CN109971760B - circ_3234及其在制备鼻咽癌治疗制剂中的应用和治疗制剂 - Google Patents

circ_3234及其在制备鼻咽癌治疗制剂中的应用和治疗制剂 Download PDF

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Abstract

本发明属于肿瘤分子生物学技术领域，具体涉及circ_3234及其在制备鼻咽癌治疗制剂中的应用和治疗制剂。由于siRNA具有良好的基因沉默效果，本发明在确保将鼻咽癌细胞系HONE1、HNE2和CNE2中的circ_3234用siRNA干扰沉默掉后，进行了Transwell小室实验及划痕愈合实验，相对于对照组，siRNA组细胞的侵袭迁移速度明显减慢，即沉默circ_3234抑制了鼻咽癌细胞的侵袭迁移，相应的，我们还构建了过表达circ_3234的载体，在鼻咽癌细胞系HONE1、HNE2和CNE2中过表达circ_3234后，细胞的侵袭迁移速度明显加快。即抑制circ_3234能延缓鼻咽癌扩散转移，具有深远的临床意义和重要的推广应用前景。

Description

circ_3234及其在制备鼻咽癌治疗制剂中的应用和治疗制剂
技术领域
本发明属于肿瘤分子生物学技术领域，具体涉及一种环状RNA circ_3234，以及抑制环状RNA circ_3234表达的试剂和其在制备鼻咽癌治疗制剂中的应用。
背景技术
目前环状RNA(Circular RNA)是个研究热点，circRNA主要来源于蛋白质编码基因的外显子区，也可以由内含子区、UTR区、基因间区、非编码RNA位点及已知转录物的反义位点形成。CircRNA是由前体mRNA(precursor messenger RNA,pre-mRNA) 反向拼接而形成的一类不具有5‘末端帽子和3’末端poly(A)尾巴并以共价键形成环形结构的非编码RNA分子。
CircRNA形成过程可以分为两大类，即外显子环化(exon circularization)和内含子环化(intron circularization)两大机制。Jeck等提出外显子来源的circRNA(exoniccircRNA,ecircRNA)可以分为套索驱动环化(lariat-driven circularization)和内含子配对驱动环化(intron-pairing-driven circularization)两种形成方式，套索驱动环化是外显子 3’端作为剪接供体(splice donor)攻击5’端剪接受体(splice receptor),Alu区共价结合而形成套索结构，套索结构进行内部拼接后切除内含子形成circRNA；内含子配对驱动环化是两个内含子碱基互补配对形成环状结构后，剪除内含子形成circRNA。其实内含子本身也可以环化，可以形成内含子来源circRNA(circular intronic RNA,ciRNA)。CircRNA是由前体mRNA反向拼接而形成的一类不具有5‘末端帽子和3’末端poly(A) 尾巴并以共价键形式形成的封闭环形结构的非编码RNA分子。有着高度的稳定性、保守性、特异性，并且含量高的特点。
CircRNA最早在1976年于RNA病毒中首次发现，随后Hsu MT等人使用电子显微镜技术在猴的肾细胞质中发现了circRNA的存在。近年来越来越多的circRNA被发现，目前为止已知的circRNA数目已经达到三万多个。CircRNA也不再被认为是错误的RNA转录本，而是作为非编码RNA研究中的耀眼之星冉冉升起。发现更多的新型circRNA作为肿瘤诊断和预后的生物标志物及其应用，并能尽早在专利领域得到好的保护，能显著提升我国在该技术领域的国际竞争力。
鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)属于头颈部肿瘤，起源于鼻咽部上皮组织。一般在鼻咽部的后外侧隐窝(罗森缪勒窝，Fossa of Rosenmüller)处发病，此处的鼻咽癌细胞易侵袭邻近的组织和器官。由于鼻咽癌的发生发展是由积累的家族遗传和体细胞遗传突变及表观遗传学突变导致的多阶段复杂基因调控过程，涉及到原癌基因和抑癌基因的激活和沉默、及ncRNA参与的表观遗传学调控等等。所以鼻咽癌发生发展的具体分子机制尚不明确，而且由于肿瘤异质性和个体差异性，传统的放疗联合化疗的疗效不显著。因此通过circRNA探究其与鼻咽癌发生发展机制，进一步为鼻咽癌的诊断，以及控制鼻咽癌增殖、侵袭和转移将是研究的热点。
我们检测到一个长度377bp的circ_3234。通过试验发现该环状RNA与鼻咽癌的发生发展存在关联，有可能作为鼻咽癌诊断标记物，以及治疗的靶点。
发明内容
本发明发现了一个大小377bp的circ_3234，并发现了它与鼻咽癌之间存在的关系，有可能作为鼻咽癌诊断标记物和治疗的靶点。
本发明的首要目的是提供一种新的环状RNA circ_3234，序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明的第二个目的是提供一种抑制环状RNA circ_3234表达的试剂在制备治疗鼻咽癌制剂中的应用，所述的环状RNA circ_3234序列如SEQ ID NO.1所示。
进一步的，所述的抑制环状RNA circ_3234表达的试剂包括但不限于siRNA。
进一步的，所述的siRNA优选如下：
正义链(5'-3')CCUCAGAGCCUGAACUGGCUU
反义链(5'-3')GCCAGUUCAGGCUCUGAGGUU，
但不限于上述具体的siRNA。
进一步的，所述的抑制circ_3234表达的试剂还包括阴性对照：
正义链(5'-3')UUCUCCGAACGUGUCACGUUU
反义链(5'-3')ACGUGACACGUUCGGAGAAUU，
但不限于上述具体的阴性对照。
本发明的第三个目的是提供一种治疗鼻咽癌的制剂，包括抑制环状RNA circ_3234 表达的试剂，所述的环状RNA circ_3234序列如SEQ ID NO.1所示。
进一步的，所述的抑制环状RNA circ_3234表达的试剂包括但不限于siRNA。
进一步的，所述的siRNA优选如下：
正义链(5'-3')CCUCAGAGCCUGAACUGGCUU
反义链(5'-3')GCCAGUUCAGGCUCUGAGGUU，
但不限于上述具体的siRNA。
进一步的，所述的抑制circ_3234表达的试剂还包括阴性对照：
正义链(5'-3')UUCUCCGAACGUGUCACGUUU
反义链(5'-3')ACGUGACACGUUCGGAGAAUU，
但不限于上述具体的阴性对照。
本发明所述的鼻咽癌治疗制剂还包括转染siRNA所需的试剂。
目前，siRNA已发展成为基因功能研究的重要工具。为了探究circ_3234在肿瘤发生发展中的作用，本发明根据circ_3234的拼接位点设计了一对siRNA，利用Hiperfect试剂将siRNA和siNC(对照)瞬时转染到HONE1、HNE2和CNE2细胞系中沉默 circ_3234的表达。转染后继续培养36小时收集细胞，利用实时荧光定量PCR技术检测circ_3234的表达水平以检测siRNA的转染效率，同时检测circ_3234的表达水平，发现设计的siRNA能显著抑制circ_3234的表达水平。
本发明通过大量的试验证实上述结论：即抑制circ_3234表达的试剂能够用于制备鼻咽癌治疗制剂。这些试验包括：体外过表达circ_3234促进鼻咽癌细胞的迁移，体外沉默circ_3234的表达抑制鼻咽癌的迁移；体外过表达circ_3234促进鼻咽癌细胞的侵袭，体外沉默circ_3234抑制鼻咽癌细胞的侵袭。
由于siRNA具有良好的沉默效果。在确保circ_3234被干扰掉后，本发明在沉默了circ_3234的鼻咽癌细胞系HONE1、HNE2和CNE2中进行Transwell小室实验及划痕愈合实验，相对于NC对照组，siRNA组细胞的侵袭迁移速度明显减慢，即沉默circ_3234 抑制了鼻咽癌细胞的侵袭迁移。即抑制circ_3234能延缓鼻咽癌扩散，具有深远的临床意义和重要的推广应用前景。
附图说明
图1为过表达载体图谱。
图2为qRT-PCR检测在鼻咽癌细胞系中circ_3234过表达效果；
qRT-PCR检测在鼻咽癌细胞系HONE1、HNE2和CNE2中circ_3234过表达效果以β-actin作为参照将pcDNA3.1(+)组标准化为1，*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。
图3为qRT-PCR技术检测鼻咽癌细胞系中circ_3234siRNA的沉默效率；
qRT-PCR检测在鼻咽癌细胞系HONE1、HNE2和CNE2中circ_3234siRNA的沉默效率；circ_3234表达水平分析以β-actin作为参照，将NC组标准化为1，ns代表没有意义，*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。
图4为qRT-PCR检测划痕实验细胞中circ_3234过表达效率；
a-c.划痕实验所用鼻咽癌细胞株HONE1、HNE2和CNE2过表达效率用qRT-PCR 实验检测，circ_3234表达水平分析以β-actin作为参照，将pcDNA3.1(+)组标准化为1， *P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。
图5为过表达circ_3234对鼻咽癌细胞HONE1、HNE2和CNE2划痕愈合实验的影响；
a-c.鼻咽癌细胞系HONE1、HNE2和CNE2转染pcDNA3.1(+)空载、pcDNA3.1(+) /circ_3234，待细胞密度达到100％后划痕，于第0,12,24小时观察拍照。
图6为过表达circ_3234的鼻咽癌HONE1、HNE2和CNE2细胞划痕实验统计图；
a-c.每组随机选取6个视野测量划痕宽度,将0小时的划痕宽度标准化为1，作统计图；每个实验重复三次,采用Student's t-test方法统计。*P<0.05, **P<0.01,***P<0.001。
图7为qRT-PCR检测划痕实验细胞中circ_3234干扰效率；；
a-c.划痕实验所用鼻咽癌细胞株HONE1、HNE2和CNE2干扰效率用qRT-PCR实验检测，circ_3234表达水平分析以β-actin作为参照，将NC组标准化为1，*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。
图8为干扰circ_3234对鼻咽癌细胞HONE1、HNE2和CNE2划痕愈合实验的影响；
a-c.鼻咽癌HONE1、HNE2和CNE2细胞转染NC siRNA/circ_3234siRNA，待细胞密度达到100％后划痕，于第0,12,24小时观察拍照。
图9为干扰circ_3234的鼻咽癌HONE1、HNE2和CNE2细胞划痕实验统计图；
a-c.每组随机选取6个视野测量划痕宽度,将0小时的划痕宽度标准化为1，作统计图；每个实验重复三次,采用Student's t-test方法统计。*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。
图10为qRT-PCR检测Transwell小室基质胶侵袭实验中circ_3234的过表达效率；
a-c.Transwell小室基质胶侵袭实验所用鼻咽癌细胞株HONE1、HNE2和CNE2过表达效率用qRT-PCR实验检测，circ_3234表达水平分析以β-actin作为参照，将 pcDNA3.1(+)组标准化为1，*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。
图11为过表达circ_3234对鼻咽癌细胞系HONE1、HNE2和CNE2侵袭能力的影响；
分别过表达circ_3234的HONE1、HNE2和CNE2以及各自的对照组细胞进行Transwell小室基质胶侵袭实验。
图12为过表达circ_3234的Transwell小室基质胶侵袭实验统计图；
每组随机选取3个细胞视野进行细胞计数，作统计图；每个实验重复三次，采用Student's t-test方法统计；以β-actin作为参照，将pcDNA3.1(+)组标准化为1，*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。
图13为qRT-PCR检测Transwell小室基质胶侵袭实验中circ_3234的干扰效率；
a-c.Transwell小室基质胶侵袭实验所用鼻咽癌细胞株HONE1、HNE2和CNE2干扰效率用qRT-PCR实验检测，circ_3234表达水平分析以β-actin作为参照，将NC组标准化为1，*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。
图14为干扰circ_3234对鼻咽癌细胞系HONE1、HNE2和CNE2侵袭能力的影响；
分别干扰circ_3234的HONE1、HNE2和CNE2以及各自的对照组细胞进行 Transwell小室基质胶侵袭实验。
图15为干扰circ_3234的Transwell小室基质胶侵袭实验统计图；
每组随机选取3个细胞视野进行细胞计数，作统计图；每个实验重复三次，采用Student's t-test方法统计；以β-actin作为参照，将NC组标准化为1，*P<0.05, **P<0.01,***P<0.001。
具体实施方式
以下结合具体实施方式旨在进一步说明本发明，而非限制本发明。
本发明所用HONE1、HNE2和CNE2三株鼻咽癌细胞系均为中南大学肿瘤研究所分子遗传实验室所保存。细胞培养条件为：含10％胎牛血清(FBS)和1％双抗(青霉素、链霉素)的RPMI1640液体培养基，37℃、95％湿度、5％CO2浓度的恒温培养箱内贴壁生长。
本发明环状RNA的引物与线性RNA引物的设计不同，其是根据拼接位点两侧设计，在Primer3.0网站上在线设计，最终的引物合成工作，通过发送电子邮件订货，委托擎科生物公司长沙合成部合成。
(1)β-actin
上游引物：5’-TCACCAACTGGGACGACATG-3’，SEQ ID NO.2所示；
下游引物：5’-GTCACCGGAGTCCATCACGAT-3’，SEQ ID NO.3所示。
(2)环状RNA circ_3234实时定量PCR引物
上游引物：5’-CAACAATCAGATGGCACCAG-3’，SEQ ID NO.4所示；
下游引物：5’-AATTCTTCCAAGCCCCTTTG-3’，SEQ ID NO.5所示。
(3)扩增circ_3234全长引物
上游引物：5’-CCCATCGATAACTGGCATCAAATACTCACAAC-3’，SEQ ID NO.6 所示；
下游引物：5’-TAACCGCGGCAGGCTCTGAGGAGAACAG-3’，SEQ ID NO.7所示。
本发明为了特定的敲低环状RNA而不影响它的线性基因表达，根据拼接位点设计siRNA，靶向沉默circ_3234。
circ_3234siRNA序列：
正义链(5'-3')CCUCAGAGCCUGAACUGGCUU，SEQ ID NO.8所示，
反义链(5'-3')GCCAGUUCAGGCUCUGAGGUU，SEQ ID NO.9所示。
阴性对照：
正义链(5'-3')UUCUCCGAACGUGUCACGUUU，SEQ ID NO.10所示，
反义链(5'-3')ACGUGACACGUUCGGAGAAUU，SEQ ID NO.11所示。
本发明试验结果均采用统计学分析：t检验用来评价两组之间的差异。p<0.05用于表示统计学显著性，所有p值均使用双侧检验。统计分析采用SPSS 13.0和Graphpad 5.0 软件进行。
实施例1：在鼻咽癌细胞系中circ_3234过表达效果检测
首先我们选择酶切位点，将circ_3234全长序列放入NEB cutter 2.0在线网站分析，显示Sacll和Clal酶切位点为circ_3234全长序列中不存在的位点，同时在pcDNA3.1质粒载体(购于生工生物工程股份有限公司)中单一存在的DNA限制性内切酶。据此构建过表达载体，见图1。
为了检测circ_3234的成环效率，首先我们将构建的pcDNA3.1/circ_3234真核过表达载体在鼻咽癌细胞中进行表达。把生长状况良好的第三、四代鼻咽癌细胞HONE1、 HNE2和CNE2种到12孔板中，待细胞融合度达到60％-80％时，用脂质体法 lipofectamine 3000把无内毒素质粒pcDNA3.1空载体和pcDNA3.1/circ_3234过表达载体瞬时转染鼻咽癌细胞HONE1、HNE2和CNE2，继续培养到48小时后。收集细胞，利用实时荧光定量PCR技术检测circ_3234的表达水平及成环效率。qPCR结果显示，与pcDNA3.1空质粒组细胞相比，转pcDNA3.1/circ_3234过表达质粒组的细胞中 circ_3234的表达水平显著升高，且在HONE1、HNE2和CNE2细胞系中其表达倍数均在300倍以上，见图2，结果具有统计学意义。
实施例2：在鼻咽癌细胞系中沉默circ_3234表达的效果检测
根据拼接位点设计了circ_3234的siRNA序列，siRNA即一类长度为21-25个核苷酸，能与同源RNA互补结合，特异性降解目的RNA，从而抑制其表达的双链RNA 分子。目前，siRNA已发展成为基因功能研究的重要工具。为了探究circ_3234在肿瘤发生发展中的作用，我们根据circ_3234的拼接位点设计了siRNA，利用Hiperfect试剂将siRNA和siNC(空白对照)瞬时转染到HONE1、HNE2和CNE2细胞系中沉默 circ_3234的表达。转染后继续培养48小时收集细胞，利用实时荧光定量PCR技术检测circ_3234的表达水平以检测siRNA的转染效率，确认转染siRNA后的circ_3234 的表达水平低于转染siNC后circ_3234表达水平的60％。结果见图3。
实施例3：细胞划痕愈合迁移实验：
(1)照细胞台：1000μl/10μl Tip头、高温高压灭菌的D-Hank’s，直尺、1000μl/10μl移液枪、marker笔等，用酒精消毒后再放置在超净台内紫外照射30分钟；
(2)待细胞长至50％～70％左右分别转染siRNA和NC组或者转染质粒；
(3)待细胞长满平铺板底后第二天开始划痕：将10μl枪头比着直尺垂直于6孔板底部干脆快速进行十字或井字划痕，不要倾斜，力度大小一致，以确保划痕宽度尽可能一样；
(4)吸弃培养液，用D-hanks轻轻洗涤3次，尽可能洗掉由于划痕引起的碎片细胞；
(5)加入1％双抗2％胎牛血清的1640培养基；
(6)拍照记录此时的十字旁边划痕宽度，记为0h；
(7)将6孔板放回培养箱培养，间隔12小时取出，拍摄0h时所拍图片的位置，记为12h；
(8)间隔24h时再拍相同位置，直到划痕愈合，整理所有的图片，并进行统计分析。
体外过表达circ_3234促进鼻咽癌细胞的迁移
在确定环状RNAcirc_3234对鼻咽癌细胞的增殖能力有促进作用后，我们又在鼻咽癌细胞系中进行了划痕实验，以验证circ_3234对鼻咽癌细胞系的迁移有没有影响。利用脂质体法lipofectamine 3000把无内毒素质粒pcDNA3.1和pcDNA3.1/has_circ_3234 过表达载体瞬时转染鼻咽癌细胞HONE1、HNE2和CNE2，继续培养到48小时后。收集细胞，利用实时荧光定量PCR技术检测circ_3234的表达水平及成环效率。在确定了circ_3234过表达质粒的过表达良好效果后，我们在鼻咽癌细胞系HONE1、HNE2 和CNE2进行了细胞划痕愈合实验。划痕愈合实验在这些细胞中的多个时间点(HONE1 为0h、12h、24h；HNE2为0h、12h、24h；CNE2为0h、12h、24h)均证实：相对于空载 pcDNA3.1(+)质粒组，pcDNA3.1/circ_3234过表达质粒组细胞的迁移能力明显增强。划痕宽度差异较大,且具有统计学意义。以上结果显示,过表达鼻咽癌细胞系中circ_3234 的表达,能够促进鼻咽癌细胞HONE1、HNE2和CNE2在体外的迁移能力。(结果见图 4,5,6)
体外沉默circ_3234抑制鼻咽癌细胞的迁移
利用Hiperfect试剂将siRNA和NC瞬时转染到HONE1、HNE2和CNE2细胞系中沉默circ_3234的表达。转染后继续培养48小时收集细胞，利用实时荧光定量PCR技术检测circ_3234的表达水平以检测siRNA的转染效率。结果显示，siRNA具有良好的沉默效果。在确保circ_3234被干扰掉后，我们在沉默了circ_3234的鼻咽癌细胞系HONE1、HNE2和CNE2中进行划痕实验，验证其对细胞迁移的影响。划痕愈合实验在这些细胞中的多个时间点(HONE1为0h、12h、24h；HNE2为0h、12h、24h；CNE2 为0h、12h、24h)均证实：相对于NC组，siRNA组细胞的迁移能力明显减弱。划痕宽度差异明显,且具有统计学意义。以上结果显示,沉默鼻咽癌细胞系中circ_3234的表达, 能够抑制鼻咽癌细胞HONE1、HNE2和CNE2在体外的迁移能力。通过正反两个方向验证证明，circ_3234可以促进鼻咽癌细胞的迁移。(结果见图7,8,9)
实施例4：细胞transwell侵袭实验：
(1)基质胶准备：提前一天把冻存于-20℃的BDMatrigel胶置于4℃冰箱融化成液态，把释胶用的tip头、EP管置于-20℃过夜，这样第二天操作时Matrigel胶在铺胶时不会过快凝固；
(2)基质胶稀释：BDMatrigel胶：无血清培基＝1:8，即20μl基质胶加160μl 1640培基轻吹混匀；
(3)将稀释好的基质胶加入transwell小室100μl，再沿边吸出80μl，依次铺好放入37℃培养箱里孵育2-3小时，当看到铺胶层为白色时，表明液体Matrigel胶已呈固态；
(4)消化转染后的实验细胞，用无血清培基洗2遍，然后使用无血清的培基重悬细胞，进行细胞计数，调整细胞浓度为每200μl中20,000个细胞；
(5)向下层小室添加800μl含有20％FBS的1640培养基，放入小室时将24孔板倾斜45°角，以避免放入小室过程中在小室和液面之间产生气泡；
(6)每室加200μl统一计数好的细胞悬液到transwell上室内，将24孔板放回37℃培养箱中，根据细胞状态和细胞侵袭速度，孵育约24～48小时。
(7)取出24孔板，用PBS或者D-hanks洗两遍，4％多聚甲醛浸洗10分钟，用清水洗3遍。
(8)染色：用0.1％的结晶紫滴加到transwell小室的底部，室温安静放置5-10min，用 PBS清洗2-3遍，用棉签小心擦掉小室上面的基质胶；
(9)在24孔板中加入蒸馏水800μl，transwell上室中加入蒸馏水约200μl，然后在倒置显微镜下，进行观测，不同视野拍照，用image J软件进行计数和统计学分析差异的显著性。
体外过表达circ_3234促进鼻咽癌细胞的侵袭
我们在鼻咽癌细胞系HONE1、HNE2和CNE2进行了Transwell小室基质胶侵袭实验，以观察过表达circ_3234对细胞侵袭能力的影响。我们同样利用脂质体法 lipofectamine3000把无内毒素质粒pcDNA3.1和pcDNA3.1/circ_3234过表达载体瞬时转染鼻咽癌细胞HONE1、HNE2和CNE2，继续培养到48小时后。收集细胞，利用实时荧光定量PCR技术检测circ_3234的表达水平及成环效率。在确定了circ_3234过表达质粒的过表达良好效果后，我们将细胞接种到铺基质胶的Transwell小室中，发现过表达质粒组的细胞侵袭到小室下表面的数目明显比空载组多，且三株细胞系结果的趋势一致。随机拍摄3张照片并记录细胞数目，每一细胞系中两组别数据间均有明显差异，且具有统计学意义。以上结果表明，过表达鼻咽癌细胞系中circ_3234的表达, 能够促进鼻咽癌细胞HONE1、HNE2和CNE2在体外的侵袭能力。(结果见图 10,11,12)
体外沉默circ_3234的表达影响鼻咽癌的侵袭
为了探究沉默circ_3234后是否能够逆转过表达circ_3234所带来的表型改变,我们又在两株细胞系中进行了Transwell小室基质胶侵袭实验，利用Hiperfect试剂将 circ_3234siRNA和NC瞬时转染到HONE1、HNE2和CNE2细胞系中沉默circ_3234 的表达。转染后继续培养48小时收集细胞，利用实时荧光定量PCR技术检测circ_3234 的表达水平以检测siRNA的转染效率。结果显示，circ_3234siRNA具有良好的沉默效果。在确保circ_3234被干扰掉后，我们在沉默了circ_3234的鼻咽癌细胞系HONE1、 HNE2和CNE2中进行Transwell小室基质胶侵袭实验，结果显示，siRNA组可在 Transwell小室下表面观察到的肿瘤细胞数目明显少于NC组，且两株细胞系结果的趋势一致。随机拍摄6张照片并记录细胞数目，每一细胞系中两组别数据间均有明显差异，且具有统计学意义。以上结果表明，沉默鼻咽癌细胞系中circ_3234的表达,能够抑制鼻咽癌细胞HONE1、HNE2和CNE2在体外的侵袭能力。通过正反两个方向证明，环状 RNAcirc_3234能够促进鼻咽癌细胞的侵袭。(结果见图13,14,15)。
序列表
<110> 中南大学
<120> circ_3234及其在制备鼻咽癌治疗制剂中的应用和治疗制剂
<160> 11
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 377
<212> RNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 1
agcauugauc ugguagccuu gcuccagaag ccuguuccuc acagucaagc cucagaagcc 60
aacuccuuug aaacuuccca acagcagggc uuuggccaag cccuugucuu cacaaauucg 120
caacacaaca aucagauggc accagggacu ggcagcucca cugccgucaa cuccuguucu 180
ccucagagcc ugaacuggca ucaaauacuc acaacauagc ucaggaucug ucaaacaaaa 240
guucuuaugg acucaaaggg gcuuggaaga auucugugga agaguggaca acagaagacu 300
ggacugaaga ucuuucugaa acaaaggucu ucacugccuc aucugcucca gcagagaauc 360
acaucuuacc ugggcaa 377
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 未知(Unknown)
<400> 2
tcaccaactg ggacgacatg 20
<210> 3
<211> 21
<212> DNA
<213> 未知(Unknown)
<400> 3
gtcaccggag tccatcacga t 21
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 未知(Unknown)
<400> 4
caacaatcag atggcaccag 20
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> 未知(Unknown)
<400> 5
aattcttcca agcccctttg 20
<210> 6
<211> 32
<212> DNA
<213> 未知(Unknown)
<400> 6
cccatcgata actggcatca aatactcaca ac 32
<210> 7
<211> 28
<212> DNA
<213> 未知(Unknown)
<400> 7
taaccgcggc aggctctgag gagaacag 28
<210> 8
<211> 21
<212> RNA
<213> 未知(Unknown)
<400> 8
ccucagagcc ugaacuggcu u 21
<210> 9
<211> 21
<212> RNA
<213> 未知(Unknown)
<400> 9
gccaguucag gcucugaggu u 21
<210> 10
<211> 21
<212> RNA
<213> 未知(Unknown)
<400> 10
uucuccgaac gugucacguu u 21
<210> 11
<211> 21
<212> RNA
<213> 未知(Unknown)
<400> 11
acgugacacg uucggagaau u 21

Claims (4)

1.抑制环状RNA circ_3234表达的试剂在制备治疗鼻咽癌制剂中的应用，所述的环状RNA circ_3234序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的抑制环状RNA circ_3234表达的试剂包括siRNA。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的siRNA如下：
正义链(5'-3')CCUCAGAGCCUGAACUGGCUU
反义链(5'-3')GCCAGUUCAGGCUCUGAGGUU。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的抑制circ_3234表达的试剂还包括阴性对照：
正义链(5'-3')UUCUCCGAACGUGUCACGUUU
反义链(5'-3')ACGUGACACGUUCGGAGAAUU。
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