CN109776607A

CN109776607A - 芳基磷氧类和芳基磷硫类化合物及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN109776607A
Application number: CN201910135589.9A
Authority: CN
Inventors: 陈栋; 徐涛; 赵维峰; 秦玉婷; 张守会; 单甜甜
Original assignee: Qingdao Institute Of Marine Biology And Medicine
Current assignee: Qingdao Institute Of Marine Biology And Medicine; Qingdao Marine Biomedical Research Institute Co Ltd
Priority date: 2019-02-21
Filing date: 2019-02-21
Publication date: 2019-05-21
Anticipated expiration: 2039-02-21
Also published as: CN109776607B

Abstract

本发明公开了芳基磷氧类和芳基磷硫类化合物及其制备方法和应用，本发明所述的芳基磷氧类和芳基磷硫类化合物可以作为HIF‑2α抑制剂，用于制备治疗和/或预防哺乳动物与缺氧诱导因子2α相关的疾病或病症的药物。所述化合物芳基磷氧类和芳基磷硫类化合物的结构式如下：

Description

芳基磷氧类和芳基磷硫类化合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一类新的具有抗肿瘤活性的芳基磷氧类和芳基磷硫类化合物及其制备方法和应用。

背景技术

肾癌是起源于肾实质泌尿小管上皮***的恶性肿瘤，学术名词全称为肾细胞癌，又称肾腺癌，简称为肾癌。肾癌约占成人恶性肿瘤的2％～3％，占成人肾脏恶性肿瘤的80％～90％。近年来肾癌发病率上升幅度在恶性肿瘤中排名第一。临床治疗表明，肾癌对放疗和化疗均不敏感，以VEGFR抑制剂索拉非尼和舒尼替尼为代表的靶向抗肿瘤药物是晚期肾癌的一线治疗药物。虽然FDA批准的针对肾癌治疗的药物已经多达十种，但这些药物均对转移性肾癌的疗效十分有限，并且容易产生耐药。因此，发现并确证治疗肾癌特异性药物作用新靶标是一项十分紧迫并意义重大的任务。

缺氧诱导因子2a(HIF-2a)是一种影响多种基因表达的转录因子。它负责调控细胞对缺氧环境的反应，促进细胞在缺氧环境下的存活和增殖。HIF-2a调控的基因影响到新陈代谢、血管生成、细胞增殖、肿瘤转移、炎症以及逃避抗癌免疫反应等多种生理过程。它被认为与多种癌症的恶化相关，尤其在透明细胞肾细胞癌(Clear Cell Renal CellCarcinoma，ccRCC)中起到非常重要的作用。因此，开发HIF-2a的靶点抑制药物具有重要意义。

目前关于HIF-2a抑制剂的报道较少，仅有一个抑制剂PT2385处于1期临床阶段。因此，研发新的改进的或更高效的HIF-2a抑制剂，对于抑制肿瘤的发生、转移和复发具有十分重要的临床意义。

发明内容

本发明的目的是提供了芳基磷氧类和芳基磷硫类化合物及其制备方法和应用，利用本发明所述芳基磷氧类和芳基磷硫类化合物作为HIF-2a抑制剂，可以用于治疗或/和预防哺乳动物(包括人)与HIF-2α相关的疾病或病症。

为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

本发明的第一方面在于提供了芳基磷氧类和芳基磷硫类化合物，其为式(I)所示化合物及其药学上可接受的盐，

其中：R1选自芳基或杂芳基；

R2选自氢、卤代或烷基；或者两个R2和它们所连接的碳原子形成3-8元环；

W选自氧或硫。

进一步的：所述R1为苯基、单环杂芳基或双环杂芳基。

进一步的：所述R1为苯基或吡啶基。

进一步的：被至少一个选自卤代、C1-C4烷基烷氧基和氰基的取代基取代；R2为氟代，且n为1、2或3。

本发明还提供了所述化合物，所述化合物选自：

3-[7-(二甲基磷酰基)-2，2-二氟-1-羟基-2，3-二氢-1H-茚满-4-基]氧基-5-氟苯甲腈；

3-[(1S)-7-(二甲基磷酰基)-2，2-二氟-1-羟基-2，3-二氢-1H-茚满-4-基]氧基-5-氟苯甲腈；

3-[(1R)-7-(二甲基磷酰基)-2，2-二氟-1-羟基-2，3-二氢-1H-茚满-4-基]氧基-5-氟苯甲腈；

[7-(3，5二氟苯氧基)-2，2-二氟-3-羟基-2，3-二氢-1H-茚满-4-基]二甲基氧化膦；

[7-((5-氯吡啶-3-基)氧)-2，2-二氟-3-羟基-2，3-二氢-1H-茚满-4-基]二甲基氧化膦；

3-[7-(二甲基硫膦)-2，2-二氟-1-羟基-2，3-二氢-1H-茚满-4-基]氧基-5-氟苯甲腈。

本发明的第二方面提供了制备上述化合物的方法，其制备路线如下所示：

本发明的第三方面提供了一种药物组合物，其包含本发明第一方面所述式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物，以及任选的一种或多种药学上可接受的赋形剂。

本发明的第四方面提供了本发明所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗和/或预防哺乳动物与缺氧诱导因子2α相关的疾病或病症的药物中的用途。所述哺乳动物包括人类。

进一步的，所述的与缺氧诱导因子2α相关的疾病或病症选自癌症、炎症、代谢性疾病。

进一步的，所述的癌症包括皮肤癌、肺癌、泌尿系肿瘤、血液肿瘤、乳腺癌、胶质瘤、消化***肿瘤、生殖***肿瘤、淋巴瘤、神经***肿瘤、脑瘤、头颈癌；所述的炎症包括肺炎、肠炎、肾炎、关节炎、外伤感染；所述的代谢性疾病包括肥胖症、血脂异常、高脂质血症。

与现有技术相比，本发明化合物可以有效抑制HIF-2a与HIF-1β形成二聚体复合物；与HIF-2α蛋白具有较强的体外结合能力；能有效抑制HIF-2a下游靶基因VEGF的表达。

具体实施方式

下面通过具体的制备实施例和生物学实验进一步详细说明本发明，但是，应当理解，这些实施例和生物学实验仅仅是用于具体说明之用，而不应将其理解为用于以任何形式限制本发明。本领域技术人员清楚，在下文中，如果未特别说明，所用的材料和操作方法是本领域公知的。除非另外说明，其中：(1)温度以摄氏度(℃)表示，操作在室温下进行，所述室温一般指15-35℃，优选20-30℃，更优选20-25℃；(2)有机溶剂用无水硫酸钠干燥，溶剂的去除采用旋转蒸发仪减压蒸发，浴温不高于60℃；(3)反应过程用薄层色谱(TLC)跟踪；(4)终产物具有满意的氢核磁共振光谱(¹H-NMR)、和质谱(MS)数据。

实施例1

3-[7-(二甲基磷酰基)-2，2-二氟-1-羟基-2，3-二氢-1H-茚满-4-基]氧基-5-氟苯甲腈(化合物1)的合成，所述化合物1的结构式如下：

所述化合物1的制备方法包括以下步骤：

(1a)：制备4-甲氧基-1-茚酮

将4-羟基-1-茚酮(2.00g，13.5mmol)、碳酸钾(7.5g，54.0mmol)加入至丙酮(40mL)中，加入碘甲烷(3.8g，27.0mmol)，升温至60℃，搅拌5h。TLC显示反应完成，冷却至室温，将反应混合物倒入水中，加入乙酸乙酯萃取2次，有机相用食盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，并浓缩至干，得到4-甲氧基-1-茚酮(2.18g，产率99％)。

LCMS(ESI)：m/z：163.1[M+1]。

(1b)：制备7-碘-4-甲氧基-茚满-1-酮

在0℃下，向碘(3.41g，13.4mmol)的乙腈(150mL)溶液中，加入1-氯甲基-4-氟-1，4-二铵双环[2.2.2]辛烷双(四氟硼酸盐)(3.97g，11.2mmol)。将所得的溶液在0℃下搅拌10min，然后加入所述4-甲氧基-1-茚酮(2.00g，12.3mmol)。反应混合物在室温下搅拌5小时后，将反应混合物蒸发并使残余物在乙酸乙酯与稀硫代硫酸钠水溶液之间分配。将有机相用饱和硫代硫酸钠水溶液、盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，并浓缩至干，得到7-碘-4-甲氧基-茚满-1-酮(3.05g，产率86％)。

¹H NMR(500MHz，DMSO-d⁶)：67.78(d，J＝8Hz，1H)，7.03(d，J＝8Hz，1H)，3.86(s，3H)，2.84(m，2H)，2.65(m，2H).LCMS(ESI)：m/z：289.1[M+1]。

(1c)：制备4-羟基-7-碘-茚满-1-酮

在0℃下，将三甲基氯化铵(2.98g，31.2mmol)加至无水三氯化铝(8.31g，62.5mmoL)在DCM(20mL)的悬浮液中。保持温度搅拌3h后，加入所述7-碘-4-甲氧基-茚满-1-酮(3.00g，10.4mmol)的DCM(100mL)溶液，反应混合物变成深棕色。将反应混合物加热到50℃，并搅拌12小时。TLC显示反应完成，将混合物冷却至0℃，搅拌下加入1M HCl水溶液(40mL)。将棕褐色悬浮液用乙酸乙酯萃取2次。将有机相用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，并浓缩至干，得到4-羟基-7-碘-茚满-1-酮(2.60g，产率91％)。

LCMS(ESI)：m/z：273.1[M-1]。

(1d)：制备7-碘茚满-1，4-二醇

在0℃下，将硼氢化钠(0.70g，18.5mmol)加入至所述4-羟基-7-碘-茚满-1-酮(2.50g，9.1mmol)的甲醇(200mL)溶液中。保持温度搅拌2h，反应液变澄清。将反应混合物浓缩，残余物在乙酸乙酯和1M HCl之间分配。将乙酸乙酯层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，并浓缩至干，得到7-碘茚满-1，4-二醇(2.40g，产率95％)。

LCMS(ESI)：m/z：275.1[M-1]。

(1e)：制备3-氟-5-(1-羟基-7-碘-茚满-4-基)氧基-苯甲腈

将所述7-碘茚满-1，4-二醇(2.00g，7.2mmol)、3，5-二氟苯腈(1.51g，10.9mmol)，碳酸钾(3.00g，21.7mmol)加入至于DMF(50mL)中，加热至110℃并搅拌10h。TLC显示反应完成，冷却至室温，将反应混合物倒入水中，加入乙酸乙酯萃取2次，有机相用食盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩至干，将粗产物通过柱层析(石油醚∶乙酸乙酯＝10∶1)纯化，得到3-氟-5-(1-羟基-7-碘-茚满-4-基)氧基-苯甲腈(2.16g，产率76％)。

¹H NMR(500MHz，DMSO-d⁶)：δ7.66(d，J＝8.3Hz，1H)，7.60(d，J＝8.3Hz，1H)，7.28-7.22(m，2H)，6.82-6.79(m，1H)，5.16(d，J＝7.3Hz，1H)，4.92-4.87(m，1H)2.90(dt，J＝16.4，8.1Hz，1H)，2.68(dt，J＝16.5，8.8Hz，1H)，2.27-2.18(m，1H)，1.92-1.90(m，1H).LCMS(ESI)：m/z：396.2[M+1]。

(1f)：制备3-氟-5-(7-碘-1-氧代-茚满-4-基)氧基-苯甲腈

室温下，将Dess-Martin氧化剂(1.08g，2.53mmol)加入至所述3-氟-5-(1-羟基-7-碘-茚满-4-基)氧基-苄腈(1.00g，2.53mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液中。搅拌0.5h，TLC显示反应完成。将反应混合物浓缩，残余物在乙酸乙酯和稀硫代硫酸钠水溶液以及饱和碳酸氢钠水溶液之间分配。将乙酸乙酯层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，并浓缩至干，得到3-氟-5-(1-氧代-7-碘-茚满-4-基)氧基-苯甲腈(0.92g，产率93％)。

¹H NMR(500MHz，DMSO-d⁶)：δ7.91(d，J＝4Hz，1H)，7.65(d，J＝8Hz，1H)，7.43(m，2H)，7.13(d，J＝8Hz，1H)，2.83(m，2H)，2.50(m，2H).LCMS(ESI)：m/z：394.1[M+1]。

(1g)：制备3-[(7-(二甲基磷酰基)-1-氧代-茚满-4-基)氧基]-5-氟-苯甲腈

将所述3-氟-5-(7-碘-1-氧代-茚满-4-基)氧基-苯甲腈(800mg，2.04mmol)、二甲基氧膦(200mg，2.55mmol)，K₃PO₄(520mg，2.55mmol)，Xantphos(118mg，0.20mmol)和醋酸钯(46mg，0.20mmol)置于DMF(15mL)中，反应混合物在氮气保护下，加热至150℃搅拌10h。TLC显示反应完成，冷却至室温，将反应混合物倒入水中，并用乙酸乙酯(20mL×3)萃取。将合并的有机相用饱和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。将粗产物通过柱层析(二氯甲烷∶甲醇＝50∶1，30∶1)纯化，得到3-[(7-(二甲基氧膦)-1-氧代-茚满-4-基)氧基]-5-氟-苯甲腈(0.65g，产率93％)。

¹H NMR(500MHz，DMSO-d⁶)：δ8.04(m，1H)，7.73(dd，J＝8Hz，1H)，7.53(m，2H)，7.43(d，J＝8Hz，1H)，3.03(m，2H)，2.74(m，2H)，1.76(s，3H)，1.73(s，3H).LCMS(ESI)：m/z：344.1[M+1]。

(1h)：制备(E，Z)-3-[(7-(二甲基磷酰基)-1-(3-甲氧基丙基亚胺基)-茚满-4-基)氧基]-5-氟-苯甲腈

将所述3-[(7-(二甲基磷酰基)-1-氧代-茚满-4-基)氧基]-5-氟-苯甲腈(300mg，0.87mmol)、3-甲氧基丙基胺(400mg，4.49mmol)，特戊酸(18mg，0.18mmol)置于甲苯(20mL)与环己烷(10mL)的混合溶液中，用连接的Dean-Stark分水器回流加热10h。TLC显示反应完成，冷却至室温，将反应混合物蒸干并将残余物直接用于下一步反应。

(1i)：制备3-[(7-(二甲基磷酰基)-2，2-二氟-1-氧代-茚满-4-基)氧基]-5-氟-苯甲腈

将1-氯甲基-4-氟-1，4-二铵双环[2.2.2]辛烷双(四氟硼酸盐)(780mg，2.20mmol)、无水硫酸钠(250mg，1.76mmol)加入至乙腈(10mL)中。加热至70℃，滴加粗(E，Z)-3-[(7-(二甲基磷酰基)-1-(3-甲氧基丙基亚胺基)-茚满-4-基)氧基]-5-氟-苯甲腈(360mg，0.87mmol)的乙腈(10mL)溶液，继续搅拌反应2h。TLC显示反应完成，冷却至室温，反应混合物用1M HCl(8mL，8.0mmol)处理，并在室温下搅拌1h。将反应混合物蒸发并使残余物在乙酸乙酯与水之间分配。将有机相用饱和食盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，并浓缩至干，将粗产物通过柱层析(二氯甲烷∶甲醇＝50∶1)纯化，得到3-[(7-(二甲基磷酰基)-2，2-二氟-1-氧代-茚满-4-基)氧基]-5-氟-苯甲腈(160mg，产率48％)。

¹H NMR(500MHz，DMSO-d⁶)：δ8.11(m，1H)，7.78(dd，J＝8Hz，1H)，7.59(m，2H)，7.51(d，J＝8Hz，1H)，3.67(t，J＝12Hz，2H)，1.78(s，3H)，1.74(s，3H).LCMS(ESI)：m/z：380.1[M+1]。

(1j)：制备3-[7-(二甲基磷酰基)-2，2-二氟-1-羟基-2，3-二氢-1H-茚满-4-基]氧基-5-氟苯甲腈(化合物1)

0℃下，将硼氢化钠(70mg，18.4mmol)加入至所述3-[(7-(二甲基磷酰基)-2，2-二氟-1-氧代-茚满-4-基)氧基]-5-氟-苯甲腈(150mg，0.40mmol)的甲醇(10mL)溶液中，保持温度搅拌3h，TLC显示反应完成。将反应混合物旋干并将残余物经柱层析(二氯甲烷∶甲醇＝40∶1)纯化，得到3-[7-(二甲基磷酰基)-2，2-二氟-1-羟基-2，3-二氢-1H-茚满-4-基]氧基-5-氟苯甲腈(136mg，91％)。

¹H NMR(500MHz，DMSO-d⁶)：δ7.72(m，2H)，7.68(d，J＝4Hz，1H)，7.45(dd，J＝12Hz，1H)，7.10(d，J＝8Hz，1H)，6.76(d，J＝8Hz，1H)，5.44(m，1H)，3.40(m，2H)，1.77(t，6H).LCMS(ESI)：m/z：382.1[M+1]。

实施例2

3-[(1S)-7-(二甲基磷酰基)-2，2-二氟-1-羟基-2，3-二氢-1H-茚满-4-基]氧基-5-氟苯甲腈(化合物2)

0℃下，将RuCl(p-异丙基甲苯)[(R，R)-Ts-DPEN](16mg，0.025mmol)加入至氮气冲洗的3-[(7-(二甲基磷酰基)-2，2-二氟-1-氧代-茚满-4-基)氧基]-5-氟-苯甲腈(150mg，0.40mmol)、甲酸(80mg，1.58mmol)和三乙胺(0.15mL，1.0mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中。将反应瓶密封并放置于4℃冰箱中过夜。TLC显示反应完成，将反应混合物旋干并将残余物经柱层析(二氯甲烷：甲醇＝40∶1)纯化，得到3-[(1S)-7-(二甲基磷酰基)-2，2-二氟-1-羟基-2，3-二氢-1H-茚满-4-基]氧基-5-氟苯甲腈(120mg，80％)。

¹H NMR(500MHz，DMSO-d⁶)：δ7.72(m，2H)，7.68(d，J＝4Hz，1H)，7.45(dd，J＝12Hz，1H)，7.10(d，J＝8Hz，1H)，6.76(d，J＝8Hz，1H)，5.45(m，1H)，3.40(m，2H)，1.77(t，6H).LCMS(ESI)：m/z：382.1[M+1]。

实施例3

3-[(1R)-7-(二甲基磷酰基)-2，2-二氟-1-羟基-2，3-二氢-1H-茚满-4-基]氧基-5-氟苯甲腈(化合物3)

0℃下，将RuCl(p-异丙基甲苯)[(S，S)-Ts-DPEN](16mg，0.025mmol)加入至氮气冲洗的3-[(7-(二甲基磷酰基)-2，2-二氟-1-氧代-茚满-4-基)氧基]-5-氟-苯甲腈(150mg，0.40mmol)、甲酸(80mg，1.58mmol)和三乙胺(0.15mL，1.0mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中。将反应瓶密封并放置于4℃冰箱中过夜。TLC显示反应完成，将反应混合物旋干并将残余物经柱层析(二氯甲烷∶甲醇＝40∶1)纯化，得到3-[(1R)-7-(二甲基磷酰基)-2，2-二氟-1-羟基-2，3-二氢-1H-茚满-4-基]氧基-5-氟苯甲腈(122mg，81％)。

¹H NMR(500MHz，DMSO-d⁶)：δ7.71(m，2H)，7.68(d，J＝4Hz，1H)，7.45(dd，J＝12Hz，1H)，7.10(d，J＝8Hz，1H)，6.76(d，J＝8Hz，1H)，5.44(m，1H)，3.40(m，2H)，1.77(t，6H).LCMS(ESI)：m/z：382.1[M+1]。

实施例4

[7-(3，5-二氟苯氧基)-2，2-二氟-3-羟基-2，3-二氢-1H-茚满-4-基]二甲基氧化膦(化合物4)，所述化合物4的结构式如下：

所述化合物4的制备方法包括以下步骤：

(4a)：制备4-(3，5-二氟苯氧基)-7-碘-2，3-二氢-1H-茚满-1-醇

将7-碘茚满-1，4-二醇(1.50g，5.4mmol)、1，3，5-三氟苯(1.08g，8.1mmol)，碳酸铯(3.50g，10.8mmol)加入至于DMF(40mL)中，加热至100℃并搅拌过夜。TLC显示反应完成，冷却至室温，将反应混合物倒入水中，加入乙酸乙酯萃取2次，有机相用食盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩至干，将粗产物通过柱层析(石油醚∶乙酸乙酯＝10∶1)纯化，得到4-(3，5-二氟苯氧基)-7-碘-2，3-二氢-1H-茚满-1-醇(1.26g，产率60％)。

¹H NMR(500MHz，DMSO-d⁶)：δ7.56(d，J＝8.3Hz，1H)，6.85-6.75(m，3H)，6.25(m，1H)，5.12(s，1H)，4.90-4.86(m，1H)2.89(d，J＝8.1Hz，1H)，2.68(d，J＝8.8Hz，1H)，2.27-2.18(m，1H)，1.92-1.90(m，1H).LCMS(ESI)：m/z：389.2[M+1]。

(4b)：制备4-(3，5-二氟苯氧基)-7-碘-2，3-二氢-1H-茚满-1-酮

室温下，将Dess-Martin氧化剂(1.09g，2.58mmol)加入至所述4-(3，5-二氟苯氧基)-7-碘-2，3-二氢-1H-茚满-1-醇(1.00g，2.58mmol)的二氯甲烷(50mL)溶液中。搅拌0.5h，TLC显示反应完成。将反应混合物浓缩，残余物在乙酸乙酯和稀硫代硫酸钠水溶液以及饱和碳酸氢钠水溶液之间分配。将乙酸乙酯层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，并浓缩至干，得到4-(3，5-二氟苯氧基)-7-碘-2，3-二氢-1H-茚满-1-酮(0.90g，产率91％)。

¹H NMR(500MHz，DMSO-d⁶)：δ7.65(d，1H)，7.03-7.08(m，3H)，6.35(m，1H)，2.80(m，2H)，2.50(m，2H).LCMS(ESI)：m/z：387.1[M+1]。

(4c)：制备4-(3，5-二氟苯氧基)-7-(二甲基磷酰基)-2，3-二氢-1H-茚满-1-酮

将所述4-(3，5-二氟苯氧基)-7-碘-2，3-二氢-1H-茚满-1-酮(600mg，1.55mmol)、二甲基氧膦(151mg，1.94mmol)，K₃PO₄(412mg，1.94mmol)，Xantphos(90mg，0.16mmol)和醋酸钯(35mg，0.16mmol)置于DMF(15mL)中，反应混合物在氮气保护下，加热至150℃搅拌10h。TLC显示反应完成，冷却至室温，将反应混合物倒入水中，并用乙酸乙酯(20mL×3)萃取。将合并的有机相用饱和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。将粗产物通过柱层析(二氯甲烷∶甲醇＝50∶1，30∶1)纯化，得到4-(3，5-二氟苯氧基)-7-(二甲基磷酰基)-2，3-二氢-1H-茚满-1酮(0.39g，产率76％)。

¹H NMR(500MHz，DMSO-d⁶)：δ7.76(d，2H)，7.21(m，2H)，7.03(s，1H)，3.01(m，2H)，2.71(m，2H)，1.75(s，3H)，1.73(s，3H).LCMS(ESI)：m/z：337.1[M+1]。(4d)：制备(E，Z)-[(7-(3，5-二氟苯氧基)-3-(3-甲氧基丙基亚胺基)-2，3-二氢-1H-茚满-4-基)]二甲基氧化膦

将所述4-(3，5-二氟苯氧基)-7-(二甲基磷酰基)-2，3-二氢-1H-茚满-1-酮(260mg，0.77mmol)、3-甲氧基丙基胺(413mg，4.64mmol)，特戊酸(16mg，0.16mmol)置于甲苯(20mL)与环己烷(10mL)的混合溶液中，用连接的Dean-Stark分水器回流加热10h。TLC显示反应完成，冷却至室温，将反应混合物蒸干并将残余物直接用于下一步反应。

(4e)：制备4-(3，5-二氟苯氧基)-7-(二甲基磷酰基)-2，2-二氟-2，3-二氢-1H-茚满-1酮

将1-氯甲基-4-氟-1，4-二铵双环[2.2.2]辛烷双(四氟硼酸盐)(682mg，2.20mmol)、无水硫酸钠(220mg，1.76mmol)加入至乙腈(10mL)中。加热至70℃，滴加上步制得的(E，Z)-[(7-(3，5-二氟苯氧基)-3-(3-甲氧基丙基亚胺基)-2，3-二氢-1H-茚满-4-基)]二甲基氧化膦的乙腈(10mL)溶液，继续搅拌反应2h。TLC显示反应完成，冷却至室温，反应混合物用1M HCl(8mL，8.0mmol)处理，并在室温下搅拌1h。将反应混合物蒸发并使残余物在乙酸乙酯与水之间分配。将有机相用饱和食盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，并浓缩至干，将粗产物通过柱层析(二氯甲烷∶甲醇＝50∶1)纯化，得到4-(3，5-二氟苯氧基)-7-(二甲基磷酰基)-2，2-二氟-2，3-二氢-1H-茚满-1酮(120mg，产率58％)。

¹H NMR(500MHz，DMSO-d⁶)：δ7.81(d，2H)，7.27(m，2H)，7.05(s，1H)，3.58(m，2H)，1.76(s，3H)，1.73(s，3H).LCMS(ESI)：m/z：373.1[M+1]。

(4f)：制备[7-(3，5-二氟苯氧基)-2，2-二氟-3-羟基-2，3-二氢-1H-茚满-4-基]二甲基氧化膦(化合物4)

0℃下，将硼氢化钠(41mg，10.8mmo1)加入至4-(3，5-二氟苯氧基)-7-(二甲基磷酰基)-2，2-二氟-2，3-二氢-1H-茚满-1酮(100mg，0.27mmol)的甲醇(10mL)溶液中，保持温度搅拌3h，TLC显示反应完成。将反应混合物旋干并将残余物经柱层析(二氯甲烷∶甲醇＝40∶1)纯化，得到[7-(3，5-二氟苯氧基)-2，2-二氟-3-羟基-2，3-二氢-1H-茚满-4-基]二甲基氧化膦(91mg，90％)。

¹H NMR(500MHz，DMSO-d⁶)：δ7.56(m，2H)，7.18(d，1H)，7.09(d，1H)，6.76(m，2H)，5.41(m，1H)，3.38(m，2H)，1.75(t，6H).LCMS(ESI)：m/z：375.1[M+1]。

实施例5

[7-((5-氯吡啶-3-基)氧基)-2，2-二氟-3-羟基-2，3-二氢-1H-茚满-4-基]二甲基氧化膦(化合物5)，所述化合物5的结构式如下：

所述化合物5的制备方法包括以下步骤：

(5a)：制备4-[(5-氯吡啶-3-基)氧基]-7-碘-2，3-二氢-1H-茚满-1-醇

将7-碘茚满-1，4-二醇(1.50g，5.4mmol)、3，5-二氯吡啶(1.20g，8.1mmol)，碳酸铯(3.50g，10.8mmol)加入至于DMF(40mL)中，加热至100℃并搅拌过夜。TLC显示反应完成，冷却至室温，将反应混合物倒入水中，加入乙酸乙酯萃取2次，有机相用食盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩至干，将粗产物通过柱层析(石油醚∶乙酸乙酯＝5∶1)纯化，得到4-[(5-氯吡啶-3-基)氧基]-7-碘-2，3-二氢-1H-茚满-1-醇(1.02g，产率48％)。

¹H NMR(500MHz，DMSO-d⁶)：δ8.66(d，1H)，8.50(d，1H)，7.46(m，2H)，6.81(m，1H)，5.16(s，1H)，5.01(m，1H)，3.21(m，2H)，2.37-2.25(m，2H).LCMS(ESI)：m/z：388.2[M+1]。

(5b)：制备4-[(5-氯吡啶-3-基)氧基]-7-碘-2，3-二氢-1H-茚满-1-酮

室温下，将Dess-Martin氧化剂(657mg，1.55mmol)加入至4-[(5-氯吡啶-3-基)氧基]-7-碘-2，3-二氢-1H-茚满-1-醇(600mg，1.55mmol)的二氯甲烷(30mL)溶液中。搅拌0.5h，TLC显示反应完成。将反应混合物浓缩，残余物在乙酸乙酯和稀硫代硫酸钠水溶液以及饱和碳酸氢钠水溶液之间分配。将乙酸乙酯层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，并浓缩至干，得到4-[(5-氯吡啶-3-基)氧基]-7-碘-2，3-二氢-1H-茚满-1-酮(561mg，产率93％)。

¹H NMR(500MHz，DMSO-d⁶)：δ8.71(d，1H)，8.56(d，1H)，7.63(m，2H)，7.21(d，1H)，3.03(m，2H)，2.67(m，2H).LCMS(ESI)：m/z：386.1[M+1]。

(5c)：制备4-[(5-氯吡啶-3-基)氧基]-7-(二甲基磷酰基)-2，3-二氢-1H-茚满-1酮

将4-[(5-氯吡啶-3-基)氧基]-7-碘-2，3-二氢-1H-茚满-1-酮(500mg，1.30mmol)、二甲基氧膦(127mg，1.62mmol)，K₃PO₄(344mg，1.94mmol)，Xantphos(73mg，0.13mmol)和醋酸钯(29mg，0.13mmol)置于DMF(20mL)中，反应混合物在氮气保护下，加热至150℃搅拌10h。TLC显示反应完成，冷却至室温，将反应混合物倒入水中，并用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。将合并的有机相用饱和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。将粗产物通过柱层析(二氯甲烷：甲醇＝30∶1)纯化，得到4-[(5-氯吡啶-3-基)氧基]-7-(二甲基磷酰基)-2，3-二氢-1H-茚满-1酮(0.36g，产率82％)。

¹H NMR(500MHz，DMSO-d⁶)：δ8.76(d，1H)，8.58(d，1H)，7.73(s，1H)，7.13(m，2H)，3.08(m，2H)，2.76(m，2H)，1.78(s，3H)，1.75(s，3H).LCMS(ESI)：m/z：336.3[M+1]。

(5d)：制备(E，Z)-[(5-氯吡啶-3-基)氧基)-3-(3-甲氧基丙基亚胺基)-2，3-二氢-1H-茚满-4-基)]二甲基氧化膦

将4-[(5-氯吡啶-3-基)氧基]-7-(二甲基磷酰基)-2，3-二氢-1H-茚满-1酮(260mg，0.77mmol)、3-甲氧基丙基胺(413mg，4.64mmol)，特戊酸(16mg，0.16mmol)置于甲苯(20mL)与环己烷(10mL)的混合溶液中，用连接的Dean-Stark分水器回流加热10h。TLC显示反应完成，冷却至室温，将反应混合物蒸干并将残余物直接用于下一步反应。

(5e)：制备4-[(5-氯吡啶-3-基)氧基)]-7-(二甲基磷酰基)-2，2-二氟-2，3-二氢-1H-茚满-1酮

将1-氯甲基-4-氟-1，4-二铵双环[2.2.2]辛烷双(四氟硼酸盐)(682mg，2.20mmol)、无水硫酸钠(250mg，1.76mmol)加入至乙腈(10mL)中。加热至70℃，滴加上步制得的(E，Z)-[(5-氯吡啶-3-基)氧基)-3-(3-甲氧基丙基亚胺基)-2，3-二氢-1H-茚满-4-基)]二甲基氧化膦的乙腈(10mL)溶液，继续搅拌反应2h。TLC显示反应完成，冷却至室温，反应混合物用1M HCl(8mL，8.0mmol)处理，并在室温下搅拌1h。将反应混合物蒸发并使残余物在乙酸乙酯与水之间分配。将有机相用饱和食盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，并浓缩至干，将粗产物通过柱层析(二氯甲烷∶甲醇＝50∶1)纯化，得到4-[(5-氯吡啶-3-基)氧基)]-7-(二甲基磷酰基)-2，2-二氟-2，3-二氢-1H-茚满-1酮(116mg，产率56％)。

¹H NMR(500MHz，DMSO-d⁶)：δ8.78(d，1H)，8.59(d，1H)，7.75(s，1H)，7.13(m，2H)，3.68(m，2H)，1.78(s，3H)，1.76(s，3H).LCMS(ESI)：m/z：372.5[M+1]。

(5f)：制备[7-((5-氯吡啶-3-基)氧基)-2，2-二氟-3-羟基-2，3-二氢-1H-茚满-4-基]二甲基氧化膦(化合物5)

0℃下，将硼氢化钠(40mg，1.07mmol)加入至4-[(5-氯吡啶-3-基)氧基)]-7-(二甲基磷酰基)-2，2-二氟-2，3-二氢-1H-茚满-1酮(80mg，0.21mmol)的甲醇(10mL)溶液中，保持温度搅拌3h，TLC显示反应完成。将反应混合物旋干并将残余物经柱层析(二氯甲烷∶甲醇＝30∶1)纯化，得到[7-(3，5-二氟苯氧基)-2，2-二氟-3-羟基-2，3-二氢-1H-茚满-4-基]二甲基氧化膦(75mg，94％)。

¹H NMR(500MHz，DMSO-d⁶)：δ8.71(d，1H)，8.56(d，1H)，7.65(s，1H)，7.10(d，2H)，6.46(s，1H)，5.56(m，1H)，3.60(m，2H)，1.78(t，6H).LCMS(ESI)：m/z：374.5[M+1]。

实施例6

3-[7-(二甲基硫膦)-2，2-二氟-1-羟基-2，3-二氢-1H-茚满-4-基]氧基-5-氟苯甲腈(化合物6)，所述化合物6的结构式如下：

将3-[7-(二甲基磷酰基)-2，2-二氟-1-羟基-2，3-二氢-1H-茚满-4-基]氧基-5-氟苯甲腈(25mg，0.065mmol)、劳森试剂(14mg，0.033mmol)加入至甲苯(10mL)中。加热至100℃搅拌5h，将反应混合物旋干并将残余物经柱层析(二氯甲烷∶甲醇＝50∶1)纯化，得到3-[7-(二甲基硫膦)-2，2-二氟-1-羟基-2，3-二氢-1H-茚满-4-基]氧基-5-氟苯甲腈(15mg，58％)。

¹H NMR(500MHz，DMSO-d⁶)：δ7.70(m，2H)，7.65(d，1H)，7.45(d，1H)，7.08(d，1H)，6.76(d，1H)，5.40(m，1H)，3.36(m，2H)，0.78(t，6H).LCMS(ESI)：m/z：398.2[M+1]。

实施例7：生物学实验

1、VEGF ELISA测定

将处于对数生长期的786-0细胞接种于96孔板(Fisher Scientific)内，每孔7500个细胞(180μL/孔)，培养4h后，将20μL不同浓度化合物储备液添加到每个孔以使得最终浓度如下(μM)：0.01、0.05、0.25、1.25、6.25、30。约20h后，通过抽吸去除培养基并向每个孔提供180μL的生长培养基。将20μL新配制的6x待测化合物储备液添加至每个孔。低氧(1％氧气+5％二氧化碳)培养24h，将细胞培养基移出。然后，以遵照制造商建议的方法，采用从R&DSystems购买的ELISA试剂盒确定VEGF浓度。通过向每个孔中添加50μL的Celltiter Glo试剂终止反应，轻轻晃动酶标板使终止反应充分进行。对接种细胞的平板进行CellTiter-Glo发光细胞活力测定(Promega)，然后立即使用酶标仪在450nm波长测量各孔的光吸收值。使用剂量-响应-抑制(四参数)等式通过GraphPadPrism分析数据，计算EC₅₀，结果如表1所示。

表1.VEGF ELISA测定中选定化合物的EC₅₀

化合物	EC<sub>50</sub>(μM)
		1	0.51
2	0.035
		3	0.121
4	0.029
		5	0.075
6	0.92
		阳性对照	0.067

注：阳性对照药物：PT-2385。

如表1实验结果可知：化合物1-6均具有抑制VEGF表达的活性，其中化合物2及化合物4活性优于阳性对照PT-2385。

2、双荧光素酶报告基因实验

1)实验试剂：Dulbecco’Modified Eagle’s Medium，Fetal Bovine Serum，Trypsin-EDTA(0.25％)，青霉素，链霉素，Lipofectamine2000，786-O细胞，Dual-Reporter Assay System，96孔白板，HRE-Luc质粒，PRL-SV-40质粒，TOP10菌株，质粒小提试剂盒

2)仪器型号：Thermo Scientific Luminoskan^TM MAscent

3)实验过程：

a.HRE-Luc及PRL-SV-40质粒的扩增及提取

质粒转化进入TOP10感受态细胞中：取50μL大肠杆菌感受态细胞(TOP10)，加入1μL质粒，冰浴30min后，42℃热激90s，马上放回冰上，冰浴2min；加400μL LB培养基，于37℃摇床慢摇振荡培养45-60min；取50-100μL涂在含有氨苄青霉素(100μg/mL)的LB固体培养基上，37℃倒置培养过夜。

扩增，质粒提取：质粒提取按照天根质粒小提试剂盒说明书提取。

b.转染

将对数期生长的786-O细胞接种至48孔板中，每孔200μL，约200000个细胞。培养过夜弃去旧培养基，加入200μL无血清无双抗的DMEM培养基，饥饿6小时。取1.5mL ep管，A管中取1μL Lopo2000脂质体，加入到50μL无血清无双抗DMEM培养基混匀后室温静止5min；B管中取0.4mg(HRE-Luc∶PRL-SV-40＝20∶1)质粒加入到50μL无血清无双抗DMEM培养基，混匀；将B管中A管混合，室温反应20min。弃去48孔板中旧培养基，轻轻加入A、B混合培养基，低氧(1％氧气和5％二氧化碳)培养6h。

c.给药

设置浓度梯度0.01、0.05、0.25、1.25、6.25、30uM，以及空白对照。将待测化合物(母液浓度10mM)用含10％血清的DMEM培养基稀释成以上浓度。将48孔板中旧培养基弃去，PBS清洗，加入配置好的含药培养基。低氧培养24h。

d.检测

将48孔板取出，弃去旧培养基，PBS清洗两遍，使用Dual-ReporterAssay System进行检测。向每孔中加入100μL 1 x Lysis，冰浴裂解1h。取30μL48孔板中裂解液加到96孔白板中，每孔加入萤火虫荧光素底物30μL，立即检测；每孔加入30μL 1 xstop&Glo substrate，立即检测。

4)实验结果

采用Dotmatics软件计算EC₅₀，结果如表2所示：

表2.双荧光素酶实验中选定化合物的EC₅₀

化合物	EC<sub>50</sub>(μM)
		1	0.053
2	0.011
		3	0.78
4	0.024
		5	0.061
6	0.12
		阳性对照	0.023

注：阳性对照药物：PT-2385。

如表2实验结果可知：化合物1-6均具有一定体外活性，其中化合物2及化合物4活性优于阳性对照PT-2385。

3、利用SPRi***测试化合物与HIF-2α蛋白的相互作用

1)实验原理

生物分子相互作用***是一种基于微阵列技术的表面等离子体共振成像(SPRi)***，采用二维CCD技术对芯片上的数千个样点进行拍摄，实时分析多种生物分子之间的相互作用，无需标记。从而了解分子结合的特异性，精确计算分子结合的动力学数据，了解生物分子的结合过程。广泛用于各种生物体系的测定，包括各类小分子化合物、多肽、蛋白质、寡核苷酸，糖类间的相互作用。通过PLEXERA SPR Date Analysis Module(DAM)分析软件进行数据分析与拟合，可以得到结合曲线，结合，解离，平衡解离常数等动力学数据。

2)实验方法

借助Arrayit，SpotBot3针点平台中的SpotBot3Microarrayer控制软件将化合物至于生物芯片Graft-to-PCL表面，紫外光交联15min将化合物交联于芯片表面。蛋白的初始浓度为0.1-1μM用PBS缓冲液，按照一定的比例进行稀释，配置好的不同浓度的化合物进样检测。得到的数据根据PLEXERA SPR Date Analysis Module(DAM)分析软件进行数据分析与拟合，获得结合动力学常数，结果如表3所示。

缓冲液(buffer)：1×PBS

重生液：Gly-Hcl(PH＝2)

进样流速1μl/s，进样时间180s；解离流速1μl/s，进样时间200s；

重生流速2μl/s，重生时间200s

3)实验结果

实施例化合物与HIF-2α蛋白的结合常数(ka)、解离常数(kd)和平衡解离常数(KD)如表3所示。

表3.化合物与HIF-2α蛋白结合动力学常数

化合物	Ka(1/Ms)	Kd(1/s)	KD(M)
				1	5.92e2	3.73e-3	6.31e-6
4	2.05e3	1.94e-3	9.47e-7
				5	3.05e2	9.8e-3	9.55e-5
6	7.41e2	1.03e-2	1.38e-5
				PT2385	4.77e2	2.55e-3	5.34e-6

如表3实验结果可知：确定测试化合物与HIF-2α蛋白可以结合，其中化合物1和化合物4与HIF-2α具有较强的结合能力。

以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其进行限制；尽管参照前述实例对本发明进行了详细的说明，对本领域的普通技术人员来说，依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。

Claims

1.芳基磷氧类和芳基磷硫类化合物，其特征在于其为式(I)所示化合物及其药学上可接受的盐，

其中：R1选自芳基或杂芳基；

R2选自氢、卤代或烷基；

W选自氧或硫。

2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于：所述R1为苯基、单环杂芳基或双环杂芳基。

3.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于：所述R1为苯基或吡啶基。

4.根据权利要求3所述的化合物，其特征在于：所述苯基或吡啶基被至少一个选自卤代、氰基、C1-C4烷基和C1-C4烷氧基的取代基取代。

5.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于：所述R2为氟代，且n为1、2或3。

6.根据权利要求1-5任一项所述化合物，其特征在于：所述化合物选自：

7.权利要求1所述化合物的制备方法，其特征在于所述制备方法如下所示：

8.一种药物组合物，其包含权利要求1-6任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及任选的一种或多种药学上可接受的赋形剂。

9.权利要求1-6任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗和/或预防哺乳动物与缺氧诱导因子2α相关的疾病或病症的药物中的用途。

10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于：所述的与缺氧诱导因子2α相关的疾病或病症选自癌症、炎症、代谢性疾病；

所述的癌症包括皮肤癌、肺癌、泌尿系肿瘤、血液肿瘤、乳腺癌、胶质瘤、消化***肿瘤、生殖***肿瘤、淋巴瘤、神经***肿瘤、脑瘤、头颈癌；所述的炎症包括肺炎、肠炎、肾炎、关节炎、外伤感染；所述的代谢性疾病包括肥胖症、血脂异常、高脂质血症。