CN109939178A - 靶向抑制非洲猪瘟病毒增殖的活性组合物的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及靶向抑制非洲猪瘟病毒增殖的活性组合物的制备方法，具体为：首先将包括黄精、夏枯草、怀牛膝、甘草、灵芝孢子粉、五味子、牛蒡子、吴茱萸、紫锥菊、补骨脂、龙葵和贯叶连翘在内的各中药成分进行粉碎处理、煎煮、过滤、调整碳氮比，得到调整后提取液；再将调整后提取液配制为培养基，并以除灵芝孢子粉外其他各中药植物的茎和叶作为待培养物质，将待培养物质在上述培养基中进行培养，再依次进行扩大繁殖、药效筛选，即得本发明所述活性组合物。本发明所述活性组合物是通过生物炮制发酵的手段获得，避免了因使用化学方法而产生的污染；本活性组合物对非洲猪瘟病毒感染能够靶向治疗，不会产生耐药性，药效可靠，无毒副作用。

Description

靶向抑制非洲猪瘟病毒增殖的活性组合物的制备方法

技术领域

本发明属于中药应用领域，具体涉及靶向抑制非洲猪瘟病毒增殖的活性组合物的制备方法。

背景技术

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒感染家猪和各种野猪(如非洲野猪、欧洲野猪等)引起一种急性、出血性、烈性传染病。世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定报告动物疫病，该病也是我国重点防范的一类动物疫情。其特征是发病过程短，最急性和急性感染死亡率高达100％，临床表现为发热(达40～42℃)，心跳加快，呼吸困难，部分咳嗽，眼、鼻有浆液性或粘液性脓性分泌物，皮肤发绀，***、肾、胃肠粘膜明显出血，非洲猪瘟临床症状与猪瘟症状相似，只能依靠实验室监测确诊。

非洲猪瘟病毒是非洲猪瘟科非洲猪瘟病毒属的重要成员，病毒有些特性类似虹彩病毒科和痘病毒科。病毒粒子的直径为175-215纳米，呈20面体对称，有囊膜。基因组为双股线状DNA，大小170-190kb。在猪体内，非洲猪瘟病毒可在几种类型的细胞浆中，尤其是网状内皮细胞和单核巨噬细胞中复制。该病毒可在钝缘蜱中增殖，并使其成为主要的传播媒介。

现阶段，世界范围内没有研发出可以有效预防非洲猪瘟的疫苗，针对非洲猪瘟病毒的药物也寥寥无几，这对于抑制非洲猪瘟病毒增殖来说非常不利。因此，亟需我们研制一种安全可靠且有效的治疗非洲猪瘟病毒且不产生耐药性的药物，以应对市场的需求。

发明内容

为了解决现有技术存在的上述问题，本发明提供了靶向抑制非洲猪瘟病毒增殖的活性组合物的制备方法。

本发明所采用的技术方案为：

靶向抑制非洲猪瘟病毒增殖的活性组合物的制备方法，包括如下步骤：

(1)取黄精、夏枯草、怀牛膝、甘草、五味子、牛蒡子、吴茱萸、紫锥菊、补骨脂、龙葵和贯叶连翘依次进行清洗、烘干、粉碎，和灵芝孢子粉混合后得到粉碎原料；

(2)向所述粉碎原料中加入水，煎煮后进行过滤、浓缩、醇沉后得到沉淀物，随后将所述沉淀物进行溶解，得到中药提取液；

(3)调整所述中药提取液的碳氮比，得到调整后提取液；

(4)将所述调整后提取液制备为培养基；

(5)取步骤(1)中除灵芝孢子粉外其他各中药植物的茎和叶依次进行消毒、清洗、裁剪，得到待培养物质，将所述待培养物质放入所述培养基中进行培养得到培养产物，将所述培养产物经摇床扩繁、药效筛选后，得到所述靶向抑制非洲猪瘟病毒增殖的活性组合物。

进一步地，步骤(1)中，所述各原料的配比为黄精10％、夏枯草9％、怀牛膝8％、甘草8％、五味子8％、牛蒡子8％、吴茱萸9％、紫锥菊9％、补骨脂7％、龙葵8％、贯叶连翘8％、灵芝孢子粉8％。

进一步地，步骤(1)中，所述各原料粉碎至150目-250目。

进一步地，步骤(2)中，粉碎原料与水的质量比为1:(8-12)。

进一步地，步骤(2)中，所述煎煮为文火煎煮，所述煎煮时间为1.5-2.5h。

进一步地，步骤(2)中，所述浓缩为加热浓缩，所述加热时间为1-2h。

进一步地，步骤(2)中，利用浓度为85％-95％乙醇溶液对所述浓缩液体醇沉2-3小时，乙醇是浓缩液体质量的5-10倍。

进一步地，步骤(2)中，利用反渗透水将沉淀物进行溶解，所述反渗透水是沉淀物质量的5-7倍。

进一步地，步骤(3)中，使用硫酸铵和葡萄糖将所述中药提取液的碳氮比调整至(25-29):1。

进一步地，步骤(4)中，所述培养基的组分组成为：调整后提取液96.248％-96.948％、葡萄糖1.2％、磷酸氢二钾0.3％、硫酸镁0.15％、酵母膏0.1％、维生素B₁0.01‰、维生素B₆0.01‰、琼脂1.3％-2％。

进一步地，步骤(4)中，或者所述培养基的组分组成为：调整后提取液94.3％-94.7％、蔗糖3％、硝酸钠0.3％、硫酸镁0.05％、氯化钾0.05％、磷酸氢二钾0.1％、丹宁0.1％、蛋白胨0.1％、琼脂1.6％-2％。

进一步地，步骤(5)中，所述茎和叶的重量为各中药植物重量的0.5％-1.5％。

进一步地，步骤(5)中，所述消毒使用的是浓度为8％-12％的次氯酸钠。

进一步地，步骤(5)中，所述消毒的时间为8-12min。

进一步地，步骤(5)中，将所述茎或叶裁剪至1cm×1cm。

进一步地，步骤(5)中，所述培养温度为30-37℃，所述培养湿度为40％-50％，所述培养时间为5-7天。

进一步地，步骤(5)中，所述培养产物进行摇床扩繁时的扩大培养体系组成为：调整后提取液95.42％、培养产物1.5％、葡萄糖2％、磷酸二氢钾0.5％、硫酸镁0.25％、蛋白胨0.2％、苯丙氨酸0.07％、酪氨酸0.06％。

进一步地，步骤(5)中，或者所述培养产物进行摇床扩繁时的扩大培养体系组成为：调整后提取液94.3％、培养产物2％、蔗糖3％、硝酸钠0.3％、硫酸镁0.05％、氯化钾0.05％、磷酸二氢钾0.1％、丹宁0.1％、蛋白胨0.1％。

进一步地，步骤(5)中，所述摇床扩繁的温度为25-37℃，所述转速为130-170rpm，所述扩繁天数为5-7天。

进一步地，所述靶向抑制非洲猪瘟病毒增殖的活性组合物在制备抑制非洲猪瘟病毒增殖药物中的应用。

下面对本发明中原料所产生的作用进行简单叙述。

黄精，性平，味甘，归脾、肺、肾经。功能主治：补气养阴、健脾、润肺、益肾。用于脾胃虚弱、体倦乏力、口干食少、肺虚燥咳、精血不足、内热消渴。

夏枯草，性寒，味辛、苦，归肝、胆经。功能主治：清火、明目、散结、消肿。用治目赤肿痛、目珠夜痛、头痛眩晕、瘰疠、瘿瘤、乳痈肿痛、甲状腺肿大、***结核、乳腺增生、高血压。

怀牛膝，性平，味苦、酸，归经。功能主治：滋补之功，如牛之力。主治寒湿痿痹、四肢拘挛、膝痛不可屈伸、逐血气、伤热火烂、久服轻身耐老，常服具有补益肝肾、强腰膝、活血、引血下行的作用。

甘草，性平，味甘，归心、胃、脾、肺经。功能主治：补脾益气、止咳祛痰、缓急定痛、调和药性。治疗脾胃虚弱、中气不足、咳嗽气喘、痈疽疮毒、腹中挛急作痛、缓和药物烈性、解药毒、清热应生用，补中宜炙用。

灵芝孢子粉，性平，味甘，归心、肺、肝、肾经。功能主治：对虚劳、咳嗽、气喘、失眠、消化不良、恶性肿瘤等症有治疗作用。

五味子，性温，味酸，归肺、肾、心经。功能主治：敛肺滋肾，生津敛汗，涩精止泻，宁心安神。用于久咳虚喘，津伤口渴，自汗盗汗，肾虚遗精，脾肾虚泻，心悸失眠。

牛蒡子，性寒，味辛、苦，归肺、胃经。功能主治：发散风热，解毒透疹，利咽。用于外感风热，咽喉肿痛，麻疹不透，风热发疹，热毒疮疡，痄腮肿痛。

吴茱萸，性热，味辛、苦，归肝、脾、胃经。功能主治：散寒止痛，疏肝下气，燥湿降逆。用于厥阴头痛，寒疝腹痛，虚寒泄泻，脘腹胀痛，呕吐吞酸，脚气上冲，口疮口疳。

紫锥菊，可以刺激人体内的白细胞等免疫细胞的活力，具有增强免疫力的功效，还可以用于辅助治疗感冒、咳嗽及上呼吸道感染，用于治疗皮肤病及念球菌病，单纯疱疹病毒感染。

补骨脂，性温，味辛、苦，归肾、脾经。功能主治：温肾助阳、纳气、止泻。用于阳痿遗精、遗尿尿频、腰膝冷痛、肾虚作喘、五更泄泻，外用治白癜风，斑秃。

龙葵，性寒，味苦，归肝、胃经。功能主治：清热解毒、活血消肿。用于感冒发烧、牙痛、慢性支气管炎、急性肾炎、乳腺炎等。

贯叶连翘，性平，味苦、涩，归肝经。功能主治：收敛止血、调经通乳、清热解毒、利湿。用于咯血、吐血、肠风下血、崩漏、外伤出血、***、乳妇乳汁不下、黄疸、咽喉疼痛、目赤肿痛、***、口鼻生疮、痈疖肿毒、烫火伤。

本发明的有益效果为：

本发明所述靶向抑制非洲猪瘟病毒增殖的活性组合物的制备方法，具体为：首先将包括黄精、夏枯草、怀牛膝、甘草、灵芝孢子粉、五味子、牛蒡子、吴茱萸、紫锥菊、补骨脂、龙葵和贯叶连翘在内的各中药成分进行粉碎处理、煎煮、过滤、调整碳氮比，得到调整后提取液；再将调整后提取液配制为培养基，并以除灵芝孢子粉外其他各中药植物的茎和叶作为待培养物质，将待培养物质在上述培养基中进行培养，再依次进行扩大繁殖、药效筛选，即得本发明所述活性组合物。本发明所述活性组合物是通过生物炮制发酵的手段获得，避免了因使用化学方法而产生的污染；本活性组合物对非洲猪瘟病毒感染能够靶向治疗，不会产生耐药性，药效可靠，无毒副作用。

本发明所述靶向抑制非洲猪瘟病毒增殖的活性组合物针对非洲猪瘟病毒主要具有以下作用：(1)激活并增强巨噬细胞的免疫功能；(2)抑制非洲猪瘟病毒DNA的合成，进而抑制病毒的增殖。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是MDBK细胞感染VSV病毒后的形态图；

图2是正常MDBK细胞形态图；

图3是本发明实施例3所得活性组合物稀释10⁷倍后作用于MDBK细胞后的形态图；

图4是本发明实施例3所得活性组合物稀释10⁸倍后作用于MDBK细胞的形态图。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的技术方案进行详细的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本发明所保护的范围。

实施例1

本实施例提供靶向抑制非洲猪瘟病毒增殖的活性组合物的制备方法，包括如下步骤：

(1)取黄精10g、夏枯草9g、怀牛膝8g、甘草8g、五味子8g、牛蒡子8g、吴茱萸9g、紫锥菊9g、补骨脂7g、龙葵8g、贯叶连翘8g、依次进行清洗、烘干，粉碎至150目，与8g灵芝孢子粉混合后得到粉碎原料；

(2)向所述粉碎原料中加入8倍质量的水，文火煎煮1.5h，随后加热1h进行浓缩，使用5倍质量的85％乙醇溶液对所述浓缩液体醇沉2小时得到沉淀物，随后再使用5倍质量的反渗透水将所述沉淀物溶解，得到中药提取液；

(3)使用硫酸铵和葡萄糖将所述中药提取液的碳氮比调整至25:1，得到调整后提取液；

(4)取适合重量的调整后提取液、葡萄糖、磷酸氢二钾、硫酸镁、酵母膏、维生素B1、维生素B6和琼脂混合均匀，得到培养基，所述培养基组成为：调整后提取液96.948％、葡萄糖1.2％、磷酸氢二钾0.3％、硫酸镁0.15％、酵母膏0.1％、维生素B₁0.01‰、维生素B₆0.01‰、琼脂1.3％；

(5)取步骤(1)中除灵芝孢子粉外其他各中药植物重量0.5％的茎和叶，使用8％的次氯酸钠消毒8min，清洗后裁剪至1cm×1cm大小，随后放入培养基中进行培养，30℃培养5天，培养湿度为40％，得到培养产物；

(6)所述培养产物进行摇床扩繁时的扩大培养体系组成为：调整后提取液95.42％、培养产物1.5％、葡萄糖2％、磷酸二氢钾0.5％、硫酸镁0.25％、蛋白胨0.2％、苯丙氨酸0.07％和酪氨酸0.06％，将上述各组分混合均匀后进行摇床扩繁，摇床转速为130rpm，25℃培养5天，经过药效筛选后得到所述靶向抑制非洲猪瘟病毒增殖的活性组合物。

实施例2

本实施例提供靶向抑制非洲猪瘟病毒增殖的活性组合物的制备方法，包括如下步骤：

(1)取黄精10g、夏枯草9g、怀牛膝8g、甘草8g、五味子8g、牛蒡子8g、吴茱萸9g、紫锥菊9g、补骨脂7g、龙葵8g、贯叶连翘8g、依次进行清洗、烘干，粉碎至250目，与8g灵芝孢子粉混合后得到粉碎原料；

(2)向所述粉碎原料中加入12倍质量的水，文火煎煮2.5h，随后加热2h进行浓缩，使用10倍质量的95％乙醇溶液对所述浓缩液体醇沉3小时得到沉淀物，随后再使用7倍质量的反渗透水将所述沉淀物溶解，得到中药提取液；

(3)使用硫酸铵和葡萄糖将所述中药提取液的碳氮比调整至29:1，得到调整后提取液；

(4)取适合重量的调整后提取液、蔗糖、硝酸钠、硫酸镁、氯化钾、磷酸二氢钾、丹宁、蛋白胨和琼脂混合均匀，得到培养基，所述培养基组成为：调整后提取液94.3％、蔗糖3％、硝酸钠0.3％、硫酸镁0.05％、氯化钾0.05％、磷酸氢二钾0.1％、丹宁0.1％、蛋白胨0.1％和琼脂2％；

(5)取步骤(1)中除灵芝孢子粉外其他各中药植物重量1.5％的茎和叶，使用12％的次氯酸钠消毒12min，清洗后裁剪至1cm×1cm大小，随后放入所述培养基中进行培养，37℃培养7天，培养湿度为50％，得到培养产物；

(6)所述培养产物进行摇床扩繁时的扩大培养体系组成为：调整后提取液94.3％、培养产物2％、蔗糖3％、硝酸钠0.3％、硫酸镁0.05％、氯化钾0.05％、磷酸二氢钾0.1％、丹宁0.1％和蛋白胨0.1％，将上述各组分混合均匀后进行摇床扩繁，摇床转速为170rpm，37℃培养7天，经过药效筛选后得到所述靶向抑制非洲猪瘟病毒增殖的活性组合物。

实施例3

本实施例提供靶向抑制非洲猪瘟病毒增殖的活性组合物的制备方法，包括如下步骤：

(1)取黄精10g、夏枯草9g、怀牛膝8g、甘草8g、五味子8g、牛蒡子8g、吴茱萸9g、紫锥菊9g、补骨脂7g、龙葵8g、贯叶连翘8g、依次进行清洗、烘干，粉碎至200目，与8g灵芝孢子粉混合后得到粉碎原料；

(2)向所述粉碎原料中加入10倍质量的水，文火煎煮2h，随后加热1.5h进行浓缩，使用8倍质量的90％乙醇溶液对所述浓缩液体醇沉2.5小时得到沉淀物，随后再使用6倍质量的反渗透水将所述沉淀物溶解，得到中药提取液；

(3)使用硫酸铵和葡萄糖将所述中药提取液的碳氮比调整至27:1，得到调整后提取液；

(4)取适合重量的调整后提取液、葡萄糖、磷酸氢二钾、硫酸镁、酵母膏、维生素B₁、维生素B₆和琼脂混合均匀，得到培养基，所述培养基组成为：调整后提取液96.548％、葡萄糖1.2％、磷酸氢二钾0.3％、硫酸镁0.15％、酵母膏0.1％、维生素B₁0.01‰、维生素B₆0.01‰、琼脂1.7％；

(5)取步骤(1)中除灵芝孢子粉外其他各中药植物重量1％的茎和叶，使用10％的次氯酸钠消毒10min，清洗后裁剪至1cm×1cm大小，随后放入所述培养基中进行培养，34℃培养6天，培养湿度为45％，得到培养产物；

(6)所述培养产物进行摇床扩繁时的扩大培养体系组成为：调整后提取液95.42％、培养产物1.5％、葡萄糖2％、磷酸二氢钾0.5％、硫酸镁0.25％、蛋白胨0.2％、苯丙氨酸0.07％和酪氨酸0.06％，将上述各组分混合均匀后进行摇床扩繁，摇床转速为150rpm，31℃培养6天，经过药效筛选后得到所述靶向抑制非洲猪瘟病毒增殖的活性组合物。

实验例

对实施例3所得靶向抑制非洲猪瘟病毒增殖的活性组合物进行细胞毒性试验和效果试验。

一、试验目的

通过细胞生物活性试验，检测本发明实施例3所得活性组合物样品能否提高细胞免疫力以及对细胞的毒性。

二、试验方法

1.牛肾细胞(MDBK)的复苏和培养；

2.病毒(VSV)毒价测定；

3.样品稀释：取本发明实施例3所得活性组合物样品30ul至1号管中，加稀释液270ul，即得10倍稀释样品；从1号管中取30ul样品至2号管中，加稀释液270ul，即得100倍稀释样品；从2号管中取30ul样品至3号管中，加稀释液270ul，即得1000倍稀释样品，以此类推，即得10、100、1000、10⁴、10⁵、10⁶、10⁷、10⁸、10⁹、10¹⁰倍稀释样品；

4.样品接入MDBK细胞：取各稀释倍数样品100ul，按稀释倍数从小到大依次接入96孔板的G行中，H行为重复操作，观察细胞被药物作用后的形态变化；

5.接种VSV病毒：向G、H行各孔中分别接入100ul病毒(VSV)，24h后观察细胞死亡情况。

三、观察结果

观察本品稀释10、100、1000、10⁴、10⁵、10⁶、10⁷、10⁸、10⁹、10¹⁰倍的稀释样品的细胞死亡情况，结果如表1：

表1试验观察结果

注：“-”表示70％以上的细胞死亡；“+”表示40-70％的细胞死亡；“++”表示10-40％的细胞死亡；“+++”表示10％以下的细胞死亡。

图1-图4分别为病毒作用于细胞、空白对照、仅10⁷倍稀释样品作用于细胞、仅10⁸倍稀释样品作用于细胞后的细胞形态图，可以看出，病毒感染细胞后，细胞形态发生改变，细胞死亡率大大升高，10⁷倍稀释样品和10⁸倍稀释样品作用于细胞上，对细胞没有毒性，细胞形态良好。

四、试验结论

由表1中相关数据可以得出：

1.本发明实施例3所得活性组合物样品稀释10⁶倍后对MDBK细胞有保护作用，具有抑制VSV病毒感染细胞的功能，但效果不明显；

2.本发明实施例3所得活性组合物样品稀释10⁴倍后对MDBK细胞有良好的保护作用，具有抑制VSV病毒感染细胞的功能，效果明显。

利用VSV病毒替代非洲猪瘟病毒进行本试验，可以推测出本发明实施例3所得活性组合物可以保护细胞，免受非洲猪瘟病毒的感染。

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。

Claims (10)

1.靶向抑制非洲猪瘟病毒增殖的活性组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)取黄精、夏枯草、怀牛膝、甘草、五味子、牛蒡子、吴茱萸、紫锥菊、补骨脂、龙葵和贯叶连翘依次进行清洗、烘干、粉碎，和灵芝孢子粉混合后得到粉碎原料；

(2)向所述粉碎原料中加入水，煎煮后进行过滤、浓缩、醇沉后得到沉淀物，随后将所述沉淀物进行溶解，得到中药提取液；

(3)调整所述中药提取液的碳氮比，得到调整后提取液；

(4)将所述调整后提取液制备为培养基；

(5)取步骤(1)中除灵芝孢子粉外其他各中药植物的茎和叶依次进行消毒、清洗、裁剪，得到待培养物质，将所述待培养物质放入所述培养基中进行培养得到培养产物，将所述培养产物经摇床扩繁、药效筛选后，得到所述靶向抑制非洲猪瘟病毒增殖的活性组合物。

2.根据权利要求1所述的靶向抑制非洲猪瘟病毒增殖的活性组合物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述各原料的配比为黄精10％、夏枯草9％、怀牛膝8％、甘草8％、五味子8％、牛蒡子8％、吴茱萸9％、紫锥菊9％、补骨脂7％、龙葵8％、贯叶连翘8％、灵芝孢子粉8％。

3.根据权利要求1所述的靶向抑制非洲猪瘟病毒增殖的活性组合物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述各原料粉碎至150目-250目。

4.根据权利要求1所述的靶向抑制非洲猪瘟病毒增殖的活性组合物的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，粉碎原料与水的质量比为1:(8-12)；

所述煎煮为文火煎煮，所述煎煮时间为1.5-2.5h；

所述浓缩为加热浓缩，所述加热时间为1-2h；

利用浓度为85％-95％乙醇溶液对所述浓缩液体醇沉2-3小时，乙醇是浓缩液体质量的5-10倍；

利用反渗透水将沉淀物进行溶解，所述反渗透水是沉淀物质量的5-7倍。

5.根据权利要求1所述的靶向抑制非洲猪瘟病毒增殖的活性组合物的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，使用硫酸铵和葡萄糖将所述中药提取液的碳氮比调整至(25-29):1。

6.根据权利要求1所述的靶向抑制非洲猪瘟病毒增殖的活性组合物的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述培养基的组分组成为：调整后提取液96.248％-96.948％、葡萄糖1.2％、磷酸氢二钾0.3％、硫酸镁0.15％、酵母膏0.1％、维生素B₁0.01‰、维生素B₆0.01‰、琼脂1.3％-2％；

或者，所述培养基的组分组成为：调整后提取液94.3％-94.7％、蔗糖3％、硝酸钠0.3％、硫酸镁0.05％、氯化钾0.05％、磷酸氢二钾0.1％、丹宁0.1％、蛋白胨0.1％、琼脂1.6％-2％。

7.根据权利要求1所述的靶向抑制非洲猪瘟病毒增殖的活性组合物的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，所述茎和叶的重量为各中药植物重量的0.5％-1.5％；

所述消毒使用的是浓度为8％-12％的次氯酸钠，所述消毒的时间为8-12min。

8.根据权利要求1所述的靶向抑制非洲猪瘟病毒增殖的活性组合物的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，将所述茎或叶裁剪至1cm×1cm；

所述培养温度为30-37℃，所述培养湿度为40％-50％，所述培养时间为5-7天。

9.根据权利要求1所述的靶向抑制非洲猪瘟病毒增殖的活性组合物的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，所述培养产物进行摇床扩繁时的扩大培养体系组成为：调整后提取液95.42％、培养产物1.5％、葡萄糖2％、磷酸二氢钾0.5％、硫酸镁0.25％、蛋白胨0.2％、苯丙氨酸0.07％、酪氨酸0.06％；

或者，所述培养产物进行摇床扩繁时的扩大培养体系组成为：调整后提取液94.3％、培养产物2％、蔗糖3％、硝酸钠0.3％、硫酸镁0.05％、氯化钾0.05％、磷酸二氢钾0.1％、丹宁0.1％、蛋白胨0.1％；

所述摇床扩繁的温度为25-37℃，所述转速为130-170rpm，所述扩繁天数为5-7天。

10.根据权利要求1所述靶向抑制非洲猪瘟病毒增殖的活性组合物在制备抑制非洲猪瘟病毒增殖药物中的应用。