CN109781883A - 一种基于QuEChERS-分散液液微萃取痕量检测5-羟甲基糠醛的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种基于QuEChERS‑分散液液微萃取痕量检测5‑羟甲基糠醛的方法,属于食品安全检测领域。本发明利用QuEChERS联合分散液液微萃取DLLME技术进行前处理,对检测物进行净化富集处理,能够用于痕量测定米饭(固体样品)中5‑羟甲基糠醛的含量。本发明将改进的QuEChERS‑DLLME前处理与UPLC‑MS/MS有效结合,并对前处理方法进行了考察和条件优化,建立了最优的前处理方法,并成功适用于实际样品的测定。该方法操作简便,有机溶剂用量少、对环境污染小,而且净化效果好、降低了基质干扰、提高了萃取效率,具有快速、准确、有效、简便、稳定,而且兼顾灵敏度高、回收率好、价格低廉、适用对象广等的优势,适合米饭中5‑羟甲基糠醛的痕量测定。
Description
技术领域
本发明属于分析化学及食品安全技术领域,具体涉及一种基于QuEChERS-分散液液微萃取痕量检测5-羟甲基糠醛的方法。
背景技术
大米作为一种富含淀粉的产品,是世界上大多数人口的主要食物。大米经电饭锅烹饪后,会在温度为60~80℃的条件下维持保温状态。同时,电饭锅中的温度和水分含量较高,因此,在米饭烹饪和保温过程中会发生美拉德反应并加速了5-羟甲基糠醛的形成。据报道,美拉德反应和长时贮藏过程都有助于大米中5-羟甲基糠醛的形成。5-羟甲基糠醛是食品在热处理过程中发生美拉德反应产生的副产物,通常被作为一种热损伤指标,以用于评估米饭在热加工过程中美拉德反应的程度,也是衡量含糖食品在贮藏期间质量损失的指标。除此之外,5-羟甲基糠醛作为一种食品污染物,在食品中具有潜在的危害性。据报道,5-羟甲基糠醛广泛存在于种类繁多的富含碳水化合物的食品,如谷物制品、饼干、果酱、婴儿奶制品、果汁等。特别的是,Lamberts和Villanova等人已发表了关于大米中含有5-羟甲基糠醛的文献。分析食品中的5-羟甲基糠醛有多种分析方法,其中超高效液相色谱质谱联用是结合了UPLC的高效分离能力与MS/MS的高灵敏度和极强专属性的分离检测技术,即使在复杂的样品基质中还具有重复性好、灵敏度高、分析速度快等特点,然而由于基质较为复杂而且5-羟甲基糠醛的含量是痕量级的,直接采用仪器分析较为困难,因此有必要在仪器分析之前,对分析物进行净化、富集预处理。样品的前处理是关系到分析结果准确性的关键步骤,是去除复杂基质干扰、提高分析物回收率的重要步骤。目前,文献报道了许多用于提取样品中5-羟甲基糠醛的前处理方法,如传统的固相萃取、液相萃取,但是传统方法耗时、耗材昂贵且消耗大量的有机溶剂。为解决这一问题,分散液液微萃取(DLLME)技术得到广泛应用,该微萃取技术由Rezaee等人于2006年首次提出,具有操作简便、回收率高、萃取时间短、价格低廉、富集因子高等优点,但不适用于固体样品。迄今为止,尚未见关于大米中5-羟甲基糠醛的有效前处理净化、富集方法和痕量检测的报道。因此,开发一种准确、快速、有效、价格低廉、简便的前处理净化以及富集方法(QuEChERS-分散液液微萃取)用于检测和定量大米中的5-羟甲基糠醛具有重要意义。
发明内容
为了解决上述问题,本发明提供了一种快速、准确、有效、简便、稳定,而且兼顾高富集因子、环境污染小、经济优势的前处理方法,用以痕量检测米饭中美拉德反应副产物5-羟甲基糠醛。本发明采用改进的QuEChERS结合分散液液微萃取(DLLME)作为前处理净化技术,并利用超高效液相色谱-质谱联用(UPLC-MS/MS)为检测方法,克服了现有方法有机溶剂消耗大、耗时长、基质干扰多、步骤繁琐等问题,能够快速地检测米饭中的5-羟甲基糠醛,适用范围广,测定结果具有较高的准确度、良好的灵敏度和优异的回收率。
QuEChERS萃取分离技术近年来已被进行了改进,用于测定蔬菜、土壤、茶叶等不同基质的农药残留量。但是,目前为止,尚未见有用QuEChERS萃取分离技术处理大米(固体样品)中5-羟甲基糠醛的文献报道,也未见将QuEChERS与DLLME联合用于净化、富集浓缩大米中5-羟甲基糠醛的文献。
本发明的第一个目的是提供一种米饭中5-羟甲基糠醛的前处理方法,所述方法包括:
(1)在有机溶剂中,将每8~12g米饭与40mg~80mg的十八烷基硅烷键合硅胶(C18)、40mg~80mg的N-丙基乙二胺(PSA)作用,进行净化,得到净化液;
(2)将步骤(1)所得的净化液与萃取剂混合,然后加入水,实现富集,即得前处理样品。
在本发明的一种实施方式中,所述步骤(1)中还可以加入0mg~15mg的碳黑(GCB)。
在本发明的一种实施方式中,所述步骤(1)中优选不加入GCB。
在本发明的一种实施方式中,所述步骤(1)中还包括加入0.5g~2g的硫酸镁(MgSO4)和0.5g~1.5g氯化钠(NaCl)作为除水剂。
在本发明的一种实施方式中,所述步骤(1)中的有机溶剂包括乙腈。
在本发明的一种实施方式中,所述步骤(1)中有机溶剂的添加量为米饭质量的0.5~1.5倍体积。
在本发明的一种实施方式中,所述步骤(2)中的净化液与萃取剂的体积比为(2~8):1。
在本发明的一种实施方式中,所述步骤(2)中萃取剂包括三氯甲烷、二氯甲烷、四氯化碳、氯苯;优选三氯甲烷。
在本发明的一种实施方式中,所述步骤(2)中水的pH为7~10。
在本发明的一种实施方式中,所述步骤(2)中水与净化液和萃取剂体积之和的体积比为(0.5~2):1。
在本发明的一种实施方式中,所述米饭的制备方法包括:粳米中加入1~1.5倍体积的水蒸煮保温0h~42h,即得保温不同时间的米饭,而且保温时间的长短对本发明的内容产生影响。
本发明的第二个目的是提供一种定量检测米饭中5-羟甲基糠醛的方法,所述方法包括:预先进行米饭的前处理,得到前处理样品,然后进行检测;所述前处理的方法为上述的前处理方法。
在本发明的一种实施方式中,所述检测包括高效液相色谱(HPLC)检测、液相色谱-质谱联用(LC-MS)检测、气相色谱(GC)检测、气相色谱-质谱联用(GC-MS)检测、胶束电动毛细管色谱(MEKC)检测、高效阴离子交换色谱(HPAEC)等。
本发明的第三个目的是提供一种超高效液相色谱-质谱联用(UPLC-MS)痕量检测5-羟甲基糠醛的方法,所述方法包括:预先进行米饭的前处理,得到前处理样品,然后进行液相色谱-质谱联用检测;所述前处理的方法为上述的前处理方法。
在本发明的一种实施方式中,所述液相色谱的条件为:色谱柱为反相C18色谱柱(包括ACQUITY UPLC BEH反相C18柱、PhenomenexSynergi Fusion反相C18柱、SunFireWaters反相C18柱等),柱温为25~40℃;流动相A为100%的超纯水溶液,流动相B为100%的甲醇,采取梯度洗脱程序,流速为0.2~1mL/min,进样量为10~15μL。
在本发明的一种实施方式中,所述方法具体包括:
(1)取米饭8~12g放入离心管中,加入0.5~1.5倍体积的乙腈溶液并通过高速剪切分散器在5000~8000rpm转速下匀浆2~5min进行粗提操作,得到匀浆液;
(2)净化过程:
在步骤(1)的匀浆液中加入0.5g~2g的硫酸镁(MgSO4)和0.5g~1.5g氯化钠(NaCl)作为除水剂,随后迅速涡旋0.5~1.5min,再在7000~9000rpm下离心4~8min以沉淀米饭样品获得澄清的含有5-羟甲基糠醛的乙腈层;然后在澄清溶液中加入吸附剂包括40mg~80mg的十八烷基硅烷键合硅胶(C18),主要用于去除样品中的脂质和其他非极性干扰物;40mg~80mg的N-丙基乙二胺(PSA)作为弱阴离子交换吸附剂,通常用于去除脂肪酸、有机酸、各种糖类和基质共萃取物等;0mg~15mg的碳黑(GCB)作为一种除色剂,主要用于去除样品中的色素。随后迅速涡旋0.5~1.5min并在7000~9000rpm下离心4~8min,将澄清的上层清液置于离心管中,即为净化液;
(3)分散液液微萃取进一步净化处理和富集浓缩过程:
取一定体积的步骤(2)中的乙腈层(净化液作为分散剂)与一定体积的萃取剂混合,使净化液与萃取剂的体积比为(2~8):1,随后向混合液中加入pH范围在7~10的超纯水,使超纯水与净化液和萃取剂体积之和的体积比为(0.5~2):1;混合溶液立即呈现出云雾状,在7000~9000rpm下离心4~8min,然后收集最下层的有机相经氮气吹干,得残渣备用;
(4)超高效液相色谱-质谱联用测定米饭中的5-羟甲基糠醛:
超高效液相色谱条件为:色谱柱为反相C18色谱柱(包括ACQUITY UPLC BEH反相C18柱、PhenomenexSynergi Fusion反相C18柱、SunFire Waters反相C18柱等),柱温为25~40℃;流动相A为100%的超纯水溶液,流动相B为100%的甲醇,采取梯度洗脱程序,流速为0.2~1mL/min,进样量为10~15μL;质谱条件为:离子源为电喷雾离子源(ESI),源参数为:入口电压(EP)为10V,电喷雾电压为5500V,碰撞能量(CE)为15V,离子源温度为600℃,源气体和辅助气体分别设定为15L/min和18L/min,扫描模式为正离子扫描,采集模式为多反应监测(MRM);
(5)米饭中的5-羟甲基糠醛含量测定结果的计算:
移取特定浓度的5-羟甲基糠醛标准品溶液添加到米饭中,对其进行样品前处理-超高效液相色谱-质谱联用(改进的QuEChERS-分散液液微萃取前处理净化方法-UPLC-MS/MS)测定,得到标准曲线;将步骤(5)中的测定结果带入标准曲线求得待分析米饭中5-羟甲基糠醛的含量。
本发明的优点和效果:
本发明将改进的QuEChERS和分散液液微萃取技术联用,并有效结合UPLC-MS/MS检测方法,建立了QuEChERS-DLLME-UPLC-MS/MS法痕量测定米饭中的美拉德反应副产物5-羟甲基糠醛的检测方法。该方法用乙腈溶剂粗提米饭中的5-羟甲基糠醛,利用C18、PSA等吸附剂净化,随后通过分散液液微萃取步骤(优化萃取剂、分散剂、pH等条件),达到进一步净化与富集浓缩的效果,然后进行UPLC-MS/MS分析测定。该方法提高了对待测物5-羟甲基糠醛的选择性,也大大增加了富集倍数,为前处理技术的开发应用提供了新思路,也对痕量检测米饭(固体样品)中美拉德反应副产物5-羟甲基糠醛的提取、分离、富集浓缩增加了新方法。
本发明方法有效缩短了前处理时间,30min内至少可以同时完成6个样品的前处理,而且有机试剂用量少、废弃物少、对环境污染小;此外,通过对除水剂、吸附剂、萃取剂、分散剂等的条件优化,降低了复杂基质的干扰,提高了净化效率和回收率。结果表明,该方法不仅实现了对5-羟甲基糠醛的高选择性和高灵敏度的有效结合,而且具有准确、快速、简便、有效、稳定、低成本、重复性好、回收率高等优点,适合米饭(固体样品)中5-羟甲基糠醛的痕量测定。其中检测限和定量限分别为0.1、0.3μg/L,具有较高的灵敏度;日内和日间精密度的相对标准偏差均在9%以内,平均准确度在93.95%~114.22%之间;平均回收率在82.87%~104.86%之间,相对标准偏差在9%以内。
附图说明
图1为实施例1-2优化改进的QuEChERS-DLLME前处理方法,其中A:改进的QuEChERS方法条件优化;B:DLLME萃取条件优化;
图2为实施例3中米饭未经前处理和经改进的QuEChERS-DLLME前处理方法对比色谱图,其中a、c:米饭样品中分别添加50、500μg/L的5-羟甲基糠醛标品,未经前处理的色谱图;b、d:米饭样品中分别添加50、500μg/L的5-羟甲基糠醛标品,经改进的QuEChERS-DLLME前处理方法的色谱图;
图3为实施例4米饭只经改进的QuEChERS处理和只经DLLME前处理和经改进的QuEChERS-DLLME前处理方法对比色谱图。
具体实施方式
为了更好地理解本发明,下面结合实施例进一步阐明发明的内容,但本发明的内容不仅仅局限于下面的实施例。
富集因子的测定方法:
改进的QuEChERS-DLLME前处理的富集因子按照以下公式计算:富集因子EF=CA/CB,CA为米饭中加入5-羟甲基糠醛标准品通过改进的QuEChERS-DLLME前处理后得到的峰面积,CB为米饭中加入5-羟甲基糠醛标准品未经过以上前处理方法得到的峰面积。
实施例1
一、样品前处理:
(1)制备米饭:
粳米中加入1.5倍体积的水,随后在电饭锅中煮制得到米饭。
米饭中5-羟甲基糠醛的粗提过程:
称取米饭10g放入离心管中,加入10mL的乙腈溶液并通过高速剪切分散器在8000rpm转速下匀浆3min进行粗提操作。
(2)改进的QuEChERS前处理净化过程:
在步骤(1)中的米饭中加入1g的硫酸镁(MgSO4)和0.5g氯化钠(NaCl)作为除水剂,随后迅速涡旋1min,再在8000rpm下离心5min以沉淀米饭样品获得澄清的含有5-羟甲基糠醛的乙腈层。然后在澄清溶液中加入一定量的吸附剂包括60mg的十八烷基硅烷键合硅胶(C18)、50mg的N-丙基乙二胺(PSA)。随后迅速涡旋1min,再在8000rpm下离心5min,将澄清的上层清液置于离心管中,即为净化液。
(3)分散液液微萃取进一步净化处理和富集浓缩过程:
取一定体积的步骤(3)中的乙腈层(净化液作为分散剂)与一定体积的萃取剂混合,使净化液与萃取剂的体积比为4:1,所述萃取剂优化为三氯甲烷。随后向混合液中加入一定体积的pH为7的超纯水,使超纯水与净化液萃取剂体积之和的比值为1:1。混合溶液立即形成呈现出云雾状,在8000rpm下离心5min,然后收集最下层的有机相经氮气吹干,得到前处理样品。
二、利用超高效液相色谱-质谱联用测定米饭中的5-羟甲基糠醛:
超高效液相色谱条件为:色谱柱:ACQUITY UPLC BEH-RP C18色谱柱(2.1mm×100mm,1.7μm),柱温为40℃。流动相A为100%的超纯水溶液,流动相B为100%的甲醇,采取梯度洗脱程序,流速为0.3mL/min,进样量为10μL。质谱条件为:离子源为电喷雾离子源(ESI),源参数为:入口电压(EP)为10V,电喷雾电压为5500V,碰撞能量(CE)为15V,离子源温度为600℃,源气体和辅助气体分别设定为15L/min和18L/min,扫描模式为正离子扫描,采集模式为多反应监测(MRM)。
计算米饭中的5-羟甲基糠醛含量测定结果:
移取特定浓度的5-羟甲基糠醛标准品溶液添加到米饭中,对其进行样品前处理-超高效液相色谱-质谱联用(改进的QuEChERS-DLLME-UPLC-MS/MS)测定,得到标准曲线;将检测结果带入标准曲线求得待分析米饭中5-羟甲基糠醛的含量。
定量分析及方法的有效性评价:
(1)线性关系、检出限、定量限:准确移取适量的5-羟甲基糠醛标准品溶液,添加到米饭样品(无5-羟甲基糠醛的样品)中,待前处理后经UPLC-MS/MS分析。以目标组分峰面积为纵坐标,以组分相应的添加浓度(μg/L)为横坐标,绘制标准曲线,结果如表1所示。5-羟甲基糠醛在0.5~50.0μg/L的范围内具有较好的线性关系,回归系数大于0.999,检测限和定量限分别为0.1、0.3μg/L,具有较高的灵敏度。
表1米饭中5-羟甲基糠醛的标准曲线范围、回归方程、检测限和定量限
注:上标a和b值分别表示信噪比的3倍和10倍。
(2)准确度和精密度:在米饭样品中,做2.0、5.0、10.0、20.0和50.0μg/L四个浓度水平的添加实验,每个浓度水平做6个平行样品,分别进行前处理和仪器分析,日内和日间精密度和准确度如表2所示。由表2可知,日内和日间精密度的相对标准偏差均在9%以内,平均准确度在93.95%~114.22%之间,符合国内外分析标准和要求。
表2米饭中5-羟甲基糠醛的精密度和准确度(n=6)
(3)回收率:分别对实际样品按低、中、高三个浓度加标水平进行测定,即在2.0、5.0、10.0μg/L三个浓度水平做加标回收实验,每个浓度水平做3个平行样品,分别进行前处理和仪器分析,并按加标量和测定值计算回收率,结果如表3所示。由表3可知,平均回收率在82.87%~104.86%之间,相对标准偏差在9%以内,符合国内外分析标准和要求。
表3米饭中5-羟甲基糠醛的回收率(n=3)
(4)实际样品测定:
运用本发明建立的方法处理不同保温时间的米饭(即不同5-羟甲基糠醛含量)并进行5-羟甲基糠醛检测,结果如表4所示,该方法简便、快捷、准确、有效,具有很好的适用性和操作性。
表4保温不同时间的米饭样品中5-羟甲基糠醛的测定
上标字母(a-f)表示统计学显著性差异(p<0.05)。
实施例2:
采用单因素实验,对改进的QuEChERS-DLLME萃取米饭中5-羟甲基糠醛的方法进行条件考察和优化,包括除水剂、吸附剂种类和含量、分散液液微萃取萃取剂和分散剂的种类与用量、pH的范围等条件,选择最优的条件,得到在最优条件下对米饭中5-羟甲基糠醛的最大萃取率(最高富集因子)。
QuEChERS条件优化:
1)优化MgSO4和NaCl的用量:固定C18 20mg、PSA 20mg、体积比1为4:1、体积比2为2:1、pH为7,将MgSO4的用量分别替换为1g、2g、3g、4g,将NaCl的用量分别替换为0g、0.5g、1g、1.5g,具体实验参数如表5所示,处理后的富集效果如图1(A)所示,当加入2g MgSO4时,富集因子为0.6,结果表明:加入1g MgSO4和0.5g NaCl时,5-羟甲基糠醛的富集因子达到0.90。
表5优化MgSO4和NaCl用量的实验参数
表5中“—”代表应用的实验参数。
2)优化吸附剂的组分和用量:
根据1)优化结果,选用1g MgSO4和0.5g NaCl,优化吸附剂条件,测定富集效果,具体实验参数如表6所示,处理后的富集效果如图1(A)所示,结果发现:随着C18的用量从20mg增加到60mg,5-羟甲基糠醛的富集因子也增加。C18量继续增加却导致5-羟甲基糠醛的富集因子明显降低,当加至200mg时,富集因子只有0.1。因此,C18的用量为60mg可获得最高的富集因子1.12;当添加50mg PSA时,可获得5-羟甲基糠醛的最大富集因子1.56,当加入100mgPSA时,富集因子只有0.6。此外,由图1(A)所示,随着GCB量的增加,5-羟甲基糠醛的富集因子一直在降低,当加入10mg GCB时,富集因子只有0.7,为确保有较好的灵敏度,在本发明样品前处理中不添加GCB。
表6优化吸附剂用量的实验参数
表6中“—”代表应用的实验参数。
结果表明,1g MgSO4,0.5g NaCl,60mg C18,50mg PSA和0mg GCB的组合可以为米饭中5-羟甲基糠醛的提取提供较好的净化处理效果,富集因子为1.98。
DLLME条件优化:
1)优化萃取剂的选择:选取QuEChERS的最优条件,改变萃取剂的种类,包括二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、氯苯,其他条件不变,具体实验参数如表7所示,测定处理后的富集强度,结果如图1(B)所示,萃取剂中选择三氯甲烷可得到最大的5-羟甲基糠醛富集因子1.56。
2)优化萃取剂的用量:选取QuEChERS的最优条件,萃取剂选择三氯甲烷,改变净化液与萃取剂的用量(体积比1),分别为0.25:1、1:1、4:1、8:1,其他条件不变,具体实验参数如表7所示,测定处理后的富集强度,结果如图1(B)所示,体积比从0.25:1~4:1时,5-羟甲基糠醛的富集因子也随之增加,而体积比1继续增大富集因子出现下降趋势。因此,最佳体积比1的值为4:1,得到1.56的富集因子。
表7优化萃取剂种类和用量的实验参数
表7中“—”代表应用的实验参数。
3)优化水的工艺条件:选取QuEChERS的最优条件,萃取剂选择三氯甲烷,体积比1为4:1,改变水与净化液萃取剂体积之和的比(体积比2),分别为:0.5:1、1:1、2:1、4:1,具体实验参数如表8所示,测定处理后的富集强度,结果如图1(B)所示,在比值为1:1时获得最大的富集因子1.98;同时,超纯水调节pH范围为3~10,pH值的从3增加到10,5-羟甲基糠醛的最大富集因子2.0在pH 10时获得,但是当pH值从7到10时,5-羟甲基糠醛的富集因子增加缓慢,为了实验操作的便利性,pH可选择7即可得到富集因子为1.98的5-羟甲基糠醛萃取效率。
表8优化水的工艺条件实验参数
表8中“—”代表应用的实验参数。
实施例3:
米饭未经前处理进行检测分析:粳米中加入1.5倍体积的水,随后在电饭锅中煮制并维持保温状态0h(保温0h无5-羟甲基糠醛产生,对添加标品无干扰),并添加50、500μg/L的5-羟甲基糠醛标品。称取米饭10g放入离心管中,加入1倍体积的乙腈溶液并通过高速剪切分散器在8000rpm转速下匀3min进行粗提操作。随后,匀浆液通过0.22μm膜过滤,通过超高效液相色谱分离和质谱检测。
米饭经改进的QuEChERS-DLLME前处理方法进行检测分析:选用实施例1中条件下的QuEChERS-DLLME前处理方法对添加50、500μg/L的5-羟甲基糠醛标品的米饭进行净化处理,随后通过超高效液相色谱分离和质谱检测。
以上两种处理条件下得到的米饭中5-羟甲基糠醛的色谱图如图2所示,由图2b、d可知,经过改进的QuEChERS-DLLME前处理方法,所得谱图无干扰峰,峰型对称性良好且无拖尾,此外相同浓度的5-羟甲基糠醛具有较明显的富集浓缩作用。然而,未经前处理的谱图杂峰较多,峰型不对称,拖尾严重(图2a、c)。因此,改进的QuEChERS-DLLME前处理方法降低了基质的干扰,操作性强,富集浓缩效果好,适用于米饭(固体样品)中5-羟甲基糠醛的测定。
实施例4:
米饭只经改进的QuEChERS前处理进行检测分析:粳米中加入1.5倍体积的水,随后在电饭锅中煮制并维持保温状态30h。称取保温不同时间的米饭10g放入离心管中,加入1倍体积的乙腈溶液并通过高速剪切分散器在8000rpm转速下匀浆3min进行粗提操作。然后在匀浆液中加入1gMgSO4、0.5gNaCl作为除水剂,随后迅速涡旋1min并在8000rpm下离心5min以沉淀米饭样品获得澄清的含有5-羟甲基糠醛的乙腈层。然后在澄清溶液中加入60mgC18、50mg PSA,随后迅速涡旋1min并在8000rpm下离心5min,将澄清的上层清液通过0.22μm膜过滤,通过超高效液相色谱分离和质谱检测。
米饭只经DLLME前处理进行检测分析:粳米中加入1.5倍体积的水,随后在电饭锅中煮制并维持保温状态30h。称取保温不同时间的米饭10g放入离心管中,加入1倍体积的乙腈溶液并通过高速剪切分散器在8000rpm转速下匀浆5min进行粗提操作。然后,取一定体积的净化液(分散剂)与一定体积的三氯甲烷(萃取剂)混合,使净化液与萃取剂的体积比(体积比1)为4:1。随后向混合液中加入一定体积的pH值为7的超纯水,使超纯水与净化液萃取剂体积之和的比(体积比2)为1:1。混合溶液立即呈现出云雾状,在8000rpm下离心5min,然后收集最下层的有机相经氮气吹干,用超纯水复溶并通过0.22μm膜过滤,随后通过超高效液相色谱分离和质谱检测。
米饭经改进的QuEChERS-DLLME前处理方法进行检测分析:选用最优条件的QuEChERS-DLLME前处理方法对米饭进行净化处理,随后通过超高效液相色谱分离和质谱检测。
以上三种处理方式条件下得到的米饭中5-羟甲基糠醛的色谱图如图3所示。由图3可知,只经改进的QuEChERS前处理得到的5-羟甲基糠醛的色谱峰强度最小而且噪音较多、基质干扰较为严重;只经DLLME前处理得到的色谱图有所改善,但仍然有较多的噪音,峰型有拖尾且不对称;相比之下,经改进的QuEChERS-DLLME前处理得到的5-羟甲基糠醛谱图基线较为平稳、噪音较少、基质干扰小而且峰型对称、峰强度较高。并且,只经改进的QuEChERS前处理和只经DLLME前处理得到的检测限分别为5.0μg/L,2.0μg/L;回收率分别为25.86%~42.94%,44.02%~68.55%。
因此,改进的QuEChERS-DLLME前处理方法大大消除了基质的干扰、净化作用明显、富集浓缩效果好,适用于米饭中5-羟甲基糠醛的测定。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所做的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的范围之内。
Claims (10)
1.一种米饭中5-羟甲基糠醛的前处理方法,其特征在于,所述方法包括:
(1)在有机溶剂中,将每8~12g米饭与40mg~80mg的十八烷基硅烷键合硅胶、40mg~80mg的N-丙基乙二胺作用,进行净化,得到净化液;
(2)将步骤(1)所得的净化液与萃取剂混合,然后加入水,实现富集,即得前处理样品。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤(1)中还包括加入0.5g~2g的硫酸镁和0.5g~1.5g氯化钠作为除水剂。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,所述步骤(1)中还可以加入0mg~15mg的碳黑。
4.根据权利要求1-3任一所述的方法,其特征在于,所述步骤(1)中的有机溶剂包括乙腈。
5.根据权利要求1-3任一所述的方法,其特征在于,所述步骤(1)中有机溶剂的添加量为米饭质量的0.5~1.5倍体积。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤(2)中的净化液与萃取剂的体积比为(2~8):1。
7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤(2)中水用量与净化液和萃取剂的总体积的体积比为(0.5~2):1。
8.一种定量检测米饭中5-羟甲基糠醛的方法,其特征在于,所述方法包括:预先进行米饭的前处理,得到前处理样液,然后进行检测;所述前处理的方法为权利要求1-7任一所述的前处理方法。
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述检测包括高效液相色谱检测、液相色谱-质谱联用检测、气相色谱检测、气相色谱-质谱联用检测、胶束电动毛细管色谱检测、高效阴离子交换色谱。
10.一种超高效液相色谱-质谱联用痕量检测5-羟甲基糠醛的方法,其特征在于,所述方法包括:预先进行米饭的前处理,得到前处理样品,然后进行液相色谱-质谱联用检测;所述前处理的方法为权利要求1-7任一所述的前处理方法。
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