CN109777777B - 一种减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种减轻内质网应激的4‑苯基丁酸溶液及其制备方法,属于溶剂配制技术领域。所述方法包括如下步骤:1)将4‑苯基丁酸与无血清DME/F‑12培养基混合,将得到的共混物在48~52℃的水浴中涡旋8~12min,得到预处理液;2)将所述步骤1)的预处理液静置22~26h,得到减轻内质网应激的4‑苯基丁酸溶液。本发明通过将含有4‑苯基丁酸的DME/F‑12培养基置于空气中,使溶液碱性化,平衡酸性物质对细胞的损害,从而使制备得到的减轻内质网应激的4‑苯基丁酸溶液能够减小对细胞的毒性。
Description
技术领域
本发明属于溶剂配制技术领域,具体涉及一种减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液及其制备方法。
背景技术
内质网是细胞中一种重要的膜性网状细胞器,主要参与蛋白质、脂类和糖类的合成和代谢、调控钙离子的储存和释放。在人体各组织和器官细胞中,肝细胞中内质网最为丰富。当机体出现生理或者病理因素(营养缺乏、酸中毒、病毒感染等)时均可导致内质网稳态被破坏。而内质网稳态一旦遭到破坏,内质网内的钙离子水平骤变、错误折叠蛋白和未折叠蛋白累积均可诱导内质网应激(endoplasmicreticulum stress,ERS),继而出现未折叠蛋白反应和应激反应。未折叠蛋白反应是介导ERS的重要环节,持续强烈的ERS会激活细胞的凋亡信号通路。很多疾病均与内质网应激有关,如心血管疾病、呼吸***疾病、病毒性肝炎、自身免疫性疾病等。探讨内质网应激与其相关疾病分子机制已成为近年来的新挑战。
目前诱导内质网应激的诱导剂包括毒胡萝卜素、衣霉素、油酸、硬脂酸、棕榈酸等。4-苯基丁酸(PBA)可以作为一种分子伴侣,逆转蛋白质分子的错误移位或错误聚集,帮助其建立正常的空间结构,从而减轻内质网的负担、抑制内质网应激信号感应,减轻内质网应激导致的组织损伤。内质网诱导剂和PBA的使用,可以更加充分探讨内质网应激的分子机制,但现有技术中配制PBA溶液的方法为采用水浴使4-苯基丁酸得到PBA溶液,但这种溶液呈酸性,对细胞有明显的细胞毒性作用,采用碳酸氢钠或氢氧化钠将PH值调至细胞培养最适PH值后,仍对细胞有明显的损伤作用。
发明内容
有鉴于此,本发明提供了一种减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液及其制备方法,本发明提供的制备方法使配制得到的4-苯基丁酸溶液能够有效减轻对细胞的毒害作用。
为了解决上述问题,本发明提供了以下技术方案:
本发明提供了一种减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液的制备方法,包括如下步骤:
1)将4-苯基丁酸与无血清DME/F-12培养基混合,将得到的共混物在48~52℃的水浴中涡旋8~12min,得到预处理液;
2)将所述步骤1)的预处理液静置22~26h,得到减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液。
优选的,所述步骤1)中4-苯基丁酸与无血清DME/F-12培养基的质量体积比为32.8mg:20mL。
优选的,所述步骤1)中涡旋的时间为10min。
优选的,所述步骤2)中静置时在超净台紫外线照射条件下进行。
优选的,所述步骤2)中进行静置后还包括过滤除菌。
优选的,所述过滤除菌的方法为膜过滤除菌,所述膜的孔径为0.22μm。
优选的,所述步骤2)中静置的时间为24h。
本发明提供了一种上述方案所述方法制备得到的减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液。
优选的,当所述减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液进行稀释时,采用质量浓度为15%~20%的胎牛血清培养基进行稀释。
与现有技术相比,本发明提供的技术方案具有以下优点:
本发明提供了一种减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液的制备方法,包括如下步骤:1)将4-苯基丁酸与无血清DME/F-12培养基混合,将得到的共混物在48~52℃的水浴中涡旋8~12min,得到预处理液;2)将所述步骤1)的预处理液静置22~26h,得到减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液。本发明中将含有4-苯基丁酸的DME/F-12培养基置于空气中,使溶液碱性化,平衡酸性物质对细胞的损害,从而使制备得到的减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液能够减小对细胞的毒性。同时,本发明制备得到的减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液稳定性、重复性好,且操作简单。
附图说明
图1为预干预HepG2细胞后Western Blot检测GRP78、CHOP结果图,其中从左到右四条条带依次为给予含10%胎牛血清的DME/F-12培养基、1μg/mL的衣霉素、2mmol/L的4-苯基丁酸溶液、2mmol/L的4-苯基丁酸溶液+衣霉素中预干预后的检测结果条带。
具体实施方式
本发明提供了一种减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液的制备方法,包括如下步骤:
1)将4-苯基丁酸与无血清DME/F-12培养基混合,将得到的共混物在48~52℃的水浴中涡旋8~12min,得到预处理液;
2)将所述步骤1)的预处理液静置22~26h,得到减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液。
本发明将4-苯基丁酸与无血清DME/F-12培养基混合,将得到的共混物在48~52℃的水浴中涡旋8~12min,得到预处理液。在本发明中,所述4-苯基丁酸与无血清DME/F-12培养基的质量体积比优选为32.8mg:20mL。无血清DME/F-12培养基为HepG2培养的基础培养基,在本发明中,所述无血清DME/F-12培养基一方面可以培养细胞,另一方面作为溶剂溶解4-苯基丁酸。本发明对所述无血清DME/F-12培养基和4-苯基丁酸的来源没有特殊限定,采用本领域常规产品即可。本发明实施例中所述DME/F-12培养基在HyClone公司购买;所述4-苯基丁酸购买自sigma公司。
在本发明中,所述水浴的温度为48~52℃,优选为50℃。在本发明中,所述涡旋的时间为8~12min,优选为10min。在本发明中,将得到的共混物在48~52℃的水浴中涡旋8~12min可以使4-苯基丁酸充分溶解。在溶解前共混物为红色,因DME/F-12培养基内含有酚红,故4-苯基丁酸溶解后,变为橙色的预处理液。
得到预处理液后,本发明将所述预处理液静置22~26h,得到减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液。在本发明中,所述静置的时间优选为24h。DME/F-12培养基置于空气中可以转化为碱性,在本发明中,将含有4-苯基丁酸的DME/F-12培养基置于空气中,使PBA溶液碱性化,以平衡酸性物质对细胞的损害,从而使制备得到的减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液能够减小对细胞的毒性。
在本发明中,所述静置优选在超净台紫外线照射条件下进行。在本发明中,在超净台紫外线下照射条件下进行静置可以进行杀菌,防止污染。在静置过程中,预处理液碱性化,橙色的预处理液变为红色的减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液。
本发明在静置后,优选还包括过滤除菌。在本发明中,所述过滤除菌的方法优选为膜过滤除菌;所述膜的孔径优选为0.22μm。
本发明提供了一种上述方案所述方法制备得到的减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液。
在本发明中,当所述减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液进行稀释时,优选采用质量浓度为15%~20%的胎牛血清培养基进行稀释,更优选为16.67%的胎牛血清培养基。
本发明提供了一种上述方案所述方法制备得到的减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液。在本发明中,所述减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液能够应用到诱导内质网的诱导反应中,减轻内质网进行诱导时产生的应激,并对细胞的毒害较小。在本发明中,所述减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液在应用到诱导内质网的诱导反应中时,所述减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液的浓度优选为1.5~2.5mmol/L,更优选为2mmol/L。
为了进一步说明本发明,下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细地描述,但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
称取32.8mg 4-苯基丁酸,加入到20mL的无血清DME/F-12培养基中,在52℃的水浴中涡旋8min,变为橙色,得到预处理液。将预处理液在超净台紫外照射下静置22h,变为红色,再用滤膜孔径为0.22μm的过滤器除菌,得到减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液。
实施例2
称取32.8mg 4-苯基丁酸,加入到20mL的无血清DME/F-12培养基中,在48℃的水浴中涡旋12min,变为橙色,得到预处理液。将预处理液在超净台紫外照射静置26h,变为红色,再用滤膜孔径为0.22μm的过滤器除菌,得到减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液。
实施例3
称取32.8mg 4-苯基丁酸,加入到20mL的无血清DME/F-12培养基中,在50℃的水浴中涡旋10min,变为橙色,得到预处理液。将预处理液在超净台紫外照射静置24h,变为红色,再用滤膜孔径为0.22μm的过滤器除菌,得到减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液。
实施例4
将实施例3制备得到的减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液用质量浓度为16.67%的胎牛血清培养基稀释至2mmol/L,将处于对数期的HepG2细胞分别给予培养基含10%胎牛血清的DME/F-12培养基、浓度为1μg/mL的衣霉素、2mmol/L的4-苯基丁酸溶液、2mmol/L的4-苯基丁酸溶液+1μg/mL的衣霉素中,分别预干预1d后分别观察细胞形态,具体观察结果如表1所示。并提取细胞蛋白,采用WesternBlot进行检测GRP78、CHOP,具体结果如图1所示,由图1可以看出,单独给予4-苯基丁酸作用HepG2细胞,其GRP78及CHOP的表达情况和阴性对照组无差异,表明4-苯基丁酸单独作用无明显细胞毒性;给予(衣霉素)TM干预HepG2后可见GRP78、CHOP显著上调,表明TM可引起明显的内质网应激;而用4-苯基丁酸预干预TM诱导的内质网应激,可见GRP78、CHOP均较单独给予TM干预明显下调,表明4-苯基丁酸预干预后可减轻内质网诱导剂诱导的内质网应激。以上试验重复三次,试验结果相同,表明本发明提供的4-苯基丁酸溶液稳定性及重复性好。
表1不同干预后细胞的形态
由表1可以看出,采用本发明提供的4-苯基丁酸溶液干预后,细胞形态与未干预的HepG2细胞类似,圆形,抱团生长,折光性良好,无明显凋亡,试验结果表明:本发明提供的4-苯基丁酸溶液对细胞的毒性小。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (6)
1.一种减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
1)将4-苯基丁酸与无血清DME/F-12培养基混合,将得到的共混物在48~52℃的水浴中涡旋8~12min,得到预处理液,所述4-苯基丁酸与无血清DME/F-12培养基的质量体积比为32.8mg:20mL;
2)将所述步骤1)的预处理液静置22~26h,得到减轻内质网应激的4-苯基丁酸溶液。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述步骤1)中涡旋的时间为10min。
3.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述步骤2)中静置时在超净台紫外线照射条件下进行。
4.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述步骤2)中进行静置后还包括过滤除菌。
5.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述过滤除菌的方法为膜过滤除菌,所述膜的孔径为0.22μm。
6.根据权利要求1或4所述的制备方法,其特征在于,所述步骤2)中静置的时间为24h。
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Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101272763A (zh) * | 2005-07-01 | 2008-09-24 | 纳文塔有限责任公司 | 含有4-苯基丁酸钠的液体剂型的制备方法 |
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Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
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CN103266144A (zh) * | 2013-05-06 | 2013-08-28 | 中国药科大学 | 一种基于高分子材料的新型的生物催化反应底物传递*** |
Non-Patent Citations (2)
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---|
Curcumin induces endoplasmic reticulum stress-associated apoptosis in human papillary thyroid carcinoma BCPAP cells via disruption of intracellular calcium homeostasis;Zhang, Li;《MEDICINE》;20180630;第97卷(第24期);第3页右栏第3段 * |
高甘油三酯饮食诱导甲状腺功能减退的机制研究;张晓寒;《中国博士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》;20190115(第12期);第23页第5段 * |
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