CN109535178A - 一种子囊霉素的深度纯化方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种高效深度分离纯化子囊霉素的方法，包括以下步骤，将子囊霉素粗提取物进行溶解、过滤；将上述过滤后的子囊霉素溶液上样到装有均粒反相硅胶的层析柱中进行层析；用超纯水和有机溶剂按比例混合作为流动相对目标产物进行洗脱；分段收集目的峰值的溶液并直接通入等体积的有机溶剂进行萃取，对符合要求的组份液进行汇总。本发明用于子囊霉素的深度精纯，仅需一步层析纯化和萃取即可满足子囊霉素纯度大于99.4％，收率大于90.0％的要求，纯化收率高而稳定，同时本发明分离方法简单方便，可用于规模化生产，大大降低生产成本。
Description
技术领域
本发明涉及药物纯化领域，特别是一种高效深度分离纯化子囊霉素的方法。
背景技术
子囊霉素(ascosin)，又名长川霉素，是吸水链霉菌子囊亚种发酵产生的一种由二十三元环组成的大环内酯类免疫抑制剂，子囊霉素将广泛应用于特应性皮炎、变应性接触性皮炎、银屑病、红斑狼疮、扁平苔癣、白癜风等自身免疫疾病的治疗。
结构式如下：
目前国内外专利、文献等对子囊霉素也有相关分离纯化方法的报道。CN201610467120.1提供了一种子囊霉素的分离纯化方法，其中描述了正相柱色谱分离纯化，流动相多为正相试剂，该方法工序步骤多，所用的溶剂危害较大，操作复杂，收率降低。因此有必要对子囊霉素的分离、纯化和制备做更进一步的研究。
发明内容
本发明的目的在于提供一种高效、深度提纯子囊霉素的方法，仅需一步层析纯化和萃取即可满足子囊霉素纯度大于99.4％，收率大于90.0％的要求，纯化收率高而稳定，同时本发明分离方法简单方便，可用于规模化生产，大大降低生产成本。
为达到上述目的，本发明的技术方案如下：一种子囊霉素的深度提纯方法，包括以下步骤：1)将子囊霉素粗提取物进行溶解、过滤；2)将上述过滤后的子囊霉素溶液上样到装有UniSil微球的层析柱中进行层析，以超纯水和有机溶剂的混合液作为流动相对子囊霉素溶液进行等度洗脱；3)分段收集目的峰值的子囊霉素溶液并将收集液直接通入等体积的有机溶剂进行萃取，对符合要求的组份液进行汇总，得到纯化的子囊霉素。
优选的，步骤2)中，所述反相硅胶微球的型号是UniSil C8。
优选的，所述反相硅胶微球的粒径为5-10μm，粒径分布CV＜5％，孔径为
更优选的，所述反相硅胶微球的粒径为10μm，孔径为
优选的，步骤2)中，所述流动相中的有机溶剂为乙腈。
优选的，步骤3)中，所述用于萃取的有机溶剂为乙酸丁酯、二氯甲烷、乙酸乙酯中的任意一种。
更优选的，步骤3)中，所述用于萃取的有机溶剂为二氯甲烷。
优选的，步骤2)上样前，先对层析柱进行平衡，用高浓度有机相进行除杂，后用浓度50％的乙腈-水溶液进行平衡。
优选的，步骤3)中，将目的峰值的收集液直接通入等体积的二氯甲烷中，加入等体积超纯水，混匀，静置分层萃取，取下层液氮吹干，得到纯化的子囊霉素。然后可用适量乙腈溶解，分析其纯度。
优选的，所述子囊霉素粗提取物的纯度在92％～95％。
优选的，所述纯化后的子囊霉素的纯度在99.4％以上。
优选的，所述纯化后的子囊霉素的收率在90.0％以上。
UniSil C8是粒径分别为10μm、孔径的反相硅胶微球，该微球具有严格控制的粒径大小和孔径结构(如图1)，为单分散的(其CV＜5％)、具有孔道结构的微球，使其作为色谱填料时具有很好的针对性，非常适用应用于子囊霉素的深度纯化。
本发明采用有机溶剂和超纯水按比例混合作为流动相，用11个柱体积可完成子囊霉素主峰的洗脱，纯化过程所用流动相较安全、成本较低，纯化周期比较短。
本发明采用单分散UniSil C8作为固定相，仅需一步层析纯化和萃取，可达到子囊霉素纯度大于99.4％，收率大于90.0％。
因此，本发明方法分离纯化子囊霉素，不仅纯度高、收率高且稳定，而且操作简单方便，所用固定相可重复利用，所用流动相可回收利用，大大降低成本，减少环境影响。
附图说明
图1为实施例1使用的UniSil C8微球的的扫描电镜照片。
图2为实施例1提纯前的子囊霉素粗提取物的高效液相色谱分析。
图3为实施例1纯化后的子囊霉素的高效液相色谱分析。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步的描述，但本发明并不限于这些实施例。
一种子囊霉素的分离纯化方法，包括以下步骤：1)将子囊霉素粗提取物进行溶解、过滤；2)将上述过滤后的子囊霉素溶液上样到装有UniSil微球的层析柱中进行层析，以超纯水和有机溶剂的混合液作为流动相对子囊霉素溶液进行等度洗脱；3)分段收集目的峰值的子囊霉素溶液并将收集液直接通入等体积的有机溶剂进行萃取，对符合要求的组份液进行汇总，得到纯化的子囊霉素。
优选的，步骤2)中，所述反相硅胶微球的型号是UniSilC8。
优选的，所述反相硅胶微球的粒径为10μm，孔径为
优选的，步骤2)中，所述流动相的有机溶剂为乙腈。
优选的，步骤3)中，所述用于萃取的有机溶剂为二氯甲烷。
优选的，步骤2)上样前，先对层析柱进行平衡，用高浓度有机相进行除杂，后用浓度50％的乙腈-水溶液进行平衡。
优选的，步骤3)中，将收集液直接通入等体积的二氯甲烷中，加入等体积超纯水，混匀，静置分层萃取，取下层液氮吹干，得到纯化的子囊霉素。然后用适量乙腈溶解，分析其纯度。
实施例1
取纯度为93.114％的子囊霉素粗提取物，加入50％乙腈-水溶液，溶解，溶液中子囊霉素含量为10mg/mL。待溶液澄清后，用孔径为0.45μm滤膜过滤，收集滤液待用。
采用20×250mm的色谱柱，UniSil C8微球(苏州纳微科技股份有限公司生产)作为层析柱填料，装柱体积为78.5m1。对层析柱进行柱前预处理，先用高浓度有机相进行除杂，后用浓度50％的乙腈进行平衡。然后采用50％乙腈-水混合溶液作为流动相进行等度洗脱，流速控制在20ml/min。
分段收集目的峰值的子囊霉素溶液，将收集液直接通入等体积的二氯甲烷溶液中萃取，对符合要求的组份液进行汇总，经高效液相色谱分析，洗脱液中子囊霉素的纯度大于99.4％，收率大于90.0％。
图2是提纯前的子囊霉素粗提取物的高效液相色谱分析，可见有一定的杂质。图3是提纯后的子囊霉素高效液相色谱分析，可见杂质非常少，杂峰非常小。
实施例2
取纯度为94.215％的子囊霉素粗提取物，加入50％乙腈-水溶液，溶解，溶液中子囊霉素含量为10mg/mL。待溶液澄清后，用孔径为0.45μm滤膜过滤，收集滤液待用。
采用20×250mm的色谱柱，UniSil C8微球(苏州纳微科技股份有限公司生产)作为层析柱填料，装柱体积为78.5ml。对层析柱进行柱前预处理，先用高浓度有机相进行除杂，后用浓度50％的乙腈进行平衡。然后采用50％乙腈-水混合溶液作为流动相进行等度洗脱，流速控制在20ml/min。
分段收集目的峰值的子囊霉素溶液，将收集液直接通入等体积的二氯甲烷溶液中萃取，对符合要求的组份液进行汇总，经高效液相色谱分析，洗脱液中子囊霉素的纯度大于99.5％，收率大于90.4％。
对比例
取纯度为94.215％的子囊霉素粗提取物，加入50％乙腈-水溶液，溶解，溶液中子囊霉素含量为10mg/mL。待溶液澄清后，用孔径为0.45μm滤膜过滤，收集滤液待用。
采用20×250mm的色谱柱，UniSil C18微球作为层析柱填料，装柱体积为78.5ml。对层析柱进行柱前预处理，先用高浓度有机相进行除杂，后用浓度50％的乙腈进行平衡。然后采用50％乙腈-水混合溶液作为流动相进行等度洗脱，流速控制在20ml/min。
分段收集目的峰值的子囊霉素溶液，将收集液直接通入等体积的二氯甲烷溶液中萃取，对符合要求的组份液进行汇总，经高效液相色谱分析，洗脱液中子囊霉素的纯度99.0％，收率53.8％。
本发明将单分散UniSil C8作为固定相用于子囊霉素的深度精纯，仅需一步层析纯化和萃取即可实现对子囊霉素的深度提纯，满足子囊霉素纯度大于99.4％，收率大于90.0％的要求，纯化收率高而稳定，同时本发明分离方法简单方便，可用于规模化生产，大大降低生产成本，减少环境影响。
以上所述的仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种子囊霉素的深度提纯方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将子囊霉素粗提取物进行溶解、过滤；2)将上述过滤后的子囊霉素溶液上样到装有反相硅胶微球的层析柱中进行层析，以超纯水和有机溶剂的混合液作为流动相对子囊霉素溶液进行等度洗脱；3)分段收集目的峰值的子囊霉素溶液，并用有机溶剂进行萃取，对符合要求的组份液进行汇总，得到纯化的子囊霉素。
2.如权利要求1所述的子囊霉素的深度提纯方法，其特征在于，步骤2)中，所述反相硅胶微球型号为UniSil C8。
3.如权利要求2所述的子囊霉素的深度提纯方法，其特征在于，所述反相硅胶微球的粒径为5-10μm，粒径分布CV＜5％，孔径为
4.如权利要求3所述的子囊霉素的深度提纯方法，其特征在于，所述反相硅胶微球的粒径为10μm，孔径为
5.如权利要求1所述的子囊霉素的深度提纯方法，其特征在于，步骤2)中，所述流动相中的有机溶剂为乙腈。
6.如权利要求1所述的子囊霉素的深度提纯方法，其特征在于，步骤3)中，所述用于萃取的有机溶剂可以为乙酸丁酯、二氯甲烷、乙酸乙酯中的任意一种。
7.如权利要求1所述的子囊霉素的深度提纯方法，其特征在于，步骤2)上样前，先对层析柱进行平衡，用高浓度有机相进行除杂，后用浓度50％乙腈-水溶液进行平衡。
8.如权利要求1所述的子囊霉素的深度提纯方法，其特征在于，步骤3)中，将目的峰值的收集液直接通入等体积的二氯甲烷中，加入等体积超纯水，混匀，静置分层萃取，取下层液氮吹干，得到纯化的子囊霉素。
9.如权利要求1～6任一所述的子囊霉素的深度提纯方法，其特征在于，所述子囊霉素粗提取物的纯度在92％～95％；
所述纯化后的子囊霉素的纯度在99.4％以上。
10.如权利要求1～6任一所述的子囊霉素的深度提纯方法，其特征在于，所述纯化的子囊霉素的收率在90.0％以上。
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| PATIL, NITIN S.等: "Procedure for chromatography involving sample solvent with higher elution strength than the mobile phase", 《JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY A》 * |
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