CN109777777B - 一种减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液及其制备方法 - Google Patents
一种减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109777777B CN109777777B CN201910097643.5A CN201910097643A CN109777777B CN 109777777 B CN109777777 B CN 109777777B CN 201910097643 A CN201910097643 A CN 201910097643A CN 109777777 B CN109777777 B CN 109777777B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- phenylbutyric acid
- endoplasmic reticulum
- reticulum stress
- solution
- acid solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明提供了一种减轻内质网应激的4‑苯基丁酸溶液及其制备方法，属于溶剂配制技术领域。所述方法包括如下步骤：1)将4‑苯基丁酸与无血清DME/F‑12培养基混合，将得到的共混物在48～52℃的水浴中涡旋8～12min，得到预处理液；2)将所述步骤1)的预处理液静置22～26h，得到减轻内质网应激的4‑苯基丁酸溶液。本发明通过将含有4‑苯基丁酸的DME/F‑12培养基置于空气中，使溶液碱性化，平衡酸性物质对细胞的损害，从而使制备得到的减轻内质网应激的4‑苯基丁酸溶液能够减小对细胞的毒性。
Description
技术领域
本发明属于溶剂配制技术领域，具体涉及一种减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液及其制备方法。
背景技术
内质网是细胞中一种重要的膜性网状细胞器，主要参与蛋白质、脂类和糖类的合成和代谢、调控钙离子的储存和释放。在人体各组织和器官细胞中，肝细胞中内质网最为丰富。当机体出现生理或者病理因素(营养缺乏、酸中毒、病毒感染等)时均可导致内质网稳态被破坏。而内质网稳态一旦遭到破坏，内质网内的钙离子水平骤变、错误折叠蛋白和未折叠蛋白累积均可诱导内质网应激(endoplasmicreticulum stress，ERS)，继而出现未折叠蛋白反应和应激反应。未折叠蛋白反应是介导ERS的重要环节，持续强烈的ERS会激活细胞的凋亡信号通路。很多疾病均与内质网应激有关，如心血管疾病、呼吸***疾病、病毒性肝炎、自身免疫性疾病等。探讨内质网应激与其相关疾病分子机制已成为近年来的新挑战。
目前诱导内质网应激的诱导剂包括毒胡萝卜素、衣霉素、油酸、硬脂酸、棕榈酸等。4-苯基丁酸(PBA)可以作为一种分子伴侣，逆转蛋白质分子的错误移位或错误聚集，帮助其建立正常的空间结构，从而减轻内质网的负担、抑制内质网应激信号感应，减轻内质网应激导致的组织损伤。内质网诱导剂和PBA的使用，可以更加充分探讨内质网应激的分子机制，但现有技术中配制PBA溶液的方法为采用水浴使4-苯基丁酸得到PBA溶液，但这种溶液呈酸性，对细胞有明显的细胞毒性作用，采用碳酸氢钠或氢氧化钠将PH值调至细胞培养最适PH值后，仍对细胞有明显的损伤作用。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液及其制备方法，本发明提供的制备方法使配制得到的4-苯基丁酸溶液能够有效减轻对细胞的毒害作用。
为了解决上述问题，本发明提供了以下技术方案：
本发明提供了一种减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液的制备方法，包括如下步骤：
1)将4-苯基丁酸与无血清DME/F-12培养基混合，将得到的共混物在48～52℃的水浴中涡旋8～12min，得到预处理液；
2)将所述步骤1)的预处理液静置22～26h，得到减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液。
优选的，所述步骤1)中4-苯基丁酸与无血清DME/F-12培养基的质量体积比为32.8mg:20mL。
优选的，所述步骤1)中涡旋的时间为10min。
优选的，所述步骤2)中静置时在超净台紫外线照射条件下进行。
优选的，所述步骤2)中进行静置后还包括过滤除菌。
优选的，所述过滤除菌的方法为膜过滤除菌，所述膜的孔径为0.22μm。
优选的，所述步骤2)中静置的时间为24h。
本发明提供了一种上述方案所述方法制备得到的减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液。
优选的，当所述减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液进行稀释时，采用质量浓度为15％～20％的胎牛血清培养基进行稀释。
与现有技术相比，本发明提供的技术方案具有以下优点：
本发明提供了一种减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液的制备方法，包括如下步骤：1)将4-苯基丁酸与无血清DME/F-12培养基混合，将得到的共混物在48～52℃的水浴中涡旋8～12min，得到预处理液；2)将所述步骤1)的预处理液静置22～26h，得到减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液。本发明中将含有4-苯基丁酸的DME/F-12培养基置于空气中，使溶液碱性化，平衡酸性物质对细胞的损害，从而使制备得到的减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液能够减小对细胞的毒性。同时，本发明制备得到的减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液稳定性、重复性好，且操作简单。
附图说明
图1为预干预HepG2细胞后Western Blot检测GRP78、CHOP结果图，其中从左到右四条条带依次为给予含10％胎牛血清的DME/F-12培养基、1μg/mL的衣霉素、2mmol/L的4-苯基丁酸溶液、2mmol/L的4-苯基丁酸溶液+衣霉素中预干预后的检测结果条带。
具体实施方式
本发明提供了一种减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液的制备方法，包括如下步骤：
1)将4-苯基丁酸与无血清DME/F-12培养基混合，将得到的共混物在48～52℃的水浴中涡旋8～12min，得到预处理液；
2)将所述步骤1)的预处理液静置22～26h，得到减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液。
本发明将4-苯基丁酸与无血清DME/F-12培养基混合，将得到的共混物在48～52℃的水浴中涡旋8～12min，得到预处理液。在本发明中，所述4-苯基丁酸与无血清DME/F-12培养基的质量体积比优选为32.8mg:20mL。无血清DME/F-12培养基为HepG2培养的基础培养基，在本发明中，所述无血清DME/F-12培养基一方面可以培养细胞，另一方面作为溶剂溶解4-苯基丁酸。本发明对所述无血清DME/F-12培养基和4-苯基丁酸的来源没有特殊限定，采用本领域常规产品即可。本发明实施例中所述DME/F-12培养基在HyClone公司购买；所述4-苯基丁酸购买自sigma公司。
在本发明中，所述水浴的温度为48～52℃，优选为50℃。在本发明中，所述涡旋的时间为8～12min，优选为10min。在本发明中，将得到的共混物在48～52℃的水浴中涡旋8～12min可以使4-苯基丁酸充分溶解。在溶解前共混物为红色，因DME/F-12培养基内含有酚红，故4-苯基丁酸溶解后，变为橙色的预处理液。
得到预处理液后，本发明将所述预处理液静置22～26h，得到减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液。在本发明中，所述静置的时间优选为24h。DME/F-12培养基置于空气中可以转化为碱性，在本发明中，将含有4-苯基丁酸的DME/F-12培养基置于空气中，使PBA溶液碱性化，以平衡酸性物质对细胞的损害，从而使制备得到的减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液能够减小对细胞的毒性。
在本发明中，所述静置优选在超净台紫外线照射条件下进行。在本发明中，在超净台紫外线下照射条件下进行静置可以进行杀菌，防止污染。在静置过程中，预处理液碱性化，橙色的预处理液变为红色的减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液。
本发明在静置后，优选还包括过滤除菌。在本发明中，所述过滤除菌的方法优选为膜过滤除菌；所述膜的孔径优选为0.22μm。
本发明提供了一种上述方案所述方法制备得到的减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液。
在本发明中，当所述减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液进行稀释时，优选采用质量浓度为15％～20％的胎牛血清培养基进行稀释，更优选为16.67％的胎牛血清培养基。
本发明提供了一种上述方案所述方法制备得到的减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液。在本发明中，所述减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液能够应用到诱导内质网的诱导反应中，减轻内质网进行诱导时产生的应激，并对细胞的毒害较小。在本发明中，所述减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液在应用到诱导内质网的诱导反应中时，所述减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液的浓度优选为1.5～2.5mmol/L，更优选为2mmol/L。
为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
称取32.8mg 4-苯基丁酸，加入到20mL的无血清DME/F-12培养基中，在52℃的水浴中涡旋8min，变为橙色，得到预处理液。将预处理液在超净台紫外照射下静置22h，变为红色，再用滤膜孔径为0.22μm的过滤器除菌，得到减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液。
实施例2
称取32.8mg 4-苯基丁酸，加入到20mL的无血清DME/F-12培养基中，在48℃的水浴中涡旋12min，变为橙色，得到预处理液。将预处理液在超净台紫外照射静置26h，变为红色，再用滤膜孔径为0.22μm的过滤器除菌，得到减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液。
实施例3
称取32.8mg 4-苯基丁酸，加入到20mL的无血清DME/F-12培养基中，在50℃的水浴中涡旋10min，变为橙色，得到预处理液。将预处理液在超净台紫外照射静置24h，变为红色，再用滤膜孔径为0.22μm的过滤器除菌，得到减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液。
实施例4
将实施例3制备得到的减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液用质量浓度为16.67％的胎牛血清培养基稀释至2mmol/L，将处于对数期的HepG2细胞分别给予培养基含10％胎牛血清的DME/F-12培养基、浓度为1μg/mL的衣霉素、2mmol/L的4-苯基丁酸溶液、2mmol/L的4-苯基丁酸溶液+1μg/mL的衣霉素中，分别预干预1d后分别观察细胞形态，具体观察结果如表1所示。并提取细胞蛋白，采用WesternBlot进行检测GRP78、CHOP，具体结果如图1所示，由图1可以看出，单独给予4-苯基丁酸作用HepG2细胞，其GRP78及CHOP的表达情况和阴性对照组无差异，表明4-苯基丁酸单独作用无明显细胞毒性；给予(衣霉素)TM干预HepG2后可见GRP78、CHOP显著上调，表明TM可引起明显的内质网应激；而用4-苯基丁酸预干预TM诱导的内质网应激，可见GRP78、CHOP均较单独给予TM干预明显下调，表明4-苯基丁酸预干预后可减轻内质网诱导剂诱导的内质网应激。以上试验重复三次，试验结果相同，表明本发明提供的4-苯基丁酸溶液稳定性及重复性好。
表1不同干预后细胞的形态
由表1可以看出，采用本发明提供的4-苯基丁酸溶液干预后，细胞形态与未干预的HepG2细胞类似，圆形，抱团生长，折光性良好，无明显凋亡，试验结果表明：本发明提供的4-苯基丁酸溶液对细胞的毒性小。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (6)
1.一种减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)将4-苯基丁酸与无血清DME/F-12培养基混合，将得到的共混物在48～52℃的水浴中涡旋8～12min，得到预处理液，所述4-苯基丁酸与无血清DME/F-12培养基的质量体积比为32.8mg:20mL；
2)将所述步骤1)的预处理液静置22～26h，得到减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中涡旋的时间为10min。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中静置时在超净台紫外线照射条件下进行。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中进行静置后还包括过滤除菌。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述过滤除菌的方法为膜过滤除菌，所述膜的孔径为0.22μm。
6.根据权利要求1或4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中静置的时间为24h。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910097643.5A CN109777777B (zh) | 2019-01-31 | 2019-01-31 | 一种减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910097643.5A CN109777777B (zh) | 2019-01-31 | 2019-01-31 | 一种减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液及其制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN109777777A CN109777777A (zh) | 2019-05-21 |
| CN109777777B true CN109777777B (zh) | 2020-11-03 |
Family
ID=66503925
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910097643.5A Active CN109777777B (zh) | 2019-01-31 | 2019-01-31 | 一种减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN109777777B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111329852A (zh) * | 2020-04-14 | 2020-06-26 | 温州医科大学 | 4-苯基丁酸类衍生物在制备治疗脑缺血再灌注损伤的药物中的用途 |
| WO2022191296A1 (ja) * | 2021-03-10 | 2022-09-15 | 昭和電工マテリアルズ株式会社 | 培地組成物、細胞培養物の製造方法、及び細胞懸濁物 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101272763A (zh) * | 2005-07-01 | 2008-09-24 | 纳文塔有限责任公司 | 含有4-苯基丁酸钠的液体剂型的制备方法 |
| CN103266144A (zh) * | 2013-05-06 | 2013-08-28 | 中国药科大学 | 一种基于高分子材料的新型的生物催化反应底物传递*** |
-
2019
- 2019-01-31 CN CN201910097643.5A patent/CN109777777B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101272763A (zh) * | 2005-07-01 | 2008-09-24 | 纳文塔有限责任公司 | 含有4-苯基丁酸钠的液体剂型的制备方法 |
| CN103266144A (zh) * | 2013-05-06 | 2013-08-28 | 中国药科大学 | 一种基于高分子材料的新型的生物催化反应底物传递*** |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Curcumin induces endoplasmic reticulum stress-associated apoptosis in human papillary thyroid carcinoma BCPAP cells via disruption of intracellular calcium homeostasis;Zhang, Li;《MEDICINE》;20180630;第97卷(第24期);第3页右栏第3段 * |
| 高甘油三酯饮食诱导甲状腺功能减退的机制研究;张晓寒;《中国博士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》;20190115(第12期);第23页第5段 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN109777777A (zh) | 2019-05-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Guo et al. | Neuroprotective effect of calycosin on cerebral ischemia and reperfusion injury in rats | |
| CN109777777B (zh) | 一种减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液及其制备方法 | |
| Chen et al. | Pomegranate juice and punicalagin attenuate oxidative stress and apoptosis in human placenta and in human placental trophoblasts | |
| Lin et al. | Protective effects of scutellarin and breviscapine on brain and heart ischemia in rats | |
| Chang et al. | Methylmercury induces caspase-dependent apoptosis and autophagy in human neural stem cells | |
| Gao et al. | Tanshinone IIA protects neonatal rat cardiomyocytes from adriamycin-induced apoptosis | |
| Luo et al. | Nutritional preconditioning induced by astragaloside Ⅳ on isolated hearts and cardiomyocytes against myocardial ischemia injury via improving Bcl-2-mediated mitochondrial function | |
| Yi et al. | Total ginsenosides increase coronary perfusion flow in isolated rat hearts through activation of PI3K/Akt-eNOS signaling | |
| He et al. | Dual action of vitamin C in iron supplement therapeutics for iron deficiency anemia: prevention of liver damage induced by iron overload | |
| Dong et al. | Scutellaria baicalensis Georgi extract protects against alcohol‑induced acute liver injury in mice and affects the mechanism of ER stress | |
| Dong et al. | Alpha‐Lipoic Acid Attenuates Cerebral Ischemia and Reperfusion Injury via Insulin Receptor and PI3K/Akt‐Dependent Inhibition of NADPH Oxidase | |
| Chen et al. | Cell-cycle blockage associated with increased apoptotic cells in the thymus of chickens fed on diets high in fluorine | |
| Shang et al. | Effects of amelioration of total flavonoids from stems and leaves of Scutellaria baicalensis Georgi on cognitive deficits, neuronal damage and free radicals disorder induced by cerebral ischemia in rats | |
| Gu et al. | Polydatin enhances glomerular podocyte autophagy homeostasis by improving Nrf2-dependent antioxidant capacity in fructose-fed rats | |
| Wang et al. | Isorhamnetin, the xanthine oxidase inhibitor from Sophora japonica, ameliorates uric acid levels and renal function in hyperuricemic mice | |
| Qiao et al. | Capsaicin Alleviates the Deteriorative Mitochondrial Function by Upregulating 14‐3‐3η in Anoxic or Anoxic/Reoxygenated Cardiomyocytes | |
| Ooi et al. | Serum transferrin levels in chronic renal failure | |
| Cerig et al. | Hepatoprotective effect of oleuropein against cisplatin-induced liver damage in rat | |
| Yang et al. | Ursolic acid alleviates heat stress-induced lung injury by regulating endoplasmic reticulum stress signaling in mice | |
| Kivel | Hematologic aspects of acute viral hepatitis | |
| Yang et al. | Tartary buckwheat extract alleviates alcohol-induced acute and chronic liver injuries through the inhibition of oxidative stress and mitochondrial cell death pathway | |
| Wu et al. | NMR-based metabolomics approach to study the effects of Wu-Zi-Yan-Zong-Wan on triptolide-induced oligospermia in rats | |
| Hu et al. | Upregulation of CDGSH iron sulfur domain 2 attenuates cerebral ischemia/reperfusion injury | |
| Zhou et al. | [Retracted] Ginsenoside Rg1 Ameliorates Acute Renal Ischemia/Reperfusion Injury via Upregulating AMPKα1 Expression | |
| Li et al. | Soluble epoxide hydrolase (Ephx2) silencing attenuates the hydrogen peroxide-induced oxidative damage in IEC-6 cells |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: 563000 No. 149, Dalian Road, Zunyi, Guizhou Patentee after: AFFILIATED HOSPITAL OF ZUNYI MEDICAL University Address before: 563000 No. 149, Dalian Road, Zunyi, Guizhou Patentee before: AFFILIATED HOSPITAL OF ZUNYI MEDICAL College |
|
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder |