CN109633028B - 一种特殊医学用途配方食品中香料添加剂的检测方法 - Google Patents

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Abstract

一种特殊医学用途配方食品中香料添加剂的检测方法，通过一种通过式固相萃取技术，选择合适的萃取方法Captive EMR‑Lipid净化柱来净化样品，上样前无需活化和平衡，样液直接加载至SPE柱以吸附FSMA样品脂质中C5及以上的碳链，从而除去脂质、蛋白质干扰物，达到净化11种目标香料添加剂的目的。该小柱能不含溶剂保留滤芯，可实现重力自流，简化了样品前处理步骤，缩短前处理时间，少了样品杂质峰的干扰，从而显著提高方法的可靠性和实用性，通过Captive EMR‑Lipid(增强型脂质去除过滤柱)以固相萃取SPE形式净化，高效液相色谱仪进行检测，具有回收率高，简便、快速等优点，可以满足日常对特医配食品中香料化合物的限量控制的要求。

Description

一种特殊医学用途配方食品中香料添加剂的检测方法
技术领域
本发明涉及食品添加剂检测技术领域，特别涉及一种特殊医学用途配方食品中香料添加剂的检测方法。
背景技术
特殊医学用途配方食品(FSMA，以下简称特医食品)是为了满足进食受限、消化吸收障碍、代谢紊乱或特定疾病状态人群对营养素或膳食的特殊需要，专门加工配制而成的配方食品，其主要成分为蛋白质、脂肪、碳水化合物、维生素等生物活性成分，是国内新兴的食品产业。而特医食品中香兰素等添加剂的使用必不可少的，香兰素等添加剂的安全性在国内外仍然存在一定争议，大剂量的使用香兰素等添加剂对人体有较大的危害，过度摄入可导致头痛、恶心、呕吐、呼吸困难，甚至损伤肝肾等，同时麦芽酚具有弱致突变活性和诱导细胞死亡的毒性作用等等。而制造人工香料香兰素化合物通常用廉价的原料合成，如愈创木酚、丁香酚、或木质素等。在人工合成原料的过程中，所用原料不纯或合成不完全，会有副产物、中间产物等香兰素衍生物生成，包括合成香兰素、乙基香兰素、愈创木酚、香草酸、丁香酚、麦芽酚、乙基麦芽酚、香豆素等化合物。
经调研，食品用香料在特医食品中按生产需要适量使用(除0-6个月的婴幼儿特医食品)，对其所含有的香兰素、乙基香兰素等添加剂的质量控制，需通过制订相关标准，推行良好生产规范。关于标准，国家总局最新发布了食品补充检验方法的公告(2017年第64号)《食品中香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素的测定》，规定了食品中香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素的高效液相色谱-串联质谱的测定方法。在其适用的食品范围中，特别标明了不包括特殊医学用途的婴幼儿配方乳粉。基于此，笔者开展对特医食品中香兰素、乙基香兰素等11种合成香料化合物的检测方法研究。
发明内容
针对特医食品中可能含有的11种香料添加剂的Captive EMR-Lipid/高效液相色谱检测方法研究，本发明提供一种特殊医学用途配方食品中香料添加剂的检测方法。
本发明采用的技术解决方案是：一种特殊医学用途配方食品中香料添加剂的检测方法，其特征在于，所述的方法由以下步骤组成：
(1)标准储备液的配制：分别精密称取各标准品分别置于20mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得到相应标准储备液，浓度为3mg/mL于-18℃冷冻保存；
(2)混合标准中间液的配制：精密移取各标准储备液各1.0mL，置于同一20mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得到混合标准中间液1；精密移取混合标准中间液11.0mL，置于50mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得到混合标准中间液2；
(3)不同浓度的系列标准工作溶液配制：精密移取各标准储备溶液各1.0mL、0.5mL、0.2mL、0.1mL、0.05mL、0.02mL至20mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，配制成不同浓度的系列标准工作溶液,供高效液相色谱仪测定；
(4)样品预处理:准确称取1g样品，加甲醇，涡旋1min，超声10min，10000r/min离心10min，取上清液，供净化用；
(5)测定：取600mg/6mL的Captive EMR-Lipid小柱将样品的上清液全部加到柱管内，上样接收，重力自流，抽干小柱，接收液用氮吹仪35℃吹至溶液不到1mL，用甲醇定容至1mL。过0.45μm滤膜，上机检测；
液相色谱条件如下：
色谱柱为4.6mm×100mm×2.7μm的Agilent Poroshell 120SB-Aq，；DAD检测波长为280nm；进样体积为5μL；流速为1.0ml/min；柱温为30℃；流动相中A相为0.1％磷酸水溶液和B相为甲醇；梯度洗脱条件为74％的A相持续12min，经2min线性变化为20％的A相，持续4min；最后经1min线性变化为初始的74％A相；总检测时间为20min。
所述的标准品为麦芽酚、4-羟基苯甲酸、愈创木酚、乙基麦芽酚、香草酸、香兰素、香豆素、乙基香兰素、甲基香兰素、邻香草醛、丁香酚中的一种。
所述的步骤(1)标准储备液的配制中标准品为麦芽酚、4-羟基苯甲酸、愈创木酚、乙基麦芽酚、香草酸、香兰素、香豆素、乙基香兰素、甲基香兰素中的一种，其称取质量为60mg。
所述的步骤(1)标准储备液的配制中标准品为邻香草醛或丁香酚，其称取质量为40mg。
所述的步骤(3)不同浓度的系列标准工作溶液配制中麦芽酚、4-羟基苯甲酸、愈创木酚、乙基麦芽酚、香草酸、香兰素、香豆素、乙基香兰素、甲基香兰素配制浓度均配置3μg/mL、7.5μg/mL、15μg/mL、30μg/mL、75μg/mL、150μg/mL的系列标准工作溶液，供高效液相色谱仪测定。
所述的步骤(3)不同浓度的系列标准工作溶液配制中邻香草醛、丁香酚均配置4μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、100μg/mL、200μg/mL的系列标准工作溶液，供高效液相色谱仪测定。
所述的步骤(4)样品预处理中固态样品加入的甲醇量为10mL。
所述的步骤(4)样品预处理中液态样品加入的甲醇量为9mL。
本发明的有益效果是：本发明提供了一种特殊医学用途配方食品中香料添加剂的检测方法，通过一种通过式固相萃取技术，选择合适的萃取方法Captive EMR-Lipid净化柱来净化样品，上样前无需活化和平衡，样液直接加载至SPE柱以吸附FSMA样品脂质中C5及以上的碳链，从而除去脂质、蛋白质干扰物，达到净化11种目标香料添加剂的目的。该小柱能不含溶剂保留滤芯，可实现重力自流，简化了样品前处理步骤，缩短前处理时间，少了样品杂质峰的干扰，从而显著提高方法的可靠性和实用性，通过Captive EMR-Lipid(增强型脂质去除过滤柱)以固相萃取SPE形式净化，高效液相色谱仪进行检测，具有回收率高，简便、快速等优点，可以满足日常对特医配食品中香料化合物的限量控制的要求。
附图说明
图1为本发明11种香料化合物标准品溶液色谱图。
图2为本发明不同样品的提取净化结果色谱重叠图。
图3为本发明不同溶剂提取11种香料化合物的回收率结果图。
图4为本发明不同比例的甲醇和不同酸度的甲醇提取11种香料化合物的回收率结果图。
图5为本发明不同萃取时间下11种香料化合物的回收率结果。
图6为氮吹仪水浴温度对11种香料化合物的检测影响。
具体实施方式
为了更清楚地说明本发明内容，用具体实施例说明如下，具体实施例不限定本发明内容范围。
仪器与试剂
Agilent1260LC液相色谱仪(美国安捷伦公司)，配置二极管阵列检测器(DAD)；色谱柱：Poroshell 120SB-Aq，(4.6×100mm，2.7μm)；UV-2700紫外可见分光光度计(岛津企业管理(中国)有限公司)BS-124S十万分之一电子天平(北京赛多利斯仪器***有限公司)；FC204万分之一电子天平(上海精密科学仪器有限公司)；H20-I-2-TOC-T超纯水器(赛多利斯科学仪器有限公司)；AllegraX-30R离心机(贝克曼库尔特有限公司)；MS3旋涡混合器(德国IKA公司)；SPE柱：
Figure BDA0001941057560000041
(500mg/6ml)，
Figure BDA0001941057560000042
(500mg/6ml)，Welchrom P-WAX，Captive EMR-Lipid小柱(600mg/6mL)；SΜPELCO VISIPREP 24TM DL防交叉污染固相萃取装；N-EVAP-112氮吹仪(美国Organomeation公司)。
甲醇：色谱纯；磷酸：优级纯；所用水均为去离子水；
香兰素(Anpel，批号：O0410024，纯度：99.9％)；乙基香兰素(美国Sigma，批号：BCBS7690V，纯度：98.5％)；甲基香兰素(加拿大TRC，批号：6-SCC-123-1，纯度：98％)；乙基麦芽酚(加拿大TRC，批号：1-AJK-132-1，纯度：98％)；麦芽酚(德国Dr，批号：C14734300，纯度：99.8％)；香草酸(Anpel，批号：J6060010，纯度：98.9％)；丁香酚(德国Dr，批号：50120，纯度：99.0％)；愈创木酚(Anpel，批号：L2950010，纯度：98.9％)；香豆素(德国Dr，批号：G145290，纯度：99.7％)；邻香草醛(加拿大TRC，批号：7-SYQ-38-1，纯度：97％)；4-羟基苯甲酸(Anpel，批号：K3380024，纯度：99.9％)；
11种香精香料标准品的化学结构式如下：
香兰素C8H8O3，152.15，121-33-5乙基香兰素C12H16O4，224.24，68527-76-7
Figure BDA0001941057560000051
Figure BDA0001941057560000061
实验方法
标准溶液的配制
(1)标准储备液的配制
分别精密称取各标准品约60mg、邻香草醛和丁香酚约40mg，分别置于20mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得到相应标准储备液，浓度为3mg/mL于-18℃冷冻保存。
(2)混合标准中间液的配制
精密移取各标准储备液各1.0mL，置于同一20mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得到混合标准中间液1；精密移取混合标准中间液11.0mL，置于50mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得到混合标准中间液2。
(3)精密移取各标准储备溶液各1.0mL、0.5mL、0.2mL、0.1mL、0.05mL、0.02mL至20mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，配制成不同浓度的系列标准工作溶液。其中麦芽酚、4-羟基苯甲酸、愈创木酚、乙基麦芽酚、香草酸、香兰素、香豆素、乙基香兰素、甲基香兰素浓度分别为3μg/mL、7.5μg/mL、15μg/mL、30μg/mL、75μg/mL、150μg/mL，邻香草醛、丁香酚浓度分别为4μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、100μg/mL、200μg/mL，供高效液相色谱仪测定。
样品预处理
固体样品前处理步骤
准确称取1g样品，加10mL的甲醇，涡旋1min，超声10min，10000r/min离心10min，取上清液，供净化用。
液体样品前处理步骤
准确称取1g样品，加9mL的甲醇，涡旋1min，超声10min，10000r/min离心10min，取上清液，供净化用。
取Captive EMR-Lipid小柱(600mg/6mL)将上清液全部加到柱管内，上样接收，重力自流，抽干小柱，接收液用氮吹仪35℃吹至溶液不到1mL，用甲醇定容至1mL。过0.45μm滤膜，上机检测。
液相色谱条件
色谱柱：Agilent Poroshell 120SB-Aq，(4.6×100mm，2.7μm)；DAD检测波长：280nm；进样体积：5μL；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；流动相：0.1％磷酸水溶液(A相)和甲醇(B相)；梯度洗脱条件：74％的A相持续12min，经2min线性变化为20％的A相，持续4min；最后经1min线性变化为初始的74％A相；总检测时间为20min。
结果与讨论
标准品的色谱图
如图1所示。
样品的色谱重叠图
取固体样品和液体样品各1g，按样品预处理方法处理，固体样品分别检出麦芽酚、愈创木酚、乙基麦芽酚、香兰素、乙基香兰素、甲基香兰素等。结果如图2所示。
预处理方法的优化
不同类型的SPE柱比较
由于特医食品中蛋白质的含量较高，用水对样品进行浸泡处理时会带入大量的水溶性蛋白质，因此测定前需对样品进行净化处理。本研究根据香兰素、乙基香兰素、甲基香兰素、愈创木酚、香草酸、丁香酚、麦芽酚、乙基麦芽酚、香豆素、4-羟基苯甲酸、邻香草醛这11种香料化合物弱酸性的特质，设计多种用于食品添加剂的固相萃取小柱，对目标化合物进行有效的分离、净化和富集。
选用不同类型小柱，取相同规格的
Figure BDA0001941057560000071
混合强阴离子小柱、Welchrom P-WAX混合弱阴离子小柱、CNW Poly-Sery HLB亲水-亲脂小柱、WelchromC18E小柱和Captive EMR-Lipid小柱(增强型脂质去除过滤柱)来进行测试，通过混标上柱，甲醇10mL洗脱、35℃氮吹至近干，定容1mL，过0.45μm滤膜，上机检测，结果见表1。
表1.11种香料化合物混标通过不同类型的SPE小柱的回收率结果(％)Table1.The results of the recovery of 11flavoring compoundsby different types ofSPE columns(％)
Figure BDA0001941057560000081
Figure BDA0001941057560000091
结果Welchrom C18E柱、Poly-Sery HLB柱和Captive EMR-Lipid小柱混标过柱回收率均为满意。
测试样品加标试验，选择特医食品全营养配方和营养混悬液各1g，加混标溶液1.0mL，加甲醇至10mL，与样品同法处理过柱，试验结果，Poly-Sery HLB柱的回收率仅为22％-63％，Welchrom C18E小柱作为分散固相萃取基质难以完全去除脂质。由WelchromC18E过柱的样液颜色较浑浊，难以滤过，有部分乳状物积蓄，需复溶至2-5mL，滤过上机，想要达到检出限可加倍称样量，样品加标结果详见表2。
表2.3种不同类型的SPE柱处理固体(液体)样品加标试验整体效果Table2.3different types of SPE columns for solid(liquid)samples to test theoverall effect of standard test.
Figure BDA0001941057560000092
Figure BDA0001941057560000101
综合上述试验结果，选择Captive EMR-Lipid小柱来处理不同配方的特医食品，更为快速、简便，满足检测要求且回收率良好，操作过程中上样无需活化和平衡，样液直接加载至EMR-Lipid小柱以吸附脂肪和磷脂及蛋白质，不仅净化了样品溶液，更提高了样品前处理效率。
萃取溶剂的选择和萃取效果的优化
考虑到11种待测物均易溶于醇，故本研究分别选取甲醇、甲醇-水(不同比例)、乙醇、乙腈作为提取溶剂，以常见全营养配方粉为研究对象，加标回收率作为评价指标，进行比对实验。由于厂家会采用一些分子包埋技术来保护营养粉配方成分，因此在加入提取溶剂前，先添加适量水分来散浸润样品，再添加甲醇提取以增加待测组分的包埋释放。选用乙醇、乙腈可用于沉淀蛋白，降低干扰物的响应，结果如图3所示，以甲醇为提取溶剂时，即可获得理想的回收率，可满足检测需求，且重现性好；如图4所示，不同比例的甲醇水溶液和不同酸度的甲醇水溶液相比，不同的香料化合物的回收率结果波动较大，由图4表明，100％甲醇溶液回收率的折线图趋于平坦，不同的酸度、不同比例的甲醇溶液对4-羟基苯甲酸、乙基麦芽酚、邻香草醛这三组成分影响较大，回收率随着甲醇比例增加明显提高。因此，本研究选择100％甲醇作为提取溶剂，提取效果详见图3、图4。
甲醇提取量的选择，考察10mL甲醇直接提取和10mL甲醇分两次提取(5mL、5mL)，再合并上清液氮吹至1mL，结果与10mL甲醇直接提取结果差别不大，直接混标过柱回收率较好，且均能达到95％-100％。
取特医食品固体样品，加入混合标准中间液1 1.0mL，采用漩涡混合器高速、连续震荡1分钟，使样品与甲醇液充分混匀，分别选择超声5min、10min、20min、30min萃取，高速离心机10000/转离心10min，取上清液过EMR-Lipid小柱，洗脱液浓缩后，滤过，检测。由图3表明，11种香料化合物在不同超声时间上的萃取结果，超声10min为最佳萃取时间。详见图5。
比较150ug/g加标水平下各因素组合的回收率和净化效果，使用10mL的甲醇作为提取剂，漩涡1min，超声10min，10000/转离心10min，上清液直接上样过EMR-Lipid柱，重力自流，可以获得良好的提取、净化效果。
Captive EMR-Lipid净化及浓缩步骤的优化
采用Captive EMR-Lipid柱，针对脂类物质进行必要的净化，收集流出液并吹干柱内溶剂，取定量浓缩管，用氮吹仪浓缩至少于1mL，定容至1mL，达到最低检出限。由图6表明，11种香料化合物的回收率随着温度的升高而降低，以35℃为最佳氮吹温度。
液-液萃取法和Captive EMR-Lipid柱的检测结果比较
利用香兰素在酸性和碱性溶液中分别以盐和分子形式存在的特点，采用液液萃取的方法进行前处理，先用***液萃取加酸的奶粉溶液，弃去水层；加一定量NaOH溶液萃取后，弃去***层；加酸调pH至酸性，用***萃取后，挥干***，用甲醇定容，滤过0.45um滤膜，进样检测，与Captive EMR-Lipid柱的检测结果比较，样品加标回收率仅在21.9％～76.9％。
色谱条件的优化.
分别取11种化合物标准品储备液，通过紫外可见分光光度计对每个单标进行最大波长扫描，发现11种香料化合物在280nm处有共同较大吸收峰；考察了甲醇－水、乙腈－水混合溶剂体系及其添加0.1％磷酸、0.1％三氟乙酸时对11种香料的色谱行为影响。通过试验发现甲醇-0.1％磷酸溶液作为流动相且以上述液相方法的梯度条件洗脱待测物质的分离度及峰形较好。
本实验使用磷酸体系，比较了Agilent Poroshell 120SB-AQ(4.6×100mm，2.7um)和Ultimate LP-C18(4.6×250mm，5um)两根不同类型、不同粒径的色谱柱，其中AQ柱可耐受高水相、低pH以及高柱温的极端条件，可匹配高效液相色谱仪(HPLC)和超高效液相色谱仪(UPLC)。11种目标被测组分与相邻物质分离度良好，保留时间仅为20min，快速且高效地完成了11种目标物质的色谱分离，提高了检测效率，适合于处理大批量的样品。图1为AQ柱分离11种香料化合物的色谱图。
表3、两种色谱柱的性能区别
Table 3.Performance differences between two chromatographiccolumns
Figure BDA0001941057560000121
方法学考察
方法线性范围、检出限、定量限
将配制的线性标准工作溶液(浓度3)在2.3仪器色谱条件下进行分析，建立标准曲线。经测定11种香料化合物的相关系数r均在0.9998以上，线性关系良好。分别取空白基质样品1g，以逐渐降低样品中混合标准中间液2添加量的方法进行实验，以峰面积相当于基线噪音的3倍(S/N＝3)计算检出限(limit of detection，LOD)为0.05-0.19μg/g；以峰面积相当于基线噪音的10倍(S/N＝10)计算定量限(limit of qμantification，LOQ)为0.15-0.29μg/g，结果见表4。
表4.11种香料化合物的线性方程、相关系数r、检出限(LODs)、定量限(LOQs)
Table 3.Linear equation，correlation coefficient r，detectionlimit(LODs)and quantitative limit(LOQs)of 11spice compounds
Figure BDA0001941057560000131
Figure BDA0001941057560000141
方法回收率和精密度
按特医食品脂肪、蛋白质含量的高低和剂型的不同，分别在4份样品中加入混标标准中间液1 1.0mL、0.2mL和混标标准中间液21.0mL，按2.2样品预处理方法，每个浓度平行3次进行试验，分别作为高浓度回收率、中浓度回收率和低浓度回收率，四类特医食品的三种添加水平的平均回收率84.1％-107％，结果见表5。
表5.11种香料化合物回收率和精密度(n＝6)
Table 4.11Recovery and Precision of Fragrance Compounds(n＝6)
Figure BDA0001941057560000142
Figure BDA0001941057560000151
结论
本发明通过建立了C18E固相萃取柱—高效液相色谱法测定特殊医学用途配方食品中香兰素等11种香料化合物的方法。该方法干扰小，回收率高，操作简便快速，易于批处理，可用于特殊医学用途配方食品中香精香料等化合物的测定。
本发明针对特医食品中可能含有的11种香料添加剂的Captive EMR-Lipid/高效液相色谱检测方法研究。样品的提取和净化为关键技术，会直接影响方法的灵敏度和精密度，尤其是部分特医食品中脂类或者磷脂含量较多，干扰较大；普通的前处理净化方法多以SPE法和液-液萃取法为主，但液-液萃取法步骤较为繁琐，试剂消耗量大，萃取的香料化合物会有部分损失；SPE法通常被用来去除影响下一步液相/液质分析的杂质，如选择不同类型的SPE柱则对结果的影响性很大，操作不当易造成损失而影响定量准确性。本研究通过一种通过式固相萃取技术，选择合适的萃取方法和Captive EMR-Lipid净化柱来净化样品，上样前无需活化和平衡，样液直接加载至SPE柱以吸附FSMA样品脂质中C5及以上的碳链，从而除去脂质、蛋白质干扰物，达到净化11种目标香料添加剂的目的。该小柱能不含溶剂保留滤芯，可实现重力自流，简化了样品前处理步骤，缩短前处理时间，少了样品杂质峰的干扰，从而显著提高方法的可靠性和实用性。
通过Captive EMR-Lipid(增强型脂质去除过滤柱)以固相萃取SPE形式净化，高效液相色谱仪进行检测，具有回收率高，简便、快速等优点，可以满足日常对特医配食品中香料化合物的限量控制的要求。
各位技术人员须知：虽然本发明已按照上述具体实施方式做了描述，但是本发明的发明思想并不仅限于此发明，任何运用本发明思想的改装，都将纳入本专利专利权保护范围内。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，本发明的保护范围并不仅局限于上述实施例，凡属于本发明思路下的技术方案均属于本发明的保护范围。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理前提下的若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种特殊医学用途配方食品中香料添加剂的检测方法，其特征在于，所述的方法由以下步骤组成：
（1）标准储备液的配制：分别精密称取各标准品分别置于20mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得到相应标准储备液，浓度为3mg/mL于-18℃冷冻保存，所述的标准品为麦芽酚、4-羟基苯甲酸、愈创木酚、乙基麦芽酚、香草酸、香兰素、香豆素、乙基香兰素、甲基香兰素、邻香草醛、丁香酚；
（2）混合标准中间液的配制：精密移取各标准储备液各1.0mL，置于同一20mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得到混合标准中间液1；精密移取混合标准中间液11.0mL，置于50mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得到混合标准中间液2;
（3）不同浓度的系列标准工作溶液配制：精密移取各标准储备溶液各1.0mL、0.5mL、0.2mL、0.1mL、0.05mL、0.02mL至20mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，配制成不同浓度的系列标准工作溶液, 供高效液相色谱仪测定;
（4）样品预处理: 准确称取1g样品，加甲醇，涡旋1min，超声10min，10000r/min离心10min，取上清液，供净化用；
（5）测定：取600mg/6mL 的Captive EMR-Lipid小柱将样品的上清液全部加到柱管内，上样接收，重力自流，抽干小柱，接收液用氮吹仪35℃吹至溶液不到1mL，用甲醇定容至1mL，过0.45μm滤膜，上机检测；
液相色谱条件如下：
色谱柱为4.6 mm×100mm×2.7μm 的Agilent Poroshell 120 SB-Aq；DAD检测波长为280nm；进样体积为5μL；流速为1.0ml/min；柱温为30℃；流动相中A相为0.1%磷酸水溶液和B相为甲醇；梯度洗脱条件为74%的A相持续12min，经2min线性变化为20%的A相，持续4min；最后经1min线性变化为初始的74%A相；总检测时间为20min。
2.根据权利要求1所述的一种特殊医学用途配方食品中香料添加剂的检测方法，其特征在于，所述的步骤（1）标准储备液的配制中标准品麦芽酚、4-羟基苯甲酸、愈创木酚、乙基麦芽酚、香草酸、香兰素、香豆素、乙基香兰素、甲基香兰素均称取质量60mg。
3.根据权利要求1所述的一种特殊医学用途配方食品中香料添加剂的检测方法，其特征在于，所述的步骤（1）标准储备液的配制中标准品邻香草醛或丁香酚均称取质量40mg。
4.根据权利要求1所述的一种特殊医学用途配方食品中香料添加剂的检测方法，其特征在于，所述的步骤（3）不同浓度的系列标准工作溶液配制中麦芽酚、4-羟基苯甲酸、愈创木酚、乙基麦芽酚、香草酸、香兰素、香豆素、乙基香兰素、甲基香兰素均配置3μg/mL、7.5μg/mL、15μg/mL、30μg/mL、75μg/mL、150μg/mL的系列标准工作溶液，供高效液相色谱仪测定。
5.根据权利要求1所述的一种特殊医学用途配方食品中香料添加剂的检测方法，其特征在于，所述的步骤（3）不同浓度的系列标准工作溶液配制中邻香草醛、丁香酚均配置4μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、100μg/mL、200μg/mL的系列标准工作溶液，供高效液相色谱仪测定。
6.根据权利要求1所述的一种特殊医学用途配方食品中香料添加剂的检测方法，其特征在于，所述的步骤（4）样品预处理中固态样品加入的甲醇量为10mL。
7.根据权利要求1所述的一种特殊医学用途配方食品中香料添加剂的检测方法，其特征在于，所述的步骤（4）样品预处理中液态样品加入的甲醇量为9mL。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114252534A (zh) * 2021-12-16 2022-03-29 北京奶牛中心 一种EMR-Lipid前处理技术结合超高效液相测定干酪中山梨酸含量的方法
CN114858939A (zh) * 2022-04-27 2022-08-05 国家烟草质量监督检验中心 同时测定新型雾化产品中丁香酚、麦芽酚、乙基麦芽酚、香兰素和乙基香兰素的方法
CN114894947A (zh) * 2022-06-21 2022-08-12 重庆馨可元油脂有限公司 一种液相色谱同时测定芝麻油中四种香精的方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8062898B2 (en) * 2006-10-20 2011-11-22 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Selection and rational development of solvent systems in counter-current chromatograph
WO2013035070A1 (en) * 2011-09-07 2013-03-14 Yeda Research And Development Co. Ltd. Olfactory signature and odorant mixture having the same
CN108896694A (zh) * 2018-07-05 2018-11-27 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 一种动物性食品中农药残留的LC-QToF-MS筛查分析方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8062898B2 (en) * 2006-10-20 2011-11-22 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Selection and rational development of solvent systems in counter-current chromatograph
WO2013035070A1 (en) * 2011-09-07 2013-03-14 Yeda Research And Development Co. Ltd. Olfactory signature and odorant mixture having the same
CN108896694A (zh) * 2018-07-05 2018-11-27 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 一种动物性食品中农药残留的LC-QToF-MS筛查分析方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
巧克力中香兰素的快速分离柱高效液相色谱法测定;李海燕等;《安徽农业科学》;20091231;第37卷(第21期);第9841页第1.2-1.3小节，第9842页第2.2-2.3小节 *
高效液相色谱法同时测定豆浆中麦芽酚、乙基麦芽酚、香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素5种香料;迟秋池等;《食品安全质量检测学报》;20160725(第07期);第2690-2695页 *

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