CN109985023A - 一种能降低雷公藤甲素毒性的肾脏靶向纳米载体及其制备方法与其应用 - Google Patents

一种能降低雷公藤甲素毒性的肾脏靶向纳米载体及其制备方法与其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种能降低雷公藤甲素毒性的肾脏靶向纳米载体及其制备方法与其应用。其制备方法包括如下步骤：(1)将配体和两亲性的嵌段物溶于二甲基亚砜中，然后加入N,N'‑二环己基碳二亚胺和4‑二甲氨基吡啶进行反应，透析，冻干，得到配体‑嵌段物聚合物；(2)将配体‑嵌段物聚合物，雷公藤甲素和乳化剂溶于有机溶剂中，接着旋转蒸发去除溶剂，用去离子水水化，沉化后，再经离心洗涤后，得到包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体。本发明制备的肾脏靶向纳米载体能够通过配体的介导特异性靶向到肾脏部位，减少雷公藤甲素对正常器官的损害，因此，可将该肾脏靶向纳米载体用于肾脏疾病的治疗。

Description

一种能降低雷公藤甲素毒性的肾脏靶向纳米载体及其制备方 法与其应用
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，特别涉及一种能降低雷公藤甲素毒性的肾脏靶向纳米载体及其制备方法与其应用。
背景技术
雷公藤甲素是来源于雷公藤的主要生物活性成分。它具有免疫调节、抗炎、抗肿瘤、抗膀胱生成和抗增殖等多种药理活性，在治疗自身免疫性和炎症性疾病、肿瘤、器官和组织移植性疾病等方面有着广泛的应用。另外，雷公藤甲素还可用于治疗进展性炎症肾脏疾病，如肾炎(狼疮性肾炎、肾小管间质性肾炎、IgA肾病)和慢性异体肾移植肾病。然而，尽管雷公藤甲素在治疗临床疾病方面有许多优点，但是它对于肾脏、肝脏和生殖器官严重的毒性限制了其生物应用。目前临床上主要通过将雷公藤甲素与其它中药联合配伍的方法来降低其毒性，但是由于雷公藤甲素的毒理机理复杂，目前仍然没有有效的方法来实现对其毒性的完全控制。因此，基于雷公藤甲素对多种肾脏疾病优越的治疗效果，提供一种肾脏靶向的雷公藤甲素纳米载体，它能够特异性靶向到肾脏部位的同时减少其对于其它正常器官的损害成为了技术难点。
发明内容
本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种能降低雷公藤甲素毒性的肾脏靶向纳米载体的制备方法。
本发明的另一目的在于提供所述方法制备得到的能降低雷公藤甲素毒性的肾脏靶向纳米载体。
本发明的再一目的在于提供所述能降低雷公藤甲素毒性的肾脏靶向纳米载体的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：一种能降低雷公藤甲素毒性的肾脏靶向纳米载体的制备方法，包括如下步骤：
(1)将配体和两亲性的嵌段物溶于二甲基亚砜中，然后加入N,N'-二环己基碳二亚胺和4-二甲氨基吡啶进行反应，透析，冻干，得到配体-嵌段物聚合物；
(2)将步骤(1)中得到的配体-嵌段物聚合物，雷公藤甲素和乳化剂溶于有机溶剂中，接着旋转蒸发去除溶剂，并加入去离子水进行水化，然后在30～50℃水浴条件下搅拌进行沉化，再经离心洗涤后，得到包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体，即所述的能降低雷公藤甲素毒性的肾脏靶向纳米载体。
步骤(1)所述的配体为肾脏靶向性配体；优选为叶酸、壳聚糖、溶菌酶、氨基糖苷和谷胱甘肽中的至少一种；更优选为叶酸。
步骤(1)所述的两亲性的嵌段物为普朗尼克F127、普朗尼克L121、PLA-PEG(聚乳酸-聚乙二醇)、普朗尼克F68和PLGA-PEG(聚乳酸-羟基乙酸共聚物)中的至少一种；优选为普朗尼克F127。
所述的PLA-PEG为分子量低于10000的PLA-PEG。
所述的PLGA-PEG为分子量低于10000的PLGA-PEG。
步骤(1)所述的两亲性的嵌段物，配体，N,N'-二环己基碳二亚胺和4-二甲氨基吡啶的摩尔比为1:1.5:1.5:1.5。
步骤(1)所述的二甲基亚砜的用量优选为按每克(g)配体配比40mL二甲基亚砜计算。
步骤(1)所述的透析为采用截留分子量1000的透析袋进行透析。
步骤(1)所述的透析所用的透析液为去离子水。
步骤(2)所述的乳化剂为普朗尼克P105、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、普朗尼克P123、泊洛沙姆188和聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯中的至少一种；优选为普朗尼克P123或泊洛沙姆188。
所述的聚乙烯醇为分子量低于30000的聚乙烯醇。
所述的聚乙烯吡咯烷酮的K值为13～18。
所述的聚乙二醇为分子量低于12000的聚乙二醇。
步骤(2)所述的配体-嵌段物聚合物、雷公藤甲素和乳化剂的质量比为50～100：1～3：50～100；优选为50～100：2～3：50～100。
步骤(2)中所述的有机溶剂为甲醇、乙醇、乙腈、丙酮、二氯甲烷和四氢呋喃中的一种；优选为甲醇。
步骤(2)中所述的有机溶剂的用量优选为按每毫克(mg)雷公藤甲素配比1.5～5mL有机溶剂计算。
步骤(2)中所述的水优选为去离子水。
步骤(2)中所述的水的添加量优选为按每毫克(mg)雷公藤甲素配比1.5～5mL水计算。
步骤(2)中所述的水化为采用超声或均质的方式进行水化。
所述的超声的条件为：频率40KHz，功率300W，时间5min。
所述的均质的为采用均质机进行均质。
所述的均质的条件为：17000rpm均质2min。
步骤(2)中所述的搅拌的时间优选为3～6h。
一种能降低雷公藤甲素毒性的肾脏靶向纳米载体，通过上述任一项所述的方法制备得到。
所述的能降低雷公藤甲素毒性的肾脏靶向纳米载体在制备治疗肾脏疾病的药物中的应用。
所述的肾脏疾病包括肾炎和慢性异体肾移植肾病等。
所述的肾炎包括狼疮性肾炎、肾小管间质性肾炎和IgA肾病等。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
(1)本发明中将肾脏靶向配体修饰到两亲性嵌段物上，形成配体-嵌段物聚合物；将上述得到的配体-嵌段物聚合物，雷公藤甲素和乳化剂溶于有机溶剂中，除去有机溶剂后，再用去离子水水化，沉化后，经离心洗涤，得到包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体。所得的能降低雷公藤甲素毒性的肾脏靶向纳米载体是利用雷公藤甲素、配体-嵌段物聚合物和乳化剂之间的亲疏水相互作用，从而把雷公藤甲素包裹在嵌段物的脂溶性内部所形成的。所得的包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体尺寸在90nm左右，且能够实现肾脏靶向性和减少雷公藤甲素的毒性。
(2)本发明制备的纳米载体具有暴露在载体表面的肾脏靶向配体，能够将有毒的雷公藤甲素包裹在生物相容性良好的载体内部，从而改善其毒性，并且能够通过配体的介导特异性靶向到肾脏部位，减少雷公藤甲素对正常器官的损害。这对于雷公藤甲素特异性靶向到肾脏实现对肾脏疾病的治疗，同时降低其对肝脏和睾丸的毒性具有重大的意义。
附图说明
图1为实施例1中所得包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体的扫描电镜图。
图2为实施例1中所得包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体粒径随时间变化曲线图。
图3为实施例1中所得的包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体和游离雷公藤甲素与细胞共培养后的细胞存活率图。
图4为实施例1中所得的包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体静脉注射进入小鼠不同时间点(1、6、12、24h)的主要器官荧光成像图。
图5为实施例1中所得的包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体静脉注射进入小鼠后的肝脏H&E染色图。
图6为实施例1中所得的包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体静脉注射进入小鼠后的睾丸H&E染色图。
图7为实施例1中所得的包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体静脉注射进入小鼠后的肾功能指标血肌酐和尿素氮的变化图；其中，图A为肾脏靶向纳米载体静脉注射进入小鼠后的肾功能指标血肌酐的变化图；图B为肾脏靶向纳米载体静脉注射进入小鼠后的肾功能指标尿素氮的变化图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。除非特别说明，下列实施例中采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。下列实施例中未注明具体实验条件的试验方法，通常按照常规实验条件或按照制造厂所建议的实验条件。
实施例1
(1)通过酯化反应将肾脏靶向配体叶酸修饰到普朗尼克F127上，具体为：将叶酸(0.5g)和普朗尼克F127(10g)溶于二甲基亚砜(20mL)，加入0.25g N,N'-二环己基碳二亚胺和4-二甲氨基吡啶(0.15g)，搅拌反应过夜后，反应液用透析袋(透析袋截留分子量MW1000，透析液为去离子水)透析两天，冻干后得到叶酸-普朗尼克F127嵌段物。
(2)将上述步骤(1)中得到的叶酸-普朗尼克F127嵌段物(100mg)，雷公藤甲素(2mg)和乳化剂普朗尼克P123(50mg)溶于甲醇(5mL)中，通过旋蒸除去甲醇后，再用5mL去离子水均质水化(采用均质机均质:17000rpm，2min)，在50℃水浴搅拌6h后，经离心洗涤，得到包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体。
实施例1所得的包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体的扫描电镜图如图1所示，所得的肾脏靶向纳米载体直径在90nm左右，且粒径均一。
实施例2
(1)通过酯化反应将肾脏靶向配体叶酸修饰到普朗尼克F127上，具体为：叶酸(0.5g)和普朗尼克F127(10g)溶于二甲基亚砜(20mL)，加入0.25g N,N'-二环己基碳二亚胺和4-二甲氨基吡啶(0.15g)，搅拌反应过夜后，反应液用透析袋(透析袋截留分子量MW1000，透析液为去离子水)透析两天，冻干后得到叶酸-普朗尼克F127嵌段物。
(2)将上述步骤(1)中得到的叶酸-普朗尼克F127嵌段物(100mg)，雷公藤甲素(2mg)和乳化剂泊洛沙姆188(50mg)溶于甲醇(5mL)中，通过旋蒸除去甲醇后，再用5mL去离子水均质水化(采用均质机均质:17000rpm，2min)，在50℃水浴搅拌3h后，经离心洗涤，得到包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体。
实施例3
(1)通过酯化反应将肾脏靶向配体叶酸修饰到普朗尼克F127上，具体为：叶酸(0.5g)和普朗尼克F127(10g)溶于二甲基亚砜(20mL)，加入0.25g N,N'-二环己基碳二亚胺和4-二甲氨基吡啶(0.15g)，搅拌反应过夜后，反应液用透析袋(透析袋截留分子量MW1000，透析液为去离子水)透析两天，冻干后得到叶酸-普朗尼克F127嵌段物。
(2)将上述步骤(1)中得到的叶酸-普朗尼克F127嵌段物(100mg)，雷公藤甲素(2mg)和乳化剂普朗尼克P123(50mg)溶于甲醇(5mL)中，通过旋蒸除去甲醇后，再用10mL去离子水均质水化(采用均质机均质:17000rpm，2min)，在30℃水浴搅拌6h后，经离心洗涤，得到包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体。
实施例4
(1)通过酯化反应将肾脏靶向配体叶酸修饰到普朗尼克F127上，具体为：叶酸(0.5g)和普朗尼克F127(10g)溶于二甲基亚砜(20mL)，加入0.25g N,N'-二环己基碳二亚胺和4-二甲氨基吡啶(0.15g)，搅拌反应过夜后，反应液用透析袋(透析袋截留分子量MW1000，透析液为去离子水)透析两天，冻干后得到叶酸-普朗尼克F127嵌段物。
(2)将上述步骤(1)中得到的叶酸-普朗尼克F127嵌段物(50mg)，雷公藤甲素(3mg)和乳化剂普朗尼克P123(100mg)溶于甲醇(5mL)中，通过旋蒸除去甲醇后，再用5mL去离子水均质水化(超声5min，300W，40KHz)，在50℃水浴搅拌6h后，经离心洗涤，得到包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体。
效果实施例
对实施例1所得的包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体的性能及效果进行测试：
(1)对包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体进行稳定性的评估
将制备好的包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体分散于10mM(pH 7.4)的PBS缓冲液中，在37℃恒温搅拌状态下搅拌，分布在0,1,3,6,12,24h定点取样。
将取出来的样品超声10min后，用马尔文粒径分析仪测量其粒径，得到粒径随时间变化的曲线如图2所示，由图可知，包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体在24h内的粒径均没有明显的变化，说明了这种纳米载体具有很好的稳定性，这是其能应用于生物体内保持其稳定性从而避免雷公藤甲素对正常组织或器官造成伤害的基础。
(2)对雷公藤甲素的细胞毒性改善测试：
将正常大鼠肾近端肾小管上皮细胞系(NRK-52E，购于美国模式培养物保藏所)注入含有3mL完全培养基的塑料离心管中，在500rpm/min的转速下离心5min后弃去上清液，然后加入新鲜的DMEM培养基，接种至25mL的培养瓶当中，用含有10％(v/v)的胎牛血清的DMEM培养基在37℃和5％(v/v)CO2的条件下培养，每隔24h更换培养基一次，直至80～90％的细胞融合，弃去培养液。用10％(v/v)的PBS缓冲溶液洗涤2次，加入0.7mL的胰蛋白酶-EDTA溶液(0.05％)，在37℃下孵育1min，再加入3mL的10％(v/v)胎牛血清的DMEM培养基，500rpm/min离心5min，分散至10％(v/v)的胎牛血清的DMEM培养基，接种至96孔细胞培养板，培养24h后，再更换无血清培养基培养12h，分别加入终浓度为0、5、10、15、30、60、120、250、500ng/mL的本实施例1所得包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体，以雷公藤甲素为对照，在37℃下培养24h。用PBS缓冲液洗涤2次，每孔加入10μL CCK-8，37℃下培养2h，用酶标仪测定450nm下的吸光度，计算细胞的存活率。
本实施例1所得包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体与细胞共培养后的细胞存活率如图3所示，对于包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体，在雷公藤甲素浓度低于120ng/mL与细胞培养后，仍然均具有80％以上的存活率。而游离的雷公藤甲素在60ng/mL与细胞培养后，存活率就只有50％了，当浓度达到500ng/mL时，其存活率更是降低到了不足25％。说明本发明所得包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体具有很好的生物相容性，同时能够有效地改善雷公藤甲素的细胞毒性。
(3)肾脏靶向性测试：
将包裹荧光染料的肾脏靶向纳米载体分别通过尾静脉注射进入Balb/c小鼠(3～4周，雌性小鼠，购于南方医科大学实验动物中心)当中，在不同的时间点(1、6、12、24h)牺牲小鼠，取心、肝、脾、肺、肾、小肠、脑、胸腺和肌肉等主要器官，用生理盐水清洗后在动物活体荧光成像仪下成像。
包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体打入小鼠体内1、6、12、24h后的成像结果如图4所示，肾脏靶向纳米载体主要富集于肾脏部位，这说明包裹雷公藤甲素的纳米载体具有肾脏靶向性，这为减少雷公藤甲素在其它器官的富集，进而降低其对正常器官的毒性提供了保证。
(4)包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体对肝脏毒性的改善：
将Balb/c小鼠随机分为4组考察其肝脏毒性：对照组(尾静脉注射生理盐水)、雷公藤甲素组(尾静脉注射游离的雷公藤甲素)、肾脏靶向纳米载体组(尾静脉注射肾脏靶向纳米载体，其制备方法同实施例1，区别在于制备过程中不添加雷公藤甲素，下同)和包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体组(尾静脉注射包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体)。每周三次给药，注射相当于0.7mg/kg雷公藤甲素量，即对照组和肾脏靶向纳米载体组注射量为0.7mg/kg，包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体组按照其中含有的雷公藤甲素0.7mg/kg计算(下同)。21天后，牺牲小鼠，取其肝脏，并置于10％中性甲醛当中，在4℃下固定24h后，再进行脱水和石蜡包埋。最后，切片并用苏木素-伊红(H&E)进行染色。具体脱水包埋步骤如下：
1)、75％(v/v)乙醇脱水3次，然后80～100％(v/v)梯度乙醇脱水各一次，每次10min。然后二甲苯清洗两次，每次10min。
2)、用石蜡包埋处理两次，每次50min。
3)、石蜡包埋冷冻2h后，切片(厚2μm)，并在65℃下烘烤1h。二甲苯脱蜡两次，每次30min，梯度乙醇清洗，每次5min。
4)、进行H&E染色：苏木素染色20min，纯水冲洗，1％(v/v)盐酸乙醇分化后，氨水反蓝。纯水和95％(v/v)乙醇分别冲洗一次；伊红染色5min，95％(v/v)乙醇和无水乙醇脱水，二甲苯透明2次后，中性树脂封片。
肝脏切片染色结果如图5所示，游离雷公藤甲素组出现了炎性浸润、空泡化、肿胀坏死的现象，说明出现了比较严重的肝损伤，而肾脏靶向纳米载体组和包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体组的肝脏切片并为出现明显的上述现象，肝脏呈现完整的形态，说明没有明显的肝损伤。这说明了肾脏靶向纳米载体对肝脏没有毒性，呈现了良好的生物相容性。同时也说明了包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体能够显著地改善雷公藤甲素对肝脏的毒性。
(5)包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体对睾丸毒性的改善：
将雄性Balb/c小鼠随机分为4组考察其睾丸毒性：对照组(尾静脉注射生理盐水)、雷公藤甲素组(尾静脉注射游离的雷公藤甲素)、肾脏靶向纳米载体组(尾静脉注射肾脏靶向纳米载体)和包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体组(尾静脉注射包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体)。每周三次给药，注射相当于0.7mg/kg雷公藤甲素量，21天后，牺牲小鼠，取其睾丸，进行H&E染色。
睾丸切片染色结果如图6所示，游离雷公藤甲素组出现了睾丸严重退变，间质组织有***坏死灶的现象，说明出现了严重的***，而肾脏靶向纳米载体组和包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体组的睾丸切片并为出现明显的上述现象，***组织有完整的***细胞，这说明没有出现明显的***。以上结果说明了肾脏靶向纳米载体对睾丸没有毒性，呈现了良好的生物相容性，同时，包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体能够显著地改善雷公藤甲素对睾丸的毒性。
(6)包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体对肾脏毒性的改善：
将Balb/c小鼠随机分为4组考察其肾脏毒性：对照组(尾静脉注射生理盐水)、游离雷公藤甲素组(尾静脉注射游离的雷公藤甲素)、肾脏靶向纳米载体组(尾静脉注射肾脏靶向纳米载体)和包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体组(尾静脉注射包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体)。每周三次给药，注射相当于0.7mg/kg雷公藤甲素量，21天后，牺牲小鼠，收集小鼠血液(全血)，进行肾脏功能指标血肌酐和尿素氮的测量。
结果如图7所示，相对于对照组，注射游离的雷公藤甲素组的血肌酐和尿素氮指标显著增加，说明了造成了比较严重的肾损伤。而纳米载体组和包裹雷公藤甲素的纳米载体组的血肌酐和尿素氮指标都没有明显变化，几乎与对照组持平，这说明纳米载体组和包裹雷公藤甲素的纳米载体组的肾功能没有出现明显的下降，没有造成明显的肾损伤。因此通过将雷公藤甲素包裹进入肾脏靶向的纳米载体中能显著的改善雷公藤甲素对于肝脏，肾脏和睾丸的毒性，将会成为一种潜在的治疗肾脏疾病的载体。
由以上结果表明，本发明所述的肾脏靶向纳米载体其尺寸在90nm左右，具有良好的稳定性，纳米载体表面暴露着具有肾脏靶向能力的配体，并可以成功包裹雷公藤甲素。一方面，肾脏靶向纳米载体可以将雷公藤甲素包裹在内部并且具有良好的稳定性，从而降低其生物毒性。另一方面，靶向配体在纳米载体表面的存在，使纳米载体可以精准的靶向到肾脏，从而大大减少了雷公藤甲素在正常器官的富集，进而能够降低其对于其它器官的毒性。本发明制备的肾脏靶向纳米载体具有生物相容性好，肾脏靶向能力强，有效降低雷公藤甲素毒性的优点。***毒性实验表明，本发明制备的包裹肾雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体可以实现肾脏的特异性靶向富集，从而降低了雷公藤甲素对肝脏，肾脏和睾丸的毒性，将有望成为临床上的一种理想的肾脏靶向纳米载体用于肾脏疾病的治疗。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种能降低雷公藤甲素毒性的肾脏靶向纳米载体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将配体和两亲性的嵌段物溶于二甲基亚砜中，然后加入N,N'-二环己基碳二亚胺和4-二甲氨基吡啶进行反应，透析，冻干，得到配体-嵌段物聚合物；
(2)将步骤(1)中得到的配体-嵌段物聚合物，雷公藤甲素和乳化剂溶于有机溶剂中，接着旋转蒸发去除溶剂，并加入去离子水进行水化，然后在30～50℃水浴条件下搅拌进行沉化，再经离心洗涤后，得到包裹雷公藤甲素的肾脏靶向纳米载体，即所述的能降低雷公藤甲素毒性的肾脏靶向纳米载体。
2.根据权利要求1所述的能降低雷公藤甲素毒性的肾脏靶向纳米载体的制备方法，其特征在于：
步骤(1)所述的配体为叶酸、壳聚糖、溶菌酶、氨基糖苷和谷胱甘肽中的至少一种；
步骤(1)所述的两亲性的嵌段物为普朗尼克F127、普朗尼克L121、PLA-PEG、普朗尼克F68和PLGA-PEG中的至少一种；
步骤(2)所述的乳化剂为普朗尼克P105、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、普朗尼克P123、泊洛沙姆188和聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯中的至少一种。
3.根据权利要求2所述的能降低雷公藤甲素毒性的肾脏靶向纳米载体的制备方法，其特征在于：
步骤(1)所述的配体为叶酸；
步骤(1)所述的两亲性的嵌段物为普朗尼克F127；
步骤(2)所述的乳化剂为普朗尼克P123或泊洛沙姆188。
4.根据权利要求1所述的能降低雷公藤甲素毒性的肾脏靶向纳米载体的制备方法，其特征在于：
步骤(1)所述的两亲性的嵌段物，配体，N,N'-二环己基碳二亚胺和4-二甲氨基吡啶的摩尔比为1:1.5:1.5:1.5；
步骤(2)所述的配体-嵌段物聚合物、雷公藤甲素和乳化剂的质量比为50～100：1～3：50～100。
5.根据权利要求1所述的能降低雷公藤甲素毒性的肾脏靶向纳米载体的制备方法，其特征在于：
步骤(2)中所述的有机溶剂为甲醇、乙醇、乙腈、丙酮、二氯甲烷和四氢呋喃中的一种。
6.根据权利要求1所述的能降低雷公藤甲素毒性的肾脏靶向纳米载体的制备方法，其特征在于：
步骤(1)所述的二甲基亚砜的用量为按每克配体配比40mL二甲基亚砜计算；
步骤(2)中所述的有机溶剂的用量为按每毫克雷公藤甲素配比1.5～5mL有机溶剂计算；
步骤(2)中所述的水的添加量为按每毫克雷公藤甲素配比1.5～5mL水计算。
7.根据权利要求1所述的能降低雷公藤甲素毒性的肾脏靶向纳米载体的制备方法，其特征在于：
步骤(1)所述的透析为采用截留分子量1000的透析袋进行透析，透析所用的透析液为去离子水；
步骤(2)中所述的水化为采用超声或均质的方式进行水化；所述的超声的条件为：频率40KHz，功率300W，时间5min；所述的均质的条件为：17000rpm均质2min；
步骤(2)中所述的搅拌的时间为3～6h。
8.一种能降低雷公藤甲素毒性的肾脏靶向纳米载体，其特征在于：通过权利要求1～7任一项所述的方法制备得到。
9.权利要求8所述的能降低雷公藤甲素毒性的肾脏靶向纳米载体在制备治疗肾脏疾病的药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的能降低雷公藤甲素毒性的肾脏靶向纳米载体在制备治疗肾脏疾病的药物中的应用，其特征在于：
所述的肾脏疾病为肾炎和/或慢性异体肾移植肾病；
所述的肾炎为狼疮性肾炎、肾小管间质性肾炎和/或IgA肾病。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114042043A (zh) * 2021-11-26 2022-02-15 河南中医药大学 一种雷公藤甲素线粒体靶向脂质体及其应用
CN114425045A (zh) * 2022-02-16 2022-05-03 山西医科大学 作用于红内期疟原虫的纳米载体、制剂及其制备方法
CN114569554A (zh) * 2022-03-01 2022-06-03 福建省医学科学研究院 一种肿瘤靶向性雷公藤内酯醇乳液及其制备方法

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