CN109730948A - 从牡丹鲜花中提取牡丹鲜花细胞水的方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于植物提取领域，具体公开了一种从牡丹鲜花中提取牡丹鲜花细胞水的方法。本发明的方法包括以下的步骤：（1）采摘牡丹鲜花；（2）压榨；（3）超声旋转蒸发；（4）酶解；（5）合并细胞水汁液。本发明以新鲜的刚采摘的牡丹花瓣为原料，较大限度的保留了牡丹花瓣中的香料成分、热敏物质以及其它的活性成分，在提取细胞水的过程中天然防腐处理，延长了其保质期和纯天然活性；并进行了脱敏处理，避免了部分人群出现花粉过敏的状况。同时，也克服了采用有机溶剂提取所造成的有害物质的残留问题以及有机溶剂的处理与回收问题，减少了环境污染，降低了能耗。
Description
技术领域
本发明属于植物提取领域，具体公开了一种从牡丹鲜花中提取牡 丹鲜花细胞水的方法。
背景技术
CN106562908A披露了一种芳香植物玫瑰花细胞水提取方法，该 方法按下述步骤进行：第一步，将玫瑰花放置在旋转蒸发仪中，在温 度为58℃至62℃、真空度为0.08Mpa至0.10Mpa下旋转干馏25min至 35min，干馏中，玫瑰花细胞液析出并形成蒸汽，抽取蒸汽经冷凝后 得到冷凝液；第二步，对干馏后的玫瑰花在温度为58℃至62℃、真 空度为0.08Mpa至0.10Mpa下继续在旋转蒸发仪中旋转干馏55min至 65min，干馏中，玫瑰花细胞液继续析出并形成蒸汽，抽取蒸汽经冷 凝后得到冷凝液；第三步，重复第二步操作2次至3次，然后将每次冷 凝液合并后得到芳香植物玫瑰花细胞水。
CN106819693A一种植物细胞水的制备方法，所述方法包括如下
步骤：
清洗：将水果和/或蔬菜清洗干净；
榨汁：将洗净的水果和/或蔬菜压榨并过滤，获得初步提取液；
低温分离：将所述初步提取液引入冷冻机内，所述冷冻机的设定 温度介于-1℃到-10℃之间；静置，直至由所述初步提取液静置分离 后形成的，由汁液层和细胞液层组成的冻结液完全凝固；
采集：采集所述冻结液中，由位于上层的细胞液层凝固形成的细 胞液冰；
灌装：将所述细胞液冰在室温下融化后得到的胞液水进行灌装； 及
灭菌：将灌装后的胞液水放入超高压冷杀菌装备中进行灭菌，得 到植物细胞水成品。
以上的方法中，若按CN106562908A中的方法来处理牡丹，旋转 蒸干的温度最高达到了62℃，其温度较高，可能会破坏牡丹中热敏性 活性成分；而且仅仅通过上述的旋转蒸发，可能无法将牡丹中的细胞 水完全提取出来。由于牡丹和水果或蔬菜中的水分含量差别较大，而 若采用CN106819693A披露的方法处理，其提取率将大大降低，提取 效率也会比较低。
因此，需要发明一种适于牡丹鲜花细胞水提取的方法，通过该方 法能较彻底的将牡丹中的细胞水提取出来。
发明内容
为了解决上述的技术问题，本发明提供了一种采用超声低温旋蒸 法和酶法相结合制备牡丹鲜花细胞水的方法。
本发明是通过下述的技术方案来实现的：
从牡丹鲜花中提取牡丹鲜花细胞水的方法，包括下述的步骤：
(1)采摘牡丹鲜花：选择在5月中下旬的上午8～10点，采摘牡 丹初开两天的牡丹鲜花，保留牡丹花蕊；
(2)压榨：将(1)中采摘的牡丹鲜花冲洗干净，晾干，并压榨， 得汁液和渣的混合物，过滤，获得牡丹汁液与牡丹花渣Ⅰ；
(3)将步骤(2)中的牡丹花渣经过低温超声旋转蒸发仪旋蒸， 于20～40℃、超声频率为20～30kHz、真空度5-100Pa，旋转转速15～ 70r/min，旋转干馏60～100min，将干馏牡丹花渣Ⅰ中的细胞液析出 的蒸汽抽取，并冷凝，获得冷凝液Ⅰ，保留剩下的牡丹花渣Ⅱ备用；
(4)在牡丹花渣Ⅱ中加入其重量6～10倍的水，再加入纤维素酶 和果胶酶，于45～50℃下酶解30～40min，纤维素酶的用量为牡丹花 渣Ⅱ重量的2～3％，果胶酶的用量为牡丹花渣Ⅱ重量的1～2％；灭酶 后将酶解液旋转蒸发，旋蒸的条件是：40～50℃、真空度为0.05～ 0.07Mpa下旋转干馏15～20min，将酶解液中的细胞液析出的蒸汽抽 取，并冷凝，获得冷凝液Ⅱ，保留酶解液中的残留成分；
(5)将牡丹花汁液、冷凝液Ⅰ、冷凝液Ⅱ合并，获得牡丹鲜花细 胞水。
优选的，(3)中：于35℃提取1.5h；超声频率为25kHz，真空 度50Pa，旋转转速30r/min。
(4)中：在牡丹花渣Ⅱ中加入其重量6～10倍的水，再加入纤维 素酶和果胶酶，于45℃下酶解35min，纤维素酶的用量为牡丹花渣Ⅱ 重量的2.5％，果胶酶的用量为牡丹花渣Ⅱ重量的1.5％；灭酶后将酶 解液旋转蒸发，旋蒸的条件是：45℃、真空度为0.06Mpa下旋转干馏 18min，将酶解液中的细胞液析出的蒸汽抽取，并冷凝，获得冷凝液 Ⅱ，保留酶解液中的残留成分。
作为本发明的一种改进，从牡丹鲜花中提取牡丹鲜花细胞水的方 法，包括下述的步骤：
(1)采摘牡丹鲜花：选择在5月中下旬的上午8～10点，采摘牡 丹初开两天的牡丹鲜花，保留牡丹花蕊；
(2)压榨：将(1)中采摘的牡丹鲜花冲洗干净，晾干，并压榨， 得汁液和渣的混合物，过滤，获得牡丹汁液与牡丹花渣Ⅰ；
(3)将步骤(2)中的牡丹花渣、芍药和辅料经过超声旋转蒸发 仪旋蒸，于20～40℃、超声频率为20～30kHz、真空度5-100Pa，旋 转转速15～70r/min，旋转干馏60～100min，将干馏牡丹花渣Ⅰ中的 细胞液析出的蒸汽抽取，并冷凝，获得冷凝液Ⅰ，保留剩下的牡丹花渣Ⅱ备用；
辅料为牡丹根、银杏叶、迷迭香花、肉桂的至少一种，辅料占牡 丹花瓣重的0.5-2％，芍药占牡丹花瓣重的0.5-2％；
(4)在牡丹花渣Ⅱ中加入其重量6～10倍的水，再加入纤维素酶 和果胶酶，于45～50℃下酶解30～40min，纤维素酶的用量为牡丹花 渣Ⅱ重量的2～3％，果胶酶的用量为牡丹花渣Ⅱ重量的1～2％；灭酶 后将酶解液旋转蒸发，旋蒸的条件是：40～50℃、真空度为0.05～ 0.07Mpa下旋转干馏15～20min，将酶解液中的细胞液析出的蒸汽抽 取，并冷凝，获得冷凝液Ⅱ，保留酶解液中的残留成分；
(5)将牡丹花汁液、冷凝液Ⅰ、冷凝液Ⅱ合并，获得牡丹鲜花细 胞水。
优选的，上述的从牡丹鲜花中提取牡丹鲜花细胞水的方法，包括 下述的步骤：
(1)采摘牡丹鲜花：选择在5月中下旬的上午8～10点，采摘牡 丹初开两天的牡丹鲜花，保留牡丹花蕊；
(2)压榨：将(1)中采摘的牡丹鲜花冲洗干净，晾干，并压榨， 得汁液和渣的混合物，过滤，获得牡丹汁液与牡丹花渣Ⅰ；
(3)将步骤(2)中的牡丹花渣、芍药和辅料经过超声旋转蒸发 仪旋蒸，于40℃、超声频率为25kHz、真空度5-100Pa，旋转转速40 r/min，旋转干馏90min，将干馏牡丹花渣Ⅰ中的细胞液析出的蒸汽抽 取，并冷凝，获得冷凝液Ⅰ，保留剩下的牡丹花渣Ⅱ备用；
辅料为牡丹根、银杏叶、迷迭香花、肉桂的至少一种，辅料占牡 丹花瓣重的1.5％，芍药占牡丹花瓣重的1％；
(4)在牡丹花渣Ⅱ中加入其重量8倍的水，再加入纤维素酶和果 胶酶，于50℃下酶解35min，纤维素酶的用量为牡丹花渣Ⅱ重量的 2.5％，果胶酶的用量为牡丹花渣Ⅱ重量的1.5％；灭酶后将酶解液旋 转蒸发，旋蒸的条件是：50℃、真空度为0.05Mpa下旋转干馏18min， 将酶解液中的细胞液析出的蒸汽抽取，并冷凝，获得冷凝液Ⅱ，保留 酶解液中的残留成分；
(5)将牡丹花汁液、冷凝液Ⅰ、冷凝液Ⅱ合并，获得牡丹鲜花细 胞水。
作为本发明的另一种改进，从牡丹鲜花中提取牡丹鲜花细胞水的 方法，包括下述的步骤：
(1)采摘牡丹鲜花：选择在5月中下旬的上午8～10点，采摘牡 丹初开两天的牡丹鲜花，保留牡丹花蕊；
(2)压榨：将(1)中采摘的牡丹鲜花冲洗干净，晾干，并压榨， 得汁液和渣的混合物，过滤，获得牡丹汁液与牡丹花渣Ⅰ；
(3)将步骤(2)中的牡丹花渣、牡丹根、芍药和辅料经过超声 旋转蒸发仪旋蒸，于20～40℃、超声频率为20～30kHz、真空度 5-100Pa，旋转转速15～70r/min，旋转干馏60～100min，将干馏牡 丹花渣Ⅰ中的细胞液析出的蒸汽抽取，并冷凝，获得冷凝液Ⅰ，保留 剩下的牡丹花渣Ⅱ备用；
辅料为洋甘菊、薰衣草、金缕梅的至少一种，辅料占牡丹花瓣重 的0.5-2％，芍药占牡丹花瓣重的0.5-2％；牡丹根的总量占牡丹花瓣重 的0.5-2％；
(4)在牡丹花渣Ⅱ中加入其重量6～10倍的水，再加入纤维素酶 和果胶酶，于45～50℃下酶解30～40min，纤维素酶的用量为牡丹花 渣Ⅱ重量的2～3％，果胶酶的用量为牡丹花渣Ⅱ重量的1～2％；灭酶 后将酶解液旋转蒸发，旋蒸的条件是：40～50℃、真空度为0.05～ 0.07Mpa下旋转干馏15～20min，将酶解液中的细胞液析出的蒸汽抽 取，并冷凝，获得冷凝液Ⅱ，保留酶解液中的残留成分；
(5)将牡丹花汁液、冷凝液Ⅰ、冷凝液Ⅱ合并，获得牡丹鲜花细 胞水。
优选的，上述的从牡丹鲜花中提取牡丹鲜花细胞水的方法，包括 下述的步骤：
(1)采摘牡丹鲜花：选择在5月中下旬的上午8～10点，采摘牡 丹初开两天的牡丹鲜花，保留牡丹花蕊；
(2)压榨：将(1)中采摘的牡丹鲜花冲洗干净，晾干，并压榨， 得汁液和渣的混合物，过滤，获得牡丹汁液与牡丹花渣Ⅰ；
(3)将步骤(2)中的牡丹花渣、牡丹根、芍药和辅料经过超声 旋转蒸发仪旋蒸，于55℃、超声频率为25kHz、真空度80Pa，旋转 转速40r/min，旋转干馏90min，将干馏牡丹花渣Ⅰ中的细胞液析出 的蒸汽抽取，并冷凝，获得冷凝液Ⅰ，保留剩下的牡丹花渣Ⅱ备用；
辅料为洋甘菊、薰衣草、金缕梅的至少一种，辅料占牡丹花瓣重 的1.5％，芍药占牡丹花瓣重的1％；牡丹根的总量占牡丹花瓣重的 1.5％；
(4)在牡丹花渣Ⅱ中加入其重量8倍的水，再加入纤维素酶和果 胶酶，于50℃下酶解35min，纤维素酶的用量为牡丹花渣Ⅱ重量的 2.5％，果胶酶的用量为牡丹花渣Ⅱ重量的1.5％；灭酶后将酶解液旋 转蒸发，旋蒸的条件是：50℃、真空度为0.06Mpa下旋转干馏18min， 将酶解液中的细胞液析出的蒸汽抽取，并冷凝，获得冷凝液Ⅱ，保留 酶解液中的残留成分；
(5)将牡丹花汁液、冷凝液Ⅰ、冷凝液Ⅱ合并，获得牡丹鲜花细 胞水。
上述的从牡丹鲜花中提取牡丹鲜花细胞水的方法制备获得的牡丹 鲜花细胞水在护肤品中的应用，也是本发明所要保护的范围。
本发明的有益效果在于，采用本发明的方法，以以新鲜的刚采 摘的牡丹花瓣为原料，较大限度的保留了牡丹花瓣中的香料成分、热 敏物质以及其它的活性成分，在提取细胞水的过程中天然防腐处理， 延长了其保质期和纯天然活性；并进行了脱敏处理，避免了部分人群 出现花粉过敏的状况。同时，也克服了采用有机溶剂提取所造成的有 害物质的残留问题以及有机溶剂的处理与回收问题，减少了环境污 染，降低了能耗。
附图说明
附图1为实施例1中产品HSGCMS谱图；
附图2为实施例1中的产品扫描43(1.484分)未知图谱基于顶 点；
附图3为实施例1中的产品扫描2572(16.880分)未知图谱基 于顶点；
附图4为实施例1中的产品扫描2627(17.202分)未知图谱基 于顶点。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作更进一步的说明，以便本领域的 技术人员更了解本发明，但并不因此限制本发明。
实施例1
从牡丹鲜花中提取牡丹鲜花细胞水的方法，包括下述的步骤：
(1)采摘牡丹鲜花：选择在5月中下旬的上午8～10点，采摘牡 丹初开两天的牡丹鲜花，保留牡丹花蕊；
(2)压榨：将(1)中采摘的牡丹鲜花冲洗干净，晾干，并压榨， 得汁液和渣的混合物，过滤，获得牡丹汁液与牡丹花渣Ⅰ；
(3)将步骤(2)中的牡丹花渣经过低温超声旋转蒸发仪旋蒸， 于35℃、超声频率为25kHz、真空度50Pa，旋转转速30r/min，旋转 干馏90min，将干馏牡丹花渣Ⅰ中的细胞液析出的蒸汽抽取，并冷凝， 获得冷凝液Ⅰ，保留剩下的牡丹花渣Ⅱ备用；
(4)在牡丹花渣Ⅱ中加入其重量8倍的水，再加入纤维素酶和果 胶酶，于45℃下酶解35min，纤维素酶的用量为牡丹花渣Ⅱ重量的 2.5％，果胶酶的用量为牡丹花渣Ⅱ重量的1.5％；灭酶后将酶解液旋 转蒸发，旋蒸的条件是：50℃、真空度为0.06Mpa下旋转干馏20min， 将酶解液中的细胞液析出的蒸汽抽取，并冷凝，获得冷凝液Ⅱ，保留 酶解液中的残留成分；
(5)将牡丹花汁液、冷凝液Ⅰ、冷凝液Ⅱ合并，获得牡丹鲜花细 胞水。
实施例2
从牡丹鲜花中提取牡丹鲜花细胞水的方法，包括下述的步骤：
(1)采摘牡丹鲜花：选择在5月中下旬的上午8～10点，采摘牡 丹初开两天的牡丹鲜花，保留牡丹花蕊；
(2)压榨：将(1)中采摘的牡丹鲜花冲洗干净，晾干，并压榨， 得汁液和渣的混合物，过滤，获得牡丹汁液与牡丹花渣Ⅰ；
(3)将步骤(2)中的牡丹花渣经过低温超声旋转蒸发仪旋蒸， 于37℃、超声频率为25kHz、真空度40Pa，旋转转速25r/min，旋转 干馏80min，将干馏牡丹花渣Ⅰ中的细胞液析出的蒸汽抽取，并冷凝， 获得冷凝液Ⅰ，保留剩下的牡丹花渣Ⅱ备用；
(4)在牡丹花渣Ⅱ中加入其重量8倍的水，再加入纤维素酶和果 胶酶，于45℃下酶解30min，纤维素酶的用量为牡丹花渣Ⅱ重量的 2.5％，果胶酶的用量为牡丹花渣Ⅱ重量的1.5％；灭酶后将酶解液旋 转蒸发，旋蒸的条件是：48℃、真空度为0.06Mpa下旋转干馏20min， 将酶解液中的细胞液析出的蒸汽抽取，并冷凝，获得冷凝液Ⅱ，保留 酶解液中的残留成分；
(5)将牡丹花汁液、冷凝液Ⅰ、冷凝液Ⅱ合并，获得牡丹鲜花细 胞水。
实施例3
从牡丹鲜花中提取牡丹鲜花细胞水的方法，包括下述的步骤：
(1)采摘牡丹鲜花：选择在5月中下旬的上午8～10点，采摘牡 丹初开两天的牡丹鲜花，保留牡丹花蕊；
(2)压榨：将(1)中采摘的牡丹鲜花冲洗干净，晾干，并压榨， 得汁液和渣的混合物，过滤，获得牡丹汁液与牡丹花渣Ⅰ；
(3)将步骤(2)中的牡丹花渣经过低温超声旋转蒸发仪旋蒸， 于40℃、超声频率为25kHz、真空度40Pa，旋转转速25r/min，旋转 干馏80min，将干馏牡丹花渣Ⅰ中的细胞液析出的蒸汽抽取，并冷凝， 获得冷凝液Ⅰ，保留剩下的牡丹花渣Ⅱ备用；
(4)在牡丹花渣Ⅱ中加入其重量6倍的水，再加入纤维素酶和果 胶酶，于45℃下酶解30min，纤维素酶的用量为牡丹花渣Ⅱ重量的 2％，果胶酶的用量为牡丹花渣Ⅱ重量的1％；灭酶后将酶解液旋转蒸 发，旋蒸的条件是：45℃、真空度为0.06Mpa下旋转干馏20min，将 酶解液中的细胞液析出的蒸汽抽取，并冷凝，获得冷凝液Ⅱ，保留酶 解液中的残留成分；
(5)将牡丹花汁液、冷凝液Ⅰ、冷凝液Ⅱ合并，获得牡丹鲜花细 胞水。
实施例4
从牡丹鲜花中提取牡丹鲜花细胞水的方法，包括下述的步骤：
(1)采摘牡丹鲜花：选择在5月中下旬的上午8～10点，采摘牡 丹初开两天的牡丹鲜花，保留牡丹花蕊；
(2)压榨：将(1)中采摘的牡丹鲜花冲洗干净，晾干，并压榨， 得汁液和渣的混合物，过滤，获得牡丹汁液与牡丹花渣Ⅰ；
(3)将步骤(2)中的牡丹花渣、芍药和辅料经过超声旋转蒸发 仪旋蒸，于30℃、超声频率为25kHz、真空度5-100Pa，旋转转速50 r/min，旋转干馏80min，将干馏牡丹花渣Ⅰ中的细胞液析出的蒸汽抽 取，并冷凝，获得冷凝液Ⅰ，保留剩下的牡丹花渣Ⅱ备用；
辅料为牡丹根、银杏叶、迷迭香花、肉桂的至少一种，辅料占牡 丹花瓣重的1.5％，芍药占牡丹花瓣重的1.5％；
(4)在牡丹花渣Ⅱ中加入其重量8倍的水，再加入纤维素酶和果 胶酶，于45℃下酶解35min，纤维素酶的用量为牡丹花渣Ⅱ重量的 2.5％，果胶酶的用量为牡丹花渣Ⅱ重量的1.5％；灭酶后将酶解液旋 转蒸发，旋蒸的条件是：50℃、真空度为0.06Mpa下旋转干馏18min， 将酶解液中的细胞液析出的蒸汽抽取，并冷凝，获得冷凝液Ⅱ，保留 酶解液中的残留成分；
(5)将牡丹花汁液、冷凝液Ⅰ、冷凝液Ⅱ合并，获得牡丹鲜花细 胞水。
实施例5
从牡丹鲜花中提取牡丹鲜花细胞水的方法，包括下述的步骤：
(1)采摘牡丹鲜花：选择在5月中下旬的上午8～10点，采摘牡 丹初开两天的牡丹鲜花，保留牡丹花蕊；
(2)压榨：将(1)中采摘的牡丹鲜花冲洗干净，晾干，并压榨， 得汁液和渣的混合物，过滤，获得牡丹汁液与牡丹花渣Ⅰ；
(3)将步骤(2)中的牡丹花渣、芍药和辅料经过超声旋转蒸发 仪旋蒸，于35℃、超声频率为25kHz、真空度80Pa，旋转转速50r/min， 旋转干馏90min，将干馏牡丹花渣Ⅰ中的细胞液析出的蒸汽抽取，并 冷凝，获得冷凝液Ⅰ，保留剩下的牡丹花渣Ⅱ备用；
辅料为牡丹根、银杏叶、迷迭香花、肉桂的至少一种，辅料占牡 丹花瓣重的1.5％，芍药占牡丹花瓣重的1.5％；
(4)在牡丹花渣Ⅱ中加入其重量8倍的水，再加入纤维素酶和果 胶酶，于45℃下酶解35min，纤维素酶的用量为牡丹花渣Ⅱ重量的 2％，果胶酶的用量为牡丹花渣Ⅱ重量的1％；灭酶后将酶解液旋转蒸 发，旋蒸的条件是：45℃、真空度为0.06Mpa下旋转干馏18min，将 酶解液中的细胞液析出的蒸汽抽取，并冷凝，获得冷凝液Ⅱ，保留酶 解液中的残留成分；
(5)将牡丹花汁液、冷凝液Ⅰ、冷凝液Ⅱ合并，获得牡丹鲜花细 胞水。
实施例6
从牡丹鲜花中提取牡丹鲜花细胞水的方法，包括下述的步骤：
(1)采摘牡丹鲜花：选择在5月中下旬的上午8～10点，采摘牡 丹初开两天的牡丹鲜花，保留牡丹花蕊；
(2)压榨：将(1)中采摘的牡丹鲜花冲洗干净，晾干，并压榨， 得汁液和渣的混合物，过滤，获得牡丹汁液与牡丹花渣Ⅰ；
(3)将步骤(2)中的牡丹花渣、牡丹根、芍药和辅料经过超声 旋转蒸发仪旋蒸，于45℃、超声频率为25kHz、真空度80Pa，旋转 转速40r/min，旋转干馏90min，将干馏牡丹花渣Ⅰ中的细胞液析出 的蒸汽抽取，并冷凝，获得冷凝液Ⅰ，保留剩下的牡丹花渣Ⅱ备用；
辅料为洋甘菊、薰衣草、金缕梅的至少一种，辅料占牡丹花瓣重 的1.5％，芍药占牡丹花瓣重的1％；牡丹根的总量占牡丹花瓣重的 1.5％；
(4)在牡丹花渣Ⅱ中加入其重量8倍的水，再加入纤维素酶和果 胶酶，于45℃下酶解30min，纤维素酶的用量为牡丹花渣Ⅱ重量的 2.5％，果胶酶的用量为牡丹花渣Ⅱ重量的1.5％；灭酶后将酶解液旋 转蒸发，旋蒸的条件是：50℃、真空度为0.06Mpa下旋转干馏15min， 将酶解液中的细胞液析出的蒸汽抽取，并冷凝，获得冷凝液Ⅱ，保留 酶解液中的残留成分；
(5)将牡丹花汁液、冷凝液Ⅰ、冷凝液Ⅱ合并，获得牡丹鲜花细 胞水。
在获得本发明的方案之前，本发明人还做过如下的实验：
对比例1：与实施例1的区别在于，未采用酶解的方法对牡丹花 渣进一步处理；
对比例2：与实施例1的区别在于，仅加入纤维素酶，未加入果 胶酶来酶解；
对比例3：与实施例1的区别在于，仅加入果胶酶，未加入纤维 素酶来酶解；
对比例4：与实施例1的区别在于，仅采用酶解的方法对牡丹花 渣Ⅰ处理，未采用低温超声旋蒸的方法处理；
对比例1
从牡丹鲜花中提取牡丹鲜花细胞水的方法，包括下述的步骤：
(1)采摘牡丹鲜花：选择在5月中下旬的上午8～10点，采摘牡 丹初开两天的牡丹鲜花，保留牡丹花蕊；
(2)压榨：将(1)中采摘的牡丹鲜花冲洗干净，晾干，并压榨， 得汁液和渣的混合物，过滤，获得牡丹汁液与牡丹花渣Ⅰ；
(3)将步骤(2)中的牡丹花渣Ⅰ经过低温超声旋转蒸发仪旋蒸， 于35℃、超声频率为25kHz、真空度50Pa，旋转转速30r/min，旋转 干馏90min，将干馏牡丹花渣Ⅰ中的细胞液析出的蒸汽抽取，并冷凝， 获得冷凝液Ⅰ，保留剩下的牡丹花渣Ⅱ备用；
(4)将牡丹花汁液、冷凝液Ⅰ合并，获得牡丹鲜花细胞水。
对比例2
从牡丹鲜花中提取牡丹鲜花细胞水的方法，包括下述的步骤：
(1)采摘牡丹鲜花：选择在5月中下旬的上午8～10点，采摘牡 丹初开两天的牡丹鲜花，保留牡丹花蕊；
(2)压榨：将(1)中采摘的牡丹鲜花冲洗干净，晾干，并压榨， 得汁液和渣的混合物，过滤，获得牡丹汁液与牡丹花渣Ⅰ；
(3)将步骤(2)中的牡丹花渣经过低温超声旋转蒸发仪旋蒸， 于35℃、超声频率为25kHz、真空度50Pa，旋转转速30r/min，旋转 干馏90min，将干馏牡丹花渣Ⅰ中的细胞液析出的蒸汽抽取，并冷凝， 获得冷凝液Ⅰ，保留剩下的牡丹花渣Ⅱ备用；
(4)在牡丹花渣Ⅱ中加入其重量8倍的水，再加入纤维素酶，于 45℃下酶解35min，纤维素酶的用量为牡丹花渣Ⅱ重量的4％，将酶 解液旋转蒸发，旋蒸的条件是：50℃、真空度为0.06Mpa下旋转干馏 20min，将酶解液中的细胞液析出的蒸汽抽取，并冷凝，获得冷凝液 Ⅱ，保留酶解液中的残留成分；
(5)将牡丹花汁液、冷凝液Ⅰ、冷凝液Ⅱ合并，获得牡丹鲜花细 胞水。
对比例3
从牡丹鲜花中提取牡丹鲜花细胞水的方法，包括下述的步骤：
(1)采摘牡丹鲜花：选择在5月中下旬的上午8～10点，采摘牡 丹初开两天的牡丹鲜花，保留牡丹花蕊；
(2)压榨：将(1)中采摘的牡丹鲜花冲洗干净，晾干，并压榨， 得汁液和渣的混合物，过滤，获得牡丹汁液与牡丹花渣Ⅰ；
(3)将步骤(2)中的牡丹花渣经过低温超声旋转蒸发仪旋蒸， 于35℃、超声频率为25kHz、真空度50Pa，旋转转速30r/min，旋转 干馏90min，将干馏牡丹花渣Ⅰ中的细胞液析出的蒸汽抽取，并冷凝， 获得冷凝液Ⅰ，保留剩下的牡丹花渣Ⅱ备用；
(4)在牡丹花渣Ⅱ中加入其重量8倍的水，再加入果胶酶，于 45℃下酶解35min，果胶酶的用量为牡丹花渣Ⅱ重量的4％；将酶解 液旋转蒸发，旋蒸的条件是：50℃、真空度为0.06Mpa下旋转干馏 20min，将酶解液中的细胞液析出的蒸汽抽取，并冷凝，获得冷凝液Ⅱ，保留酶解液中的残留成分；
(5)将牡丹花汁液、冷凝液Ⅰ、冷凝液Ⅱ合并，获得牡丹鲜花细 胞水。
对比例4
从牡丹鲜花中提取牡丹鲜花细胞水的方法，包括下述的步骤：
(1)采摘牡丹鲜花：选择在5月中下旬的上午8～10点，采摘牡 丹初开两天的牡丹鲜花，保留牡丹花蕊；
(2)压榨：将(1)中采摘的牡丹鲜花冲洗干净，晾干，并压榨， 得汁液和渣的混合物，过滤，获得牡丹汁液与牡丹花渣Ⅰ；
(3)在牡丹花渣Ⅰ中加入其重量8倍的水，再加入纤维素酶和果 胶酶，于45℃下酶解35min，纤维素酶的用量为牡丹花渣Ⅰ重量的 2.5％，果胶酶的用量为牡丹花渣Ⅱ重量的1.5％；灭酶后将酶解液旋 转蒸发，旋蒸的条件是：50℃、真空度为0.06Mpa下旋转干馏20min， 将酶解液中的细胞液析出的蒸汽抽取，并冷凝，获得冷凝液Ⅰ，保留 酶解液中的残留成分；
(5)将牡丹花汁液、冷凝液Ⅰ合并，获得牡丹鲜花细胞水。
实施例7
为证明本发明的牡丹鲜花细胞水能有效避免了部分人群出现花粉 过敏的状况。针对实施例1、2、3所得的牡丹鲜花细胞水做了对比实 验，对比实验中为脱敏的牡丹鲜花细胞水。通过测试产品和原花青素、 儿茶素对透明质酸酶体外抑制试验对比来评价抗过敏活性。
实验方法：
取0.1mL0.25mmol/LCaCl2溶液和0.5mL透明质酸酶液37℃保温培 养20min；加入处理后的样品液0.5mL，继续37℃保温培养20min； 加入0.5mL透明质酸钠液37℃保温30min，常温放置5min；加入 0.1mL0.4mol/LNaOH溶液和0.5mL乙酰丙酮溶液，置于沸水浴中加热 15min后立即用冰水进行冷却5min；加入埃尔利希试剂1.0mL并用 3.0mL无水乙醇进行稀释，放置20min显色，用分光光度计测定其吸 光度值。抗过敏活性计算公式：
透明质酸酶抑制率＝[(A-B)-(C-D)]/(A-B)×100％
式中：
A——对照溶液ABS值(用醋酸缓冲溶液代替样品溶液)
B——对照空白溶液ABS值(用醋酸缓冲溶液代替样品溶液及酶 液)
C——试样溶液ABS值
D——试样空白溶液ABS值(用醋酸缓冲溶液代替酶液)
实验时先对A组试样进行450～700nm范围的波长扫描，以确定最 大吸收波长，然后以去离子水作为参比，在该最大吸收波长处进行样 品的ABS值测定。
实验结果表明，实施例1样品有较强的抗过敏活性。
表1样品对透明质酸酶抑制率
| 样品 | 透明质酸酶抑制率％ |
| 实施例1样品 | 78 |
| 实施例2样品 | 82 |
| 实施例3样品 | 80 |
| 对照实验样品 | 25 |
| 原花青素 | 97 |
| 儿茶素 | 93 |
注：各样品的参考浓度对1.5mg/ml，各数值为三次测定平均值。
实施例8
本发明人对实施例1-6中的牡丹鲜花细胞水的外观品质进行了考 察，其结果如下：
表2 实施例及对比例的产品外观特征表
备注：耐热：(40±1)℃保持24h,恢复至室温后，与试验前有无明显差异； 耐寒：(5±1)℃保持24h,恢复至室温后，与试验前有无明显差异。
通过以上的比较可以看出，对比例1、4的产品与实施例1的产 品相差无几，它们的区别在于，对比例1、4中省略了其中的某些步 骤，会导致牡丹鲜花细胞水不能彻底的完全的被提取出来；对比例2、 3中在酶的选择上与实例1有区别，减少了其中的一种酶的用量，其 结果是对于产品的透明度会略微产生影响，这是因为果胶酶与纤维素 酶共同作用于牡丹细胞壁，可使其中的水分更好的溶出，并且减少未 分解的纤维或减少沉淀的产生，使产品外观更加透明。
将实施例1-6的产品放置3个月、6个月后，产品的外观特征基 本上无明显的变化，本发明人取实施例1-6中的产品，放置具体如下：
表3 实施例及对比例的产品外观特征表(放置3个月后)
| 外观 | 香气 | 耐热 | 耐寒 | |
| 实施例1 | 澄清透明无色液体 | 牡丹固有的花香气味 | 无 | 无 |
| 实施例2 | 澄清透明无色液体 | 牡丹固有的花香气味 | 无 | 无 |
| 实施例3 | 澄清透明无色液体 | 牡丹固有的花香气味 | 无 | 无 |
| 实施例4 | 澄清透明无色液体 | 牡丹固有的花香气味 | 无 | 无 |
| 实施例5 | 澄清透明无色液体 | 牡丹固有的花香气味 | 无 | 无 |
| 实施例6 | 澄清透明无色液体 | 牡丹固有的花香气味 | 无 | 无 |
表4 实施例及对比例的产品外观特征表(放置6个月 后)
以上表格中的数据表明，实施例1-6中的产品，放置3个月、6 个月后，产品的透明度并无明显的变化，并且香气也较浓郁。这说 明产品的稳定性较好，放置几个月后，产品无分层无沉淀。
表5 实施例1中的产品主要成分的含量
通过附图1-4的样品GCMS谱图分析，获知，样品中含有香茅醇、 香叶醇、各种萜类、烃类、脂类、酚类化合物。
本发明中，最大的特点是采用了低温超声旋蒸结合酶解方法，无 论是低温超声还是旋蒸，其最高的温度均未超过50℃，对于牡丹中 的热敏成分具有很好的保护作用，防止其挥发或散失。例如牡丹中的 热敏成分在温度较高时就开始挥发或损失，当温度达到80℃时热敏 成分会挥发或散失得比较严重；
本发明中采用低温超声旋蒸—酶解—旋蒸的方法，较大限度的将 牡丹鲜花细胞水提取出来，相较于传统的仅仅采用旋蒸的方法，本发 明的提取率高。
通过以上的方法对比，可以看出，采用本发明的方法，获得的产 品其透明度高，稳定性强，即便长时间放置，产品仍然较稳定。
Claims (8)
1.从牡丹鲜花中提取牡丹鲜花细胞水的方法，包括下述的步骤：
（1）采摘牡丹鲜花：选择在5月中下旬的上午8～10点，采摘牡丹初开两天的牡丹鲜花，保留牡丹花蕊；
（2）压榨：将（1）中采摘的牡丹鲜花冲洗干净，晾干，并压榨，得汁液和渣的混合物，过滤，获得牡丹汁液与牡丹花渣Ⅰ；
（3）将步骤（2）中的牡丹花渣经过低温超声旋转蒸发仪旋蒸，于20～40℃、超声频率为20～30 kHz、真空度5-100Pa，旋转转速15～70 r/min，旋转干馏60～100min，将干馏牡丹花渣Ⅰ中的细胞液析出的蒸汽抽取，并冷凝，获得冷凝液Ⅰ，保留剩下的牡丹花渣Ⅱ备用；
（4）在牡丹花渣Ⅱ中加入其重量6～10倍的水，再加入纤维素酶和果胶酶，于45～50℃下酶解30～40min，纤维素酶的用量为牡丹花渣Ⅱ重量的2～3%，果胶酶的用量为牡丹花渣Ⅱ重量的1～2%；灭酶后将酶解液旋转蒸发，旋蒸的条件是：40～50℃、真空度为0.05～0.07Mpa下旋转干馏15～20min，将酶解液中的细胞液析出的蒸汽抽取，并冷凝，获得冷凝液Ⅱ，保留酶解液中的残留成分；
（5）将牡丹花汁液、冷凝液Ⅰ、冷凝液Ⅱ合并，获得牡丹鲜花细胞水。
2.根据权利要求1所述牡丹鲜花中提取牡丹鲜花细胞水的方法，其特征在于，（3）中：于35℃提取1.5 h；超声频率为25 kHz，真空度50Pa，旋转转速30 r/min。
3.根据权利要求1所述牡丹鲜花中提取牡丹鲜花细胞水的方法，其特征在于，（4）
中：在牡丹花渣Ⅱ中加入其重量6～10倍的水，再加入纤维素酶和果胶酶，于45℃下酶解35min，纤维素酶的用量为牡丹花渣Ⅱ重量的2.5%，果胶酶的用量为牡丹花渣Ⅱ重量的1.5%；灭酶后将酶解液旋转蒸发，旋蒸的条件是：45℃、真空度为0.06Mpa下旋转干馏18min，将酶解液中的细胞液析出的蒸汽抽取，并冷凝，获得冷凝液Ⅱ，保留酶解液中的残留成分。
4.从牡丹鲜花中提取牡丹鲜花细胞水的方法，包括下述的步骤：
（1）采摘牡丹鲜花：选择在5月中下旬的上午8～10点，采摘牡丹初开两天的牡丹鲜花，保留牡丹花蕊；
（2）压榨：将（1）中采摘的牡丹鲜花冲洗干净，晾干，并压榨，得汁液和渣的混合物，过滤，获得牡丹汁液与牡丹花渣Ⅰ；
（3）将步骤（2）中的牡丹花渣、芍药和辅料经过超声旋转蒸发仪旋蒸，于20～40℃、超声频率为20～30 kHz、真空度5-100Pa，旋转转速15～70 r/min，旋转干馏60～100min，将干馏牡丹花渣Ⅰ中的细胞液析出的蒸汽抽取，并冷凝，获得冷凝液Ⅰ，保留剩下的牡丹花渣Ⅱ备用；
辅料为牡丹根、银杏叶、迷迭香花、肉桂的至少一种，辅料占牡丹花瓣重的0.5-2%，芍药占牡丹花瓣重的0.5-2%；
（4）在牡丹花渣Ⅱ中加入其重量6～10倍的水，再加入纤维素酶和果胶酶，于45～50℃下酶解30～40min，纤维素酶的用量为牡丹花渣Ⅱ重量的2～3%，果胶酶的用量为牡丹花渣Ⅱ重量的1～2%；灭酶后将酶解液旋转蒸发，旋蒸的条件是：40～50℃、真空度为0.05～0.07Mpa下旋转干馏15～20min，将酶解液中的细胞液析出的蒸汽抽取，并冷凝，获得冷凝液Ⅱ，保留酶解液中的残留成分；
（5）将牡丹花汁液、冷凝液Ⅰ、冷凝液Ⅱ合并，获得牡丹鲜花细胞水。
5.如权利要求4所述的从牡丹鲜花中提取牡丹鲜花细胞水的方法，包括下述的步骤：
（1）采摘牡丹鲜花：选择在5月中下旬的上午8～10点，采摘牡丹初开两天的牡丹鲜花，保留牡丹花蕊；
（2）压榨：将（1）中采摘的牡丹鲜花冲洗干净，晾干，并压榨，得汁液和渣的混合物，过滤，获得牡丹汁液与牡丹花渣Ⅰ；
（3）将步骤（2）中的牡丹花渣、芍药和辅料经过超声旋转蒸发仪旋蒸，于40℃、超声频率为25 kHz、真空度5-100Pa，旋转转速40 r/min，旋转干馏90min，将干馏牡丹花渣Ⅰ中的细胞液析出的蒸汽抽取，并冷凝，获得冷凝液Ⅰ，保留剩下的牡丹花渣Ⅱ备用；
辅料为牡丹根、银杏叶、迷迭香花、肉桂的至少一种，辅料占牡丹花瓣重的1.5%，芍药占牡丹花瓣重的1%；
（4）在牡丹花渣Ⅱ中加入其重量8倍的水，再加入纤维素酶和果胶酶，于50℃下酶解35min，纤维素酶的用量为牡丹花渣Ⅱ重量的2.5%，果胶酶的用量为牡丹花渣Ⅱ重量的1.5%；灭酶后将酶解液旋转蒸发，旋蒸的条件是：50℃、真空度为0.05Mpa下旋转干馏18min，将酶解液中的细胞液析出的蒸汽抽取，并冷凝，获得冷凝液Ⅱ，保留酶解液中的残留成分；
（5）将牡丹花汁液、冷凝液Ⅰ、冷凝液Ⅱ合并，获得牡丹鲜花细胞水。
6.从牡丹鲜花中提取牡丹鲜花细胞水的方法，包括下述的步骤：
（1）采摘牡丹鲜花：选择在5月中下旬的上午8～10点，采摘牡丹初开两天的牡丹鲜花，保留牡丹花蕊；
（2）压榨：将（1）中采摘的牡丹鲜花冲洗干净，晾干，并压榨，得汁液和渣的混合物，过滤，获得牡丹汁液与牡丹花渣Ⅰ；
（3）将步骤（2）中的牡丹花渣、牡丹根、芍药和辅料经过超声旋转蒸发仪旋蒸，于20～40℃、超声频率为20～30 kHz、真空度5-100Pa，旋转转速15～70 r/min，旋转干馏60～100min，将干馏牡丹花渣Ⅰ中的细胞液析出的蒸汽抽取，并冷凝，获得冷凝液Ⅰ，保留剩下的牡丹花渣Ⅱ备用；
辅料为洋甘菊、薰衣草、金缕梅的至少一种，辅料占牡丹花瓣重的0.5-2%，芍药占牡丹花瓣重的0.5-2%；牡丹根的总量占牡丹花瓣重的0.5-2%；
（4）在牡丹花渣Ⅱ中加入其重量6～10倍的水，再加入纤维素酶和果胶酶，于45～50℃下酶解30～40min，纤维素酶的用量为牡丹花渣Ⅱ重量的2～3%，果胶酶的用量为牡丹花渣Ⅱ重量的1～2%；灭酶后将酶解液旋转蒸发，旋蒸的条件是：40～50℃、真空度为0.05～0.07Mpa下旋转干馏15～20min，将酶解液中的细胞液析出的蒸汽抽取，并冷凝，获得冷凝液Ⅱ，保留酶解液中的残留成分；
（5）将牡丹花汁液、冷凝液Ⅰ、冷凝液Ⅱ合并，获得牡丹鲜花细胞水。
7.如权利要求5所述的从牡丹鲜花中提取牡丹鲜花细胞水的方法，包括下述的步骤：
（1）采摘牡丹鲜花：选择在5月中下旬的上午8～10点，采摘牡丹初开两天的牡丹鲜花，保留牡丹花蕊；
（2）压榨：将（1）中采摘的牡丹鲜花冲洗干净，晾干，并压榨，得汁液和渣的混合物，过滤，获得牡丹汁液与牡丹花渣Ⅰ；
（3）将步骤（2）中的牡丹花渣、牡丹根、芍药和辅料经过超声旋转蒸发仪旋蒸，于55℃、超声频率为25 kHz、真空度80Pa，旋转转速40 r/min，旋转干馏90min，将干馏牡丹花渣Ⅰ中的细胞液析出的蒸汽抽取，并冷凝，获得冷凝液Ⅰ，保留剩下的牡丹花渣Ⅱ备用；
辅料为洋甘菊、薰衣草、金缕梅的至少一种，辅料占牡丹花瓣重的1.5%，芍药占牡丹花瓣重的1%；牡丹根的总量占牡丹花瓣重的1.5%；
（4）在牡丹花渣Ⅱ中加入其重量8倍的水，再加入纤维素酶和果胶酶，于50℃下酶解35min，纤维素酶的用量为牡丹花渣Ⅱ重量的2.5%，果胶酶的用量为牡丹花渣Ⅱ重量的1.5%；灭酶后将酶解液旋转蒸发，旋蒸的条件是：50℃、真空度为0.06Mpa下旋转干馏18min，将酶解液中的细胞液析出的蒸汽抽取，并冷凝，获得冷凝液Ⅱ，保留酶解液中的残留成分；
（5）将牡丹花汁液、冷凝液Ⅰ、冷凝液Ⅱ合并，获得牡丹鲜花细胞水。
8.采用权利要求1～6中任一项所述的从牡丹鲜花中提取牡丹鲜花细胞水的方法制备获得的牡丹鲜花细胞水在护肤品中的应用。
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