CN109517755B - 一株耐酸地衣芽孢杆菌及其在堆肥中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一株较低pH条件下可高效降解有机物的耐酸地衣芽孢杆菌及其在堆肥中的应用，属环境生物技术领域。本发明提供的复合微生物菌剂的活菌总数为1.0×109‑1.0×1010CFU/mL或者CFU/g。本发明所提供的菌剂中耐酸地衣芽孢杆菌B105具有良好的耐酸的能力，可在较低pH条件下高效降解有机物，与其他各菌株可良好共生，复配比例科学合理，使用该菌剂堆制堆肥，堆体达到高温所需时间短，在pH较低时蛋白质与多糖的降解速度快且降解率高，不仅可有效缓解pH较低导致的堆肥速度慢的问题，还可改善堆肥的无害化效果，具有较为广阔的应用前景。

Description

一株耐酸地衣芽孢杆菌及其在堆肥中的应用
技术领域
本发明涉及一株耐酸地衣芽孢杆菌及其在堆肥中的应用，属环境生物技术领域。
背景技术
食品厂污水处理剩余污泥的有机物含量高，大多为蛋白质、多糖、脂肪和纤维素等，不含有毒有害物质，同时具有如下特点：食品工业废水处理污泥的含水率较高，可以达到80％～90％，导致收集、运输和处理的过程有较大的困难；其渗滤液污染力较强，会通过地表径流和土壤渗透的方式污染地表水、地下水和土壤；有机质含量高，在95％以上，并且其热量低，营养丰富，无毒性容易被微生物利用，易腐败发臭。利用食品厂污水处理产生的剩余污泥制取生物有机肥，可解决其带来的污染问题，同时产生一定的经济效益，是实现食品厂剩余污泥资资源化的一条切实可行的有效途径。
然而，当堆肥原料中有机物含量较高时，好氧堆肥过程需要的氧量较大，一旦供氧量不足，即会导致有机酸累积，堆肥物料酸化，微生物活性降低，有机物中的化学能无法彻底释放，堆体温度较难达到55℃以上高温，堆肥效果较差，更无法实现堆肥无害化。因此，筛选较低pH条件下可高效降解有机物的耐酸微生物菌种、研发含有不同微生物菌种及复配比例的复合微生物菌剂对加快堆肥化进程、提高堆肥化效率和及无害化效果、改善堆肥成品品质意义重大。
发明内容
本发明的第一个目的是提供较低pH条件下可高效降解有机物的耐酸地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis strain)B105，已于2018年7月13日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No:M 2018470，保藏地址为中国，武汉，武汉大学。该菌株的发酵培养条件为：温度30-40℃，通气量0.8-1.5vvm，搅拌转速200-600r/min，溶解氧大于20％，pH值6.5-7.5。
本发明的第二个目的是提供含有上述耐酸地衣芽孢杆菌B105的微生物菌剂。
在本发明的一种实施方式中，所述堆肥复合微生物菌剂含有地衣芽孢杆菌B105、蔬菜芽孢杆菌(Bacillus oleronius)、热噬淀粉芽孢杆菌(Bacillus thermoamylovoransstrain)B202、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis strain)B211与深绿木霉(Trichodermaatroviride)组成。
在本发明的一种实施方式中，所述蔬菜芽孢杆菌(Bacillus oleronius)与深绿木霉(Trichoderma atroviride)可选用商业化的菌株，例如Bacillus oleronius DSM 9356、Trichoderma atroviride IMI 206040。
在本发明的一种实施方式中，所述热噬淀粉芽孢杆菌(Bacillusthermoamylovorans strain)B202，已于2018年7月13日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No:M2018471，保藏地址为中国，武汉，武汉大学。
在本发明的一种实施方式中，所述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis strain)B211，已于2018年7月13日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No:M2018475，保藏地址为中国，武汉，武汉大学。
在本发明的一种实施方式中，所述地衣芽孢杆菌B105、蔬菜芽孢杆菌、热噬淀粉芽孢杆菌B202、枯草芽孢杆菌B211与深绿木霉的活菌数之比为0.5-1.5:450-480:1800-2400:20-28:25-36。
在本发明的一种实施方式中，所述微生物菌剂的活菌总数为1.0×109-1.0×1010CFU/mL。
在本发明的一种实施方式中，所述微生物菌剂的活菌总数为1.0×109-1.0×1010CFU/g。
在本发明的一种实施方式中，所述微生物菌剂按如下方法制备：将耐酸地衣芽孢杆菌B105、蔬菜芽孢杆菌、热噬淀粉芽孢杆菌B202、枯草芽孢杆菌B211与深绿木霉分别接种至培养基中，获得耐酸地衣芽孢杆菌B105、蔬菜芽孢杆菌、热噬淀粉芽孢杆菌B202、枯草芽孢杆菌B211与深绿木霉的发酵液，将获得的发酵液按照比例混合，添加载体辅料，得到包含耐酸地衣芽孢杆菌B105的液态复合微生物菌剂。
在本发明的一种实施方式中，所述载体辅料包括但不限于褐煤、沸石、石粉中的一种或几种。
在本发明的一种实施方式中，所述复合微生物菌剂的制备方法为将耐酸地衣芽孢杆菌B105、蔬菜芽孢杆菌、热噬淀粉芽孢杆菌B202、枯草芽孢杆菌B211与深绿木霉的发酵液按比例混合，添加粉碎秸秆、炭化秸秆、麸皮中的一种或几种，热风干燥后，得到包含耐酸地衣芽孢杆菌B105的固态复合微生物菌剂。
在本发明的一种实施方式中，所述耐酸地衣芽孢杆菌B105、蔬菜芽孢杆菌、热噬淀粉芽孢杆菌B202与枯草芽孢杆菌B211的发酵液是将耐酸地衣芽孢杆菌B105、蔬菜芽孢杆菌、热噬淀粉芽孢杆菌B202与枯草芽孢杆菌B211分别接种至高温灭菌后的营养肉汤培养基中，接种量为发酵培养基体积的3％-10％(v/v)，静置培养20-35h；所述耐酸地衣芽孢杆菌B105与枯草芽孢杆菌B211的培养温度为30-40℃；所述耐蔬菜芽孢杆菌与热噬淀粉芽孢杆菌B202的培养温度为30-60℃；当活菌数大于或等于1×108CFU/mL时，获得所述耐酸地衣芽孢杆菌B105、蔬菜芽孢杆菌、热噬淀粉芽孢杆菌B202与枯草芽孢杆菌B211的发酵液。
在本发明的一种实施方式中，所述营养肉汤培养基为高温灭菌后的营养肉汤培养基。
在本发明的一种实施方式中，所述营养肉汤培养基的成分包含牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，氯化钠5.0g，水1000mL。
在本发明的一种实施方式中，所述获得深绿木霉的发酵液为将深绿木霉分别接种至高温灭菌后的马铃薯葡萄糖培养基中，接种量为发酵培养基体积的3％-10％(v/v)，静置培养20-30h，培养温度为20-30℃；当活菌数大于或等于1×108CFU/mL时，获得所述深绿木霉的发酵液。
在本发明的一种实施方式中，所述马铃薯葡萄糖培养基为高温灭菌后的马铃薯葡萄糖培养基。
在本发明的一种实施方式中，所述马铃薯葡萄糖培养基的成分包含马铃薯浸粉6.0g，葡萄糖20.0g，水1000mL。
本发明的第三个目的是提供所述微生物菌剂的应用。
在本发明的一种实施方式中，所述应用是用于食品厂污水处理剩余污泥与秸秆混合堆肥。
在本发明的一种实施方式中，所述应用包含如下步骤：
(1)将所述复合微生物菌剂和堆肥原料按0.5-1：100的比例进行混合；
(2)将混合物堆制堆肥，测量堆体温度，按照温度变化进行翻堆。
在本发明的一种实施方式中，所述步骤(2)为将所述混合物堆制堆肥，每天早上8:00和下午6:00测量堆体温度，当温度高于55℃时，每天翻堆一次，随着堆制时间的延长，堆体温度开始下降，当温度低于40℃时，停止翻堆，堆制结束。
本发明还要求保护所述地衣芽孢杆菌B105在食品、生物、化工、环境领域的应用。
本发明的有益效果：
(1)本发明公开了一株较低pH条件下可高效降解有机物的耐酸地衣芽孢杆菌B105。该菌株耐酸，可在较低pH条件下高效降解有机物，具有较好的耐酸生长能力和较为广阔的市场应用前景。
(2)本发明提供的这种堆肥复合微生物菌剂，可用于食品厂污水处理剩余污泥与秸秆混合堆制堆肥，较好实现剩余污泥与秸秆混合物的资源化利用。
(3)本发明提供的这种复合微生物菌剂，堆制12h时，堆体pH降低为5.08-5.69，但堆制7d后，堆体的蛋白质与多糖降解率分别达71.9％-85.6％与77.5％-89.7％，而对照实验中经历12h堆制pH降到5.10后，堆制7d时蛋白质与多糖降解率仅分别为29.7％％与17.2％。
(4)本发明提供的这种微生物菌剂在堆制堆肥时优势明显，可有效缩短堆体升温时间，使得堆体达到高温55℃所需时间由对照实验的72h缩短至22-38h。
(5)本发明提供的这种微生物菌剂在堆制堆肥时优势明显，可有效提高堆体的最高温度，使得堆体达到的最高温度由对照实验的58℃提高至61-69℃。
(6)本发明提供的这种微生物菌剂在堆制堆肥时优势明显，可改善堆肥的无害化效果，堆肥结束时，粪大肠菌群数与蛔虫卵死亡率分别为82-98个/g与95.2％-97.3％，而对照实验分别为106个/g与94.0％。
生物材料保藏
地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis strain)B105，已于2018年7月13日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No:M 2018470，保藏地址为中国，武汉，武汉大学。
热噬淀粉芽孢杆菌(Bacillus thermoamylovorans strain)B202，已于2018年7月13日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No:M 2018471，保藏地址为中国，武汉，武汉大学。
枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis strain)B211，已于2018年7月13日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No:M 2018475，保藏地址为中国，武汉，武汉大学。
具体实施方式
检测方法参见我国生物有机肥质量标准(NY 884-2012)。
(1)蛋白质含量的检测方法：采用凯氏定氮法进行检测，即在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气蒸馏出来并为过量的硼酸液吸收，再以标准盐酸滴定，就可计算出样品中的氮量，进而得到蛋白质含量。蛋白质的降解率为R(％)：
R＝[(m1-m2)/m1/*100％
其中，m1为起始原料中蛋白质的质量(mg)，m2为堆制一段时间后物料中蛋白质的质量(mg)。
(2)粪大肠菌群数的检测方法：采用肥料中粪大肠菌群数的检测方法(GB/T19524.1-2004)进行检测。
(3)蛔虫卵死亡率的检测方法：采用肥料中粪大肠菌群数的检测方法(GB/T19524.2-2004)进行检测。
具体实施方式中，蔬菜芽孢杆菌(Bacillus oleronius)与深绿木霉(Trichodermaatroviride)可选用商业化的菌株Bacillus oleronius DSM 9356、Trichodermaatroviride IMI 206040，但不受限于上述菌株。
实施例1耐酸地衣芽孢杆菌B105的筛选
(1)将食品厂污水处理的剩余污泥与玉米秸秆按质量比1.5：1的比例混合，接种5％(w/w)的江苏省无锡市某区夏季腐叶，混合物料的含水率为55％，C/N比为25，混合均匀后堆制堆肥，每天早上8:00和下午6:00测量堆体温度，当温度高于55℃时，每天翻堆一次，随着堆制时间的延长，堆体温度开始下降，当温度低于40℃时，停止翻堆，取样；
(2)称取堆肥样品10g，放入装有90mL灭菌水的三角烧瓶中，120r/min摇床震荡1h，得到10-1稀释液，并依次制成10-4、10-5和10-6的三种堆肥样品稀释液，分别吸取上述三种稀释液100μL均匀涂布于营养琼脂培养基、高氏一号琼脂培养基和马铃薯琼脂培养基平板上，分别置于37℃的培养箱中倒置培养1～7d，然后反复划线分离，直至获得纯菌株；
(3)将适量pH为4.5的稀盐酸直接滴浸于菌落表面，继续培养，每隔2h观察一次菌落，若菌落继续生长且颜色正常，则该菌株为耐酸菌株，并可据菌落大小及颜色判断菌株的耐酸能力，菌落越大、越饱满且颜色越正常耐酸能力越强，最终获得耐酸能力最强的纯菌株。
实施例2耐酸地衣芽孢杆菌B105的鉴定
在营养琼脂培养基平板上于37℃培养过夜后，形成白色，表面湿润，波状，边缘不规则的菌落，用光学显微镜观察呈革兰氏染色阳性，杆状，产芽孢。
采用16SrDNA测序进行分类学分子鉴定，将测序结果(1471bp)在NCBI中进行Blast比对，发现其16SrDNA碱基序列与地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis strain)的相似性最高。
综合上述形态特征、生理生化特征及遗传性特征，可鉴定该耐酸菌株为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis strain)，将其命名为地衣芽孢杆菌B105，并于2018年7月13日保藏于中国典型培养物保藏中心，菌种保藏号为CCTCC No.M 2018470。
将菌株接种至营养琼脂培养基平板上，37℃培养24h，然后转接于营养肉汤培养基中，37℃培养24h后，采用盐酸溶液将发酵液pH调节为1.8，静置24h后，对微生物浓度进行测定，结果显示，菌株(含芽胞)的存活率为72.3％。
实施例3耐酸地衣芽孢杆菌B105菌种活化与培养
将耐酸地衣芽孢杆菌B105接种至营养琼脂培养基平板上，37℃培养24h。营养琼脂培养基的组成为牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，氯化钠5.0g。
将活化好的菌种接种于装有100mL液体培养基的250mL摇瓶中，37℃条件下，450r/min振荡培养24h。摇瓶培养基组成为牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，氯化钠5.0g，pH为7.0。
将摇瓶培养液按体积比3％-10％接种至3L发酵罐中，搅拌转速为200-600r/min，通气量为0.8-1.5vvm，溶解氧大于20％，30℃-40℃条件下发酵培养20-35h。发酵罐培养基组成为牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，葡萄糖30g，磷酸二氢钾2.0g，氯化钠5.0g，pH为7.0。
实施例4含耐酸地衣芽孢杆菌B105的液态复合微生物菌剂的制备
堆肥复合微生物菌剂由耐酸地衣芽孢杆菌B105的发酵液与其他菌株发酵液按照不同活菌数配比复配而成，具体制备方法如下：
(1)耐酸地衣芽孢杆菌B105、蔬菜芽孢杆菌、热噬淀粉芽孢杆菌B202与枯草芽孢杆菌B211分别接种至高温灭菌后的营养肉汤培养基中，接种量为发酵培养基体积的3％-10％(v/v)，培养20-35h；所述耐酸地衣芽孢杆菌B105与枯草芽孢杆菌B211的培养温度为30-40℃；所述耐蔬菜芽孢杆菌与热噬淀粉芽孢杆菌B202的培养温度为30-60℃；当活菌数大于或等于1×108CFU/mL时，获得所述耐酸地衣芽孢杆菌B105、蔬菜芽孢杆菌、热噬淀粉芽孢杆菌B202与枯草芽孢杆菌B211的发酵液；
(2)深绿木霉的发酵液为将深绿木霉接种至高温灭菌后的马铃薯葡萄糖琼脂培养基中，接种量为发酵培养基体积的3％-10％(v/v)，培养20-30h，培养温度为20-30℃；当活菌数大于或等于1×108CFU/mL时，获得所述深绿木霉的发酵液.
(3)将获得的耐酸地衣芽孢杆菌B105、蔬菜芽孢杆菌、热噬淀粉芽孢杆菌B202、枯草芽孢杆菌B211与深绿木霉的发酵液按一定比例混合，使耐酸地衣芽孢杆菌B105、蔬菜芽孢杆菌、热噬淀粉芽孢杆菌B202、枯草芽孢杆菌B211与深绿木霉的活菌数之比为0.5-1.5:450-480:1800-2400:20-28:25-36，添加发酵液质量0.1～10％的市售的载体辅料褐煤、沸石、石粉中的一种或几种，获得包含较低pH条件下可高效降解有机物的耐酸地衣芽孢杆菌B105的活菌总数为1.0×109-1.0×1010CFU/mL的液态复合微生物菌剂。
实施例5含耐酸地衣芽孢杆菌B105的固态复合微生物菌剂的制备
将获得的耐酸地衣芽孢杆菌B105、蔬菜芽孢杆菌、热噬淀粉芽孢杆菌B202、枯草芽孢杆菌B211与深绿木霉的发酵液按一定比例混合，使耐酸地衣芽孢杆菌B105、蔬菜芽孢杆菌、热噬淀粉芽孢杆菌B202、枯草芽孢杆菌B211与深绿木霉的活菌数之比为0.5-1.5:450-480:1800-2400:20-28:25-36，添加粉碎秸秆、炭化秸秆、麸皮中的一种或几种，热风干燥后，得到包含较低pH条件下可高效降解有机物的耐酸地衣芽孢杆菌B105的固态复合微生物菌剂。
实施例6堆肥复合微生物菌剂的应用
将食品厂污水处理剩余污泥与玉米秸秆按1.5：1比例混合，混合物料的含水率为55％，C/N比为30，将含耐酸地衣芽孢杆菌B105、蔬菜芽孢杆菌、热噬淀粉芽孢杆菌B202、枯草芽孢杆菌B211与深绿木霉的活菌数之比为1:475:2185:24:29的液态复合微生物菌剂与混合物料按照质量配比为0.8：100的比例混合，菌剂添加量为0.8％，混合均匀后，堆制堆肥，每天早上8:00和下午6:00测量两个堆体的温度，当温度高于55℃时，每天翻堆一次，随着堆制时间的延长，堆体温度开始下降，当温度低于40℃时，停止翻堆，取样，测定堆肥各项质量指标。结果表明，堆制12h时，堆体pH降低为5.23；堆体达到最高温度所需时间为24h，最高温度为66℃；堆制7d后，堆体的蛋白质与多糖降解率分别达80.9％与88.6％；堆肥结束时，粪大肠菌群数与蛔虫卵死亡率分别为90个/g与95.9％。
实施例7堆肥复合微生物菌剂的应用
将食品厂污水处理剩余污泥与玉米秸秆按2.5：1比例混合，混合物料的含水率为55％，C/N比为30，将耐酸地衣芽孢杆菌B105、蔬菜芽孢杆菌、热噬淀粉芽孢杆菌B202、枯草芽孢杆菌B211与深绿木霉的活菌数之比为1.5:480:2400:28:36的液态复合微生物菌剂与混合物料按照质量配比为1：100的比例混合，菌剂添加量为1％，混合均匀后，堆制堆肥，每天早上8:00和下午6:00测量两个堆体的温度，当温度高于55℃时，每天翻堆一次，随着堆制时间的延长，堆体温度开始下降，当温度低于40℃时，停止翻堆，取样，测定堆肥各项质量指标。结果表明，堆制12h时，堆体pH降低为5.08；堆体达到最高温度所需时间为38h，最高温度为61℃；堆制7d后，堆体的蛋白质与多糖降解率分别达71.9％与77.5％；堆肥结束时，粪大肠菌群数与蛔虫卵死亡率分别为98个/g与95.2％。
实施例8堆肥复合微生物菌剂的应用
将食品厂污水处理剩余污泥与玉米秸秆按2.5：1比例混合，混合物料的含水率为55％，C/N比为30，将耐酸地衣芽孢杆菌B105、蔬菜芽孢杆菌、热噬淀粉芽孢杆菌B202、枯草芽孢杆菌B211与深绿木霉的活菌数之比为0.5:450:1800:20:25的固态复合微生物菌剂与混合物料按照质量配比为0.5：100的比例混合，菌剂添加量为0.5％，混合均匀后堆制堆肥，每天早上8:00和下午6:00测量两个堆体的温度，当温度高于55℃时，每天翻堆一次，随着堆制时间的延长，堆体温度开始下降，当温度低于40℃时，停止翻堆，取样，测定堆肥各项质量指标。结果表明，堆制12h时，堆体pH降低为5.69；堆体达到最高温度所需时间为22h，最高温度为69℃；堆制7d后，堆体的蛋白质与多糖降解率分别达85.6％与89.7％；堆肥结束时，粪大肠菌群数与蛔虫卵死亡率分别为82个/g与97.3％。
对比例1
将食品厂污水处理剩余污泥与玉米秸秆按1.5：1比例混合，混合物料的含水率为55％，C/N比为30，将不含耐酸地衣芽孢杆菌B105的上述液态复合微生物菌剂与混合物料按照质量配比为0.8：100的比例混合，菌剂添加量为0.8％，其中，蔬菜芽孢杆菌、热噬淀粉芽孢杆菌B202、枯草芽孢杆菌B211与深绿木霉的活菌数之比为475:2185:24:29，混合均匀后，堆制堆肥，每天早上8:00和下午6:00测量两个堆体的温度，当温度高于55℃时，每天翻堆一次，随着堆制时间的延长，堆体温度开始下降，当温度低于40℃时，停止翻堆，取样，测定堆肥各项质量指标。结果表明，堆制12h时，堆体pH降低为5.10；堆体达到最高温度所需时间为72h，最高温度为58℃；堆制7d后，堆体的蛋白质与多糖降解率分别达29.7％与17.2％；堆肥结束时，粪大肠菌群数与蛔虫卵死亡率分别为106个/g与94.0％。可见，当堆体中不含有耐酸地衣芽孢杆菌B105时，堆体中的微生物活性受到低pH抑制，代谢活动微弱，致使堆体达最高温度所需时间较长，有机物降解率明显下降，同时，堆体最高温度降低，55℃以上持续时间缩短，堆肥产品的无害化程度降低。
对比例2
具体实施方式同实施例6，区别在于，耐酸地衣芽孢杆菌B105、蔬菜芽孢杆菌、热噬淀粉芽孢杆菌B202、枯草芽孢杆菌B211与深绿木霉的活菌数之比为如表1所示。结果表明，堆制12h时，堆体pH降低为5.20；堆体未达到55℃的高温，最高温度为46；堆制7d后，堆体的蛋白质与多糖降解率分别达32.4％和22.8％；堆肥结束时，粪大肠菌群数与蛔虫卵死亡率分别为990和54.2％。
表1
Figure BDA0001872032270000081
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

Claims (10)

1.一株较低pH条件下可高效降解有机物的耐酸地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)B105，已于2018年7月13日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No:M 2018470，保藏地址为中国，武汉，武汉大学。
2.含有权利要求1所述耐酸地衣芽孢杆菌B105的微生物菌剂。
3.根据权利要求2所述的微生物菌剂，其特征在于，含有地衣芽孢杆菌B105、蔬菜芽孢杆菌(Bacillus oleronius)、热噬淀粉芽孢杆菌(Bacillus thermoamylovorans)B202、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B211与深绿木霉(Trichoderma atroviride)；所述热噬淀粉芽孢杆菌(Bacillus thermoamylovorans)B202，已于2018年7月13日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No:M 2018471，保藏地址为中国，武汉，武汉大学；枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B211，已于2018年7月13日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No:M 2018475，保藏地址为中国，武汉，武汉大学。
4.根据权利要求3所述的微生物菌剂，其特征在于，所述地衣芽孢杆菌B105、蔬菜芽孢杆菌、热噬淀粉芽孢杆菌B202、枯草芽孢杆菌B211与深绿木霉的活菌数之比为0.5-1.5:450-480:1800-2400:20-28:25-36；所述微生物菌剂的活菌总数为1.0×109-1.0×1010CFU/mL或者CFU/g。
5.根据权利要求4所述的微生物菌剂，其特征在于，微生物菌剂按如下方法制备：将耐酸地衣芽孢杆菌B105、蔬菜芽孢杆菌、热噬淀粉芽孢杆菌B202、枯草芽孢杆菌B211与深绿木霉的发酵液按照比例混合，添加载体辅料，得到包含耐酸地衣芽孢杆菌B105的液态复合微生物菌剂；所述载体辅料包括但不限于褐煤、沸石、石粉中的一种或几种。
6.根据权利要求4所述的微生物菌剂，其特征在于，微生物菌剂的制备方法为：将耐酸地衣芽孢杆菌B105、蔬菜芽孢杆菌、热噬淀粉芽孢杆菌B202、枯草芽孢杆菌B211与深绿木霉的发酵液按比例混合，添加粉碎秸秆、炭化秸秆、麸皮中的一种或几种，热风干燥后，得到包含耐酸地衣芽孢杆菌B105的固态复合微生物菌剂。
7.权利要求1所述耐酸地衣芽孢杆菌B105在堆肥中的应用。
8.一种促进食品厂污水处理的剩余污泥与秸秆进行混合堆肥的方法，其特征在于，应用含有权利要求1所述地衣芽孢杆菌B105的微生物菌剂进行堆肥。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，包含如下步骤：
(1)将所述微生物菌剂和堆肥原料按0.5-1：100的比例进行混合；
(2)将混合物堆制堆肥，测量堆体温度，按照温度变化进行翻堆。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)为将所述混合物堆制堆肥，每天早上和下午测量堆体温度，当温度高于55℃时，每天翻堆1～2次，随着堆制时间的延长，堆体温度开始下降，当温度低于40℃时，停止翻堆，堆制结束。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111328666A (zh) * 2020-03-13 2020-06-26 深圳市中懿环境治理有限公司 一种固体培养基及其制备方法及应用
CN115322030B (zh) * 2022-06-30 2023-08-22 北京世纪阿姆斯生物工程有限公司 一种复合菌剂及其应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103243041A (zh) * 2012-07-27 2013-08-14 四川农业大学 一株地衣芽孢杆菌h2及其应用
CN105154376A (zh) * 2015-10-19 2015-12-16 山东隆科特酶制剂有限公司 一株高产耐酸性高温α-淀粉酶的菌株及其液体发酵方法
CN105820987A (zh) * 2016-05-31 2016-08-03 四川大工汇能纵横环境技术有限责任公司 一种地衣芽孢杆菌菌株及微生态制剂
CN106190900A (zh) * 2016-07-15 2016-12-07 标优美生态工程股份有限公司 一种地衣芽孢杆菌及其在餐厨垃圾中的应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103243041A (zh) * 2012-07-27 2013-08-14 四川农业大学 一株地衣芽孢杆菌h2及其应用
CN105154376A (zh) * 2015-10-19 2015-12-16 山东隆科特酶制剂有限公司 一株高产耐酸性高温α-淀粉酶的菌株及其液体发酵方法
CN105820987A (zh) * 2016-05-31 2016-08-03 四川大工汇能纵横环境技术有限责任公司 一种地衣芽孢杆菌菌株及微生态制剂
CN106190900A (zh) * 2016-07-15 2016-12-07 标优美生态工程股份有限公司 一种地衣芽孢杆菌及其在餐厨垃圾中的应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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微生物菌剂复配及强化厨余垃圾好氧堆肥效果分析;周营 等;《环境工程学报》;20180131;第294-303页，参见全文 *

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