CN109526873A - 一种喂食秀丽线虫油脂或脂溶性物质的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种喂食秀丽线虫油脂或脂溶性物质的方法，其包括如下步骤：配制一定浓度的蛋白溶液，将油脂或脂溶性物质与蛋白溶液混合，经过均质、高速剪切或超声等手段制备成乳液，最后将上述乳液按一定的比例加入到秀丽线虫液态培养液中进行培养。本发明解决了油脂或脂溶性物质无法高效被秀丽线虫摄入的问题，方法操作简便快捷，为利用秀丽线虫作为模型评价油脂或脂溶性物质的营养功能提供解决方案。
Description
技术邻域
本发明属于生物技术邻域，涉及一种喂食秀丽线虫油脂或脂溶性物质的方法的建立。
技术背景
秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans，C.elegans)是一种无毒无害、可以独立生存的线虫。其个体小，成体仅1.5mm长，为雌雄同体(hermaphrodites)，雄性个体仅占群体的0.2％，可自体受精或双性生殖；在20℃下平均生活史为3.5天，平均繁殖力为300-350个；但若与雄虫交配，可产生多达1400个以上的后代。自1965年起，科学家Sydney Brenner利用线虫作为分子生物学和发育生物学研究领域的模式生物。
食用油也称为“食油”，是指在制作食品过程中使用的，动物或者植物油脂。常温下为液态。由于原料来源、加工工艺以及品质等原因，常见的食用油多为植物油脂，包括粟米油、菜籽油、花生油、火麻油、玉米油、橄榄油、山茶油、棕榈油、芥花子油、葵花子油、大豆油、芝麻油、亚麻籽油(胡麻油)、葡萄籽油、核桃油、牡丹籽油等等。
秀丽线虫作为一种常用的模型生物，由于其独特的摄食习惯(以细菌为食)和生活环境 (亲水性的培养基)，使得秀丽线虫在研究油脂的营养方面具有诸多困难。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供了一种喂食秀丽线虫油脂或脂溶性物质的方法。
本发明的目的是通过以下方式实现的：
一种喂食秀丽线虫油脂或脂溶性物质的方法，包括如下步骤，
步骤一：配制蛋白溶液；
步骤二：将油脂或脂溶性物质加入到步骤一中制得的蛋白溶液中，获得混合溶液；
步骤三：将步骤二中制得的混合溶液进行微粒化、均匀化处理，制得乳液；
步骤四：将步骤三制得的乳液加入到秀丽线虫培养基中，进行秀丽线虫的培养。
优选地，步骤一中的蛋白溶液配制方法为：称取一定量的蛋白、叠氮化钠，加入去离子水溶解，搅拌。
优选地，步骤一中配制的蛋白溶液浓度为0.01％～50％，叠氮化钠的浓度为0～0.1％。
优选地，步骤一中的蛋白溶液由一种或多种蛋白配制，所述蛋白包括但不局限于乳清蛋白、酪蛋白酸钠、酪蛋白、大豆蛋白、豌豆蛋白、卵清蛋白、卵白蛋白。
优选地，步骤一中配制蛋白溶液搅拌的时间为0.1～48小时。
优选地，步骤二中的油脂或脂溶性物质与蛋白溶液的质量比为1:100～50:100。
优选地，步骤二中的微粒化、均匀化处理包括但不局限于均质、高速剪切或超声。
优选地，高速剪切的速率为5000～25000r/min，剪切的时间为0.5～30分钟。超声的频率为20kHz～60kHz，强度为30-550W cm-2，时间为0.1～10分钟，保持低温。均质的压力为 20～300Mpa，均质一次及以上，保持低温。
优选地，步骤三中的乳液粒径范围为100～500nm。
优选地，步骤四中秀丽线虫培养基为秀丽线虫液态培养基，乳液加入量为1％～20％。使用蛋白作为乳液，既能降低水层和油层的表面张力，又能降低水层和空气的表面张力，总体来说，易于形成稳定的乳液，可以加入到线虫液态培养基中，乳液可以被秀丽线虫吞食。
本发明解决了油脂或脂溶性物质在秀丽线虫培养基中无法高效被秀丽线虫摄入的问题，方法操作简单快捷，为利用秀丽线虫作为体外模型评价油脂或脂溶性物质营养提供途径。
附图说明
图1为不同超声时间和超声功率对乳液粒径的影响
其中，SCN为酪蛋白酸钠；WPI为乳清浓度蛋白；SPI为大豆蛋白。
图2为不同粒径和乳液中油的不同浓度对秀丽线虫摄入的影响
其中，RFU/500worm为500条秀丽线虫的荧光值；200nm、300nm、400nm分别为乳液粒径为200纳米，300纳米，400纳米。
图3不同种类的油制备的蛋白乳液对秀丽线虫摄入的影响
其中，RFU/500worm为500条线虫的荧光值；MCT为中碳链甘三酯；olive oil为橄榄油； soybean oil为大豆油；Algal oil为藻油。
具体实施方式
以下通过案例进一步对本发明的技术方案进行说明，应理解以下仅为本发明示例性说明，并不局限与本发明权利要求的保护范围。
实施例1喂食秀丽线虫油脂的基本方法
将酪蛋白酸钠溶于0.02％叠氮化钠的蒸馏水，1克酪蛋白酸钠溶于100毫升去离子水中，配制成蛋白溶液，将蛋白溶液室温下搅拌2小时。
称取10g油，加入到100毫升蛋白溶液。
将混合溶液高速剪切20000转/分钟，剪切2分钟；然后，将超声探头深入溶液，据底面 3mm，用20kHz的超声探头，强度为40～80W cm-2的条件下，进行超声。处理时间分别为2分钟，3分钟，4分钟，5分钟和6分钟，得到乳液。
实施例2：蛋白乳液性质的实验
实验与仪器：磁力搅拌器，超声乳化仪，马尔文2000粒度分布仪，高速离心机均为市购常规仪器。
蛋白乳液平均粒径测定
取实施例1制备的蛋白乳液，通过马尔文粒度分布仪器进行测定。使用去离子水作为分散剂，参数设置为温度25℃，用马尔文粒度仪测量乳液乳滴。
图1为不同超声时间和超声功率对乳液粒径的影响，可以发现超声功率的不同和超声时间的不同对蛋白乳液的粒径有明显影响。
实施例3：秀丽线虫摄入实验
实验与仪器：磁力搅拌器，超声乳化仪，马尔文2000粒度分布仪，荧光酶标仪，高速离心机均为市购常规仪器。
取实施例1制备的蛋白乳液，通过尼罗红进行染色。取0.01Mm,0.1Mm,1mM染色乳液加入到秀丽线虫液态培养基中，加入秀丽线虫喂养24小时。通过此方法秀丽线虫成功摄入了油脂。
图2为不同粒径和乳液中油的不同浓度对秀丽线虫摄入的影响，可以发现随着乳液浓度的增加秀丽线虫的摄入量逐渐增加。随着乳液粒径的增加秀丽线虫的摄入量逐渐减小。
图3为不同种类的油制备的蛋白乳液对秀丽线虫摄入的影响，可以发现秀丽线虫对油脂的摄入量会随油种类的变化而变化。
Claims (12)
1.一种喂食秀丽线虫油脂或脂溶性物质的方法，其特征在于，包括如下步骤，
步骤一：配制蛋白溶液；
步骤二：将油脂或脂溶性物质加入到步骤一制得的蛋白溶液中，获得混合溶液；
步骤三：将步骤二制得的混合溶液进行微粒化、均匀化处理，制得乳液；
步骤四：将步骤三制得的乳液加入到秀丽线虫培养基中，进行秀丽线虫的培养。
2.根据权利要求1所述的一种喂食秀丽线虫油脂或脂溶性物质的方法，其特征在于，步骤一中的蛋白溶液配制方法为：称取一定量的蛋白、叠氮化钠，加入去离子水溶解，搅拌。
3.根据权利要求1所述的一种喂食秀丽线虫油脂或脂溶性物质的方法，其特征在于，步骤一中配制的蛋白溶液浓度为0.01％～50％，叠氮化钠的浓度为0～0.1％。
4.根据权利要求1所述的一种喂食秀丽线虫油脂或脂溶性物质的方法，其特征在于，步骤一中配制蛋白溶液搅拌的时间为0.1～48小时。
5.根据权利要求1-4中任一所述的一种喂食秀丽线虫油脂或脂溶性物质的方法，其特征在于，步骤一中的蛋白溶液由一种或多种蛋白配制，所述蛋白包括但不局限于乳清蛋白、酪蛋白酸钠、酪蛋白、大豆蛋白、豌豆蛋白、卵清蛋白、卵白蛋白。
6.根据权利要求1所述的一种喂食秀丽线虫油脂或脂溶性物质的方法，其特征在于，步骤二中的油脂或脂溶性物质与蛋白溶液的质量比为1:100～50:100。
7.根据权利要求1所述的一种喂食秀丽线虫油脂或脂溶性物质的方法，其特征在于，步骤二中的微粒化、均匀化处理包括但不局限于均质、高速剪切或超声。
8.根据权利要求7所述的一种喂食秀丽线虫油脂或脂溶性物质的方法，其特征在于高速剪切的速率为5000～25000r/min，剪切的时间为0.5～30分钟。
9.根据权利要求7所述一种喂食秀丽线虫油脂或脂溶性物质的方法，其特征在于，超声的频率为20kHz～60kHz，强度为30-550W cm-2，时间为0.1～10分钟，保持低温。
10.根据权利要求7所述一种喂食秀丽线虫油脂或脂溶性物质的方法，其特征在于，均质的压力为20～300Mpa，均质一次及以上，保持低温。
11.根据权利要求1所述所述一种喂食秀丽线虫油脂或脂溶性物质的方法，其特征在于，步骤三中的乳液粒径范围为100～500nm。
12.根据权利要求1所述所述一种喂食秀丽线虫油脂或脂溶性物质的方法，其特征在于，步骤四中秀丽线虫培养基为秀丽线虫液态培养基，乳液加入量为1％～20％。
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2018
- 2018-10-19 CN CN201811222503.8A patent/CN109526873A/zh active Pending
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