗的稳健配制品,从而确保在很宽的范围的条件下的稳定性。将需要选择,确切地说是组合缓冲液类型、pH、和专门化的赋形剂,并且随后细致地优化来使糖缀合物疫苗保持化学上、物理上、以及生物学上稳定。鉴于所有这些因素都可以变化,找到用于配制针对ExPEC的糖缀合物疫苗的最佳条件是具挑战性的,并且良好配制品的组成是事前不可预测的。
因此,本领域对于确保疫苗组合物可以禁得起多种环境胁迫并且具有改进的稳定性和更长的保质期的针对ExPEC的糖缀合物疫苗的配制品存在需要。本发明的目的是提供此类配制品。
发明内容
提供的是针对ExPEC的糖缀合物疫苗的两种新配制品,提供了在冷冻/融化、搅拌胁迫、热胁迫、以及金属诱导的氧化胁迫下,具有改进的稳定效应的疫苗组合物,该配制品另外与不同的处理(例如容器)材料相容。可以在药物产品和药品二者的储存或运输期间利用这些改进的配制品,其中会发生(偶然的)冷冻或快速的搅拌,这会对产品完整性以及因此的功效具有不利影响。另外,新颖的配制品提供了针对热胁迫具有改进的稳定性的糖缀合物ExPEC疫苗,并且因此相对于在很宽的范围的温度和条件下的药物产品和药品储存、处理和运输,会具有广泛的商业应用。
在此提供了以下组合物,这些组合物包含至少一种大肠杆菌O抗原多糖,其中该至少一种O抗原多糖共价结合至铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)载体蛋白;3%至8%(w/v)山梨醇;5至15mM甲硫氨酸;在6.5至7.5的pH下的5至20mM钾/钠磷酸盐缓冲液;以及0.01%至0.2%(w/v)表面活性剂。在优选实施例中,山梨醇的浓度是4%至6%(w/v)。在优选实施例中,甲硫氨酸的浓度是8至12mM。在优选实施例中,钾/钠磷酸盐缓冲液的浓度是8至15mM。优选地,该组合物是多价免疫原性组合物,该组合物包含大肠杆菌O25B抗原多糖、大肠杆菌O1A抗原多糖、大肠杆菌O2抗原多糖、以及大肠杆菌O6A抗原多糖,其中每种O抗原多糖独立地共价结合至铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)载体蛋白;4%至6%(w/v)山梨醇;8至12mM甲硫氨酸;在6.5至7.5的pH下的8至15mM钾/钠磷酸盐缓冲液;以及0.01%至0.2%(w/v)表面活性剂。
在此还提供了以下组合物,这些组合物包含至少一种大肠杆菌O抗原多糖,其中该至少一种O抗原多糖共价结合至铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)载体蛋白;3%至12%(w/v)蔗糖;0.1至1.5mM EDTA;在6.5至7.5的pH下的5至20mM钾/钠磷酸盐缓冲液;以及0.01%至0.2%(w/v)表面活性剂。在优选实施例中,蔗糖的浓度是3%至10%(w/v)。在优选实施例中,钾/钠磷酸盐缓冲液的浓度是8至15mM。优选地,该组合物是多价免疫原性组合物,该组合物包含大肠杆菌O25B抗原多糖、大肠杆菌O1A抗原多糖、大肠杆菌O2抗原多糖、以及大肠杆菌O6A抗原多糖,其中每种抗原多糖独立地共价结合至铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)载体蛋白;3%至10%(w/v)蔗糖;0.1至1.5mM EDTA;在6.5至7.5的pH下的8至15mM钾/钠磷酸盐缓冲液;以及0.01%至0.2%(w/v)表面活性剂。
在某些实施例中,大肠杆菌O25B、O1A、O2、和O6A抗原多糖是按1:1:1:1或2:1:1:1的重量比。
在某些实施例中,山梨醇的浓度是5%(w/v)。
在某些实施例中,蔗糖的浓度是8%(w/v)。
在某些实施例中,甲硫氨酸的浓度是10mM。
在某些实施例中,EDTA的浓度是1mM。
在某些实施例中,该钾/钠磷酸盐缓冲液的浓度是10mM,并且该钾/钠磷酸盐缓冲液的pH是7.0。
在某些实施例中,该表面活性剂的浓度是0.02%(w/v)。在优选实施例中,该表面活性剂由亲水性头部(OH基团)和长疏水性尾部(碳链,该碳链在该碳链中可以包含至少约12、14、16、18、20、30、40、50、60、80、100、120、130、或更多个碳)组成。在优选实施例中,该表面活性剂是非离子表面活性剂。在某些实施例中,该表面活性剂选自下组,该组由以下各项组成:F-68、PS20、PS40、PS60、和PS80。在某些实施例中,该表面活性剂是PS80。
在某些实施例中,提供了以下组合物,这些组合物实质上由以下项组成:大肠杆菌O25B抗原多糖、大肠杆菌O1A抗原多糖、大肠杆菌O2抗原多糖、以及大肠杆菌O6A抗原多糖,其中每种O抗原多糖共价结合至铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)载体蛋白;5%(w/v)山梨醇;10mM甲硫氨酸;在7.0的pH下的10mM钾/钠磷酸盐缓冲液;以及0.02%PS80。还提供了以下组合物,这些组合物由以下项组成:大肠杆菌O25B抗原多糖、大肠杆菌O1A抗原多糖、大肠杆菌O2抗原多糖、以及大肠杆菌O6A抗原多糖,其中每种O抗原多糖共价结合至铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)载体蛋白;5%(w/v)山梨醇;10mM甲硫氨酸;在7.0的pH下的10mM钾/钠磷酸盐缓冲液;以及0.02%PS80。
在某些实施例中,提供了以下组合物,这些组合物实质上由以下项组成:大肠杆菌O25B抗原多糖、大肠杆菌O1A抗原多糖、大肠杆菌O2抗原多糖、大肠杆菌O6A抗原多糖,以及1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20种其他大肠杆菌O-抗原多糖,其中每种O抗原多糖共价结合至铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)载体蛋白;5%(w/v)山梨醇;10mM甲硫氨酸;在7.0的pH下的10mM钾/钠磷酸盐缓冲液;以及0.02%PS80。还提供了以下组合物,这些组合物由以下项组成:大肠杆菌O25B抗原多糖、大肠杆菌O1A抗原多糖、大肠杆菌O2抗原多糖、大肠杆菌O6A抗原多糖,以及1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20种其他大肠杆菌O抗原多糖,其中每种O抗原多糖共价结合至铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)载体蛋白;5%(w/v)山梨醇;10mM甲硫氨酸;在7.0的pH下的10mM钾/钠磷酸盐缓冲液;以及0.02%PS80。
在某些实施例中,提供了以下组合物,这些组合物实质上由以下项组成:大肠杆菌O25B抗原多糖、大肠杆菌O1A抗原多糖、大肠杆菌O2抗原多糖、大肠杆菌O6A抗原多糖,其中每种O抗原多糖共价结合至铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)载体蛋白;8%(w/v)蔗糖;1mMEDTA;在7.0的pH下的10mM钾/钠磷酸盐缓冲液;以及0.02%PS80。还提供了以下组合物,这些组合物由以下项组成:大肠杆菌O25B抗原多糖、大肠杆菌O1A抗原多糖、大肠杆菌O2抗原多糖、大肠杆菌O6A抗原多糖,其中每种O抗原多糖共价结合至铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)载体蛋白;8%(w/v)蔗糖;1mM EDTA;在7.0的pH下的10mM钾/钠磷酸盐缓冲液;以及0.02%PS80。
在某些实施例中,提供了以下组合物,这些组合物实质上由以下项组成:大肠杆菌O25B抗原多糖、大肠杆菌O1A抗原多糖、大肠杆菌O2抗原多糖、大肠杆菌O6A抗原多糖,以及1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20种其他大肠杆菌O抗原多糖,其中每种O抗原多糖共价结合至铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)载体蛋白;8%(w/v)蔗糖;1mM EDTA;在7.0的pH下的10mM钾/钠磷酸盐缓冲液;以及0.02%PS80。还提供了以下组合物,这些组合物由以下项组成:大肠杆菌O25B抗原多糖、大肠杆菌O1A抗原多糖、大肠杆菌O2抗原多糖、大肠杆菌O6A抗原多糖,以及1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20种其他大肠杆菌O抗原多糖,其中每种O抗原多糖共价结合至铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)载体蛋白;8%(w/v)蔗糖;1mM EDTA;在7.0的pH下的10mM钾/钠磷酸盐缓冲液;以及0.02%PS80。
在此还提供了制备如在此披露的组合物的方法。在某些实施例中,提供了制备组合物的方法,这些方法包括添加至少一种共价连接至EPA载体的大肠杆菌O抗原、水、缓冲溶液的盐(即钠(二)氢磷酸盐和钾(二)氢磷酸盐[即Na2HPO4和KH2PO4或NaH2PO4和K2HPO4])、渗透压调节剂(即山梨醇或蔗糖)、抗氧化剂(即甲硫氨酸,其条件是渗透压调节剂是山梨醇;EDTA,其条件是渗透压调节剂是蔗糖)、以及表面活性剂(例如PS80)至容器中,调节pH至希望的pH(即6.5至7.5,例如7.0),并且混合这些组分,这样使得产生根据本发明的液体配制品。在优选实施例中,制备组合物的方法包括添加大肠杆菌O25B抗原多糖、大肠杆菌O1A抗原多糖、大肠杆菌O2抗原多糖、以及大肠杆菌O6A抗原多糖,其中每种抗原多糖共价结合至铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)载体蛋白;水;磷酸钾;磷酸钠;山梨醇;甲硫氨酸;以及PS80至容器中,调节pH至6.5-7.5(例如7.0),并且混合每种组分,这样使得钾/钠磷酸盐缓冲液的终浓度是5-20mM(例如10mM),具有6.5-7.5的pH(例如7.0),山梨醇的终浓度是3%-8%(例如5%)(w/v),甲硫氨酸的终浓度是5-15mM(例如10mM),并且PS80的终浓度是0.01%-0.08%(例如0.02%)(w/v)。在另一个优选实施例中,制备组合物的方法包括添加大肠杆菌O25B抗原多糖、大肠杆菌O1A抗原多糖、大肠杆菌O2抗原多糖、大肠杆菌O6A抗原多糖,其中每种抗原多糖共价结合至铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)载体蛋白;水;磷酸钾;磷酸钠;蔗糖;EDTA;以及PS80至容器中,混合每种组分,并且调节pH至6.5-7.5(例如7.0),这样使得蔗糖的终浓度是3%-12%(例如8%)(w/v),EDTA的终浓度是0.1-1.5mM(例如1mM),钾/钠磷酸盐缓冲液的终浓度是5-20mM(例如10mM),具有6.5-7.5(例如7.0)的pH,并且PS80是0.01%-0.08%(例如0.02%)(w/v)。
在某些实施例中,在此将组合物提供为液体组合物。液体组合物意指在2℃-8℃下,组合物是液体形式,并且优选储存在2℃-8℃下。
在某些实施例中,这些组合物可以储存在2℃-8℃下、在25℃下、或在40℃下,并且是稳定的。在优选实施例中,组合物被储存在2℃-8℃下并且是稳定的。在某些实施例中,组合物在2℃-8℃下是稳定的,持续至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36或更多个月。在某些实施例中,组合物在25℃下是稳定的,持续至少约1、2、3、4、5、6、或更多个月。在某些实施例中,组合物在40℃下是稳定的,持续至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、或更多个周。
在某些实施例中,在此将组合物提供为冷冻配制品。冷冻配制品意指组合物在约-18℃下或低于该温度下,例如在约-20℃、-40℃、-60℃、-70℃、-80℃或其间的任何温度、或更低温度下储存时,是固体形式。在某些实施例中,这些组合物可以在-40℃下或在-60℃下储存并且是稳定的,取决于组合物中存在的渗透压调节剂。在某些实施例中,这些组合物可以在-70℃下储存并且是稳定的。在某些实施例中,组合物包含蔗糖并且在-40℃下是稳定的,持续至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、或更多个月。在某些实施例中,组合物包含山梨醇并且在-60℃下是稳定的,持续至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、或更多个月。在某些实施例中,组合物包含山梨醇或蔗糖并且在-70℃下是稳定的,持续至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、或更多年。
在优选实施例中,本发明的组合物不包含氯化钠。
在某些实施例中,组合物中每种O-抗原多糖的浓度是在约1和200μg/mL之间,例如在约2与100μg/mL之间,例如在约4与50μg/mL之间。在其某些实施例中,对于组合物中的每种O-抗原多糖而言,多糖:载体蛋白比率是在约1:10与约1:2之间,例如在约1:5与1:2之间。
附图说明
当连同附图一起阅读时,会更好地理解先前概述以及以下本申请的优选实施例的详述。应理解的是本发明不限于附图中示出的准确实施例。
在这些附图中:
图1A-1C示出,PS20、PS80、和F68,而不是山梨醇能够防止在测试条件下ExPEC糖缀合物的冷冻/融化诱导的聚集:将PS20、PS80、F68和山梨醇添加至ExPEC糖缀合物配制品,并且使其经受冷冻/融化诱导的胁迫,
图1A示出尺寸排阻色谱法-高效液相色谱法(SEC-HPLC)色谱图的积分方案;
图1B示出SEC-HPLC色谱图,展示冷冻/融化之前和之后的实验的结果;以及
图1C示出了标出在总峰积分时,前峰1的百分比值的图;
图2示出了比较当经受40℃持续12周的延长时段时,与旧ExPEC糖缀合物配制品直接对比的配制品26和28的SEC-HPLC色谱前峰1的百分比的图:检验了直立(↑)和倒立(↓)小瓶取向,当经受热胁迫(40℃)时,配制品26和28展示了超过旧ExPEC糖缀合物配制品的增加的稳定性;以及
图3示出多幅图,这些图展示了当暴露于三种不同浓度的钨提取物(HW、MW、LW)并且储存在40℃下持续4周,与旧ExPEC糖缀合物配制品相比,配制品26和28的前峰1趋势。
图4示出了SEC-HPLC色谱图,其展示了与PETG和PC塑料材料接触下,与旧配制品相比,配制品26和26在搅拌胁迫之前和之后的实验的结果(T0是对照,即没有搅拌胁迫)。
发明详述
在背景和整个说明书中引用或描述了各种出版物、文章和专利;这些参考文献中的每一篇均通过引用以其整体结合在此。包括在本说明书中的文件、法案、材料、装置、物品或类似物的讨论用于提供本发明的背景的目的。这种讨论不承认任何或所有这些事项形成关于所披露或要求保护的任何发明的现有技术的一部分。
除非另外定义,在此所使用的所有科学技术术语具有如本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。否则,在此所使用的某些术语具有说明书中阐述的含义。
必须注意,除非上下文另外明确规定,否则如在此和所附权利要求中所使用,单数形式“一个/一种(a/an)”和“该”包括复数指示物。
除非另有说明,任何数值,如此处所述的浓度或浓度范围,应被理解为在所有情况下都被术语“约”修饰。因此,数值典型包括列举值±10%。例如,1mg/mL的浓度包括0.9mg/mL至1.1mg/mL。同样地,1%至10%(w/v)的浓度范围包括0.9%(w/v)至11%(w/v)。如在此所使用,数值范围的使用明确地包括所有可能的子范围,该范围内的所有单个数值,包括值的这些范围内的整数和分数,除非上下文另有明确指示。
如在此使用,术语“包括(包含)(comprises、comprising、includes、including)”,“具有(has、having)”,“包含(contains或containing)”、或它们的任何其他变化,将被理解为意味着包括所述整数或整数组,而不排除任何其他整数或整数组,并且旨在是非排他的或开放端的。例如,包含元件的清单的组合物、混合物、工艺、方法、物品、或设备不一定限制于仅那些元件,而可以包括不是此类组合物、混合物、工艺、方法、物品、或设备明确列出的或固有的其他元件。此外,除非明确地说明是相反的,“或”是指包括在内的或,而不是指排他的或。例如,以下项中的任一者满足条件A或B:A是真(或存在)并且B是假(或不存在),A是假(或不存在)并且B是真(或存在),以及A和B二者都是真(或存在)。
如在此使用,术语“由……组成(consists of)”、或变化形式,例如“由……组成(consist of或consisting of)”,如贯穿说明书和权利要求书中使用,指示包括任何列举的整数或整数组,而且没有另外的整数或整数组可以添加至指定方法、结构、或组合物。
如在此使用,术语“实质上由……组成(consists essentially of)”、或变化形式,例如“实质上由……组成(consist essentially of或consisting essentially of)”,如贯穿说明书和权利要求书中使用,指示包括任何列举的整数或整数组,并且任选地包括不实质性改变所指定的方法、结构或组合物的基本的或新颖的特性的任何列举的整数或整数组。
应当理解的是,当提及优选的发明的组分的规格或特征时,在此使用的术语“约”、“大约”、“总体上”、“基本上”、以及类似术语,指示描述的规格/特征不具有严格的界限或参数,并且并不从其排除功能上相同或相似的微小变化,如本领域普通技术人员将理解的那样。在最低程度上,包括数值参数的此类引用将包括将不改变最低有效位数的变化,使用本领域接受的数学的和产业的原理(例如化整误差、测量误差或其他***误差、制造公差等)。
如在此使用,术语“O多糖”、“O-抗原”、“O抗原”、“O-抗原多糖”、“O-多糖抗原”、以及缩写“OPS”,都是指革兰氏阴性菌的O抗原,它是脂多糖(LPS)的组分,并且特异性针对革兰氏阴性菌的每一种血清型或血清(亚)型。O抗原通常包含二至七个糖残基的重复单元(RU)。如在此使用,RU被设置为等于生物重复单元(BRU)。BRU将O-抗原的RU描述为它是体内合成的。
如在此使用,术语“缀合物”和“糖缀合物”都是指包含共价结合至载体蛋白(例如铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA))的大肠杆菌O抗原的缀合产物。缀合物可以是生物缀合物,它是在宿主细胞中制备的缀合产物,其中宿主细胞机器产生O抗原和载体蛋白,并且将O抗原连接至载体蛋白,例如经由N-连接。还可以通过其他手段制备缀合物,例如通过蛋白和糖抗原的化学键。
在本发明的实施例中的大肠杆菌O抗原包括O1A、O2、O6A、和O25B,它们披露于WO2015/124769、和WO 2017/035181中。这些参考文献中的每一篇通过引用以其全部内容结合在此。也可以使用其他大肠杆菌O抗原,例如除了特定的O1A、O2、O6A和/或O25B抗原,并且可以例如包括,但不限于来自大肠杆菌O1、O2、O4、O6、O7、O8、O15、O16、O18、O21、O25、O73、O75和O153血清型及其亚血清型的O抗原。
如在此使用,术语“药品”是指单独的糖缀合物(例如共价偶联至EPA载体蛋白的大肠杆菌O抗原多糖,例如共价偶联至EP的大肠杆菌O25B O抗原)的散装产品,其处于与如将最终给予受试者的产品相比的更高浓度。可以在用来纯化糖缀合物的下游工艺结束以后,产生该药品。例如,该药品可以按更浓缩的形式,储存在本发明的配制品缓冲液中,例如处于冷冻条件下,例如处于负70℃下。
如在此使用,术语“药物产品”是指糖缀合物的配制品,处于用于给予受试者的最终形式。药物产品包含所有糖缀合物(在多价疫苗的情况下,偶联至EPA载体蛋白的大肠杆菌O抗原多糖,例如对于四价疫苗,O25B、O1A、O2和O6A,每一种单独偶联至EPA载体蛋白,并且如果疫苗的配价增加,任选地是偶联至EPA载体蛋白的更多大肠杆菌O抗原)。可以典型地通过混合各自的糖缀合物的药品,并且如果需要,用配制品缓冲液进行稀释,这样使得产生靶剂量的疫苗,来制备药物产品。在根据本发明所述配制品中的药物产品可以储存在2℃-8℃下,并且在该温度下持续至少6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36或更多个月,仍保持稳定。
当结合数字使用时,术语“约”是指在引用的数字的±1、±5或±10%内的任何数字。
当O抗原共价结合至蛋白载体时,仅基于缀合物中的O抗原多糖部分计算O抗原的有效量或剂量。
与ExPEC或ExPEC感染相关的疾病包括,但不限于尿道感染、手术部位感染、菌血病、腹腔感染或盆腔感染、肺炎、医院获得性肺炎、骨髓炎、蜂窝组织炎、肾盂肾炎、伤口感染、脑膜炎、新生儿脑膜炎、腹膜炎、胆管炎、软组织感染、脓性肌炎、脓毒性关节炎、以及脓毒症。
如在此使用,在给予受试者两种或更多种疗法的背景下,术语“联合”是指使用多于一种疗法。术语“联合”的使用并不限制其中给予受试者疗法的顺序。例如,可以在给予受试者第二治疗(例如,在此描述的组合物,或另一种疗法,例如用抗生素治疗)之前、同时、或之后给予第一疗法(例如在此描述的组合物)。
如在此使用,术语“受试者”是指动物,优选哺乳动物,并且可以包括非灵长类(例如猪、马、山羊、绵羊、猫、狗、兔、大鼠、或小鼠)和灵长类(例如猴、黑猩猩、或人类)。在某些实施例中,受试者是非人类动物。在另一实施例中,受试者是人类。术语“受试者”和“患者”可以在此可互换地使用。根据本发明所述的组合物适合给予至受试者,并且可以用于产生针对该组合物中涵盖的ExPEC O-抗原的免疫应答。
如在此使用,对抗原的“免疫学应答”或“免疫应答”是指受试者中对抗原或组合物中存在的抗原的体液免疫应答和/或细胞免疫应答的发展。
包含大肠杆菌O抗原多糖的组合物
在一个一般方面,本发明涉及包含主要在大肠杆菌临床分离株中发现的O-抗原血清型的多价疫苗,该多价疫苗可以可以被用于提供自动免疫接种作用,以便预防由具有包含在该疫苗中的O-抗原血清型的ExPEC引起的疾病。在一个实施例中,本发明涉及包含至少一种大肠杆菌O抗原多糖的组合物。在某些实施例中,组合物可以包含大肠杆菌O25B抗原多糖。在其他实施例中,组合物包含大肠杆菌O1A、O2、和/或O6A抗原多糖。在优选实施例中,组合物包含大肠杆菌O1A、O2、O6A和O25B抗原多糖,它们披露于WO 2015/124769、和WO 2017/035181中。这些参考文献中的每一篇通过引用以其全部内容结合在此。在某些实施例中,在组合物中存在其他的或另外的大肠杆菌O抗原多糖。此类大肠杆菌O抗原多糖可以包括,但不限于来自大肠杆菌O1、O2、O4、O6、O7、O8、O15、O16、O18、O21、O25、O73、O75和O153的(亚)血清型的O抗原。取决于需要,组合物可以包括多于一种另外的大肠杆菌O抗原,例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、或更多种另外的大肠杆菌O抗原,以提供针对多种大肠杆菌血清型的免疫保护。
在某些实施例中,这些组合物和方法可以涉及大肠杆菌O25B抗原和一种或多种另外的大肠杆菌O抗原。大肠杆菌O抗原的实例可以包括但不限于大肠杆菌O25B、O1A、O2和O6A抗原。
如在此使用,“大肠杆菌O25B抗原”是指特异性针对大肠杆菌O25B血清型的O抗原。在一个实施例中,大肠杆菌O25B抗原包括式O25B’的结构:
其中在式O25B’中的n是1至30、1至20、1至15、1至10、1至5、10至30、15至30、20至30、25至30、5至25、10至25、15至25、20至25、10至20、或15至20的整数。在本发明的一个实施例中,式O25B’中的n是10-20的整数。
如在此使用,“大肠杆菌O1A抗原”是指特异性针对大肠杆菌O1A血清型的O抗原。在一个实施例中,大肠杆菌O1A抗原包括式O1A’的结构:
其中在式O1A’中的n是1至30、1至20、1至15、1至10、1至5、10至30、15至30、20至30、25至30、5至25、10至25、15至25、20至25、10至20、或15至20的整数。在一个实施例中,式O1A’中的n是7-15的整数。
如在此使用,“大肠杆菌O2抗原”是指特异性针对大肠杆菌O2血清型的O抗原。在一个实施例中,大肠杆菌O2抗原包括式O2’的结构:
其中在式O2’中的n是1至30、1至20、1至15、1至10、1至5、10至30、15至30、20至30、25至30、5至25、10至25、15至25、20至25、10至20、或15至20的整数。在一个实施例中,式O2’中的n是8-16的整数。
如在此使用,“大肠杆菌O6抗原”是指特异性针对大肠杆菌O6血清型的O抗原。在一个实施例中,大肠杆菌O6抗原是大肠杆菌O6A。
如在此使用,“大肠杆菌O6A”抗原也被称为“大肠杆菌O6K2抗原”或“大肠杆菌O6Glc抗原”,是指特异性针对大肠杆菌O6A血清型的O抗原。在一个实施例中,大肠杆菌O6A抗原包括式O6A’的结构:
其中β1,2键也称为β2键,在式O6A’中的n是1至30、1至20、1至15、1至10、1至5、10至30、15至30、20至30、25至30、5至25、10至25、15至25、20至25、10至20、或15至20的整数。在一个实施例中,式O6A’中的n是8-18的整数。
在本发明的组合物中的大肠杆菌O抗原多糖共价结合(有时称为“缀合”)至载体蛋白,本发明的载体蛋白是铜绿假单胞菌的外毒素A,优选地是其脱毒变体(EPA;参见例如Ihssen等人,(2010)Microbial cell factories[微生物细胞工厂]9,61;WO 2015/124769)。载体蛋白和O抗原多糖的组合称为糖缀合物。典型地,来自组合物中的每一种大肠杆菌血清型的O抗原共价结合至单独的载体蛋白,即,如果组合物包含四种O抗原多糖,则这些中的每一种单独地并且独立地偶联至EPA载体蛋白,并且组合物因此包含四种不同的糖缀合物。制造糖缀合物的一种方式是通过生物缀合,其中宿主细胞机器产生O抗原和载体蛋白,并且将O抗原连接至载体蛋白,例如经由N-连接(参见例如WO 2015/124769,用于制备与EPA载体蛋白的大肠杆菌O抗原O25B、O1A、O2和O6A多糖的生物缀合物)。对于EPA,已经在文献中描述了不同的脱毒蛋白变体,并且它们可以被用作载体蛋白。脱毒的(或无毒的)EPA是指缺乏ADP核糖基化活性的任何铜绿假单胞菌外毒素A。野生型EPA的核糖基化作用活性位于EPA的约氨基酸400与613之间,并且例如从野生型EPA缺失在位置553的氨基酸谷氨酸,或在野生型EPA中用酪氨酸取代在位置426的组氨酸,使EPA分子脱毒。可以通过例如缺失、添加、或取代氨基酸残基,修饰野生型EPA的氨基酸400-613内的其他氨基酸,以消除ADP核糖基化活性,以及伴随其的毒性,如普通技术人员已知的。在本发明的优选实施例中,EPA载体蛋白是脱毒变体。在某些非限制性和示例性实施例中,EPA载体蛋白可以包含如在SEQ IDNO:1中列出的氨基酸序列(是脱毒EPA的实施例),或与SEQ ID NO:1至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%一致或与SEQ ID NO:1具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10个氨基酸差异的氨基酸序列,这些中的任一个任选地进一步包含如以下描述的1、2、3、4、5、6、7、8、或更多个重组地引进的糖基化共有序列。在具体实施例中,通过在EPA蛋白的一级结构的中的任何位置***糖基化共有序列(例如Asn-X-Ser(Thr),其中X可以是任何氨基酸,除了Pro;或优选地Asp(Glu)-X-Asn-Z-Ser(Thr),其中X和Z独立地选自任何天然氨基酸,除了Pro(SEQ ID NO:2)(参见例如WO 2006/119987和WO 2015/124769)),来完成糖基化位点的引入。在优选实施例中,EPA载体蛋白包含具有氨基酸序列Asp(Glu)-X-Asn-Z-Ser(Thr)的一个或多个重组地引进的N-连接的糖基化共有位点,其中X和Z独立地选自任何天然氨基酸,除了Pro(SEQ IDNO:2)。在某些实施例中,EPA载体蛋白包含此类引入的共有序列中的一、二、三、四、五、六、七、八、或更多个。在其他实施例中,EPA并不包含此类引入的N-连接的糖基化共有位点,例如其中糖缀合物是使用经典缀合化学制备的(参见例如US 5,370,872;Cryz等人,1990,Infection and Immunity[感染与免疫]58:373-377)。
在某些实施例中,大肠杆菌O-抗原按约1:20至20:1,优选1:10至10:1,例如1:10至3:1的多糖比蛋白重量/重量比共价结合至载体蛋白。在生物缀合物的某些非限制性实施例中,对于每种生物缀合物,取决于O抗原血清型,多糖/蛋白的比率是在约0.1与0.5之间(即多糖:蛋白是约1:10至1:2,例如约1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10,或其间的任何值)。
在某些非限制性实施例中,对于每种O抗原多糖,大肠杆菌O抗原多糖可以按约1至200μg/mL的浓度存在于组合物中,例如约2至100μg/mL,例如约4至50μg/mL、例如约4至48μg/mL、例如约8至48g/mL、例如约4至32μg/mL、例如约8至32μg/mL、例如8、16、20、或32g/mL,或其间的任何值。优选地,在至少两种大肠杆菌O抗原多糖的组合物中,对于组合物中O抗原多糖的每种组合,每种O抗原多糖按1:1至1:2之间的重量比,或其间的任何值存在。
在某些非限制性实施例中,O-抗原多糖按约4至1000μg/mL,例如约10至500μg/mL、例如约20至250μg/mL、例如约24至120μg/mL的总O-抗原多糖的浓度,存在于组合物中。
在某些非限制性实施例中,在组合物中EPA载体蛋白的总浓度可以例如在约40与2000μg/mL之间,例如约100至1500μg/mL,例如约200至1200μg/mL、例如约250至600μg/mL。
在某些实施例中,组合物按1:1:1:1的重量比包含O25B、O1A、O2和O6A抗原多糖,其中O抗原多糖中的每一种共价结合至EPA载体蛋白。在另一实施例中,组合物按2:1:1:1的重量比包含大肠杆菌O25B、O1A、O2和O6A抗原多糖,其中O抗原多糖中的每一种共价结合至EPA载体蛋白。在此类实施例中的每一个中,作为非限制性实例,O25B抗原多糖可以按约8、16、或32μg/mL的浓度存在。
在治疗和预防受试者(例如人类受试者)的ExPEC感染中,在此描述的组合物是有用的。在某些实施例中,除了包含共价结合至EPA载体蛋白的大肠杆菌O抗原多糖,在此描述的组合物包含药学上可接受的载体。如在此使用,术语“药学上可接受的”意指被联邦政府或州政府的监管机构核准,或列出于美国药典,或用于在动物、并且更具体地在人类中使用的其他普遍认可的药典中。如在此使用,在药学上可接受的载体的背景下,术语“载体”是指与药物组合物一起给予的稀释剂、佐剂、赋形剂、或运载体。在本发明的组合物中的水优选是注射用水。
在此提供的组合物包含表面活性剂。如在此使用,表面活性剂是两亲的有机化合物,意味着它们包含疏水基团(它们的尾部)和亲水基团(它们的头部)二者。在优选实施例中,表面活性剂由亲水性头部(包含OH基团)和长疏水性尾部(碳链,该碳链在该碳链中可以包含至少约12、14、16、18、20、30、40、50、60、80、100、120、130、或更多个碳)组成。根据本发明的优选表面活性剂是非离子表面活性剂。适合本发明的组合物的表面活性剂的实例包括,但不限于聚山梨酯20(PS20)、聚山梨酯40(PS40)、聚山梨酯60(PS60)、聚山梨酯80(PS80)、以及F-68(F-68)。在优选实施例中,表面活性剂是PS80。在某些实施例中,按组合物中0.01%(重量/体积(w/v))至0.2%(w/v)的浓度提供表面活性剂。在某些实施例中,按合物中0.01%、0.02%、0.03%、0.04%、0.05%、0.06%、0.07%、0.08%、0.09%、0.1%、0.11%、0.12%、0.13%、0.14%、0.15%、0.16%、0.17%、0.18%、0.19%、0.2%、或其间的任何值的浓度,提供组表面活性剂。对于其中F-68是表面活性剂的实施例,浓度优选是从约0.05%至约0.2%。对于其中PS20、PS40、PS60、或PS80是表面活性剂的实施例,浓度优选是从约0.01%至约0.08%,例如约0.01%、0.02%、0.03%、0.04%、0.05%、0.06%、0.07%、0.08%、或其间的任何值。
在此提供的组合物进一步包含具有特定pH的缓冲液。根据本发明,组合物包含钾/钠磷酸盐缓冲液。对于此类缓冲液,浓度范围可以例如是约5mM至约20mM、约8mM至约15mM、约8mM至约13mM、约9mM至约11mM。在某些实施例中,按8mM、9mM、10mM、11mM、12mM、13mM、14mM、15mM、或其间的任何值的浓度,提供缓冲液。在某些实施例中,缓冲液浓度是从约8mM至约15mM。在优选实施例中,组合物包含10mM的浓度缓冲液。对于此类缓冲液,pH范围可以例如是约pH 6.5至约pH 7.5、约pH 6.6至约pH 7.4、约pH 6.7至约pH 7.3、约pH 6.8至约pH7.2、约pH 6.9至约pH 7.1。在某些实施例中,pH可以是6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、或其间的任何值。在优选实施例中,缓冲液的pH是7.0。在优选实施例中,组合物包含10mM的浓度和7.0的pH钾/钠磷酸盐缓冲液。
钾/钠磷酸盐缓冲液溶液可以例如包含来自K2HPO4(二碱价的)或KH2PO4(一碱价的)的钾,和来自Na2HPO4(二碱价的)或NaH2PO4(一碱价的)的钠。在某些实施例中,钾/钠磷酸盐缓冲液包含磷酸二氢钾(KH2PO4)和磷酸氢二钠(Na2HPO4)。在某些实施例中,钾/钠磷酸盐缓冲液包含磷酸氢二钾(K2HPO4)和磷酸二氢钠(NaH2PO4)。与反离子无关,磷酸二氢盐种类和磷酸一氢盐种类([H2PO4]-/[HPO4]2-)之间的摩尔比的范围是在5.13与0.52之间。
在此提供的组合物进一步包含渗透压调节剂(有时也称为‘稳定剂’)。在本发明的组合物中使用的渗透压调节剂是蔗糖或山梨醇,取决于其他赋形剂,如在此限定的。在某些实施例中,组合物包含蔗糖。在某些实施例中,组合物包含约3%至约12%(w/v)、约3%至约11%(w/v)、约3%至约10%(w/v)、约4%至约10%(w/v)、约5%至约9%(w/v)、约6%至约9%(w/v)的浓度范围的蔗糖。在某些实施例中,按3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、或其间的任何值的浓度,提供蔗糖。在优选实施例中,组合物包含约3%至约10%的浓度的蔗糖。在优选实施例中,组合物包含8%的浓度的蔗糖。在其他优选实施例中,组合物包含山梨醇。在优选实施例中,组合物包含约3%至约8%(w/v)、约3%至约7%(w/v)、约4%至约6%(w/v)的浓度的山梨醇。在优选实施例中,组合物包含约4%至约6%(w/v)的浓度的山梨醇。在某些实施例中,组合物包含约3%、4%、5%、6%、7%、8%、或其间的任何值的浓度的山梨醇。在优选实施例中,组合物包含5%的浓度的山梨醇。
在此提供的组合物进一步包含抗氧化剂。在本发明的组合物中使用的抗氧化剂是EDTA或甲硫氨酸,取决于其他赋形剂,如在此描述的。在某些实施例中,组合物包含EDTA。在某些实施例中,组合物包含约0.1mM至约1.5mM、约0.2mM至约1.4mM、约0.5mM至约1.3mM、约0.7mM至约1.2mM、约0.8mM至约1.2mM、约0.9mM至约1.1mM的浓度的EDTA。在某些实施例中,按0.1mM、0.2mM、0.3mM、0.4mM、0.5mM、0.6mM、0.7mM、0.8mM、0.9mM、1.0mM、1.1mM、1.2mM、1.3mM、1.4mM、1.5mM、或其间的任何值的浓度提供EDTA。在优选实施例中,组合物包含1.0mM的浓度的EDTA。包含EDTA的本发明的组合物还包含蔗糖。在其他实施例中,组合物包含甲硫氨酸。在某些实施例中,组合物包含约5mM至约15mM、约6mM至约14mM、约7mM至约13mM、约8mM至约12mM、约9mM至约11mM的浓度的甲硫氨酸。在优选实施例中,组合物包含约8mM至约12mM的浓度的甲硫氨酸。在某些实施例中,按5mM、6mM、7mM、8mM、9mM、10mM、11mM、12mM、13mM、14mM、15mM、或其间的任何值的浓度提供甲硫氨酸。在优选实施例中,组合物包含10mM的浓度的甲硫氨酸。包含甲硫氨酸的本发明的组合物还包含山梨醇。
提供了以下组合物,这些组合物包含:大肠杆菌O25B抗原多糖、大肠杆菌O1A抗原多糖、大肠杆菌O2抗原多糖、以及大肠杆菌O6A抗原多糖,其中每种O抗原多糖共价结合至铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)载体蛋白;5%(w/v)山梨醇;10mM甲硫氨酸;在7.0的pH下的10mM钾/钠磷酸盐缓冲液;以及0.02%PS80。还提供了以下组合物,这些组合物实质上由以下项组成:大肠杆菌O25B抗原多糖、大肠杆菌O1A抗原多糖、大肠杆菌O2抗原多糖、以及大肠杆菌O6A抗原多糖,其中每种O抗原多糖共价结合至铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)载体蛋白;5%(w/v)山梨醇;10mM甲硫氨酸;在7.0的pH下的10mM钾/钠磷酸盐缓冲液;以及0.02%PS80。还提供了以下组合物,这些组合物由以下项组成:大肠杆菌O25B抗原多糖、大肠杆菌O1A抗原多糖、大肠杆菌O2抗原多糖、以及大肠杆菌O6A抗原多糖,其中每种O抗原多糖共价结合至铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)载体蛋白;5%(w/v)山梨醇;10mM甲硫氨酸;在7.0的pH下的10mM钾/钠磷酸盐缓冲液;以及0.02%PS80。还提供了以下组合物,这些组合物包含:大肠杆菌O25B抗原多糖、大肠杆菌O1A抗原多糖、大肠杆菌O2抗原多糖、大肠杆菌O6A抗原多糖,以及1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20种其他大肠杆菌O抗原多糖,其中每种O抗原多糖共价结合至铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)载体蛋白;5%(w/v)山梨醇;10mM甲硫氨酸;在7.0的pH下的10mM钾/钠磷酸盐缓冲液;以及0.02%PS80。还提供了以下组合物,这些组合物实质上由以下项组成:大肠杆菌O25B抗原多糖、大肠杆菌O1A抗原多糖、大肠杆菌O2抗原多糖、大肠杆菌O6A抗原多糖,以及1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20种其他大肠杆菌O抗原多糖,其中每种O抗原多糖共价结合至铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)载体蛋白;5%(w/v)山梨醇;10mM甲硫氨酸;在7.0的pH下的10mM钾/钠磷酸盐缓冲液;以及0.02%PS80。还提供了以下组合物,这些组合物由以下项组成:大肠杆菌O25B抗原多糖、大肠杆菌O1A抗原多糖、大肠杆菌O2抗原多糖、大肠杆菌O6A抗原多糖,以及1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20种其他大肠杆菌O抗原多糖,其中每种O抗原多糖共价结合至铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)载体蛋白;5%(w/v)山梨醇;10mM甲硫氨酸;在7.0的pH下的10mM钾/钠磷酸盐缓冲液;以及0.02%PS80。
提供了以下组合物,这些组合物包含:大肠杆菌O25B抗原多糖、大肠杆菌O1A抗原多糖、大肠杆菌O2抗原多糖、大肠杆菌O6A抗原多糖,其中每种O抗原多糖共价结合至铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)载体蛋白;8%(w/v)蔗糖;1mM EDTA;在7.0的pH下的10mM钾/钠磷酸盐缓冲液;以及0.02%PS80。还提供了以下组合物,这些组合物实质上由以下项组成:大肠杆菌O25B抗原多糖、大肠杆菌O1A抗原多糖、大肠杆菌O2抗原多糖、大肠杆菌O6A抗原多糖,其中每种O抗原多糖共价结合至铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)载体蛋白;8%(w/v)蔗糖;1mM EDTA;在7.0的pH下的10mM钾/钠磷酸盐缓冲液;以及0.02%PS80。还提供了以下组合物,这些组合物由以下项组成:大肠杆菌O25B抗原多糖、大肠杆菌O1A抗原多糖、大肠杆菌O2抗原多糖、大肠杆菌O6A抗原多糖,其中每种O抗原多糖共价结合至铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)载体蛋白;8%(w/v)蔗糖;1mM EDTA;在7.0的pH下的10mM钾/钠磷酸盐缓冲液;以及0.02%PS80。还提供了以下组合物,这些组合物包含:大肠杆菌O25B抗原多糖、大肠杆菌O1A抗原多糖、大肠杆菌O2抗原多糖、大肠杆菌O6A抗原多糖,以及1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20种其他大肠杆菌O抗原多糖,其中每种O抗原多糖共价结合至铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)载体蛋白;8%(w/v)蔗糖;1mM EDTA;在7.0的pH下的10mM钾/钠磷酸盐缓冲液;以及0.02%PS80。还提供了以下组合物,这些组合物实质上由以下项组成:大肠杆菌O25B抗原多糖、大肠杆菌O1A抗原多糖、大肠杆菌O2抗原多糖、大肠杆菌O6A抗原多糖,以及1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20种其他大肠杆菌O抗原多糖,其中每种O抗原多糖共价结合至铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)载体蛋白;8%(w/v)蔗糖;1mM EDTA;在7.0的pH下的10mM钾/钠磷酸盐缓冲液;以及0.02%PS80。还提供了以下组合物,这些组合物由以下项组成:大肠杆菌O25B抗原多糖、大肠杆菌O1A抗原多糖、大肠杆菌O2抗原多糖、大肠杆菌O6A抗原多糖,以及1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20种其他大肠杆菌O抗原多糖,其中每种O抗原多糖共价结合至铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)载体蛋白;8%(w/v)蔗糖;1mM EDTA;在7.0的pH下的10mM钾/钠磷酸盐缓冲液;以及0.02%PS80。
在此描述的组合物可以任选地另外包含防腐剂,例如汞衍生物硫柳汞、苯氧乙醇、或尼泊金酯类。在具体实施例中,在此描述的药物组合物包含0.001%至0.01%硫柳汞。在其他实施例中,在此描述的药物组合物不包含防腐剂。
在某些实施例中,在此描述的组合物(例如免疫原性组合物)包含佐剂,或结合佐剂给予。用于结合在此描述的组合物给予的佐剂可以在给予所述组合物之前、同时、或之后给予。在一些实施例中,术语“佐剂”是指当结合在此描述的组合物,或作为其一部分给予时,增大、增强和/或促进对生物缀合物的免疫应答,但是当该佐剂化合物单独给予时,并不产生对生物缀合物的免疫应答的化合物。佐剂可以通过若干机制增强免疫应答,这些机制包括例如淋巴细胞募集、B和/或T细胞的刺激、以及巨噬细胞的刺激。在某些实施例中,在此描述的组合物并不包含除生物缀合物和赋形剂之外的佐剂,和/或并不与除生物缀合物和赋形剂之外的佐剂组合给予(如果生物缀合物或赋形剂将包含一些固有佐剂特性,则这些将被忽略,并且在这些实施例中,将不添加另外的外来佐剂)。
佐剂的具体实例包括,但不限于铝盐(矾)(例如氢氧化铝、磷酸铝、以及硫酸铝),3De-O-酰化单磷酰脂质A(MPL)(参见英国专利GB2220211),MF59(诺华(Novartis)),AS03(葛兰素史克公司(GlaxoSmithKline)),AS04(葛兰素史克公司(GlaxoSmithKline)),咪唑并吡啶化合物(参见WO 2007/109812),咪唑并喹喔啉化合物(参见WO 2007/109813)和皂苷,例如QS21(参见Kensil等人,in Vaccine Design:The Subunit and AdjuvantApproach[在疫苗设计中:亚基和佐剂方法](编辑Powell&Newman,美国殷实出版社(PlenumPress),纽约州,1995);美国专利号5,057,540)。其他佐剂是水包油型乳状液(例如角鲨烯或花生油),任选地结合免疫刺激剂,例如单磷酰脂质A(参见Stoute等人,1997,N.Engl.J.Med.[新英格兰医学杂志]336,86-91)。另一佐剂是CpG(Bioworld Today[今日生物世界],1998年11月15日)。
在某些实施例中,将在此描述的组合物配制为适合给予至受试者的计划途径。例如,在此描述的组合物可以例如被配制为适合肌内、皮下、肠胃外、口服、鼻内、皮内、经皮、结肠直肠、腹膜内、气管内、局部、直肠或肺部给予。在某些实施例中,对于通过肌内注射给予,在此描述的组合物是有用的。在其他实施例中,可以皮内地给予在此描述的组合物。在其他实施例中,可以经由皮肤递送在此描述的组合物。
在另一方面,在此还提供了在此描述的配制品中,包含在此详细描述的四种缀合物(即代表来自大肠杆菌血清型O25B、O1A、O2、或O6A的O-抗原)中的至少一种的药品组合物。对于散装抗原,例如作为在复合进最终药物产品之前的药品的储存,包含四种缀合物中的仅一种或一个子集的此类组合物会例如是有用的,并且共享针对包含所有四种缀合物的药物产品组合物描述的有用稳定性特征。
方法/用途
本发明的组合物可以例如用于在对其有需要的受试者中诱导对ExPEC的免疫应答的方法。优选地,该免疫应答能在对其有需要的受试者中有效预防或治疗与ExPEC相关的疾病。该方法包括给予受试者根据本发明所述的组合物。
在某些实施例中,在此提供的组合物可以储存在容器中。适合的容器可以包括,但不限于袋、小瓶、注射器、瓶、以及试管。在某些实施例中,具有能够由注射器穿刺的塞子的小瓶包含任何在此描述的组合物。可以由多种材料,例如玻璃(例如硼硅玻璃)、金属、或塑料(例如聚碳酸酯)形成在此提供的容器。在某些实施例中,该容器例如是类型I硼硅玻璃的小瓶。在其他实施例中,该容器是具有鲁尔锁紧头或押针的玻璃注射器。在其他实施例中,该容器是塑料材料,例如聚碳酸酯(PC)或聚对苯二甲酸乙二醇酯(PETG)的小瓶或注射器,该材料例如表现出与根据本发明所述的药品相容。小瓶可以任选地包含橡皮塞,例如来自涂覆有氟聚合物膜(例如Flurotec[乙烯-四氟乙烯共聚物(EFTE)]或特氟龙[氟化乙丙烯(FEP)])的(氯/溴)丁基橡胶。也可以使用其他材料和容器类型,并且这些材料可以基于本披露,由本领域普通技术人员确定与本发明的配制品的相容性。
在某些实施例中,药品被储存在聚碳酸酯容器中,例如瓶中。在某些实施例中,药品被储存在聚对苯二甲酸乙二醇酯容器中,例如瓶中。在某些实施例中,药物产品被储存在玻璃容器中,例如小瓶中。
在此提供的配制品改进了在组合物中的糖缀合物的稳定性。稳定的,一般意指在储存时,组合物保持其物理稳定性和/或化学稳定性和/或生物活性。优选地,在储存时,组合物保持其物理和化学稳定性及其生物活性。可以由本领域普通技术人员利用在此披露的方法和本领域已知的方法,确定物理稳定性、化学稳定性、以及生物活性。对于本发明,如在此的实例中所描述,如果与时间点零相比,存在尺寸排阻色谱法HPLC前峰(指示糖缀合物的聚集)方面5%或更小的改变,则认为组合物是“稳定的”(并且对应的配制品被认为是“稳定化”)。例如,在40℃下,在第8周时,现有ExPEC疫苗组合物(在25mM Tris pH 7.4、2.7mMKCl、137mM NaCl中)示出前峰的多于5%增加,并且因此在此温度下,在第8周时不稳定,而在40℃下,在12周后,本发明的组合物示出前峰的小于5%增加,并且因此在此温度下是稳定的,持续至少12周。本发明的组合物在2℃-8℃下,在玻璃容器中是稳定的,持续至少6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、或更多个月。本发明的组合物在25℃下,在塑料容器中也是稳定的,持续至少7天,这允许在这些条件下加工ExPEC糖缀合物产品。
在某些实施例中,在此将组合物提供为液体组合物。液体组合物意指当组合物在2℃-8℃下,并且优选储存在2℃-8℃下时是液体形式。任选地,液体组合物储存在25℃下或40℃下,例如用于在热胁迫条件下的加速的稳定性试验。
在某些实施例中,这些组合物可以在2℃-8℃下、在25℃下、或在40℃下储存并且是稳定的。在优选实施例中,组合物在2℃-8℃下被储存并且是稳定的。在某些实施例中,组合物在2℃-8℃下是稳定的,持续至少约6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36或更多个月。在某些实施例中,组合物在25℃下是稳定的,持续1、2、3、4、5、6、或更多个月。在某些实施例中,组合物在40℃下是稳定的,持续至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、或更多个周。
在某些实施例中,在此将组合物提供为冷冻组合物。冷冻组合物意指在约-18℃下或低于该温度下,例如在约-20℃、-40℃、-60℃、-70℃、-80℃或其间的任何温度、或更低温度下储存时,组合物是固体形式。在某些实施例中,这些组合物可以在-40℃下或在-60℃下储存并且是稳定的,取决于组合物中存在的渗透压调节剂。在某些实施例中,这些组合物可以在-70℃下储存并且是稳定的。在某些实施例中,组合物包含蔗糖并且在-40℃下是稳定的,持续至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、或更多个月。在某些实施例中,组合物包含山梨醇并且在-60℃下是稳定的,持续至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、或更多个月。在某些实施例中,组合物包含山梨醇或蔗糖并且在-70℃下是稳定的,持续至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、或更多年。与先前描述的旧组合物配制品相比,本发明的组合物被设计为更稳定。可以通过在此描述的方法和本领域已知的方法确定组合物的稳定性。利用这些方法,在给定温度下经给定时段,与经相同时段和相同温度的旧配制品的组合物相比,本发明的组合物将更稳定。
在此还提供了制备如在此披露的组合物的方法。在某些实施例中,提供了制备组合物的方法,这些方法包括添加至少一种共价连接至EPA载体的大肠杆菌O抗原、水、缓冲溶液的盐(即钠(二)氢磷酸盐和钾(二)氢磷酸盐[即Na2HPO4和KH2PO4或NaH2PO4和K2HPO4])、渗透压调节剂(即山梨醇或蔗糖)、抗氧化剂(即甲硫氨酸,其条件是渗透压调节剂是山梨醇;EDTA,其条件是渗透压调节剂是蔗糖)、以及表面活性剂(例如PS80)至容器中,调节pH至希望的pH(即6.5至7.5,例如7.0),并且混合这些组分,这样使得产生根据本发明所述的液体配制品。在优选实施例中,制备组合物的方法包括添加大肠杆菌O25B抗原多糖、大肠杆菌O1A抗原多糖、大肠杆菌O2抗原多糖、以及大肠杆菌O6A抗原多糖,其中每种抗原多糖共价结合至铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)载体蛋白;水;磷酸钾;磷酸钠;山梨醇;甲硫氨酸;以及PS80至容器中,调节pH至7.0,并且混合每种组分,这样使得钾/钠磷酸盐缓冲液的终浓度是10mM,具有7.0的pH,山梨醇是5%(w/v),甲硫氨酸是10mM,并且PS80是0.02%(w/v)。制备根据本发明所述的配制品的一个非限制性并且示例性方式如下:向约3.5升的水添加:3.3696g KH2PO4(Mw=136.09g/mol)、2.1635g Na2HPO4(Mw=141.96g/mol)、200g山梨醇、5.9684g甲硫氨酸(Mw=149.21g/mol)、8mL的10%(w/v)PS80原料液,这导致约6.73的pH,随后用约500μL的10N NaOH将其调节至靶pH=7.0,并且用水将体积调节至4升。可以按类似方式制备包含蔗糖和EDTA,代替山梨醇和甲硫氨酸的配制品,这是具有公知常识和在此提供的信息的普通技术人员所清楚的。用于制备根据本发明所述的组合物的一种可能方式是通过缓冲液更换,例如使用切向流过滤、过滤、透析、尺寸排阻色谱法、等,以将如以上描述制备的配制品更换为其中存在ExPEC糖缀合物的任何缓冲液,例如在ExPEC糖缀合物的纯化步骤期间或之后。对于普通技术人员而言,使用在此提供的信息,此种缓冲液更换步骤是常规的。
本发明的以下实例是用来进一步说明本发明的性质。应当理解的是,以下实例并不限制本发明,并且本发明的范围是由所附权利要求书决定的。
具体实施方式
实施例1是一种免疫原性组合物,该免疫原性组合物包含大肠杆菌O25B抗原多糖、大肠杆菌O1A抗原多糖、大肠杆菌O2抗原多糖、以及大肠杆菌O6A抗原多糖中的一种或多种,优选地,包含大肠杆菌O25B、O1A、O2和O6A抗原多糖中的全部四种,其中每种抗原多糖共价结合至铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)载体蛋白;3%至8%(优选4%至6%)(w/v)山梨醇;5至15mM(优选8至12mM)甲硫氨酸;在6.5至7.5的pH下的5至20mM(优选8至15mM)钾/钠磷酸盐缓冲液;以及0.01%至0.2%(w/v)表面活性剂。
实施例2是实施例1的免疫原性组合物,其中大肠杆菌O25B、O1A、O2、和O6A抗原多糖是按1:1:1:1或2:1:1:1的重量比。
实施例3是实施例1或2的免疫原性组合物,其中山梨醇的浓度是5%(w/v)。
实施例4是实施例1-3中任一项的免疫原性组合物,其中甲硫氨酸的浓度是10mM。
实施例5是实施例1-4中任一项的免疫原性组合物,其中该钾/钠磷酸盐缓冲液的浓度是10mM,并且该钾/钠磷酸盐缓冲液的pH是7.0。
实施例6是实施例1-5中任一项的免疫原性组合物,其中该表面活性剂包含亲水性头部和疏水性尾部,优选地,其中该表面活性剂选自下组,该组由以下各项组成:F-68、PS20、以及PS80。
实施例7是实施例6的免疫原性组合物,其中该表面活性剂是PS80。
实施例8是实施例7的免疫原性组合物,其中该表面活性剂的浓度是0.02%(w/v)。
实施例9是一种免疫原性组合物,该免疫原性组合物包含:
a.大肠杆菌O25B抗原多糖、大肠杆菌O1A抗原多糖、大肠杆菌O2抗原多糖、以及大肠杆菌O6A抗原多糖,其中每种抗原多糖共价结合至铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)载体蛋白;
b.5%(w/v)山梨醇;
c.10mM甲硫氨酸;
d.6.19mM KH2PO4和3.81mM Na2HPO4缓冲液,在7.0的pH下;以及
e.0.02%(w/v)PS80。
实施例10是一种免疫原性组合物,该免疫原性组合物包含大肠杆菌O25B抗原多糖、大肠杆菌O1A抗原多糖、大肠杆菌O2抗原多糖、以及大肠杆菌O6A抗原多糖中的一种或多种,优选地,包含大肠杆菌O25B、O1A、O2和O6A抗原多糖中的全部四种,其中每种抗原多糖共价结合至铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)载体蛋白;3%至12%(优选3至10%)(w/v)蔗糖;0.1至1.5mM EDTA;在6.5至7.5的pH下的5至20mM(优选8至15mM)钾/钠磷酸盐缓冲液;以及0.01%至0.2%(w/v)表面活性剂。
实施例11是实施例10的免疫原性组合物,其中大肠杆菌O25B、O1A、O2、和O6A抗原多糖是按1:1:1:1或2:1:1:1的重量比。
实施例12是实施例10或11的免疫原性组合物,其中蔗糖的浓度是8%(w/v)。
实施例13是实施例10-12中任一项的免疫原性组合物,其中EDTA的浓度是1mM。
实施例14是实施例10-13中任一项的免疫原性组合物,其中该钾/钠磷酸盐缓冲液的浓度是10mM,并且该钾/钠磷酸盐缓冲液的pH是7.0。
实施例15是实施例10-14中任一项的免疫原性组合物,其中该表面活性剂包含亲水性头部和疏水性尾部,优选地,其中该表面活性剂选自下组,该组由以下各项组成:F-68、PS20、以及PS80。
实施例16是实施例15的免疫原性组合物,其中表面活性剂是PS80。
实施例17是实施例16的免疫原性组合物,其中该表面活性剂的浓度是0.02%(w/v)。
实施例18是一种免疫原性组合物,该免疫原性组合物包含:
a.大肠杆菌O25B抗原多糖、大肠杆菌O1A抗原多糖、大肠杆菌O2抗原多糖、大肠杆菌O6A抗原多糖,其中每种抗原多糖共价结合至铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)载体蛋白;
b.8%(w/v)蔗糖;
c.1mM EDTA;
d.10mM钾/钠磷酸盐(例如6.19mM KH2PO4和3.81mM Na2HPO4)缓冲液,在7.0的pH下;以及
e.0.02%(w/v)PS80。
实施例19是实施例1-18中任一项的免疫原性组合物,其中每种O-抗原多糖的浓度是在约1与200μg/mL之间,优选1与100μg/mL之间,更优选2与50μg/mL之间,例如约4μg/mL与32μg/mL之间。
实施例20是实施例1-19中任一项的免疫原性组合物,其中对于每种O-抗原多糖,多糖:载体蛋白(重量:重量)比率是在约1:10与约1:2之间,例如在约1:5与约1:2之间。
实施例21是实施例1-20中任一项的免疫原性组合物,处于适合通过注射或输注给予的液体形式。
实施例22是实施例1-21中任一项的免疫原性组合物,用于在对其有需要的受试者中诱导免疫应答。
实施例23是实施例1-21中任一项的免疫原性组合物的用途,用于制造用于在对其有需要的受试者中诱导免疫应答的药物。
实施例24是根据实施例1-21中任一项所述的组合物,其在玻璃容器中。
实施例25是根据实施例1-21中任一项所述的组合物,其在聚碳酸酯容器中。
实施例26是根据实施例1-21中任一项所述的组合物,其在聚对苯二甲酸乙二醇酯容器中。
实施例27是根据实施例1-21中任一项所述的组合物,其在小瓶中。
实施例28是根据实施例1-21中任一项所述的组合物,其在注射器中。
实施例29是根据实施例1-21或24-28中任一项所述的组合物,当在2℃-8℃的温度下储存时,该组合物是稳定的,持续至少6个月,优选至少12个月,更优选至少18个月,更优选至少24个月,更优选至少25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、更多个月。
实施例30是用来稳定地维持包含共价偶联至EPA载体蛋白的大肠杆菌O抗原的液体免疫原性组合物的方法,该液体免疫原性组合物,该方法包括在2℃-8℃的温度下储存根据实施例1-21或24-29中任一项所述的组合物,持续至少6个月,优选至少12个月,更优选至少18个月,更优选至少24个月,更优选至少25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、更多个月。
实例
实例1:添加表面活性剂防止ExPEC糖缀合物的冷冻/融化诱导的聚集
为了确定赋形剂的哪种组合可以被添加至大肠杆菌O25B、O1A、O2、O6A抗原多糖,其中每种抗原多糖独立地共价结合至单独的(即总计四种单独的糖缀合物)铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA),此后称为ExPEC糖缀合物,从而在冷冻/融化、搅拌、热诱导的胁迫,以及金属诱导的氧化胁迫时辅助稳定化,将不同的赋形剂添加至初始ExPEC糖缀合物配制品(ExPEC糖缀合物,25mM Tris,pH 7.4,137mM NaCl,2.7mM KCl)(此后称为“旧”配制品,它是目前在ExPEC糖缀合物的2期临床试验中使用的配制品,临床试验数据库标示符(ClinicalTrials.gov Identifier):NCT02546960),并且通过适当方法,针对增加的稳定化,对所得配制品进行测试。
在旧配制品(在此有时也称为“对照”)中,在经受冷冻/融化诱导的胁迫时,ExPEC糖缀合物聚集。作为尺寸排阻色谱法-高效液相色谱法(SEC-HPLC)谱中的前峰,ExPEC糖缀合物的聚集是可见的(参见例如图1A和1B),其中前峰1是在经受胁迫时,不稳定性的指示。
最初,将冷冻保护剂(例如山梨醇)添加至ExPEC糖缀合物配制品中并且测试后续配制品,以确定在经受冷冻/融化诱导的胁迫时,稳定性是否增加。如通过SEC-HPLC测量的,发现添加山梨醇并未保护ExPEC糖缀合物免于冷冻/融化诱导的聚集(图1B)。
出人意料地,然而添加表面活性剂(例如F-68[也称为泊洛沙姆188,或普朗尼克F-68]、PS20、或PS80)至ExPEC糖缀合物配制品增加了当经受冷冻/融化诱导的胁迫时ExPEC糖缀合物的稳定性。确切地,当暴露于冷冻/融化诱导的胁迫时,表面活性剂防止了ExPEC糖缀合物的聚集。如通过SEC-HPLC测量的,添加0.01%PS-80、0.01%PS 20、或0.1%F-68(都是w/v)至ExPEC糖缀合物防止了冷冻/融化诱导的聚集(图1B和图1C)。每种测试的表面活性剂(所有非离子表面活性剂)由亲水性头部(包含OH基团)和长疏水性尾部(碳链,该碳链在该碳链中可以包含至少约12、14、16、18、20、30、40、50、60、80、100、120、130、或更多个碳)组成。尽管不希望受理论束缚,但是据信这些物理特性允许测试的表面活性剂防止ExPEC糖缀合物的冷冻/融化诱导的聚集。在进一步开发中,将PS80用作赋形剂,来防止冷冻/融化诱导的聚集,因为此具体的表面活性剂具有与对于ExPEC糖缀合物的后期开发而言的容易实施相关的另外的优点。
实例2:针对缓冲液、pH值、以及渗透压调节剂的配制品评估
在展示了表面活性剂能够防止ExPEC糖缀合物的冷冻/融化诱导的聚集后,研究了用于配制品的适合的缓冲液、pH、以及渗透压调节剂。在后续实验中,在作为渗透压调节剂的NaCl(150mM)或5%山梨醇(w/v)存在下,研究了若干配制品,覆盖不同的缓冲液-pH组合,并且所有都包含PS80(0.01%(w/v))。将旧配制品(25mM Tris、pH 7.4、137mM NaCl、2.7mMKCl)用作对照。测试了ExPEC糖缀合物的多个浓度(例如对于每种多糖,16或8μg/mL),但是我们并未观察到在测试的配制品的稳定化中,浓度差异的作用(数据并未示出)。
将若干胁迫应用至这些配制品,包括冷冻/融化、搅拌、曝光、和热胁迫,在不同温度下(例如2℃-8℃、25℃、和40℃)(表1)。
表1:应用至复配的ExPEC糖缀合物配制品的胁迫条件
表2:用于分析复配的ExPEC糖缀合物配制品的分析包
分析方法 | 目的 |
肉眼检查 | 外观和澄清度 |
pH | 样品的酸度或碱度 |
重量克分子渗透压浓度 | 重量克分子渗透压浓度 |
SEC-HPLC | 纯度、聚集、裂解 |
反相(RP)-HPLC | 纯度,化学修饰 |
等电聚焦(IEF) | 纯度,化学修饰 |
动态光散射(DLS) | 不可见颗粒 |
FlowCAM | 不可见颗粒 |
利用表2中描述的分析包,展示了与其他缓冲液-pH组合相比,在pH 7下包含组氨酸或在pH 7下包含磷酸钾的配制品更稳定(数据并未示出)。而且,在极端pH值(即pH 5.0和pH 8.0)下,似乎存在ExPEC糖缀合物的更多聚集。另外,观察到与包含NaCl作为渗透压调节剂的配制品相比,包含山梨醇作为渗透压调节剂的配制品出乎意料地更被稳定化。事实上,观察到包含NaCl的配制品不能针对在40℃下储存期间的聚集,将ExPEC糖缀合物稳定化。当将山梨醇用作渗透压调节剂时,并未出现ExPEC糖缀合物的聚集,展示了山梨醇具有出人意料的稳定效应。此外,与包含NaCl的配制品相比,在包含山梨醇的配制品中,在极端pH(即pH5.0和pH 8.0)下的聚集减少。这示出山梨醇使配制品更稳健,并且能够提供针对ExPEC糖缀合物的稳定效应,即使在生产期间存在pH差异。
实例3:针对稳定性的配制品评估。
设计另外的配制品来关于ExPEC糖缀合物的稳定性,鉴定最佳候选配制品。对于缓冲液和pH,在6.5和7.0的pH下评估组氨酸,并且代替纯磷酸钾,在6.5和7.0的pH下评估钾/钠磷酸盐缓冲液(KH2PO4/Na2HPO4)。基于初始结果选择钾和钠的组合,并且在冷冻/融化时,缓冲液覆盖局部pH缓冲能力。在制备缓冲***中,钾展示超过钠(例如对于具有pH=7.0的10mM磷酸盐缓冲液,我们使用了6.19mM KH2PO4和3.81mM Na2HPO4)。作为渗透压调节剂,评估了蔗糖(8%(w/v))和山梨醇(5%(w/v))。另外,评估了抗氧化剂EDTA(1mM)或甲硫氨酸(10mM)的添加的作用。还测试了如果NaCl不存在或在实例2中观察到提供保护效应的山梨醇存在,通过包括以下配制品,该配制品包含这些的组合(各自处在与当这些组分单独在实例2中使用时相比一半的浓度)。所有配制品包含0.02%(w/v)的浓度的PS80。
这些不同的配制品经受了在实例2中描述的相同胁迫条件。基于稳定性数据的组合,进行选择步骤,其中评估了每种配制品的性能并且基于以下标准进行排除:(a)对于每一温度,在三个时间点中的至少两个下,在RP-HPLC色谱图上,另外的后峰是可见的;(b)对于每一温度,在三个时间点中的至少两个下,在SEC-HPLC色谱图上,前峰1是可见的/增加的;(c)在经受胁迫(例如搅拌、冷冻/融化、曝光)后,在SEC-HPLC色谱图上,另外的后峰是可见的;以及(d)在经受胁迫(例如搅拌、冷冻/融化、曝光)后,在SEC-HPLC上,前峰1是可见的/增加的。发现两种具体配制品,在此命名为配制品26和28,能够提供禁得起测试的每种胁迫条件的ExPEC糖缀合物。
配制品26包含10mM Na/K磷酸盐缓冲液pH 7.0,5%(w/v)山梨醇,10mM甲硫氨酸,0.02%(w/v)PS-80,以及ExPEC糖缀合物。
配制品28包含10mM Na/K磷酸盐缓冲液pH 7.0,8%蔗糖,1mM EDTA,0.02%PS-80,以及ExPEC糖缀合物。
出人意料地,渗透压调节剂和抗氧化剂的浓度是相关的,因为包含(i)山梨醇与甲硫氨酸,或(ii)蔗糖与EDTA的配制品,胜过(a)其中山梨醇与EDTA组合的配制品,连同(b)其中蔗糖与甲硫氨酸组合的配制品,以及(c)其中不存在抗氧化剂的配制品。还出人意料地,发现ExPEC糖缀合物配制品优选并不包含氯化钠。配制品26和28可以在多个范围内变化,并且仍预期将ExPEC糖缀合物稳定化。表3提供了对于配制品26和28,pH和赋形剂浓度的可应用范围。
表3:对于ExPEC糖缀合物,pH和赋形剂浓度的范围
在确认研究中进一步测试配制品26和28,以便与旧ExPEC糖缀合物配制品(ExPEC糖缀合物,25mM Tris,pH 7.4,137mM NaCl,2.7mM KCl)直接对比。测试了直立和倒立小瓶取向,以评价与最终容器的塞子接触的影响。配制品26和28由在提出的浓度下,并不造成任何安全性问题的赋形剂组成,用于许可的疫苗和/或被列出为用于肠胃外给予的核准的赋形剂。与旧ExPEC糖缀合物配制品相比,用于配制品26和28的这些赋形剂的组合和缓冲溶液的pH值有助于ExPEC糖缀合物的改进的稳定效应。用于配制品26和28的这些赋形剂的提出的组合展示了在冷冻/融化和热胁迫时,保护了ExPEC糖缀合物疫苗的药品(DS)和药物产品(DP)(例如图2),同时符合预期的在2℃-8℃和25℃下储存时的稳定性趋势(数据并未示出)。对于每种菌株,DP的测试的多糖浓度是20μg/mL(总计80μg/mL),并且蛋白浓度是总计300μg/mL。对于血清型O25B的DS(即包含共价结合至EPA载体蛋白的大肠杆菌O25B抗原多糖),多糖的测试浓度是200μg/mL并且蛋白的测试浓度是830μg/mL。此类组合物随时间是稳定的。
到目前为止,配制品26和28中的药物产品示出在2℃-8℃下持续至少6个月、在25℃下持续至少六个月的稳定性,并且稳定性研究仍在进行。
实例4:针对金属诱导的氧化胁迫的配制品评估。
作为金属诱导的产品氧化的模型,在钨存在下,针对其对ExPEC糖缀合物的稳定效应,进一步评估配制品26和28。钨残余物通常存在于玻璃预载药注射器(PFS)的尖端,这是用钨销进行尖端成形工艺的结果。在PFS中钨残余物的沉积取决于制造工艺,并且可以在PFS制造商之间变化,处于250-1250纳克/筒的范围中。钨与PFS中的蛋白聚集相关(Jiang等人,J.Pharmaceutical Sci.[药物科学杂志]98(12):4695-710(2009);Seidl等人,Pharmaceutical Res.[药物研究]29:1454-67(2012))。因此,研究了当暴露于在不同浓度下的钨时配制品26和28以及旧配制品的稳定性,同时监测了氧化胁迫和ExPEC糖缀合物的聚集的倾向。在此评估中,检验了钨的三个水平(高(HW)、中(MW)、以及低(LW)),覆盖了目前在市场上可得的PFS中存在的钨残余物的所有水平。应用至配制品的胁迫条件总结在表4中。
表4:应用至包含钨的配制品的胁迫条件
胁迫 | 条件 | 时间点 |
温度 | 40℃ | 0、1、2和4周 |
搅拌 | 涡旋(在环境温度下200rpm) | 24小时 |
配制品26和28示出具有随时间的ExPEC糖缀合物的最小量的聚集,如通过SEC-HPLC分析所展示(稳定性-指示前峰1).即使当暴露于最高水平的钨时,与在T-0时的1.0%相比,在第4周时,前峰水平仅达到3.1%(平均0.5%生长每周,图3)。
本发明因此提供了用于ExPEC糖缀合物疫苗的两种不同的改进的液体配制品。第一,最优选的组合物包含ExPEC糖缀合物、山梨醇、甲硫氨酸、K/Na-磷酸盐缓冲液pH 7和表面活性剂。第二优选的组合物包含ExPEC糖缀合物、蔗糖、EDTA、K/Na-磷酸盐缓冲液pH 7和表面活性剂。在2℃-8℃下储存时,这些组合物具有超过先前描述的组合物的优点,在本发明的新配制品中,ExPEC糖缀合物疫苗示出更好的稳定性特征曲线,其中防止了聚集和形成降解产物,如稳定性指示测定(SEC-HPLC和RP-HPLC)所示。当用上述分析技术进行分析时,在冷冻/融化、热(40℃)、以及金属诱导的氧化胁迫下,两种新发明的配制品的稳定效应甚至更明显。这些特征允许针对ExPEC糖缀合物疫苗的DS和DP二者,多个储存和运输选项。此外,关于禁得起金属诱导的氧化胁迫的改进特性,也可以应用于ExPEC疫苗在替代性初级包装***(例如载药注射器和/或可应用的装置)中的长期储存。
实例5:针对与塑料材料的相容性的配制品评估。
针对其对ExPEC糖缀合物药品(O25B缀合物,多糖的测试浓度227-242μg/mL,并且蛋白的测试浓度952-1048μg/mL)的稳定效应,进一步评估配制品26和28,其中这些配制品与不同塑料材料,例如聚碳酸酯(PC)和聚对苯二甲酸乙二醇酯(PETG)接触。塑料材料已经与蛋白降解相关,例如当已经通过辐射将塑料材料稳定化时。在PETG和PC容器中,针对在快速的搅拌胁迫(在室温下,在200rpm下24小时)下的稳定性,测试配制品。在PETG容器中,在这些条件下,旧配制品展示完全降解。相比之下,如通过SEC-HPLC分析所展示(参见图4,使用前峰1作为不稳定性的指示),在测试的PETG和PC容器中,在相同条件下,配制品26和28保持稳定。此外,观察到在25℃下,在PC和PETG容器中储存七天,这些配制品的药品的稳定性(数据并未示出)。
序列表
<110> 杨森制药公司
<120> ExPEC糖缀合物疫苗配制品
<130> 0281 WO 00 ORD
<160> 2
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 612
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 脱毒的铜绿假单胞菌的外毒素A
<400> 1
Ala Glu Glu Ala Phe Asp Leu Trp Asn Glu Cys Ala Lys Ala Cys Val
1 5 10 15
Leu Asp Leu Lys Asp Gly Val Arg Ser Ser Arg Met Ser Val Asp Pro
20 25 30
Ala Ile Ala Asp Thr Asn Gly Gln Gly Val Leu His Tyr Ser Met Val
35 40 45
Leu Glu Gly Gly Asn Asp Ala Leu Lys Leu Ala Ile Asp Asn Ala Leu
50 55 60
Ser Ile Thr Ser Asp Gly Leu Thr Ile Arg Leu Glu Gly Gly Val Glu
65 70 75 80
Pro Asn Lys Pro Val Arg Tyr Ser Tyr Thr Arg Gln Ala Arg Gly Ser
85 90 95
Trp Ser Leu Asn Trp Leu Val Pro Ile Gly His Glu Lys Pro Ser Asn
100 105 110
Ile Lys Val Phe Ile His Glu Leu Asn Ala Gly Asn Gln Leu Ser His
115 120 125
Met Ser Pro Ile Tyr Thr Ile Glu Met Gly Asp Glu Leu Leu Ala Lys
130 135 140
Leu Ala Arg Asp Ala Thr Phe Phe Val Arg Ala His Glu Ser Asn Glu
145 150 155 160
Met Gln Pro Thr Leu Ala Ile Ser His Ala Gly Val Ser Val Val Met
165 170 175
Ala Gln Ala Gln Pro Arg Arg Glu Lys Arg Trp Ser Glu Trp Ala Ser
180 185 190
Gly Lys Val Leu Cys Leu Leu Asp Pro Leu Asp Gly Val Tyr Asn Tyr
195 200 205
Leu Ala Gln Gln Arg Cys Asn Leu Asp Asp Thr Trp Glu Gly Lys Ile
210 215 220
Tyr Arg Val Leu Ala Gly Asn Pro Ala Lys His Asp Leu Asp Ile Lys
225 230 235 240
Pro Thr Val Ile Ser His Arg Leu His Phe Pro Glu Gly Gly Ser Leu
245 250 255
Ala Ala Leu Thr Ala His Gln Ala Cys His Leu Pro Leu Glu Ala Phe
260 265 270
Thr Arg His Arg Gln Pro Arg Gly Trp Glu Gln Leu Glu Gln Cys Gly
275 280 285
Tyr Pro Val Gln Arg Leu Val Ala Leu Tyr Leu Ala Ala Arg Leu Ser
290 295 300
Trp Asn Gln Val Asp Gln Val Ile Arg Asn Ala Leu Ala Ser Pro Gly
305 310 315 320
Ser Gly Gly Asp Leu Gly Glu Ala Ile Arg Glu Gln Pro Glu Gln Ala
325 330 335
Arg Leu Ala Leu Thr Leu Ala Ala Ala Glu Ser Glu Arg Phe Val Arg
340 345 350
Gln Gly Thr Gly Asn Asp Glu Ala Gly Ala Ala Ser Ala Asp Val Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Pro Val Ala Ala Gly Glu Cys Ala Gly Pro Ala Asp
370 375 380
Ser Gly Asp Ala Leu Leu Glu Arg Asn Tyr Pro Thr Gly Ala Glu Phe
385 390 395 400
Leu Gly Asp Gly Gly Asp Val Ser Phe Ser Thr Arg Gly Thr Gln Asn
405 410 415
Trp Thr Val Glu Arg Leu Leu Gln Ala His Arg Gln Leu Glu Glu Arg
420 425 430
Gly Tyr Val Phe Val Gly Tyr His Gly Thr Phe Leu Glu Ala Ala Gln
435 440 445
Ser Ile Val Phe Gly Gly Val Arg Ala Arg Ser Gln Asp Leu Asp Ala
450 455 460
Ile Trp Arg Gly Phe Tyr Ile Ala Gly Asp Pro Ala Leu Ala Tyr Gly
465 470 475 480
Tyr Ala Gln Asp Gln Glu Pro Asp Ala Arg Gly Arg Ile Arg Asn Gly
485 490 495
Ala Leu Leu Arg Val Tyr Val Pro Arg Trp Ser Leu Pro Gly Phe Tyr
500 505 510
Arg Thr Gly Leu Thr Leu Ala Ala Pro Glu Ala Ala Gly Glu Val Glu
515 520 525
Arg Leu Ile Gly His Pro Leu Pro Leu Arg Leu Asp Ala Ile Thr Gly
530 535 540
Pro Glu Glu Glu Gly Gly Arg Val Thr Ile Leu Gly Trp Pro Leu Ala
545 550 555 560
Glu Arg Thr Val Val Ile Pro Ser Ala Ile Pro Thr Asp Pro Arg Asn
565 570 575
Val Gly Gly Asp Leu Asp Pro Ser Ser Ile Pro Asp Lys Glu Gln Ala
580 585 590
Ile Ser Ala Leu Pro Asp Tyr Ala Ser Gln Pro Gly Lys Pro Pro Arg
595 600 605
Glu Asp Leu Lys
610
<210> 2
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 优选的N-连接的糖基化共有序列
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> Xaa可以是Asp或Glu
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (2)..(2)
<223> Xaa可以是任何氨基酸,除了Pro
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(4)
<223> Xaa可以是任何氨基酸,除了Pro
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (5)..(5)
<223> Xaa可以是Ser或Thr
<400> 2
Xaa Xaa Asn Xaa Xaa
1 5
Claims (17)
1.一种免疫原性组合物,该免疫原性组合物包含:
a.大肠杆菌O25B抗原多糖、大肠杆菌O1A抗原多糖、大肠杆菌O2抗原多糖、以及大肠杆菌O6A抗原多糖,其中每种抗原多糖共价结合至铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)载体蛋白;
b.3%至8%(w/v)山梨醇;
c.5至15mM甲硫氨酸;
d.在6.5至7.5的pH下的5至20mM钾/钠磷酸盐缓冲液;以及
e.0.01%至0.2%(w/v)表面活性剂。
2.如权利要求1所述的免疫原性组合物,其中山梨醇的浓度是5%(w/v)。
3.如权利要求1或2所述的免疫原性组合物,其中甲硫氨酸的浓度是10mM。
4.如权利要求1-3中任一项所述的免疫原性组合物,其中该钾/钠磷酸盐缓冲液的浓度是10mM,并且该钾/钠磷酸盐缓冲液的pH是7.0。
5.如权利要求1-4中任一项所述的免疫原性组合物,其中该表面活性剂是非离子表面活性剂,优选地,其中该表面活性剂选自下组,该组由以下各项组成:F-68、PS20、以及PS80。
6.如权利要求5所述的免疫原性组合物,其中该表面活性剂是PS80,优选地,其中PS80的浓度是0.02%(w/v)。
7.一种免疫原性组合物,该免疫原性组合物由以下项组成:
a.大肠杆菌O25B抗原多糖、大肠杆菌O1A抗原多糖、大肠杆菌O2抗原多糖、以及大肠杆菌O6A抗原多糖,其中每种抗原多糖共价结合至铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)载体蛋白;
b.5%(w/v)山梨醇;
c.10mM甲硫氨酸;
d.在7.0的pH下的10mM KH2PO4/Na2HPO4缓冲液;
e.0.02%(w/v)PS80;以及
f.水。
8.一种免疫原性组合物,该免疫原性组合物包含:
a.大肠杆菌O25B抗原多糖、大肠杆菌O1A抗原多糖、大肠杆菌O2抗原多糖、大肠杆菌O6A抗原多糖,其中每种抗原多糖共价结合至铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)载体蛋白;
b.3%至12%(w/v)蔗糖;
c.0.1至1.5mM EDTA;
d.在6.5至7.5的pH下的5至20mM钾/钠磷酸盐缓冲液;以及
e.0.01%至0.2%(w/v)表面活性剂。
9.如权利要求8所述的免疫原性组合物,其中蔗糖的浓度是8%(w/v)。
10.如权利要求8或9中任一项所述的免疫原性组合物,其中EDTA的浓度是1mM。
11.如权利要求8-10中任一项所述的免疫原性组合物,其中该钾/钠磷酸盐缓冲液的浓度是10mM,并且该钾/钠磷酸盐缓冲液的pH是7.0。
12.如权利要求8-11中任一项所述的免疫原性组合物,其中该表面活性剂是非离子表面活性剂,优选地,其中该表面活性剂选自下组,该组由以下各项组成:F-68、PS20、以及PS80。
13.如权利要求12所述的免疫原性组合物,其中该表面活性剂是PS80,优选地,其中PS80的浓度是0.02%(w/v)。
14.一种免疫原性组合物,该免疫原性组合物由以下项组成:
a.大肠杆菌O25B抗原多糖、大肠杆菌O1A抗原多糖、大肠杆菌O2抗原多糖、大肠杆菌O6A抗原多糖,其中每种抗原多糖共价结合至铜绿假单胞菌的外毒素A(EPA)载体蛋白;
b.8%(w/v)蔗糖;
c.1mM EDTA;
d.在7.0的pH下的10mM KH2PO4/Na2HPO4缓冲液;
e.0.02%(w/v)PS80;以及
f.水。
15.如权利要求1-14中任一项所述的免疫原性组合物,当在2℃-8℃的温度下储存时,该组合物是稳定的,持续至少6个月、优选持续至少12个月、更优选持续至少18个月。
16.如权利要求1-15中任一项所述的免疫原性组合物,其中每种O-抗原多糖的浓度是约1至200μg/mL,例如约2至100μg/mL,例如约8至48μg/mL,并且优选地,其中对于每种O-抗原多糖,多糖:载体蛋白比率是在约1:10与约1:2之间,优选地在约1:5与约1:2之间。
17.一种用于稳定地维持包含共价偶联至EPA载体蛋白的大肠杆菌O抗原的液体免疫原性组合物的方法,该方法包括将根据权利要求1-16中任一项所述的组合物在2℃-8℃的温度下储存至少6个月。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP16195256 | 2016-10-24 | ||
EP16195256.9 | 2016-10-24 | ||
PCT/EP2017/077123 WO2018077853A1 (en) | 2016-10-24 | 2017-10-24 | Expec glycoconjugate vaccine formulations |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN109996559A true CN109996559A (zh) | 2019-07-09 |
Family
ID=57206056
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201780065201.1A Pending CN109996559A (zh) | 2016-10-24 | 2017-10-24 | ExPEC糖缀合物疫苗配制品 |
Country Status (25)
Country | Link |
---|---|
US (5) | US10159751B2 (zh) |
EP (1) | EP3528839B1 (zh) |
JP (1) | JP6698220B2 (zh) |
KR (1) | KR102576346B1 (zh) |
CN (1) | CN109996559A (zh) |
AR (1) | AR109621A1 (zh) |
AU (1) | AU2017349163B2 (zh) |
BR (1) | BR112019007803A2 (zh) |
CA (1) | CA3038705A1 (zh) |
CL (1) | CL2019001104A1 (zh) |
CO (1) | CO2019003949A2 (zh) |
EA (1) | EA201991033A1 (zh) |
ES (1) | ES2966895T3 (zh) |
HR (1) | HRP20240171T1 (zh) |
HU (1) | HUE065328T2 (zh) |
IL (1) | IL266080B (zh) |
MA (1) | MA46661B1 (zh) |
MX (2) | MX2019004689A (zh) |
MY (1) | MY191842A (zh) |
PH (1) | PH12019500561A1 (zh) |
PL (1) | PL3528839T3 (zh) |
RS (1) | RS65125B1 (zh) |
SG (1) | SG11201902567WA (zh) |
TW (1) | TWI734853B (zh) |
WO (1) | WO2018077853A1 (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN115803087A (zh) * | 2020-09-17 | 2023-03-14 | 杨森制药公司 | 多价疫苗组合物及其用途 |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ES2718051T3 (es) | 2013-01-17 | 2019-06-27 | Arsanis Biosciences Gmbh | Antígeno específico de E. coli MDR |
CN106535927B (zh) | 2014-02-24 | 2019-09-20 | 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 | 新颖多糖及其用途 |
TWI715617B (zh) * | 2015-08-24 | 2021-01-11 | 比利時商葛蘭素史密斯克藍生物品公司 | 對抗腸道外病原性大腸桿菌之免疫保護之方法及組合物 |
AR109621A1 (es) | 2016-10-24 | 2018-12-26 | Janssen Pharmaceuticals Inc | Formulaciones de vacunas contra glucoconjugados de expec |
AR118389A1 (es) | 2019-03-18 | 2021-09-29 | Janssen Pharmaceuticals Inc | Métodos de producción de bioconjugados de polisacáridos de e. coli o-antígeno, sus composiciones y métodos de utilización |
JOP20210256A1 (ar) | 2019-03-18 | 2023-01-30 | Janssen Pharmaceuticals Inc | متقارن حيوي لعديدات سكاريد المستضدات-o للإشريكية القولونية، طرائق إنتاجه، وطرائق استخدامه |
CN117098550A (zh) | 2021-04-08 | 2023-11-21 | 杨森制药公司 | 生物缀合物生产方法 |
Citations (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1671410A (zh) * | 2002-06-21 | 2005-09-21 | 诺沃挪第克公司 | 因子ⅶ多肽的稳定化固体组合物 |
CN1842320A (zh) * | 2003-06-30 | 2006-10-04 | 阿尔扎公司 | 含有不挥发性平衡离子的用于经涂覆的微突出物的制剂 |
CN1993138A (zh) * | 2004-06-01 | 2007-07-04 | 阿雷斯贸易股份有限公司 | 稳定蛋白质的方法 |
CN101132810A (zh) * | 2004-12-14 | 2008-02-27 | Nabi生物制药公司 | 含有肽聚糖的糖缀合物疫苗 |
US20110064723A1 (en) * | 2009-09-14 | 2011-03-17 | Aridis Pharmaceuticals | Formulation for room temperature stabilization of a live attenuated bacterial vaccine |
WO2012028315A1 (en) * | 2010-09-02 | 2012-03-08 | Sanofi Pasteur Sa | A stabilizer for the preparation of a dry polio injectable vaccine composition |
CN104244974A (zh) * | 2011-05-13 | 2014-12-24 | 硕腾有限公司 | 亨德拉和尼帕病毒g糖蛋白免疫原性组合物 |
US20150118261A1 (en) * | 2011-09-14 | 2015-04-30 | Novartis Ag | Escherichia coli vaccine combination |
US20150202309A1 (en) * | 2014-01-21 | 2015-07-23 | Pfizer Inc. | Immunogenic Compositions Comprising Conjugated Capsular Saccharide Antigens and Uses Thereof |
US20150238588A1 (en) * | 2014-02-24 | 2015-08-27 | Glycovaxyn Ag | Novel polysaccharide and uses thereof |
US20150328301A1 (en) * | 2013-01-22 | 2015-11-19 | Londong School of Hygiene and Tropical Medicine | Glycoconjugate vaccines |
US20160000916A1 (en) * | 2013-03-15 | 2016-01-07 | Glaxosmithkline Intellectual Property (No.2) Limited | Low concentration antibody formulations |
Family Cites Families (41)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3700612A (en) | 1971-06-23 | 1972-10-24 | Tenneco Chem | Aqueous surface-coating compositions containing hydroxyalkyl ethers of galactomannan gums as thickeners |
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
GB8422653D0 (en) | 1984-09-07 | 1984-10-10 | Technology Licence Co Ltd | Monoclonal antibodies |
US5057540A (en) | 1987-05-29 | 1991-10-15 | Cambridge Biotech Corporation | Saponin adjuvant |
US4912094B1 (en) | 1988-06-29 | 1994-02-15 | Ribi Immunochem Research Inc. | Modified lipopolysaccharides and process of preparation |
US5370872A (en) | 1991-08-12 | 1994-12-06 | Swiss Serum And Vaccine Institute Berne | Escherichia coliO-polysaccharide-protein conjugate vaccine |
AUPM399594A0 (en) | 1994-02-21 | 1994-03-17 | Csl Limited | Antigenic preparation for treatment or prevention of helicobacter infection |
FI102976B (fi) | 1994-02-28 | 1999-03-31 | Valtion Teknillinen | Menetelmä lisäkeittokemikaalien tuottamiseksi sekä käyttämiseksi sulfa attiselluloosaprosessissa |
US6858211B1 (en) | 1998-07-20 | 2005-02-22 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Vaccines against Escherichia coli O157 infection |
AU2001253568A1 (en) | 2000-04-18 | 2001-10-30 | Dan C. Deborde | Lipopolysaccharide-conjugate vaccine for sepsis treatment |
RU2189253C1 (ru) | 2001-04-09 | 2002-09-20 | Государственный научный центр прикладной микробиологии | Диагностикум для идентификации escherichia coli o157 : h7 и способ его получения |
AU2003217912A1 (en) | 2002-03-01 | 2003-09-16 | Xencor | Antibody optimization |
EP1481057B1 (en) | 2002-03-07 | 2006-02-15 | Eidgenössische Technische Hochschule Zürich | System and method for the production of recombinant glycosylated proteins in a prokaryotic host |
AU2003901008A0 (en) | 2003-03-04 | 2003-03-20 | Anadis Ltd | Composition for the treatment and prevention of bacterial infections |
DE602005014354D1 (de) | 2004-03-30 | 2009-06-18 | Nsgene As | Therapeutische verwendung des wachstumsfaktors nsg33 |
ES2703061T3 (es) | 2005-05-11 | 2019-03-06 | Eth Zuerich | Proteínas N-glicosiladas recombinantes procedentes de células procariotas |
ES2388556T3 (es) | 2006-03-23 | 2012-10-16 | Novartis Ag | Compuestos inmunopotenciadores |
ES2376492T3 (es) | 2006-03-23 | 2012-03-14 | Novartis Ag | Compuestos de imidazoquinoxalina como inmunomoduladores. |
JP4791866B2 (ja) | 2006-03-24 | 2011-10-12 | 国立大学法人秋田大学 | 下痢原性大腸菌感染症の判別に用いられる固相等 |
US8877688B2 (en) | 2007-09-14 | 2014-11-04 | Adimab, Llc | Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor |
EP2193146B1 (en) | 2007-09-14 | 2016-05-25 | Adimab, LLC | Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor |
US20100286067A1 (en) | 2008-01-08 | 2010-11-11 | Biogenerix Ag | Glycoconjugation of polypeptides using oligosaccharyltransferases |
KR20100123730A (ko) | 2008-02-20 | 2010-11-24 | 글리코박신 아게 | 원핵생물 세포로부터의 n-당화된 재조합 단백질로부터 제조된 바이오컨쥬게이트 |
ES2684696T3 (es) | 2009-04-27 | 2018-10-04 | Immuron Limited | Preparación de inmunoglobulina enriquecida con anti-LPS para su uso en el tratamiento y/o la profilaxis de esteatohepatitis no alcohólica |
CN102724997B (zh) | 2009-11-19 | 2016-09-21 | 格林考瓦因有限公司 | 在原核细胞中产生免疫原性多糖的生物合成*** |
AU2011279073B2 (en) | 2010-07-16 | 2016-06-09 | Adimab, Llc | Antibody libraries |
CA2819366A1 (en) * | 2010-12-10 | 2012-06-14 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Novel formulations which mitigate agitation-induced aggregation of immunogenic compositions |
US20140336366A1 (en) | 2011-09-06 | 2014-11-13 | Glycovaxyn Ag | Bioconjugate vaccines made in prokaryotic cells |
US9932598B2 (en) | 2012-08-02 | 2018-04-03 | The Regents Of The University Of California | Metabolic engineering of microbial organisms |
CA2883000A1 (en) | 2012-09-10 | 2014-03-13 | Glycovaxyn Ag | Bioconjugates comprising modified antigens and uses thereof |
CN104837984A (zh) | 2012-10-12 | 2015-08-12 | 格林考瓦因有限公司 | 宿主细胞修饰方法 |
US10287330B2 (en) | 2012-12-27 | 2019-05-14 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Methods and compositions relating to CRM197 |
ES2718051T3 (es) | 2013-01-17 | 2019-06-27 | Arsanis Biosciences Gmbh | Antígeno específico de E. coli MDR |
CA2926523C (en) | 2013-10-11 | 2023-09-26 | Glycovaxyn Ag | Methods of host cell modification |
EP3102599B1 (en) | 2014-02-06 | 2019-02-27 | ARSANIS Biosciences GmbH | E. coli specific antibody sequences |
HUE057726T2 (hu) | 2014-12-30 | 2022-06-28 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Fehérje glikozilálására szolgáló készítmények és módszerek |
TWI715617B (zh) | 2015-08-24 | 2021-01-11 | 比利時商葛蘭素史密斯克藍生物品公司 | 對抗腸道外病原性大腸桿菌之免疫保護之方法及組合物 |
AR109621A1 (es) | 2016-10-24 | 2018-12-26 | Janssen Pharmaceuticals Inc | Formulaciones de vacunas contra glucoconjugados de expec |
GB201711635D0 (en) | 2017-07-19 | 2017-08-30 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Immunogenic composition |
JOP20210256A1 (ar) | 2019-03-18 | 2023-01-30 | Janssen Pharmaceuticals Inc | متقارن حيوي لعديدات سكاريد المستضدات-o للإشريكية القولونية، طرائق إنتاجه، وطرائق استخدامه |
AR118389A1 (es) | 2019-03-18 | 2021-09-29 | Janssen Pharmaceuticals Inc | Métodos de producción de bioconjugados de polisacáridos de e. coli o-antígeno, sus composiciones y métodos de utilización |
-
2017
- 2017-10-23 AR ARP170102949A patent/AR109621A1/es unknown
- 2017-10-24 HR HRP20240171TT patent/HRP20240171T1/hr unknown
- 2017-10-24 US US15/792,242 patent/US10159751B2/en active Active
- 2017-10-24 AU AU2017349163A patent/AU2017349163B2/en active Active
- 2017-10-24 MA MA46661A patent/MA46661B1/fr unknown
- 2017-10-24 WO PCT/EP2017/077123 patent/WO2018077853A1/en active Application Filing
- 2017-10-24 ES ES17794931T patent/ES2966895T3/es active Active
- 2017-10-24 CN CN201780065201.1A patent/CN109996559A/zh active Pending
- 2017-10-24 TW TW106136594A patent/TWI734853B/zh active
- 2017-10-24 PL PL17794931.0T patent/PL3528839T3/pl unknown
- 2017-10-24 RS RS20240125A patent/RS65125B1/sr unknown
- 2017-10-24 CA CA3038705A patent/CA3038705A1/en active Pending
- 2017-10-24 MY MYPI2019002160A patent/MY191842A/en unknown
- 2017-10-24 MX MX2019004689A patent/MX2019004689A/es unknown
- 2017-10-24 HU HUE17794931A patent/HUE065328T2/hu unknown
- 2017-10-24 EA EA201991033A patent/EA201991033A1/ru unknown
- 2017-10-24 JP JP2019521766A patent/JP6698220B2/ja active Active
- 2017-10-24 SG SG11201902567WA patent/SG11201902567WA/en unknown
- 2017-10-24 EP EP17794931.0A patent/EP3528839B1/en active Active
- 2017-10-24 KR KR1020197011812A patent/KR102576346B1/ko active IP Right Grant
- 2017-10-24 BR BR112019007803A patent/BR112019007803A2/pt unknown
-
2018
- 2018-11-15 US US16/191,659 patent/US10525145B2/en active Active
-
2019
- 2019-03-15 PH PH12019500561A patent/PH12019500561A1/en unknown
- 2019-04-16 IL IL266080A patent/IL266080B/en unknown
- 2019-04-18 CO CONC2019/0003949A patent/CO2019003949A2/es unknown
- 2019-04-22 MX MX2023004834A patent/MX2023004834A/es unknown
- 2019-04-23 CL CL2019001104A patent/CL2019001104A1/es unknown
- 2019-12-10 US US16/709,223 patent/US11033633B2/en active Active
-
2021
- 2021-05-12 US US17/318,616 patent/US11844766B2/en active Active
-
2023
- 2023-11-07 US US18/503,294 patent/US20240082412A1/en active Pending
Patent Citations (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1671410A (zh) * | 2002-06-21 | 2005-09-21 | 诺沃挪第克公司 | 因子ⅶ多肽的稳定化固体组合物 |
CN1842320A (zh) * | 2003-06-30 | 2006-10-04 | 阿尔扎公司 | 含有不挥发性平衡离子的用于经涂覆的微突出物的制剂 |
CN1993138A (zh) * | 2004-06-01 | 2007-07-04 | 阿雷斯贸易股份有限公司 | 稳定蛋白质的方法 |
CN101132810A (zh) * | 2004-12-14 | 2008-02-27 | Nabi生物制药公司 | 含有肽聚糖的糖缀合物疫苗 |
US20110064723A1 (en) * | 2009-09-14 | 2011-03-17 | Aridis Pharmaceuticals | Formulation for room temperature stabilization of a live attenuated bacterial vaccine |
WO2012028315A1 (en) * | 2010-09-02 | 2012-03-08 | Sanofi Pasteur Sa | A stabilizer for the preparation of a dry polio injectable vaccine composition |
CN104244974A (zh) * | 2011-05-13 | 2014-12-24 | 硕腾有限公司 | 亨德拉和尼帕病毒g糖蛋白免疫原性组合物 |
US20150118261A1 (en) * | 2011-09-14 | 2015-04-30 | Novartis Ag | Escherichia coli vaccine combination |
US20150328301A1 (en) * | 2013-01-22 | 2015-11-19 | Londong School of Hygiene and Tropical Medicine | Glycoconjugate vaccines |
US20160000916A1 (en) * | 2013-03-15 | 2016-01-07 | Glaxosmithkline Intellectual Property (No.2) Limited | Low concentration antibody formulations |
US20150202309A1 (en) * | 2014-01-21 | 2015-07-23 | Pfizer Inc. | Immunogenic Compositions Comprising Conjugated Capsular Saccharide Antigens and Uses Thereof |
US20150238588A1 (en) * | 2014-02-24 | 2015-08-27 | Glycovaxyn Ag | Novel polysaccharide and uses thereof |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
CARL J. BURKE ET AL: "Formulation, Stability, and Delivery of Live Attenuated Vaccines for Human Use", 《CRITICAL REVIEWS™ IN THERAPEUTIC DRUG CARRIER SYSTEMS》 * |
GPJM VAN DEN DOBBELSTEEN ET AL: "Immunogenicity and safety of a tetravalent E. coli O-antigen bioconjugate vaccine in animal models", 《VACCINE》 * |
JOSÉ L. TLAXCA ET AL: "Live attenuated and inactivated viral vaccine formulation and nasal delivery: Potential and challenges", 《ADVANCED DRUG DELIVERY REVIEWS》 * |
元英进主编: "《现代制药工程学(上册)》", 31 July 2004, 化学工业出版社教材出版中心 * |
吴正红主编: "《药剂学》", 28 February 2013, 中国医药科学出版 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN115803087A (zh) * | 2020-09-17 | 2023-03-14 | 杨森制药公司 | 多价疫苗组合物及其用途 |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN109996559A (zh) | ExPEC糖缀合物疫苗配制品 | |
US20230062987A1 (en) | Methods and compositions for immune protection against extra-intestinal pathogenic e. coli | |
CN104023744A (zh) | 用于针对金黄色葡萄球菌免疫的稳定组合物 | |
CA2785585A1 (en) | Vaccine compositions | |
EA044571B1 (ru) | СОСТАВЫ ГЛИКОКОНЪЮГАТНОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ExPEC | |
NZ751736B2 (en) | Expec glycoconjugate vaccine formulations |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination |