CN109943551A - 一种脂肪酶组合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种脂肪酶组合物及其应用，属于酶工程技术领域。本发明的脂肪酶组合物由来自铜绿假单胞菌的脂肪酶和来自疏绵状嗜热丝孢菌的脂肪酶组成，按蛋白质含量，具体组成如下：铜绿假单胞菌的脂肪酶25％～50％、疏绵状嗜热丝孢菌的脂肪酶50％～75％。本发明的脂肪酶组合物对催化油脂的水解反应和酯化反应具有协同增效作用，能够快速水解甘油三酯、加快酯化初始反应速度，反应过程更平缓、波动少，反应终了时能够生成更多的酯化产物，降低了酶制剂用量，有效节省反应时间和生产成本，在油脂化工、饲料添加剂和洗涤剂等领域中具有优异的推广应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及酶工程技术领域，具体涉及一种脂肪酶组合物及其应用。
背景技术
酶制剂作为生物催化剂，具有高度的专一性和特异性。酶制剂的本质是蛋白质，它的催化功能和特异性是由蛋白质的高级结构决定的。由长链氨基酸组成的蛋白质，由于不同氨基酸残基所具有的不同基团极性不同，例如，由于分子间的氢键、范德华力、离子作用力及有时形成二硫键等共价键，其在细胞内的经过折叠和修饰，在这些分子间作用力的共同作用下最终形成具有功能性的高级结构。经过折叠的酶蛋白往往具有至少一个催化反应的活性中心和一个捕捉反应底物的结合结构。结合结构决定了酶蛋白对底物的亲和力，而反应中心是真正催化反应发生的位置。
由于不同酶蛋白的一级结构(氨基酸序列)和高级结构(不同的折叠方式) 的不同，不同的蛋白酶具有不同的反应中心和结合中心。这也就是不同的酶制剂高度的转一性和高效性的原因。酶制剂在催化生化反应的过程中，由于底物的复杂性，往往需要复合以达到效果。
脂肪酶是重要的工业酶制剂品种之一，可以催化解脂、酯交换、酯合成等反应，广泛应用于油脂加工、食品、医药、日化等工业。在现有已经发现的脂肪酶中，作用于甘油三脂的脂肪酶分为脂肪酶和酯酶。二者区别在于它们所作用的脂肪酸链长度不一样：酯酶作用于短链脂肪酸，而脂肪酶作用于长链脂肪酸。酯酶和脂肪酶的结合中心不一样，所以对不同脂肪酸的亲和力不同。
与一般酶结构相比，脂肪酶具有以下特点：
1)界面激活：当底物以单体形式溶解在水中时脂肪酶不表现催化活力或者活力低，而底物浓度超过溶解度而以聚集状态出现(即界面出现)时，脂肪酶的活力急剧提升。脂肪酶的底物以不溶于水的长链脂肪酸甘油酯为主，其催化动力学遵循“界面激活”的规律。
2)“盖子结构”：脂肪酶的活性中心被表面的一段肽链覆盖，底物无法直接进入。因此脂肪酶要行使催化功能需要经历一个构象变化，暴露在闭合结构中覆盖在催化位点上方的肽段，这段肽链被人们形象地称为脂肪酶的“盖子”结构。大多数脂肪酶的盖子结构由一个或多个两亲性α-螺旋结构构成，盖子的疏水区与疏水的催化口袋相互作用，亲水部分则暴露在蛋白表面，与极性的溶剂分子相互作用，稳定酶的构象。当脂肪酶的盖子打开后，盖子的疏水氨基酸暴露，对界面吸附和底物的结合起着重要作用。因此，盖子结构中的特定氨基酸排布和两亲性对脂肪酶的底物选择性和催化活力有着重要意义。
由于目前发现的脂肪酶活性较低，所以需要开发能够提高酶活性的复合脂肪酶组合物。目前对于脂肪酶配伍的文献和专利比较少，也相对简单，往往只是根据最基础的最适pH、最适温度等进行复合，很少从其结构与催化底物的亲和力和活性入手配伍。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种脂肪酶组合物及其应用，该脂肪酶组合物能够加快初始反应速度，快速水解甘油三脂，反应终了时能够生成更多的酯化产物，大大降低了酶制剂用量，有效节省反应时间。
为解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：
一种脂肪酶组合物，所述脂肪酶组合物由来自铜绿假单胞菌的脂肪酶和来自疏绵状嗜热丝孢菌的脂肪酶组成。
作为本发明优选的实施方式，所述脂肪酶组合物是由以下按质量百分数计的成分组成的：铜绿假单胞菌的脂肪酶25％～50％、疏绵状嗜热丝孢菌的脂肪酶 50％～75％。
作为本发明优选的实施方式，所述脂肪酶组合物是由以下按质量百分数计的成分组成的：铜绿假单胞菌的脂肪酶50％、疏绵状嗜热丝孢菌的脂肪酶50％。
本发明该提供了如上所述的脂肪酶组合物在酯化反应的应用。
作为本发明优选的实施方式，所述酯化反应的反应底物为植物油、动物油、餐厨废弃油脂、脱臭馏出物、酸化油中的一种；所述酯化反应的酰基供体为甲醇、乙醇、甘油中的一种；所述酯化反应的反应产物为脂肪酸甲酯、甘油、沥青、维生素E、甾醇中的一种。
本发明还提供了一种脂肪酸甲酯的制备方法，其是使用如上所述的脂肪酶组合物制备脂肪酸甲酯，具体步骤如下：
1)取餐厨废弃油脂或植物油脱臭馏出物置于反应装置中，调节pH至5～6.5，搅拌均匀备用；
2)按质量比称取0.1％～0.6％的脂肪酶组合物加入纯净水或自来水中，混合均匀，再加入步骤1)中的大豆油脱臭馏出物中，继续反应；
3)反应过程中多次加入1.5～2当量的甲醇，以10～300r/min的转速继续搅拌反应2～24h，反应完毕后，取油样，制得脂肪酸甲酯。
作为本发明优选的实施方式，所述步骤1)还包括加入碱液的步骤，所述碱液为0-560ppm的NaOH。碱液的加入形成少量皂，从而创造了更大的水油界面，使得脂肪酶能在水油界面催化酯化或水解反应。
作为本发明优选的实施方式，所述步骤3)中取油样前，通过以 3000～12000r/min的转速离心或静置6～24h使油样分层。
作为本发明优选的实施方式，所述步骤1)中反应的温度为30～45℃；反应开始前体系中水分总水分含量为1.5％-10％。
本发明还提供了如上所述的脂肪酶组合物在制备饲料添加剂、洗涤剂中的应用。
相比现有技术，本发明的有益效果在于：
本发明的脂肪酶组合物通过将来源于铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)的脂肪酶(以下简称为PAL)和来源于疏绵状嗜热丝孢菌 (Thermomyces lanuginosus)的脂肪酶(以下简称为TLL)组合使用，对催化油脂的水解反应和酯化反映具有协同增效作用，同样蛋白添加量的脂肪酶组合物水解油脂酶活超过单个酶同样剂量的20％以上，能够在反应开始时快速水解甘油三脂得到游离脂肪酸，从而有效加快初始反应速度，反应过程更平缓、波动少，反应终了时能够生成更多的如脂肪酸甲酯、乙酯等酯化产物，使得脂肪酶组合物在酶活、水解效率、酯化催化效率、饲料添加剂应用、洗涤剂应用等方面出现1+1>2的协同作用，可以节约生产时的反应时间或者反应中酶制剂的添加量，从而降低企业的生产成本，在油脂化工行业、医药中间体合成、洗涤剂、饲料添加剂、生物柴油等行业中具有很好的推广应用价值。
在同样的蛋白添加量情况下，酶活的提高在20％以上。酶活作为酶制剂的出厂标准，测定酶活的提高能够为企业节约蛋白添加量从而节约成本。
附图说明
图1为本发明所述的来源于铜绿假单胞菌的脂肪酶PAL的蛋白结构示意图；
图2为本发明所述的来源于疏绵状嗜热丝孢菌的脂肪酶TLL的蛋白结构示意图；
图3为本发明所述的脂肪酶组合物三次测定酶活的坐标图；
图4为不同含量的脂肪酶制得的脂肪酸甲酯的酸价对比图；
图5为反应时间为6h时各组的酸价对比图；
图6为反应时间为8h时各组的酸价对比图；
图7为本发明的脂肪酶组合物应用于洗涤剂的油渍去除率对比图；
图8为本发明的脂肪酶组合物应用于饲料的水解效率对比图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细说明。
一种脂肪酶组合物，该脂肪酶组合物由来自铜绿假单胞菌的脂肪酶PAL和来自疏绵状嗜热丝孢菌的脂肪酶TTL组成。优选地，本发明的脂肪酶组合物是由以下按蛋白质量百分数计的成分组成的：铜绿假单胞菌的脂肪酶25％～50％、疏绵状嗜热丝孢菌的脂肪酶50％～75％。更优选地，所述脂肪酶组合物是由以下按质量百分数计的成分组成的：铜绿假单胞菌的脂肪酶50％、疏绵状嗜热丝孢菌的脂肪酶50％。优选地，本发明所选用的脂肪酶PAL来自禾本公司的生物柴油专用酶，脂肪酶TTL来自诺维信公司生产的Eversa Transform1.0和Eversa Transform 2.0。
脂肪酶PAL和脂肪酶TLL的蛋白结构分别如图1和图2所示，以上两种脂肪酶均具有脂肪酶典型的活性中心盖子结构，但其盖子和活性中心的“沟”状结构的不同使其具有不同的催化活性和特异性。在酯化反应中，PAL开始催化甘油三脂水解速度很快，但反应接近终了时酯化反应能力稍差；TLL开始水解能力稍弱、反应较慢，而最终酯化能力强，能生成更多的酯化产物。本发明通过将PAL和TLL组合使用，能够有效加快初始反应速度，快速水解甘油三脂，反应终了时能够生成更多的酯化产物，使得脂肪酶组合物在酶活、水解效率、酯化催化效率、饲料添加剂应用、洗涤剂应用等方面出现1+1>2的协同作用，可以节约生产时的反应时间或者反应中酶制剂的添加量，从而降低企业的生产成本，在油脂化工行业、医药中间体合成、洗涤剂、饲料添加剂、生物柴油等行业中具有很好的推广应用价值。
本发明该提供了如上所述的脂肪酶组合物在酯化反应的应用。具体地，所述酯化反应的反应底物为植物油、动物油、餐厨废弃油脂、脱臭馏出物、酸化油中的一种；所述酯化反应的酰基供体为甲醇、乙醇、甘油中的一种；所述酯化反应的反应产物为脂肪酸甲酯、甘油、沥青、维生素E、甾醇中的一种。本发明还提供了如上所述的脂肪酶组合物在制备饲料添加剂、洗涤剂中的应用。本发明的脂肪酶组合物应用于酯化反应或水解反应时的反应温度为30～45℃，酶的添加量为0.1％及以上(质量比)；应用于洗涤剂时，反应温度为15～40℃。
本发明还提供了一种脂肪酸甲酯的制备方法，其是使用如上所述的脂肪酶组合物制备脂肪酸甲酯，具体步骤如下：
1)取餐厨废弃油脂或植物油脱臭馏出物置于反应装置中，加入碱液，调节 pH至5～6.5，在30～45℃下搅拌均匀备用；其中，碱液为0-560ppm的NaOH；
2)按质量比称取0.1％～0.6％的脂肪酶组合物加入纯净水或自来水中，混合均匀，再加入步骤1)中的大豆油脱臭馏出物中，继续反应；
3)反应过程中多次加入1.5～2当量的甲醇，以10～300r/min的转速继续搅拌反应2～24h，反应完毕后，通过以3000～12000r/min的转速离心或静置6～24h 使油样分层，取油样，制得脂肪酸甲酯。
实施例1：
一种脂肪酶组合物，该脂肪酶组合物由以下按质量百分数计的成分组成的：铜绿假单胞菌的脂肪酶75％、疏绵状嗜热丝孢菌的脂肪酶25％。
一种脂肪酸甲酯的制备方法，其是使用如上所述的脂肪酶组合物制备脂肪酸甲酯，具体步骤如下：
1)取餐厨废弃油脂置于三角瓶中，加入240-560ppm的碱液NaOH调节pH 至5～6，于温度为30℃的摇床中摇匀备用；
2)取质量比为0.3％的脂肪酶组合物加入纯净水中，混合均匀，再加入步骤 1)中的大豆油脱臭馏出物中，置于摇床中反应；
3)反应前3h分多次加入1.5当量的甲醇，以300r/min的转速离心反应24h， 0h时添加0.25个当量的甲醇，1h时添加0.25个当量的甲醇，2h添加0.5个当量的甲醇，3h时添加0.5当量的甲醇；反应完毕后，以10000r/min的转速离心后分层取油样，制得脂肪酸甲酯。
实施例2：
一种脂肪酶组合物，该脂肪酶组合物由以下按蛋白质量百分数计的成分组成的：铜绿假单胞菌的脂肪酶50％、疏绵状嗜热丝孢菌的脂肪酶50％。
一种脂肪酸甲酯的制备方法，其是使用如上所述的脂肪酶组合物制备脂肪酸甲酯，具体步骤如下：
1)取大豆油脱臭馏出物置于带有搅拌桨的容积为6立方米的反应釜内，加入200-300ppm的碱液NaOH调节pH至5～6，在适当搅拌下，于温度为38℃备用；
2)取质量比为0.2％的脂肪酶组合物加入自来水中，混合均匀，再加入步骤 1)中的大豆油脱臭馏出物中，调节整个反应体系水分含量为3％，置于反应釜中反应；
3)反应8h内流加1.5当量的甲醇，以50r/min的转速离心反应8h；反应完毕后10000rpm离心分层，制得脂肪酸甲酯。
实施例3：
一种脂肪酶组合物，该脂肪酶组合物由以下按质量百分数计的成分组成的：铜绿假单胞菌的脂肪酶50％、疏绵状嗜热丝孢菌的脂肪酶50％。
一种脂肪酸甲酯的制备方法，其是使用如上所述的脂肪酶组合物制备脂肪酸甲酯，具体步骤如下：
1)取酸化油置于三角瓶中，加入240-560ppm的碱液NaOH调节pH至5～6，于温度为36℃的摇床中摇匀备用；
2)取质量比为0.3％的脂肪酶组合物加入纯净水中，混合均匀，再加入步骤 1)中的大豆油脱臭馏出物中，置于摇床中反应；
3)反应前3h分多次加入1.5当量的甲醇，以300r/min的转速离心反应24h， 0h时添加0.25个当量的甲醇，1h时添加0.25个当量的甲醇，2h添加0.5个当量的甲醇，3h时添加0.5当量的甲醇；反应完毕后，静置24小时，制得脂肪酸甲酯。
实施例4：
一种脂肪酶组合物，该脂肪酶组合物由以下按质量百分数计的成分组成的：铜绿假单胞菌的脂肪酶25％、疏绵状嗜热丝孢菌的脂肪酶75％。
一种脂肪酸甲酯的制备方法，其是使用如上所述的脂肪酶组合物制备脂肪酸甲酯，具体步骤如下：
1)取大豆油置于三角瓶中，加入240-560ppm的碱液NaOH调节pH至5～6，于温度为40℃的摇床中摇匀备用；
2)取质量比为0.3％的脂肪酶组合物加入纯净水中，混合均匀，再加入步骤 1)中的大豆油脱臭馏出物中，置于摇床中反应；
3)反应前3h分多次加入1.5当量的乙醇，以300r/min的转速离心反应24h， 0h时添加0.25个当量的乙醇，1h时添加0.25个当量的乙醇，2h添加0.5个当量的甲醇，3h时添加0.5当量的乙醇；反应完毕后，以3000r/min的转速离心后取油样，制得脂肪酸乙酯＝。
对比例1：
一种脂肪酸甲酯的制备方法，其是使用脂肪酶PAL制备脂肪酸甲酯，具体步骤如下：
1)取大豆油脱臭馏出物置于三角瓶中，加入240-560ppm的碱液NaOH调节pH至5～6，于温度为36℃的摇床中摇匀备用；
2)取质量比为0.3％的脂肪酶组合物加入纯净水中，混合均匀，再加入步骤 1)中的大豆油脱臭馏出物中，置于摇床中反应；
3)反应前3h分多次加入1.5当量的甲醇，以300r/min的转速离心反应24h， 0h时添加0.25个当量的甲醇，1h时添加0.25个当量的甲醇，2h添加0.5个当量的甲醇，3h时添加0.5当量的甲醇；反应完毕后，以5000r/min的转速离心后取油样，制得脂肪酸甲酯。
对比例2：
一种脂肪酸甲酯的制备方法，其是使用脂肪酶TTL制备脂肪酸甲酯，具体步骤如下：
1)取大豆油脱臭馏出物置于三角瓶中，加入240-560ppm的碱液NaOH调节pH至5～6，于温度为36℃的摇床中摇匀备用；
2)取质量比为0.3％的脂肪酶TTL加入纯净水中，混合均匀，再加入步骤 1)中的大豆油脱臭馏出物中，置于摇床中反应；
3)反应前3h分多次加入1.5当量的甲醇，以300r/min的转速离心反应24h， 0h时添加0.25个当量的甲醇，1h时添加0.25个当量的甲醇，2h添加0.5个当量的甲醇，3h时添加0.5当量的甲醇；反应完毕后，静置8小时，制得脂肪酸甲酯。
一、酶活测定
参照国标法测定本发明脂肪酶组合物的酶活，结果如图3所示。由图3可知，本发明的脂肪酶组合物的酶活分别超过理论值40％、23％和14％，(注：理论值为单个酶按照其在组合物中添加比例计算出的酶活)因此来自铜绿假单胞菌的脂肪酶PAL和来自疏绵状嗜热丝孢菌的脂肪酶TTL组合使用，具有显著的协同效应。
二、脂肪酸甲酯的酸价测定
对实施例1～3和对比例1～2制备过程中的脂肪酸甲酯进行酸价测定，测定方法参照GB5009.229-2016，具体方法如下：
分别精确称取各组于0、1、2、3、4、6、8h反应时间的1g平行油样于250ml 三角瓶中，各加入20ml石油醚-无水乙醇(混合体积比为2：1)，充分摇匀。然后加入2滴酚酞指示剂(10g/L，即10g酚酞加入1000ml95％乙醇)，滴加 0.05mol/L KOH标准溶液，直到溶液呈淡红色，并经过30秒后不褪色为终点。酸价计算公式如下：
酸价(mgKOH/g)＝(V×M×56.11)/W
式中，V为滴定KOH标准溶液所需的体积，单位为ml；M为KOH标准溶液的浓度，单位为mol/L；W为称取油样的质量，单位g。
分别测定记录各组于，实验结果如表1和图4所示。
表1 不同含量的脂肪酶制得的脂肪酸甲酯的酸价
| 时间 | 100％PAL | 75％PAL+25％TTL | 50％PAL+50％TTL | 25％PAL+75％TTL | 100％TTL |
| 0h | 29.2840 | 29.3958 | 30.6253 | 30.6812 | 31.2121 |
| 1h | 29.5914 | 27.4957 | 28.6413 | 28.7811 | 32.1063 |
| 2h | 24.9529 | 28.9767 | 27.1324 | 27.5516 | 25.4279 |
| 3h | 23.4160 | 23.1925 | 22.9131 | 23.6675 | 26.7971 |
| 4h | 17.0451 | 18.5819 | 17.2407 | 17.9952 | 22.6895 |
| 6h | 10.5100 | 12.0154 | 6.5107 | 8.9417 | 12.6860 |
| 8h | 7.2300 | 6.0077 | 5.0297 | 5.0297 | 5.5886 |
如表1和图4所示，单独添加PAL的对比例1初期反应速度快，但反应末期(6～8h)催化酯化反应的能力下降，不能进一步降低酸价；单独添加TLL的对比例2反应速度较慢，但最终能减低酸价；而添加了本发明的脂肪酶组合物的实施例1～3，能够有效加快初始反应速度，快速水解甘油三脂，又能降低最终酸价，反应终了时能够生成更多的酯化产物，由此可见，添加本发明的脂肪酶组合物能够节约2个小时的反应时间，对生产的实际意义巨大。
如图5所示，反应6h时各组的酸价从低到高的顺序依次是：实施例2 (50％PAL+50％TTL)、实施例3(25％PAL+75％TTL)，对比例1(100％PAL)，实施例1(75％PAL+25％TTL)，对比例2(100％TTL)。如图6所示，反应8h 时各组的酸价从低到高的顺序依次是：实施例2(50％PAL+50％TTL)，实施例3 (25％PAL+75％TTL)，对比例2(100％TTL)，实施例1(75％PAL+25％TTL)，对比例1(100％PAL)。由此可见，两个脂肪酶的最佳配比是50％PAL+50％TTL，脂肪酶PAL的优选配比范围是25％～50％，脂肪酶TTL的优选配比范围是 50％～75％时为最佳，以上比例均为蛋白质的添加量。
三、脂肪酶组合物应用于洗涤剂的效果验证
将本发明的脂肪酶组合物(PAL+TTL)、PAL、TTL分别按照常规方法制成含酶洗涤剂，采用各组洗涤剂洗涤含有橄榄油污渍的污布，分别测定油渍去除率，结果如表2和图7所示。
具体测定方法如下：
1、用100mg/ml溶于苯的橄榄油溶液滴在棉布上制成污布；
2、将污布放入准备好的含脂肪酶的洗涤剂中在37℃下以100rpm转速摇瓶 30分钟；冲洗后风干污布；
3、用石油醚提取污布并测量剩余的橄榄油量，计算污布上橄榄油去除率。
表2含有不同含量脂肪酶的洗涤剂的油渍去除率
| 酶添加量 | PAL | PAL+TLL | TLL |
| 0.10％ | 49％ | 51％ | 51％ |
| 0.20％ | 57％ | 62％ | 57％ |
| 0.30％ | 63％ | 68％ | 64％ |
| 0.40％ | 68％ | 73％ | 69％ |
| 0.50％ | 70％ | 75％ | 70％ |
如表2和图7所示，添加了本发明的脂肪酶组合物的洗涤剂在不同酶添加量中的油渍去除率均优于单独添加PAL脂肪酶或TTL脂肪酶的油渍去除率，由此可见，本发明的脂肪酶组合物协同增强了洗涤剂的油渍去除效率。
四、脂肪酶组合物应用于饲料的效果体外验证
模拟动物单胃肠道生理条件，在棕榈油中添加10％的脂肪酶进行水解反应，反应条件如下：pH值为7.5，反应温度为37℃，水解时间为2h；比较PAL，PAL+TTL，TTL的棕榈油的水解作用，结果如图8所示。由图8可知，体外模拟消化实验，本发明的脂肪酶组合物的水解效率可以提高到123％。
综上所述，本发明的脂肪酶组合物通过将来源于铜绿假单胞菌的脂肪酶(和来源于疏绵状嗜热丝孢菌的脂肪酶组合使用，能够有效加快初始反应速度，快速水解甘油三脂，反应终了时能够生成更多的酯化产物，使得脂肪酶组合物在酶活、水解效率、酯化催化效率、饲料添加剂应用、洗涤剂应用等方面出现1+1>2 的协同作用，可以节约生产时的反应时间或者反应中酶制剂的添加量，从而降低企业的生产成本，在油脂化工行业、医药中间体合成、洗涤剂、饲料添加剂、生物柴油等行业中具有很好的推广应用价值。
上述实施方式仅为本发明的优选实施方式，不能以此来限定本发明保护的范围，本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。
Claims (10)
1.一种脂肪酶组合物，其特征在于：所述脂肪酶组合物由来自铜绿假单胞菌的脂肪酶和来自疏绵状嗜热丝孢菌的脂肪酶组成。
2.根据权利要求1所述的脂肪酶组合物，其特征在于：所述脂肪酶组合物是由以下按质量百分数计的成分组成的：铜绿假单胞菌的脂肪酶25％～50％、疏绵状嗜热丝孢菌的脂肪酶50％～75％。
3.根据权利要求1所述的脂肪酶组合物，其特征在于：所述脂肪酶组合物是由以下按质量百分数计的成分组成的：铜绿假单胞菌的脂肪酶50％、疏绵状嗜热丝孢菌的脂肪酶50％。
4.如权利要求1所述的脂肪酶组合物在酯化反应的应用。
5.根据权利要求4所述的脂肪酶组合物在酯化反应的应用，其特征在于：所述酯化反应的反应底物为植物油、动物油、餐厨废弃油脂、脱臭馏出物、酸化油中的一种；所述酯化反应的酰基供体为甲醇、乙醇、甘油中的一种；所述酯化反应的反应产物为脂肪酸甲酯、甘油、沥青、维生素E、甾醇中的一种。
6.一种脂肪酸甲酯的制备方法，其特征在于：使用如权利要求1所述的脂肪酶组合物制备脂肪酸甲酯，具体步骤如下：
1)取餐厨废弃油脂或植物油脱臭馏出物置于反应装置中，调节pH至5～6.5，搅拌均匀备用；
2)按质量比称取0.1％～0.6％的脂肪酶组合物加入纯净水或自来水中，混合均匀，再加入步骤1)中的大豆油脱臭馏出物中，继续反应；
3)反应过程中多次加入1.5～2当量的甲醇，以10～300r/min的转速继续搅拌反应2～24h，反应完毕后，取油样，制得脂肪酸甲酯。
7.根据权利要求6所述的脂肪酸甲酯的制备方法，其特征在于：所述步骤1)还包括加入碱液的步骤，所述碱液为0-560ppm的NaOH。
8.根据权利要求6所述的脂肪酸甲酯的制备方法，其特征在于：所述步骤3)中取油样前，通过以3000～12000r/min的转速离心或静置6～24h使油样分层。
9.根据权利要求6所述的脂肪酸甲酯的制备方法，其特征在于：所述步骤1)中反应的温度为30～45℃；反应开始前体系中水分总水分含量为1.5％-10％。
10.根据权利要求1所述的脂肪酶组合物在制备饲料添加剂、洗涤剂中的应用。
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