CN109922823A - 先兆子痫的诊断和治疗方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于治疗、缓解或预防个体中的先兆子痫的ELABELA多肽或核酸。在本发明的另一方面，提供了诊断个体的先兆子痫或检测个体对先兆子痫的易感性的方法，其中该方法包括检测ELABELA的表达、量或活性的调节，优选下调。

Description

先兆子痫的诊断和治疗方法
技术领域
本发明涉及医学、细胞生物学、分子生物学和遗传学领域。本发明涉及医学领域。
背景技术
胎盘是哺乳动物特异性器官，并且是负责重塑母体心血管***以适应胎儿生长需要的因素的重要来源。
胎盘中的缺陷经常导致胎儿宫内生长受限(IUGR)，以及母体的妊娠并发症，诸如先兆子痫(PE)。
PE影响所有妊娠的5-8％，并且，仍然是胎儿和母体发病/死亡的主要原因。目前PE的挑战包括早期检测和对胎儿发育没有不利影响的有效药物的可用性。
ELABELA编码Apelin(爱帕琳肽)(APLNR或APJ)受体的内源性配体。它首先在植入前期人胚泡中检测到，并且控制胚胎干细胞的自我更新(1)。在成人中，它的表达限于少数组织，包括两个内分泌器官、肾脏和胎盘(1)。在啮齿动物中，Ela表达的开始与合子转录一致(图6A)，在胚泡阶段达到峰值，并且在成年动物中同样受限。在低脊椎动物中，Ela是正常内胚层发育所需要的，并且Ela缺乏的斑马鱼患有由于心脏祖细胞迁移受损而产生的严重的心脏畸形(2、3)。由于成血管细胞向中线的迁移受损，缺乏Ela和Apelin(Apln)即Aplnr的替代配体的斑马鱼在血管新生中具有缺陷(4)。
目前，APLNR下游的ELA信号传导的分子效应尚不清楚，并且其在哺乳动物发育和生理学中的参与尚未得到确定。
Chng等人(2013)描述了一种新型激素ELABELA，并表明它是心脏发育必需的激素。表明ELABELA经由apelin受体(APNJ或APNLR)进行传导。Ho等人(2015)表明了ELABELA是内源性生长因子，其经由PI3K/AKT通道维持hESC自我更新。Murza等人(2016)描述了调节血管和心脏功能的ELABELA生物活性片段。Perjès等人(2016)描述了APELA在成年者心脏中的特征。Helker等人(2015)表明了Elabela在血管新生期间将成血管细胞引导至中线。
还参考了国际专利公开号WO 2015/084264(PCT/SG2014/000574)。
WO 2015/084264描述了ELABELA的结构和功能。表明ELABELA具有许多活性，包括维持干细胞的自我更新，维持干细胞的多能性，维持干细胞生长，促进干细胞生长，抑制细胞凋亡，结合至胚胎干细胞的细胞表面，使干细胞倾向于向内胚层或中胚层分化，结合至apelin受体(APLNR)，结合至CXCR4受体，活化P13K/AKT通道，缺血和/或再灌注期间保护心脏、恢复或维持心脏功能，减少氧化应激，减少梗塞大小以及抑制HIV感染。
在WO 2015/084264中，公开了ELABELA用于治疗、预防或缓解心脏功能障碍，高血压，或在血压、心脏收缩性或体液平衡中的心血管异常；心血管疾病，诸如心脏肥大、冠状动脉疾病(CAD)、动脉粥样硬化、梗死后治疗、心肌缺血——再灌注损伤或心房颤动、冠心病、心力衰竭、肺动脉高压(PAH)；与高血压相关的病症，诸如高血压、心绞痛、充血性心力衰竭或***功能障碍；以及与HIV感染有关的病症，诸如个体的AIDS。
先兆子痫影响全球范围内2-8％的妊娠。先兆子痫可能是由于妊娠导致死亡的最常见的原因之一。先兆子痫经常发生在32周之后；然而，如果它发生的更早，则它会伴随着更坏的结果。患有先兆子痫的女性在以后的生活中患心脏病和中风的风险增加。
发明内容
然而，高血压和先兆子痫是非常不同的疾病。因此，人们一般不会将一般高血压的发现推断成胎盘存在的特有病症，即先兆子痫。
根据本发明的第1方面，我们提供了ELABELA多肽或核酸，用于诊断个体中的先兆子痫、检测个体对先兆子痫的易感性、治疗、缓解或预防个体中的先兆子痫。
ELABELA多肽可以用于诊断个体中的先兆子痫、检测个体对先兆子痫的易感性、治疗、缓解或预防个体中的先兆子痫。
ELABELA多肽可以包含序列CXXXRCXXXHSRVPFP(SEQ ID NO:1)，在其中，X代表氨基酸残基、或其片段、同源物、变体或衍生物。
ELABELA多肽可以包含序列SEQ ID NO:162(XXXXXXXCXXXRCXXXHSRVPFP)，在其中，X代表氨基酸残基，并且在其中，SEQ ID NO:162的1位包含碱性氨基酸残基，优选K或R。
ELABELA多肽可以包含序列SEQ ID NO:163(XXXXXXXXCXXXRCXXXHSRVPFP)，在其中，X代表氨基酸残基，并且在其中，SEQ ID NO:163的1位包含碱性氨基酸残基。氨基酸残基可以包含K或R。
ELABELA多肽可以包含序列SEQ ID NO:163(XXXXXXXXCXXXRCXXXHSRVPFP)，在其中，X代表氨基酸残基，其中，SEQ ID NO:163的1位或2位包含碱性氨基酸残基对。碱性氨基酸残基对可以包含KK、KR、RK或RR。
ELABELA多肽可以包含选自由以下组成组的序列：SEQ ID NO:2至SEQ ID NO:18。ELABELA多肽可以包含如SEQ ID NO:2所示的人ELABELA序列。
ELABELA多肽还可以包含信号传导序列。该信号传导序列可以包含SEQ ID NO:19中示出的人ELABELA信号传导序列。
ELABELA多肽可以包含选自由以下组成组的序列：SEQ ID NO:20至SEQ ID NO:36。ELABELA多肽可以包含如SEQ ID NO:20所示的人ELABELA序列。
参考序列CXXXRCXXXHSRVPFP(SEQ ID NO：1)中的编号，ELABELA多肽可以包含位于1位和6位或在1位和6位附近的半胱氨酸残基之间的分子内共价键。一个或两个半胱氨酸残基可以包含具有巯基的还原半胱氨酸。
ELABELA多肽可以包含位于31位的碱性残基的突变。ELABELA多肽可以是使得位于31位的碱性残基突变成中性残基。ELABELA多肽可以是使得位于31位的K或R突变成A或G。
ELABELA多肽可以包含位于32位的碱性残基的突变。ELABELA多肽可以是使得位于32位的碱性残基突变成中性残基。ELABELA多肽可以是使得位于32位的K或R突变成A或G。
参考如SEQ ID NO:20所示的人ELABELA序列的位置编号，ELABELA多肽可以包含R31G、R31A、K31G或K31A取代。参考如SEQ ID NO:20所示的人ELABELA序列的位置编号，ELABELA多肽可以包含R32G、R32A、K32G或K32A取代。
ELABELA核酸可用于诊断个体中的先兆子痫、检测个体对先兆子痫的易感性、治疗、缓解或预防个体中的先兆子痫。
ELABELA核酸可以包含能够编码如本发明第1方面所述的ELABELA多肽的序列。
ELABELA核酸可以包含SEQ ID NO.37至SEQ ID NO:46中任一个所示的核酸序列。ELABELA核酸可以包含人ELABELA核酸序列SEQ ID NO：37或SEQ ID NO：42。
据本发明的第2方面提供了包含ELABELA核酸的载体，诸如表达载体；包含这种载体或核酸的宿主细胞，诸如细菌、真菌或酵母细胞，或包含这种宿主细胞、这种载体或这种核酸的转基因非人类动物，优选哺乳动物诸如小鼠，用于诊断个体中的先兆子痫、检测个体对先兆子痫的易感性、治疗、缓解或预防个体中的先兆子痫。
根据本发明的第3方面，我们提供了能够调节ELABELA多肽的表达、量或活性的任何组合的shRNA或siRNA分子，该shRNA或siRNA分子优选包含选自由以下组成组的序列：SEQID NO：47至SEQ ID NO：51，用于诊断个体中的先兆子痫、检测个体对先兆子痫的易感性、治疗、缓解或预防个体中的先兆子痫。
作为本发明的第4方面，提供了抗体或其抗原结合片段，用于诊断个体中的先兆子、检测个体对先兆子痫的易感性、治疗、缓解或预防个体中的先兆子痫。
抗体或其抗原结合片段能够特异性结合于包含序列CMPLHSRVPFP(SEQ ID NO：52)的多肽。
抗体或其抗原结合片段能够特异性结合于包含序列QRPVNLTMRRKLRKHNC(SEQ IDNO：53)的多肽。
抗体或其抗原结合片段能够特异性结合于包含序列QRPVNLTMRRKLRKHNCLQRRCMPLHSRVPFP(SEQ ID NO：2)的多肽。
抗体或其抗原结合片段能够特异性结合于ELABELA多肽。
抗体或其抗原结合片段能够特异性结合于由ELABELA核酸编码的ELABELA多肽。
抗体或其抗原结合片段能够特异性结合于包含SEQ ID NO：1-36中任何序列的ELABELA多肽。
抗体或其抗原结合片段能够特异性结合于上述中的一种或多种。
抗体或其抗原结合片段还可以任选地包含标签。
根据本发明的第5方面，我们提供了ELABELA多肽或ELABELA核酸在制备用于治疗或防止先兆子痫的药物中的用途。
ELABELA多肽可以包括如本发明第1方面所述的多肽。
ELABELA核酸可以包括如本发明第2方面所述的核酸。
在第6方面，本发明提供了一种测定可用于治疗或缓解先兆子痫的化合物的方法。
该方法可以包括使ELABELA多肽与候选化合物接触，并进行测定以确定候选化合物是否结合于ELABELA多肽。
该方法可以包括使ELABELA多肽与候选化合物接触，并进行测定以确定候选化合物是否调节ELABELA多肽的活性。
该方法可以包括使表达ELABELA多肽的细胞与候选化合物接触，并进行测定以确定候选化合物是否引起细胞中或细胞的ELABELA多肽的表达、量或活性的升高或降低。
该方法还可以包括分离或合成如此鉴定的目标化合物。
在本发明的第7方面，提供了一种治疗、缓解或预防个体中的先兆子痫的方法。该方法可包括向个体给药治疗有效量的ELABELA。
根据本发明的第8方面，我们提供了一种诊断个体中的先兆子痫或检测个体对先兆子痫的易感性的方法。该方法可以包括检测个体中或个体的ELABELA的表达、量或活性的调节，优选下调。
该方法可以是使得个体中或个体的ELABELA的下调表明个体中的先兆子痫或个体对先兆子痫的易感性或倾向性。
ELABELA
EABELA也被称为ela、ELA、Apelin受体早期内源性配体、APELA、Toddler和Ende。
正如该术语在本文中使用的，“ELABELA”指ELABELA多肽以及ELABELA核酸。这些将在下文进一步详细描述。
先兆子痫
先兆子痫或先兆子痫(PE)是一种妊娠病，其特征在于高血压和尿液中的大量蛋白质。这种病通常发生在妊娠晚期，并随着时间的推移而恶化。
在严重的疾病中，可能存在红细胞分解、血小板计数低、肝功能受损、肾功能障碍、肿胀、肺部液体引起的呼吸短促或视力障碍。
先兆子痫增加了母体和婴儿的不良后果的风险。如果不进行治疗，可能会导致癫痫发作，此时将其称为子痫。
原因和风险因素
目前不清楚先兆子痫的确切原因。危险因素包括未生育(从未生育)、糖尿病、肾病、慢性高血压、先兆子痫病史、先兆子痫家族史、高龄产妇年龄(>35岁)、肥胖、抗磷脂抗体综合征、多胎妊娠、肾脏捐献、亚临床甲状腺功能减退症或甲状腺抗体和胎盘异常，诸如胎盘缺血。
虽然先兆子痫的确切原因尚不清楚，但有强有力的证据表明，使妇女易患先兆子病的主要原因是异常植入的胎盘。
异常植入可能源于母体免疫***对胎盘的响应，特别是妊娠期缺乏既定的免疫耐受。这种异常植入的胎盘可能引起子宫和胎盘灌注不良，产生缺氧状态和氧化应激增加，以及抗血管生成蛋白质与炎症介质一起释放到母体血浆中。这一系列事件的主要结果是全身性内皮功能障碍。
内皮功能障碍被认为导致与先兆子痫相关的高血压和许多其他症状以及并发症。
诊断标准
在产前护理期间对先兆子痫进行常规筛查。孕妇发生以下情形时诊断为先兆子痫：
·在先前正常血压的个体中，在妊娠20周后至少相隔四至六小时的两个单独的读数，血压≥140mm Hg收缩压或≥90mm Hg舒张压。
·在妊娠20周前开始出现原发性高血压的女性中，诊断标准为：≥30mm Hg收缩压(SBP)的升高或≥15mm Hg舒张压(DBP)的升高。
·蛋白尿≥0.3克(300mg)或24小时尿样中的更多的蛋白质或SPOT尿蛋白与肌酸酐比率≥0.3或尿液试纸读数为1+或更高(只有在其他定量方法不可用时才应使用试纸读数)。
除非另有说明，本发明的实施将采用化学、分子生物学、微生物学、重组DNA和免疫学的常规技术，这些技术在本领域普通技术人员的能力范围内。这些技术在文献中有解释。参考，例如，J.Sambrook,E.F.Fritsch,and T.Maniatis,1989,Molecular Cloning:ALaboratory Manual,Second Edition,Books 1-3,Cold Spring Harbor LaboratoryPress；Ausubel,F.M.等人(1995 and periodic supplements；Current Protocols inMolecular Biology,ch.9,13,and 16,John Wiley&Sons,New York,N.Y.)；B.Roe,J.Crabtree,and A.Kahn,1996,DNA Isolation and Sequencing:Essential Techniques，John Wiley&Sons；J.M.Polak and James O’D.McGee,1990,In Situ Hybridization:Principles and Practice；Oxford University Press；M.J.Gait(Editor),1984,Oligonucleotide Synthesis:A Practical Approach,Irl Press；D.M.J.Lilley andJ.E.Dahlberg,1992,Methods of Enzymology:DNA Structure Part A:Synthesis andPhysical Analysis of DNA Methods in Emymology,Academic Press；UsingAntibodies:A Laboratory Manual:Portable Protocol NO.I by Edward Harlow,DavidLane,Ed Harlow(1999,Cold Spring Harbor Laboratory Press,ISBN 0-87969-544-7)；Antibodies:A Laboratory Manual by Ed Harlow(Editor),David Lane(Editor)(1988,Cold Spring Harbor Laboratory Press,ISBN 0-87969-314-2),1855，Handbook of DrugScreening,edited by Ramakrishna Seethala,Prabhavathi B.Fernandes(2001,NewYork,NY,Marcel Dekker,ISBN 0-8247-0562-9)；以及Lab Ref:A Handbook of Recipes,Reagents,and Other Reference Tools for Use at the Bench,Edited Jane Roskamsand Linda Rodgers,2002,Cold Spring Harbor Laboratory,ISBN 0-87969-630-3。这些一般文本中的每一个通过引用并入本文。
附图说明
图1A示出了Ela的外显子2两侧有loxp位点并用Zp3-cre重组酶去除以产生缺少肽编码区的ElaΔ等位基因。
图1B示出了野生型和ElaΔcDNA转录子的示意图。
图1C示出了Ela基因组基因座和cDNA的半定量PCR。引物位置用A和B表示。
图1D示出了来自杂交和ElaΔ/Δ(♀)×Ela+/Δ 正交的ElaΔ/Δ在断奶时具有降低的孟德尔表示。χ2＝卡方检验；％P＝外显率；L＝窝数。
图1E描绘了Ela+/Δel0.5胚胎与野生型胚胎无法区分。
图1F示出了43％(n＝17/39)的ElaΔ/Δ胚胎在el0.5显示出心血管缺陷。
图1G示出了14％(n＝3/22)的ApjΔ/Δ胚胎在el0.5显示出心血管缺陷。
图1H描绘了具有正常卵黄血管的Ela+/Δel0.5卵黄囊。
图1I示出了ElaΔ/Δ胚胎在el0.5具有呈皱褶外观的无血管卵黄囊。
图1J示出了ApjΔ/Δ胚胎在el0.5具有呈皱褶外观的无血管卵黄囊。
图1K示出了Ela+/Δ、ElaΔ/Δ(L)和ApjΔ/Δ(M)el0.5卵黄囊脉管***的CD31/Pecam染色。
图1N示出了Ela+/Δ、ElaΔ/Δ(O)和ApjΔ/Δ(P)el0.5头部脉管***的CD31染色。
图1Q示出了Ela+/Δ、ElaΔ/Δ(R)和ApjΔ/Δ(S)心脏的CD31(绿色)和平滑肌肌动蛋白(SMA)染色。
图1T示出了e8胚胎中Ela的原位杂交(ISH)，示出了在发育中的心脏管和后肠上方的区域中的mRNA定位。
图1U示出了在蜕膜(deciduum)内e8胚胎中的Ela和Apj(V)的RNAScope。
图1W示出了卵黄囊层中e8胚胎中Ela和Apj(X)的RNAScope。en＝内胚层；me＝中胚层。
图2A示出了在e9.5，在绒毛尿囊胎盘的绒毛膜板(cp)中表达了Ela。
图2B示出了在e9.5，在胎儿尿囊内皮细胞中表达了Apj。
图2C示出了在el0.5，胎盘迷路(1b)中的Ela表达限于合胞体滋养层。
图2D示出了在el0.5，胎盘迷路(1b)中的Apj表达限于与合胞体滋养层相邻的内皮细胞。
图2E示出了Ela可以通过免疫组织化学(IHC)在el0.5迷路切片上检测，其中在血窦和胎儿内皮(插图，箭头)衬里合体滋养层中染色最明显。
图2F示出了这种染色虽然是弥漫性的，但在el0.5ElaΔ/Δ胎盘中被消除了。
图2G示出了ELISA检测在指定的妊娠时间点收获的母体血清中的Ela。(GD＝妊娠日；NP＝非妊娠)
图2H示出了收获自野生型母体的GD11母体血清的，或与野生型父体交配的ElaΔ/Δ母体的GD11母体血清的，或与ElaΔ/Δ父体交配的ElaΔ/Δ母体的GD11母体血清的ELISA，表明Ela通过母体和胚胎区室两者对母体循环的贡献。
图2I示出了Ela+/Δ和ElaΔ/Δ(J)el0.5胎盘的H&E染色示出了ElaΔ/Δ胎盘的不良侵入和血管新生。(al＝尿囊)
图2K示出了Ela+/Δ和ElaΔ/Δ(L)el0.5的CD31/Pecam染色，示出了迷路中胎儿内皮细胞的缺乏。
图2M示出了el0.5胎盘的定量，示出了与Ela+/Δ同窝相比，ElaΔ/Δ中的迷路厚度显著减少。当比较野生型和ElaΔ/Δ胎盘时，这种减少在el8.5持续存在。后者来自两个不同的窝，当发育方差比el0.5小得多时，这在el8.5是可能的。误差条＝SEM；统计＝非配对的2尾T检验。
图3A示出了来自与指定基因型的父体交配的指定基因型的GD15妊娠母体(♀)的24小时尿蛋白/肌酸酐比率。误差条＝SEM；统计＝非配对的2尾T检验。
图3B示出了来自GD18野生型母体(与野生型父体交配的)和ElaΔ/Δ母体(与ElaΔ/Δ父体交配的)的肾小球切片的(B-I)苏木精染色切片(左)和透射电子显微照片(TEM，从左到右增加放大倍数1Kx、5Kx、10Kx)，示出了在没有Ela的情况下内皮增生和内皮沉积。(刻度条：2μm)。
图3J示出了在指定的孕龄时野生型母体(与野生型父体交配的)和ElaΔ/Δ母体(与ElaΔ/Δ父体交配的)的尾袖收缩血压测量值。误差条＝SEM；统计＝非配对的2尾t检验；虚线表示分娩日。
图3K示出了以ΔBP形式计算的根据(C)的BP读数(指定妊娠日的BP-同一母体的基线非妊娠BP)。误差条＝SEM；统计＝非配对的2尾t检验。
图3L示出了GD7植入了含有PBS或ELA肽的输液泵的野生型母体(与野生型父体交配的)和ElaΔ/Δ母体(与ElaΔ/Δ父体交配的)的收缩压测量值。误差条＝SEM；统计＝非配对的2尾t检验。
图3M示出了在GD15和GD17测量的(E)中受试者的24小时尿蛋白/肌酸酐比率。误差条＝SEM；统计＝非配对的2尾t检验。
图3N示出了在它们的妊娠晚期正常雌性与先兆子痫雌性的血浆ELA水平的ELISA测量值。
图4A示出了ELA和APELIN(B)以与通过β-抑制蛋白募集测量值的相同效力活化APJ(APLNR)。
图4C示出了ELA和APELIN在APJ活化方面没有明显的协同作用。
图4D示出了在APJ活化方面ELA不拮抗APELIN。
图4E示出了具有指定基因型的妊娠母体的ΔBP测量值和在GD16和GD18的交配。数据是结合图3D-WT中显示的数据获得的，并且此处再次显示了ElaΔ/Δ读数用于与其余基因型进行比较。误差条＝SEM；统计＝非配对的2尾t检验。
图4F示出了在GD15下测量的(A)中受试者的24小时尿蛋白/肌酸酐比率。数据是结合图3A-WT中显示的数据获得的，并且此处再次显示了ElaΔ/Δ读数用于与其余基因型进行比较。误差条＝SEM。
图4A说明了一种工作模型：Ela，通过胎盘合胞体向Apj传导信号在胎儿内皮细胞上表达而产生的，以促进正常的胎盘形成，从而防止妊娠期间先兆子痫的症状。Apelin和Apj似乎对先兆子痫症状有增强作用。在胎儿内皮细胞通过Apj信号传导产生的Apelin存在的情况下，Ela的丢失是胎盘缺陷的原因，导致妊娠母体易患先兆子痫。
图5A.鼠Ela的外显子3两侧为loxp位点，并用cre重组酶切除以产生缺少ELA成熟肽(MP)编码区的ElaΔ等位基因。
图5B.来自wt和ElaΔ等位基因的cDNA的示意图。SP＝信号传导肽
图5C.来自gDNA和cDNA的Ela基因座的半定量PCR。引物位置如图5B所示。
图5D.在el0.5和断奶时来自交叉和ElaΔ/Δ(母体)×Ela+/Δ(父体)正交的基因型分布。％P＝外显率；L＝窝数。数据使用具有1自由度的卡方检验测试，结果与预期分布有显著差异。
图5E至图5G。在el0.5，Ela+/Δ胚胎与wt无法区分，而43％(n＝17/39)的ElaΔ/Δ胚胎和14％(n＝3/22)的ApjΔ/Δ胚胎显示出心血管缺陷以及宫内生长受限。刻度条：1mm。
图5H至图5J.在el0.5，Ela+/Δ卵黄囊具有正常的卵黄血管，而受影响的ElaΔ/Δ和ApjΔ/Δ胚胎具有呈皱褶外观的无血管卵黄囊。
刻度条：1mm。
图5K至图5M.Ela+/Δ、ElaΔ/Δ和ApjΔ/Δ卵黄囊的CD31染色揭示了突变体胚胎中的成熟不良的脉管***。刻度条：50μm。
图5N至图5P.在el0.5，Ela+/Δ、ElaΔ/Δ和ApjΔ/Δ头部脉管***的CD31染色。刻度条：300μm。
图5Q至图5S.Ela+/Δ、ElaΔ/Δ和ApjΔ/Δ心脏的CD31(绿色)和平滑肌肌动蛋白(SMA)染色。刻度条：300μm。
图5T.Ela在e8的原位杂交，示出了在发育中心脏管(ht)和索神经铰链(cnh)上方的区域中的mRNA定位。刻度条：200μm。
图5U至图5V.在它的蜕膜内的e8胚胎中的Ela和Apj的RNAScope，示出了在原始前肠(fg)和后肠(hg)内胚层中的表达。箭头指示绒毛膜滋养层中Ela表达的开始。刻度条：100μm。
图5W至图5X.在附着于下层蜕膜的e8卵黄囊层中，Ela和Apj的RNAScope。EN＝内胚层；me＝中胚层。刻度条：40μm。
图6A.早期小鼠植入前期胚胎的半定量RT-PCR示出没有Elabela(Ela)的母体表达，其首先在2细胞期的胚胎中检测到。Oct4和Nanog分别是已知为母体-合子和仅合子的对照基因。
图6B.用于去除小鼠Ela外显子3的同源重组策略。
图6C.Southern印迹验证图6B中所示的靶向载体的正确***。克隆32和43被正确靶向并用于胚泡注射。由于不希望的整合或重排，克隆45被排除在外。
图6D.合子和母体-合子ElaΔ/Δ小鼠的表型异质性和分类。
图6E至图6J.背主动脉和流出道的CD31内皮染色。
图6E、图6F和图6G.以及节间血管。
图6H、图6I和图6J.ElaΔ/Δ、Ela+/Δ和ApjΔ/Δ胚胎。刻度条：300μm。
图6K和图6L.伴有心脏水肿和一般生长迟缓的Ela+/Δ胚胎和严重受影响的ElaΔ/Δ胚胎的代表性图像。刻度条：1mm。
图6M和图6N.e8.5胎孕体绒毛膜板中Ela和阴性对照的RNAscope。箭头示出了绒毛膜外胚层中Ela表达的最初迹象。刻度条：50μm。
图7A和图7B.在e9，在绒毛尿囊胎盘的绒毛膜板(cp)中表达了Ela，而其受体Apj在胎儿尿囊内皮细胞中表达。d＝蜕膜。刻度条：1mm。
图7C和图7D.在el0.5，胎盘迷路(lb)中的Ela表达限于合体滋养层(ST)，而Apj表达限于与ST相邻的内皮细胞。刻度条：100μm。
图7C'和图7D'.更高的放大倍数示出在母体血液空间(mbs)周围的合体滋养层(ST)中的Ela表达，以及在胎儿血液空间(fbs)衬里内皮细胞(EC)中的Apj表达。刻度条：200μm。
图7E和图7F.在细胞衬里血液空间(箭头)中的wt el0.5迷路中而非ElaΔ/Δ胎盘中，ELA可以通过使用ELa特异性抗体(αC)的免疫组织化学检测。刻度条：20μm。
图7G.在指定的妊娠日((GD)n＝在每个妊娠时间点测定的小鼠数目)收获的母体血清中，ELISA检测循环的ELA。NP＝非妊娠。误差条表示3个独立实验的SEM。使用单向ANOVA(红色星号)和双样品Studen’s t检验(黑色星号)对数据进行了检验。
图7H.收获自wt母体的，或者与wt父体交配的ElaΔ/Δ母体的，或与ElaΔ/Δ父体交配的ElaΔ/Δ母体的GD10.5母体血清的ELISA，表明在妊娠期间循环ELA的母体和合子起源。n＝在每个妊娠时间点测定的小鼠数目。误差条表示3个独立实验的SEM。使用单向ANOVA对数据进行了检验。在图7G和图7H中，在母体合子敲除中检测到的ELA归因于测定背景。
图7I和图7J.Ela+/Δ和ElaΔ/Δel0.5胎盘的H&E染色，示出ElaΔ/Δ胎盘的不良侵入和血管生成。刻度条：250μm；al＝尿囊。
图7K和图7L.el0.5Ela+/Δ和ElaΔ/Δ的CD31/Pecam-1(血小板内皮细胞粘附因子-1)染色，示出迷路中胎儿内皮细胞的缺乏。刻度条：100μm。
图7M和图7N.el0.5Ela+/Δ和ElaΔ/Δ胎盘的Alpp(胎盘碱性磷酸酶)染色，示出迷路中滋养层的缺乏。刻度条：50μm。*p<0.05，**p<0.01根据所示的显著性检验。
图8A.Ela的RNAscope示出在8.5妊娠日子宫蜕膜(de)组织周围的子宫内膜基质中的表达。刻度条：1mm。
图8B.Ela的RNAscope示出来自10.5妊娠日小鼠的肾脏集合管中的表达。刻度条50μm。
图8C.在指定的妊娠时间点，妊娠小鼠肾脏中mRNA水平的qPCR。每个点表示来自一只小鼠的左肾。使用单向ANOVA，每个妊娠时间点的平均值没有显著差异。
图8D.在el0.5，Ela+/Δ和ElaΔ/Δ胎盘迷路的厚度(从绒毛膜板的底部到海绵体滋养层的顶部)。
图8E.在e18.5，Ela+/Δ和ElaΔ/Δ胎盘迷路的厚度(从绒毛膜板的底部到海绵体滋养层的顶部)。每列代表一个胎盘，点代表来自每个胎盘的等间距的外侧至内侧的测量值。使用具有6个自由度的双样品t检验来检验来自两种基因型的胎盘的平均值。
图8F和图8G.凋亡标记物激活在el0.5的Ela+/Δ和ElaΔ/Δ胎盘迷路中的半胱天冬酶3的免疫荧光。刻度条：200μm。
图8H和图8I.在el0.5的Ela+/Δ和ElaΔ/Δ胎盘迷路中有丝***标记物磷酸化的H3的免疫荧光。刻度条：200μm。
图8J和图8K.el0.5Ela+/Δ和ElaΔ/Δ胎盘迷路中合体滋养层标记物合胞体-1(Syncytin-1)的免疫组织化学。刻度条：50μm。
除非另有说明，数据表示为平均值±s.e.m.，双样品Student's T-检验的**p<0.01，***p<0.001。
图9A.e9.5wt与ElaΔ/Δ迷路的RNA-seq实验的示意图。
图9B和图9C.对ElaΔ/Δ(1级和3级)的GSEA分析示出ElaΔ/Δ迷路中，甚至在形态正常的1级胎盘中，缺氧响应和促血管生成基因的上调。
图9D.ElaΔ/Δ迷路中基因上调的基因本体分析。红色是富含端细胞的通道。P值来自具有Bonferroni校正的二项分布。
图9E.GSEA检测1级ElaΔ/Δ迷路中内皮端细胞基因的上调。
图9F.在ElaΔ/Δ迷路中对端细胞富集和血管生成基因进行qPCR验证(n＝wt；n＝6ElaΔ/Δ)。误差条表示2个独立实验的SEM。
图9G.从含有母体中央管的内侧平面获取的e9.5胎盘颤动切片上的Esm1免疫荧光。点线标志着过渡区的位置。al＝尿囊，lb＝迷路，d＝蜕膜。刻度条：40μm。
图9H.每个切片的Esm1+细胞数(n＝6wt；n＝7ElaΔ/Δ；每个切片代表不同的胎盘)。
图9I.图9H中定量的每个胎盘样品中Esm1+细胞的第75百分位积分密度。数据以任意单位表示(A.U.)。
图9J.Ela+/+；Apln+/Δ和ElaΔ/Δ；Apln+/Δ胎盘的β-半乳糖苷酶(AplnΔ等位基因中的LacZ转基因)染色，表明在ElaΔ/Δ迷路中Apln表达增加。刻度条：300μm。双样品Student’s t检验的*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。
图10A.在图9A中通过RNAseq对其胎盘进行分析的胚胎中CD31标记内皮细胞的全部抗体染色。刻度尺：250μm。
图10B.对来自wt、1级和3级ElaΔ/Δ胎盘的RNA-seq数据的主要成分分析。
图10C和图10D.与wt相比，在ElaΔ/Δ1级(图10C)和3级(图10D)胎盘中上调基因的GSEA分析示出GSEA标志性缺氧数据集中的基因富集。
图10E和图10F.el0.5Ela+/Δ和ElaΔ/Δ胎盘迷路和过渡区中缺氧标记物Hiflα的免疫组织化学。刻度尺：150μm。
图10G和图10H.在el0.5Ela+/Δ和ElaΔ/Δ胎盘迷路中的羟脯氨酸Hiflα的免疫荧光。刻度条：100μm。de＝蜕膜；TGC＝滋养层巨细胞；lb＝迷路。
图10I和图10J.Ela+/+；Apln+/Δ和ElaΔ/Δ；Apln+/Δ胎盘的β-半乳糖苷酶(β-gal)(AplnΔ等位基因中的LacZ转基因)染色，从胎侧观察，表明在ElaΔ/Δ迷路中Apln表达增加。
图10K、图10L、图10M和图10N.在el0.5Ela+/Δ(图10K)和1级(图10L，图10M)和3级(N)ElaΔ/Δ卵黄囊横截面中，有丝***标记物磷酸化的H3的免疫荧光。刻度条：200μm。
图10O.来自Ela+/Δ和ElaΔ/Δ同窝对照胚胎的各个卵黄囊在el0.5处的蛋白质印迹，示出增加的有丝***标记物磷酸化的H3。
图11A.来自与指定基因型的父体交配的指定基因型的GD15妊娠母体(♀)的尿蛋白/肌酸酐比率。每个点代表单个的小鼠。误差条表示SEM。
图11B.在指定的孕龄时，wt母体(n＝7，与wt父体交配的)和ElaΔ/Δ母体(n＝5，与ElaΔ/Δ父体交配的)的重复尾袖收缩血压测量值。点线表示分娩日。误差条表示SEM。2向ANOVA分析检测到时间和基因型之间的显著相互作用，F(7,49)＝2.074；p＝0.0413，即当妊娠进展时，与对照相比，ElaΔ/Δ雌性发育显著更高的收缩压。星号表示在指示的GD时wt和ElaΔ/Δ之间的双样品非配对t-检验的显著性。
图11C.来自图11B的BP读数以ΔBP的形式计算(指定GD同一母体的BP-基线非妊娠BP)。每个点代表一只小鼠的平均超过20个读数的BP；误差条表示SEM。2向ANOVA检验检测到wt和ElaΔ/Δ小鼠之间的平均ΔBP的统计学显著差异，F(1,16)＝11.28，p＝0.0100。星号表示双样品非配对t检验的显著性。
图11D.通过剖腹产收集的e18.5的幼仔体重。每个点代表一只幼仔。误差条表示SEM。
图11E.在GD15测量的在GD7植入了含有PBS(实心符号)或合成ELA肽(空心符号)的输液泵的wt母体(与wt父体交配的)(黑色方块)和ElaΔ/Δ母体(与ElaΔ/Δ父体交配的)(红色圆圈)的尿蛋白/肌酸酐比率。每个点代表一只小鼠；误差条表示SEM。
图11F.在GD14、16和18测量的图11E中受试者的收缩压ΔBP测量值。每个点代表一只小鼠；误差条表示SEM。2向ANOVA检验检测到ElaΔ/Δ+PBS和ElaΔ/Δ+ELA小鼠之间的平均ΔBP的统计学显著差异，F(1,16)＝6.938，p＝0.0300。星号表示双样品非配对t检验的显著性。
图11G.在人早期(8+3周)胎盘FFPE切片上，用αC生物素化的ELA特异性抗体对ELA进行IHC。刻度条＝200μm。
图11H.使用在浓度增加的合成ELA肽的存在下培养的Jar绒毛膜癌细胞的Transwell侵入测定。每个点代表3个孔的平均值；误差条表示3个独立实验的SEM。
图11I.工作模型：通过ST细胞向APJ传导信号在胎儿内皮细胞(EC)上表达产生的小鼠ELA，以促进正常的胎盘血管生成。ELA还进入母体循环，在其中***性地作用以防止妊娠期先兆子痫的症状。Tb＝滋养层。除非另有说明，数据表示为平均值±s.e.m.，双样品Student’s t检验的*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。
图12A.与wt相比，ElaΔ/Δ1级胎盘中上调基因的GSEA分析示出干扰素(IFN)响应通道中基因的富集。
图12B、图12C、图12D、图12E、图12F和图12G.来自18.5妊娠日wt和ElaΔ/Δ小鼠的肾皮质切片的以1000×拍摄(图12B，图12E)；5000×(图12C，图12F)和15000×(图12D，图12C)的透射电子显微照片。刻度条＝2μm。
图12H.来自非怀孕wt和ElaΔ/Δ雌性的尿液的蛋白质/肌酸酐比率。使用Mann-Whitney检验对组平均值进行检验，并且未发现显著差异。
图12I.对血管生成基因的mRNA的e9.5(顶部)和el8.5(底部)胎盘进行的qPCR分析。每个点代表单个胎盘。数据表示为平均值±s.e.m.，并且使用双样品Student's T-检验来检验平均值，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。
图12J、图12K和图12L.在15和18妊娠日(GD)收获的来自wt和ElaΔ/Δ妊娠母体的母体血浆对于可溶性VEGFR1(sFlt1)(图12J和图12K)和Vegfa(图12L)的ELISA测量值。使用Mann Whitney检验对组平均值进行检验，未发现显著差异。
图12M和图12N.对于妊娠晚期人胎盘的绒毛膜绒毛中ELA的RNAscope，伴随H&E染色以示出合体滋养层(ST)中ELA的表达。刻度条：50μm。
图13A.16和18妊娠日(GD)的wt和AplnΔ/Δ妊娠小鼠的Δ收缩BP。通过非配对的双样品Student’s t检验无显著差异。
图13B.在GD15收集的来自wt和AplnΔ/Δ妊娠小鼠的12小时尿液样品的蛋白质/肌酸酐比率。在图13A和图13B两者中，wt小鼠的数据点还显示在图11A和图11C中，因为这些小鼠是与ElaΔ/Δ小鼠相同的组群的一部分并且一起测定。
图13C.在wt和ElaΔ/Δe9.5胎盘(顶部子图)与wt和AplnΔ/Δe9.5胎盘(底部子图)中的Esm1、Igfbp3和Igfbp5内皮端细胞富集标记物和血管生成基因的qPCR分析。每个点代表一个胎盘。
图13D.移植来自前融合体节阶段胚胎的尿囊(阶段匹配的对照和治疗)并用2.5μM的ELA或APLN-36或两者处理12小时，然后进行Esm1基因表达的数字液滴(dd)PCR分析。每个点代表一个外植体，并且基于每个外植体的体节阶段用配对的Student's t检验对平均值进行了检验。
图13E和图13E’.对于参与缺氧响应Foxoa3和Hif3a的基因，4-体节(4s)阶段尿囊外植体的ddPCR分析。
图13F.用PBS(-)或2.5μM的ELA(+)处理的4s和5s阶段尿囊外植体中Apln mRNA水平的ddPCR分析。在图13E和图13F中，每个点代表一个外植体。
图13G.来自wt和ElaΔ/Δe9.5胎盘的Apln mRNA水平的qPCR分析。红色是来自具有3级表型的胚胎的胎盘，而黑点代表来自形态正常胚胎的胎盘。
图13H、图13H’、图13I和图13I’.在母体蜕膜内的e9胚胎中的Ela(图13H，图13H’)和Apln(图13I，图13I’)的RNAScope。刻度条：200μm(顶部)，100μm(底部)。在所有子图中，除非另有说明，数据表示为平均值±s.e.m.，非配对双样品Student's T-检验的*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。
图14A.在el8.5获得的具有各自处理的wt和ElaΔ/Δ小鼠的周期性希夫酸(PAS)基膜染色。刻度条：20μm。
图14B和图14C.在el8.5获得的具有各自处理的wt和ElaΔ/Δ小鼠的肾脏中纤维蛋白原的免疫荧光染色。刻度条：图14B中的0.1mm以及图14C中的15μm。每个子图代表来自不同小鼠的切片。
序列表
SEQ ID NO：1示出了ELABELA多肽特征序列的序列。SEQ ID NO：2示出了人ELABELA成熟多肽的序列。SEQ ID NO：3示出了白足鼠属(Peromyscus)ELABELA成熟多肽的序列。SEQID NO：4示出了家鼠属(Rattus)ELABELA成熟多肽的序列。
SEQ ID NO：5示出了小鼠(Mus)ELABELA成熟多肽的序列。SEQ ID NO：6示出了黄牛属(Bos)ELABELA成熟多肽的序列。SEQ ID NO：7示出了猪属(Sus)ELABELA成熟多肽的序列。SEQ ID NO：8示出了犰狳属(Dasypus)ELABELA成熟多肽的序列。SEQ ID NO：9示出了帚尾袋貂属(Trichosurus)ELABELA成熟多肽的序列。
SEQ ID NO：10示出了原鸡属(Gallus)ELABELA成熟多肽的序列。SEQ ID NO：11示出了中国壁虎属(Gekko)ELABELA成熟多肽的序列。SEQ ID NO：12示出了安乐蜥属(Anolis)ELABELA成熟多肽的序列。SEQ ID NO：13示出了非洲爪蟾属(Xenopus)ELABELA成熟多肽的序列。SEQ ID NO：14示出了美西螈属(Ambystoma)ELABELA成熟多肽的序列。
SEQ ID NO:15示出了青鳉属(Oryzias)ELABELA成熟多肽的序列。SEQ ID NO：16示出了叶吻银鲛属(Callorhinchus)ELABELA成熟多肽的序列。SEQ ID NO：17示出了太平洋鲑属(Oncorhynchus)ELABELA成熟多肽的序列。SEQ ID NO：18示出了丹鱼属(Danio)ELABELA成熟多肽的序列。
SEQ ID NO：19示出了人ELABELA信号传导序列的序列。SEQ ID NO：20示出了具有信号传导序列(粗体)的人ELABELA多肽的序列。SEQ ID NO：21示出了具有信号传导序列(粗体)的白足鼠属ELABELA多肽的序列。SEQ ID NO：22示出了具有信号传导序列(粗体)的家鼠属ELABELA多肽的序列。
SEQ ID NO：23示出了具有信号传导序列(粗体)的小鼠ELABELA多肽的序列。SEQID NO：24示出了具有信号传导序列(粗体)的黄牛属ELABELA多肽的序列。SEQ ID NO：25示出了具有信号传导序列(粗体)的猪属ELABELA多肽的序列。SEQ ID NO：26示出了具有信号传导序列(粗体)的犰狳属ELABELA多肽的序列。SEQ ID NO：27示出了具有信号传导序列(粗体)的帚尾袋貂属ELABELA多肽的序列。
SEQ ID NO：28示出了具有信号传导序列(粗体)的原鸡属ELABELA多肽的序列。SEQID NO：29示出了具有信号传导序列(粗体)的中国壁虎属ELABELA多肽的序列。SEQ ID NO：30示出了具有信号传导序列(粗体)的安乐蜥属ELABELA多肽的序列。SEQ ID NO：31示出了具有信号传导序列(粗体)的非洲爪蟾属ELABELA多肽的序列。SEQ ID NO：32示出了具有信号传导序列(粗体)的美西螈属ELABELA多肽的序列。
SEQ ID NO：33示出了具有信号传导序列(粗体)的青鳉属ELABELA多肽的序列。SEQID NO：34示出了具有信号传导序列(粗体)的叶吻银鲛属ELABELA多肽的序列。SEQ ID NO：35示出了具有信号传导序列(粗体)的太平洋鲑属ELABELA多肽的序列。SEQ ID NO：36示出了具有信号传导序列(粗体)的丹鱼属ELABELA多肽的序列。
EQ ID NO：37示出了人(智人(Homo sapiens))ELABELA cDNA序列。SEQ ID NO：38示出了小鼠(小家鼠(Mus musculus))ELABELA cDNA序列。SEQ ID NO：39示出了鸡(原鸡(Gallus gallus))ELABELA cDNA序列。SEQ ID NO：40示出了非洲爪蟾属(非洲爪蟾(Xenopus laevis))ELABELA cDNA序列。SEQ ID NO：41示出了斑马鱼(斑马鱼(Daniorerio))ELABELA cDNA序列。
SEQ ID NO：42示出了人(智人(Homo sapiens))ELABELA基因组序列。SEQ ID NO：43示出了小鼠(小家鼠(Mus musculus))ELABELA基因组序列。SEQ ID NO：44示出了鸡(原鸡(Gallus gallus))ELABELA基因组序列。SEQ ID NO：45示出了非洲爪蟾属(Xenopuslaevis)ELABELA基因组序列。SEQ ID NO：46示出了斑马鱼(Danio rerio)ELABELA基因组序列。
SEQ ID NO：47示出了抗-ELABELA shRNA序列A。SEQ ID NO：48示出了抗-ELABELAshRNA序列B。SEQ ID NO：49示出了抗-ELABELA shRNA序列C。SEQ ID NO：50示出了抗-ELABELA shRNA序列D。SEQ ID NO：51示出了抗-ELABELA shRNA序列E。
具体实施方式
先兆子痫的治疗和诊断
实施例证明了ELABELA在胎盘血管新生中的作用。
我们的数据示出了，Ela缺失导致了由于心血管缺陷引起的妊娠中期死亡。我们进一步清楚地证明了Ela是胎盘血管新生所需的胎盘激素，并且在妊娠期间Ela的丢失使其易患先兆子痫。
最后，我们示出了Ela和Api缺失对蛋白尿和妊娠期血压有相反的影响。
因此，ELABELA、其变体、同源物、衍生物和片段，以及调节剂诸如激动剂和拮抗剂，可用于治疗、预防或缓解个体中的先兆子痫。
ELABELA多肽
我们描述了ELABELA多肽用于诊断个体中的先兆子痫、检测个体对先兆子痫的易感性、治疗、缓解或预防个体中的先兆子痫。
在最广泛的意义上，ELABELA多肽是包括“ELABELA特征”序列的多肽。ELABELA多肽还可以包括一种或多种活性，诸如如本文件中所述的天然ELABELA多肽的生物活性。从序列比对中可以清楚地看出，诸如在国际专利公开WO 2015/084264中所述的，许多ELABELA特征是可能的。
例如，ELABELA特征可以包含序列HSRVPFP(SEQ ID NO：57)。因此，如本文件中所用的，术语“ELABELA多肽”可以指包含HSRVPFP序列的多肽(SEQ ID NO：58)。包含SEQ ID NO：58的ELABELA多肽可以包括天然ELABELA多肽的一种或多种生物学活性，诸如维持如本文所述的干细胞的自动更新、多能性或两者。
或者，或另外，ELABELA特征可包含序列RCXXXHSRVPFP(SEQ ID NO：59)。因此，在这个意义上，术语“ELABELA多肽”可以指包含RCXXXHSRVPFP序列(SEQ ID NO：59)的多肽，其中在其中X代表任何氨基酸残基。包含SEQ ID NO：59的ELABELA多肽可以包含天然ELABELA多肽的一种或多种生物学活性，诸如维持如本文所述的干细胞的自动更新、多能性或两者。
然而，在优选的实施方式中，ELABELA特征意指序列CXXXRCXXXHSRVPFP(SEQ IDNO：1)，在其中X代表氨基酸残基。因此，如在本文件中使用的术语“ELABELA多肽”意指包含CXXXRCXXXHSRVPFP(SEQ ID NO：1)的序列，在其中X代表氨基酸残基。包含SEQ ID NO：1的ELABELA多肽可以包含天然ELABELA多肽的一种或多种生物学活性，诸如维持如本文所述的干细胞的自动更新、多能性或两者。
出于本文件的目的，术语“ELABELA多肽”还应理解为涵盖这种多肽的任何片段、同源物、变体或衍生物。这种ELABELA片段、同源物、变体和衍生物在本文件的其他地方进一步详细描述。这种ELABELA片段、同源物、变体和衍生物可以包含天然ELABELA多肽的一种或多种生物活性，诸如维持如本文所述的干细胞的自动更新、多能性或两者。
因此，本文件涵盖的ELABELA多肽可以包含来自在其中表达ELABELA的任何脊椎动物物种的特征或保守区域(参考例如国际专利公开WO 2015/084264的图1C)。这些特征和保守区域如SEQ ID NO：2至SEQ ID NO：18和SEQ ID NO：60至76所示。
ELABELA多肽可包含来自任何物种的特征或保守区域，例如：人序列CLQRRCMPLHSRVPFP(SEQ ID NO：60)；白足鼠属序列CFRRRCVPLHSRVPFP(SEQ ID NO：61)；家鼠属序列CFRRRCISLHSRVPFP(SEQ ID NO：62)；小鼠序列CFRRRCIPLHSRVPFP(SEQ ID NO：63)；黄牛属序列CLQRRCMPLHSRVPFP(SEQ ID NO：64)；猪属序列CLQRRCMPLHSRVPFP(SEQ IDNO：65)；犰狳属序列CFQRRCMPLHSRVPFP(SEQ ID NO：66)；帚尾袋貂属序列CPQRRCMPLHSRVPFP(SEQ ID NO：67)；原鸡属ELABELA多肽序列CSHRRCMPLHSRVPFP(SEQ IDNO：68)；中国壁虎属序列CSHRRCMPLHSRVPFP(SEQ ID NO：69)；安乐蜥属序列CSHRRCMPLHSRVPFP(SEQ ID NO：70)；非洲爪蟾属序列CFLKRCIPLHSRVPFP(SEQ ID NO：71)；美西螈属序列CSLRRCMPLHSRVPFP(SEQ ID NO：72)；青鳉属序列CLHRRCMPLHSRVPFP(SEQ IDNO：73)；叶吻银鲛属序列CWHRRCLPFHSRVPFP(SEQ ID NO：74)；太平洋鲑属序列CPHRRCMPLHSRVPFP(SEQ ID NO：75)；丹鱼属序列CPKKRCLPLHSRVPFP(SEQ ID NO：76)。
因此，ELABELA多肽可以包含来自人ELABELA的特征，即CXXXRCXXXHSRVPFP(SEQ IDNO：1)可以包含CLQRRCMPLHSRVPFP(SEQ ID NO：60)。它可以包含来自小鼠ELABELA的特征，即CXXXRCXXXHSRVPFP(SEQ ID NO：1)可以包含CFRRRCIPLHSRVPFP(SEQ ID NO：63)。
包含CLQRRCMPLHSRVPFP(SEQ ID NO：60)或CFRRRCIPLHSRVPFP(SEQ ID NO：63)的ELABELA多肽可包含天然ELABELA多肽的一种或多种生物学活性，诸如维持如本文所述的干细胞的自动更新、多能性或两者。
在ELABELA多肽中还可以存在许多其他残基。例如，ELABELA多肽可以包含ELABELA特征序列上游的一个或多个碱性残基。
特别地，ELABELA多肽可以包含位于ELABELA特征序列CXXXRCXXXHSRVPFP(SEQ IDNO：1)上游7位或其附近的碱性残基。碱性残基可以包含赖氨酸残基或精氨酸残基。
因此，ELABELA多肽可包含序列(R/K)XXXXXXCXXXRCXXXHSRVPFP(SEQ ID NO：77)，在其中X代表任何氨基酸。
包含(R/K)XXXXXXCXXXRCXXXHSRVPFP(SEQ ID NO：77)的ELABELA多肽可以包含天然ELABELA多肽的一种或多种生物学活性，诸如维持如本文所述的干细胞的自动更新、多能性或两者。
或者，或另外，ELABELA多肽可以包含位于ELABELA特征序列CXXXRCXXXHSRVPFP(SEQ ID NO：1)上游8位或其附近的碱性残基。碱性残基可以包含赖氨酸残基或精氨酸残基。
因此，ELABELA多肽可包含序列(R/K)XXXXXXXCXXXRCXXXHSRVPFP(SEQ ID NO：78)，在其中X代表任何氨基酸。包含(R/K)XXXXXXXCXXXRCXXXHSRVPFP(SEQ ID NO：78)的ELABELA多肽可以包含天然ELABELA多肽的一种或多种生物学活性，诸如维持如本文所述的干细胞的自动更新、多能性或两者。
如上所述，ELABELA多肽可以包含位于ELABELA特征序列CXXXRCXXXHSRVPFP(SEQID NO：1)上游7位和8位或其附近的碱性残基对，即它可以包含序列(R/K)(R/K)XXXXXXCXXXRCXXXHSRVPFP(SEQ ID NO：79)。
显而易见的是，当ELABELA多肽包含信号传导序列(见下文)时，ELABELA特征序列CXXXRCXXXHSRVPFP(SEQ ID NO：1)上游8位对应于人ELABELA序列(SEQ ID NO：20)的31位并且ELABELA特征序列CXXXRCXXXHSRVPFP(SEQ ID NO：1)上游7位对应于人ELABELA序列(SEQID NO：20)的32位。
ELABELA多肽可以包含选自由SEQ ID NO：2至SEQ ID NO：18组成的组的序列。ELABELA多肽可以包含如SEQ ID NO：2所示的人ELABELA序列。它可以包含如SEQ ID NO：5所示的小鼠ELABELA序列。
在一些实施方式中，ELABELA多肽包含信号传导肽或信号传导序列。本领域技术人员将理解，信号传导肽的存在将允许ELABELA肽从细胞中输出和分泌。本领域技术人员还将知道如何将此类信号传导序列改造成本文件中描述的ELABELA多肽序列。
在本文件中为了方便，包含信号传导序列的ELABELA多肽可以称为“全长”多肽。它们可以通过将任何已知的信号传导序列，包括本文件中公开的ELABELA信号传导序列，包括在待产生的ELABELA多肽中来产生。
ELABELA多肽可以包含来自任何合适物种的ELABELA信号传导序列，例如人MRFQQFLFAFFIFIMSLLLISG(SEQ ID NO：19)；白足鼠属MRFQHYFLVFFIFAMSLLFITE(SEQ IDNO：80)；家鼠属MRFQPLFWVFFIFAMSLLFITE(SEQ ID NO：81)；小鼠MRFQPLFWVFFIFAMSLLFISE(SEQ ID NO：82)；黄牛属MRFHQFFLLFVIFMLSLLLIHG(SEQ ID NO：83)；猪属MRFRQFFLVFFIFMMNLLLICG(SEQ ID NO：84)；犰狳属MKFQQFFYVFFVFIMSLLLING(SEQ ID NO：85)；帚尾袋貂属MRFQLLFFLFLFFTMGILLIDG(SEQ ID NO：86)；原鸡属MRLRRLLCWFLLLVSLLPAAA(SEQ ID NO：87)；中国壁虎属MRLQLLLLTCFLILTGVLLGNG(SEQ IDNO：88)；安乐蜥属MRLQQLLLTWFLLLAGALLING(SEQ ID NO：89)；非洲爪蟾属MDFQKLLYALFFILMSLLLING(SEQ ID NO：90)；美西螈属MKWQKLLAILFWILMGALLVNG(SEQ IDNO：91)；青鳉属MRVWNLLYLLLLLAAALAPVFS(SEQ ID NO：92)；或叶吻银鲛属MRFQHLLHIILLLCTSLLLISG(SEQ ID NO：93)。
它可以例如包含如SEQ ID NO：19所示的人ELABELA信号传导序列，即MRFQQFLFAFFIFIMSLLLISG。
本文公开了“全长”或“天然”ELABELA多肽的实例，并且包括如SEQ ID NO：20至SEQID NO：36所示的任何序列。在一些实施方式中，ELABELA多肽可包含或由以下组成：具有或包含SEQ ID NO：20所示序列的人ELABELA多肽。它可包含小鼠ELABELA多肽或由小鼠ELABELA多肽组成，诸如具有SEQ ID NO：23的序列。
“ELABELA多肽”可以包含天然ELABELA多肽的一种或多种活性，诸如天然ELABELA多肽的一种或多种生物活性。这种ELABELA活性在本文件的其他地方详细描述，并且包括例如细胞(诸如干细胞)维持自我更新或多能性，或两者的能力。
如上所述，这些多肽中的任何、一些或全部的同源物变体及其衍生物也包括在术语“ELABELA多肽”中。
例如，ELABELA多肽可以包含具有巯基的一个或多个还原半胱氨酸。还原半胱氨酸可出现在ELABELA氨基酸序列中的任何位置。例如，参考序列CXXXRCXXXHSRVPFP(SEQ IDNO：1)中的编号，位于1位的半胱氨酸可以包含具有巯基的还原半胱氨酸。位于6位的半胱氨酸可以类似地包含具有巯基的还原半胱氨酸。位于1位和6位的半胱氨酸残基可以如此修饰。参考序列CXXXRCXXXHSRVPFP(SEQ ID NO：1)中的编号，ELABELA多肽可以包含1位和6位处的半胱氨酸残基之间的分子内共价键。
上述位置编号分别对应于人ELABELA多肽序列MRFQQFLFAFFIFIMSLLLISGQRPVNLTMRRKLRKHNCLQRRCMPLHSRVPFP(SEQ ID NO：20)中的位置编号39和43。
作为另一实例，ELABELA多肽可以包含本文件中讨论的任何序列的一个或多个突变，诸如称为“ELABELA多肽”的那些。这种突变序列在本文件的其他地方进一步详细描述。
参考如SEQ ID NO：20所示的人ELABELA序列的位置编号，包括了ELABELA多肽，该ELABELA多肽包含位于其序列31位的碱基残基突变。位于31位的碱基残基可突变为中性残基。例如，位于31位的精氨酸或赖氨酸残基可突变为丙氨酸或甘氨酸残基。
参考如SEQ ID NO：20所示的人ELABELA序列的位置编号，ELABELA多肽可以包含位于32位碱基残基的突变。例如，位于32位的碱基残基可以突变为中性残基。因此，位于32位的精氨酸或赖氨酸残基可突变为丙氨酸或甘氨酸残基。
ELABELA多肽可包含突变体，该突变体中上述两种碱性残基都是这样突变的。因此，ELABELA多肽可以包含R31G、R31A、K31G或K31A取代。取代可包括R32G、R32A、K32G或K32A。因此，ELABELA多肽可包含以下任一序列：(R/K)(A/G)XXXXXXCXXXRCXXXHSRVPFP(SEQID NO：94)、(A/G)(R/K)XXXXXXCXXXRCXXXHSRVPFP(SEQ ID NO：95)或(A/G)(A/G)XXXXXXCXXXRCXXXHSRVPFP(SEQ ID NO：96)。
如上所述，位置编号参考如SEQ ID NO：20所示的人ELABELA序列的位置编号。
应当理解，参考如SEQ ID NO：20所示的人ELABELA序列的位置编号，31位和32位分别对应于参考ELABELA特征序列CXXXRCXXXHSRVPFP(SEQ ID NO：1)的位置编号的8位和7位。
由于本文件中描述的每种ELABELA多肽序列必须包含ELABELA特征序列，本领域技术人员将能够确定他所拥有的ELABELA多肽序列内任何特定残基的位置编号。也就是说，根据本文件中以及他所拥有的其他资源中可获得的信息，参考如SEQ ID NO：20所示的人ELABELA序列，或参考ELABELA多肽中包含的ELABELA特征序列CXXXRCXXXHSRVPFP(SEQ IDNO：1)的位置编号，技术人员将能够在任何ELABELA多肽序列中确定任何特定残基的位置编号。
ELABELA多肽可用于多种方式，例如，向患有或怀疑患有先兆子痫的个体给药，用于其治疗。
它们还可以用于产生或筛选抗ELABELA试剂，诸如特异性ELABELA结合剂，特别是抗ELABELA抗体。这些在本文件的其他地方进一步详细描述。
可以检测ELABELA多肽的表达以诊断或检测先兆子痫。
我们专门提供了包含序列CXXXRCXXXHSRVPFP(SEQ ID NO：1)的ELABELA多肽片段，在其中X是一/任何氨基酸残基，并且其中多肽片段维持干细胞的自动更新、多能性或两者。
该片段可以是不包含序列SEQ ID NO：60-76这样的。
分子内共价键可以存在于SEQ ID NO：1的1位和6位的半胱氨酸残基之间，或位于SEQ ID NO：1的1位和6位的一个或两个半胱氨酸残基可以包含具有巯基的还原半胱氨酸，或两者。
ELABELA多肽片段还可以包含标签。标签可以包含放射性同位素。放射性同位素可包含125I。
多肽片段可以衍生的。
ELABELA多肽片段还可以包含信号传导序列。信号传导序列可以包含SEQ ID NO：19。
该片段还可以包含位于SEQ ID NO：1的N末端的七个另外的氨基酸。ELABELA多肽片段可以具有SEQ ID NO：162(XXXXXXXCXXXRCXXXHSRVPFP)的序列。SEQ ID NO：162的1位可包含碱性氨基酸残基。位于2-6位、8-10位和13-15位的X可以包含一/任何氨基酸残基。多肽片段可以能够维持干细胞的自我更新、多能性或两者。
片段可以是不包含序列SEQ ID NO：181-197这样的。
位于1位的碱性残基可以选自K或R。
该片段还可以包含位于SEQ ID NO：1的N末端的八个另外的氨基酸。ELABELA多肽片段可以具有SEQ ID NO：163(XXXXXXXXCXXXRCXXXHSRVPFP)的序列。SEQ ID NO：163的1位可以包含碱性氨基酸残基。位于2-7位、9-11位和14-17位的X可以包含一/任何氨基酸残基。多肽片段可以能够维持干细胞的自我更新、多能性或两者。
片段可以是不包含序列SEQ ID NO：164-180这样的。
位于1位的碱性残基可以选自K或R。
该片段还可以包含位于SEQ ID NO：1的N末端的八个另外的氨基酸。ELABELA多肽片段可以包含SEQ ID NO：163(XXXXXXXXCXXXRCXXXHSRVPFP)的序列。SEQ ID NO：163的1位和2位可以包含碱性氨基酸残基对。位于3-7位、10-12位和15-17位的X可以包含一/任何氨基酸残基。多肽片段可以能够维持干细胞的自我更新、多能性或两者。
片段可以是不包含序列SEQ ID NO：164-180这样的。
位于1位和2位的碱性残基对可选自KK、KR、RK和RR。
多肽
“多肽”是指包含通过肽键或修饰的肽键彼此连接的两个或更多个氨基酸的任何肽或蛋白质，即肽等价物。“多肽”是指短链，通常称为肽、寡肽或寡聚体，并且较长的链，通常称为蛋白质。多肽可以含有除基因编码的20种氨基酸之外的氨基酸。
“多肽”包括通过天然过程(诸如翻译后加工)或通过本领域熟知的化学修饰技术修饰的氨基酸序列。这些修饰在基础文本和更详细的专著以及大量研究文献中有很好的描述。修饰可以发生在多肽的任何地方，包括肽骨架、氨基酸侧链和氨基或羧基末端。应当理解，相同类型的修饰可以在给定多肽中的几个位点以相同或不同的程度存在。而且，给定的多肽可含有许多类型的修饰。
由于泛素化，ELABELA多肽可以是分支的，并且它们可以是环状的，具有或不具有支化。环状的、支化的和支化环状的多肽可以由翻译后天然过程产生，或者可以通过合成方法产生。修饰包括乙酰化、酰化、ADP-核糖基化、酰胺化、黄素的共价连接、血红素部分的共价连接、核苷酸或核苷酸衍生物的共价连接、脂质或脂质衍生物的共价连接、磷脂酰肌醇的共价连接、交联、环化、二硫键形成、去甲基化、共价交联的形成、胱氨酸的形成、焦谷氨酸的形成、甲酰化、γ-羧化、糖基化、GPI锚形成、羟基化、碘化、甲基化、肉豆蔻酰化、氧化、蛋白水解加工、磷酸化、异戊烯化、外消旋化、硒化、硫酸化、转移-RNA介导的氨基酸添加到蛋白质(诸如精氨酸化)和泛素化。参考，例如，Proteins-Structure and MolecularProperties，2nd Ed.，T.E.Creighton，W.H.Freeman and Company，New York，1993和Wold，F.，PosttranslationalProtein Modifications：Perspectives and Prospects，pgs.1-12in Posttranslational Covalent Modification of Proteins，B.C.Johnson，Ed.，Academic Press，New York，1983；Seifter等人，“Analysis for protein modificationsand nonprotein cofactors”，Meth Enzymol(1990)182：626-646和Rattan等人，“ProteinSynthesis：Posttranslational Modifications and Aging”，Ann NY Acad Sci(1992)663：48-62。
ELABELA多肽可以包含具有SEQ ID NO：53序列的片段。这种片段可以包含位于N-末端的焦谷氨酸。如本领域普通技术人员所理解的，当谷氨酸或谷氨酰胺位于多肽的N-末端时，诸如SEQ ID NO：53的ELABELA多肽片段，它们可以自发环化形成焦谷氨酸。在一些实施方式中，具有SEQ ID NO：53序列的片段还可以包含标签。
术语“多肽”包括本领域已知的各种合成肽变体，诸如反转D肽。肽可以是抗原决定簇和/或T细胞表位。肽在体内可以具有免疫原性。肽可以能够在体内诱导中和抗体。
当应用于ELABELA时，所得氨基酸序列可以具有一种或多种活性，诸如与ELABELA多肽(例如人ELABELA多肽)相同的生物活性。ELABELA多肽活性在本文件的其他地方详细描述。例如，ELABELA同源物可以能够维持细胞(诸如干细胞)的自我更新或多能性或两者。
特别地，术语“同源物”旨在覆盖关于结构和/或功能的同一性，使得所得氨基酸序列具有ELABELA活性。关于序列同一性(即相似性)，可以存在至少70％，诸如至少75％，诸如至少85％，诸如至少90％的序列同一性。可能存在至少95％，诸如至少98％的序列同一性。这些术语还涵盖衍生自氨基酸的多肽，该氨基酸是ELABELA核酸序列的等位基因变体。
其他ELABELA多肽
ELABELA变体、同源物、衍生物和片段还可以用于本文所述的方法和组合物中。
与ELABELA相关的术语“变体”、“同源物”、“衍生物”或“片段”包括来自序列的一个(或多个)氨基酸的取代、变体、修饰、替换、缺失或添加，或者对序列的一个(或多个)氨基酸的取代、变体、修饰、替换、缺失或添加。除非上下文另有规定，否则对“ELABELA”的引用包括对ELABELA的这些变体、同源物、衍生物和片段的引用。这些ELABELA变体、同源物、衍生物和片段可以包含天然ELABELA多肽的一种或多种生物活性，诸如维持如本文所述的干细胞的自我更新、多能性或两者。
如本文所用，“缺失”定义为核苷酸或氨基酸序列的变化，在其中分别缺少一个或多个核苷酸或氨基酸残基。
如本文所用，“***”或“添加”是核苷酸或氨基酸序列的变化，与天然存在的物质相比，其分别引起了一个或多个核苷酸或氨基酸残基的添加。
如本文所用，“取代”分别是由不同核苷酸或氨基酸取代一个或多个核苷酸或氨基酸产生的。
如本文所述的ELABELA多肽还可以具有氨基酸残基的缺失、***或取代，这产生沉默变化(silent change)并得到功能等同的氨基酸序列。
可以基于残基的极性、电荷、溶解度、疏水性、亲水性和/或两亲性质的相似性来进行有意的氨基酸取代。例如，带负电荷的氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸；带正电荷的氨基酸包括赖氨酸和精氨酸；以及具有相似亲水性值的不带电的极性头部基团的氨基酸包括亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、甘氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸。
可以进行保守取代，例如根据下表。第二列相同块中和第三列相同行中的氨基酸可以彼此取代：
ELABELA多肽还可以包含异源氨基酸序列，通常在N-末端或C-末端，诸如N-末端。
异源序列可以包括影响细胞内或细胞外蛋白质靶向的序列(诸如前导序列)。异源序列还可以包括增加ELABELA多肽的免疫原性的序列和/或促进多肽的鉴定、提取和/或纯化的序列。另一种可以使用的异源序列是聚氨基酸序列，诸如可以是N-末端的聚组氨酸。可以使用至少10个氨基酸的聚组氨酸序列，诸如至少17个氨基酸但少于50个氨基酸。
ELABELA多肽可以是“成熟”蛋白质的形式，或者可以是较大蛋白质的一部分，诸如融合蛋白质。还可以包括另外的氨基酸序列，另外的氨基酸序列含有分泌或前导序列、前序列、有助于纯化的序列(诸如多个组氨酸残基)，或在重组生产期间用于稳定性的另外的序列。
信号传导序列(分泌序列或前导序列)可以包含序列MRFQQFLFAFFIFIMSLLLISG(SEQ ID NO：19)。包含这种信号传导序列的ELABELA多肽的实例是如SEQ ID NO：20所示的全长人ELABELA多肽序列。
如本文所述的ELABELA多肽可以通过重组方法使用已知技术来制备。然而，它们也可以通过合成方法使用技术人员熟知的技术来制备，诸如使用化学方法，诸如固相合成。
这种多肽还可以作为融合蛋白质产生，例如用于帮助提取和纯化。融合蛋白质配偶体的实例包括谷胱甘肽-S-转移酶(GST)、6xHis(SEQ ID NO：97)、GAL4(DNA结合和/或转录激活结构域)和β-半乳糖苷酶。
还可能方便的是在融合蛋白质配偶体和目标蛋白质序列之间包括蛋白水解切割位点(诸如凝血酶切割位点)以允许去除融合蛋白质序列。融合蛋白质可以是不妨碍目标蛋白质序列功能的蛋白质。
ELABELA多肽可以是以基本上分离的形式。该术语意指从自然状态通过人类手段的改变。如果天然存在“分离的”组合物或物质，则其已经从其原始环境改变了或去除了，或改变和去除两者。例如，天然存在于活着的动物中的多核苷酸、核酸或多肽不是“分离的”，但是分离自其天然状态的共存材料的相同多核苷酸、核酸或多肽是“分离的”，正如该术语在本文中使用的。
然而，应当理解，ELABELA蛋白质可以与载体或稀释剂混合，载体或稀释剂不会干扰蛋白质的预期目的，并且ELABELA蛋白质仍然被认为是基本上分离的。ELABELA多肽还可以是基本上纯化的形式，在这种情况下，它通常包含制剂形式的蛋白质，其中，该制剂中超过90％，例如95％、98％或99％的蛋白质是ELABELA多肽。
通过比对来自不同物种的ELABELA序列，可以确定氨基酸序列的哪些区域在不同物种之间是保守的(“同源区域”)，以及哪些区域在不同物种之间不同(“异源区域”)。
这种比对的实例在国际专利公开WO 2015/084264的图1C中示出。
ELABELA多肽可以包含对应于同源区域至少一部分的序列。
同源区域在至少两个物种之间显示高度同源性。这两个物种可以包括例如人和另一物种，诸如：白足鼠属、家鼠属、小鼠、黄牛属、猪属、犰狳属、帚尾袋貂属、原鸡属、中国壁虎属、安乐蜥属、非洲爪蟾属、美西螈属、青鳉属、叶吻银鲛属、太平洋鲑属或丹鱼属。
例如使用上述测试同源区域可以在氨基酸水平上显示出至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的同一性。
同源区域的实例在本文件中列出，并且可以包括例如HSRVPFP(SEQ ID NO：58)、RCXXXHSRVPFP(SEQ ID NO：59)或CXXXRCXXXHSRVPFP(SEQ ID NO：1)。这种同源区域可以包含天然ELABELA多肽的一种或多种生物活性，诸如维持如本文所述的干细胞的自我更新、多能性或两者。
可用于如本文件中其他地方进一步详细解释的治疗策略中的肽包含对应于同源区域的序列。或者，ELABELA肽可以包含对应于至少部分异源区域的序列。异源区域显示出至少两个物种之间的低度同源性。
ELABELA同源物
公开使用的ELABELA多肽包括从任何来源获得的同源序列，例如相关的病毒/细菌蛋白质、细胞同源物和合成肽以及它们的变体或衍生物。
因此，多肽还包括编码来自其他物种的ELABELA同源物的那些，其他物种包括动物诸如哺乳动物(例如小鼠、大鼠或兔)，尤其是灵长类动物，更特别是人类。更具体地，同源物包括人类同源物。
在本文件的上下文中，同源序列被认为包括在氨基酸水平上具有至少15、至少20、至少25、至少30、至少40、至少50、至少60、至少70、至少80或至少90％(诸如至少95或至少98％)同一性的氨基酸序列，例如，超过至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59或60或更多个氨基酸具有与ELABELA序列相关的序列。
特别地，通常应该考虑已知的对蛋白质功能重要的序列的那些区域而不是非重要的相邻序列的同源性。当考虑来自远缘相关生物的同源序列时，这尤其重要。
ELABELA中这种区域的实例在以下序列中以下划线示出：
(R/K)(R/K)XXXXXXCXXXRCXXXHSRVPFP(SEQ ID NO：79)
尽管也可以根据相似性(即具有相似化学性质/功能的氨基酸残基)考虑同源性，但在本文件的上下文中，同源性可以用序列同一性表示。
同源性比较可以通过目测进行，或者更通常地，借助于容易获得的序列比较程序进行。这些公开的和可商购的计算机程序可以计算两个或更多个序列之间的％同一性。
可以在连续序列上计算％同一性，即一个序列与另一个序列比对，并且一个序列中的每个氨基酸直接与另一个序列中的相应氨基酸比较，一次一个残基。这称为“无空位”比对。通常，这种无空位比对仅在相对较少的残基(例如少于50个连续氨基酸)上进行。
虽然这是一种非常简单且一致的方法，但是它没有考虑到，例如，在另一对相同的序列中，一个***或缺失会导致随后的氨基酸残基对不齐，从而可能导致当进行全局比对时，％同源性大大降低。因此，大多数序列比较方法设计成考虑可能的***和缺失而不过度降低整体同源性评分而产生最佳比对。这是通过在序列比对中***“空位”以试图最大化局部同一性或相似性来实现的。
然而，这些更复杂的方法将“空位罚分”分配给比对中出现的各个空位，使得对于相同数量的相同氨基酸，反映两个比较序列之间更高相关性的具有尽可能少空位的序列比对获得的分数将高于具有许多空位的序列比对。通常使用“仿射空位成本”，其对于空位的存在收取相对高的成本并且对空位中的每个后续残基收取较小的罚分。这是最常用的空位评分***。高空位罚分当然会产生空位更少的最佳比对。大多数比对程序允许修改空位罚分。然而，当使用这种软件进行序列比较时，可以使用默认值。例如，当使用GCG WisconsinBestfit软件包(参考本文件的其他部分)时，对于氨基酸序列，默认空位罚分为一空位-12和每个延伸-4。
因此，最大％同源性的计算首先需要产生考虑到空位罚分的最佳比对。用于进行这种比对的合适的计算机程序是GCG Wisconsin Bestfit软件包(University ofWisconsin,U.S.A；Devereux等人,1984,Nucleic Acids Research 12:387)。可以进行序列比较的其他软件的实例包括但不限于BLAST软件包(参考Ausubel等人，1999ibid-Chapter18)，FASTA(Altschul等人，1990，J.Mol.Biol.，403-410)和GENEWORKS比较工具套件。BLAST和FASTA两者都可用于离线和在线搜索(参考Ausubel等人，1999ibid,pages 7-58 to 7-60)。可以使用GCG Bestfit程序。
虽然可以根据同一性来测量最终的％同源性，但是比对程序本身通常不基于所有的成对比较或非成对比较。相反，通常使用缩放的相似性评分矩阵，基于化学相似性或进化距离将分数分配至各个成对比较。常用的这种矩阵的实例是BLOSUM62矩阵-用于BLAST程序套件的默认矩阵。GCG Wisconsin程序通常使用公共默认值或自定义符号比较表(如果提供)(有关详细信息，参考用户手册)。可以使用用于GCG软件包的公共默认值，或者在其他软件的情况下，可以使用默认矩阵诸如BLOSUM62。
一旦软件产生了最佳比对，就可以计算％同源性，诸如％序列同一性。软件通常将此作为序列比较的一部分并生成数值结果。
与氨基酸序列相关的术语“变体”或“衍生物”包括来自该序列的一个(或多个)氨基酸的任何取代、变体、修饰、替换、缺失或添加，或者对该序列的一个(或多个)氨基酸的任何取代、变体、修饰、替换、缺失或添加，使得所得的氨基酸序列保持与未修饰序列基本相同的活性，诸如具有与ELABELA多肽至少相同的活性。这些ELABELA变体和衍生物可以包含天然ELABELA多肽的一种或多种生物活性，诸如维持如本文所述的干细胞的自我更新、多能性或两者。
具有本文公开的ELABELA氨基酸序列的多肽，或其片段或同源物可以修饰用于本文所述的方法和组合物。通常，进行修饰以维持序列的生物活性。可以进行氨基酸取代，例如进行1、2或3至10、20或30个取代，使得修饰的序列保留未修饰序列的生物活性。或者，可以进行修饰以故意灭活本文所述多肽的一个或多个功能结构域。氨基酸取代可以包括使用非天然存在的类似物，例如以增加治疗性给药的多肽的血浆半衰期。
ELABELA片段
用于本文所述方法和组合物的多肽还包括上文鉴定的任何ELABELA多肽全长序列的片段。片段可以包含至少一个表位。鉴定表位的方法是本领域熟知的。片段通常将包含至少5个氨基酸，诸如至少6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55或更多个氨基酸。
包括的片段包含或者由以下组成：5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60或更多个来自相关ELABELA氨基酸序列的残基。
这种ELABELA片段可以包含天然ELABELA多肽的一种或多种生物活性，诸如维持如本文所述的干细胞的自我更新、多能性或两者。
我们进一步描述了包含如本文所述ELABELA多肽的一部分的肽。因此，包括了ELABELA的片段及其同源物、变体或衍生物。肽的长度可以在2至60个氨基酸之间，诸如在4至50个氨基酸之间。肽可以衍生自如本文公开的ELABELA多肽，例如通过使用合适的酶(诸如胰蛋白酶)消化。或者，肽、片段等可以通过重组方法制备，或通过化学方法(诸如固相合成)以合成方法合成。
因此，我们描述了制备ELABELA多肽或片段的方法，该方法包括在细胞中表达编码包含CXXXRCXXXHSRVPFP(SEQ ID NO：1)的序列的核酸，在其中X是一或任何氨基酸残基，并且在其中多肽片段维持干细胞的自我更新、多能性或两者。
表达编码包含CXXXRCXXXHSRVPFP(SEQ ID NO：1)的序列的核酸的细胞可以是细菌、真菌或酵母细胞。
包含CXXXRCXXXHSRVPFP(SEQ ID NO：1)的序列可选自由SEQ ID NO：2至36组成的组。
我们还描述了制备ELABELA多肽或片段的方法，该方法包括使用化学合成来产生包含CXXXRCXXXHSRVPFP(SEQ ID NO：1)的合成多肽或具有SEQ ID NO：53序列的片段，在其中X是或任何氨基酸残基，并且在其中多肽片段维持干细胞的自动更新、多能性或两者。
ELABELA多肽或片段、衍生物、同源物或变体可以包含标签。标签可以包含放射性同位素。放射性同位素可以包含125I。ELABELA多肽或片段、衍生物、同源物或变体可以是衍生的。
这种ELABELA多肽、片段、衍生物、同源物和变体可用于产生探针以优先检测ELABELA表达，例如，通过抗这种片段产生的抗体。预期这些抗体特异性结合于ELABELA，并且可用于本文公开的诊断和治疗方法。
ELABELA及其片段、同源物、变体和衍生物可以通过重组方法来制备。然而，它们也可以通过合成方法使用技术人员熟知的技术诸如固相合成来制备。蛋白质还可以作为融合蛋白质产生，例如以帮助提取和纯化。融合蛋白质配偶体的实例包括谷胱甘肽-S-转移酶(GST)、6xHis(SEQ ID NO：97)、GAL4(DNA结合和/或转录激活结构域)和β-半乳糖苷酶。还可能方便的是在融合蛋白质配偶体和目标蛋白质序列之间包括蛋白水解切割位点以允许去除融合蛋白质序列。融合蛋白质可以是不妨碍目标序列的蛋白质功能的蛋白质。蛋白质还可以通过纯化来自动物细胞的提取物来获得。
本文公开的ELABELA多肽、变体、同源物、片段和衍生物可以是基本上分离的形式。应当理解，这种多肽可以与载体或稀释剂混合，载体或稀释剂不会干扰蛋白质的预期目的，并且这种多肽仍然被认为是基本上分离的。ELABELA变体、同源物、片段或衍生物还可以是基本上纯化的形式，在这种情况下，它通常包含制剂形式的蛋白质，其中在制剂中超过90％，例如95％、98％或99％的蛋白质是蛋白质。
本文公开的ELABELA多肽、变体、同源物、片段和衍生物可以用显示性标签标记。显示性标签可以是允许多肽等被检测的任何合适的标签。合适的标记包括放射性同位素(例如，125I)、酶、抗体、多核苷酸和接头(诸如生物素)。标记的多肽可用于诊断程序(诸如免疫测定)以确定样品中多肽的量。多肽或标记的多肽还可以用于血清学或细胞介导的免疫测定，以使用标准方案检测动物和人中对所述多肽的免疫反应性。
本文公开的(任选标记的)ELABELA多肽、变体、同源物、片段和衍生物还可以固定在固相上，例如免疫测定孔或试纸的表面。这种标记和/或固定的多肽可以与合适的试剂、对照、说明书等一起包装在合适容器中的试剂盒中。这种多肽和试剂盒可用于通过免疫测定检测多肽或其等位基因或物种变体的抗体的方法中。
免疫测定方法是本领域熟知的，并且通常包括：(a)提供包含可被抗所述蛋白质的抗体结合的表位的多肽；(b)在允许形成抗体-抗原复合物的条件下将生物样品与所述多肽一起孵育；以及(c)确定是否形成包含所述多肽的抗体-抗原复合物。
本文公开的ELABELA多肽、变体、同源物、片段和衍生物可用于体外或体内细胞培养***，以研究其相应基因及其同源物在细胞功能中的作用，包括它们在疾病(诸如先兆子痫)中的功能。例如，可以将截短的或修饰的多肽引入细胞中以破坏细胞中发生的正常功能。
本文公开的ELABELA多肽、变体、同源物、片段和衍生物还可以用于诊断个体中的先兆子痫、检测个体对先兆子痫的易感性、治疗、缓解或防止个体中的先兆子痫。
可以通过原位表达来自重组表达载体(参考本文件的其他地方)的多肽将多肽引入细胞中。表达载体任选地携带诱导型启动子以控制多肽的表达。
预期使用适当的宿主细胞，诸如昆虫细胞或哺乳动物细胞，以提供这种翻译后修饰(例如肉豆蔻酰化，糖基化，截短，失活(lapidation)和酪氨酸、丝氨酸或苏氨酸磷酸化)，根据可能的需要以提供重组表达产物的最佳生物学活性。
在其中表达本文公开的ELABELA多肽、变体、同源物、片段和衍生物的这种细胞培养***可以用于测定***中以鉴定干扰或增强细胞中多肽功能的候选物质。
我们描述了制备ELABELA多肽或其片段的方法，该方法包括：(a)在细胞中表达编码包含CXXXRCXXXHSRVPFP(SEQ ID NO：1)的序列的核酸，在其中X是一/任何氨基酸残基，并且，在其中多肽片段维持干细胞的自我更新、多能性或两者；或(b)使用化学合成以产生包含CXXXRCXXXHSRVPFP(SEQ ID NO：1)的合成多肽或其片段或具有SEQ ID NO：53序列的片段，在其中X是一/任何氨基酸残基，并且，在其中多肽片段维持干细胞的自我更新、多能性或两者。
表达编码包含CXXXRCXXXHSRVPFP(SEQ ID NO：1)的序列的核酸的细胞可以包括细菌、真菌或酵母细胞。
包含CXXXRCXXXHSRVPFP(SEQ ID NO：1)的序列可选自由SEQ ID NO：2-36组成的组。
ELABELA多肽或其片段还包括包含标签。标签可以包含放射性同位素。放射性同位素可以包含125I。
多肽或其片段可以是衍生的。
ELABELA核酸
本文描述的方法和组合物可以利用ELABELA多核苷酸、ELABELA核苷酸和ELABELA核酸，以及任何它们的变体、同源物、衍生物和片段，用于诊断个体中的先兆子痫、检测个体对先兆子痫的易感性，治疗、缓解或预防个体中的先兆子痫。
术语“ELABELA多核苷酸”、“ELABELA核苷酸”和“ELABELA核酸”可以互换使用，并且，应理解为具体包括cDNA和基因组ELABELA序列两者。这些术语还旨在包括能够编码ELABELA多肽和/或其片段、衍生物、同源物或变体的核酸序列。这些术语还旨在包括核酸序列，其是具有本文件中公开的特定序列(例如如在序列表中所列出的)的ELABELA多肽的片段、衍生物、同源物或变体。
当提及ELABELA核酸时，应将其视为能够编码ELABELA多肽的核酸序列的参考。这种核酸可以编码包含天然ELABELA多肽的一种或多种生物活性(诸如维持干细胞的自动更新、多能性或两者)的ELABELA多肽。
例如，ELABELA核酸序列可以能够编码包含序列CXXXRCXXXHSRVPFP(SEQ ID NO：1)的多肽，在其中X表示氨基酸残基。得到的被编码的多肽序列可以包含ELABELA活性，诸如能够维持干细胞的自我更新和/或多能性。
ELABELA核酸通常还可以指ELABELA核酸家族的任何成员。
ELABELA核酸可以例如能够编码包含如SEQ ID NO：2至SEQ ID NO：19所示的任何序列的多肽。ELABELA核酸可以能够编码包含序列CLQRRCMPLHSRVPFP(SEQ ID NO：2)的多肽。
ELABELA核酸的实例包括选自由以下组成的组的那些：SEQ ID NO：37至SEQ IDNO：41或SEQ ID NO：42至SEQ ID NO：46。例如，公开了具有序列SEQ ID NO：37的人ELABELA核酸序列。
还包括本文件中其他地方列出的“其他ELABELA核酸序列”的任何一种或多种核酸序列。
例如，ELABELA核酸可以包含人ELABELA序列SEQ ID NO：37。
如本文件中所述，ELABELA核酸可以用于多种方法。例如，ELABELA核酸可以用于治疗患有或怀疑患有先兆子痫的个体，或用于防止这种病症或缓解由于这种病症而引起的任何症状。ELABELA核酸还可以用于表达或产生ELABELA多肽。其他用途对于技术人员来说是显而易见的，并且也涵盖在本文件中。
如本文件中使用的术语“多核苷酸”通常是指任何多核糖核苷酸或多脱氧核糖核苷酸，其可以是未修饰的RNA或DNA或者修饰的RNA或DNA。“多核苷酸”包括但不限于单链和双链DNA、作为单链和双链区域混合物的DNA、单链和双链RNA以及作为单链和双链区域混合物的RNA，包含DNA和RNA的杂合分子，该杂合分子可以是单链的，或更通常是双链的或者是单链和双链区域的混合物。另外，“多核苷酸”是指包含RNA或DNA或RNA和DNA两者的三链区域。术语多核苷酸还包括含有一个或多个修饰的碱基的DNA或RNA，以及具有出于稳定性或其他原因而修饰的骨架的DNA或RNA。“修饰的”碱基包括，例如，三烷基碱基和不常见的碱基，诸如肌苷。已经对DNA和RNA进行了各种修饰；因此，“多核苷酸”包括如通常在自然界中发现的多核苷酸的化学、酶促或代谢修饰形式，以及病毒和细胞特有的DNA和RNA的化学形式。“多核苷酸”还包括相对短的多核苷酸，通常称为寡核苷酸。
本领域技术人员将理解，由于遗传密码的简并性，许多核苷酸序列可以编码相同的多肽。
如本文所用，术语“核苷酸序列”指核苷酸序列、寡核苷酸序列、多核苷酸序列以及它们的变体、同源物、片段和衍生物(诸如它们的部分)。核苷酸序列可以是基因组或合成或重组来源的DNA或RNA，其可以是双链或单链的，无论是代表正义链或反义链或其组合。术语核苷酸序列可以通过使用重组DNA技术(例如，重组DNA)来制备。
术语“核苷酸序列”可以指DNA。
其他核酸
我们还提供了核酸，其是ELABELA核酸的片段、同源物、变体或衍生物。与ELABELA核酸相关的术语“变体”、“同源物”、“衍生物”或“片段”包括来自ELABELA核苷酸序列的一个(或多个)核酸的任何取代、变体、修饰、替换、缺失或添加，或者对ELABELA核苷酸序列的一个(或多个)核酸的任何取代、变体、修饰、替换、缺失或添加。除非上下文另有规定，否则提及“ELABELA”和“ELABELA核酸”、“ELABELA核苷酸序列”等时包括对ELABELA的这些变体、同源物、衍生物和片段的提及。
得到的核苷酸序列可以编码具有任何一种或多种ELABELA活性的多肽。术语“同源物”可以旨在覆盖与结构和/或功能相关的同一性，使得所得核苷酸序列编码具有ELABELA活性的多肽。例如，与正常细胞相比，在来自患有先兆子痫个体的细胞中ELABELA的同源物等可以具有降低的表达水平。关于序列同一性(即相似性)，可以有至少70％、至少75％、至少85％或至少90％的序列同一性。对于相关序列诸如序列表中所示的任何核酸序列(例如，具有SEQ ID NO：37的ELABELA序列)可以存在至少95％，诸如至少98％的序列同一性。这些术语还涵盖序列的等位基因变异。
变体、衍生物和同源物
ELABELA核酸变体、片段、衍生物和同源物可以包含DNA或RNA。它们可以是单链或双链。它们还可以是在其中包括合成或修饰的核苷酸的多核苷酸。对寡核苷酸的许多不同类型的修饰是本领域已知的。这些包括甲基膦酸酯和硫代磷酸酯骨架，在分子的3'和/或5'末端添加吖啶或聚赖氨酸链。出于本文件的目的，应理解可通过本领域可用的任何方法修饰多核苷酸。可以进行这种修饰以增强目标多核苷酸的体内活性或寿命。
在多核苷酸是双链的情况下，双链的两条链，无论是单独的还是组合的，都被涵盖在本文所述的方法和组合物中。在多核苷酸是单链的情况下，应理解还包括该多核苷酸的互补序列。
与核苷酸序列相关的术语“变体”、“同源物”或“衍生物”包括来自序列的一个(或多个)核酸的任何取代、变体、修饰、替换、缺失或添加，或者对序列的一个(或多个)核酸的任何取代、变体、修饰、替换、缺失或添加。所述变体、同源物或衍生物可以编码具有生物活性的多肽。如上所述，ELABELA的这些片段、同源物、变体和衍生物可以包含调节的活性。
如上所述，关于序列同一性，“同源物”对于相关序列，诸如序列表中所示的任何核酸序列(例如，具有SEQ ID NO：37的ELABELA序列)，可以具有至少5％的同一性，至少10％的同一性，至少15％的同一性，至少20％的同一性，至少25％的同一性，至少30％的同一性，至少35％的同一性，至少40％的同一性，至少45％的同一性，至少50％的同一性，至少55％的同一性，至少60％的同一性，至少65％的同一性，至少70％的同一性，至少75％的同一性，至少80％的同一性，至少85％的同一性，至少90％的同一性或至少95％的同一性。
可以有至少95％的同一性，至少96％的同一性，至少97％的同一性，至少98％的同一性或至少99％的同一性。可以如上所述进行核苷酸的同一性比较。可以使用的序列比较程序是上述的GCG Wisconsin Bestfit程序。默认评分矩阵对于每个相同的核苷酸具有10的匹配值，并且对于每个错配具有-9的匹配值。对于每个核苷酸，默认空位产生罚分为-50并且默认空位延伸罚分为-3。
杂交
我们还描述了能够选择性地与本文提供的任何序列或其任何变体、片段或衍生物，或与任何上述序列互补的序列，杂交的核苷酸序列。核苷酸序列的长度可以是至少5个、10个或15个核苷酸，诸如长度为至少20个、30个、40个或50个核苷酸。
如本文所用的术语“杂交”应包括“核酸链通过碱基配对与互补链连接的过程”以及在聚合酶链式反应技术中进行的扩增过程。
对于本文提供的相应核苷酸序列诸如序列表中所示的任何核酸序列(例如，具有SEQ ID NO：37的ELABELA序列)，能够与本文提供的核苷酸序列或其互补序列选择性杂交的多核苷酸可以具有至少40％同源性，至少45％同源性，至少50％同源性，至少55％同源性，至少60％同源性，至少65％同源性，至少70％同源性，至少75％同源性，至少80％同源性，至少85％同源性，至少90％同源性或至少95％同源性。对于相应的核苷酸序列，这种多核苷酸通常在至少5个、10个、15个或20个，诸如至少25个或30个，例如至少40个、60个或100个或更多个连续核苷酸上具有至少70％、至少80或90％或至少95％或98％的同源性。
术语“可选择性杂交的”是指用作探针的多核苷酸在发现靶多核苷酸的条件下使用用于以显著高于背景的水平与探针杂交。背景杂交可能由于存在的其他多核苷酸而发生，例如，在筛选的cDNA或基因组DNA库中。在这种情况下，背景意味着探针与库的非特异性DNA成员之间的相互作用产生的信号水平是靶DNA观察到的特异性相互作用强度的10分之一，诸如100分之一。例如，可以通过放射性标记探针，例如使用32P或33P或用非放射性探针(例如，荧光染料、生物素或洋地黄毒苷)来测量相互作用的强度。
杂交条件基于核酸结合复合物的解链温度(Tm)，如Berger和Kimmel(1987，Guideto Molecular Cloning Techniques，Methods in Enzymology，Vol 152，Academic Press，San Diego CA)中教导的，并且如本文件其他部分所解释的，赋予了定义的“严格性”。
最大严格性通常发生在约Tm-5℃(比探针的Tm低5℃)；高严格性在Tm以下约5℃至10℃；中度严格性在Tm以下约10℃至20℃；并且低严格性在Tm以下约20℃至25℃。如本领域技术人员所理解的，最大严格性的杂交可用于鉴定或检测相同的多核苷酸序列，而中度(或低)严格性的杂交可用于鉴定或检测相似或相关的多核苷酸序列。
我们提供了能够在严格条件下(例如65℃和0.1×SSC(1×SSC＝0.15M NaCl、0.015M Na3柠檬酸盐pH 7.0))与ELABELA核酸、片段、变体、同源物或衍生物杂交的核苷酸序列。
同源物、变体和衍生物的生成
与相关序列(例如，具有SEQ ID NO：37的人ELABELA序列)不是100％相同但也被包括的多核苷酸，以及ELABELA的同源物、变体和衍生物能够以多种方式获得。序列的其他变体可以例如通过探测由一系列个体(例如来自不同群体的个体)制备的DNA库来获得。例如，可以从其他个体或其他物种中鉴定ELABELA同源物。其他重组ELABELA核酸和多肽可以通过鉴定同源物中的相应位置来产生，并合成或产生如本文件中其他地方所述的分子。
此外，可以获得ELABELA的其他病毒/细菌或细胞同源物，特别是在哺乳动物细胞(例如大鼠、小鼠、牛和灵长类动物细胞)中发现的细胞同源物，并且这些同源物和其片段通常能够与人ELABELA选择性地杂交。这些同源物可用于设计非人ELABELA核酸、片段、变体和同源物。可以通过本领域已知的方法进行诱变以产生其他变种。
ELABELA同源物的序列可以通过探测由其他动物物种制备的cDNA库或基因组DNA库获得，并且在中至高严格性的条件下，使用包含任何ELABELA核酸、片段、变体和同源物的全部或部分或ELABELA的其他片段的探针来探测这种库。
类似的考虑适用于获得本文公开的多肽或核苷酸序列的物种同源物和等位基因变体。
变体和菌株/物种同源物也可以使用简并PCR来获得，简并PCR将使用设计的引物以靶向编码ELABELA核酸序列内的保守氨基酸序列的变体和同源物内的序列。可以预测保守序列，例如，通过比对来自几种变体/同源物的氨基酸序列。可以使用本领域已知的计算机软件进行序列比对。例如，广泛使用的GCG Wisconsin PileUp程序。
用于简并PCR的引物将含有一个或多个简并位置，并且将在严格条件下使用，该严格条件低于用于使用针对已知序列的单序列引物的克隆序列的条件。本领域技术人员将理解，来自远缘相关生物的序列之间的总体核苷酸同源性可能非常低，并且因此在这些情况下，简并PCR可以是选择的方法，而不是用ELABELA序列的标记片段筛选库。
另外，可以通过使用(诸如BLAST程序套件)搜索算法搜索核苷酸和/或蛋白质数据库来鉴定同源序列。
或者，这种多核苷酸可通过特征序列(例如，ELABELA核酸、或其变体、同源物、衍生物或片段)的定点诱变获得。例如，当序列需要沉默密码子改变以优化在其中表达多核苷酸序列的特定宿主细胞的密码子偏好时，这可能是有用的。为了引入限制酶识别位点，或改变由多核苷酸编码的多肽的性质或功能，可能需要其他的序列改变。
本文描述的多核苷酸可以用于产生引物，例如PCR引物，用于替代性扩增反应的引物，探针例如，通过常规方法用放射性或非放射性标签标记有显示性标签，或者可以将多核苷酸克隆到载体中。这些引物、探针和其他片段的长度为至少8个、9个、10个或15个，诸如至少20个，例如，至少25个、30个或40个核苷酸，并且还被如本文所用的术语“多核苷酸”涵盖。
多核苷酸(诸如DNA多核苷酸和探针)可以重组、合成或通过本领域技术人员可获得的任何方法产生。它们还可以通过标准技术克隆。
通常，引物将通过合成方法产生，包括一次一个核苷酸地逐步制备所需的核酸序列。使用自动化技术实现这个的技术在本领域中是容易获得的。
包含ELABELA片段的引物在检测ELABELA表达的方法中特别有用，诸如ELABELA表达的下调，例如，如与先兆子痫相关的。用于扩增ELABELA的合适引物可以产生自任何合适的ELABELA段。可以使用的引物包括能够扩增特异性ELABELA序列的引物。
尽管ELABELA引物可以单独提供，但最有用地是作为包括正向引物和反向引物的引物对提供。
通常使用重组方法，例如使用PCR(聚合酶链式反应)克隆技术，将会产生更长的多核苷酸。这将涉及制备引物对(例如约15至30个核苷酸的)，使引物与获得自动物或人细胞的mRNA或cDNA接触，在引起所需区域扩增的条件下进行聚合酶链式反应，分离扩增的片段(例如通过在琼脂糖凝胶上纯化反应混合物)并回收扩增的DNA。可以将引物设计成含有合适的限制酶识别位点，使得能够将扩增的DNA克隆到合适的克隆载体中。
多核苷酸或引物可带有显示性标签。合适的标签包括放射性同位素(诸如32P或35S)、地高辛、荧光染料、酶标签或其他蛋白质标签(诸如生物素)。可以将这些标签添加到多核苷酸或引物中，并且可以使用本身已知的技术检测。标记或未标记的多核苷酸或引物或其片段可以被本领域技术人员用于基于核酸的测试中，以检测或测序人体或动物体内的多核苷酸。
这种用于检测的测试通常包括在杂交条件下使含有DNA或RNA的生物样品与包含多核苷酸或引物的探针接触，并检测样品中探针和核酸之间形成的任何双链。这种检测可以使用诸如PCR的技术或通过将探针固定在固体支持物上，去除未与探针杂交的样品中的核酸，然后检测已与探针杂交的核酸来实现。或者，可以将样品核酸固定在固体支持物上，并且可以检测与这种支持物结合的探针的量。该形式和其他形式的合适的测定方法可以在例如WO89/03891和WO90/13667中找到。
用于测序核苷酸(例如，ELABELA核酸)的测试，涉及在杂交条件下使含有靶DNA或RNA的生物样品与包含多核苷酸或引物的探针接触，并通过例如Sanger双脱氧链终止法测定该序列(参考Sambrook等人)。
这种方法通常包括在合适试剂存在下通过合成靶DNA或RNA的互补链来延长引物，并选择性地终止位于A、C、G或T/U残基中的一个或多个的延长反应；使得发生链延长和终止反应；根据大小分离延长产物以确定已经发生了选择性终止的核苷酸序列。合适的试剂包括DNA聚合酶，脱氧核苷酸dATP、dCTP、dGTP和dTTP，缓冲液和ATP。双脱氧核苷酸用于选择性终止。
检测和诊断方法
ELABELA表达的检测
我们描述了检测ELABELA表达的方法，包括ELABELA多肽、ELABELA核酸及其变体、同源物、衍生物和片段等。这些方法可用于诊断个体中的先兆子痫或检测个体对先兆子痫的易感性。
可以检测ELABELA表达作为确定ELABELA的量或其活性的方法。可以在细胞中检测ELABELA表达或检测细胞的ELABELA表达。还可以在包含细胞组织、器官或生物体的部分或全部的样品上进行ELABELA表达的检测。
在先兆子痫中ELABELA的表达可以调节，例如与正常组织相比下调。因此，我们提供了诊断先兆子痫的方法，包括检测ELABELA表达的调节，诸如调节个体的细胞或组织中ELABELA表达的下调。
ELABELA表达、活性或量的检测可用于提供确定细胞状态的方法。因此，目标细胞可以是与正常细胞相比具有高水平的ELABELA表达、活性或量的细胞。类似地，目标细胞可以是与正常细胞相比具有低水平ELABELA表达、活性或量的细胞。
ELABELA的检测还可以用于确定细胞是否是目标细胞。因此，可以检测到细胞中高水平的ELABELA的表达、ELABELA的量或活性。类似地，还可以在细胞中检测到低水平的ELABELA表达、量或活性。
应当理解，如果ELABELA的水平随着先兆子痫的侵入性而变化，则ELABELA表达、量或活性的检测也可用于预测患有先兆子痫的个体的存活率，即，较低水平的ELABELA表明较低的存活率或概率，并且较高水平的ELABELA表明较高的存活率或概率，两者均与具有正常ELABELA水平的个体或同源群体相比。因此，ELABELA的表达、量或活性的检测可以用作患有先兆子痫的个体预后的方法。
ELABELA的表达、量或水平的检测可用于在患有先兆子痫的个体中确定特定疗法的成功可能性。
本文件中描述的诊断方法可以与所描述的治疗方法组合。因此，我们提供了一种治疗、预防或缓解个体中的先兆子痫的方法，该方法包括检测个体的细胞中ELABELA的表达、量或活性的调节，并基于先兆子痫的侵入性对该个体施用适当的疗法。该疗法可以包含如别处所述的ELABELA或ELABELA激动剂。
如本文其他地方进一步详细描述的，可以在样品中检测ELABELA多肽和核酸的存在和量。因此，可以通过包括从源自受试者的样品确定ELABELA多肽或ELABELA mRNA的异常降低的表达、量或活性的方法来诊断先兆子痫。
样品可以包含来自生物体或个体的细胞或组织样品，该生物体或个体患有或怀疑患有与ELABELA表达、量或活性增加、减少或异常相关的疾病，包括表达水平或模式、量或活性中的空间或时间变化(诸如先兆子痫)。与正常生物体中的表达水平或模式、量或活性进行比较，在患有或怀疑患有这种疾病(包括先兆子痫)的生物体中ELABELA的表达水平或模式、量或活性可以作为诊断疾病的方法。
样品可以包含来自患有或怀疑患有先兆子痫的个体的细胞或组织样品，诸如这些组织或细胞的任何组织或细胞样品。
在一些实施方式中，在样品中检测到降低的ELABELA表达水平、量或活性。与正常细胞或来自已知未患有先兆子痫的个体的细胞相比，ELABELA的水平可以降低至显著程度。这种细胞可以获得自被测个体或其他个体，诸如在年龄、体重、生活方式等与被测个体匹配的个体。
在一些实施方式中，ELABELA的表达水平、量或活性降低了10％、20％、30％或40％或更多。在一些实施方式中，例如如通过cDNA杂交判断的，ELABELA的表达水平、量或活性降低了45％或更多，例如50％或更多。
ELABELA的表达、量或活性可以以多种方式检测，如本领域已知的，并且如本文件中其他地方进一步详细描述的。通常，测量了来自个体的组织样品中ELABELA的量，并与来自未受影响的个体的样品进行比较。可以测量ELABELA核酸以及ELABELA多肽水平两者。
检测ELABELA的量、活性或表达可用于对先兆子痫进行分级。
可以使用许多不同的技术确定ELABELA基因表达的水平。
测量ELABELA在RNA水平的表达
可以在RNA水平检测到ELABELA基因表达。
因此，在一种实施方式中，我们公开了通过使样品与至少一种对ELABELA核酸特异的核酸探针接触并监测所述样品存在ELABELA核酸来检测样品中包含ELABELA核酸的核酸的存在的方法。例如，核酸探针可以特异性结合于ELABELA核酸或其一部分，并且在检测到的两者之间的结合；还可以检测复合物本身的存在。
因此，在一种实施方式中，可以测量样品中以ELABELA mRNA形式的ELABELA核酸的量。可以通过原位杂交、Northern印迹和逆转录酶-聚合酶链式反应来测定ELABELA mRNA。可以通过原位杂交、Southern印迹、单链构象多态性、PCR扩增和使用特异性引物的DNA芯片分析来鉴定核酸序列(Kawasaki，1990；Sambrook，1992；Lichter等人，1990；Orita等人，1989；Fodor等人，1993；Pease等人，1994)。
可以使用RNA提取技术从细胞中提取ELABELA RNA，包括例如使用酸性酚/异硫氰酸胍提取物(RNAzol B；Biogenesis)或RNeasy RNA制备试剂盒(Qiagen)。利用核糖核酸杂交的典型测定形式包括核运行测定、RT-PCR和RNA酶保护测定(Melton等人，Nuc.AcidsRes.12:7035)。可以使用的用于检测的方法包括放射性标签、酶标签、化学发光标签、荧光标签和其他合适的标签。
这些方法中的每一种都允许进行定量测定，并且是本领域熟知的。因此，可以使用本领域熟知的用于定量多核苷酸的任何方法在RNA水平上测量减少或增加的ELABELA表达、量或活性。来自ELABELA序列的任何合适的探针，例如，合适的人ELABELA序列的任何部分可以用作探针。用于设计ELABELA探针的序列可以包括具有SEQ ID NO：37至41的序列或其部分。
通常，RT-PCR用于扩增RNA靶标。在该过程中，逆转录酶用于将RNA转化为互补DNA(cDNA)，然后可以扩增互补DNA以促进检测。
许多DNA扩增方法是已知的，其中大多数依赖于酶链式反应(诸如聚合酶链式反应、连接酶链式反应或自持序列复制)或根据已被克隆至载体中的所有或部分的复制。
许多靶标和信号放大方法已经在文献中描述了，例如，Landegren，U等人，Science242：229-237(1988)和Lewis，R.,Genetic Engineering News 10:1,54-55(1990)中对这些方法的综述。
例如，聚合酶链式反应可用于检测ELABELA mRNA。
“聚合酶链式反应”或“PCR”是特别描述于美国专利号4,683,195和4,683,202中的核酸扩增方法。PCR可以用于扩增诊断环境中任何已知的核酸(Mok等人，1994，Gynaecologic Oncology 52：247-252)。自持序列复制(3SR)是TAS的变体，其涉及通过逆转录酶(RT)的连续轮对核酸模板进行等温扩增，由酶混合物和合适的寡核苷酸引物介导的聚合酶和核酸酶活性，(Guatelli等人，1990，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87：1874)。连接扩增反应或连接扩增***使用DNA连接酶和四个寡核苷酸，每个靶链两个。该技术由Wu,D.Y.和Wallace.,1989，Genomics 4:560描述。在Qβ重复酶技术中，复制单链RNA的噬菌体Qβ的RNA复制酶用于扩增靶DNA，如Lizardi等人，1988，Bio/Technology 6:1197所述的。
PCR程序基本涉及：(1)处理提取的DNA以形成单链互补链；(2)添加寡核苷酸引物对，其中该对引物的一个引物与正义链中的部分序列基本上互补，并且每对的另一个引物与互补反义链中相同序列的不同部分基本上互补；(3)将配对引物退火至互补序列；(4)同时从每个引物的3'末端延伸退火的引物以合成与每个引物退火的链互补的延伸产物，其中所述延伸产物在从互补物分离后用作模板，用于合成每对其他引物中的延伸产物；(5)将所述延伸产物与所述模板分离以产生单链分子；并且(6)通过重复至少一次所述退火、延伸和分离步骤来扩增所述单链分子。
可以使用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)。还可以使用定量RT-PCR。这种PCR技术是本领域熟知的，并且可以使用来自ELABELA序列的任何合适的引物。
还可以利用替代的扩增技术。例如，滚环扩增(Lizardi等人,1998,Nat Genet 19:225)是商业上可获得的扩增技术(RCATTM)，其由DNA聚合酶驱动并且在等温条件下可以以线性或几何动力学复制环状寡核苷酸探针。另一种技术，链置换扩增(SDA；Walker等人，1992，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 80:392)以特定靶标特有的特定序列开始。
测量ELABELA在多肽水平的表达
可以在多肽水平检测ELABELA表达。
因此，在另一实施方式中，可以通过检测样品中ELABELA多肽的存在或量来检测ELABELA表达、量或活性。这可以通过使用与ELABELA多肽结合的分子来实现。直接或间接结合于ELABELA多肽以检测其存在的合适分子/剂包括天然存在的分子，诸如肽和蛋白质，例如抗体，或它们可以是合成分子。
因此，我们公开了通过使细胞样品与能够结合多肽的抗体接触并监测所述样品中多肽的存在来检测ELABELA多肽的存在的方法。
例如，可以使用抗ELABELA抗体检测ELABELA多肽。这种抗体可通过本领域已知的方法制备(诸如国际专利公开WO 2015/084264中所述的)。
通过监测抗体和ELABELA多肽之间形成的复合物的存在，或监测多肽和抗体之间的结合，可以方便地实现ELABELA的检测。检测两个实体之间结合的方法是本领域已知的，并且包括FRET(荧光共振能量转移)、表面等离子体共振等。
与相同细胞群中的未处理的细胞相比，标准实验室技术诸如如上所述的免疫印迹可用于检测ELABELA蛋白的水平变化。
还可以通过检测ELABELA多肽的翻译后加工或ELABELA核酸的转录后修饰的变化来测定基因表达。例如，可以测量ELABELA多肽的差异磷酸化、ELABELA多肽的切割或ELABELA RNA的选择剪接等。可以使用专有蛋白质测定法或技术诸如2D聚丙烯酰胺凝胶电泳检测基因产物(诸如ELABELA多肽)的表达水平以及它们的翻译后修饰。
可用于确定衍生自宿主的样品中ELABELA蛋白水平的测定技术是本领域技术人员熟知的。可以通过本领域已知的任何方法可以测定用于免疫特异性结合的抗体。
可以使用的免疫测定包括但不限于竞争性和非竞争性测定***，其使用技术，诸如蛋白质印迹、放射免疫测定、ELISA、夹心免疫测定、免疫沉淀测定、沉淀素反应、凝胶扩散沉淀反应、免疫扩散测定、凝集测定、补体结合测定、免疫放射测定、荧光免疫测定和蛋白A免疫测定。这些测定法是本领域常规的(参考，例如，通过引用整体并入本文的Ausubel等人，eds,1994,Current Protocols in Molecular Biology,Vol.1,John Wiley&Sons,Inc.,New York)。
我们描述了用于测量或检测ELABELA表达的免疫测定试剂盒，用于诊断或检测个体对先兆子痫的易感性。免疫测定试剂盒可包含：包被抗原；(b)一种或多种分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合于以下中的一种或多种：(i)包含序列CMPLHSRVPFP(SEQ IDNO：52)的多肽；(ii)包含序列QRPVNLTMRRKLRKHNC(SEQ ID NO：53)的多肽；(iii)包含序列QRPVNLTMRRKLRKHNCLQRRCMPLHSRVPFP(SEQ ID NO：2)的多肽；(iv)包含序列SEQ ID NO：1至36中任一项的多肽；以及(c)使用说明。
可以标记分离的抗体或抗原结合片段，诸如用放射性标记物，例如125I。
免疫测定试剂盒还可以包含酶标记的试剂、能够与分离的抗体或抗原结合片段特异性结合的第二抗体、固体底物或这些的任何组合。
对于多肽/蛋白质，可以通过免疫组织化学和免疫细胞化学染色(通常参见Stitesand Terr，Basic and Clinical Immunology，Appleton and Lange，1994)、ELISA、RIA、免疫印迹、蛋白质印迹、免疫沉淀、功能测定和蛋白质截短测试来测定试样。其他测定方法包括放射免疫测定、竞争结合测定、蛋白质印迹分析和ELISA测定。
ELISA测定是本领域技术人员熟知的。多克隆抗体和单克隆抗体两者可以用于测定。适当的时候，可以如本领域技术人员已知的使用其他免疫测定，诸如放射免疫测定(RIA)。可用的免疫测定在专利和科学文献中有广泛描述。参考，例如，美国专利号3,791,932；3,839,153；3,850,752；3,850,578；3,853,987；3,867,517；3,879,262；3,901,654；3,935,074；3,984,533；3,996,345；4,034,074；4,098,876；4,879,219；5,011,771和5,281,521以及Sambrook等人，1992。
诊断试剂盒
我们还提供了诊断试剂盒用于检测个体中的先兆子痫或个体对先兆子痫易感性。
诊断试剂盒可以包括用于通过本文件中描述的任何方式检测个体中ELABELA的表达、量或活性的装置。因此，诊断试剂盒可以包括以下中的任何一种或多种：ELABELA多核苷酸或其片段；ELABELA核酸或其片段的互补核苷酸序列；ELABELA多肽或其片段，或ELABELA的抗体诸如包含抗ELABELA的抗ELABELA抗体，例如，抗肽抗体人ELABELA抗体。
诊断试剂盒可以包括使用说明或其他标注。诊断试剂盒还可以包括用于治疗或预防先兆子痫的装置，诸如本文件中描述的任何组合物，或本领域已知的用于治疗这种先兆子痫的任何方法。特别地，诊断试剂盒可以包括ELABELA多肽或核酸。诊断试剂盒可以包括治疗药物。
免疫测定
我们描述了用于测量或检测ELABELA表达的免疫测定试剂盒，该免疫测定试剂盒包括：(a)包被抗原，其包含一种或多种与以下中的一种或多种特异性结合的分离抗体或其抗原结合片段：(i)包含序列CMPLHSRVPFP(SEQ ID NO：52)的多肽；(ii)包含序列QRPVNLTMRRKLRKHNC(SEQ ID NO：53)的多肽；(iii)包含序列QRPVNLTMRRKLRKHNCLQRRCMPLHSRVPFP(SEQ ID NO：2)的多肽；或(iv)包含序列SEQ ID NO：1-36中任一项的ELABELA多肽；以及(b)使用所述包被抗原的说明书。
分离的抗体或其抗原结合片段可以是被标记的。
试剂盒还可以包括酶标记试剂、与分离的抗体或抗原结合片段特异性结合的第二抗体、固体底物或其任何组合。
预防和治疗方法
我们公开了治疗与ELABELA的表达或活性不足或过量有关的异常病症(诸如先兆子痫)的方法。防止先兆子痫(即，预防)的方法也适当地应用相同或相似的方法。
一般而言，我们的方法涉及通过调节(诸如上调)细胞中ELABELA的表达、量或活性来操纵细胞。检测细胞中调节的ELABELA表达、量或活性的步骤可以在操纵步骤之前或之后进行。检测步骤可以检测到下调的ELABELA表达、量或活性。如本文件中其他地方详细描述的，可以使用任何调节或上调ELABELA的方法。
该方法可包括将细胞、生物体或个体暴露于ELABELA多肽。这在下文中进一步详细描述。
如果与疾病相关的病症，诸如先兆子痫，相对于对照被显著抑制(即，50％或更多)，则先兆子痫定义为“被治疗”。相对于对照，抑制可以是至少75％，诸如相对于对照，抑制了90％、95％或100％。我们所指的术语“治疗”还包括先兆子痫预防或缓解。
药物组合物和给药
先兆子痫的治疗方法可以包括向有此治疗需要的个体给药ELABELA，ELABELA包括ELABELA核酸、其多肽、片段、同源物、变体或衍生物，调节剂，激动剂，结构相关化合物或其酸性盐。
在下面的讨论中，ELABELA，包括ELABELA核酸、其多肽、片段、同源物、变体或衍生物，调节剂，激动剂，结构相关化合物或其酸性盐将被称为“ELABELA试剂”。
虽然可以单独给药ELABELA剂，但活性成分可以配制成药物制剂。
因此，我们还公开了包含ELABELA剂的药物组合物。这种药物组合物可用于将ELABELA剂，诸如以所述组合物的形式，递送至个体，用于治疗或缓解所述症状。
在本文件的上下文中，药物组合物是至少包括ELABELA剂作为活性成分的物质的组合物。
药物制剂包括有效量的ELABELA剂和一种或多种药学上可接受的载体。“有效量”是足以缓解疾病(诸如所述的先兆子痫)的至少一种症状的量。
有效量将根据待治疗或缓解的特定疾病或综合征(包括先兆子痫)以及其他因素而变化，其他因素包括患者的年龄和体重、疾病等状态有多严重、患者的一般健康状况、症状的严重程度以及ELABELA剂是单独给药还是与其他疗法组合。
合适的药学上可接受的载体是本领域熟知的，并且随药物制剂的所需形式和给药方式而变化。例如，它们可包括稀释剂或赋形剂，诸如填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、表面活性剂、润滑剂等。通常，载体是固体、液体或可蒸发的载体，或其组合。在与制剂中的其他成分相容并且对患者无害的意义上，每种载体应该是“可接受的”。载体应该是生物学上可接受的，当向宿主给药时不引起不良反应(例如免疫应答)。
设想药物组合物的一种或多种活性成分，例如在先兆子痫的缓解中，表现出治疗活性。可以调整剂量方案以提供最佳治疗响应。例如，按照治疗情况的紧急程度，可以每天给药几个分开的剂量，或者剂量可以按比例减少。
活性化合物可以以方便的方式给药，诸如通过口服、静脉内(其中水溶的)、肌肉内、皮下、鼻内、皮内或栓剂途径或植入(例如使用缓释分子)。根据给药途径，可能需要将活性成分包衣在一材料中以保护所述成分免受酶、酸和其他可能使所述成分失活的天然条件的作用。
可以单独给药ELABELA剂，或与其他治疗剂组合。适用于本文的其他治疗剂是对预期目的有效的任何相容药物，或与该剂制剂互补的药物。组合疗法中使用的制剂可以与其他治疗同时或相继给药，从而实现组合效果。
口服给药
在一些实施方式中，ELABELA剂作为口服组合物提供并相应地给药。ELABELA剂的剂量可以为约1mg/天至约10mg/天之间。
药物组合物可以以片剂、胶囊或溶液的形式以口服制剂形式给药。每天向患者给药有效量的口服制剂1至3次，直至疾病(例如先兆子痫)的症状缓解。
有效量的试剂取决于患者的年龄、体重和病症。通常，每日口服剂量小于1200mg，并且大于100mg。每日口服剂量可为约300-600mg。口服制剂方便地以单位剂型提供，并且可以通过药学领域中已知的任何方法制备。组合物可以与合适的药学上可接受的载体一起配制成任何所需的剂型。典型的单位剂型包括片剂、丸剂、粉剂、溶液、混悬液、乳剂、颗粒、胶囊、栓剂。通常，制剂通过将剂组合物与液体载体或细碎的固体载体或两者均匀且紧密地结合在一起，并在必要时将产品成形来制备。活性成分可以液体、粉末、片剂或胶囊的形式掺入各种基础材料中，以提供有效量的活性成分来治疗疾病，诸如先兆子痫。
组合物可以适当地口服给药，例如，连同惰性稀释剂或连同可吸收的可食用载体，或者可以将其包封在硬壳或软壳明胶胶囊中，或者可以将其压制成片剂，或者可以直接掺入饮食的食物中。对于口服治疗给药，活性化合物可与赋形剂混合并以可摄入的片剂、含片、锭剂、胶囊、酏剂、悬浮液、糖浆、糯米纸囊剂等形式使用。在这种治疗上有用的组合物中活性化合物的量使得将获得合适的剂量。
片剂、锭剂、丸剂、胶囊等还可以含有下列物质：粘合剂诸如黄蓍胶、***树胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂，诸如磷酸二钙；崩解剂，诸如玉米淀粉、马铃薯淀粉、海藻酸等；润滑剂，诸如硬脂酸镁；以及可加入甜味剂，诸如蔗糖、乳糖或糖精，或调味剂，诸如薄荷、冬青油或樱桃调味剂。当剂量单位形式是胶囊时，除了上述类型的材料外，它还可以含有液体载体。
各种其他材料可以作为包衣提供或以其他方式改变剂量单位的物理形式提供。例如，片剂、丸剂或胶囊可以用虫胶、糖或两者包衣。糖浆或酏剂可含有活性化合物，蔗糖作为甜味剂，对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯作为防腐剂，染料和调味剂诸如樱桃或橙子调味剂。当然，用于制备任何剂量单位形式的任何材料应该在药学上是纯的并且在使用的量下基本上无毒。此外，活性化合物可以掺入缓释制剂和制剂中。
可注射或静脉给药
在一些实施方式中，ELABELA剂作为可注射或静脉内组合物提供并相应地给药。ELABELA剂的剂量可以为约5mg/kg/2周至约10mg/kg/2周之间。ELABELA剂可以以10-300mg/天，诸如至少30mg/天，小于200mg/天或30mg/天至200mg/天之间的剂量提供。
适合注射使用的药物形式包括无菌水溶液(其中水溶的)或分散液和用于临时制备无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末。在所有情况下，该形式必须是无菌的并且流动程度必须达到易于注射。在制造和储存条件下它必须是稳定的，并且必须防止微生物(诸如细菌和真菌)的污染作用。载体可以是溶剂或分散介质，溶剂或分散介质含有例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)、它们合适的混合物以及植物油。例如，可以通过使用包衣(诸如卵磷脂)，通过在分散的情况下保持所需的颗粒尺寸和通过使用表面活性剂来维持适当的流动性。
局部给药
本文公开的药物组合物包括适合局部和口服给药的那些。当受影响的组织主要是皮肤或表皮时，可以使用局部制剂。
局部制剂包括那些药物形式，在其中组合物通过与待处理的皮肤表面直接接触而在外部应用。用于局部应用的常规药物形式包括浸泡剂、软膏、乳膏、洗剂、糊剂、凝胶、棒剂、喷雾、气溶胶、沐浴油、溶液等。局部治疗由各种载体递送，载体的选择可能是重要的并且通常与待治疗的是否为急性或慢性疾病有关。例如，急性皮肤增生疾病通常用含水干燥制剂治疗，而慢性皮肤增殖疾病用水合制剂治疗。浸泡是干燥急性湿疹的最简单方法。乳液(水悬浮液中的粉末)和溶液(溶解在溶剂中的药物)是用于毛发和毛发间隙的理想选择。软膏或油包水乳液是最有效的保湿剂，适用于干燥的鳞状疹，但是是油腻的并且根据病变的部位有时是不希望的。适当的时候，特别是当需要增加剂组合物渗入病变时，它们可以与绷带组合使用。乳膏或水包油乳液以及凝胶是可吸收的，并且是患者最容易接受的(Guzzo等人，in Goodman&Gilman’s Pharmacological Basis of Therapeutics,9th Ed.,p.1593-15950(1996))。乳膏制剂通常包括诸如石油、羊毛脂、聚乙二醇、矿物油、甘油、棕榈酸异丙酯、硬脂酸甘油酯、鲸蜡硬脂醇、乙酸生育酚酯、肉豆蔻酸异丙酯、羊毛脂醇、二甲基硅油、卡波明(carbomen)、氯甲基异噻唑啉酮、甲基异噻唑啉酮、环甲基硅氧烷和羟丙基甲基纤维素以及它们的混合物的组分。
用于局部应用的其他制剂包括洗发剂、肥皂、摇晃洗剂等，特别是那些配制成在下面的皮肤上留下残余物的那些，诸如头皮(Arndt等人,in Dermatology In GeneralMedicine 2:2838(1993))。
通常，局部制剂中组合物的浓度按重量计为组合物的约0.5至50％，诸如约1至30％，约2-20％，或约5-10％。使用的浓度最初可以在该范围的上部，随着处理的继续，可以降低浓度或可以较不频繁应用制剂。局部应用通常每天应用两次。然而，每日一次的较大剂量应用或更频繁地的较小剂量应用可能是有效的。角质层可以充当储库并且允许药物在延长的时间段内逐渐渗透到活的皮肤层中。
在局部应用中，足量的活性成分必须渗透患者的皮肤以获得所需的药理效果。通常理解的是，药物吸收到皮肤中是药物的性质、载体的行为和皮肤的函数。三个主要变量说明了不同载体中不同局部药物或同一药物的吸收率或通量差异的原因；载体中药物的浓度，角质层与载体之间的药物分配系数以及角质层中药物的扩散系数。为了有效治疗，药物必须穿过负责皮肤的屏障功能的角质层。通常，在体外发挥较高皮肤渗透的局部制剂在体内是有效的。Ostrenga等人(J.Pharm.Sci。，60：1175-1179(1971))证明了局部应用的类固醇的体内功效与体外植皮的人皮肤中的类固醇渗透速率成比例。
可以将皮肤病学上可接受的并且与剂相容的皮肤渗透增强剂掺入制剂中，以增加一种或多种活性化合物从皮肤表面渗透到表皮角质形成细胞中。增加一种或多种活性化合物吸收到皮肤中的皮肤增强剂减少了有效治疗所需的剂的量，并提供了更持久的制剂效果。皮肤渗透增强剂在本领域中是熟知的。例如，二甲基亚砜(美国专利号3,711,602)；油酸，1,2-丁二醇表面活性剂(Cooper，J.Pharm.Sci。，73：1153-1156(1984))；乙醇和油酸或油醇(EP 267,617)，2-乙基-3-己二醇(WO 87/03490)的组合；癸基甲基亚砜和氮酮(Azone).RTM。(Hadgraft，Eur.J.Drug.Metab.Pharmacokinet，21：165-173(1996))；醇、亚砜、脂肪酸、酯、氮酮.RTM、吡咯烷酮、脲和多元醇(Kalbitz等人，Pharmazie，51：619-637(1996))；
已知萜烯，诸如1,8-桉叶素、薄荷酮、柠檬烯和橙花醇(Yamane，J.Pharmacy&Pharmocology，47：978-989(1995))；氮酮.RTM和卡必醇(Transcutol)(Harrison等人，Pharmaceutical Res.13：542-546(1996))；以及油酸、聚乙二醇和丙二醇(Singh等人，Pharm azie，51：741-744(1996))可改善活性成分的皮肤渗透性。
剂或组合物的渗透水平可以通过本领域技术人员已知的技术确定。例如，放射性标记活性化合物，然后测量被皮肤吸收的放射性标记的化合物的量，使得本领域技术人员能够使用确定测试化合物的皮肤渗透的几种方法中的任何一种来确定被吸收的组合物的水平。与皮肤渗透研究有关的出版物包括Reinfenrath，W G和G S Hawkins。断奶约克夏猪(Weaning Yorkshire Pig)作为动物模型用于测量经皮渗透。在：Swine in BiomedicalResearch(M.E.Tumbleson,Ed.)Plenum,New York,1986,和Hawkins,G.S.Methodology forthe Execution of In Vitro Skin Penetration Determinations中，在：Methods forSkin Absorption,B W Kemppainen and W G Reifenrath,Eds.,CRC Press,Boca Raton,1990，pp.67-80；和W.G.Reifenrath,Cosmetics&Toiletries,110:3-9(1995)中。
对于一些应用，可以使用本领域已知的制剂，诸如聚合物，给药长效形式的剂或组合物。根据本领域已知方法，可以将该剂掺入皮肤贴剂中(Junginger,H.E.,in ActaPharmaceutica Nordica 4:117(1992)；Thacharodi等人,in Biomaterials 16:145-148(1995)；NiednerR.,in Hautarzt 39:761-766(1988))或绷带中，以提高药物向待治疗区域的递送效率。
任选地，本文描述的局部制剂可以具有另外的赋形剂，例如；防腐剂，诸如对羟基苯甲酸甲酯、苯甲醇、山梨酸或季铵化合物；稳定剂，诸如EDTA，抗氧化剂，诸如丁基化羟基甲苯或丁基化羟基苯甲醚，以及缓冲剂诸如柠檬酸盐和磷酸盐。
肠外给药
活性化合物还可以肠外或腹膜内给药。分散液还可以在甘油、液体聚乙二醇和它们的混合物中以及油中制备。在一些实施方式中，分散液可以在30％卡普西托(Capsitol)(CyDex，Inc.，Lenexa，Kansas，USA)中制备。卡普西托是聚阴离子β-环糊精衍生物，该衍生物具有通过丁醚间隔基团或磺基丁醚(SBE)分离自亲脂腔的磺酸钠盐。环糊精可以是SBE7-β-CD。
佐剂
该组合物可以在佐剂中给药，与酶抑制剂共同给药或在脂质体中给药。佐剂以其最广泛的含义使用，并且包括任何免疫刺激化合物，诸如干扰素。本文考虑的佐剂包括间苯二酚、非离子表面活性剂诸如聚氧乙烯油基醚和正十六烷基聚乙烯醚。酶抑制剂包括胰蛋白酶。脂质体包括水包油包水CGF乳剂以及常规脂质体。
防止微生物生长
在通常的储存和使用条件下，这些制剂可含有防腐剂以防止微生物的生长。
微生物作用的防止可以通过各种抗细菌剂和抗真菌剂产生，例如对羟基苯甲酸酯类、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等。在许多情况下，可以包括等渗剂，例如，糖或氯化钠。通过在组合物中使用延迟吸收的剂，例如单硬脂酸铝和明胶，可以实现可注射组合物的延长吸收。
通过将所需量的活性化合物掺入到具有上面列举的各种其他成分(如果需要)的适当的溶剂中，然后过滤灭菌，制备无菌可注射溶液。通常，通过将灭菌的活性成分掺入无菌载体中来制备分散液，该无菌载体含有基础的分散介质和来自上面列举的那些所需的其他成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，制备方法可包括真空干燥和冷冻干燥技术，其产生活性成分的粉末加上来自其先前无菌过滤溶液的任何其他所需成分。
药学上可接受的载体
如本文所用，“药学上可接受的载体和/或稀释剂”包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂等。这种介质和剂用于药物活性物质的用途是本领域熟知的。除非任何常规介质或剂与活性成分不相容，否则考虑其在治疗组合物中的用途。还可以将补充的活性成分掺入组合物中。
剂量单位形式
药物组合物可以配制成剂量单位形式，以便于给药和剂量的均匀性。
如本文所用的剂量单位形式是指适合作为用于待治疗受试者的单位剂量的物理离散单位；每个单位含有预定量的经计算可与所需药物载体一起产生所需的治疗效果的活性物质。新型剂量单位形式的说明书由以下决定并且直接取决于：(a)活性材料的独特特征和待实现的特定治疗效果，以及(b)复合领域中的固有限制，诸如活性材料，用于治疗患有身体健康受损的疾病病症的活体受试者的疾病。
将主要活性成分与合适的药学上可接受的载体复合成剂量单位形式，以有效量方便且有效地给药。在组合物含有补充活性成分的情况下，通过参考成分的常用剂量和给药方式来确定剂量。
实施例
哺乳动物胎盘是负责重塑母体心血管***以适应胎儿生长的因素的重要来源。
ELABELA(ELA)是最近发现的APLNR的替代配体，由胎盘滋养层分泌，双向保障妊娠，确保胎儿中适当的心血管发育，并调节母体内皮以防止妊娠期高血压。
Ela敲除的怀孕的小鼠显示出升高的血压、蛋白尿，这可以通过在整个妊娠期输注合成ELA来逆转，并且Ela无效胎儿具有主要的心血管缺陷。
在诊断患有先兆子痫的女性中，ELA水平反常升高，这可能反映了改善先兆子痫症状的代偿性努力或功能失调的ELA通道。
令人惊讶的是，这些表型在Apelin或Aplnr无效小鼠中没有重复，而Apelin；Ela双重无效从先兆子痫症状和胎盘缺陷中获救。
我们认为ELA能够微调Aplnr活性，并且因此可以成为治疗候选物用于患有先兆子痫的孕妇。
实施例1：Ela的缺失导致由心血管缺陷引起的妊娠中期死亡
实施例1在图1中示出。图1示出了Ela的缺失导致由心血管缺陷引起的妊娠中期死亡。
实施例2：Ela是胎盘血管新生所需的胎盘激素
实施例2在图2中示出。图2示出了Ela是胎盘血管新生所需的胎盘激素。
实施例3：妊娠期间Ela的丢失易于发生先兆子痫
实施例3在图3中示出。图3示出了妊娠期间Ela的丢失易于发生先兆子痫。
实施例4：Ela和Apj的缺失对蛋白尿和妊娠期血压具有相反的作用
实施例4在图4中示出。图14示出了Ela和Apj的缺失对蛋白尿和妊娠血压具有相反的作用。
实施例5：材料和方法：小鼠
通过C57B6/J小鼠胚胎干细胞(mESC)中同源重组介导的靶向载体的***，编码成熟肽的小鼠Elabela的外显子3(NC_000074.6和NM_001297554.1)两侧均有loxp位点。靶向载体包括外显子3两翼的loxp位点、PGK-新霉素(neo)盒的两侧为外显子2和3'loxp位点之间的frt位点，以及5'和3'同源臂。对电穿孔mESC进行G418选择，并且对于neo盒的存在通过PCR预筛选G418抗性克隆。在基因组DNA的NdeI消化后，我们选择了3个neo阳性克隆用neo探针和5'探针进行了Southern印迹。克隆32和43得到了具有两种探针的预期大小的条带(图6B)，而克隆45代表了随机整合。将克隆32和43注射到了B6(Cg)-Tyrc-2J/J同基因B6白化受体胚泡(Jackson Laboratory)中。我们用来自克隆32的一个F0嵌合体实现了种系传递，这产生了黑色包被的F1后代。用CMV-flp重组酶转基因小鼠(C57BL/6-Tg(CAG-Flpe)2Arte，Taconic)培育这些F1小鼠以去除neo盒以产生Elaflox等位基因。将Elaflox/wt杂合子与Zp3-cre(C57BL/6-Tg(Zp3-ere)1Gwh/J，Jackson Laboratory)重组酶转基因小鼠一起繁殖以产生ElaΔ敲除的等位基因。在杂交产生纯合子ElaΔ/Δ之前将ElaΔ/+杂合子与C57B6/J回交>8代。为了避免可能的Ela丢失的跨代适应，除非另有说明，ElaΔ等位基因维持在杂合状态。所有小鼠程序均按照IACUC方案#080361、110673和140907进行，并获得生物资源中心A*STAR和新加坡农业食品和兽医局(Agri-Food&Veterinary Authority of Singapore)的批准。
实施例6：材料和方法：LacZ染色
Apln敲除动物是来自Quertermous及其同事的赠送(参考文献A15)。Apln由X染色体编码，并且靶向的Apln无效等位基因(AplnLacZ)含有在内源性Apln启动子控制下转录的β-半乳糖苷酶转基因。ElaΔ/Δ；Apln+/+雌性与ElaΔ/Δ交配；AplnLacZ/Y和基因型ElaΔ/Δ的雌性胚胎；AplnLacZ/+与基因型Ela+/+的雌性对照比较；AplnLacZ/+来自wt雌性和Ela+/+；AplnLacZ/Y雄性之间的交配。根据Barker和同事描述的方案(参考文献A31)，ElaΔ/Δ；AplnLacZ/+和Ela+/+；AplnLacZ/+胚胎和胎盘的完整的LacZ染色在获得的e9.5窝上同时平行进行。简而言之，将胚胎和胎盘在新制备的戊二醛固定剂中在室温下固定1小时，用新制备的洗涤缓冲液洗涤5次，并与超纯X-gal底物(Invitrogen 15520034)在黑暗中于30℃孵育过夜。通过洗涤并在4％多聚甲醛中固定来终止染色。使用立体显微镜(Leica；M205 FA)在连续焦平面中捕获整个胎盘的图像。然后使用Photoshop CS5(Adobe)将图像在Z维度上手动合并。
实施例7：材料和方法：原位杂交(WISH和RNAScope)
完整的原位杂交(WISH)是根据我们实验室网站(https：//sites.***.eom/a/reversade.com/www/protocols/)上可获得的方案进行的。根据制造商的建议，使用Advanced Cell Diagnostics的HD2.0和HD2.5棕色试剂盒，使用自定义mEla和hELA(ApelaCat#416811和APELA Cat#427251)C2探针对小鼠胚胎、小鼠组织和人绒毛膜绒毛进行RNAScope。用于IHC和RNAScope的第1和第3孕期人胎盘组织通过先兆子痫和非先兆子痫数据库(PANDA)收集，由阿姆斯特丹大学学术医学中心的机构审查委员会(Academic MedicalCenter,University of Amsterdam)批准的产科生物样品工作。获得了所有妇女的知情同意。在石蜡包埋和切片之前，将所有RNAScope组织固定在中性缓冲***(NBF)中(16-32小时)。
实施例8：材料和方法：免疫组织化学(IHC)和免疫荧光(IF)
针对CD31(MEC13.3，BioLegend)的完整抗体染色如(参考文献A32、A33)所述进行。简而言之，对于完整的IF，将el0.5胚胎固定在PBS中的4％(质量/体积)PFA中，在4℃下过夜，通过冰上的甲醇系列脱水，用4:1甲醇:DMSO中的5％过氧化氢在室温下漂白4小时，用PBS-MT(3％(质量/体积)脱脂乳和0.1％(体积/体积)Triton X-100)中的3％BSA(SigmaA7030)溶液在冰上封闭1小时。将MEC13.3以1:100加入2天，在4℃下摇动。用PBS-MT洗涤胚胎5次(在4℃下每次1小时)，用1:500的第二抗体(AF-488，Molecular Probes)在4℃下染色过夜，用PBS-T(0.5％(体积/体积)Triton X-100)洗涤3次，并脱水至100％甲醇。将它们放置在低熔点琼脂糖的盖玻片上，在甲醇中孵育以使琼脂糖脱水，在BABB溶液(1份苯甲醇:2份苯甲酸苄酯，Sigma)中清洗，并放置在Fastwells上进行共焦成像(FVI000，Olympus)。呈现的图像沿z轴最大程度地投影。除了使用抗大鼠HRP(Jackson Laboratories，1:2000)作为第二抗体和3,3'-二氨基联苯胺过氧化物酶底物(具有金属增强剂的SIGMAFAST DAB，Sigma D0426)之外，类似的程序适用于完整的IHC。在终止缓冲液(PBS中的5mM EDTA)中大量洗涤后，然后将胚胎通过甲醇系列脱水并使用BABB清洗，并用立体显微镜(Leica；M205FA)成像。
对于基于切片的染色，使用了两种组织制备方法：***固定的石蜡包埋切片(FFPE)和新鲜冷冻的冷冻切片(FF)。将e9.5-10.5胚胎固定或直接冷冻在蜕膜内，同时从受孕体(concepti)中去除el8.5胎盘并分别固定。使用了用于IHC和IF的标准程序，使用5％正常山羊血清作为封闭剂，除非染色磷酸化蛋白，则在其中使用3％BSA代替。使用FFPE-IHC检测了以下蛋白质：ELABELA(αC ELA Ab)；合胞体-1(MyBioSource，MBS2516746)，磷酸化组蛋白-H3(Ser10)(Millipore 06-570)；使用FF-IHC：Hiflα(Abcam ab 114977)，ELA(定制αELAC pAb)，碱性磷酸酶(MyBioSource，MBS2524098)，裂解的半胱天冬酶3(Cell SignalingTechnologies 5A1E)；磷酸化组蛋白H3(Ser10)；使用FF-IF：Hydroxy-HIF-1α(Pro564)(Cell Signaling Technologies D43B5)。用倒置的立式显微镜(Zeiss Axiolmager)对切片成像。
使用兔α-纤维蛋白原全抗血清(Abcam ab34269)如所述(参考文献A34)进行冷冻切片上的纤维蛋白原IHC。通过在Schiff试剂中浸泡15分钟，然后在Mayer's苏木精中复染，对再水化的FFPE切片进行了PAS染色。
实施例9：材料和方法：蛋白质印迹
用PhosphoSafe提取试剂(EMD Millipore，71296)裂解单独解剖的el0.5卵黄囊，并进行了SDS-PAGE。使用的抗体抗CD31(Abcam ab28364)、磷酸化组蛋白H3(Ser10)(Millipore 06-570)和肌动蛋白(克隆C4，Millipore)。
实施例10：材料和方法：小鼠生物特征测量
将指定基因型的妊娠雌性在妊娠日(GD)15从上午10点到晚上10点放置到具有adlib食物和水的个体代谢笼(Techniplast Metabolic Mice)中。收集了尿液样品(直接进入粘在代谢笼收集漏斗唇部的1.5ml Eppendorf管中)，并使用BioAssay’s DPCR试剂盒(DPCR-100)根据制造商的说明书测量了蛋白质/肌酸酐比率。每种样品以两种不同的稀释度测量，每次一式两份，并使用平均读数。
使用具有小咬合和VPR袖带以及中等小鼠夹持器(Kent Scientific)的CODA 4通道尾袖平台测量了收缩压。通过在一天中的同一时间(下午2点)分别测量了基线血压3天以对小鼠进行预处理，然后将它们与雄性同期交配。然后在GD 8天、10天、12天、14天、18天和分娩后1天(通常在交配后20天)测量每只***(plugged)的小鼠。尽可能地，所有实验组中的小鼠在同一天一起测量。但这并不总是可能的，因为在一个大型队列中，它们并非都在同一天***。然而，采取了很多措施来确保将小鼠暴露在了相同的环境条件下(房间、处理者、噪音水平、温度、照明等)，并在每天的同一时间(14:00)进行了测量，以尽量减少个体间差异。从训练前到分娩后的每只小鼠的所有测量都在具有相同袖带的相同通道中进行，以最小化通道间和袖带变化。在开始前15分钟和整个测量期间，将小鼠保持固定在加热平台(水平3)上的夹持器中，在测量期间尾部皮肤温度达到并保持在30℃(如通过红外温度计测量的)。使用以下参数进行了每天的BP测量：5个预处理循环，20个常规循环，每个循环之间5秒，最大袖带压力150mmHg。去除异常值后所有接受的循环的平均值被视为当天的收缩压。Δ收缩压＝收缩BPGDx.-收缩BP非妊娠期。
实施例11：材料和方法：渗透泵
ELA肽由GL Biochem合成制备，纯度达到>98％。收到后，通过HPLC和质谱法检测肽的纯度，以确保正确的质量为3964.85。用PBS重构冻干的肽，用Slide-A-Lyzer透析盒(MW2500截止值，Thermo Fischer)透析以去除任何小的污染物。将透析的肽再冻干并储存在-80℃直至准备使用。然后将纯化的肽在水中重悬浮至2.5mg/ml，并使用皮下Alzet泵(型号1002)以0.5mg/kg/天输注，该泵以0.25μl/小时的速率递送肽。将准备好的泵在37℃孵育过夜以进行平衡，然后在GD7皮下植入背部经由肩部切口进入妊娠雌性小鼠。在小鼠进行血压测量之前，至少需要7天，以允许充分的伤口愈合。通过ELISA(在内源水平的2-3倍)检测到了母体血清中的外源性ELA，证实了它进入全身循环。
实施例12：材料和方法：胎盘转录组学分析
E9.5胎盘解剖自wt、ElaΔ/Δ和AplnΔ/Δ胚胎，胚胎分别来自wt×wt；ElaΔ/Δ×ElaΔ/Δ以及AplnΔ/Δ×AplnΔ/Y正交。AplnΔ/Δ、ElaΔ/Δ和wt母体是同窝出生的。去除母体蜕膜组织并立即快速冷冻胚胎胎盘。将相应的胚胎固定并且在CD31染色后评估血管发育和体细胞阶段，并且仅将wt和ElaΔ/Δ1级胚胎发育匹配的wt和ElaΔ/Δ对的胎盘用于RNASeq。使用RNAeasy(Qiagen)提取了RNA并且必须在BioAnalyzer(Agilent)上超过RIN值9以供进一步考虑。
实施例13：材料和方法：库的制备(mRNA序列链)
使用Agilent的Tapestation和Agilent RNA ScreenTape确认总RNA质量和RIN值。高RIN值为8以及以上表明总RNA质量良好且适合库的制备。使用可商购的试剂盒，TruSeq Stranded mRNA LT Sample Prep Kit，按照制造商的方案进行了库的制备。在构建库期间，将富集的mRNA片段化以获得片段大小为120-200bp(中值大小为150bp)的***片段。使用Agilent D1000 ScreenTape检测库的质量。应该观察到～280bp的预期区域中的单个峰，表明该库是良好的并且适合于测序。
实施例14：材料和方法：簇生成和测序
用0.2N NaOH将样品线性化为单链形式，然后将它们中和并用杂交缓冲液(HT1)稀释至4pM的上样浓度。使用Illumina NEXT SEQ 500 Sequenrs和Reagent v2(75循环试剂盒)试剂盒进行了NEXTSEQ High Output。将DNA连接到流式细胞表面并扩增成簇并与测序引物连接，并以1×76个循环运行，产生了单读的75碱基对读数。这些图像由NextSeq控制软件(MCS)捕获，并且实时分析(RTA v2)软件将图像转换为碱基评定(Basecall)(bcl)文件。然后将所有bcl文件传输到服务器用于存储和主要分析。
实施例15：材料和方法：RNA序列的数据分析
在主要分析中，使用bcl2fastq将bcl文件转换为fastq文件。转换后，对fastq读数进行了过滤，以去除未通过过滤的所有读数，只留下可用的通过过滤的(Passed Filtered)(PF)读数。然后，将主要分析结果生成为Demultiplexed-Stats文件并进行检验，并且然后传递PF fastq文件以进一步分析。使用TopHat(版本2.0.11)针对小鼠参考基因组(mm9)唯一且独立地映射(绘制mapped)来自每个库的读数。使用Cufflinks程序(版本2.2.1)进一步分析了映射的读数，并使用小鼠gencode.vM1注释将每个转录物的表达水平定量为每千转录物碱基每百万映射读数(FPKM)的片段。
使用CuffDiff(cuffdiff v2.2.1(4237))确定了差异FKPM基因表达，具有以下参数：基因文库归一化，合并的方差估计，0.05假发现率，最小比对计数为10，使用mm9参考序列的偏差校正，以及袖扣有效长度校正。在任何条件下，将FPKM 0.5以上没有表达的基因排除在进一步分析之外。如(参考文献A7)所述进行了基因集富集分析。使用与常规微阵列数据类似的工作流程，将每个样品的归一化FPKM计数(在去除“非表达”基因后)用作输入GCT数据，用于测试针对分子标记数据库中的基因集。根据del Toro等人(参考文献A9)，其使用分离自Dll4+/-小鼠视网膜的视网膜内皮细胞的转录组学分析(与wt视网膜相比其具有大量端细胞的过度生长)以定义一组端细胞富集的基因，我们还生成了定制“端细胞”基因集。通过来自相同样品的qPCR验证了十个最顶部上调和下调的基因，以确保与RNASeq数据的对应。原始数据在GSM 2675549(临时)下保存在NCBI的SRA中。以下是用于qpcr的寡核苷酸序列：
实施例16:材料和方法：尿囊外植体
在解剖培养基(DMEM+Hepes+7.5％FCS)中，在受孕第8天早晨从4-5个体节阶段胚胎显微解剖尿囊外植体，并培养于聚-L-赖氨酸包被的微孔(Ibidi)上的DMEM+NaHCO3+50％大鼠血清中。放入培养1小时后，加入了下列配体：PBS、2.5μM APLN-36(Sigma)、2.5μM ELA或ELA和APLN-36一起。12小时后，通过直接的裂解收获了外植体，并用Nucleospin RNA XS试剂盒(Machery Nagel)提取了RNA。使用Pico PCR cDNA合成试剂盒(Clontech)制备了cDNA，并使用带有EvaGreen和下面列出的PrimeTime探针的数字液滴PCR(Biorad)进行了基因定量：
实施例17：材料和方法：胎盘Esm1染色
由于Esm1阳性细胞在胎盘中非常罕见，我们通过整体免疫荧光标记的厚切片的共聚焦成像检测到了它们。解剖了E9.5胎盘并在室温下在4％PFA中固定了15分钟。将它们洗涤并包埋在2.5％低熔点琼脂糖中，并在200μm(速率6，速度7)下在振动切片机(Leica)上切片。将切片在室温下进一步固定了5分钟，并在室温下在PBS中的1％BSA/0.3％TX-100中封闭1小时，然后在4℃下用抗CD31(MEC13.3，BioLegend)和抗Esm1(R&D System,AF1999)染色过夜。将切片用1％BSA/0.3％TX-100洗涤3次(每次10分钟)，在室温下用鸡抗大鼠-AF488(分子探针1:1000)和驴抗山羊-647(分子探针，1:500)染色1.5小时。洗涤3次后，将切片脱水至100％甲醇，并在BABB中清洗，然后放置于BABB中的载玻片上。将每个胎盘的中间部分用于成像，并选择了母体中央管下的迷路区域。在Olympus FVI000上进行了共聚焦成像，对于所有获得的样品具有相同的设置。每个切片获得了77个z-堆叠，并且使用FIJI中的3D对象计数器插件(参考文献A35、参考文献A36)推导出每个部分的Esm1阳性细胞的数量。
实施例18：材料和方法：透射电子显微镜
在GD18.5，从wt和ElaΔ/Δ母体分别与wt和ElaΔ/Δ雄***配收获肾脏。在洗涤缓冲液将它们手动解剖成2mm厚的含有皮质区域的片，并在4℃下在0.1M磷酸盐缓冲的戊二醛(2％)中固定过夜。使用振动切片机切割20μm厚的切片，并将切片在0.1M二甲胂酸盐缓冲液中洗涤，并在含有1.5％K3Fe(Cn6)的1％OsO4中后固定2小时，脱水并包埋在环氧树脂中。将切片收集至铜网格上，复染并在JEM-1010上获得图像。每次放大获得每个肾脏样品的5个图像，并示出了代表性图像。
实施例19：材料和方法：ELISA
ELA：在指定的妊娠日通过心脏穿刺然后立即离心以除去血细胞压积收获的来自雌性小鼠的血清。通过进一步离心挤压并除去了纤维蛋白凝块，并且立即将血清快速冷冻并储存在-80℃直至所有样品准备好同时进行测量。如前所述(参考文献A1)进行了定制的ELA ELISA，具有以下修饰：使用一步抗体生物素化试剂盒(One-Step AntibodyBiotinylation kit)(Miltenyi Biotec)将检测的兔多克隆αC抗体生物素化，并以0.5ug/ml使用。将链霉亲和素-HRP用作扩增的第二抗体。在来自发现的产生低水平背景信号的非妊娠NSG雌性小鼠的血清中稀释了用作标准的ELA肽。
Plgf、Vegf、Apln、sFlt1：使用Microvette CB K2E 300μl管(Starstedt)从侧隐静脉收获了来自GD15和18的雌性小鼠的血液，并立即离心沉淀。收集了血浆上清液并快速冷冻直至所有样品都准备好进行测量。用于小鼠Plgf、Vegf、Apln和sFlt1的ELISA试剂盒购自Ray Biotech并根据制造商的说明书进行。另外使用独立获得的sFlt1重组标准验证了sFlt1 ELISA试剂盒，并且通过观察如预期的那样循环sFlt1水平在整个妊娠期间增加。
实施例20:材料和方法：侵入测定
将JAR绒毛膜癌细胞血清饥饿24小时，然后在不同浓度的ELA重组肽的存在下将50,000个细胞接种在100μl 10倍稀释的基质胶(Matrigel)包被的8.0μm细胞培养***物上。侵入发生27小时，之后将膜固定，用DAPI覆盖在Vectapield中，并盖上盖玻片，然后计数膜的下侧。计数通过每个膜拍摄10个随机视野之后使用ImageJ计数细胞数而进行的。
实施例21：材料和方法：统计学
所有数据均表示为平均值±平均值标准误差(s.e.m.)。使用Prism 5.0进行了测试均值差异的统计方法。每个面板中使用的测试类型都在附图图例中示出了。除非另有说明，这些包括双样品/配对的Student’s t检验，单向和双向ANOVA以及双侧检验。如果未明确指出p值的，显著性水平遵循*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001的惯例。对于条形图，N个数字是明确指出的。在所有子图中，散点图中的数据点代表个体生物学复制。
实施例22：Ela的合子型缺失导致由心血管缺陷和Apj的拟表型丢失引起的妊娠中期致死率
为了描绘ELA对哺乳动物发育的作用，我们使用同源重组生成了Ela敲除(ElaΔ/Δ)小鼠以删除编码成熟ELA肽的外显子3(图5A、图5B和图6B和图6C)。
该策略未引起ElaΔmRNA(图5C)的无义介导衰变，并且可能保留了Ela转录物(5)的潜在非编码功能。在断奶时仅获得了一半来自杂合杂交的预期ElaΔ/Δ小鼠(图5D)(p<0.001，卡方检验具有df＝1)。
值得注意的是，这种减少的隐性孟德尔遗传对于ElaΔ/Δ母体携带的ElaΔ/Δ胚胎(67％)比ElaΔ/+母体(51％)更为明显(图5D)。这种明显的母体贡献不是由于Ela mRNA沉积在***中，因为Ela转录的起始是严格合子的(图6A)。相反，我们推测ELA可能由母体循环或子宫环境提供。
在el0.5，ElaΔ/Δ胚胎可以分为3级：48.9％表型正常(1级)，8.5％具有延迟的少血管卵黄囊(2级)，以及42.6％具有无血管卵黄囊和严重的胚胎血管畸形(3级，图6D)，其类似于先前报道的Apj敲除(图5E至图5J)。在受影响的ElaΔ/Δ胚胎中，血管新生似乎开始，如CD31/Pecam+内皮丛的存在所证明的，其随后不能进行重塑和血管生成萌出以形成有组织的卵黄血管、背主动脉、流出道和体节间血管(图5K至图5S，图6E至图6J)。
心脏管环形性差，具有减少的平滑肌动蛋白肌肉(SMA)染色(图5Q至图5S)，并且受影响最严重的胚胎(3级)具有心包水肿(图6K和图6L)。
这些心脏缺陷与覆盖发育中心脏管的原始前肠中Ela的第一次胃后表达一致(图5T至图5U)(6)。
令人惊讶的是，在卵黄囊的内皮前体中未检测到Ela(图5W)，而Apj表达在胚胎、尿囊和卵黄囊中胚层中普遍存在，这产生了内皮细胞(图5V、图5X)。Ela和Apj的表达模式表明观察到的心脏缺陷部分是由于血流不足以刺激血管生成所致。
实施例23：Ela是胎盘血管生成所需的妊娠激素
在发育中的心脏管外，首先在发育中的胎盘的绒毛膜滋养层中检测到了Ela(图5U、图6M和图6N)，并且在尿囊融合后强烈上调(图7A)，限于el0.5的合体滋养层(ST)(图7C和图7C’)。
因此，在野生型(wt)ST中通过免疫组织化学检测到了ELA蛋白，而未在ElaΔ/Δ胎盘中检测到(图7E和图7F)。ELA阳性ST与Apj表达胎儿内皮细胞并列(图7B、图7D和图7D’)。因此，ELA可以以旁分泌方式向Apj表达的细胞传导信号，但是还可能因为绒毛尿囊胎盘由母体和胎儿血液灌注而是***循环的。事实上，通过ELISA在妊娠雌性的血清中检测到了内源性ELA，在妊娠中期达到峰值，但未在非妊娠小鼠中检测到(图7G)。妊娠母体的***性ELA在母体和胚胎两者方面都有贡献(图7H)，前者反映了母体子宫内膜基质和肾脏的分泌(图8A至图8C)，并且后者来自胚胎衍生的ST(图7C)。因此，我们得出结论，ELA是由发育中的孕体和胎盘分泌的妊娠相关激素。
来自受影响胚胎的ElaΔ/Δ胎盘具有薄的迷路(图7I和图7J，图8D和图7E)，血管化不良(图7K和图7L)，细胞凋亡增加(图8F和图8G)和增殖减少(图8H和图8I)。来自未受影响(1级)或轻度受影响(2级)胚胎的ElaΔ/Δ胎盘，其中度血管化，但仍表现出ST分化延迟，如在el0.5中减少的碱性磷酸酶和合胞体-1染色所示的(图7M和图7N，图8J和图8K)。尽管这样的胎盘最终发育成允许胚胎存活，但突变体与wt胎盘的迷路在妊娠结束结束之前仍然较薄(图8E)。
实施例24：Ela的丢失导致缺氧响应以及促血管生成程序的上调
为了理解导致胎盘功能障碍的Ela缺乏的发病机理，我们分离了来自wt和ElaΔ/Δ孕体的母体蜕膜的裸露胎盘(图9A)。我们选择通过e9.5进行了分析，以避免在el0.5时出现的主要心血管异常引起的混杂转录变化。根据相应胚胎的总体形态，将ElaΔ/Δ胎盘分为1级或3级(图10A)。
RNA测序和主组分分析显示，1级和3级ElaΔ/Δ胎盘彼此簇集靠近并远离wt胎盘(图10B)。由于1级胎盘与wt对应物完全无法区分，因此这些结果表明观察到的转录变化是由于ELA缺乏而非样品收集时已经存在的形态学缺陷。
基因集富集分析(GSEA)(7)显示了1级和3级ElaΔ/Δ胎盘具有指示升高的缺氧响应的基因标记(gene signature)(图9B、图10C和图10D，下表E1)。
表E1.ElaΔ/Δ胎盘中前65个上调基因的列表
与此观察一致，ElaΔ/Δ胎盘具有高水平的稳定化Hiflα(图10E和图10F)，以及降低水平的脯氨酰-羟基化Hiflα(图10G和图10H)，其是常氧下的降解目标(8)。同时，并且可能作为升高的缺氧响应的一部分，Ela缺乏导致促血管生成基因的上调，甚至在没有可辨别的血管缺陷的1级胎盘中(图9C)。
对差异调节基因的精密检查揭示了定义内皮端细胞的基因和通道的显著富集(图9D和图9E)(9)。端细胞形成萌出的内皮细胞的前缘并响应促血管生成信号而迁移(10)。以与轴突生长锥相同的方式起作用，端细胞延伸丝状伪足以确定血管生成萌出的方向，而尾炳细胞增殖以使管腔生成和血管萌芽的延伸(11、12)。
基因本体论分析证实了端细胞同一性的功能标志，诸如VEGF和信号素(Semaphorin)信号传导、激素分泌、轴突发生和丝状伪足延伸(图9D)。qPCR分析验证了端细胞标记物和血管生成基因的上调，血管生成基因包括Vegfa、Apln、Plgf、Esm1、Igfbp3、Flt4、Adm(图9F)。
通过针对内源性Esm1的直接免疫染色证实了这一点，内源性Esm1是一种特异性端细胞标记物(9、13、14)，其在ElaΔ/Δ胎盘切片中的数量和强度均显著上调，表明异位端细胞分化(图9G至图9I)。使用Apln-LacZ敲入报告体(15)作为端细胞同一性的替代标记物，我们发现在ElaΔ/Δ迷路中确实存在更多的Apln阳性端细胞，其具有整体发育不良的结构，其特征在于很少或没有血管生成萌芽的延伸和分支(图9J、图10I和图10J)。
这一发现表明，ELA缺失导致端细胞对柄细胞的扩张，这预期会损害管腔发生和萌芽延伸，诸如小鼠中对于Notch配体Dll4的单倍不足(16、17)。这种端细胞同一性的不平衡与ElaΔ/Δ迷路中的增殖性扰动是一致的，该迷路是低增生性的(图8H和图81)，以及相反地其是过度增殖的ElaΔ/Δ卵黄囊(图10K至图10O)，对血管生成具有整体负面影响。我们的结果表明，ELA有效地抑制端细胞基因诸如Esm1和Apln的表达。
实施例25：内源性ELA防止先兆子痫(PE)和外源性ELA给药挽救ELa缺乏小鼠中的PE症状/在妊娠期间ELA和APLN具有不同的生物学效应/向ElaΔ/Δ妊娠小鼠给药ELA挽救内皮增生症
胎盘发育和血管生成所需基因中的缺陷经常导致小鼠中的先兆子痫(18、19)。鉴于ElaΔ/Δ孕体中所见的胎盘缺陷，包括炎症反应增加的突出基因标记(图12A)，以及与人PE相关的Esm1(20、21)和Adm(22)的表达增加，我们假设ElaΔ/Δ母体可能表现出PE的症状。
因此，我们评估了ElaΔ/Δ妊娠小鼠的蛋白尿和高血压的迹象，这是PE的两个诊断标志。事实上，通过减少胎儿及其妊娠母体中wt Ela等位基因的数量，在妊娠日(GD)15尿蛋白/肌酸酐比率戏剧性增加，表明内源性ELA水平与蛋白尿的严重程度之间呈负相关(图11A)。
在妊娠结束时，肾小球切片的组织学和透射电子显微镜(TEM)显示了ElaΔ/Δ妊娠母体的内皮增生迹象(图12B至图12G)，这是患有PE的雌性的独特肾脏病理学(23、24)。来自ElaΔ/Δ妊娠母体的肾小球是肿胀的并且具有闭塞的毛细血管，证据表明内皮细胞上有蛋白质和囊泡沉积，缺少适当的内皮窗孔，以及毛细管腔中红细胞的凝固(图12B至图12G)。另一方面，足细胞表现正常。在非妊娠的ElaΔ/Δ小鼠中未观察到蛋白尿(图12H)，表明肾脏病理学对于妊娠是独特的。
接下来，在交配前训练小鼠至少3天后，我们采用尾袖法测量了整个妊娠期的收缩压(BP)。虽然wt和ElaΔ/Δ小鼠之间的非妊娠基线BP没有显著差异，但是妊娠ElaΔ/Δ母体(与ElaΔ/Δ父体交配)具有显著更高的收缩BP，其在分娩后恢复到正常水平(图11B)，以及GD 16和18的ΔBP(妊娠BP减去基线BP)(图11C)。
此外，与来自wt母体的wt幼仔相比，在el8.5通过剖腹产收集的来自ElaΔ/Δ母体的ElaΔ/Δ幼仔的体重明显更低(图11D)。这让人想起经常伴随PE和胎盘功能不全的宫内生长受限(IUGR)。我们的研究结果表明ElaΔ/Δ小鼠患有PE，并且表明对于调节母体心血管稳态以预防妊娠期高血压，ELA是所必需的。
为了确定ELA的丢失是否是人PE良好建立的生物标志物的上游，我们测量了sFlt1(24)、Vegf(25)和Plgf(19、26)的母体血浆和胎盘mRNA水平。在妊娠晚期，ElaΔ/Δ胎盘具有增加的sFlt1、Vegfa和Plgf mRNA水平(图12I)，尽管这些转录变化未转化为对应蛋白质的显著升高的血浆水平(图12J至图12L)。总之，这些数据表明ElaΔ/Δ小鼠仅仅由于Plgf/sFlt1比率的降低而没有发展PE症状，但是表明ELA在PE的发病机理中独立于这些血管生成因子并且可能更早地起作用。
值得注意的是，APJ的替代配体Apln的过量表达(图9F)，不足以挽救ElaΔ/Δ胎盘，表明这些配体引起不同的信号传导结果。事实上，与ElaΔ/Δ母体不同，AplnΔ/Δ母体未发展高血压(图13A)，实际上不具有显著降低的蛋白尿水平(图13B)。
类似地，AplnΔ/Δ胎盘未异常上调内皮端细胞标记物Esm1和Igfbp3，如ElaΔ/Δ胎盘中所见(图13C)。为了进一步研究APLN和ELA之间的生物学差异，我们用等浓度的ELA、APLN或两者处理了来自体节阶段胚胎的表达APJ的初级尿囊培养物(图13D)。我们发现ELA和APLN对Esm1和几种缺氧响应基因的表达产生了相反的作用(图13D至图13E’)。
最后，我们发现ELA可以直接抑制这些尿囊外植体中Apln的表达(图13F)，提高了在缺乏ELA的情况下Apln去抑制驱动过度的端细胞分化和致病性端细胞分化的可能性。事实上，我们发现在一窝ElaΔ/Δ无效胚胎中，受影响最严重的胚胎是Apln表达水平最高的胚胎(图13G)。此外，这两种配体显示出明显的时空表达，其中Ela高度集中并限于发育中的心脏、尾神经管和滋养层，而Apln在所有胚胎组织和胚外组织中广泛表达并广泛分布(图13H至图13I’)。总之，我们的数据表明，Ela和Apln在生物学上是截然不同的，并且对胎盘血管生成和PE症状引起相反的作用。
由于ELA似乎在妊娠期间充当***激素，我们询问在妊娠期间给药合成ELA是否可以缓解PE症状。ELA输注不影响妊娠wt小鼠中的BP和蛋白尿参数(图11F)，对胚胎发生也没有明显的副作用，如通过胎儿体重、形态学和随后的产后发育所测量的。我们能够归一化从GD 7.5开始输注重组ELA的ElaΔ/Δ妊娠母体的蛋白尿(图11E)和BP(图11F)，这与我们的ELA充当***激素的模型一致。此外，如通过周期性希夫酸和α-纤维蛋白原染色测定的，ELA的输注挽救了ElaΔ/Δ胎儿的重量(图11D)和妊娠ElaΔ/Δ母体的肾小球内皮增生症(图14)。
在人类中，我们发现ELA的表达主要在：早期胎盘组织(8+3周)(图11G)和术语胎盘(图12M和图12N)的绒毛状细胞滋养层和合体滋养层中。在PE中，绒毛外滋养层侵入和随后的螺旋动脉重塑常常是不完整的，导致胎儿形成浅且有缺陷(27)。
因此，我们假设在人类中，ELA可能有助于滋养层侵入。事实上，将ELA添加到滋养层样JAR绒毛膜癌细胞中显著增加了它们在transwell侵入测定中的侵入性(图11H)(28)。
这些数据表明，从合体滋养层分泌的ELA对滋养层分化成侵入性绒毛外滋养层具有旁分泌作用。ELA活性加强了侵入并且可能增强随后的螺旋动脉重塑，以防止人妊娠期间PE的发展。
实施例26：讨论
妊娠是一种独特的与增加的心血管需求和负担有关的生理状态。许多过程协同工作以赋予妊娠雌性的心血管稳态，尽管迄今为止这些在很大程度上是未知的。在小鼠中，我们提出了由胎盘滋养层产生的ELA以两种方式起作用以防止妊娠期高血压(图11I)。
首先，ELA对胎儿内皮细胞发挥旁分泌作用，其中，其抑制内皮细胞细胞的不适当分化。这使得能够正常分支血管生成并形成适当灌注所需的足够的迷路网络。
其次，ELA进入母体循环以调节心-肾功能。我们推测后者的作用可能对母体内皮有直接影响(例如通过刺激血管扩张机制，诸如一氧化氮的产生)(29)，或通过调节利尿(30)。
虽然，通过内皮细胞中的APJ信号传导可能实现了PE保护作用，但我们不排除尚未鉴定的ELA受体可能的作用(1)。小鼠中ELA缺乏导致经典的PE症状以及胎盘发育中的严重异常。
类似地，ELA由人胎盘的绒毛膜绒毛中的滋养层表达，并且在体外增强滋养层侵入。我们推测，在人类中，除了对母体内皮的直接影响外，ELA可能通过刺激滋养层迁移和侵入而促成胎盘形成，尽管这些仍有待研究。
总之，我们提出ELA是由哺乳动物胎盘产生的循环激素，以确保妊娠期间母体和胎儿的心血管完整性。我们的结果提出了这种可能性，即ELABELA-能轴(nergic axis)的短暂执行因此可能对呈现高血压的病症(诸如但不限于先兆子痫)有益。
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本发明所述方法和***的各种修改和变化对于本领域技术人员来说是显而易见的，而不脱离本发明的范围和精神。尽管已经结合特定的优选实施方式描述了本发明，但是应该理解，要求保护的本发明不应该不适当地限于这些特定实施方式。实事实上，用于实施本发明的所述模式的各种修改旨在落入权利要求的范围内，这对于分子生物学或相关领域的技术人员显而易见的。
序列表
<110> 新加坡科技研究局（AGENCY FOR SCIENCE, TECHNOLOGY AND RESEARCH）
<120> 多肽、核酸及其用途
<130> PN19000943P
<140>
<141>
<150> 10201605841S
<151> 2016-07-15
<160> 197
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的ELABELA 多肽特征序列
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (2)..(4)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (7)..(9)
<223> 任何氨基酸
<400> 1
Cys Xaa Xaa Xaa Arg Cys Xaa Xaa Xaa His Ser Arg Val Pro Phe Pro
1 5 10 15
<210> 2
<211> 32
<212> PRT
<213> 智人
<400> 2
Gln Arg Pro Val Asn Leu Thr Met Arg Arg Lys Leu Arg Lys His Asn
1 5 10 15
Cys Leu Gln Arg Arg Cys Met Pro Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20 25 30
<210> 3
<211> 32
<212> PRT
<213> 白足鼠属（Peromyscus sp.）
<400> 3
Gln Arg Pro Val Asn Phe Pro Lys Lys Arg Lys Val Tyr Arg His Asn
1 5 10 15
Cys Phe Arg Arg Arg Cys Val Pro Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20 25 30
<210> 4
<211> 32
<212> PRT
<213> 家鼠属（Rattus sp.）
<400> 4
Glu Lys Ser Val Asn Phe Pro Arg Arg Arg Lys Leu Tyr Arg His Asn
1 5 10 15
Cys Phe Arg Arg Arg Cys Ile Ser Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20 25 30
<210> 5
<211> 32
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 5
Gln Lys Pro Val Asn Phe Pro Arg Arg Arg Lys Leu Tyr Arg His Asn
1 5 10 15
Cys Phe Arg Arg Arg Cys Ile Pro Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20 25 30
<210> 6
<211> 32
<212> PRT
<213> 黄牛属（Bos sp.）
<400> 6
Gln Arg Gln Ala Asn Leu Ala Met Arg Arg Lys Leu His Arg His Asn
1 5 10 15
Cys Leu Gln Arg Arg Cys Met Pro Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20 25 30
<210> 7
<211> 32
<212> PRT
<213> 猪属（Sus sp.）
<400> 7
Gln Arg Pro Ala Asn Leu Ala Val Arg Arg Lys Leu His Arg His Asn
1 5 10 15
Cys Leu Gln Arg Arg Cys Met Pro Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20 25 30
<210> 8
<211> 32
<212> PRT
<213> 犰狳属（Dasypus sp.）
<400> 8
Gln Arg Pro Ala Asn Leu Ala Met Arg Arg Lys Leu His Arg His Asn
1 5 10 15
Cys Phe Gln Arg Arg Cys Met Pro Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20 25 30
<210> 9
<211> 32
<212> PRT
<213> 帚尾袋貂属（Trichosurus sp.）
<400> 9
Gln Arg Pro Gly Asn Leu Ala Leu Arg Arg Lys Pro His Arg His Ile
1 5 10 15
Cys Pro Gln Arg Arg Cys Met Pro Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20 25 30
<210> 10
<211> 32
<212> PRT
<213> 原鸡（Gallus gallus）
<400> 10
Gln Arg Pro Ala Asn Leu Ala Leu Arg Arg Lys Leu His Arg His Asn
1 5 10 15
Cys Ser His Arg Arg Cys Met Pro Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20 25 30
<210> 11
<211> 32
<212> PRT
<213> 中国壁虎属（Gekko sp.）
<400> 11
Gln Arg Pro Ala Asn Leu Ser Leu Arg Arg Lys Leu His Arg Gln His
1 5 10 15
Cys Ser His Arg Arg Cys Met Pro Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20 25 30
<210> 12
<211> 32
<212> PRT
<213> 安乐蜥属（Anolis sp.）
<400> 12
Gln Arg Pro Ala Asn Leu Ala Ser Arg Arg Lys Leu His Arg His His
1 5 10 15
Cys Ser His Arg Arg Cys Met Pro Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20 25 30
<210> 13
<211> 32
<212> PRT
<213> 非洲爪蟾（Xenopus laevis）
<400> 13
Gln Lys Pro Ala Asn Leu Ala Gln Arg Arg Arg Ile His Arg His Asn
1 5 10 15
Cys Phe Leu Lys Arg Cys Ile Pro Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20 25 30
<210> 14
<211> 32
<212> PRT
<213> 美西螈属（Ambystoma sp.）
<400> 14
Gln Arg Pro Val Asn Ala Ala His Arg Arg Arg Leu His Arg His Asn
1 5 10 15
Cys Ser Leu Arg Arg Cys Met Pro Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20 25 30
<210> 15
<211> 32
<212> PRT
<213> 青鳉属（Oryzias sp.）
<400> 15
Ala Arg Pro Asp Phe Leu Asn Leu Arg Arg Lys Tyr His Arg His His
1 5 10 15
Cys Leu His Arg Arg Cys Met Pro Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20 25 30
<210> 16
<211> 32
<212> PRT
<213> 叶吻银鲛属（Callorhinchus sp.）
<400> 16
Gln Lys Ser Gly Asn Ser Trp Arg Arg Lys Lys Met Gln Arg Arg Asn
1 5 10 15
Cys Trp His Arg Arg Cys Leu Pro Phe His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20 25 30
<210> 17
<211> 32
<212> PRT
<213> 太平洋鲑属（Oncorhynchus sp.）
<400> 17
Val Arg Pro Asp Ile Leu Asn Ile Arg Arg Arg Tyr His Arg His His
1 5 10 15
Cys Pro His Arg Arg Cys Met Pro Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20 25 30
<210> 18
<211> 36
<212> PRT
<213> 斑马鱼（Danio rerio）
<400> 18
Asp Lys His Gly Thr Lys His Asp Phe Leu Asn Leu Arg Arg Lys Tyr
1 5 10 15
Arg Arg His Asn Cys Pro Lys Lys Arg Cys Leu Pro Leu His Ser Arg
20 25 30
Val Pro Phe Pro
35
<210> 19
<211> 22
<212> PRT
<213> 智人
<400> 19
Met Arg Phe Gln Gln Phe Leu Phe Ala Phe Phe Ile Phe Ile Met Ser
1 5 10 15
Leu Leu Leu Ile Ser Gly
20
<210> 20
<211> 54
<212> PRT
<213> 智人
<400> 20
Met Arg Phe Gln Gln Phe Leu Phe Ala Phe Phe Ile Phe Ile Met Ser
1 5 10 15
Leu Leu Leu Ile Ser Gly Gln Arg Pro Val Asn Leu Thr Met Arg Arg
20 25 30
Lys Leu Arg Lys His Asn Cys Leu Gln Arg Arg Cys Met Pro Leu His
35 40 45
Ser Arg Val Pro Phe Pro
50
<210> 21
<211> 54
<212> PRT
<213> 白足鼠属（Peromyscus sp.）
<400> 21
Met Arg Phe Gln His Tyr Phe Leu Val Phe Phe Ile Phe Ala Met Ser
1 5 10 15
Leu Leu Phe Ile Thr Glu Gln Arg Pro Val Asn Phe Pro Lys Lys Arg
20 25 30
Lys Val Tyr Arg His Asn Cys Phe Arg Arg Arg Cys Val Pro Leu His
35 40 45
Ser Arg Val Pro Phe Pro
50
<210> 22
<211> 54
<212> PRT
<213> 家鼠属（Rattus sp.）
<400> 22
Met Arg Phe Gln Pro Leu Phe Trp Val Phe Phe Ile Phe Ala Met Ser
1 5 10 15
Leu Leu Phe Ile Thr Glu Glu Lys Ser Val Asn Phe Pro Arg Arg Arg
20 25 30
Lys Leu Tyr Arg His Asn Cys Phe Arg Arg Arg Cys Ile Ser Leu His
35 40 45
Ser Arg Val Pro Phe Pro
50
<210> 23
<211> 54
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 23
Met Arg Phe Gln Pro Leu Phe Trp Val Phe Phe Ile Phe Ala Met Ser
1 5 10 15
Leu Leu Phe Ile Ser Glu Gln Lys Pro Val Asn Phe Pro Arg Arg Arg
20 25 30
Lys Leu Tyr Arg His Asn Cys Phe Arg Arg Arg Cys Ile Pro Leu His
35 40 45
Ser Arg Val Pro Phe Pro
50
<210> 24
<211> 54
<212> PRT
<213> 黄牛属（Bos sp.）
<400> 24
Met Arg Phe His Gln Phe Phe Leu Leu Phe Val Ile Phe Met Leu Ser
1 5 10 15
Leu Leu Leu Ile His Gly Gln Arg Gln Ala Asn Leu Ala Met Arg Arg
20 25 30
Lys Leu His Arg His Asn Cys Leu Gln Arg Arg Cys Met Pro Leu His
35 40 45
Ser Arg Val Pro Phe Pro
50
<210> 25
<211> 54
<212> PRT
<213> 猪属（Sus sp.）
<400> 25
Met Arg Phe Arg Gln Phe Phe Leu Val Phe Phe Ile Phe Met Met Asn
1 5 10 15
Leu Leu Leu Ile Cys Gly Gln Arg Pro Ala Asn Leu Ala Val Arg Arg
20 25 30
Lys Leu His Arg His Asn Cys Leu Gln Arg Arg Cys Met Pro Leu His
35 40 45
Ser Arg Val Pro Phe Pro
50
<210> 26
<211> 54
<212> PRT
<213> 犰狳属（Dasypus sp.）
<400> 26
Met Lys Phe Gln Gln Phe Phe Tyr Val Phe Phe Val Phe Ile Met Ser
1 5 10 15
Leu Leu Leu Ile Asn Gly Gln Arg Pro Ala Asn Leu Ala Met Arg Arg
20 25 30
Lys Leu His Arg His Asn Cys Phe Gln Arg Arg Cys Met Pro Leu His
35 40 45
Ser Arg Val Pro Phe Pro
50
<210> 27
<211> 54
<212> PRT
<213> 帚尾袋貂属（Trichosurus sp.）
<400> 27
Met Arg Phe Gln Leu Leu Phe Phe Leu Phe Leu Phe Phe Thr Met Gly
1 5 10 15
Ile Leu Leu Ile Asp Gly Gln Arg Pro Gly Asn Leu Ala Leu Arg Arg
20 25 30
Lys Pro His Arg His Ile Cys Pro Gln Arg Arg Cys Met Pro Leu His
35 40 45
Ser Arg Val Pro Phe Pro
50
<210> 28
<211> 54
<212> PRT
<213> 原鸡（Gallus gallus）
<400> 28
Met Arg Leu Arg Arg Leu Leu Cys Val Val Phe Leu Leu Leu Val Ser
1 5 10 15
Leu Leu Pro Ala Ala Ala Gln Arg Pro Ala Asn Leu Ala Leu Arg Arg
20 25 30
Lys Leu His Arg His Asn Cys Ser His Arg Arg Cys Met Pro Leu His
35 40 45
Ser Arg Val Pro Phe Pro
50
<210> 29
<211> 54
<212> PRT
<213> 中国壁虎属（Gekko sp.）
<400> 29
Met Arg Leu Gln Leu Leu Leu Leu Thr Cys Phe Leu Ile Leu Thr Gly
1 5 10 15
Val Leu Leu Gly Asn Gly Gln Arg Pro Ala Asn Leu Ser Leu Arg Arg
20 25 30
Lys Leu His Arg Gln His Cys Ser His Arg Arg Cys Met Pro Leu His
35 40 45
Ser Arg Val Pro Phe Pro
50
<210> 30
<211> 54
<212> PRT
<213> 安乐蜥属（Anolis sp.）
<400> 30
Met Arg Leu Gln Gln Leu Leu Leu Thr Trp Phe Leu Leu Leu Ala Gly
1 5 10 15
Ala Leu Leu Ile Asn Gly Gln Arg Pro Ala Asn Leu Ala Ser Arg Arg
20 25 30
Lys Leu His Arg His His Cys Ser His Arg Arg Cys Met Pro Leu His
35 40 45
Ser Arg Val Pro Phe Pro
50
<210> 31
<211> 54
<212> PRT
<213> 非洲爪蟾（Xenopus laevis）
<400> 31
Met Asp Phe Gln Lys Leu Leu Tyr Ala Leu Phe Phe Ile Leu Met Ser
1 5 10 15
Leu Leu Leu Ile Asn Gly Gln Lys Pro Ala Asn Leu Ala Gln Arg Arg
20 25 30
Arg Ile His Arg His Asn Cys Phe Leu Lys Arg Cys Ile Pro Leu His
35 40 45
Ser Arg Val Pro Phe Pro
50
<210> 32
<211> 54
<212> PRT
<213> 美西螈属（Ambystoma sp.）
<400> 32
Met Lys Trp Gln Lys Leu Leu Ala Ile Leu Phe Trp Ile Leu Met Gly
1 5 10 15
Ala Leu Leu Val Asn Gly Gln Arg Pro Val Asn Ala Ala His Arg Arg
20 25 30
Arg Leu His Arg His Asn Cys Ser Leu Arg Arg Cys Met Pro Leu His
35 40 45
Ser Arg Val Pro Phe Pro
50
<210> 33
<211> 54
<212> PRT
<213> 青鳉属（Oryzias sp.）
<400> 33
Met Arg Val Trp Asn Leu Leu Tyr Leu Leu Leu Leu Leu Ala Ala Ala
1 5 10 15
Leu Ala Pro Val Phe Ser Ala Arg Pro Asp Phe Leu Asn Leu Arg Arg
20 25 30
Lys Tyr His Arg His His Cys Leu His Arg Arg Cys Met Pro Leu His
35 40 45
Ser Arg Val Pro Phe Pro
50
<210> 34
<211> 54
<212> PRT
<213> 叶吻银鲛属（Callorhinchus sp.）
<400> 34
Met Arg Phe Gln His Leu Leu His Ile Ile Leu Leu Leu Cys Thr Ser
1 5 10 15
Leu Leu Leu Ile Ser Gly Gln Lys Ser Gly Asn Ser Trp Arg Arg Lys
20 25 30
Lys Met Gln Arg Arg Asn Cys Trp His Arg Arg Cys Leu Pro Phe His
35 40 45
Ser Arg Val Pro Phe Pro
50
<210> 35
<211> 53
<212> PRT
<213> 太平洋鲑属（Oncorhynchus sp.）
<400> 35
Met Arg Ile Ile Ser Leu Leu Tyr Leu Leu Leu Leu Val Thr Val Leu
1 5 10 15
Gly Ser Val Ser Ser Val Arg Pro Asp Ile Leu Asn Ile Arg Arg Arg
20 25 30
Tyr His Arg His His Cys Pro His Arg Arg Cys Met Pro Leu His Ser
35 40 45
Arg Val Pro Phe Pro
50
<210> 36
<211> 58
<212> PRT
<213> 斑马鱼（Danio rerio）
<400> 36
Met Arg Phe Phe His Pro Leu Tyr Leu Leu Leu Leu Leu Leu Thr Val
1 5 10 15
Leu Val Leu Ile Ser Ala Asp Lys His Gly Thr Lys His Asp Phe Leu
20 25 30
Asn Leu Arg Arg Lys Tyr Arg Arg His Asn Cys Pro Lys Lys Arg Cys
35 40 45
Leu Pro Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
50 55
<210> 37
<211> 165
<212> DNA
<213> 智人
<400> 37
atgagatttc agcaattcct ttttgcattt tttattttta ttatgagtct tctccttatc 60
agcggacaga gaccagttaa tttgaccatg agaagaaaac tgcgcaaaca caattgcctt 120
cagaggagat gtatgcctct ccattcacga gtacccttcc cctga 165
<210> 38
<211> 165
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 38
atgcgattcc agcccctttt ttgggtattt tttatttttg ccatgagtct cctttttatc 60
agtgaacaga aaccagttaa ctttcccagg agaagaaaac tatacagaca caactgcttt 120
cgcaggagat gcattccact tcattctcga gtgcccttcc catga 165
<210> 39
<211> 165
<212> DNA
<213> 原鸡（Gallus gallus）
<400> 39
atgaggctcc ggcggctgct gtgcgtcgtg ttcctgctcc tggtcagcct gctacctgcc 60
gccgcgcaga gaccggccaa cctggccctg cgcaggaagc tgcaccgaca caactgctcg 120
caccggcggt gcatgccgct ccactcccgc gtgccctttc cctga 165
<210> 40
<211> 165
<212> DNA
<213> 非洲爪蟾（Xenopus laevis）
<400> 40
atggattttc agaaattatt gtatgcctta tttttcattc tgatgagtct actgctgatt 60
aatggccaga aaccagccaa cctcgcacag cgccggagga tacacagaca caactgcttc 120
ctcaagaggt gcataccact acattcaaga gttccatttc catga 165
<210> 41
<211> 177
<212> DNA
<213> 斑马鱼（Danio rerio）
<400> 41
atgagattct tccacccgct gtatctgctg ctgctgctgc tgacagtgct ggtcctcatc 60
agcgcagata aacatggtac aaaacacgat tttctcaact tgaggcggaa atatcgcaga 120
cacaactgcc cgaagaaacg ctgtctacct cttcactcca gagtaccttt cccttga 177
<210> 42
<211> 2422
<212> DNA
<213> 智人
<400> 42
atcattaacc ttcctgcaaa acacagctgg cagttctctg aggcttgtca ctagaatgtg 60
aagacagcca cacagatatt gcacagacta tttacagatc gtttggctta cattgagagt 120
cattgctcta cttttgtgcg gtaggaaaat gagatttcag caattccttt ttgcattttt 180
tatttttatt atgagtcttc tccttatcag cggacagaga ccagttaatt tgaccatgag 240
aagaaaactg cgcaaacaca attgccttca gaggagatgt atgcctctcc attcacgagt 300
acccttcccc tgagatctct ctagctaact ttactggatc tatcagaaga agaagaggag 360
tgaaggaaag acacccagcc acacaaaaga acttcatgat gccaacagcg tgattgctta 420
gaagttccta cacaaaaaaa ggatcatttg aaagcacctg gaatggttta ttagcttcac 480
aggattttat tcttcttggc ttctatttgg agggaaaata acataaattc aaaaggattc 540
caatctgaag cccaaattgt ttgcctacat aacaaaaata tctcatcttt tcctgcacat 600
tattattctt ttatgggtta aaaagaaaaa taccttttag tgttttagaa ctctctcatg 660
gtaaaaagtg caagaattta aaatgttgct ttcatattcc tataattctc caaaagtatt 720
aaattcgtat atgtttgagt gattttctaa aaactgctca acctggaatc aattgcattg 780
accatttggc ttcgcacaat agggagaaaa taattggttc attgattata tagagagaaa 840
gactaagaaa agctattaat tgctaccaat tttatgataa gctttaaggt ttatgaaagt 900
atgttttttt atttaatgag taatgtccat ttgaagttga aagaaaacat gaaatcctaa 960
ttgtagttca ttttatgttc aaatgaaacc attgtttttg tttttgtttt gaaacagagt 1020
ctcactctgt tgcccaaggt ggagagaagt ggcacgcttt tgtctcactg caacctccac 1080
ctcccgagtt caagtgattc tcgtgcctca acctcccaat tataggctgg gattacaggt 1140
gtgcaccact acacccagct aattcttgta ttttttgtag agatgaggtt ttaccctgtt 1200
gcccaggctg gtcttgaact caggctggaa ccattcattt tttaaccttt ctcatcatgt 1260
aattatagga acccaacgtt tgatttcctt tgaagttttg ttatgtcctt tattattttg 1320
tatggataat ttctttaaaa gtcttactta aagtcgacat ctaaaataca gttatgccaa 1380
tgaagtccca ctcagggtga tatctgtatc taaaagatga gtgctcatca tcctattagg 1440
ctttgtcttg gtggtgttca tcctgagatg ctgagacatg gaaataaaaa atcagaagga 1500
atttagggat atgattactc aaaaaagaaa ctatcctgtc taaatttgaa ttgtgttgat 1560
aactaggtgt tccccagatg ctaagatgtt cttaatttgt atttattgaa ggattgttag 1620
cttagtgcca caaaattttt cttactttat gttaattcca gataagaaat ttacaagttt 1680
atatcttttt ttttcttttt tttaagatga gatctggctc tatcacccag gctaaagtgc 1740
agtggcatga tctaggctaa ctccctggct caagcgatcc ttccacctca gcctcccaag 1800
tacctgggac tacaggcact cacggccaca cctgactaat ttttgtattt ttttgtagag 1860
atggagtatc gccatgttgc ccaggttggt ctcaaactca ggctggtgag ctcaagtgat 1920
ccgcctcctt ggcctcccaa aatactggga ttacaggcat gtgccaccat gctgggccac 1980
aagttcatat ctggagtaga agttttactt tgtaaatatt ataaagtaga agaaaccata 2040
aaccattttg ctaaaatgaa aggttggggt taatataaat gtaattttaa atagaaaatc 2100
tgacaacact gtcgagtttg tcttcctgtc aaagcttatt aaaagtgtct ttgcggatga 2160
atggtacttt ccacaagtgc atttgagtag aagcataacc tattctcagt tatatttatg 2220
tttaaaacat gtactggttt gtatattttg tactgaaaaa gaaaacactt tatagtcaag 2280
atacatctca ttcaatacaa gtctaaactc tttcaaatac aaattcgcat attcacagaa 2340
aaagttacaa atcagtttta ctattgtaaa gtaatgaaat ggttatacat ttcttaattg 2400
ttcaataaaa cactcaatga tt 2422
<210> 43
<211> 975
<212> DNA
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 43
cggactctcc ttggagcttt gcagagactt cccgcttaag ttactgcgtg cctgaatgga 60
aaaggcagct ggcagccctc tgagttctgg ccataggatg tggggtgagc cggacagata 120
ctgcgattta cagacgattt ctctacttga agagctattg ttcacttgcg tgtaagaaaa 180
aagaaaaaca aaaggaaaga aaaagaagaa aagaaaaaag agaaagaaaa gaaaagatgc 240
gattccagcc ccttttttgg gtatttttta tttttgccat gagtctcctt tttatcagtg 300
aacagaaacc agttaacttt cccaggagaa gaaaactata cagacacaac tgctttcgca 360
ggagatgcat tccacttcat tctcgagtgc ccttcccatg aggaaaacct ctaatttcct 420
tggctctacc agaagaaggg tgaaagcaaa gatacccaat caccggaaaa acaacctcag 480
gatggcaaca ggatggcagc tcaggagtta ctacgcaaca gaggctgttt cagagtaccg 540
tggatggctt ttcagactgc tcttcctgga ttctctttga caagaaaatg atagaaaggg 600
aaaacagacg aggttaaagc acatgcgttt gtctgaataa caatctctcc tgctgttctg 660
cacgttcttt gcgtataatg tatgaattac acatagtggt gggtttcaca aaggcattta 720
cataccagta catcacgtcc tatggccgtc tttccacaca tgtgcatcat atacaccgat 780
tctttacagg catgcatgcc atatacactg actacatttg cacacacata ccttcccctt 840
tctctcccct caccctcctg caggtctctt ttattcacct gggcagtttt gtttctattt 900
taatggtttg tacacatgaa tgattttatt gcacattatt attcttacat ggattaaaaa 960
gaaaactact ttaat 975
<210> 44
<211> 482
<212> DNA
<213> 原鸡（Gallus gallus）
<400> 44
ggcgagtgcc acggacgctt ctgtacacac gcggaccgca gggatgaggc tccggcggct 60
gctgtgcgtc gtgttcctgc tcctggtcag cctgctacct gccgccgcgc agagaccggc 120
caacctggcc ctgcgcagga agctgcaccg acacaactgc tcgcaccggc ggtgcatgcc 180
gctccactcc cgcgtgccct ttccctgagc gcccggccca gctcggcaag caatttcgta 240
acgggctttt cagtgtctta aaggaggaag ctgcaacaac tgcactgata gagaagctca 300
ttctaagtac tgcttaccaa cagttgacct ggtggagcca cagcaatcct gttttgaggg 360
agtccatctg aaatgaacac tttcagtggt cctgtgtatc acattctgca tgacctggaa 420
caaaggccca tgactcatat cctagaagca gggggaaggg agaaacgggg aaggtgattg 480
gg 482
<210> 45
<211> 700
<212> DNA
<213> 非洲爪蟾（Xenopus laevis）
<400> 45
gtttcggtcc ggattcccgg gatccagacc tgatctaata gttgcctatc tctgaagagc 60
aatatggatt ttcagaaatt attgtatgcc ttatttttca ttctgatgag tctactgctg 120
attaatggcc agaaaccagc caacctcgca cagcgccgga ggatacacag acacaactgc 180
ttcctcaaga ggtgcatacc actacattca agagttccat ttccatgaga ccactgagga 240
atctcatcat gatgtaacat aggatctgac tcaaatctac agaaataata tttattttga 300
acagtgttta agttgttctt tgacttataa gtggatgttt cttaaatgag ctgcccacaa 360
gaatgggcac agacaagctc caacccatgt aactggctgt gaaactggca caggagctgc 420
cgaaagcaat gtccctccat gaaactgatc caggagacat ctacagcaac ctttgttcca 480
ccaaaacaga caagagagca gattctccat cacattccaa ggaagtgaat gttcaaaggc 540
ttgcatttat tatcaaactg aaatgaagca tatcataata aggctcaatg tcctgtacct 600
caaaagattt aaaatatggg gataaaatga agaaaaacag aagatggttt ttggacaatc 660
tggtcatatt tttaaatatt gccccgtgtg caaaaaaaga 700
<210> 46
<211> 849
<212> DNA
<213> 斑马鱼（Danio rerio）
<400> 46
catcaggtca tctgtctatc tatccatccc tcagaggaca gagagagaag agagagtgaa 60
tatcgccatc tcaaactttg aaaaagttgg agagaccgag agctggctag aactgcgcgt 120
cttctatata actcaactta tacgagatct gagaacactt gctgagagcg acagacacat 180
aagaggattt ctacagtccg ttacctgcac atccgacaga atttatcgtc tgaggaaccg 240
cggacatcct gtgaggagag tcgagtctgc gccgcggacc aaaccaccct gagcatcacc 300
atgagattct tccacccgct gtatctgctg ctgctgctgc tgacagtgct ggtcctcatc 360
agcgcagata aacatggtac aaaacacgat tttctcaact tgaggcggaa atatcgcaga 420
cacaactgcc cgaagaaacg ctgtctacct cttcactcca gagtaccttt cccttgaggt 480
tttatgatgc tccgggcaag cattaagaaa aaccaaagac cagccttgga ttggaaatga 540
gaaaagattt atgtcagatg tgccgaggac tgttttattc gcacatgtat tgtaatcaaa 600
gccatgtttg tcacttctgt agcagaagtg ttttttgttt tgttttgttt tttaaatgaa 660
tgtaagtgaa tgagccatgg agatcctact gctgccaaac atgctgcaaa ctcatcactc 720
aatcaggttg agttggagca gaatcattgt aaatagtgag gactgaatga aatgtgttta 780
tatgtaagtt atgcacttca aatgttttat tattatcttg atttattaaa agtgtattgt 840
cttttcaga 849
<210> 47
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的抗ELABELA shRNA序列 A 寡核苷酸
<400> 47
gacacccagc cacacaaaa 19
<210> 48
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的抗ELABELA shRNA 序列 B 寡核苷酸
<400> 48
cccagccaca caaaagaac 19
<210> 49
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的抗ELABELA shRNA 序列 C 寡核苷酸
<400> 49
gtgattctcg tgcctcaac 19
<210> 50
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的抗ELABELA shRNA 序列 D 寡核苷酸
<400> 50
ctcacggcca cacctgact 19
<210> 51
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的抗ELABELA shRNA 序列 E 寡核苷酸
<400> 51
ttgccttcag aggagatgt 19
<210> 52
<211> 11
<212> PRT
<213> 智人
<400> 52
Cys Met Pro Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
1 5 10
<210> 53
<211> 17
<212> PRT
<213> 智人
<400> 53
Gln Arg Pro Val Asn Leu Thr Met Arg Arg Lys Leu Arg Lys His Asn
1 5 10 15
Cys
<210> 54
<211> 10
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述:ELABELA肽
<400> 54
Met Pro Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
1 5 10
<210> 55
<211> 16
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述:ELABELA肽
<400> 55
Gln Arg Pro Val Asn Leu Thr Met Arg Arg Lys Leu Arg Lys His Asn
1 5 10 15
<210> 56
<211> 54
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的共有多肽
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (2)..(2)
<223> Arg, Lys或Asp
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (3)..(3)
<223> Phe, Leu, Trp或Val
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (4)..(4)
<223> Gln, His, Arg或Trp
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (5)..(5)
<223> Gln, His, Pro, Leu, Arg, Lys或Asn
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (6)..(6)
<223> Phe, Tyr或Leu
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (7)..(7)
<223> Leu或Phe
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (8)..(8)
<223> Phe, Leu, Trp, Tyr, Cys, Ala或His
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (9)..(9)
<223> Ala, Val, Leu, Thr或Ile
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (10)..(10)
<223> Phe, Val, Cys, Trp, Leu或Ile
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (11)..(11)
<223> Phe, Val或Leu
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (12)..(12)
<223> Ile, Val, Phe, Leu或Trp
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (13)..(13)
<223> Phe, Leu或Ile
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (14)..(14)
<223> Ile, Ala, Met, Thr, Leu或Cys
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (15)..(15)
<223> Met, Leu, Val, Thr或Ala
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (16)..(16)
<223> Ser, Asn, Gly或Ala
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (17)..(17)
<223> Leu, Ile, Val或Ala
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (18)..(18)
<223> Leu或Ala
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (19)..(19)
<223> Leu, Phe或Pro
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (20)..(20)
<223> Ile, Ala, Gly或Val
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (21)..(21)
<223> Ser, Thr, His, Cys, Asn, Asp, Ala或Phe
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (22)..(22)
<223> Gly, Glu, Ala或Ser
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (23)..(23)
<223> Gln, Glu或Ala
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (24)..(24)
<223> Arg或Lys
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (25)..(25)
<223> Pro, Ser或Gln
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (26)..(26)
<223> Val, Ala, Gly或Asp
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (27)..(27)
<223> Asn或Phe
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (28)..(28)
<223> Leu, Phe, Ala或Ser
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (29)..(29)
<223> Thr, Pro, Ala, Ser, Asn或Trp
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (30)..(30)
<223> Met, Lys, Arg, Val, Leu, Ser, Gln或His
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (31)..(31)
<223> Arg或Lys
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (32)..(32)
<223> Arg或Lys
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (33)..(33)
<223> Lys或Arg
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (34)..(34)
<223> Leu, Val, Pro, Ile, Tyr或Met
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (35)..(35)
<223> Arg, Tyr, His或Gln
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (36)..(36)
<223> Lys或Arg
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (37)..(37)
<223> His, Gln或Arg
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (38)..(38)
<223> Asn, Ile或His
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (40)..(40)
<223> Leu, Phe, Pro, Ser或Trp
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (41)..(41)
<223> Gln, Arg, His或Leu
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (42)..(42)
<223> Arg或Lys
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (45)..(45)
<223> Met, Val, Ile或Leu
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (46)..(46)
<223> Pro或Ser
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (47)..(47)
<223> Leu或Phe
<400> 56
Met Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5 10 15
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
20 25 30
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Arg Cys Xaa Xaa Xaa His
35 40 45
Ser Arg Val Pro Phe Pro
50
<210> 57
<211> 4
<212> PRT
<213> 斑马鱼（Danio rerio）
<400> 57
Asp Lys His Gly
1
<210> 58
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的ELABELA多肽特征序列
<400> 58
His Ser Arg Val Pro Phe Pro
1 5
<210> 59
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的ELABELA多肽特征序列
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (3)..(5)
<223> 任何氨基酸
<400> 59
Arg Cys Xaa Xaa Xaa His Ser Arg Val Pro Phe Pro
1 5 10
<210> 60
<211> 16
<212> PRT
<213> 智人
<400> 60
Cys Leu Gln Arg Arg Cys Met Pro Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
1 5 10 15
<210> 61
<211> 16
<212> PRT
<213> 白足鼠属（Peromyscus sp.）
<400> 61
Cys Phe Arg Arg Arg Cys Val Pro Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
1 5 10 15
<210> 62
<211> 16
<212> PRT
<213> 家鼠属（Rattus sp.）
<400> 62
Cys Phe Arg Arg Arg Cys Ile Ser Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
1 5 10 15
<210> 63
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 63
Cys Phe Arg Arg Arg Cys Ile Pro Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
1 5 10 15
<210> 64
<211> 16
<212> PRT
<213> 黄牛属（Bos sp.）
<400> 64
Cys Leu Gln Arg Arg Cys Met Pro Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
1 5 10 15
<210> 65
<211> 16
<212> PRT
<213> 猪属（Sus sp.）
<400> 65
Cys Leu Gln Arg Arg Cys Met Pro Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
1 5 10 15
<210> 66
<211> 16
<212> PRT
<213> 犰狳属（Dasypus sp.）
<400> 66
Cys Phe Gln Arg Arg Cys Met Pro Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
1 5 10 15
<210> 67
<211> 16
<212> PRT
<213> 帚尾袋貂属（Trichosurus sp.）
<400> 67
Cys Pro Gln Arg Arg Cys Met Pro Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
1 5 10 15
<210> 68
<211> 16
<212> PRT
<213> 原鸡（Gallus gallus）
<400> 68
Cys Ser His Arg Arg Cys Met Pro Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
1 5 10 15
<210> 69
<211> 16
<212> PRT
<213> 中国壁虎属（Gekko sp.）
<400> 69
Cys Ser His Arg Arg Cys Met Pro Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
1 5 10 15
<210> 70
<211> 16
<212> PRT
<213> 安乐蜥属（Anolis sp.）
<400> 70
Cys Ser His Arg Arg Cys Met Pro Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
1 5 10 15
<210> 71
<211> 16
<212> PRT
<213> 非洲爪蟾（Xenopus laevis）
<400> 71
Cys Phe Leu Lys Arg Cys Ile Pro Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
1 5 10 15
<210> 72
<211> 16
<212> PRT
<213> 美西螈属（Ambystoma sp.）
<400> 72
Cys Ser Leu Arg Arg Cys Met Pro Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
1 5 10 15
<210> 73
<211> 16
<212> PRT
<213> 青鳉属（Oryzias sp.）
<400> 73
Cys Leu His Arg Arg Cys Met Pro Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
1 5 10 15
<210> 74
<211> 16
<212> PRT
<213> 叶吻银鲛属（Callorhinchus sp.）
<400> 74
Cys Trp His Arg Arg Cys Leu Pro Phe His Ser Arg Val Pro Phe Pro
1 5 10 15
<210> 75
<211> 16
<212> PRT
<213> 太平洋鲑属（Oncorhynchus sp.）
<400> 75
Cys Pro His Arg Arg Cys Met Pro Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
1 5 10 15
<210> 76
<211> 16
<212> PRT
<213> 斑马鱼（Danio rerio）
<400> 76
Cys Pro Lys Lys Arg Cys Leu Pro Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
1 5 10 15
<210> 77
<211> 23
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未的描述知:ELABELA肽
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (1)..(1)
<223> Arg或Lys
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (2)..(7)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (9)..(11)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (14)..(16)
<223> 任何氨基酸
<400> 77
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Arg Cys Xaa Xaa Xaa
1 5 10 15
His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 78
<211> 24
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未的描述知:ELABELA肽
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (1)..(1)
<223> Arg或Lys
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (2)..(8)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (10)..(12)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (15)..(17)
<223> 任何氨基酸
<400> 78
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Arg Cys Xaa Xaa
1 5 10 15
Xaa His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 79
<211> 24
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未的描述知:ELABELA肽
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (1)..(1)
<223> Arg或Lys
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (2)..(2)
<223> Arg或Lys
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (3)..(8)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (10)..(12)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (15)..(17)
<223> 任何氨基酸
<400> 79
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Arg Cys Xaa Xaa
1 5 10 15
Xaa His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 80
<211> 22
<212> PRT
<213> 白足鼠属（Peromyscus sp.）
<400> 80
Met Arg Phe Gln His Tyr Phe Leu Val Phe Phe Ile Phe Ala Met Ser
1 5 10 15
Leu Leu Phe Ile Thr Glu
20
<210> 81
<211> 22
<212> PRT
<213> 家鼠属（Rattus sp.）
<400> 81
Met Arg Phe Gln Pro Leu Phe Trp Val Phe Phe Ile Phe Ala Met Ser
1 5 10 15
Leu Leu Phe Ile Thr Glu
20
<210> 82
<211> 22
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 82
Met Arg Phe Gln Pro Leu Phe Trp Val Phe Phe Ile Phe Ala Met Ser
1 5 10 15
Leu Leu Phe Ile Ser Glu
20
<210> 83
<211> 22
<212> PRT
<213> 黄牛属（Bos sp.）
<400> 83
Met Arg Phe His Gln Phe Phe Leu Leu Phe Val Ile Phe Met Leu Ser
1 5 10 15
Leu Leu Leu Ile His Gly
20
<210> 84
<211> 22
<212> PRT
<213> 猪属（Sus sp.）
<400> 84
Met Arg Phe Arg Gln Phe Phe Leu Val Phe Phe Ile Phe Met Met Asn
1 5 10 15
Leu Leu Leu Ile Cys Gly
20
<210> 85
<211> 22
<212> PRT
<213> 犰狳属（Dasypus sp.）
<400> 85
Met Lys Phe Gln Gln Phe Phe Tyr Val Phe Phe Val Phe Ile Met Ser
1 5 10 15
Leu Leu Leu Ile Asn Gly
20
<210> 86
<211> 22
<212> PRT
<213> 帚尾袋貂属（Trichosurus sp.）
<400> 86
Met Arg Phe Gln Leu Leu Phe Phe Leu Phe Leu Phe Phe Thr Met Gly
1 5 10 15
Ile Leu Leu Ile Asp Gly
20
<210> 87
<211> 22
<212> PRT
<213> 原鸡（Gallus gallus）
<400> 87
Met Arg Leu Arg Arg Leu Leu Cys Val Val Phe Leu Leu Leu Val Ser
1 5 10 15
Leu Leu Pro Ala Ala Ala
20
<210> 88
<211> 22
<212> PRT
<213> 中国壁虎属（Gekko sp.）
<400> 88
Met Arg Leu Gln Leu Leu Leu Leu Thr Cys Phe Leu Ile Leu Thr Gly
1 5 10 15
Val Leu Leu Gly Asn Gly
20
<210> 89
<211> 22
<212> PRT
<213> 安乐蜥属（Anolis sp.）
<400> 89
Met Arg Leu Gln Gln Leu Leu Leu Thr Trp Phe Leu Leu Leu Ala Gly
1 5 10 15
Ala Leu Leu Ile Asn Gly
20
<210> 90
<211> 22
<212> PRT
<213> 非洲爪蟾（Xenopus laevis）
<400> 90
Met Asp Phe Gln Lys Leu Leu Tyr Ala Leu Phe Phe Ile Leu Met Ser
1 5 10 15
Leu Leu Leu Ile Asn Gly
20
<210> 91
<211> 22
<212> PRT
<213> 美西螈属（Ambystoma sp.）
<400> 91
Met Lys Trp Gln Lys Leu Leu Ala Ile Leu Phe Trp Ile Leu Met Gly
1 5 10 15
Ala Leu Leu Val Asn Gly
20
<210> 92
<211> 22
<212> PRT
<213> 青鳉属（Oryzias sp.）
<400> 92
Met Arg Val Trp Asn Leu Leu Tyr Leu Leu Leu Leu Leu Ala Ala Ala
1 5 10 15
Leu Ala Pro Val Phe Ser
20
<210> 93
<211> 22
<212> PRT
<213> 叶吻银鲛属（Callorhinchus sp.）
<400> 93
Met Arg Phe Gln His Leu Leu His Ile Ile Leu Leu Leu Cys Thr Ser
1 5 10 15
Leu Leu Leu Ile Ser Gly
20
<210> 94
<211> 24
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未的描述知:ELABELA肽
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (1)..(1)
<223> Arg或Lys
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (2)..(2)
<223> Ala或Gly
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (3)..(8)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (10)..(12)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (15)..(17)
<223> 任何氨基酸
<400> 94
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Arg Cys Xaa Xaa
1 5 10 15
Xaa His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 95
<211> 24
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未的描述知:ELABELA肽
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (1)..(1)
<223> Ala或Gly
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (2)..(2)
<223> Arg或Lys
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (3)..(8)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (10)..(12)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (15)..(17)
<223> 任何氨基酸
<400> 95
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Arg Cys Xaa Xaa
1 5 10 15
Xaa His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 96
<211> 24
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未的描述知:ELABELA肽
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (1)..(1)
<223> Ala或Gly
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (2)..(2)
<223> Ala或Gly
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (3)..(8)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (10)..(12)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (15)..(17)
<223> 任何氨基酸
<400> 96
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Arg Cys Xaa Xaa
1 5 10 15
Xaa His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 97
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的6xHis 标签
<400> 97
His His His His His His
1 5
<210> 98
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 98
agcaaaaccc ggaggagt 18
<210> 99
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 99
cacgagtacc ctttccctga 20
<210> 100
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 100
tccagcagat gcaagaactc 20
<210> 101
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223>人工序列的描述:合成的引物
<400> 101
ggaagcccaa gaacctgaat 20
<210> 102
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 102
aatacttccc ccacaacaca a 21
<210> 103
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 103
cgccctactc gtacatctcg 20
<210> 104
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 104
gtggggaggt cgaggttc 18
<210> 105
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 105
gctgtgacag gtacccaacc 20
<210> 106
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 106
tgcgggctac tgaaaagttc 20
<210> 107
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 107
agccacatcg ctcagacac 19
<210> 108
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 108
atcttgaccc tccctggaat 20
<210> 109
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 109
aatgggcgga gttatgatac c 21
<210> 110
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 110
gatcttcact ccccttgttc a 21
<210> 111
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 111
gctgtgttca gccagtgct 19
<210> 112
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 112
cgtctgctac tgcttcatcg 20
<210> 113
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 113
cctcttgcgc tatggacttc 20
<210> 114
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 114
ttcttccacc cgctgtatct 20
<210> 115
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223>人工序列的描述:合成的引物
<400> 115
ccacatcggc ctgtgtatat c 21
<210> 116
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 116
ggctgggtgt ctttccttc 19
<210> 117
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 117
ttgctattct tcggccagtt 20
<210> 118
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 118
gctggagttg ctggaagc 18
<210> 119
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 119
ctctcccgca ccagtcat 18
<210> 120
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 120
agcgtcagca tcttgttgg 19
<210> 121
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 121
tgttctggag gtccatggta g 21
<210> 122
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 122
catgcaggtg agttgtcaga a 21
<210> 123
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 123
tgtaggccct gtttctcctg 20
<210> 124
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 124
gcccaatacg accaaatcc 19
<210> 125
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 125
atggggagac taggctgtga 20
<210> 126
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 126
catatcaggt tcacttccgg g 21
<210> 127
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 127
ggcagcgatt tcctcatc 18
<210> 128
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 128
ttctgccgca aaggagtc 18
<210> 129
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 129
gctttttctg gtcttccttg c 21
<210> 130
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 130
gcctgcaatc cagtaggtct 20
<210> 131
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 131
ccggagcatc ataaaacctc 20
<210> 132
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的寡核苷酸
<400> 132
gtgattctcg tgcctcaac 19
<210> 133
<211> 16
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的寡核苷酸
<400> 133
tccacccgct gtatct 16
<210> 134
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的寡核苷酸
<400> 134
gctgctgctg acagt 15
<210> 135
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的寡核苷酸
<400> 135
aacacttgct gagagcgaca g 21
<210> 136
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的寡核苷酸
<400> 136
agatgtggtg gtgttgagta gc 22
<210> 137
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 137
atggagccaa cgccggaat 19
<210> 138
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 138
atgaatgcca tggacaacat 20
<210> 139
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 139
acacacatcc cagccttttc 20
<210> 140
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 140
ccatccctca gaggacagag 20
<210> 141
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 141
tcacactttg gtggccagc 19
<210> 142
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 142
tcacaccttc gtagccagc 19
<210> 143
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 143
ccaatttcat tcggcaatct 20
<210> 144
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 144
catgtttggc agcagtagga 20
<210> 145
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 145
ctttgtggtg accctgcccc tgttggccgt ctacactgct ctg 43
<210> 146
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 146
cagagcagtg tagacggcca acaggggcag ggtcaccaca aag 43
<210> 147
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 147
atggaggaag gtggtgattt tga 23
<210> 148
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 148
atggacccag aagaaacttc ag 22
<210> 149
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 149
atgagattct tccacccgc 19
<210> 150
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 150
ggagaccctt gtggttgact ag 22
<210> 151
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 151
ttagagtgac acagacctct tcc 23
<210> 152
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的引物
<400> 152
tcaagggaaa ggtactctgg ag 22
<210> 153
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述:合成的寡核苷酸
<400> 153
acacgtaccg ggactatga 19
<210> 154
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的寡核苷酸
<400> 154
ccatcatgct gacctgtta 19
<210> 155
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的寡核苷酸
<400> 155
gacctctgcg cctaattat 19
<210> 156
<211> 57
<212> DNA
<213> 斑马鱼（Danio rerio）
<400> 156
atgagattct tccacccgct gtatctgctg ctgctgctgc tgacagtgct ggtcctc 57
<210> 157
<211> 51
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的多肽
<400> 157
Met Arg Phe Phe His Pro Leu Tyr Leu Leu Val Leu Ile Ser Ala Asp
1 5 10 15
Lys His Gly Thr Lys His Asp Phe Leu Asn Leu Arg Arg Lys Tyr Arg
20 25 30
Arg His Asn Cys Pro Lys Lys Arg Cys Leu Pro Leu His Ser Arg Val
35 40 45
Pro Phe Pro
50
<210> 158
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的多肽
<400> 158
Met Arg Phe Phe His Pro Leu Tyr Leu Cys Gln Cys Trp Ser Ser Ser
1 5 10 15
Ala Gln Ile Asn Met Val Gln Asn Thr Ile Phe Ser Thr
20 25
<210> 159
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的肽
<400> 159
Met Arg Phe Phe His Pro Leu
1 5
<210> 160
<211> 33
<212> PRT
<213> 智人
<400> 160
Gly Gln Arg Pro Val Asn Leu Thr Met Arg Arg Lys Leu Arg Lys His
1 5 10 15
Asn Cys Leu Gln Arg Arg Cys Met Pro Leu His Ser Arg Val Pro Phe
20 25 30
Pro
<210> 161
<211> 36
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述:爱帕琳（apelin）肽
<400> 161
Leu Val Gln Pro Arg Gly Ser Arg Asn Gly Pro Gly Pro Trp Gln Gly
1 5 10 15
Gly Arg Arg Lys Phe Arg Arg Gln Arg Pro Arg Leu Ser His Lys Gly
20 25 30
Pro Met Pro Phe
35
<210> 162
<211> 23
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述:ELABELA肽
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (1)..(7)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (9)..(11)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (14)..(16)
<223> 任何氨基酸
<400> 162
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Arg Cys Xaa Xaa Xaa
1 5 10 15
His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 163
<211> 24
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<223> 未知的描述:ELABELA肽
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (1)..(8)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (10)..(12)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> 残基的翻译后修饰
<222> (15)..(17)
<223> 任何氨基酸
<400> 163
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Arg Cys Xaa Xaa
1 5 10 15
Xaa His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 164
<211> 24
<212> PRT
<213> 智人
<400> 164
Arg Arg Lys Leu Arg Lys His Asn Cys Leu Gln Arg Arg Cys Met Pro
1 5 10 15
Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 165
<211> 24
<212> PRT
<213> 白足鼠属（Peromyscus sp.）
<400> 165
Lys Arg Lys Val Tyr Arg His Asn Cys Phe Arg Arg Arg Cys Val Pro
1 5 10 15
Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 166
<211> 24
<212> PRT
<213> 家鼠属（Rattus sp.）
<400> 166
Arg Arg Lys Leu Tyr Arg His Asn Cys Phe Arg Arg Arg Cys Ile Ser
1 5 10 15
Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 167
<211> 24
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 167
Arg Arg Lys Leu Tyr Arg His Asn Cys Phe Arg Arg Arg Cys Ile Pro
1 5 10 15
Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 168
<211> 24
<212> PRT
<213> 黄牛属（Bos sp.）
<400> 168
Arg Arg Lys Leu His Arg His Asn Cys Leu Gln Arg Arg Cys Met Pro
1 5 10 15
Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 169
<211> 24
<212> PRT
<213> 猪属（Sus sp.）
<400> 169
Arg Arg Lys Leu His Arg His Asn Cys Leu Gln Arg Arg Cys Met Pro
1 5 10 15
Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 170
<211> 24
<212> PRT
<213> 犰狳属（Dasypus sp.）
<400> 170
Arg Arg Lys Leu His Arg His Asn Cys Phe Gln Arg Arg Cys Met Pro
1 5 10 15
Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 171
<211> 24
<212> PRT
<213> 帚尾袋貂属（Trichosurus sp.）
<400> 171
Arg Arg Lys Pro His Arg His Ile Cys Pro Gln Arg Arg Cys Met Pro
1 5 10 15
Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 172
<211> 24
<212> PRT
<213> 原鸡（Gallus gallus）
<400> 172
Arg Arg Lys Leu His Arg His Asn Cys Ser His Arg Arg Cys Met Pro
1 5 10 15
Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 173
<211> 24
<212> PRT
<213> 中国壁虎属（Gekko sp.）
<400> 173
Arg Arg Lys Leu His Arg Gln His Cys Ser His Arg Arg Cys Met Pro
1 5 10 15
Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 174
<211> 24
<212> PRT
<213> 安乐蜥属（Anolis sp.）
<400> 174
Arg Arg Lys Leu His Arg His His Cys Ser His Arg Arg Cys Met Pro
1 5 10 15
Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 175
<211> 24
<212> PRT
<213> 非洲爪蟾（Xenopus laevis）
<400> 175
Arg Arg Arg Ile His Arg His Asn Cys Phe Leu Lys Arg Cys Ile Pro
1 5 10 15
Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 176
<211> 24
<212> PRT
<213> 美西螈属（Ambystoma sp.）
<400> 176
Arg Arg Arg Leu His Arg His Asn Cys Ser Leu Arg Arg Cys Met Pro
1 5 10 15
Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 177
<211> 24
<212> PRT
<213> 青鳉属（Oryzias sp.）
<400> 177
Arg Arg Lys Tyr His Arg His His Cys Leu His Arg Arg Cys Met Pro
1 5 10 15
Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 178
<211> 24
<212> PRT
<213> 叶吻银鲛属（Callorhinchus sp.）
<400> 178
Arg Lys Lys Met Gln Arg Arg Asn Cys Trp His Arg Arg Cys Leu Pro
1 5 10 15
Phe His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 179
<211> 24
<212> PRT
<213> 太平洋鲑属（Oncorhynchus sp.）
<400> 179
Arg Arg Arg Tyr His Arg His His Cys Pro His Arg Arg Cys Met Pro
1 5 10 15
Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 180
<211> 24
<212> PRT
<213> 斑马鱼（Danio rerio）
<400> 180
Arg Arg Lys Tyr Arg Arg His Asn Cys Pro Lys Lys Arg Cys Leu Pro
1 5 10 15
Leu His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 181
<211> 23
<212> PRT
<213> 智人
<400> 181
Arg Lys Leu Arg Lys His Asn Cys Leu Gln Arg Arg Cys Met Pro Leu
1 5 10 15
His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 182
<211> 23
<212> PRT
<213> 白足鼠属（Peromyscus sp.）
<400> 182
Arg Lys Val Tyr Arg His Asn Cys Phe Arg Arg Arg Cys Val Pro Leu
1 5 10 15
His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 183
<211> 23
<212> PRT
<213> 家鼠属（Rattus sp.）
<400> 183
Arg Lys Leu Tyr Arg His Asn Cys Phe Arg Arg Arg Cys Ile Ser Leu
1 5 10 15
His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 184
<211> 23
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 184
Arg Lys Leu Tyr Arg His Asn Cys Phe Arg Arg Arg Cys Ile Pro Leu
1 5 10 15
His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 185
<211> 23
<212> PRT
<213> 黄牛属（Bos sp.）
<400> 185
Arg Lys Leu His Arg His Asn Cys Leu Gln Arg Arg Cys Met Pro Leu
1 5 10 15
His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 186
<211> 23
<212> PRT
<213> 猪属（Sus sp.）
<400> 186
Arg Lys Leu His Arg His Asn Cys Leu Gln Arg Arg Cys Met Pro Leu
1 5 10 15
His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 187
<211> 23
<212> PRT
<213> 犰狳属（Dasypus sp.）
<400> 187
Arg Lys Leu His Arg His Asn Cys Phe Gln Arg Arg Cys Met Pro Leu
1 5 10 15
His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 188
<211> 23
<212> PRT
<213> 帚尾袋貂属（Trichosurus sp.）
<400> 188
Arg Lys Pro His Arg His Ile Cys Pro Gln Arg Arg Cys Met Pro Leu
1 5 10 15
His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 189
<211> 23
<212> PRT
<213> 原鸡（Gallus gallus）
<400> 189
Arg Lys Leu His Arg His Asn Cys Ser His Arg Arg Cys Met Pro Leu
1 5 10 15
His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 190
<211> 23
<212> PRT
<213> 中国壁虎属（Gekko sp.）
<400> 190
Arg Lys Leu His Arg Gln His Cys Ser His Arg Arg Cys Met Pro Leu
1 5 10 15
His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 191
<211> 23
<212> PRT
<213> 安乐蜥属（Anolis sp.）
<400> 191
Arg Lys Leu His Arg His His Cys Ser His Arg Arg Cys Met Pro Leu
1 5 10 15
His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 192
<211> 23
<212> PRT
<213> 非洲爪蟾（Xenopus laevis）
<400> 192
Arg Arg Ile His Arg His Asn Cys Phe Leu Lys Arg Cys Ile Pro Leu
1 5 10 15
His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 193
<211> 23
<212> PRT
<213> 美西螈属（Ambystoma sp.）
<400> 193
Arg Arg Leu His Arg His Asn Cys Ser Leu Arg Arg Cys Met Pro Leu
1 5 10 15
His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 194
<211> 23
<212> PRT
<213> 青鳉属（Oryzias sp.）
<400> 194
Arg Lys Tyr His Arg His His Cys Leu His Arg Arg Cys Met Pro Leu
1 5 10 15
His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 195
<211> 23
<212> PRT
<213> 叶吻银鲛属（Callorhinchus sp..）
<400> 195
Lys Lys Met Gln Arg Arg Asn Cys Trp His Arg Arg Cys Leu Pro Phe
1 5 10 15
His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 196
<211> 23
<212> PRT
<213> 太平洋鲑属（Oncorhynchus sp.）
<400> 196
Arg Arg Tyr His Arg His His Cys Pro His Arg Arg Cys Met Pro Leu
1 5 10 15
His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20
<210> 197
<211> 23
<212> PRT
<213> 斑马鱼（Danio rerio）
<400> 197
Arg Lys Tyr Arg Arg His Asn Cys Pro Lys Lys Arg Cys Leu Pro Leu
1 5 10 15
His Ser Arg Val Pro Phe Pro
20

Claims (20)

1.ELABELA多肽或核酸，用于诊断个体中的先兆子痫、检测个体对先兆子痫的易感性、治疗、缓解或预防个体中的先兆子痫。
2.根据权利要求1所述的用于本文所提出的用途的ELABELA多肽，其中，所述ELABELA多肽包含序列CXXXRCXXXHSRVPFP(SEQ ID NO：1)，其中，X代表氨基酸残基，或其片段、同源物、变体或衍生物。
3.根据权利要求2所述的用于本文所提出的用途的ELABELA多肽，其中，所述ELABELA多肽选自以下中的一种或多种：
(a)序列SEQ ID NO：162(XXXXXXXCXXXRCXXXHSRVPFP)，其中，X代表氨基酸残基，并且其中SEQ ID NO：162的1位包含碱性氨基酸残基，优选K或R；
(b)序列SEQ ID NO：163(XXXXXXXXCXXXRCXXXHSRVPFP)，其中，X代表氨基酸残基，并且其中SEQ ID NO：163的1位包含碱性氨基酸残基，优选K或R；
(c)序列SEQ ID NO：163(XXXXXXXXCXXXRCXXXHSRVPFP)，其中，X代表氨基酸残基，其中SEQ ID NO：163的1位和2位包含碱性氨基酸残基对，优选KK、KR、RK或RR。
4.根据权利要求2或3所述的用于本文所提出的用途的ELABELA多肽，其中，所述ELABELA多肽包含选自由以下组成的组的序列：SEQ ID NO：2至SEQ ID NO：18，优选如SEQID NO：2所示的人ELABELA序列。
5.根据权利要求2、3或4所述的用于本文所提出的用途的ELABELA多肽，其中，所述ELABELA多肽还包含信号传导序列，诸如SEQ ID NO：19中所示的人ELABELA信号传导序列。
6.根据权利要求2至5中任一项所述的用于本文所提出的用途的ELABELA多肽，其中，所述ELABELA多肽包含选自由以下组成的组的序列：SEQ ID NO：20至SEQ ID NO：36，优选如SEQ ID NO：20所示的人ELABELA序列。
7.根据权利要求2至6中任一项所述的用于本文所提出的用途的ELABELA多肽，其中，参考序列CXXXRCXXXHSRVPFP(SEQ ID NO：1)中的编号，所述ELABELA多肽包含位于1位和6位或在1位和6位附近的半胱氨酸残基之间的分子内共价键，或者，其中一个或两个半胱氨酸残基包含具有巯基的还原半胱氨酸。
8.根据权利要求2至7中任一项所述的用于本文所提出的用途的ELABELA多肽，其中，所述ELABELA多肽包含以下中的任何一种或多种：
(a)位于31位的碱性残基的突变，优选其中位于31位的碱性残基突变为中性残基，更优选其中位于31位的K或R突变为A或G；
(b)位于32位的碱性残基的突变，优选其中位于32位的碱性残基突变为中性残基，更优选其中位于32位的K或R突变为A或G；或者
(c)R31G、R31A、K31G或K31A取代，优选R32G、R32A、K32G或K32A取代
参考如SEQ ID NO：20所示的人ELABELA序列的位置编号。
9.根据权利要求1所述的用于本文所提出的用途的ELABELA核酸，其中，所述ELABELA核酸包含能够编码如权利要求2至8中任一项所述的ELABELA多肽的序列。
10.根据权利要求8所述的用于本文所提出的用途的ELABELA核酸，其包含SEQ ID NO：37至SEQ ID NO：46中任一个所示的核酸序列，优选人ELABELA核酸序列SEQ ID NO：37或SEQID NO：42。
11.一种包含ELABELA核酸的载体诸如表达载体，包含这种载体或核酸的宿主细胞诸如细菌、真菌或酵母细胞，或转基因非人类动物，用于诊断个体中的先兆子痫、检测个体对先兆子痫的易感性、治疗、缓解或预防个体中的先兆子痫，所述转基因非人类动物包含这种宿主细胞、这种载体或者这种核酸，优选哺乳动物，诸如小鼠。
12.一种shRNA或siRNA分子，能够调节ELABELA多肽的表达、量或活性的任何组合，所述shRNA或siRNA分子优选包含选自由以下组成的组的序列：SEQ ID NO：47至SEQ ID NO：51，用于诊断个体中的先兆子痫、检测个体对先兆子痫的易感性、治疗、缓解或预防个体中的先兆子痫。
13.抗体或其抗原结合片段，用于诊断个体中的先兆子痫、检测个体对先兆子痫的易感性、治疗、缓解或预防个体中的先兆子痫，其中，所述抗体或其抗原结合片段能够特异性结合于以下中的任何一种或多种：
(a)包含序列CMPLHSRVPFP(SEQ ID NO：52)的多肽；
(b)包含序列QRPVNLTMRRKLRKHNC(SEQ ID NO：53)的多肽；
(c)包含序列QRPVNLTMRRKLRKHNCLQRRCMPLHSRVPFP(SEQ ID NO：2)的多肽；
(d)ELABELA多肽；
(e)由ELABELA核酸编码的ELABELA多肽；以及
(f)包含SEQ ID NO：1-36中任何序列的ELABELA多肽；
所述抗体或其抗原结合片段还任选地包含标签。
14.ELABELA多肽或核酸在制备用于治疗或预防先兆子痫的药物中的用途。
15.根据权利要求14所述的用途，其中，所述ELABELA多肽包含如权利要求2-8中任一项所述的多肽。
16.根据权利要求14所述的用途，其中，所述ELABELA核酸包含如权利要求9或10中任一项所述的核酸。
17.一种测定可用于治疗或缓解先兆子痫的化合物的方法，所述方法包括：
(a)使ELABELA多肽与候选化合物接触并进行测定以确定所述候选化合物是否结合于所述ELABELA多肽；
(b)使ELABELA多肽与候选化合物接触并进行测定以确定所述候选化合物是否调节所述ELABELA多肽的活性；或者
(c)使表达ELABELA多肽的细胞与候选化合物接触并进行测定以确定所述候选化合物是否引起所述细胞中或所述细胞的所述ELABELA多肽的表达、量或活性的升高或减少；
优选地，还包括分离或合成如此鉴定的目标化合物。
18.一种治疗、缓解或预防个体中的先兆子痫的方法，所述方法包括向所述个体给药治疗有效量的ELABELA。
19.一种诊断个体中的先兆子痫或检测个体对先兆子痫的易感性的方法，所述方法包括检测所述个体中或所述个体的ELABELA的表达、量或活性的调节，优选下调。
20.根据权利要求19所述的方法，其中，所述个体中或所述个体的ELABELA的下调表明所述个体中的先兆子痫或所述个体对先兆子痫的易感性或倾向性。
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