CN109776214A

CN109776214A - 一种植物病害防除的组合物

Info

Publication number: CN109776214A
Application number: CN201811586839.2A
Authority: CN
Inventors: ***
Original assignee: Jinhua Wild Spring Horticulture Technology Co Ltd
Current assignee: Jinhua Wild Spring Horticulture Technology Co Ltd
Priority date: 2018-12-25
Filing date: 2018-12-25
Publication date: 2019-05-21

Abstract

本发明提供一种植物病害防除的组合物，属于植物病害防除领域，该组合物包括如下重量百分比的有效成分：生防菌发酵液10‑50%，水溶性铁盐1‑5%，苦豆子生物碱：1‑15%；并加入助剂复配而成，制剂形态是乳油剂、微乳剂或水乳剂；其中，生防菌为荧光假单胞菌和枯草芽孢杆菌；水溶性铁盐中铁盐和亚铁盐按质量比1:2‑4复配；生防菌发酵液和水溶性铁盐混合前，在菌液中加入水杨酸和香茅醇超声混合。本发明植物病害防除组合物，具有无毒、无害、无污染、不产生抗药性的优点，该组合物从抑制病原菌生长和加强植物本身长势两方面进行病害防除，不仅抗菌杀菌效果强，还能够提高植物生长免疫力。

Description

一种植物病害防除的组合物

技术领域

本发明属于植物病害防除领域，具体涉及一种植物病害防除的组合物。

背景技术

植物病害是植物在生物或非生物因子影响下，发生一系列形态、生理和生化上的病理变化，阻碍了植物正常生长、发育进程，从而影响经济效益的现象。目前，植物病害防治主要依赖化学农药。化学防治是控制植物病害的有效方法，具有见效快、杀菌谱广、成本低、使用简便等优点，但化学杀菌剂的长期大量使用会造成土壤、大气等环境污染、破坏生态平衡。随着近年来人们对食品安全及环境污染问题的关注，一些化学杀菌剂在许多发达国家和地区已被严格限制使用。人们开始寻找一种对人类和环境无害并具有良好防治效果的新的植物病害防治策略。生物防治高效且无毒、无害、无污染、不产生抗药性，不仅符合人们对绿色食品的需求，而且为农业的可持续发展提供了保障，因此，植物病害生物防治的研究越来越受到重视。

植物病害生物防治是指利用有益微生物或微生物代谢产物对植物病害进行有效防治的技术与方法，其实质就是利用微生物种间或种内的抗生、竞争、重寄生、溶菌作用，或者通过微生物代谢产物诱导植物抗病性等，来抑制某些病原物的存活和活动。

现有技术如授权公告号为CN 105076155B的中国发明专利，公开了一种植物病害防除组合物，包括肟醚菌胺和四氟醚唑，二者通过复配，作用于致病菌和/或其环境，或者植物、植物部位、种子、土壤、区域、材料或空间中可用于防治谷类、豆类、水果、蔬菜、棉花、观赏植物上真菌和细菌，达到了增效的效果；考虑到化学制剂易造成环境污染和产生抗性，本发明采用生物防治为主。

发明内容

本发明的目的在于提供一种无毒、无害、无污染、不产生抗药性的植物病害防除的组合物，该组合物从抑制病原菌生长和加强植物本身长势两方面进行病害防除，不仅抗菌杀菌效果强，还能够提高植物生长免疫力。

本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：

一种植物病害防除的组合物，有效成分包括苦豆子生物碱、生防菌发酵液和水溶性铁盐；并加入助剂复配而成，制剂形态是乳油剂、微乳剂或水乳剂；

有效成分按以下重量百分比配制：苦豆子生物碱：1-15％，生防菌发酵液10-50％，水溶性铁盐1-5％。

作为优选，苦豆子生物碱的制备方法为：以苦豆子为原料，将苦豆子粉碎，用8-18倍苦豆子粉末干重(w/w)的pH＝3-5的50-90％乙醇水溶液，于45-90℃条件下提取1-3次，每次1-2个小时，合并三次滤液，将滤液至大孔吸附树脂富集吸附饱和，先用60-70％乙醇清洗除杂，再用氨性乙醇水溶液洗脱目标物质，滤液经减压回流得苦豆子生物碱提取物。

作为优选，酸性溶剂采用柠檬酸、酒石酸、苹果酸中的任意一种。

作为优选，氨性乙醇水溶液中含有质量分数为0.1-0.5％的氨根和0.001-0.005％的2,6-二乙酰基吡啶；所述乙醇的浓度为80-90％；2,6-二乙酰基吡啶和NH₄ ⁺协同发挥作用，一是避免树脂体积发生收缩或膨胀，影响洗脱速率或洗脱纯度；二是增加了乙醇水溶液对生物碱的相容性，有利于生物碱得到快速置换洗脱，并且降低了生物碱成分中游离态的含量，提高生物碱的可溶性进而提高纯度。

作为优选，生防菌为荧光假单胞菌和枯草芽孢杆菌。

作为优选，水溶性铁盐中铁盐和亚铁盐按质量比1:2-4复配。

作为优选，生防菌发酵液的制备方法为：

S1.将荧光假单胞菌种子培养液按6-12％接种量于发酵培养基中，起始pH为7.0-7.3，温度25-28℃下有氧发酵2-5天；

S2.将枯草芽孢杆菌种子培养液按2-5％接种量于发酵培养基中，起始pH为7.0-7.3，温度30-40℃下有氧发酵2-5天；

S3.将荧光假单胞菌和枯草芽孢杆菌各自的发酵液，滤掉菌丝得到生物活性成分，按体积比2-3:1混合得生防菌发酵液。

作为优选，取生防菌发酵液，加入菌液质量分数为1-5％的水杨酸和0.01-0.1％的香茅醇，超声混合1-2h，然后加入水溶性铁盐，混合搅拌均匀，备用；水杨酸和香茅醇的特殊存在，使得荧光假单胞菌细胞的通透性增加，其细胞的表面张力降低，有利于胞内抗生素、次生抗性代谢物的溶出，增加溶液中的活性成分，也促进了胞外噬铁素的分泌，从而与铁元素(包括外源和土壤中的)形成螯合，携带铁被植物吸收而降低病原菌微生物对铁的利用，有效提高植物对铁的吸收利用的同时，降低病原菌微生物的滋生和繁殖，兼顾从改善植物体内铁含量和防治病原菌污染两方面提高植物病害的防除效率。

本发明的有益效果为：

1)本发明植物病害防除组合物采用生防菌发酵液和水溶性铁盐复配，不仅利用生防菌产生的有益活性物质起到抗菌杀菌效果，还可以和铁进行螯合，一是降低环境中有害病原菌可利用的铁源，二是为植物生长补充铁元素，加强植物光合作用发生和增加生长代谢相关的有些酶活，促进植物优势生长；

2)本发明植物病害防除组合物有效成分还包括苦豆子生物碱，不仅具有抗菌杀菌活性，还能够提高植物生长免疫力；

3)本发明生防菌发酵液和水溶性铁盐复配过程借助水杨酸和香茅醇，能够使得荧光假单胞菌细胞的通透性增加，其细胞的表面张力降低，有利于胞内抗生素、次生抗性代谢物的溶出，增加溶液中的活性成分，也促进了胞外噬铁素的分泌，从而与铁元素(包括外源和土壤中的)形成螯合，携带铁被植物吸收而降低病原菌微生物对铁的利用，有效提高植物对铁的吸收利用的同时，降低病原菌微生物的滋生和繁殖，兼顾从改善植物体内铁含量和防治病原菌污染两方面提高植物病害的防除效率。

本发明采用了上述技术方案提供范文，弥补了现有技术的不足，设计合理，操作方便。

具体实施方式

本发明的植物病害防除组合物，其有效成分包括苦豆子生物碱、生防菌发酵液和水溶性铁盐；

生防菌为荧光假单胞菌和枯草芽孢杆菌的复配；荧光假单胞菌属薄壁菌门假单胞菌科假单胞菌，依据菌落形态、色素、生理生化和营养的特性等表型特征将荧光假单胞菌分为5个生物型：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、G。荧光假单胞菌是一种重要的植物病害生防菌和根际促生菌；具有繁殖速度快、适应能力强、易于人工培养、制剂稳定、施用方便、不污染环境、防治多种植物病害等优点；该菌的生防机制包括：抗生素作用、噬铁素对铁的营养竞争、有效的根际定殖、次生抗性代谢物和诱导植物***抗性等；荧光假单胞菌产生的抗生素，如1-羧基吩嗪(PCA)、2，4－二乙酰藤黄酚(DAPG)、藤黄绿脓菌素(Plt)、吡咯菌素(Prn)、绿脓菌素、卵菌素A等，PCA为吩嗪类物质，在细胞内作为电子载体传递电子到靶细胞，增加胞内超氧化物自由基，使靶细胞中毒死亡；DAPG和Plt为聚酮类抗生素，具有广谱抗菌活性；Prn属于氨基糖甘类抗生素，在低浓度时破坏氧化磷酸化的偶联机制，而在高浓度时阻止参与呼吸作用的黄素蛋白和细胞色素C的电子运输。许多学者认为荧光假单胞菌产生的DAPG是拮抗根部病害的关键因素，DAPG充当诱导其本身的生物合成基因的表达信号的化合物；这些抗生素通常在很低浓度下就可阻碍病原微生物的生长。此外，荧光假单胞菌对植物根际具有一定的定植作用，能够在幼根表面形成一层均匀的保护层，降低病原菌的侵染机会；荧光假单胞菌产生许多具有抗性的次生代谢物，对植物病原菌具有拮抗作用；而荧光假单胞菌和枯草芽孢杆菌交互使用，具有协同功效，能够增加抗拮病原菌危害。

水溶性铁盐采用铁盐和亚铁盐按质量比1:2-4复配，铁元素是植物生长必需的重要物质，影响叶绿体结构组成以及参与叶绿素的合成，在叶绿素合成时，它是一种或多种酶的活化剂；铁还参与植物的呼吸作用，是一些与呼吸作用有关的酶的成分；植物缺铁时，这些酶的活性受到影响，呼吸作用受阻；从而影响了植物对矿质营养的主动运输。

苦豆子生物碱为苦豆子的提取物；苦豆子属豆科槐属，是具有西北地域性特色的天然中药。据本草纲目记载，苦豆性寒、味极苦、有毒；有清热解毒，抗菌消炎等功效。苦豆子的化学成分较为复杂，主要为生物碱、黄酮类、挥发油、有机酸、氨基酸等，其中，生物碱含量较高，约8.11％(质量分数)，主要有苦参碱、苦豆碱、槐果碱、槐定碱等。现代医学研究证明，苦豆子的药用价值极高，其主要成分生物碱具有调节免疫功能、抗乙肝病毒、抗肿瘤等广泛的药理活性，因此对心血管***、免疫***、免疫***、肌肉***等有明显作用。苦豆子对副伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌有较好抑制作用；苦豆子生物碱对大肠埃希菌、无乳链球菌、多杀性巴氏杆菌均有一定的抑制作用。苦豆碱对松线虫也有良好的防治效果，已作为制剂应用于林业虫害的防治。

本发明将有效成分中加入助剂复配成植物病害防除组合物，其制剂形态可以是乳油剂、微乳剂或水乳剂；其中，

乳油剂由以下原料按重量百分比配制：

苦豆子生物碱：1-15％，生防菌发酵液10-50％，水溶性铁盐1-5％，有机溶剂：0-20％，乳化剂：5-20％，增效剂：0-20％，渗透剂：5-30％，原料的重量百分比之和为100％；

微乳剂由以下原料按重量百分比配制：

苦豆子生物碱：1-15％，生防菌发酵液10-50％，水溶性铁盐1-5％，有机溶剂：0-20％，表面活性剂：5-15％，增效剂：0-15％，防冻剂：5-10％，余量为水，原料的重量百分比之和为100％；

水乳剂由以下原料按重量百分比配制：

苦豆子生物碱：1-15％，生防菌发酵液10-50％，水溶性铁盐1-5％，有机溶剂：0-20％，表面活性剂：5-15％，增效剂：0-15％，防冻剂：5-10％，增稠剂：0-1％，余量为水，原料的重量百分比之和为100％；

其中，有机溶剂为乙酸乙酯、环己酮、油酸甲酯、乙醇、甲醇、丙酮、二甲基甲酰胺、异丙醇中的一种或几种的混合物；

乳化剂是烷基苯磺酸盐类、烷基酚聚氧乙烯醚类、苯乙基酚聚氧乙烯醚类、苯乙基酚聚氧乙烯醚聚氧丙烯醚类、斯潘系列、吐温中的一种或几种的混合物；

表面活性剂为烷基苯磺酸盐类、烷基酚聚氧乙烯醚类、苯乙基酚聚氧乙烯醚类、苯乙基酚聚氧乙烯醚聚氧丙烯醚类、蓖麻油与环氧乙烷的加成物、芳烷基酚聚氧乙烯醚甲醛缩合物中一种或几种的混合物；

增效剂为有机硅、增效醚、增效胺、碳酸烷基酯中的一种或几种的混合物；

渗透剂为桐油、环氧大豆油或月桂氮酮中的一种或几种的混合物；

防冻剂为乙二醇或丙二醇；

增稠剂为聚乙烯醇、黄原胶、羧甲基纤维素钠、硅酸铝镁中的一种或几种的混合物。

本发明在利用树脂纯化苦豆子生物碱提取时，采用的大孔吸附树脂可以是非极性吸附树脂、中等极性大孔吸附树脂、极性大孔吸附树脂中的一种；可采用D3520、D4006、D4020、H103、X-5、HP10、HP20、XAD-7、SP850、SP825、SP700、SP207、X-5AB-8中的一种。

以下结合实施例对本发明作进一步详细描述：

实施例1：

一种植物病害防除的组合物(微乳剂)，由以下原料按重量百分比配制：

苦豆子生物碱：11％，生防菌发酵液47％，水溶性铁盐4％，有机溶剂(乙酸乙酯)：15％，表面活性剂(苯乙基酚聚氧乙烯醚)：10％，增效剂(增效胺)：9％，防冻剂(乙二醇)：6％，余量为水，原料的重量百分比之和为100％；该微乳剂的制备方法为：将原料配方称量，依次加入混合，在反应釜中搅拌透明，经过质量检验后，最后制成成品。

其中，苦豆子生物碱的制备方法为：以苦豆子为原料，将苦豆子粉碎，用12倍苦豆子粉末干重(w/w)的pH＝4.5(采用酒石酸调节酸性)的75％乙醇水溶液，于75℃条件下提取3次，每次1.5个小时，合并三次滤液，将滤液至D4020型吸附树脂富集吸附饱和，先用65％乙醇清洗除杂，再用氨性乙醇水溶液洗脱目标物质，滤液经减压回流得苦豆子生物碱提取物；氨性乙醇水溶液中含有质量分数为0.4％的氨根和0.002％的2,6-二乙酰基吡啶；所述乙醇的浓度为85％；2,6-二乙酰基吡啶和NH₄ ⁺协同发挥作用，一是避免树脂体积发生收缩或膨胀，影响洗脱速率或洗脱纯度；二是增加了乙醇水溶液对生物碱的相容性，有利于生物碱得到快速置换洗脱，并且降低了生物碱成分中游离态的含量，提高生物碱的可溶性进而提高纯度。

生防菌发酵液的制备方法为：

其中，荧光假单胞菌和枯草芽孢杆菌均来自于烟草根际土壤；

S1.将荧光假单胞菌种子培养液按10％接种量于发酵培养基中，起始pH为7.2，温度27℃下有氧发酵3天；发酵培养基为：每1000ml培养基含果糖15g、蛋白胨20g、KH₂PO₄ 8g、NaCl 6g、CaCO₃ 9g；培养终，荧光假单胞菌的浓度为10⁸-10⁹CFU/ml；

S2.将枯草芽孢杆菌种子培养液按4％接种量于发酵培养基中，起始pH为7.2，温度37℃下有氧发酵3天；发酵培养基为：每1000ml培养基含牛肉膏3g，蛋白胨10g，葡萄糖10ml，氯化钠5g，淀粉30g，3.05％浓度的硫酸镁10ml；培养终，枯草芽孢杆菌浓度为10⁷-10⁸CFU/ml；

S3.将荧光假单胞菌和枯草芽孢杆菌各自的发酵液，滤掉菌丝得到生物活性成分，按体积比2:1混合得生防菌发酵液。

将生防菌发酵液，加入菌液质量分数为3％的水杨酸和0.05％的香茅醇，超声混合1.5h，然后加入水溶性铁盐(氯离子铁盐和亚铁盐按质量比1:3复配)，混合搅拌均匀，备用；水杨酸和香茅醇的特殊存在，使得荧光假单胞菌细胞的通透性增加，其细胞的表面张力降低，有利于胞内抗生素、次生抗性代谢物的溶出，增加溶液中的活性成分，也促进了胞外噬铁素的分泌，从而与铁元素(包括外源和土壤中的)形成螯合，携带铁被植物吸收而降低病原菌微生物对铁的利用，有效提高植物对铁的吸收利用的同时，降低病原菌微生物的滋生和繁殖，兼顾从改善植物体内铁含量和防治病原菌污染两方面提高植物病害的防除效率。

实施例2：

一种植物病害防除的组合物(水乳剂)，由以下原料按重量百分比配制：

苦豆子生物碱：11％，生防菌发酵液47％，水溶性铁盐4％，有机溶剂(乙醇)：10％，表面活性剂(十二烷基苯磺酸钠)：8％，增效剂(有机硅)：5％，防冻剂(乙二醇)：6％，增稠剂(聚乙烯醇)：0.3％，余量为水，原料的重量百分比之和为100％；

该水乳剂的制备方法为：将原料按配方称量，依次加入混合，最后在高速剪切机的作用下乳化分散，经过质量检验后，最后制成成品。

其中，苦豆子生物碱的制备方法为：以苦豆子为原料，将苦豆子粉碎，用17倍苦豆子粉末干重(w/w)的pH＝5(采用柠檬酸调节酸性)的75％乙醇水溶液，于60℃条件下提取3次，每次1.5个小时，合并三次滤液，将滤液至XAD-7型吸附树脂富集吸附饱和，先用60％乙醇清洗除杂，再用氨性乙醇水溶液洗脱目标物质，滤液经减压回流得苦豆子生物碱提取物；氨性乙醇水溶液中含有质量分数为0.3％的氨根和0.002％的2,6-二乙酰基吡啶；所述乙醇的浓度为80％；2,6-二乙酰基吡啶和NH₄ ⁺协同发挥作用，一是避免树脂体积发生收缩或膨胀，影响洗脱速率或洗脱纯度；二是增加了乙醇水溶液对生物碱的相容性，有利于生物碱得到快速置换洗脱，并且降低了生物碱成分中游离态的含量，提高生物碱的可溶性进而提高纯度。

生防菌发酵液的制备方法为：

S1.将荧光假单胞菌种子培养液按10％接种量于发酵培养基中，起始pH为7.2，温度26℃下有氧发酵3天；发酵培养基为：每1000ml培养基含果糖15g、蛋白胨20g、KH₂PO₄ 8g、NaCl 6g、CaCO₃ 9g；培养终，荧光假单胞菌的浓度为10⁸-10⁹CFU/ml；

S2.将枯草芽孢杆菌种子培养液按3％接种量于发酵培养基中，起始pH为7.2，温度37℃下有氧发酵3天；发酵培养基为：每1000ml培养基含牛肉膏3g，蛋白胨10g，葡萄糖10ml，氯化钠5g，淀粉30g，3.05％浓度的硫酸镁10ml；培养终，枯草芽孢杆菌浓度为10⁷-10⁸CFU/ml；

S3.将荧光假单胞菌和枯草芽孢杆菌各自的发酵液，滤掉菌丝得到生物活性成分，按体积比2.5:1混合得生防菌发酵液。

将生防菌发酵液，加入菌液质量分数为2.5％的水杨酸和0.06％的香茅醇，超声混合1.5h，然后加入水溶性铁盐(硫酸根离子铁盐和亚铁盐按质量比1:3复配)，混合搅拌均匀，备用；水杨酸和香茅醇的特殊存在，使得荧光假单胞菌细胞的通透性增加，其细胞的表面张力降低，有利于胞内抗生素、次生抗性代谢物的溶出，增加溶液中的活性成分，也促进了胞外噬铁素的分泌，从而与铁元素(包括外源和土壤中的)形成螯合，携带铁被植物吸收而降低病原菌微生物对铁的利用，有效提高植物对铁的吸收利用的同时，降低病原菌微生物的滋生和繁殖，兼顾从改善植物体内铁含量和防治病原菌污染两方面提高植物病害的防除效率。

对比例1：

生防菌发酵液和水溶性铁盐复配时直接混合，未添加水杨酸和香茅醇，其余部分和实施例2完全一致。

对比例2：

苦豆子生物碱制备中，洗脱用乙醇水溶液中不含有2,6-二乙酰基吡啶和NH₄ ⁺，其余部分和实施例2完全一致。

实施例3：

采用浸虫浸叶法测定本发明组合物有效成分对害虫(如蚜虫)的室内毒力，测定结果见表1；

测定方法为：采用浸虫浸叶法对蚜虫进行室内生物测定：先将供试药剂用水稀释成母液，再稀释成6-7个浓度梯度，再将挑好的试虫连带叶片一起在药液中浸渍5s后取出用吸水纸吸干药液，放入预先保湿好的铺有滤纸的9cm培养皿中；每30-40头一皿，每浓度处理90-120头蚜虫；对照用水处理，8h后检查试虫死亡数，若对照死亡率高于20％则当天试验作废，反之用abott校正公式对死亡率进行校正后，计算校正死亡率；

其中，

混剂理论死亡率Dn＝1-(1-D1)×(1-D2)×(1-D3)

D1、D2、D3分别为各单剂的试虫死亡率；

协同毒力指数(c.f)＝(实际死亡率-理论死亡率)/理论死亡率×100％

以c.f值大小来评判几种药剂混用的联合作用，当c.f＞20时为增效作用，c.f＜-20时为拮杭作用，-20＜c.f＜20时为相加作用；

表1本发明组合物有效成分对蚜虫的室内毒力

由表1可知，本发明组合物有效成分苦豆子生物碱、生防菌发酵液和水溶性铁盐通过复配，具有强力的杀灭害虫的功效，对于植物病害防除具有明显的有益效果。

实施例4：

对花期番茄植株进行试验，实验组采用本发明组合物(有效成分占比为苦豆子生物碱：11％，生防菌发酵液47％，水溶性铁盐4％)喷洒植株和周围土壤，对照组采用蒸馏水，一月喷洒2次，相同条件下培养番茄至结果实结束；统计两组的结果率分别为：实验组92.3％，对照组67.1％；表明本发明组合物对植物病害防除具有优异的效果，能够加强植株的优势生长。

上述实施例中的常规技术为本领域技术人员所知晓的现有技术，故在此不再详细赘述。

以上实施方式仅用于说明本发明，而并非对本发明的限制，本领域的普通技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，还可以做出各种变化和变型。因此，所有等同的技术方案也属于本发明的范畴，本发明的专利保护范围应由权利要求限定。

Claims

1.一种植物病害防除的组合物，其特征在于，该组合物有效成分包括生防菌发酵液和水溶性铁盐；

所述生防菌为荧光假单胞菌和枯草芽孢杆菌；

所述水溶性铁盐中铁盐和亚铁盐按质量比1:2-4复配；

所述生防菌发酵液和水溶性铁盐复配体系中含有水杨酸和香茅醇。

2.根据权利要求1所述的一种植物病害防除的组合物，其特征在于：所述组合物包括如下重量百分比的有效成分：生防菌发酵液10-50%，水溶性铁盐1-5%，苦豆子生物碱：1-15%。

3.根据权利要求1所述的一种植物病害防除的组合物，其特征在于：所述组合物通过将有效成分中加入助剂复配而成，制剂形态是乳油剂、微乳剂或水乳剂。

4.根据权利要求1所述的一种植物病害防除的组合物，其特征在于：所述生防菌发酵液的制备方法为：

S1.将荧光假单胞菌种子培养液按6-12%接种量于发酵培养基中，起始pH为7.0-7.3，温度25-28℃下有氧发酵2-5天；

S2.将枯草芽孢杆菌种子培养液按2-5%接种量于发酵培养基中，起始pH为7.0-7.3，温度30-40℃下有氧发酵2-5天；

5.根据权利要求1所述的一种植物病害防除的组合物，其特征在于：取生防菌发酵液，加入菌液质量分数为1-5%的水杨酸和0.01-0.1%的香茅醇，超声混合1-2h，然后加入水溶性铁盐，混合搅拌均匀，备用。

6.根据权利要求1所述的一种植物病害防除的组合物，其特征在于：所述苦豆子生物碱的制备方法为：以苦豆子为原料，将苦豆子粉碎，用8-18倍苦豆子粉末干重（w/w）的pH=3-5的50-90%乙醇水溶液，于45-90℃条件下提取1-3次，每次1-2个小时，合并三次滤液，将滤液至大孔吸附树脂富集吸附饱和，先用60-70%乙醇清洗除杂，再用氨性乙醇水溶液洗脱目标物质，滤液经减压回流得苦豆子生物碱提取物。

7.根据权利要求6所述的一种植物病害防除的组合物，其特征在于：所述酸性溶剂采用柠檬酸、酒石酸、苹果酸中的任意一种。

8.根据权利要求6所述的一种植物病害防除的组合物，其特征在于：所述氨性乙醇水溶液中含有质量分数为0.1-0.5%的氨根和0.001-0.005%的2,6-二乙酰基吡啶；所述乙醇的浓度为80-90%。