CN109761826B

CN109761826B - 一种o-去甲基文拉法辛苯醚化合物及其制备方法和用途

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Publication number: CN109761826B
Application number: CN201910045444.XA
Authority: CN
Inventors: 田京伟; 李春梅; 钟彦; 徐钱钱; 杨米娜
Original assignee: Yantai University
Current assignee: Yantai University
Priority date: 2019-01-17
Filing date: 2019-01-17
Publication date: 2022-02-25
Anticipated expiration: 2039-01-17
Also published as: CN109761826A

Abstract

本发明涉及一种O‑去甲基文拉法辛衍生物，具体的涉及一种O‑去甲基文拉法辛苯醚化合物(式I化合物)，还公开了该化合物的制备工艺及治疗疼痛的用途，以及含有该化合物的药物组合物。

Description

一种O-去甲基文拉法辛苯醚化合物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一种O-去甲基文拉法辛衍生物，具体的涉及一种O-去甲基文拉法辛苯醚化合物及其制备方法和在制备疼痛的药物中的应用。

背景技术

O-去甲基文拉法辛是抗抑郁药—文拉法辛的活性代谢物，是第二代抗抑郁药，比第一代与神经受体无亲和力或亲和力降低很多，从而降低了副作用和毒性。目前美国惠氏公司已完成相关的临床试验，并于2007年3月获FDA的生产批文。与文拉法辛的作用机制相同，O-去甲基文拉法辛也是属于5-羟色胺-去甲肾上腺素重摄取抑制剂(SNRIs)，既通过抑制5-羟色胺(5-HT)又抑制去甲肾上腺素(NE)的再摄取的双重作用来发挥药理作用，被广泛用于治疗抑郁症等疾病，对各种抑郁症，包括单相抑郁、伴有焦虑的抑郁、双相抑郁、难治性抑郁症都有很好的疗效。

长期服用O-去甲基文拉法辛会引起一系列的不良反应，特别是镇静和嗜睡的不良反应，这些不良反应已经成为限制该药物使用的重要因素，给病人带来了痛苦和困扰。

另外，现在对O-去甲基文拉法辛的研究多集中在抑郁症方面，对疼痛的用途研究较少。

发明内容

本发明人通过研究和实验提供了一种O-去甲基文拉法辛苯醚化合物，该化合物具有良好的镇痛作用，又没有O-去甲基文拉法辛的镇静和嗜睡的副作用。

本发明提供了式Ⅰ所示化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，

本发明还提供了式Ⅰ化合物的制备方法，O-去甲文拉法辛与碘苯在催化剂的作用下反应，制得式Ⅰ的化合物。

制备方法具体如下所述：

步骤1：

加入O-去甲文拉法辛、30％甲醇钾溶液，然后加入过量甲醇，水浴85°，回流反应60min后减压除去溶剂，甲苯带水三次得到类白色固体粉末；

步骤2：

向步骤1中得到的白色固体粉末中，加入碘苯、碘化亚铜以及过量的DMF，氮气保护下油浴加热外温152℃反应72h，减压蒸馏除去大部分溶剂DMF，以二氯甲烷DCM萃取后，以2％盐酸洗涤，有机相无水硫酸钠干燥后，减压去除溶剂，得深棕色粘稠油状物；

其中，步骤1和2中添加的O-去甲文拉法辛、30％甲醇钾溶液、碘苯、碘化亚铜的质量比为(3～4)：(5～10)：(2～4)：1；

步骤3：

以柱层析进行纯化，以乙酸乙酯-二氯甲烷-正庚烷质量比(1：1：1)为洗脱液，将小极性杂质首先洗脱；然后换用四氢呋喃作为淋洗液，将式(Ⅰ)化合物洗脱，减压抽滤，去除四氢呋喃后得油状物；为去除上述油状物中包含的杂质，以10％氢氧化钾水溶液搅拌过夜处理，有棕色固体析出，过滤滤饼再以四氢呋喃溶解，过滤除去不溶物后，滤液减压除去四氢呋喃，得黄色固体湿重；再以新乙酸乙酯热溶洗30min，冷至室温后冰水浴中保温结晶2h，抽滤，干燥后，即得。

生物评价试验显示：体外试验说明式Ⅰ所示化合物能够与5-羟色胺转运蛋白(SERT)，去甲肾上腺素转运蛋白(NET)或多巴胺转运蛋白(DAT)结合，抑制5-HT，NE和DA的再摄取。体内试验表明式Ⅰ所示化合物、其异构体或其药学上可接受的盐既具有疼痛的治疗效果，又能够减少或消灭镇静和嗜睡等不良反应。其中，小鼠***疼痛模型在第II时相(15-40min)，小鼠缩足、抖足、舔足的累计时间明显缩短(p<0.01,p<0.001,p<0.001)，式I化合物-低/中/高剂量组(16mg/kg，32mg/kg，and 64mg/kg)在***诱导的伤害感受中产生明显的疼痛抑制作用，表明式I化合物具有中枢镇痛作用；同时，大鼠脊神经结扎(SNL)神经病理性疼痛试验显示，SNL模型大鼠产生明显的机械性异常性疼痛以及热痛觉过敏现象(p<0.001,p<0.001)在给药60分钟后式I化合物对触诱发痛和痛觉过敏均产生显著的抑制作用，而且，式I化合物对自发放电以及外界刺激产生的诱发放电均有明显的抑制作用。同时，副作用检测试验时，大鼠SNL转棒实验显示式I化合物对SNL大鼠的运动协调能力没有影响，正常大鼠自主活动实验显示式I化合物对正常大鼠的自主活动能力没有影响，无镇静作用，而且，戊巴比妥钠诱导的正常小鼠阈下剂量催眠实验显示，给予式I化合物后小鼠出现翻正反射消失的只数与溶媒对照组一致表明式I化合物没有催眠副作用，并且式I化合物对5-HT、NE、DA三重再摄取抑制显示镇痛作用时，其药效类似于普瑞巴林，但却明显无镇静嗜睡副作用。

基于此，本发明提供了式Ⅰ化合物在制备用于治疗疼痛的药物中的用途；而且本发明还提供的式Ⅰ化合物制备用于治疗疼痛的药物时，式Ⅰ化合物在治疗疼痛的过程中不会产生嗜睡和镇静的副作用的技术效果。

本发明还提供了一种药物组合物，在于含有治疗有效量的式Ⅰ化合物和药用辅料。

本发明提供的上述药物组合物，在于所述组合物制成口服制剂，例如片剂、胶囊或口服乳剂；注射剂，例如静脉乳剂、脂质体或脂质纳米粒。

附图说明

图1：小鼠***疼痛模型；

图2：式I化合物触诱发痛数据；

图3：式I化合物痛觉过敏数据；

图4：式I化合物对(A)自发放电，(B)毛刷诱发放电，(C)von Frey纤维丝诱发放电(D)夹捏诱发放电作用；

图5：式I化合物对SNL大鼠的运动协调能力作用数据；

图6：式I化合物对正常大鼠的自主活动能力作用数据；

图7：式I化合物催眠数据。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明进行详细描述，但并不意味着对本发明任何不利限制。本发明已经详细地描述了本发明内容，其中也公开了其具体实施例方式，对本领域的技术人员而言，在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本发明具体实施方式进行各种变化和改进将是显而易见的。

实施例1:

步骤1：

2L单口瓶中加入115g O-去甲文拉法辛、30％甲醇钾溶液200g，甲醇100ml，水浴85°，回流反应60min后减压除去溶剂，得到类白色固体粉末。

步骤2：

向步骤1中得到的白色固体粉末中，加入碘苯82g、碘化亚铜30g以及DMF 1200ml，氮气保护下油浴加热外温152℃反应72h，减压蒸馏除去大部分溶剂DMF，以二氯甲烷DCM萃取后，以2％盐酸洗涤，有机相无水硫酸钠干燥后，减压去除溶剂，得深棕色粘稠油状物190g。

步骤3：

以柱层析进行纯化，以乙酸乙酯-二氯甲烷-正庚烷(1：1：1)为洗脱液，将小极性杂质首先洗脱。然后换用四氢呋喃作为淋洗液，将式(Ⅰ)化合物洗脱，减压抽滤，去除四氢呋喃后得油状物30g。为去除上述油状物中包含的杂质，以10％氢氧化钾水溶液150ml搅拌过夜处理，有棕色固体析出，过滤滤饼再以四氢呋喃溶解，过滤除去不溶物后，滤液减压除去四氢呋喃，得黄色固体湿重20g；再以新乙酸乙酯100ml热溶洗30min，冷至室温后冰水浴中保温结晶2h，抽滤，干燥得类白色固体式(Ⅰ)13g，收率约10％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ0.80-0.90(m,1H),0.90-1.00(m,1H),2..28-2.32(m,8H)，2.96-3.00(m,1H),3.29(t,1H),6.90-6.92(m,2H),7.00-7.02(m,2H),7.07-7.12(m,3H),7.31-7.35(m,2H)。

生物学评价

实施例2：体外实验

测试1：放射性配体结合实验

1.1实验细胞：CHO细胞

1.2实验用药：式I化合物，尼索西汀，BTCP，丙咪嗪，地昔帕明

1.3实验设计：

为了确定LPM580098分别与5-羟色胺转运蛋白(SERT)，去甲肾上腺素转运蛋白(NET)或多巴胺转运蛋白(DAT)结合的情况，进行放射性配体结合实验。

1.4实验步骤：

分别在存在或不存在式I化合物的情况下将CHO细胞膜匀浆与^[3H]尼索西汀或^[3H]BTCP在4℃下孵育120min，或与^[3H]丙咪嗪在22℃下孵育60min。本次实验仅测试了10μM的LPM580098，分别在1μM地昔帕明、10μM BTCP和10μM丙咪嗪的存在下测定化合物非特异性结合。通过使用玻璃纤维过滤器在真空中快速过滤进行反应，所述玻璃纤维过滤器预先用0.3％聚乙烯亚胺预浸，然后用冰冷的50mM Tris-HCl冲洗96孔细胞培养板数次。闪烁计数器计数其放射性。特异性结合被估计为总特异性结合和非特异性结合之间的差异，并且结果表示为对照放射性配体特异性结合的抑制百分比。

1.5结果：

LPM580098分别与SERT，NET和DAT结合显示出一定的结合亲和力，抑制效率分别为90.3％，45.0％和77.5％。

测试2：神经递质再摄取实验

2.1实验材料：脑组织突触体

2.2实验用药：式I化合物

2.3实验设计：分别评估LPM580098对5-HT，NE或DA再摄取的抑制作用

2.4实验步骤：分别在存在或不存在式I化合物的情况下将制备好的突触体与0.2μCi^[3H]5-HT，0.2μCi^[3H]NE或0.2μCi^[3H]DA在37℃温育15min，通过使用玻璃纤维过滤器在真空中快速过滤进行反应，用冰冷的50mM Tris-HCl冲洗96孔细胞培养板数次。闪烁计数器计数其放射性，并计算IC₅₀值。

2.5结果：

LPM580098以剂量依赖性方式有效阻断^[3H]5-HT，^[3H]NE或^[3H]DA摄入大鼠突触体，抑制5-HT，NE和DA再摄取的IC₅₀值分别为0.89±0.13μM，3.94±0.31μM和1.63±0.39μM。

实施例3：体内实验

测试1：小鼠***疼痛模型

1.1实验动物：KM小鼠，18-22g

1.2实验用药与试剂：式I化合物,普瑞巴林，CMC-Na溶液，甲醛溶液

1.3实验设计：实验分为6组：

1、正常组；2、模型组；3、普瑞巴林组(60mg/kg)；4、式I化合物(16mg/kg)；5、式I化合物(32mg/kg)；6、式I化合物(64mg/kg)。

1.4实验步骤：

1.4.1小鼠提前灌胃1h；

1.4.2将待测小鼠放入透明鼠笼，适应5min后开始造模:在小鼠右后足底中间趾部插进25ul微量注射器，针头到脚掌心部位时注射20μL 2.5％***溶液(正常组用同样方法注射20μL生理盐水)，封针，有效避免漏液。造模后可见脚掌心鼓起发白；

1.4.3造模后即刻观察，分别记录0-5min(I相)，15-40min(II相)小鼠抬足，抖足，舔足时间。

1.5结果：

结果见图1，在第I时相(0-5min)，与模型组相比，式I化合物-低/中/高剂量组(16mg/kg，32mg/kg，64mg/kg)均没有展现出镇痛作用(p>0.05)；在第II时相(15-40min)，式I化合物-低/中/高剂量组(16mg/kg，32mg/kg，and 64mg/kg)在***诱导的伤害感受中产生明显的疼痛抑制作用，并且具有部分剂量依赖性，表现为小鼠缩足，抖足，舔足的累计时间较模型组相比明显缩短(p<0.01,p<0.001,p<0.001)。综上所述，II相结果表明式I化合物具有中枢镇痛作用，具体数据表明了中枢镇痛作用。

测试2：大鼠脊神经结扎(SNL)神经病理性疼痛模型

2.1实验动物：SD大鼠，180-220g。

2.2实验用药与试剂：式I化合物,普瑞巴林，生理盐水，CMC-Na溶液，水合氯醛，新洁尔灭，碘伏，青霉素粉剂

2.3实验设计：实验分为4组：正常组，模型组，普瑞巴林组(30mg/kg)，式I化合物组(16mg/kg)。

2.3.1行为学测试采用机械痛，热痛实验探索式I化合物的镇痛作用

2.3.2在体WDR单个神经元电生理实验用于探索式I化合物直接对脊神经结扎后单个神经元自发及诱发放电的影响；

2.4实验步骤：

2.4.1脊神经结扎模型制备：

大鼠经10％水合氯醛麻醉后，用脱毛机脱掉大鼠腿根处两个髂骨部位上下约2cm的毛发，在脊柱右侧约0.5cm处纵向开口(在能找到神经的前提下，尽可能开口小)，在冷光灯下暴露出L6横突，用大镊子直接掰掉即可，用提前制备的小棉球擦拭进而暴露出L5神经，在灯光下尽可能地去除骨头渣，6-0号线结扎，用2-0号线逐层将肌肉与皮肤缝合，碘伏消毒，左腿肌肉注射青霉素(8万单位/瓶，注射2ml生理盐水溶解，0.4ml/只)，术后连续左腿肌注3天。

2.4.2机械痛测定：

大鼠提前1h灌胃给药，在代谢笼中适应20min，让其进行探索，适应新环境。然后用von Frey纤维丝垂直扎向大鼠右后足心。从2.0g开始测定，采用up-down法。即若2.0g有反应(抬足，抖足，舔足)，则测量1.4g；若2.0g没有反应，则用4.0g，如此反复进行。若第一次2.0g有反应，则记为X，从2.0g开始共计6次；若第一次2.0g没反应，则记为O，从第一次有反应开始，计5次。根据经典文献Quantitative assessment of tactile allodynia in therat paw进行数据统计分析。给药前1天仅仅测机械痛，然后根据PWT<4g原则筛选合格大鼠，根据阈值采用随机区间分组法进行随机分组，分别在连续给药后的第1、7、14天测定机械痛。

2.4.3热痛测定：

提前用正常大鼠调试热痛辐射仪，使正常大鼠热痛潜伏期在10-12s。提前1h灌胃给药，大鼠在热痛测定仪的玻璃板上适应10min后进行测试，用辐射热源照射大鼠右后足心，当大鼠出现抬足，抖足，舔足时，停止照射，记录潜伏期时间；若大鼠在照射的20s内没有反应，则停止照射(防止组织损伤)，组间平行测定，共测定5次。

2.4.4在体WDR神经元电生理：

脊神经结扎成模后，用von Frey纤维丝筛选PWT<4g的大鼠用于电生理实验。电生理记录当天，各实验组动物分别于记录前1h灌胃给药。动物由乌拉坦经腹腔(1.0-1.5g/kg)麻醉。实验全程中，动物需处于深度麻醉，观察颈动脉血压，呼吸节律及肌张力监测动物的麻醉深度。动物角膜、足底反射消失后，行颈静脉插管用于麻醉维持，行颈动脉插管监测动物血压，行气管插管连接呼吸机，使动物呼吸平稳；采用温控***监测动物直肠温度，动物体温维持在37±0.5℃。将动物固定于ST-7立体定位***，切开背部皮肤，沿脊柱两侧肌肉做平行切口，定位脊髓腰膨大处。将脊柱固定于脊髓钳，行锥板切除术，暴露L4-L6水平脊髓。将两侧背部皮肤分别固定于金属支架，制作油槽，倒入温石蜡油，于解剖显微镜下去除硬脊膜。用电子微操***将碳纤维电极移至脊髓表面，缓慢进入脊髓。于脊髓背角寻找感受野位于后爪无毛皮肤的疼痛神经元，并排除关节及肌肉放电。分离并鉴定出单个WDR神经元以后，先后记录以下指标：

a、记录5-10min平稳自发放电；

b、毛刷刺激诱发放电：用毛刷轻轻刺激感受野，每次1秒，间隔1秒，共10次；

c、机械刺激诱发放电：给予机械刺激(von Frey纤维丝:1g,4g,8g,15g；1s on,1soff；10次/强度；刺激间隔10s；)记录机械刺激诱发放电；

d、夹捏刺激诱发放电：血管夹钳夹感受野10秒记录伤害性刺激诱发放电。

2.5结果：

图2为触诱发痛结果，图3为痛觉过敏结果。由图2图3可知，与假手术组相比，SNL模型大鼠产生明显的机械性异常性疼痛以及热痛觉过敏现象(p<0.001,p<0.001)，给药60分钟后式I化合物对触诱发痛和痛觉过敏均产生显著的抑制作用。

图4数据为式I化合物对(A)自发放电，(B)毛刷诱发放电，(C)von Frey纤维丝诱发放电(D)夹捏诱发放电的影响。其中(A)细胞外单个WDR神经元在没有外界刺激的情况下，模型组神经元自发放电频率显著增加，而给予式I化合物后，放电频率明显减少。对于机械刺激如毛刷、von Frey纤维丝以及夹捏反应，模型组的电信号明显增强，而给予式I化合物后电信号明显减小。综上所述，式I化合物对自发放电以及外界刺激产生的诱发放电均有明显的抑制作用。

2.6结论：

机械痛、热痛、在体WDR电生理实验表明，式I化合物对于脊神经结扎诱导的神经病理性疼痛具有明显的镇痛作用，且药效类似于普瑞巴林。

测试3：副作用检测

3.1大鼠SNL转棒实验

3.1.1实验动物：SD大鼠，180-220g；

3.1.2实验用药与试剂：LPM580098,普瑞巴林，生理盐水，CMC-Na溶液，水合氯醛，新洁尔灭，碘伏，青霉素粉剂；

3.1.3实验设计：实验分为4组：正常组，模型组，普瑞巴林组(30mg/kg)，式I化合物组(16mg/kg)；

a、行为学测试采用机械痛，热痛实验探索LPM580098的镇痛作用

b、在体WDR单个神经元电生理实验用于探索LPM580098直接对脊神经结扎后单个神经元自发及诱发放电的影响；

3.1.4实验步骤：

脊神经结扎模型制备：大鼠经10％水合氯醛麻醉后，用脱毛机脱掉大鼠腿根处两个髂骨部位上下约2cm的毛发，在脊柱右侧约0.5cm处纵向开口(在能找到神经的前提下，尽可能开口小)，在冷光灯下暴露出L6横突，用大镊子直接掰掉即可，用提前制备的小棉球擦拭进而暴露出L5神经，在灯光下尽可能地去除骨头渣，6-0号线结扎，用2-0号线逐层将肌肉与皮肤缝合，碘伏消毒，左腿肌肉注射青霉素(8万单位/瓶，注射2ml生理盐水溶解，0.4ml/只)，术后连续左腿肌注3天。

大鼠首先在自动加速转棒仪上以恒速4rpm/s训练2次，每次5min。其他5次实验转速在5min后从4rpm/s自动加速到40rpm/s，分别记录各组大鼠的在棒时间(s)。

3.1.5结果：

图5给出了实验结果，给予式I化合物后大鼠的在棒持续时间类似于模型组(p>0.05)，表明式I化合物对SNL大鼠的运动协调能力没有影响。

3.2正常大鼠自主活动实验

3.2.1实验动物：SD大鼠，180-220g.

3.2.2实验用药与试剂：式I化合物,普瑞巴林，度洛西汀，生理盐水，CMC-Na溶液。

3.2.3实验设计：实验分为4组：正常组，普瑞巴林组(30mg/kg)，度洛西汀组(12mg/kg)式I化合物组(16mg/kg)。

3.2.4实验步骤：大鼠提前1h灌胃给药，测试前10min将大鼠放入测试箱，让其进行探索，适应新环境。然后记录大鼠在10-20min时间内的自主活动，软件分析大鼠10min内的运动距离作为检测指标，组间平行测定。

3.2.5结果：

图6给出了实验结果，给予式I化合物后大鼠的运动距离并没有明显增加或者减少，与溶媒对照组相比，没有显著性差异(p>0.05)，表明式I化合物对正常大鼠的自主活动能力没有影响，无镇静作用。

3.3戊巴比妥钠诱导的正常小鼠阈下剂量催眠实验

3.3.1实验动物：KM小鼠，18-22g

3.2.2实验用药与试剂：式I化合物,***，普瑞巴林，度洛西汀，戊巴比妥钠，CMC-Na溶液，生理盐水；

3.2.3实验设计：实验分为5组：正常组，***组(3mg/kg)，普瑞巴林组(60mg/kg)，度洛西汀组(24mg/kg)式I组(16mg/kg)

3.2.4实验步骤：

正式实验前进行预实验，确定使90～100％的小鼠翻正反射不消失的戊巴比妥钠的最大阈下剂量(28mg/kg)。***组动物于药后0.5h，其他给药组动物于药后50min，分别腹腔注射0.3％戊巴比妥钠，观察30min内动物睡眠情况。每一轮次每组测试2只小鼠。

观察指标：以出现翻正反射消失1min为睡眠判断标准(将动物从俯卧置于仰卧状态，动物不能恢复正常***，时间大于1min为翻正反射消失)。记录各实验组睡眠出现动物数。

3.2.5结果：

图7给出了实验结果，给予式I化合物后小鼠出现翻正反射消失的只数与溶媒对照组一致，表明式I化合物没有催眠副作用。

3.2.6结论：

式I化合物是一种新型的5-HT，NE，DA三重再摄取抑制剂，其具有明显的镇痛作用，且药效类似于普瑞巴林，但是并无镇静嗜睡副作用。

Claims

1.一种O-去甲基文拉法辛苯醚化合物，如式Ⅰ所示：

2.权利要求1所述式Ⅰ化合物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

步骤1：加入O-去甲文拉法辛、30％甲醇钾溶液，然后加入过量甲醇，水浴85°，回流反应60min后减压除去溶剂，甲苯带水三次得到类白色固体粉末；

步骤2：向步骤1中得到的白色固体粉末中，加入碘苯、碘化亚铜以及过量的DMF，氮气保护下油浴加热外温152℃反应72h，减压蒸馏除去大部分溶剂DMF，以二氯甲烷DCM萃取后，以2％盐酸洗涤，有机相无水硫酸钠干燥后，减压去除溶剂，得深棕色粘稠油状物；

步骤3：以柱层析进行纯化，以乙酸乙酯-二氯甲烷-正庚烷质量比1：1：1为洗脱液，将小极性杂质首先洗脱；然后换用四氢呋喃作为淋洗液，将式Ⅰ化合物洗脱，减压抽滤，去除四氢呋喃后得油状物；以10％氢氧化钾水溶液搅拌过夜处理，有棕色固体析出，过滤滤饼再以四氢呋喃溶解，过滤除去不溶物后，滤液减压除去四氢呋喃，得黄色固体湿重；再以新乙酸乙酯热溶洗30min，冷至室温后冰水浴中保温结晶2h，抽滤，干燥后，即得。

3.权利要求1所述的化合物制备用于治疗疼痛的药物的用途。

4.一种药物组合物，其特征在于含有治疗有效量的式Ⅰ化合物和药用辅料。

5.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于所述药物组合物制成口服制剂、注射剂。

6.根据权利要求5的所述的药物组合物，其特征在于所述口服制剂为片剂、胶囊或口服乳剂。

7.根据权利要求5的所述的药物组合物，其特征在于所述注射剂为静脉乳剂、脂质体或脂质纳米粒。