CN109939211B - 治疗鸡大肠杆菌病的中兽药制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种治疗鸡大肠杆菌病的中兽药制剂，该中兽药制剂包括如下重量份数配比的中药材：丁香10‑20份、厚朴20‑35份、菩提花10‑20、浮萍25‑50份、干姜10‑15份。本发明处方药性温和，健脾化湿，通阳利水，且抗菌效果好。本发明还提供了一种中兽药制剂的制备方法，它有效提高厚朴酚含量，防止挥发油的流失。通过三次煎煮，在保持本处方药效最佳状态下将药中的有效成分提取最多。

Description

治疗鸡大肠杆菌病的中兽药制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及用于家禽的中兽药领域，具体的是一种治疗鸡大肠杆菌病的中兽药制剂及其制备方法。

背景技术

鸡大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌引起的各种鸡的急性、慢性细菌性传染病，各个品种和各年龄的鸡均可发生。近年来，随着养殖业不断向规模化发展，许多养殖户盲目地增加养殖量，造成养殖环境恶化，使大肠杆菌病呈现流行上升趋势，给养殖生产造成了巨大的经济损失。鸡大肠杆菌病作为危害养鸡业发展的重要细菌病，在防治中普遍存在以下几方面的阻碍：一、抗生素耐药；二、药残危害食品安全；三、血清型多，疫苗防治难。因此，寻找一种安全有效，无耐药性，使用方便的抗鸡大肠杆菌病药物在养鸡业中至关重要。

对于鸡大肠杆菌病的起因，中兽医认为鸡大肠杆菌病为湿邪致病，热邪伤肝，热邪侵害心脏。《本草纲目卷·四十八·禽部·鸡》曰“鸡卵生而地产，羽不能飞，虽为阳精，实属风木，是阳中之阴也”。鸡的生理特点为阳中之阴，喜燥而恶湿，常为卫阳不足，肺气虚弱。鸡的代谢方面一般体温较高，心率快，呼吸快，而现在的养殖场多属于封闭环境，温度高湿度大，故鸡以湿热证居多。

临床剖检多数可见尿酸盐沉积的现象，心肝等器官出现水肿现象。水肿日久，瘀血阻滞，湿邪导致脾胃失和，脾气不升，胃气不降，治疗时必须要健脾和胃，消除水肿。故健脾化湿，通阳利水，化气行水为治疗鸡大肠杆菌病时用药的关键。

临床上常用的中兽医处方重视抗菌，多数采用大苦大寒之药，且用药量大，处方组份多，不仅影响动物机体健康，降低药效，更延误了最佳治疗时期。根据体外抑菌试验，筛选使用大苦大寒类清热类中药(如穿心莲、黄连等)进行治疗，易伤脾胃，出现胃脘坠胀，大便自利不禁而严重影响治疗效果。

发明内容

为了解决现有的中兽药处方采用大苦大寒类清热类中药，造成严重的副作用，本发明的目的是提供一种药性温和，健脾化湿，通阳利水，且抗菌效果好的治疗鸡大肠杆菌病的中兽药制剂及其制备方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种治疗鸡大肠杆菌病的中兽药制剂，该中兽药制剂包括如下重量份数配比的中药材：丁香10-20份、厚朴20-35份、菩提花10-20、浮萍25-50份、干姜10-15份。

进一步的，该中兽药制剂包括如下重量份数配比的中药材：丁香10-15份、厚朴25-30份、菩提花10-15、浮萍30-40份、干姜10-12份。

优选的，该中兽药制剂包括如下重量份数配比的中药材：丁香15份、厚朴20份、菩提花10、浮萍45份、干姜10份。

更进一步的，该中兽药制剂还包括重量份数为5-10份的陈皮，且在丁香、菩提花、浮萍和干姜重量份数不变的情况下，将厚朴重量份数对应减少所添加的陈皮的重量份数。

优选的，该中兽药制剂包括如下重量份数配比的中药材：丁香15份、厚朴15份、菩提花10、浮萍40份、干姜10份、陈皮10份。

优选的，所述中兽药制剂为口服液。

用于制备上述不含陈皮的治疗鸡大肠杆菌病的中兽药制剂，其制备方法如下：

第一步，按厚朴重量份数的1/10取干姜，然后将所取干姜加水煎汤，将所有厚朴放入姜汤中文火加热至姜汤被厚朴完全吸收后备用；

第二步，将所有的丁香、菩提花、浮萍和剩余干姜加入所有药材重量的9-11倍的水浸泡1h，然后加入第一步中的厚朴煎煮沸腾后文火煮1h；

第三步，将第二步中的中药过滤，滤渣再加入第二步所加入水重量的70％-80％的水煎煮1h；

第四步，将第三步中的中药过滤，再加入第三步所加入水重量的60％-70％的水煎煮1h；

第五步，将三次煎得的药液合并，室温过夜，离心取上清液，药液浓缩至1g/mL，灭菌后，4℃保存备用。

用于制备上述含有陈皮的治疗鸡大肠杆菌病的中兽药制剂，其制备方法如下：

第一步，按厚朴重量份数的1/10取干姜，然后将所取干姜加水煎汤，将所有厚朴放入姜汤中文火加热至姜汤被厚朴完全吸收后备用；

第二步，将所有的丁香、菩提花、浮萍和剩余干姜加入所有药材重量的9-11倍的水浸泡1h，然后加入第一步中的厚朴煎煮沸腾后文火煮1h；

第三步，将第二步中的中药过滤，滤渣再加入第二步所加入水重量的70％-80％的水煎煮1h；

第四步，将第三步中的中药过滤，滤渣加入所有陈皮，再加入第三步所加入水重量的60％-70％的水煎煮1h；

第五步，将三次煎得的药液合并，室温过夜，离心取上清液，药液浓缩至1g/mL，灭菌后，4℃保存备用。

本发明的各中药组份药性、药理如下：

丁香，味辛、性温，具有温中降逆、补肾助阳的作用。归脾、胃、肺、肾经。用于脾胃虚寒。它还是一味很好的温胃药，还可缓解腹部胀气，增强消化能力，其含有丁香油，对于致病性真菌及葡萄球菌、痢疾和大肠杆菌等有抑制作用。

厚朴，性温，归脾、胃、肺、大肠经，能健脾和理气，可使补而不滞，可有效缓解寒性。厚朴中的厚朴酚与和厚朴酚对痢疾杆菌、大肠杆菌等革兰阴性杆菌具有较强的抗菌作用。

陈皮理气健脾，燥湿消痰，下气平喘。

菩提花，又名帝王花，促进消化、发汗利尿、可减轻疾病引起的发烧症状，提高机体免疫力。

浮萍，可利尿能发汗、利水、清热，解毒。《本草拾遗》记载：“末敷面酐；捣汁服之，主水肿，利小便；又人中毒，取萍子暴干末，酒服方寸匕；又为膏长发。”归经：《本草求真》：“入肝、脾”；《雷公炮制药性解》：“入肺、小肠二经”。

干姜，可治中寒水泻，健脾化湿。《本经》记载：“味辛，温”。归经：入脾、胃、肺经。

因本处方的主要功用为健脾化湿，通阳利水，化气行水，为了避免大苦大寒类清热类中药易伤脾胃，出现胃脘坠胀，大便自利不禁的副作用，本处方采用非大苦大寒的浮萍作为君药，但浮萍也属性寒，单独使用对疾病不利，故本发明采用干姜为浮萍的佐制药，可以进行互补，以助宣肺利小便消肿之功。又采用菩提花作为臣药以辅之，菩提花性温，促进消化、发汗利尿，提高机体免疫力，故菩提花、浮萍、干姜配伍能健脾胃、利水、发汗，有效缓解水肿，发热等临床症状，达到健脾化湿，通阳利水，化气行水的功效。

丁香和厚朴均具有健脾理气功效，两者作为臣药，且丁香中的丁香油与厚朴中的厚朴酚与和厚朴酚对大肠杆菌有较强的抑制作用，丁香与厚朴配伍，辅助治疗大肠杆菌病，能产生协同增强作用，提高其抗菌作用，且能提高机体免疫力；厚朴与陈皮配伍，能有效缓解疾病导致的脾胃失和，胃气不降问题，增加食欲，提高治疗效果，标本兼治。

本处方各药材的取量考究，用量恰到好处，充分发挥各组份的作用，使个药材之间的配伍能够最大程度的发挥药效。不存在药材种类过多，药效降低，副作用大的问题。

上述几味药材本着辨证论治、整体调理的基本原则，用药有依据可循，对因对症、治标治本，提高免疫力，缓解大肠杆菌病临床各种症状，达到有效治疗的目的，几乎没有副作用产生。而且，本处方通过调节鸡胃、肠道，优化肠道菌群，促进消化吸收功能，可提高蛋鸡的产蛋率。

本发明的制备方法具有如下有益效果：

先将厚朴和姜重量比10:1的比例炮制，避免了厚朴药力较为峻烈，其味辛辣，对食道有刺激性的问题，且姜制后可消除刺激性，并能增强宽中和胃的功效，并有效提高厚朴酚含量，防止挥发油的流失。通过三次煎煮，在保持本处方药效最佳状态下将药中的有效成分提取最多。在最后一次煎煮中加入陈皮是为了防止陈皮中的挥发油损失过多，影响药效。

具体实施方式

下面结合试验及临床效果对本发明的具体实施例进行阐述。

实施例一：

取丁香30g、厚朴50g、菩提花20g、浮萍80g、干姜20g，按照如下步骤制得药液：

第一步，取5g干姜加水煎汤，将50g厚朴放入姜汤中文火加热至姜汤被厚朴完全吸收后备用。本步骤将厚朴用姜炮制，避免了厚朴药力较为峻烈，其味辛辣，对咽喉有刺激性的问题，且姜制后可消除刺激性，并能增强宽中和胃的功效，并有效提高厚朴酚含量，防止挥发油的流失。

第二步，将30g丁香、20g菩提花、80g浮萍和15g干姜加入2000ml水浸泡1h，然后加入第一步中的厚朴煎煮沸腾后文火煮1h。

第三步，将第二步中的中药过滤，滤渣再加入1500ml水煎煮1h。

第四步，将第三步中的中药过滤，滤渣再加入1000ml水煎煮1h。

第五步，将三次煎得的药液合并，室温过夜，离心取上清液，药液浓缩至1g/mL，灭菌后，4℃保存备用。

本发明中兽药口服液对人工诱发鸡大肠杆菌病的试验效果：

1菌液制备

将保存下的大肠杆菌复苏后在LB肉汤中增殖。采用十倍稀释法，混匀制成菌液。取菌液1mL于平皿中，注入营养琼脂约15mL，混匀，凝固后置37℃培养18h。

2鸡大肠杆菌模型建立及攻毒剂量的确定

25日龄海兰褐鸡胸肌注射4.8×108cfu/mL的菌液0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL，每个剂量接种10只。记录试验鸡的发病及死亡情况，并确定正式试验的攻毒剂量。攻毒6h后，试验鸡表现食欲下降，精神沉郁，排水样粪便，18h开始出现鸡死亡，4天后统计发病率和死亡率，其中胸肌注射0.3mL组发病率90％，死亡率为70％，选择0.3mL的菌液作为临床药效试验的攻毒剂量。

3药效试验

3.1动物分组

鸡群常规笼养，自由饮水采食。选择25d龄健康雏鸡120只，称重，随机分为4组，中兽药组、药物对照组、攻毒对照组和空白对照组，每组鸡接种0.3mL细菌发病后，分别按表1.1进行分组给药，每天上、下午各1次，连用5d。用药期间观察鸡群临床症状，记录各组鸡的采食量、死亡、治愈、显效及有效情况。各组试验鸡分组及给药方案见表1.1。

表1.1各组试验鸡分组及给药方案

3.2试验指标与统计学分析方法

治愈：试验期间，用药后临床症状基本消失，精神及采食恢复正常。

显效：试验期间，用药后临床症状明显减轻，精神及采食基本恢复。

有效：试验期间，用药后临床症状减轻，但精神及采食情况基本没有恢复。

无效：在试验期间死亡，临床症状未见减轻或发病鸡死亡。

总有效率：试验结束后，鸡群治愈数、显效数和有效数总和占鸡群治疗数的百分比。

统计学分析方法

对总有效率进行x²(卡方)检验。

4对人工感染鸡大肠杆菌病的各组临床药效疗效结果

对人工感染鸡大肠杆菌病的各组临床药效疗效具体结果见表1.2。由表1.2可以看出，中兽药组与药物对照组治愈数均高于攻毒对照组，中兽药组与药物对照组间差别不大；攻毒对照组与中兽药组及药物对照组的总有效率存在显著性差异(P<0.05)，中兽药组及药物对照组相比治疗效果差异不显著(P>0.05)。因此，本发明研制的中兽药能够有效降低大肠杆菌死亡率，效果与药物对照组相当。

表1.2对人工感染鸡大肠杆菌病的各组临床药效疗效结果

注：同列数据小写字母相同者表示差异不显著(P>0.05)，小写字母不同者表示差异显著(P<0.05)。攻毒对照组和空白对照组中的治愈数为存活数量。下同。

实施例二：

取丁香30g、厚朴40g、菩提花20g、浮萍90g、干姜20g，按照如下步骤制得药液：

第一步，取4g干姜加水煎汤，将40g厚朴放入姜汤中文火加热至姜汤被厚朴完全吸收后备用。

第二步，将30g丁香、20g菩提花、90g浮萍和16g干姜加入2000ml水浸泡1h，然后加入第一步中的厚朴煎煮沸腾后文火煮1h。

第三步，将第二步中的中药过滤，滤渣再加入1500ml水煎煮1h。

第四步，将第三步中的中药过滤，滤渣再加入1000ml水煎煮1h。

第五步，将三次煎得的药液合并，室温过夜，离心取上清液，药液浓缩至1g/mL，灭菌后，4℃保存备用。

本发明中兽药口服液对人工诱发鸡大肠杆菌病的试验效果：

1菌液制备和鸡大肠杆菌模型建立及攻毒剂量的确定同实施例一中。

2药效试验

2.1动物分组

鸡群常规笼养，自由饮水采食。选择25d龄健康雏鸡120只，称重，随机分为4组，中兽药组、药物对照组、攻毒对照组和空白对照组，每组鸡接种0.3mL细菌发病后，分别按表2.1进行分组给药，每天上、下午各1次，连用5d。用药期间观察鸡群临床症状，记录各组鸡的采食量、死亡、治愈、显效及有效情况。各组试验鸡分组及给药方案见表2.1。

表2.1各组试验鸡分组及给药方案

2.2试验指标与统计学分析方法

治愈：试验期间，用药后临床症状基本消失，精神及采食恢复正常。

显效：试验期间，用药后临床症状明显减轻，精神及采食基本恢复。

有效：试验期间，用药后临床症状减轻，但精神及采食情况基本没有恢复。

无效：在试验期间死亡，临床症状未见减轻或发病鸡死亡。

总有效率：试验结束后，鸡群治愈数、显效数和有效数总和占鸡群治疗数的百分比。

统计学分析方法

对总有效率进行x²(卡方)检验。

3对人工感染鸡大肠杆菌病的各组临床药效疗效结果

对人工感染鸡大肠杆菌病的各组临床药效疗效具体结果见表2.2。由表2.2可以看出，中兽药组与药物对照组治愈数均高于攻毒对照组，中兽药组与药物对照组间差别不大,但效果差于实施例一中的中兽药效果；攻毒对照组与中兽药组及药物对照组的总有效率存在显著性差异(P<0.05)，中兽药组及药物对照组相比治疗效果差异不显著(P>0.05)。因此，本发明研制的中兽药能够有效降低大肠杆菌死亡率。

表2.2对人工感染鸡大肠杆菌病的各组临床药效疗效结果

实施例三：

取丁香30g、厚朴30g、菩提花20g、浮萍80g、干姜20g、陈皮20g，按照如下步骤制得药液：

第一步，取3g干姜加水煎汤，将30g厚朴放入姜汤中文火加热至姜汤被厚朴完全吸收后备用。

第二步，将30g丁香、20g菩提花、80g浮萍和17g干姜加入2000ml水浸泡1h，然后加入第一步中的厚朴煎煮沸腾后文火煮1h。

第三步，将第二步中的中药过滤，滤渣再加入1500ml水煎煮1h。

第四步，将第三步中的中药过滤，滤渣加入陈皮20g，再加入1000ml水煎煮1h。在本步骤中加入陈皮是为了防止陈皮中的挥发油损失过多，影响药效。

第五步，将三次煎得的药液合并，室温过夜，离心取上清液，药液浓缩至1g/mL，灭菌后，4℃保存备用。

本发明中兽药口服液对人工诱发鸡大肠杆菌病的试验效果：

1菌液制备和鸡大肠杆菌模型建立及攻毒剂量的确定同实施例一中。

2药效试验

2.1动物分组

鸡群常规笼养，自由饮水采食。选择25d龄健康雏鸡120只，称重，随机分为4组，中兽药组、药物对照组、攻毒对照组和空白对照组，每组鸡接种0.3mL细菌发病后，分别按表3.1进行分组给药，每天上、下午各1次，连用5d。用药期间观察鸡群临床症状，记录各组鸡的采食量、死亡、治愈、显效及有效情况。各组试验鸡分组及给药方案见表3.1。

表3.1各组试验鸡分组及给药方案

2.2试验指标与统计学分析方法

治愈：试验期间，用药后临床症状基本消失，精神及采食恢复正常。

显效：试验期间，用药后临床症状明显减轻，精神及采食基本恢复。

有效：试验期间，用药后临床症状减轻，但精神及采食情况基本没有恢复。

无效：在试验期间死亡，临床症状未见减轻或发病鸡死亡。

总有效率：试验结束后，鸡群治愈数、显效数和有效数总和占鸡群治疗数的百分比。

统计学分析方法

对总有效率进行x²(卡方)检验。

3对人工感染鸡大肠杆菌病的各组临床药效疗效结果

对人工感染鸡大肠杆菌病的各组临床药效疗效具体结果见表3.2。由表3.2可以看出，中兽药组与药物对照组治愈数均高于攻毒对照组，中兽药组与药物对照组间差别不大；攻毒对照组与中兽药组及药物对照组的总有效率存在显著性差异(P<0.05)，中兽药组及药物对照组相比治疗效果差异不显著(P>0.05)。因此，本发明研制的中兽药能够有效降低大肠杆菌死亡率，效果与药物对照组相当，达到了与氟苯尼考的相当的治疗效果。

表3.2对人工感染鸡大肠杆菌病的各组临床药效疗效结果

通过上述三个实施例的试验可看出，实施例一和实施例二中的处方与药物对照组均能有效降低大肠杆菌死亡率，且差异不显著，但实施例3中丁香15份、厚朴15份、菩提花10、浮萍40份、干姜10份、陈皮10份的处方对鸡大肠杆菌的治疗效果组最好，总有效率均高于实施例一和实施例二，基本接近氟苯尼考的治疗效果。

临床试验例

山东省潍坊市寒亭区一养殖户，饲养白羽肉鸡8000余只，20日龄部分鸡出现精神萎靡不振、采食减少或不食，剖检病鸡，可见结膜苍白，腹膜增厚，肝脏肿大，表面附有纤维素性渗出，心包膜变厚，有黄白色纤维素，出现气囊炎、心包炎、腹膜炎等症状。取鸡的肝脏涂片，革兰氏染色，镜检为革兰氏阴性杆菌，细菌在普通培养基中生长良好，菌落表面光滑不透明，有光泽，在麦康凯中生长良好，菌落表面光滑、湿润，边缘整齐，判为鸡大肠杆菌病。共发病578只，死亡56只。剩余522只发病鸡按6mL/kg给鸡饮水，添加本发明实施例三的中兽药制剂，连喂5天，五天后，58只鸡效果不佳，36只鸡死亡，428只有较好的治疗效果，病鸡基本恢复正常，总有效率达到82％。

Claims (7)

1.一种治疗鸡大肠杆菌病的中兽药制剂，其特征在于，该中兽药制剂由如下重量份数配比的中药材制成：丁香10-20份、厚朴20-35份、菩提花10-20份、浮萍25-50份、干姜10-15份。

2.根据权利要求1所述的治疗鸡大肠杆菌病的中兽药制剂，其特征在于，该中兽药制剂由如下重量份数配比的中药材制成：丁香10-15份、厚朴25-30份、菩提花10-15份、浮萍30-40份、干姜10-12份。

3.根据权利要求1所述的治疗鸡大肠杆菌病的中兽药制剂，其特征在于，该中兽药制剂由如下重量份数配比的中药材制成：丁香15份、厚朴20份、菩提花10份、浮萍45份、干姜10份。

4.一种治疗鸡大肠杆菌病的中兽药制剂，其特征在于，该中兽药制剂由如下重量份数配比的中药材制成：丁香15份、厚朴15份、菩提花10份、浮萍40份、干姜10份、陈皮10份。

5.根据权利要求1所述的治疗鸡大肠杆菌病的中兽药制剂，其特征在于，所述中兽药制剂为口服液。

6.如权利要求1或2或3或5所述的治疗鸡大肠杆菌病的中兽药制剂，其制备方法如下：

第一步，按厚朴重量份数的1/10取干姜，然后将所取干姜加水煎汤，将所有厚朴放入姜汤中文火加热至姜汤被厚朴完全吸收后备用；

第二步，将所有的丁香、菩提花、浮萍和剩余干姜加入所有药材重量的9-11倍的水浸泡1h，然后加入第一步中的厚朴煎煮沸腾后文火煮1h；

第三步，将第二步中的中药过滤，滤渣再加入第二步所加入水重量的70%-80%的水煎煮1h；

第四步，将第三步中的中药过滤，再加入第三步所加入水重量的60%-70%的水煎煮1h；

第五步，将三次煎得的药液合并，室温过夜，离心取上清液，药液浓缩至1g/mL，灭菌后，4℃保存备用。

7.如权利要求4所述的治疗鸡大肠杆菌病的中兽药制剂，其制备方法如下：

第一步，按厚朴重量份数的1/10取干姜，然后将所取干姜加水煎汤，将所有厚朴放入姜汤中文火加热至姜汤被厚朴完全吸收后备用；

第二步，将所有的丁香、菩提花、浮萍和剩余干姜加入所有药材重量的9-11倍的水浸泡1h，然后加入第一步中的厚朴煎煮沸腾后文火煮1h；

第三步，将第二步中的中药过滤，滤渣再加入第二步所加入水重量的70%-80%的水煎煮1h；

第四步，将第三步中的中药过滤，滤渣加入所有陈皮，再加入第三步所加入水重量的60%-70%的水煎煮1h；

第五步，将三次煎得的药液合并，室温过夜，离心取上清液，药液浓缩至1g/mL，灭菌后，4℃保存备用。