CN109568200A - 一种乙醇-硫酸铵双水相体系分离富集积雪草总苷的方法 - Google Patents
一种乙醇-硫酸铵双水相体系分离富集积雪草总苷的方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种乙醇‑硫酸铵双水相体系分离富集积雪草总苷的方法。本发明包括:步骤1:积雪草晒干粉碎;步骤2:将积雪草粉末投入圆底烧瓶中,用70%乙醇溶剂,60℃水浴加热回流提取2h,提取后过滤得到积雪草提取液;步骤3:将积雪草提取液进行真空浓缩,得到积雪草浓缩液;步骤4:利用双水相体系的选择性分离富集积雪草总苷;步骤5:按照体积比在积雪草总苷的样品层中加入一定量的无水乙醇,震荡,混匀,离心,取出离心液上层;步骤6:将上层减压浓缩,真空干燥,最终得到积雪草总苷。本发明制得产品安全性高,提高了提取物纯度,改善了其品质,有效降低其生产成本。
Description
技术领域
本发明涉及植物提取的制备方法,特别是涉及一种乙醇-硫酸铵双水相体系分离富集积雪草总苷的方法。
背景技术
积雪草为伞形科植物积雪草(Centella asiatica(L.)Urban)的干燥全草,广泛分布于长江流域以南各地,全草入药,常年可采,资源丰富,在许多国家的医药领域中应用己有几千年历史,其始载于《神农本草经》,列为中品,性寒,味苦,辛,具有清热利湿、解毒消肿之功效,主要用于湿热黄疽、中暑腹泻、痈肿疮毒、跌打损伤等。积雪草中的化学成分包括三萜皂苷、三萜酸、多炔烯类和挥发油等。现代研究证明,积雪草提取物可有效促进皮肤损伤、局部胶原合成代谢,并在皮肤损伤后的组织修复方面有中药作用。近年来研究还发现,积雪草具有抗氧化、抗抑郁、保肝、抑制肿瘤细胞增生等作用。
积雪草苷等活性成分具有美白功效,其作为化妆品的功效成分而被广泛使用。目前富集积雪草总苷的方法主要采用大孔树脂方法纯化,例如专利一种积雪草总苷的制备方法(201210071147.0):以水提取,大活性炭脱色,大孔树脂吸附-洗脱富集积雪草总苷,工艺流程复杂耗时,洗脱时产生大量溶剂导致浓缩时能耗较大。
发明内容
本发明解决的问题在于提供一种乙醇-硫酸铵双水相体系分离富集积雪草总苷的方法,本方法工序少,成本低,耗时短,适合工业化大规模生产的需求。
本发明是通过以下技术方案来实现:
步骤1:积雪草晒干,粉碎至一定粒度制得积雪草粉末。
步骤2:将积雪草粉末投入圆底烧瓶中,用70%乙醇溶剂,60℃水浴加热回流提取2h,提取后过滤,得到积雪草提取液。
步骤3:将积雪草提取液进行真空浓缩,得到积雪草浓缩液。
步骤4:利用双水相体系的选择性分离富集积雪草总苷:将步骤3中的积雪草浓缩液配置成密度为1.00~1.5g/ml的积雪草水溶液。取一定体积的积雪草水溶液加入到双水相体系中,震荡摇匀后静置,离心,分离上下相即含有积雪草总苷的上层及含有蛋白质、多糖等杂质的下层,取出含有积雪草总苷的样品层。
所述的双水相体系由乙醇、硫酸铵和蒸馏水组成;
所述双水相体系中,乙醇的体积分数为15~85%,硫酸铵的质量分数为5~45%。
步骤5:按照体积比在积雪草总苷的样品层中加入一定量的无水乙醇,震荡,混匀,离心,取出离心液上层。
步骤6:将上层减压浓缩,真空干燥,得到最终产品。
作为优选,所述步骤1具体为,积雪草粉碎至20~50目
作为优选,所述步骤2具体为,积雪草粉末与70%乙醇溶剂的料液比为1:5,提取次数为2次。
作为优选,所述步骤3具体为,浓缩温度为65℃。
作为优选,所述步骤4具体为,离心转速为4000r/min,离心10min。
作为优选,所述步骤4具体为,双水相体系的配置过程:将硫酸铵用蒸馏水溶解后,加入无水乙醇,充分搅拌混匀。
作为优选,所述步骤5具体为,积雪草总苷样品层与无水乙醇体积比为1:3~6,离心具体为4000r/min,15min。
作为优选,所述步骤6具体为,减压浓缩温度为45~65℃,真空干燥温度为45~60℃。
本发明以纯天然的积雪草植物为原料,用水、乙醇进行提取,然后双水相萃取技术富集积雪草总苷。
与现有技术相比,本发明的有益效果是:
操作过程绿色环保,未使用任何有毒有害试剂,保护环境。
使用的原料试剂,简单易得,且易于运输,储存,适合工业化生产。
工艺流程稳定可靠,重复性高,稳定性强。
本发明未采用大孔树脂纯化工艺,避免了大孔树脂残留导致的安全风险。
具体实施方式
下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明,所述是对发明的解释而不是限定。
实施例1:
取350g干燥积雪草粉末(过50目筛)投入2000ml圆底烧瓶,加入1750ml的70%乙醇,60℃水浴加热回流2h,过滤后,残渣重复提取一次,合并滤液,减压浓缩至无乙醇味得到积雪草浓缩液,取出测定其体积为535ml,密度为1.06g/ml;配置双水相体系:在50ml离心管中加入11.5g硫酸铵,加入23.5ml蒸馏水,充分震荡混匀,加入10ml无水乙醇,摇匀,得到双水相萃取剂;向双水相体系中加入12.5ml积雪草浓缩液,震荡混匀后,4000r/min离心10min,取出上层有机层15ml置于烧杯中,加入60ml无水乙醇,充分搅拌,静置15min后4000r/min离心10min,取出上层,45℃浓缩至膏状,转入60℃真空干燥箱干燥,得到1.3g最终产品,经香草醛-高氯酸-冰乙酸法检测,以羟基积雪草苷做对照品,其含量为66.7%。
实施例2:
取350g干燥积雪草粉末(过50目筛)投入2000ml圆底烧瓶,加入1750ml的70%乙醇,60℃水浴加热回流2h,过滤后,残渣重复提取一次,合并滤液,65℃减压浓缩至无乙醇味得到积雪草浓缩液,取出测定其体积为535ml,密度为1.06g/ml;配置双水相体系:在50ml离心管中加入7.5g硫酸铵,加入13ml蒸馏水,充分震荡混匀,加入37ml无水乙醇,摇匀,得到双水相萃取剂;向双水相体系中加入12.5ml积雪草浓缩液,震荡混匀后,4000r/min离心10min,取出上层有机层21ml置于烧杯中,加入84ml无水乙醇,充分搅拌,静置15min后4000r/min离心10min,取出上层,65℃浓缩至膏状,转入45℃真空干燥箱干燥,得到1.1g最终产品,经香草醛-高氯酸-冰乙酸法检测,以羟基积雪草苷做对照品,其含量为69.3%。
实施例3:
取200g干燥积雪草粉末(过20目筛)投入2000ml圆底烧瓶,加入1000ml的70%乙醇,60℃水浴加热回流2h,过滤后,残渣重复提取一次,合并滤液,65℃减压浓缩至无乙醇味得到积雪草浓缩液,取出测定其体积为220ml,密度为1.47g/ml;配置双水相体系:在50ml离心管中加入4g硫酸铵,加入25ml蒸馏水,充分震荡混匀,加入25ml无水乙醇,摇匀,得到双水相萃取剂;向双水相体系中加入10ml积雪草浓缩液,震荡混匀后,4000r/min离心10min,取出上层有机层17ml置于烧杯中,加入68ml无水乙醇,充分搅拌,静置15min后4000r/min离心10min,取出上层,65℃浓缩至膏状,转入45℃真空干燥箱干燥,得到1.4g最终产品,经香草醛-高氯酸-冰乙酸法检测,以羟基积雪草苷做对照品,其含量为67.3%。
实施例4:
取100g干燥积雪草粉末(过40目筛)投入2000ml圆底烧瓶,加入1000ml的70%乙醇,60℃水浴加热回流2h,过滤后,残渣重复提取一次,合并滤液,65℃减压浓缩至无乙醇味得到积雪草浓缩液,取出测定其体积为120ml,密度为1.24g/ml;配置双水相体系:在50ml离心管中加入7.5g硫酸铵,加入15ml蒸馏水,充分震荡混匀,加入15ml无水乙醇,摇匀,得到双水相萃取剂;向双水相体系中加入8ml积雪草浓缩液,震荡混匀后,4000r/min离心10min,取出上层有机层12ml置于烧杯中,加入48ml无水乙醇,充分搅拌,静置15min后4000r/min离心10min,取出上层,65℃浓缩至膏状,转入45℃真空干燥箱干燥,得到0.9g最终产品,经香草醛-高氯酸-冰乙酸法检测,以羟基积雪草苷做对照品,其含量为69.9%。
Claims (8)
1.一种乙醇-硫酸铵双水相体系分离富集积雪草总苷的方法,其特征在于包括如下步骤:
步骤1:积雪草晒干,粉碎至一定粒度制得积雪草粉末;
步骤2:将积雪草粉末投入圆底烧瓶中,用70%乙醇溶剂,60℃水浴加热回流提取2h,提取后过滤,得到积雪草提取液;
步骤3:将积雪草提取液进行真空浓缩,得到积雪草浓缩液;
步骤4:利用双水相体系的选择性分离富集积雪草总苷:将步骤3中的积雪草浓缩液配置成密度为1.00~1.5g/ml的积雪草水溶液;取一定体积的积雪草水溶液加入到双水相体系中,震荡摇匀后静置,离心,分离上下相即含有积雪草总苷的上层及含有蛋白质、多糖杂质的下层,取出含有积雪草总苷的样品层;
所述的双水相体系由乙醇、硫酸铵和蒸馏水组成;
所述双水相体系中,乙醇的体积分数为15~85%,硫酸铵的质量分数为5~45%;
步骤5:按照体积比在积雪草总苷的样品层中加入一定量的无水乙醇,震荡,混匀,离心,取出离心液上层;
步骤6:将上层减压浓缩,真空干燥,最终得到积雪草总苷。
2.根据权利要求1所述的一种乙醇-硫酸铵双水相体系分离富集积雪草总苷的方法,其特征在于积雪草粉碎至20~50目。
3.根据权利要求2所述的一种乙醇-硫酸铵双水相体系分离富集积雪草总苷的方法,其特征在于所述步骤2具体为:积雪草粉末与70%乙醇溶剂的料液比为1:5,提取次数为2次。
4.根据权利要求3所述的一种乙醇-硫酸铵双水相体系分离富集积雪草总苷的方法,其特征在于所述步骤3具体为:浓缩温度为65℃。
5.根据权利要求4所述的一种乙醇-硫酸铵双水相体系分离富集积雪草总苷的方法,其特征在于所述步骤4具体为:离心转速为4000r/min,离心10min。
6.根据权利要求5所述的一种乙醇-硫酸铵双水相体系分离富集积雪草总苷的方法,其特征在于双水相体系的配置过程:将硫酸铵用蒸馏水溶解后,加入无水乙醇,采用玻璃棒充分搅拌混匀,搅拌次数3次,每次1min。
7.根据权利要求6所述的一种乙醇-硫酸铵双水相体系分离富集积雪草总苷的方法,其特征在于所述步骤5具体为:积雪草总苷样品层与无水乙醇体积比为1:3~1:6,离心具体为4000r/min,15min。
8.根据权利要求7所述的一种乙醇-硫酸铵双水相体系分离富集积雪草总苷的方法,其特征在于所述步骤6具体为:减压浓缩温度为45~65℃,真空干燥温度为45~60℃。
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