CN109549957A - 能双向调节便秘的复合益生菌 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及能双向调节便秘的复合益生菌,包括以下质量百分数的组成成分:嗜酸乳杆菌18~22wt%;罗伊式乳杆菌18~22wt%;乳双歧杆菌18~22wt%;婴儿双歧杆菌8~11wt%;长双歧杆菌4~6wt%;青春双歧杆菌4~6wt%;植物乳杆菌4~5wt%;鼠李糖乳杆菌4~5wt%;余量为低聚木糖。本发明的复合益生菌产品,最终活菌数可达到109‑1010CFU/g,活菌含量高,双向调节效果显著。
Description
技术领域
本发明属于微生物制剂技术领域,特别涉及能双向调节便秘的复合益生菌。
背景技术
肠道微生态对维持人体健康至关重要。人体的维生素合成、促进生长发育和物质代谢以及免疫防御功能都有重要的作用,是维持人体健康的必要因素,也是反映机体内环境稳定的一面镜子。
抗生素的不合理应用,滥用,是目前导致肠道微生态紊乱的主要原因之一。由于不合理的应用,扰乱了肠内细菌种群或群落之间相互制约的格局,同时产生耐药菌株,迅速繁殖,致使肠道微生态的平衡遭到破坏。复合肠道微生态制剂的添加,可以补充和充实微生物菌落,改善不正常的菌落结构,调整肠道微生态平衡,达到防病、治病,维护健康的目的。
健康个体肠道中,双歧杆菌(Bifidobacterium)、乳杆菌(Lactobacillus)、类杆菌(Bacteriodes)、真杆菌(Eubacterium)、消化链球菌(Streptococcus)为正常生理性优势菌群,菌数均可达1×1010~1×1011;大肠杆菌(Escherichiacoli)和某些链球菌属于腐败性细菌,菌数约为1×107~1×108;而产气荚膜梭菌(Cl.perfringenes)、韦氏球菌(Cl.welchii)则属于病原性细菌,菌数只有1×103。
根据最新定义,微生态制剂益生菌是含有活菌或死菌包括气组成和产物的活菌制品经口或经由气体粘膜途径投入旨在改善粘膜表面处微生物或酶的平衡或刺激特异性或非特异性免疫机制。微生态制剂中活菌数是阐明其质量的重要指标之一。由于活菌剂在加工、运输和储存过程中容易失去活性,因此市场上很多制剂的标示值远远大于实际值,产品本身性能低下。
发明内容
本发明的目的是为解决以上问题,本发明提供一种能够活菌含量高,调节肠道效果显著的复合益生菌产品。
根据本发明的一个方面,提供一种能双向调节便秘的复合益生菌,包括以下质量百分数的组成成分:
其中,包括以下质量百分数的组成成分:
其中,包括以下质量百分数的组成成分:
其中,包括以下质量百分数的组成成分:
根据本发明的另一方面,提供该复合益生菌在双向调节动物及人的肠道健康领域的应用。
研究表明便秘患者结肠中的短链脂肪酸(SCFAs)含量以及G-蛋白偶联受体43(GPR43)和胆碱乙酿转移酶(ChAT)的表达可能出现异常,从而导致便秘的发生,这是因为,SCFAs可调节肠动力,一是通过由粘膜肥大细胞和肠内分泌细胞表达的G-蛋白偶联受体43(G-Protein linked receptor,GPR43)诱导释放5-HT。二是通过抑制组蛋白去乙酿化酶(histone deacetylase,HDAC) 活性,从而增加肠神经元表达胆碱乙酿转移酶(cholineacetyltransferase,ChAT) 的比率,最终促进结肠蠕动。益生菌能够产生大量短链脂肪酸(short-chain fatty acids,SCFAs)如丁酸、丙酸和乙酸,从而降低结肠的pH,促进结肠蠕动,降低结肠的传输时间;它还可以分泌产生细菌素,可有效抑制大肠杆菌、沙门氏菌、梭菌等的生长繁殖,从而有效缓解便秘,其治疗效果仅靠药物治疗无法达到。
本发明中,双歧杆菌在人体肠道中通过细胞壁磷壁酸与肠粘膜上皮细胞相互作用密切结合,与其它厌氧菌一起有序地定植在肠粘膜表面,形成生物屏障,而其代谢产物—有机酸和抗菌物质形成化学屏障,这在肠道微生态空间上构成定植阻力(生物拮抗作用),阻止了致病菌和条件致病菌的定植和入侵。肠道菌群失调可导致肠黏膜屏障功能受到破坏,免疫应答紊乱及炎症反应的发生,引起水、电解质平衡紊乱而发生腹泻。乳杆菌通过维持黏膜正常的通透性而维持肠道完整的防御屏障功能,通过刺激肠道分泌免疫球蛋白而调节肠道粘膜免疫***,通过均衡细胞因子释放调节肠道炎症反应,通过抑制肠道粘膜过度生成炎症因子并降低***全身性免疫应答反应。
本发明中,添加的多种双歧杆菌、乳杆菌均衡比例,帮助恢复肠道菌群的平衡,从而辅助治疗,缓解由服用抗生素带来的腹泻及便秘,达到双向调节的目的。多种益生菌的配合,可以有效适用于各种肠道菌群的类型,多种双歧杆菌,可以有效抵抗病原菌感染,多种乳杆菌的配合有利于清除肠道垃圾,抵抗有害菌的生长,带有原有益生菌的快速生长定植。
本发明采用的双歧杆菌与乳酸菌菌种因其自身耐酸性,可保证在胃内低pH 值条件下存活,从而保证活菌数量。由于在机体胃肠道内缺乏水解低聚木糖的酶***,因此低聚木糖不被机体降解利用,直接进入肠道内作为有益菌的底物, 促进有益菌的生长繁殖,抑制有害菌生长。肠道益双歧杆菌、乳酸杆菌等可产生分解低聚糖的酶系,使低聚糖降解为单糖,从而被有益菌或机体直接利用。按该比例添加的复合益生菌可最快速调节肠道微环境,迅速恢复健康肠道环境,同时不会对原有的肠道益生菌造成抑制与破坏。该比例效果最为显著。
本发明的复合益生菌产品,最终活菌数可达到109-1010CFU/g,活菌含量高,双向调节效果显著。
具体实施方式
下面将通过具体实施例更详细地描述本公开的示例性实施方式。虽然说明书中显示了本公开的示例性实施方式,然而应当理解,可以以各种形式实现本公开而不应被这里阐述的实施方式所限制。相反,提供这些实施方式是为了能够更透彻地理解本公开,并且能够将本公开的范围完整的传达给本领域的技术人员。
实施例1复合益生菌X1
包括以下质量百分数的组成成份:
嗜酸乳杆菌18wt%;罗伊式乳杆菌22wt%;乳双歧杆菌18wt%;婴儿双歧杆菌11wt%;长双歧杆菌4wt%;青春双歧杆菌6wt%;植物乳杆菌4wt%;鼠李糖乳杆菌5wt%;余量为低聚木糖。
检测过程:根据国家标准,采用平板培养计数法,对活菌的成活数量进行检测。选择制取10-6和10-8稀释度的样品匀液,每个稀释度吸取0.1mL样品匀液分别置于2个MRS琼脂平板,使用L形棒进行表面涂布。36℃±1℃,厌氧培养48h±2h后计数平板上的所有菌落数。
检测结果:活菌总数1.2×109CFU/g。
实施例2复合益生菌X2
嗜酸乳杆菌22wt%;罗伊式乳杆18wt%;乳双歧杆菌20wt%;婴儿双歧杆菌11wt%;长双歧杆菌6wt%;青春双歧杆菌4wt%;植物乳杆菌5wt%;鼠李糖乳杆菌5wt%;余量为低聚木糖。
检测过程:根据国家标准,采用平板培养计数法,对活菌的成活数量进行检测。选择制取10-6和10-8稀释度的样品匀液,每个稀释度吸取0.1mL样品匀液分别置于2个MRS琼脂平板,使用L形棒进行表面涂布。36℃±1℃,厌氧培养48h±2h后计数平板上的所有菌落数。
检测结果:活菌总数1.0×109CFU/g。
实施例3复合益生菌X3
嗜酸乳杆菌21wt%;罗伊式乳杆菌18wt%;乳双歧杆菌22wt%;婴儿双歧杆菌10wt%;长双歧杆菌5wt%;青春双歧杆菌4wt%;植物乳杆菌5wt%;鼠李糖乳杆菌5wt%;余量为低聚木糖。
检测过程:根据国家标准,采用平板培养计数法,对活菌的成活数量进行检测。选择制取10-6和10-8稀释度的样品匀液,每个稀释度吸取0.1mL样品匀液分别置于2个MRS琼脂平板,使用L形棒进行表面涂布。36℃±1℃,厌氧培养48h±2h后计数平板上的所有菌落数。
检测结果:活菌总数1.4×109CFU/g。
实施例4复合益生菌X4
嗜酸乳杆菌20wt%;罗伊式乳杆菌20wt%;乳双歧杆菌20wt%;婴儿双歧杆菌10wt%;长双歧杆菌5wt%;青春双歧杆菌5wt%;植物乳杆菌5wt%;鼠李糖乳杆菌5wt%;余量为低聚木糖。
检测过程:根据国家标准,采用平板培养计数法,对活菌的成活数量进行检测。选择制取10-6和10-8稀释度的样品匀液,每个稀释度吸取0.1mL样品匀液分别置于2个MRS琼脂平板,使用L形棒进行表面涂布。36℃±1℃,厌氧培养48h±2h后计数平板上的所有菌落数。
检测结果:活菌总数1.7×109CFU/g。
实施例5复合益生菌X5
嗜酸乳杆菌18wt%;罗伊式乳杆菌18wt%;乳双歧杆菌18wt%;婴儿双歧杆菌18wt%;长双歧杆菌6wt%;青春双歧杆菌5wt%;植物乳杆菌5wt%;鼠李糖乳杆菌5wt%;余量为低聚木糖。
检测过程:根据国家标准,采用平板培养计数法,对活菌的成活数量进行检测。选择制取10-6和10-8稀释度的样品匀液,每个稀释度吸取0.1mL样品匀液分别置于2个MRS琼脂平板,使用L形棒进行表面涂布。36℃±1℃,厌氧培养48h±2h后计数平板上的所有菌落数。
检测结果:活菌总数1.0×109CFU/g。
实施例6复合益生菌X6
嗜酸乳杆菌18wt%;罗伊式乳杆菌22wt%;乳双歧杆菌18wt%;婴儿双歧杆菌8wt%;长双歧杆菌6wt%;青春双歧杆菌6wt%;植物乳杆菌5wt%;鼠李糖乳杆菌4wt%;余量为低聚木糖。
检测过程:根据国家标准,采用平板培养计数法,对活菌的成活数量进行检测。选择制取10-6和10-8稀释度的样品匀液,每个稀释度吸取0.1mL样品匀液分别置于2个MRS琼脂平板,使用L形棒进行表面涂布。36℃±1℃,厌氧培养48h±2h后计数平板上的所有菌落数。
检测结果:活菌总数1.0×109CFU/g。
实验例1本发明的复合益生菌对小鼠的腹泻影响效果分析
1.1小鼠选取同一动物中心的清洁级小鼠80只,平均体重为20±2g,雌雄各半。
1.2试验菌株K88致病性大肠杆菌,培养基为EMB培养基。
1.3大肠杆菌准备将K88致病性大肠杆菌转接于EMB平板上,37℃培养 24h。选择呈金属光泽、表面光滑的单个菌落,接种于NA培养基培养,计数,并用生理盐水配制成1×108CFU/mL的菌液,4℃保存。
1.4腹泻模型的制备将小鼠适应性饲养5d后,随机分为对照组(20)只,模型组60只,等模型制备成功后,将模型组再分为模型对照组、普通益生菌组 (双歧杆菌组)和本发明的复合益生菌组。每组20只,雌雄各半。造模前禁止 6h,自由饮水。对照组每天两次罐服胜利盐水0.3mL,模型组腹腔注射大肠杆菌菌液0.3mL,连续3天,建立腹泻模型。建模成功后,每天2次,连续3天,益生菌组灌服双歧杆菌菌液0.3mL,复合益生菌组灌服本发明的实施例1的复合益生菌X1 0.3mL,模型对照组和空白对照组灌胃生理盐水0.3mL。
2.1腹泻模型的建立
在试验第1天模型组小鼠精神状态较差,腹泻症状不明显,其中85%的小鼠有轻度腹泻即粪便呈颗粒状且松软。在试验第2天模型组出现明显腹泻,其中90%的达到中度腹泻即粪便不成形,带有粘液,与对照组相比明显稀湿。在试验第3天模型组精神萎靡,85%为重度腹泻,15%为中度腹泻,粪便水样,不成形。表明腹泻模型建模成功。具体如下表表1所示。
表1:腹泻模型造模数据
注:0:正常,粪便颗粒;Ι(轻度):颗粒状,但是松软;Ⅱ(中度):不成形,粪便中带有粘液,排便次数增多;Ⅲ(重度):水样便,不成形。
2.2
普通益生菌和本发明的复合益生菌X1对腹泻模型小鼠的治疗作用,具体如下表表2所示:
表2:小鼠痊愈数据
通过上表可知,给药3天后,复合益生菌组X1的腹泻显效率为90%,普通益生菌双歧杆菌的显效率为30%。
实验例2本发明的复合益生菌对小鼠的便秘影响效果分析
1小鼠排便实验
1.1本次实验采取与实验例1相同的实验思路,采用复方地芬诺酯建立小鼠慢性便秘模型,选取80只健康小鼠,平均分为4组,设置为空白对照组,模型对照组,普通益生菌(双歧杆菌)组和复合益生菌X1组。给受试样品7天后,使用复方地芬诺酯灌胃建立小鼠慢性便秘模型。通过小鼠的首次排便时间、排便粒数、粪便水分含量和墨汁推荐率评价两种益生菌对小鼠便秘的影响。
1.2实验中,墨汁的配制具体为:称取***树胶100g,加水煮至800mL,煮沸至溶液透明,称取活性碳(粉状)50g加至上述溶液中煮沸3次,待溶液凉后加水定容到1000mL。普通益生菌组和复合益生菌组中每只小鼠的益生菌灌服数量为0.30mL。实验结果如下表2.1所示:
表2.1:益生菌对小鼠排便指标的影响
组别 | 首次排黑便时间/min | 粪便颗粒 | 粪便含水量/% |
空白对照组 | 107±13 | 41±7 | 67±3 |
模型对照组 | 157±20 | 29±3 | 61±2 |
益生菌组 | 124±5 | 32±6 | 68±1 |
复合益生菌X1组 | 104±7 | 41±9 | 69±2 |
2小鼠推进实验
给受试样品15天后,各组小鼠禁食不禁水16h。模型对照组和益生菌组和复合益生菌组给予复方地芬诺酯灌胃建立小鼠慢性便秘模型。0.5小时后,分别给予包括空白对照组在内的四组小鼠0.30mL墨汁。25分钟后,脱颈椎处死小鼠,打开腹腔分离肠系膜,剪取上端自幽门、下端至回盲部的场管,置于托盘上,将小肠拉成直线,测量肠管长度为小肠总长度。从幽门至墨汁前沿为墨汁推进长度。墨汁推荐率为:墨汁推荐长度/小肠总长度。
实验结果如表3所示:
表3:益生菌对小鼠墨汁推进率的影响
组别 | 空白对照组 | 模型对照组 | 益生菌组 | 复合益生菌X1组 |
墨汁推进率/% | 69±6 | 47±12 | 58±12 | 68±8 |
通过表3可知,与空白对照组相比,模型对照组在排黑便时间,5小时内配变颗粒和粪便含水量均有显著差异,证明模型建立成功,另外,益生菌组和复合益生菌X1组对便秘情况均有所缓解,复合益生菌X1的缓解情况要由于益生菌组。通过表3可知,益生菌组和复合益生菌X1组的墨汁推进率要显著高于模型组,其中复合益生菌X1组要高于益生菌组,上述实验证明本发明的复合益生菌在缓解便秘方法同样优于普通益生菌。
以上所述,仅为本发明较佳的具体实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,可轻易想到的变化或替换,都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此,本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。
Claims (6)
1.能双向调节便秘的复合益生菌,其特征在于,包括以下质量百分数的组成成分:
2.如权利要求1所述的复合益生菌,其特征在于,包括以下质量百分数的组成成分:
3.如权利要求1所述的复合益生菌,其特征在于,包括以下质量百分数的组成成分:
4.如权利要求1所述的复合益生菌,其特征在于,包括以下质量百分数的组成成分:
5.如权利要求1~4任一所述的复合益生菌在双向调节动物及人的肠道健康领域的应用。
6.如权利要求1~4任一所述的复合益生菌的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
将菌粉形式的各组成成份按照固定比例混合。
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