CN109477055B - 细胞的制备方法、细胞培养装置和试剂盒 - Google Patents

细胞的制备方法、细胞培养装置和试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明涉及细胞的制备方法，其包括将细胞应用于聚酰亚胺多孔质膜来培养的工序，其中，上述聚酰亚胺多孔质膜是包括具有多个孔的表面层A和表面层B、及夹在上述表面层A和表面层B之间的大孔层的三层结构的聚酰亚胺多孔质膜，上述聚酰亚胺多孔质膜通过包括以下工序的方法制造：(1)将含有聚酰胺酸和有机极性溶剂的聚酰胺酸溶液流延成膜状，浸渍或接触在凝固溶剂中，制作聚酰胺酸的多孔质膜的工序；以及(2)对上述工序(1)得到的聚酰胺酸的多孔质膜进行热处理而酰亚胺化的工序。

Description

细胞的制备方法、细胞培养装置和试剂盒
技术领域
本发明涉及细胞的制备方法、细胞培养装置和试剂盒。
背景技术
报道有一种细胞的培养方法，包括将细胞应用于聚酰亚胺多孔质膜来培养的工序(专利文献1)。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：国际公开第2015/012415号
发明内容
发明要解决的课题
在专利文献1中，仅报道了：使用将含有由四羧酸成分和二胺成分得到的聚酰胺酸溶液及着色前体的聚酰胺酸溶液组合物成型后，在250℃以上进行热处理而得到的着色了的聚酰亚胺多孔质膜来进行细胞培养。在此，着色前体是指通过250℃以上的热处理，部分或全部碳化而生成着色化物的前体，例如可举出石油焦油、石油沥青、煤焦油、煤沥青等焦油或沥青、焦炭、由含有丙烯腈的单体得到的聚合物、二茂铁化合物(二茂铁和二茂铁衍生物)等。由此制造的聚酰亚胺多孔质膜是褐色的，难以目测确认细胞的接种和生长附着行为等。
因此，本发明的目的在于，使用可视度更优异的聚酰亚胺多孔质膜，简便、高效且稳定地进行细胞培养。
解决课题的手段
本发明人等鉴于上述课题，进行了深入研究，结果发现，由不使用着色前体的方法制造的可视度高的聚酰亚胺多孔质膜可用于细胞培养，至此完成了本发明。
即，本发明具有以下方式。
[1]细胞的制备方法，其包括将细胞应用于聚酰亚胺多孔质膜来培养的工序，
其中，上述聚酰亚胺多孔质膜是包括具有多个孔的表面层A和表面层B、及夹在上述表面层A和表面层B之间的大孔层的三层结构的聚酰亚胺多孔质膜，
其中，上述表面层A中存在的孔的平均孔径小于上述表面层B中存在的孔的平均孔径，
上述大孔层具有与上述表面层A和B结合的隔壁、以及被该隔壁及上述表面层A和B包围的多个大孔，
上述表面层A和B中的孔与上述大孔连通，且
大孔层中的至少1个隔壁具有连通大孔彼此的1个或多个孔，
上述聚酰亚胺多孔质膜通过包括以下工序的方法制造：
(1)将含有聚酰胺酸和有机极性溶剂的聚酰胺酸溶液流延成膜状，浸渍或接触在凝固溶剂中，制作聚酰胺酸的多孔质膜的工序，和
(2)对上述工序(1)得到的聚酰胺酸的多孔质膜进行热处理而酰亚胺化的工序。
[2]上述[1]所述的细胞的制备方法，其中，上述聚酰亚胺多孔质膜通过包括以下工序的方法制造：
(1)将含有聚酰胺酸和有机极性溶剂的聚酰胺酸溶液流延成膜状，浸渍或接触在凝固溶剂中，制作聚酰胺酸的多孔质膜的工序，
(2)对上述工序(1)得到的聚酰胺酸的多孔质膜进行热处理而酰亚胺化的工序，和
(3)对上述工序(2)得到的聚酰亚胺多孔质膜的至少单面实施等离子体处理的工序。
[3]上述[1]或[2]所述的细胞的制备方法，其中，上述聚酰胺酸由选自联苯四羧酸二酐和均苯四甲酸二酐中的至少1种四羧酸二酐和选自苯二胺、二氨基二苯基醚和双(氨基苯氧基)苯中的至少1种二胺获得。
[4]上述[1]～[3]任一项所述的方法，其包括将细胞接种在上述聚酰亚胺多孔质膜的表面的工序。
[5]上述[1]～[3]任一项所述的方法，其包括以下工序：
在上述聚酰亚胺多孔质膜的干燥的表面上载置细胞悬浮液，
使上述聚酰亚胺多孔质膜静置，或移动上述聚酰亚胺多孔质膜，以促进液体的流出，或者刺激部分表面，使细胞悬浮液被吸入上述膜中，和
使细胞悬浮液中的细胞保留在上述聚酰亚胺多孔质膜内，使水分流出。
[6]上述[1]～[3]任一项所述的方法，其包括以下工序：
将上述聚酰亚胺多孔质膜的单面或两面用细胞培养基或灭菌的液体润湿，
向上述润湿的聚酰亚胺多孔质膜中装填细胞悬浮液，和
使细胞悬浮液中的细胞保留在上述聚酰亚胺多孔质膜内，使水分流出。
[7]上述[6]所述的方法，其中，活细胞留在上述聚酰亚胺多孔质膜内，死细胞随水分流出。
[8]上述[6]或[7]所述的方法，其中，上述灭菌的液体为灭菌水或灭菌的缓冲液。
[9]上述[1]～[8]任一项所述的方法，其中，在细胞培养容器中装入细胞培养基、细胞、及1片或多片的上述聚酰亚胺多孔质膜，其中，聚酰亚胺多孔质膜处于悬浮在细胞培养基中的状态。
[10]上述[9]所述的方法，其特征在于，使用2片以上的上述聚酰亚胺多孔质膜的小片。
[11]上述[9]或[10]所述的方法，其中，细胞与上述聚酰亚胺多孔质膜自发地粘接。
[12]上述[1]～[8]任一项所述的方法，其中，上述聚酰亚胺多孔质膜以如下方式在细胞培养容器中的细胞培养基中悬浮或固定：
i)折叠，
ii)卷成卷状，
iii)将片或小片用线状结构体连接，或
iv)系成绳状。
[13]上述[12]所述的方法，其中，细胞与上述聚酰亚胺多孔质膜自发地粘接。
[14]上述[1]～[3]任一项所述的方法，其包括将2片以上的聚酰亚胺多孔质膜上下或左右地层叠在细胞培养基中使用。
[15]上述[1]～[3]任一项所述的方法，其中，组合使用[4]～[14]任一项所述的方法中的2种或更多种的方法。
[16][1]～[15]任一项所述的方法，其中，细胞在聚酰亚胺多孔质膜的表面和内部生长增殖。
[17]上述[1]～[16]任一项所述的方法，其中，细胞选自动物细胞、昆虫细胞、植物细胞、酵母菌和细菌。
[18]上述[17]所述的方法，其中，动物细胞为来源于属于脊椎动物门的动物的细胞。
[19]上述[17]所述的方法，其中，细菌选自乳酸菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和蓝细菌。
[20]上述[1]～[16]任一项所述的方法，其中，细胞选自多能干细胞、组织干细胞、体细胞和生殖细胞。
[21]上述[1]～[16]任一项所述的方法，其中，细胞选自肉瘤细胞、株化细胞和转化细胞。
[22]用于上述[1]～[21]任一项所述的细胞制备方法的细胞培养装置，其包括聚酰亚胺多孔质膜。
[23]上述[22]所述的细胞培养装置，其中，2片以上的聚酰亚胺多孔质膜上下或左右地层叠。
[24]用于上述[1]～[21]任一项所述的细胞的制备方法的试剂盒，其包括聚酰亚胺多孔质膜。
发明效果
根据本发明，能够简便、高效且稳定地培养细胞。特别是能够目测确认细胞的接种和生长附着行为等。另外，由于所使用的聚酰亚胺多孔质膜的着色度低，因此外观性优异。
附图说明
[图1]图1表示使用聚酰亚胺多孔质膜培养的人皮肤成纤维细胞的细胞数的经时变化。
[图2]图2表示使用聚酰亚胺多孔质膜培养的CHO DP-12细胞的细胞数的经时变化。
[图3]图3表示使用聚酰亚胺多孔质膜培养的人间充质干细胞的细胞数的经时变化。
[图4]图4表示使用聚酰亚胺多孔质膜培养的人间充质干细胞的细胞数的经时变化。
[图5]图5表示在聚酰亚胺多孔质膜上培养的人间充质干细胞的显微镜观察结果。
[图6]图6表示将在聚酰亚胺多孔质膜上培养的人间充质干细胞诱导为成骨细胞、进一步诱导钙化后的光学显微镜图像。
[图7]图7表示将在聚酰亚胺多孔质膜上培养的人间充质干细胞诱导为脂肪细胞后的显微镜观察结果。
[图8]图8表示将人间充质干细胞在聚酰亚胺多孔质膜上长期培养后的基因分析结果。
[图9]图9表示使用聚酰亚胺多孔质膜长期培养的人皮肤成纤维细胞的细胞数的经时变化。
[图10]图10表示由使用聚酰亚胺多孔质膜长期培养的人皮肤成纤维细胞产生的纤连蛋白的量。
具体实施方式
1.关于本发明中使用的聚酰亚胺多孔质膜
本发明中使用的聚酰亚胺多孔质膜中的表面层A(以下，也称为“A面”或“网面”)中存在的孔的平均孔径没有特殊限定，例如为0.01～50μm、0.01μm～40μm、0.01μm～30μm、0.01μm～20μm、或0.01μm～15μm，优选为0.01μm～15μm。
只要本发明中使用的聚酰亚胺多孔质膜中的表面层B(以下，也称为“B面”或“大孔面”)中存在的孔的平均孔径大于表面层A中存在的孔的平均孔径，就没有特殊限定，例如为20μm～100μm、30μm～100μm、40μm～100μm、50μm～100μm、或60μm～100μm，优选为20μm～100μm。
聚酰亚胺多孔质膜表面的平均孔径可以通过如下方式求得：根据多孔质膜表面的扫描型电子显微镜照片，对200个点以上的开孔部测定孔面积，由该孔面积的平均值，根据下式(1)，计算孔的形状设为正圆时的平均直径。
[数1]
Figure BDA0001954028260000061
(式中，Sa是指孔面积的平均值。)
表面层A和B的厚度没有特殊限定，例如为0.01～50μm，优选为0.01～20μm。
聚酰亚胺多孔质膜的大孔层中的大孔的膜平面方向的平均孔径没有特殊限定，例如为10～500μm，优选为10～100μm，更优选为10～80μm。另外，该大孔层中的隔壁的厚度没有特殊限定，例如为0.01～50μm，优选为0.01～20μm。该大孔层中的至少1个隔壁具有连通相邻的大孔彼此的1个或多个孔。该孔的平均孔径优选为0.01～100μm，更优选为0.01～50μm。
本发明中使用的聚酰亚胺多孔质膜的总膜厚没有特殊限定、可以为5μm以上、10μm以上、20μm以上或25μm以上、也可以为500μm以下、300μm以下、100μm以下、75μm以下或50μm以下。优选为5～500μm，更优选为25～75μm。
本发明中使用的聚酰亚胺多孔质膜的膜厚的测定可以通过接触式的厚度计进行。
本发明中使用的聚酰亚胺多孔质膜的空孔率没有特殊限定，例如为40％以上且低于95％。
本发明中使用的聚酰亚胺多孔质膜的空孔率可以通过测定被切割成规定大小的多孔质膜的膜厚和质量，由单位面积质量，根据下式(2)求得。
[数2]
空孔率(％)＝(1-w/(S×d×D))×100 (2)
(式中，S是指多孔质膜的面积，d是指总膜厚，w是指测定的质量，D是指聚酰亚胺的密度。聚酰亚胺的密度为1.34g/cm3)。
本发明中使用的聚酰亚胺多孔质膜优选被灭菌。作为灭菌处理，没有特殊限定，可举出干热灭菌、蒸气灭菌、采用乙醇等消毒剂的灭菌、紫外线或伽玛射线等的电磁波灭菌等任意的灭菌处理等。
本发明中使用的聚酰亚胺多孔质膜优选为如下所述的聚酰亚胺多孔质膜：其是包括具有多个孔的表面层A和表面层B、及夹在上述表面层A和表面层B之间的大孔层的三层结构的聚酰亚胺多孔质膜，其中，上述表面层A中存在的孔的平均孔径为0.01μm～15μm，上述表面层B中存在的孔的平均孔径为20μm～100μm，上述大孔层具有与上述表面层A和B结合的隔壁、以及被该隔壁及上述表面层A和B包围的多个大孔，上述大孔层的隔壁、以及上述表面层A和B的厚度为0.01～20μm，上述表面层A和B中的孔与大孔连通，总膜厚为5～500μm，空孔率为40％以上且低于95％。其中，大孔层中的至少1个隔壁具有连通相邻的大孔彼此的平均孔径为0.01～100μm、优选为0.01～50μm的1个或多个孔。
本发明中使用的聚酰亚胺多孔质膜是以由四羧酸二酐和二胺得到的聚酰亚胺为主成分的聚酰亚胺多孔质膜，优选为由四羧酸二酐和二胺得到的聚酰亚胺构成的聚酰亚胺多孔质膜。
四羧酸二酐可以使用任意的四羧酸二酐，可以根据期望的特性等适当选择。作为四羧酸二酐的具体例，可举出均苯四甲酸二酐、3,3',4,4'-联苯四羧酸二酐(s-BPDA)、2,3,3',4'-联苯四羧酸二酐(a-BPDA)等联苯四羧酸二酐、氧二邻苯二甲酸二酐、二苯基砜-3,4,3',4'-四羧酸二酐、双(3,4-二羧基苯基)硫醚二酐、2,2-双(3,4-二羧基苯基)-1,1,1,3,3,3-六氟丙烷二酐、2,3,3',4'-二苯甲酮四羧酸二酐、3,3',4,4'-二苯甲酮四羧酸二酐、双(3,4-二羧基苯基)甲烷二酐、2,2-双(3,4-二羧基苯基)丙烷二酐、对亚苯基双(偏苯三酸单酯酸酐)、对亚联苯基双(偏苯三酸单酯酸酐)、间三联苯-3,4,3',4'-四羧酸二酐、对三联苯-3,4,3',4'-四羧酸二酐、1,3-双(3,4-二羧基苯氧基)苯二酐、1,4-双(3,4-二羧基苯氧基)苯二酐、1,4-双(3,4-二羧基苯氧基)联苯二酐、2,2-双[(3,4-二羧基苯氧基)苯基]丙烷二酐、2,3,6,7-萘四羧酸二酐、1,4,5,8-萘四羧酸二酐、4,4'-(2,2-六氟亚异丙基)二邻苯二甲酸二酐等。另外，优选使用2,3,3',4'-二苯基砜四羧酸等芳族四羧酸。它们可以单独使用或组合使用2种以上。
其中，特别优选选自联苯四羧酸二酐和均苯四甲酸二酐中的至少1种芳族四羧酸二酐。作为联苯四羧酸二酐，可适宜使用3,3',4,4'-联苯四羧酸二酐。
二胺可以使用任意的二胺。作为二胺的具体例，可举出如下。
1)1,4-二氨基苯(对苯二胺)、1,3-二氨基苯、2,4-二氨基甲苯、2，6-二氨基甲苯等1个苯核的苯二胺；
2)4,4'-二氨基二苯基醚、3,4'-二氨基二苯基醚等二氨基二苯基醚、4,4'-二氨基二苯基甲烷、3,3'-二甲基-4,4'-二氨基联苯、2,2'-二甲基-4,4'-二氨基联苯、2,2'-双(三氟甲基)-4,4'-二氨基联苯、3,3'-二甲基-4,4'-二氨基二苯基甲烷、3,3'-二羧基-4,4'-二氨基二苯基甲烷、3,3',5,5'-四甲基-4,4'-二氨基二苯基甲烷、双(4-氨基苯基)硫醚、4,4'-二氨基苯甲酰苯胺、3,3'-二氯联苯胺、3,3'-二甲基联苯胺、2,2'-二甲基联苯胺、3,3'-二甲氧基联苯胺、2,2'-二甲氧基联苯胺、3,3'-二氨基二苯基醚、3,4'-二氨基二苯基醚、4,4'-二氨基二苯基醚、3,3'-二氨基二苯基硫醚、3,4'-二氨基二苯基硫醚、4,4'-二氨基二苯基硫醚、3,3'-二氨基二苯基砜、3,4'-二氨基二苯基砜、4,4'-二氨基二苯基砜、3,3'-二氨基二苯甲酮、3,3'-二氨基-4,4'-二氯二苯甲酮、3,3'-二氨基-4,4'-二甲氧基二苯甲酮、3,3'-二氨基二苯基甲烷、3,4'-二氨基二苯基甲烷、4,4'-二氨基二苯基甲烷、2,2-双(3-氨基苯基)丙烷、2,2-双(4-氨基苯基)丙烷、2,2-双(3-氨基苯基)-1,1,1,3,3,3-六氟丙烷、2,2-双(4-氨基苯基)-1,1,1,3,3,3-六氟丙烷、3,3'-二氨基二苯基亚砜、3,4'-二氨基二苯基亚砜、4,4'-二氨基二苯基亚砜等2个苯核的二胺；
3)1,3-双(3-氨基苯基)苯、1,3-双(4-氨基苯基)苯、1,4-双(3-氨基苯基)苯、1,4-双(4-氨基苯基)苯、1,3-双(4-氨基苯氧基)苯、1,4-双(3-氨基苯氧基)苯、1,4-双(4-氨基苯氧基)苯、1,3-双(3-氨基苯氧基)-4-三氟甲基苯、3,3'-二氨基-4-(4-苯基)苯氧基二苯甲酮、3,3'-二氨基-4,4'-二(4-苯基苯氧基)二苯甲酮、1,3-双(3-氨基苯基硫醚)苯、1,3-双(4-氨基苯基硫醚)苯、1,4-双(4-氨基苯基硫醚)苯、1,3-双(3-氨基苯基砜)苯、1,3-双(4-氨基苯基砜)苯、1,4-双(4-氨基苯基砜)苯、1,3-双[2-(4-氨基苯基)异丙基]苯、1,4-双[2-(3-氨基苯基)异丙基]苯、1,4-双[2-(4-氨基苯基)异丙基]苯等3个苯核的二胺；
4)3,3'-双(3-氨基苯氧基)联苯、3,3'-双(4-氨基苯氧基)联苯、4,4'-双(3-氨基苯氧基)联苯、4,4'-双(4-氨基苯氧基)联苯、双[3-(3-氨基苯氧基)苯基]醚、双[3-(4-氨基苯氧基)苯基]醚、双[4-(3-氨基苯氧基)苯基]醚、双[4-(4-氨基苯氧基)苯基]醚、双[3-(3-氨基苯氧基)苯基]酮、双[3-(4-氨基苯氧基)苯基]酮、双[4-(3-氨基苯氧基)苯基]酮、双[4-(4-氨基苯氧基)苯基]酮、双[3-(3-氨基苯氧基)苯基]硫醚、双[3-(4-氨基苯氧基)苯基]硫醚、双[4-(3-氨基苯氧基)苯基]硫醚、双[4-(4-氨基苯氧基)苯基]硫醚、双[3-(3-氨基苯氧基)苯基]砜、双[3-(4-氨基苯氧基)苯基]砜、双[4-(3-氨基苯氧基)苯基]砜、双[4-(4-氨基苯氧基)苯基]砜、双[3-(3-氨基苯氧基)苯基]甲烷、双[3-(4-氨基苯氧基)苯基]甲烷、双[4-(3-氨基苯氧基)苯基]甲烷、双[4-(4-氨基苯氧基)苯基]甲烷、2,2-双[3-(3-氨基苯氧基)苯基]丙烷、2,2-双[3-(4-氨基苯氧基)苯基]丙烷、2,2-双[4-(3-氨基苯氧基)苯基]丙烷、2,2-双[4-(4-氨基苯氧基)苯基]丙烷、2,2-双[3-(3-氨基苯氧基)苯基]-1,1,1,3,3,3-六氟丙烷、2,2-双[3-(4-氨基苯氧基)苯基]-1,1,1,3,3,3-六氟丙烷、2,2-双[4-(3-氨基苯氧基)苯基]-1,1,1,3,3,3-六氟丙烷、2,2-双[4-(4-氨基苯氧基)苯基]-1,1,1,3,3,3-六氟丙烷等4个苯核的二胺。
它们可以单独使用或混合使用2种以上。所使用的二胺可以根据期望的特性等适当选择。
其中，优选为芳族二胺化合物，可适宜使用3,3'-二氨基二苯基醚、3,4'-二氨基二苯基醚、4,4'-二氨基二苯基醚和对苯二胺、1,3-双(3-氨基苯基)苯、1,3-双(4-氨基苯基)苯、1,4-双(3-氨基苯基)苯、1,4-双(4-氨基苯基)苯、1,3-双(4-氨基苯氧基)苯、1,4-双(3-氨基苯氧基)苯。特别优选选自苯二胺、二氨基二苯基醚和双(氨基苯氧基)苯基中的至少1种二胺。
从耐热性、高温下的尺寸稳定性的观点考虑，聚酰亚胺多孔质膜优选由玻璃化转变温度为240℃以上，或在300℃以上没有明确的转化点的组合四羧酸二酐和二胺而得到的聚酰亚胺形成。
从耐热性、高温下的尺寸稳定性的观点考虑，本发明中使用的聚酰亚胺多孔质膜优选为含有如下的芳族聚酰亚胺的聚酰亚胺多孔质膜。(i)由选自联苯四羧酸单元和均苯四甲酸单元中的至少1种四羧酸单元和芳族二胺单元形成的芳族聚酰亚胺，(i i)由四羧酸单元和选自苯二胺单元、二氨基二苯基醚单元和双(氨基苯氧基)苯基单元中的至少1种芳族二胺单元形成的芳族聚酰亚胺，和/或，(i i i)由选自联苯四羧酸单元和均苯四甲酸单元中的至少1种四羧酸单元和选自苯二胺单元、二氨基二苯基醚单元和双(氨基苯氧基)苯基单元中的至少1种芳族二胺单元形成的芳族聚酰亚胺。
2.关于本发明中使用的聚酰亚胺多孔质膜的制造方法
本发明中使用的聚酰亚胺多孔质膜通过包括以下工序的方法制造：
(1)将含有聚酰胺酸和有机极性溶剂的聚酰胺酸溶液流延成膜状，浸渍或接触在凝固溶剂中，制作聚酰胺酸的多孔质膜的工序，和
(2)对上述工序(1)得到的聚酰胺酸的多孔质膜进行热处理而酰亚胺化的工序。
聚酰胺酸是指由四羧酸单元和二胺单元构成的聚酰亚胺前体或其部分酰亚胺化的聚酰亚胺前体。聚酰胺酸可以通过聚合四羧酸二酐和二胺而得到。通过将聚酰胺酸进行热酰亚胺化或化学酰亚胺化，可以闭环而形成聚酰亚胺。本发明中使用的聚酰胺酸优选通过热酰亚胺化来制作。另外，酰亚胺化率可以为约80％以上，优选为85％以上，更优选为90％以上，进一步优选为95％以上。
四羧酸二酐和二胺可以使用上述的1.中举出的例子。本发明中使用的聚酰亚胺多孔质膜的制造方法中使用的聚酰胺酸优选由选自联苯四羧酸二酐和均苯四甲酸二酐中的至少1种四羧酸二酐和选自苯二胺、二氨基二苯基醚和双(氨基苯氧基)苯基中的至少1种二胺得到。
作为用于聚合聚酰胺酸的溶剂，可以使用任意的有机极性溶剂，可使用对氯苯酚、邻氯苯酚、N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)、吡啶、N,N-二甲基乙酰胺(DMAc)、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、四甲基脲、苯酚、甲酚等有机极性溶剂等，特别优选可使用N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)、N,N-二甲基乙酰胺(DMAc)。
聚酰胺酸可以采用四羧酸二酐、二胺和上述的有机极性溶剂等，通过任意方法制造。例如，使四羧酸二酐和二胺以大致等摩尔在优选约100℃以下、更优选80℃以下、进一步优选0～60℃、特别优选20～60℃的温度下反应优选约0.2小时以上、更优选0.3～60小时，由此制造聚酰胺酸溶液。
在制造聚酰胺酸溶液时，为了调整分子量，还可以将任意的分子量调整成分加入到反应溶液中。
本发明中使用的聚酰亚胺多孔质膜的制造方法中使用的聚酰胺酸的极限粘度数优选为1.0～3.0，更优选为1.3～2.8，特别优选为1.4～2.6。
对于聚酰胺酸来说，即使是酰胺酸的一部分被酰亚胺，只要是不影响本发明的范围，就可以使用这样的聚酰胺酸。
聚酰胺酸溶液中的聚酰胺酸的含量优选为3～60重量％，更优选为4～40质量％，进一步优选为5～20质量％，特别优选为6～10质量％。
聚酰胺酸溶液可以是在有机极性溶剂的存在下使四羧酸二酐和二胺进行聚合反应而得到的溶液，也可以是将聚酰胺酸溶解在有机极性溶剂中而得到的溶液。
另外，从流延的容易性和膜强度的观点考虑，聚酰胺酸溶液的溶液粘度优选为10～10000泊(1～1000Pa·s)，更优选为100～3000泊(10～300Pa·s)，进一步优选为200～2000泊(20～200Pa·s)，特别优选为300～1000泊(30～100Pa·s)。
(流延)
在本发明使用的聚酰亚胺多孔质膜的制造方法中，首先，将聚酰胺酸溶液流延成膜状。流延方法没有特殊限定，例如，可以将聚酰胺酸溶液用作流延(dope)液，使用刮刀或T型模头等在玻璃板或不锈钢板等上将聚酰胺酸溶液流延成膜状。另外，可以在连续的可动式的传送带或滚筒上，将聚酰胺酸溶液断续或连续地流延成膜状，来连续地制造单片或长条状的流延物。传送带或滚筒只要不影响聚酰胺酸溶液和凝固溶液即可，可以使用不锈钢等金属制、聚四氟乙烯等树脂制。另外，也可以将从T型模头成型为膜状的聚酰胺酸溶液原样投入到凝固浴中。另外，也可以根据需要使流延物的单面或两面与含有水蒸气等的气体(空气、非活性气体等)接触。
(聚酰胺酸的多孔质膜的制作)
接着，将流延物浸渍或接触在以水为必须成分的凝固溶剂中，使聚酰胺酸析出，进行多孔质化，由此制作聚酰胺酸的多孔质膜。将得到的聚酰胺酸的多孔质膜根据需要进行洗涤和/或干燥。
以水为必须成分的凝固溶剂优选为水，或者是5质量％以上且低于100质量％的水和大于0质量％且为95质量％以下的有机极性溶剂的混合液。从火灾等的安全方面、制造成本、以及确保得到的膜的均质性的观点考虑，更优选使用含有水和有机极性溶剂的凝固溶剂。作为可含有在凝固溶剂中的有机极性溶剂，可举出作为聚酰胺酸的不良溶剂的乙醇、甲醇等醇类、丙酮等。另外，可以在可析出聚合物的范围内加入聚酰胺酸的良溶剂。具体地，可以加入N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)、吡啶、N,N-二甲基乙酰胺(DMAc)、N,N-二甲基甲酰胺。
凝固溶剂为水和有机极性溶剂的混合液时，凝固溶剂100质量％中的水的含量优选为5质量％以上且低于100质量％，更优选为20质量％以上且低于100质量％，进一步优选为30～95质量％，特别优选为45～90质量％。凝固溶剂100质量％中的有机极性溶剂的含量优选为大于0质量％且为95质量％以下，更优选为大于0质量％且为80质量％以下，进一步优选为5～70质量％，特别优选为10～55质量％。
凝固溶剂的温度只要根据目的适当选用即可，例如优选在-30～70℃、优选为0～60℃、进一步优选为10～50℃的范围内进行。
(热酰亚胺化处理)
接着，将得到的聚酰胺酸的多孔质膜进行热处理而酰亚胺化，来制造聚酰亚胺多孔质膜。热酰亚胺化处理没有特殊限定，优选将该处理后的膜的纵向(长度方向)和横向的收缩率分别控制在40％以下、更优选30％以下、进一步优选15％以下、更进一步优选8％以下、特别优选5％以下来进行。没有特殊限定，例如，可以通过将聚酰胺酸的多孔质膜使用销、夹头或夹送辊等固定在支撑体上，在大气中加热来进行。反应条件从例如280～600℃、优选300～550℃的加热温度，1～120分钟、优选2～120分钟，更优选3～90分钟、进一步优选5～30分的加热时间中适当选择来进行。
在本发明使用的聚酰亚胺多孔质膜的制造方法中，在热酰亚胺化处理中，200℃以上的温度区域的升温速度没有特殊限定，例如为1℃/分钟以上，优选为5℃/分钟以上，10℃/分钟以上，15℃/分钟以上或20℃/分钟以上，更优选为25℃/分钟以上，特别优选为50℃/分钟以上，升温速度的上限值没有必要特殊限定，但在设定升温速度的上限值的情况下，例如为1～500℃/分钟，优选为5～400/分钟、5～300℃/分钟或5～200℃/分钟，更优选为50～500℃/分钟，进一步优选为50～400/分钟，更进一步优选为70～300℃/分钟，特别优选为120～200℃/分钟。
本发明中使用的聚酰亚胺多孔质膜可以通过适当选择所使用的聚合物的种类、聚合物溶液的聚合物浓度、粘度、有机溶液等、凝固条件(溶剂置换速度调节层的种类、温度、凝固溶剂等)等，来适当设定空孔率、膜厚、表面的平均孔径、最大孔径、中央部的平均孔径等。
在本发明使用的聚酰亚胺多孔质膜的制造方法中，可以通过根据目的对上述酰亚胺化工序得到的聚酰亚胺多孔质膜的至少单面实施电晕放电处理、低温等离子体放电或常压等离子体放电等等离子体放电处理、化学蚀刻等，来进行膜的表面处理。另外，还可以对表面层(a)和/或(b)进行面切削后使用。这些处理可以通过本领域技术人员公知的方法来进行。为了提高表面开口径、表面开口率和亲水性，优选对聚酰亚胺多孔质膜的至少单面实施等离子体放电处理。
在优选的实施方式中，本发明中使用的聚酰亚胺多孔质膜的制造方法包括以下工序：
(1)将包含由四羧酸单元和二胺单元形成的极限粘度数为1.0～3.0的聚酰胺酸3～60质量％和有机极性溶剂40～97质量％的聚酰胺酸溶液流延成膜状，浸渍或接触在以水为必须成分的凝固溶剂中，制作聚酰胺酸的多孔质膜的工序，和
(2)对上述工序得到的聚酰胺酸的多孔质膜进行热处理而酰亚胺化的工序，其中，将热处理后的膜的纵向和横向的收缩率分别控制在8％以下，且在上述热处理中，200℃以上的温度区域的升温速度为25℃/分钟以上。
在优选的另一实施方式中，本发明中使用的聚酰亚胺多孔质膜的制造方法包括以下工序：
(1)将包含由四羧酸单元和二胺单元形成的极限粘度数为1.0～3.0的聚酰胺酸3～60质量％和有机极性溶剂40～97质量％的聚酰胺酸溶液流延成膜状，浸渍或接触在以水为必须成分的凝固溶剂中，制作聚酰胺酸的多孔质膜的工序，
(2)对上述工序得到的聚酰胺酸的多孔质膜进行热处理而酰亚胺化的工序，和
(3)对上述工序(2)得到的聚酰亚胺多孔质膜的至少单面实施等离子体处理的工序。
3.关于本发明的细胞的制备方法
本发明的细胞的制备方法包括将细胞应用于聚酰亚胺多孔质膜来培养。本发明方法的特征在于，包括将细胞应用于聚酰亚胺多孔质膜，在聚酰亚胺膜的表面或内部培养细胞。
(1)将细胞应用于聚酰亚胺多孔质膜
将细胞应用于聚酰亚胺多孔质膜的具体工序没有特殊限定。可以采用本说明书中记载的工序、或适于将细胞应用于膜状载体的任意的方式。虽然没有限定，但在本发明的方法中，将细胞应用于聚酰亚胺多孔质膜例如包括如下这样的方式。
(A)包括将细胞接种在上述聚酰亚胺多孔质膜的表面的工序的方式。
(B)包括以下工序的方式：
在上述聚酰亚胺多孔质膜的干燥的表面上载置细胞悬浮液，
使上述聚酰亚胺多孔质膜静置，或者移动上述聚酰亚胺多孔质膜，促进液体的流出，或者刺激部分表面，使细胞悬浮液被吸入上述膜中，和
使细胞悬浮液中的细胞保留在上述聚酰亚胺多孔质膜内，使水分流出。
以及
(C)包括以下工序的方式：
用细胞培养液或灭菌的液体润湿上述聚酰亚胺多孔质膜的单面或两面，
向上述润湿的聚酰亚胺多孔质膜中装填细胞悬浮液，和
使细胞悬浮液中的细胞保留在上述聚酰亚胺多孔质膜内，使水分流出。
(A)的方式包括在聚酰亚胺多孔质膜的表面直接接种细胞、细胞块。或者，包括将聚酰亚胺多孔质膜放入细胞悬浮液中，从膜的表面使细胞培养基浸润的方式。
接种在聚酰亚胺多孔质膜表面的细胞贴附在聚酰亚胺多孔质膜上，逐渐进入多孔的内部。优选为即使不特别地从外部施加物理或化学力，细胞也与聚酰亚胺多孔质膜自发地粘接。在聚酰亚胺多孔质膜的表面接种的细胞可以在膜的表面和/或内部稳定地生长和增殖。细胞根据生长和增殖的膜的位置，可采取各种不同的形态。
在(B)的方式中，在聚酰亚胺多孔质膜的干燥的表面上载置细胞悬浮液。使聚酰亚胺多孔质膜静置，或移动上述聚酰亚胺多孔质膜，促进液体的流出，或者刺激部分表面，使细胞悬浮液吸入上述膜中，由此使细胞悬浮液渗透到膜中。不受理论束缚，认为这是由于源自聚酰亚胺多孔质膜的各表面形状等的性质引起的。根据本方式，细胞被吸入膜的装填有细胞悬浮液的部位而接种。
或者，如(C)的方式那样，可以在将上述聚酰亚胺多孔质膜的单面或两面的部分或全部用细胞培养液或灭菌的液体润湿后，在润湿了的聚酰亚胺多孔质膜中装填细胞悬浮液。此时，细胞悬浮液的通过速度大幅提高。
例如，以防止膜的飞散为主要目的，可以使用湿润膜的一部分的方法(以下，将其记为“一点湿法”)。一点湿法实质上基本近似于不湿润膜的干燥法((B)的方式)。其中，关于湿润的一小部分，认为细胞液的膜透过变得迅速。另外，也可以使用在充分湿润的聚酰亚胺多孔质膜的单面或两面的整体(以下，将其记为“湿膜”)中装填细胞悬浮液的方法(以下，将其记为“湿膜法”)。此时，在聚酰亚胺多孔质膜的整体中，细胞悬浮液的通过速度大幅提高。
在(B)和(C)的方式中，将细胞悬浮液中的细胞保留在上述聚酰亚胺多孔质膜内，使水分流出。由此也可以进行以下处理：浓缩细胞悬浮液中的细胞的浓度，使细胞以外的不需要的成分随水分流出等。
有时将(A)的方式称为“自然接种”，将(B)和(C)的方式称为“吸入接种”。
虽然没有限定，但优选活细胞选择性地留在聚酰亚胺多孔质膜中。因此，在本发明的优选的方式中，活细胞留在上述聚酰亚胺多孔质膜内，死细胞优先随水分流出。
方式(C)中使用的灭菌的液体没有特殊限定，为灭菌的缓冲液或灭菌水。缓冲液例如为(+)和(-)Dulbecco氏PBS、(+)和(-)Hank氏平衡盐溶液等。缓冲液的例子示于以下的表1。
[表1]
成分 浓度(mmol/L) 浓度(g/L)
NaCl 137 8.00
KCl 2.7 0.20
Na<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub> 10 1.44
KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub> 1.76 0.24
pH(-) 7.4 7.4
进而，在本发明的方法中，将细胞应用于聚酰亚胺多孔质膜包括通过使处于悬浮状态的粘附性细胞以悬浮方式与聚酰亚胺多孔质膜共存而使细胞附着于膜上的方式(缠结)。例如，在本发明的细胞的培养方法中，为了将细胞应用于聚酰亚胺多孔质膜，可以在细胞培养容器中装入细胞培养基、细胞、及1片或多片的上述聚酰亚胺多孔质膜。细胞培养基为液体时，聚酰亚胺多孔质膜处于悬浮在细胞培养基中的状态。由于聚酰亚胺多孔质膜的性质，细胞可以与聚酰亚胺多孔质膜粘接。因此，即使是原本不适于悬浮培养的细胞，也可以在使聚酰亚胺多孔质膜处于悬浮在细胞培养基中的状态下进行培养。优选地，细胞与聚酰亚胺多孔质膜自发地粘接。“自发地粘接”是指即使不特别地从外部施加物理或化学力，细胞也能保留在聚酰亚胺多孔质膜的表面或内部。
对于细胞培养而言，根据细胞培养中的存在形态，可将培养细胞分类成贴壁培养系细胞和悬浮培养系细胞。贴壁培养系细胞是贴附于培养容器上增殖的培养细胞，在继代中更换培养基。悬浮培养系细胞是在培养基中以悬浮状态增殖的培养细胞，一般来说，在继代培养时不更换培养基，而进行稀释培养。由于悬浮培养可以在悬浮状态、即液体中培养，因而可以大量培养，与仅在培养容器表面生长的贴壁细胞相比，由于它是立体的培养，因而具有每单位空间的可培养的细胞数量多的优点。
根据本发明，理论上，可以不限定于细胞的种类而以与悬浮培养类似的方式培养细胞，从而提供了简便地培养大量细胞的方法。在本发明的细胞培养方法中，在将聚酰亚胺多孔质膜以悬浮在细胞培养基中的状态使用时，可以使用2片以上的上述聚酰亚胺多孔质膜的小片。由于聚酰亚胺多孔质膜是柔性的薄膜，因此，例如通过将其小片悬浮在培养液中使用，可以在一定容量的细胞培养基中夹入具有大表面积的聚酰亚胺多孔质膜。在通常培养的情况下，容器底面积成为可培养细胞的面积的上限，但在使用本发明的聚酰亚胺多孔质膜的细胞培养中，先前夹入的聚酰亚胺多孔质膜的大表面积全部成为可培养细胞的面积。由于聚酰亚胺多孔质膜使细胞培养液通过，因此，例如可以向折叠的膜内供给营养和氧等。
聚酰亚胺多孔质膜的小片的尺寸、形状没有特殊限定。形状可以采取圆、椭圆形、四边形、三角形、多边形、带状等任意的形状。例如，包括一边的长度为约0.1mm～约20mm、优选为约0.2mm～约10mm的，更优选为约1mm～约5mm的四边形(正方形、长方形等)、三角形等。或者，例如，可以为优选直径为约0.1mm～约20mm，更优选约0.5mm～约10mm的圆形。通过将这些小片分散在液体中，形成与悬浮培养近似的形态。
由于本发明的聚酰亚胺多孔质膜具有柔软性，因此可以改变形状来使用。聚酰亚胺多孔质膜可以以立体状而不是平面状来加工形状后使用。例如可以将聚酰亚胺多孔质膜以如下方式在细胞培养容器中的细胞培养基中悬浮或固定：i)折叠、i i)卷成卷状、i i i)将片或小片用线状结构体连接、或iv)系成绳状。通过如i)-iv)那样加工形状，与使用小片的情况同样地，可以在一定容量的细胞培养基中加入许多聚酰亚胺多孔质膜。进而，由于可以将各个小片作为集合体来处理，因而可以将细胞体集合化来移动，综合应用性高。
作为与小片集合体同样的想法，可以将2片以上的聚酰亚胺多孔质膜在细胞培养基中上下或左右地层叠来使用。层叠包括聚酰亚胺多孔质膜部分重叠的方式。通过层叠培养，可以在狭小的空间中高密度地培养细胞。也可以在细胞已生长发育的膜上进一步层叠设置膜而形成与其他种类细胞的多层体系。进而，还可用于在立体环境下的细胞间相互作用的验证、无应激的细胞培养方法等、以及药物研发。层叠的聚酰亚胺多孔质膜的数量没有特殊限定。
可以组合使用上述本发明的细胞的培养方法中的2种或更多种的方法。例如，可以使用方式(A)～(C)任一项的方法，首先将细胞应用于聚酰亚胺多孔质膜，接着，可以将粘附有细胞的聚酰亚胺多孔质膜悬浮培养。或者，作为应用于聚酰亚胺多孔质膜的工序，可以组合使用上述方式(A)～(C)任一项的方法中的2种或更多种。
在本发明的方法中，优选地，细胞在聚酰亚胺多孔质膜的表面和内部生长和增殖。没有显示细胞在立体结构体的内部生长和增殖的报告例。在本发明中，通过利用聚酰亚胺多孔质膜，可以进行细胞的持续的三维培养。虽然没有限定，但通过本发明的方法，细胞可以持续增殖2天以上，更优选为4天以上，进一步优选为6天以上。
(2)本发明中可使用的细胞
本发明方法中可利用的细胞的种类没有特殊限定，可用于任意的细胞增殖。
例如，细胞选自动物细胞、昆虫细胞、植物细胞、酵母菌和细菌。动物细胞大致分为：来源于属于脊椎动物门的动物的细胞和来源于无脊椎动物(除了属于脊椎动物门的动物以外的动物)的细胞。本说明书中，动物细胞的来源没有特殊限定。优选是指来源于属于脊椎动物门的动物的细胞。脊椎动物门包括无颔纲和有颔纲，有颔纲包括哺乳纲、鸟纲、两栖纲、爬行纲等。优选地，一般来说，是来源于称为哺乳动物的属于哺乳纲的动物的细胞。哺乳动物没有特殊限定，优选包括小鼠、大鼠、人、猴、猪、狗、绵羊、山羊等。
本说明书中的植物细胞的来源没有特殊限定。包括苔藓植物、蕨类植物、种子植物在内的植物的细胞成为对象。
种子植物细胞来源的植物包括单子叶植物、双子叶植物中的任一种。不旨在限定，单子叶植物包括兰科植物、禾本科植物(水稻、玉米、大麦、小麦、高粱等)、莎草科植物等。双子叶植物包括属于菊亚纲、木兰亚纲、蔷薇亚纲等多种亚纲的植物。
藻类可视为细胞来源生物。包括从作为真细菌的蓝细菌(蓝藻)、到作为真核生物且单细胞生物的藻类(硅藻、黄绿藻、涡鞭毛藻等)及作为多细胞生物的海藻类(红藻、褐藻、绿藻)等不同的组。
本说明书中的古细菌和细菌的种类没有特殊限定。古细菌包括产甲烷菌、极度嗜盐菌、嗜热嗜酸菌、超嗜热菌等。细菌例如选自乳酸菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和蓝细菌等。
可在本发明方法中利用的动物细胞或植物细胞的种类没有限定，优选选自多能干细胞、组织干细胞、体细胞和生殖细胞。
本发明中“多能干细胞”是指具有分化成任何组织的细胞的能力(分化多能性)的干细胞的统称。多能干细胞包括但不限于，胚胎干细胞(ES细胞)、人工多能干细胞(iPS细胞)、胚胎生殖干细胞(EG细胞)、生殖干细胞(GS细胞)等。优选为ES细胞或iPS细胞。iPS细胞因不存在伦理问题等理由而特别优选。作为多能干细胞，可使用公知的任意的干细胞，例如可使用国际公开WO2009/123349(PCT/JP2009/057041)中记载的多能干细胞。
“组织干细胞”是指可分化的细胞系列被限定于特定的组织，但具有可分化为多样细胞种类的能力(分化多能性)的干细胞。例如，骨髓中的造血干细胞成为血细胞的来源，神经干细胞分化成神经细胞。除此以外，存在构成肝脏的肝脏干细胞、成为皮肤组织的皮肤干细胞等各种各样的种类。组织干细胞优选选自间充质干细胞、肝脏干细胞、胰腺干细胞、神经干细胞、皮肤干细胞、或造血干细胞。
“体细胞”是指构成多细胞生物的细胞中除生殖细胞以外的细胞。在有性生殖中没有被下一代继承。体细胞优选选自肝细胞、胰腺细胞、肌细胞、骨细胞、成骨细胞、破骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、皮肤细胞、成纤维细胞、胰腺细胞、肾细胞、肺细胞、或淋巴细胞、红细胞、白细胞、单核细胞、巨噬细胞或巨核细胞的血细胞。
“生殖细胞”是指具有在生殖中将遗传信息传递给下一代的作用的细胞。例如，包括用于有性生殖的配子，即卵子、***、***、***，用于无性增殖的孢子等。
细胞可选自肉瘤细胞、株化细胞和转化细胞。“肉瘤”是指在骨、软骨、脂肪、肌肉、血液等非上皮性细胞来源的***细胞中发生的癌，包括软组织肉瘤、恶性骨肿瘤等。肉瘤细胞是来源于肉瘤的细胞。“株化细胞”是指长期保持在体外，具有一定的稳定的性质，可以半永久地继代培养的培养细胞。存在PC12细胞(源自大鼠肾上腺髓质)、CHO细胞(源自中国仓鼠卵巢)、HEK293细胞(源自人胚胎肾)、HL-60细胞(源自人白细胞)、HeLa细胞(源自人***)、Vero细胞(源自非洲绿猴肾上皮细胞)、MDCK细胞(源自犬肾小管上皮细胞)、HepG2细胞(源自人肝癌)等来自包括人的各种物种的各种组织的细胞株。“转化细胞”是指从细胞外部导入核酸(DNA等)，改变遗传性质的细胞。关于动物细胞、植物细胞、细菌的转化，各种适宜的方法是公知的。
(3)细胞的培养***和细胞培养条件
在本发明的方法中，细胞的培养***和培养条件可以根据细胞的种类等适当确定。适于动物细胞、植物细胞和细菌的各细胞的培养方法是公知的，本领域技术人员可以使用任意公知的方法在聚酰亚胺多孔质膜中培养细胞。细胞培养基可以根据细胞的种类适当地制备。
动物细胞的细胞培养方法、细胞培养基例如记载在LONZA公司的细胞培养基目录中。植物细胞的细胞培养方法、细胞培养基例如记载在WAKO公司的植物组织培养基系列等中。细菌的细胞培养方法、细胞培养基例如记载在BD公司的一般细菌用培养基目录中。本发明方法中使用的细胞培养基可以为液体培养基、半固体培养基、固体培养基等的任一种形态。另外，通过将液滴状的液体培养基喷雾到细胞培养容器中，可以使培养基与负载有细胞的聚酰亚胺多孔质膜接触。
关于使用聚酰亚胺多孔质膜的细胞的培养，可以与微载体、纤维素海绵等其他悬浮型培养载体共存。
本发明的方法中，用于培养的***的形状、规模等没有特殊限定，可以从细胞培养用的培养皿、烧瓶、塑料袋、试管到大型的罐中适当利用。例如包括BD Falcon公司制的细胞培养皿、Thermo Scient ific公司制的Nunc细胞工厂等。予以说明，本发明中，通过使用聚酰亚胺多孔质膜，对于本来不能悬浮培养的细胞来说，也能在可进行悬浮培养的装置中以类似悬浮培养的状态进行培养。作为悬浮培养用的装置，例如可以使用康宁公司制的旋转烧瓶或旋转培养等。另外，作为实现同样功能的环境，可以使用VERITAS公司的FiberCel l(注册商标)***这样的中空纤维培养。
本发明方法中的培养可以通过使用在聚酰亚胺多孔质膜上连续添加并回收培养基这样的连续循环或开放式的装置，以在空气中使聚酰亚胺多孔质膜片露出这样的方式来进行。
本发明中，细胞的培养可以在这样的***中进行，其中，细胞培养基从设置在细胞培养容器外的细胞培养基供给装置连续或间歇地供给到细胞培养容器中。此时，可以是细胞培养基在细胞培养基供给装置和细胞培养容器之间循环的***。
在将细胞培养在细胞培养基从设置在细胞培养容器外的细胞培养基供给装置连续或间歇性供给细胞培养容器中这样的***中进行时，该***可以是包括作为细胞培养容器的培养单元和作为细胞培养基供给装置的培养基供给单元的细胞培养装置，其中，所述细胞培养装置具有如下特征：
培养单元是装纳用于负载细胞的1或多个聚酰亚胺多孔质膜的培养单元，其具备培养基供给口和培养基排出口，
培养基供给单元具备：培养基装纳容器、培养基供给管线、和经由培养基供给管线连续或间歇地向培养基输送液体的送液泵，其中，培养基供给管线的第一个端部与培养基装纳容器内的培养基接触，培养基供给管线的第二个端部经由培养单元的培养基供给口与培养单元内连通。
另外，在上述细胞培养装置中，培养单元可以是不具备空气供给口、空气排出口和氧更换膜的培养单元，另外，也可以是具备空气供给口和空气排出口、或氧更换膜的培养单元。培养单元即使不具备空气供给口和空气排出口、以及氧更换膜，细胞培养所必须的氧等也能通过培养基充分地供应给细胞。进而，在上述细胞培养装置中，培养单元还具备培养基排出管线，其中，培养基排出管线的第一个端部与培养基装纳容器连接，培养基排出管线的第二个端部经由培养单元的培养基排出口与培养单元内连通，培养基可以在培养基供给单元和培养单元之间循环。
4.关于本发明的细胞培养装置
另外，本发明涉及用于本发明制备方法的细胞培养装置，其包括聚酰亚胺多孔质膜。在本发明的细胞培养装置中，聚酰亚胺多孔质膜可以固定使用，或者悬浮在细胞培养基中使用。在细胞培养装置中，2片以上的聚酰亚胺多孔质膜可以上下或左右地层叠。
5.关于本发明的试剂盒
本发明还涉及用于细胞的制备方法的试剂盒，其包括聚酰亚胺多孔质膜。
本发明的试剂盒除了聚酰亚胺多孔质膜以外，可适当包括细胞培养所必须的构成要素。例如，包括应用于聚酰亚胺多孔质膜的细胞、细胞培养基、细胞培养装置、试剂盒的操作说明书等。
虽然没有限定，作为一实施方式，包括如下方式：包括在透明袋内保存1片或多片灭菌的聚酰亚胺多孔质膜，可原样用于细胞培养的形态的包装；或者将灭菌液体与聚酰亚胺多孔质膜一起封入该袋内，可有效地吸入接种的膜和液体一体化的形态的试剂盒。
实施例
参照以下所示的实施例更详细地说明本发明，但本发明的范围不限定于这些实施例。
实施例1
使用聚酰亚胺多孔质膜培养的人皮肤成纤维细胞的细胞数的经时变化
1.聚酰亚胺多孔质膜1和3的制备
(1)聚酰胺酸溶液组合物A的制备
在500ml的可分离式烧瓶中，使用N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)作为溶剂，按照使酸酐/二胺的摩尔比0.994、聚合物浓度为8质量％的量称量并投入作为酸酐的3,3',4,4'-联苯四羧酸二酐(s-BPDA)、作为二胺的4,4'-二氨基二苯基醚。然后，用安装有搅拌浆、氮气导入管、排气管的可分离式盖子盖上，继续30小时的搅拌操作。结束搅拌，用加压过滤器(滤纸：アドバンテック东洋(株)制：粘稠液用滤纸No.60)过滤烧瓶内的胶状物(dope)，得到聚酰胺酸溶液组合物A。溶液组合物A是粘稠液体，粘度为320泊。另外，极限粘度数为1.6。
(2)聚酰亚胺多孔质膜1和3的制备
在室温下，使用台式的自动涂布机，在表面实施了镜面抛光的不锈钢制的20cm见方的基板上，以约100～300μm范围的厚度，均匀地流延涂布聚酰胺酸溶液组合物A。然后，在温度23℃、湿度40％的大气中放置90秒，然后，将整个基板投入到凝固浴(水80质量份/NMP20质量份，室温)中。投入后，静置8分钟，使聚酰胺酸膜在基板上析出。然后，将基板从浴中取出，将基板上析出的聚酰胺酸膜剥离后，在纯水中浸渍3分钟，得到聚酰胺酸膜。将该聚酰胺酸膜在温度23℃、湿度40％的大气中干燥后，贴在10cm见方的针板拉幅机上，并固定四边。设置在电炉内，按照以约10℃/分钟的升温速度加热至150℃、然后加热至最高温度340℃、原样保持3分钟的温度曲线进行热处理，制备厚度不同的聚酰亚胺多孔质膜1(25μm)和聚酰亚胺多孔质膜3(48μm)。以下，也将聚酰亚胺多孔质膜1和3分别称为“膜1”和“膜3”。它们均为包括具有多个孔的表面层A和表面层B、及夹在该表面层A和表面层B之间的大孔层的三层结构的聚酰亚胺多孔质膜。
膜1的表面层A中存在的孔的平均孔径为21μm，表面层B中存在的孔的平均孔径为32μm，空孔率为73％。
膜3的表面层A中存在的孔的平均孔径为18μm，表面层B中存在的孔的平均孔径为28μm，空孔率为76％。
2.聚酰亚胺多孔质膜2、4的制备
(1)聚酰胺酸溶液组合物B的制备
在500ml的可分离式烧瓶中，使用N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)作为溶剂，按照使酸酐/二胺的摩尔比0.996、聚合物浓度为8质量％的量称量并投入作为酸酐的3,3',4,4'-联苯四羧酸二酐(s-BPDA)、作为二胺的4,4'-二氨基二苯基醚。然后，用安装有搅拌浆、氮气导入管、排气管的可分离式盖子盖上，继续30小时的搅拌操作。结束搅拌，用加压过滤器(滤纸：アドバンテック东洋(株)制：粘稠液用滤纸No.60)过滤烧瓶内的胶状物，得到聚酰胺酸溶液组合物。溶液组合物是粘稠液体，粘度为452泊。另外，极限粘度数为2.4。
(2)聚酰亚胺多孔质膜2和4的制备
在室温下，使用台式的自动涂布机，在表面实施过镜面抛光的不锈钢制的20cm见方的基板上，以约100～200μm的厚度均匀地流延涂布聚酰胺酸溶液组合物B。然后，在温度23℃、湿度40％的大气中放置90秒，然后，将整个基板投入到凝固浴(水80质量份/NMP20质量份，室温)中。投入后，静置8分钟，使聚酰胺酸膜在基板上析出。然后，将基板从浴中取出，将在基板上析出的聚酰胺酸膜剥离后，在纯水中浸渍3分钟，得到聚酰胺酸膜。将该聚酰胺酸膜在温度23℃、湿度40％的大气中干燥后，贴在10cm见方的针板拉幅机上，并固定四边。设置在电炉内，按照以约10℃/分钟的升温速度加热至150℃、然后加热至最高温度340、原样保持3分钟的温度曲线进行热处理，得到聚酰亚胺多孔质膜。
然后，对得到的聚酰亚胺多孔质膜的单面实施60秒常压等离子体处理，得到聚酰亚胺多孔质膜2、4。以下，也称为“膜2”和“膜4”。这些膜均为包括具有多个孔的表面层A和表面层B、及夹在该表面层A和表面层B之间的大孔层的三层结构的聚酰亚胺多孔质膜。
膜2的表面层A中存在的孔的平均孔径为9μm，表面层B中存在的孔的平均孔径为33μm，厚度为25μm、空孔率为74％。
膜4的表面层A中存在的孔的平均孔径为8μm，表面层B中存在的孔的平均孔径为35μm，厚度为48μm、空孔率为78.9％。
膜1～4的聚酰亚胺多孔质膜的特征示于下表。
[表2]
Figure BDA0001954028260000261
3.使用膜1～4的人皮肤成纤维细胞的培养
在2cm×2cm灭菌的正方形容器(Thermo Fisher Scient ific公司cat.103)中加入人成纤维细胞用培养基(LONZA公司，CC-3132)1ml，将灭菌的1.4cm见方的正方形的膜1～膜4以网结构的A面或大孔结构的B面朝上的方式静置。每1片接种4×104个人皮肤成纤维细胞(LONZA公司，CC-2511)，在CO2温育箱内继续进行培养。一周2次更换培养基(1ml)。培养开始后，在5天、7天、12天、19天、27天后，使用细胞计数试剂盒-8(同仁化学研究所制，以下称为“CCK8”)测量细胞数，观察细胞生长行为。结果示于图1。在膜1～4中，确认能够稳定地培养同等程度数量的细胞。
实施例2
使用聚酰亚胺多孔质膜培养的CHO DP-12细胞的细胞数的经时变化
在2cm×2cm灭菌的正方形容器(Thermo Fisher Scientific公司，cat.103)中加入细胞培养基(和光纯药工业株式会社IMDM 098-06465)0.5ml，将灭菌的1.4cm见方的正方形的膜1～膜4(实施例1制备的)以网结构的A面朝上的方式静置，每1片接种4×104个产生抗人IL-8抗体的CHO DP-12细胞(ATCC CRL-12445)。在CO2温育箱内继续培养，一周2次定期地更换培养基。培养开始后，在3天、7天、15天、22天、29天后，使用CCK8测量细胞数，观察细胞生长行为。结果示于图2。观察到稳定的细胞的生长。在膜1～4中，确认能够稳定地培养同等程度数量的细胞。
实施例3
使用聚酰亚胺多孔质膜培养的人间充质干细胞的细胞数的经时变化
在2cm×2cm灭菌的正方形容器(Thermo Fisher Scientific公司，cat.103)中加入间充质干细胞培养基(LONZA公司制，MSCBM)0.5ml，将灭菌的1.4cm见方的正方形的膜1～膜4(实施例1制备的)以网结构的A面朝上的方式静置，每1片接种4×104个人间充质干细胞。在CO2温育箱内继续培养，一周2次定期地更换培养基。培养开始后，在3天、7天、15天、22天、29天后，使用CCK8测量细胞数，观察细胞生长行为。结果示于图3。在膜1～4中，确认能够稳定地培养同等程度数量的细胞。
实施例4
在聚酰亚胺多孔质膜上的人间充质干细胞的长期培养
将人间充质干细胞接种到口内径6cm的涂布有I型胶原蛋白的培养皿(IWAKI制)中培养后，通过胰蛋白酶处理来剥离，调制细胞悬浮液。在2cm×2cm的灭菌的正方形容器(Thermo Fisher Scientific公司，cat.103)中加入细胞培养基(GIBCO制，DMEM+FBS10％)0.5ml，将灭菌的1.4cm见方的正方形的聚酰亚胺多孔质膜1和2(实施例1制备的)以网结构的A面朝上的方式置于容器中，以每1片聚酰亚胺多孔质膜4×104个人间充质干细胞的比例添加到聚酰亚胺多孔膜上部。在CO2温育箱内继续培养，一周2次更换培养基。培养开始后，定期地使用CCK8测定细胞数，一边培养一边观察细胞生长行为。将直至106天的培养细胞数的经时变化示于图4。观察到稳定的细胞的生长。以下，将使用聚酰亚胺多孔质膜的上述培养称为“部件培养”，将得到的细胞样品称为“部件培养细胞样品”。
将培养开始后第120天的生长附着有细胞的聚酰亚胺多孔质膜2用***固定后，用Alexa Fluor(注册商标)488鬼笔环肽、CellMask Orange质膜染色、和DAPI染色。将光学观察以及共聚焦激光显微镜对同一视野的光学和荧光观察的结果示于图5。在黄白色聚酰亚胺多孔质膜上的细胞的生长状态在一定程度上是光学可观察的。黄白色聚酰亚胺多孔质膜的高可视度有助于提高观察性。
实施例5
在聚酰亚胺多孔质膜上培养的人间充质干细胞向成骨细胞分化的诱导
将实施例4的培养开始后第120天的生长附着有细胞的聚酰亚胺多孔质膜1转移到成骨细胞分化诱导培养基(PromoCell公司制，C-28013)中，用22天诱导为成骨细胞(一周2次更换培养基)后，再转移到成骨细胞钙化培养基(PromoCell公司制，C-28020)中培养14天。用钙化染色试剂盒(コスモバイオ社制)染色。进行光学显微镜观察，进行钙化部位的观察。观察到显著的变成红色的部位，确认钙化的进展(图6)。确认维持间充质干细胞具有的干细胞特性。
实施例6
在聚酰亚胺多孔质膜上培养的人间充质干细胞向脂肪细胞分化的诱导
将实施例4的培养开始后第127天的生长附着有细胞的聚酰亚胺多孔质膜2转移到脂肪细胞诱导培养基(PromoCell公司制，C-28016)中，培养15天。然后，将生长附着有细胞的聚酰亚胺多孔质膜用***固定，将脂肪细胞的油滴用BODIPY荧光染色。将光学观察以及共聚焦激光显微镜对同一视野的光学和荧光观察的结果示于图7。通过黄白色聚酰亚胺多孔质膜具有的高可视度，不仅在荧光染色中、在光学观察中也观察到油滴的存在。确认维持间充质干细胞具有的干细胞特性。
实施例7
在聚酰亚胺多孔质膜上长期培养的人间充质干细胞的基因分析
1.样品的制备
将实施例4的培养开始后第154天的膜1的部件培养细胞样品用作基因分析用样品。另外，不使用聚酰亚胺多孔质膜，除此以外，在与实施例4同样的条件下，在涂布有I型胶原蛋白的培养皿(IWAKI制)中，培养7天人间充质干细胞。将培养的细胞用作基因分析用样品。以下，将不使用聚酰亚胺多孔质膜的上述培养称为“通常培养”，将得到的细胞样品称为“通常培养细胞样品”。
2.基因分析
关于得到的样品，按照以下步骤进行基因分析。
(1)RNA提取
使用RNeasy Plus micro试剂盒(Qiagen)，按照所附的方案，进行RNA的提取。RNA用30μL不含核酸酶的水提取，然后，使用不含TURBO DNA的试剂盒(Life Technologies)，通过DNase进行基因组DNA的分解处理。分解处理后，用Nano Drop 2000(Thermo FishierScientific公司)测定RNA溶液的浓度。
(2)cDNA合成
将浓度测定后的RNA溶液调节至12.5ng/μL，以100ng为模板，进行cDNA合成。合成使用用于RT-PCR的SuperScript(商标)III第一链合成***(Life Technologies公司)。用Nano Drop 2000测定cDNA溶液的浓度。
(3)q-PCR反应
将cDNA溶液调节至200ng/μL，以200ng为模板，通过实时PCR进行测定。用CFX连接(Bio-Rad公司)进行PCR，试剂使用SsoAdvanced(商标)Universal SYBR Green超混合液(Bio-Rad公司)。对间充质干细胞阳性标记物(CD166、CD44、CD105、CD146、CD90、CD106、CD29、CD71)、间充质干细胞阴性标记物(CD19、CD45、CD31、CD18、CD56、CD34、CD14、CD80、CD40、CD86)，测定表达量，使用β-肌动蛋白作为内标基因。
(4)测定数据分析
由将测定求得的各基因的Ct值减去作为内标基因测定的β-肌动蛋白的Ct值而得到的值，计算相对表达量，进行比较。另外，为了比较通常培养细胞样品与部件培养细胞样品之间基因表达的经时变化，分别计算将7天通常培养的细胞样品的表达量设为1时的变化来进行比较。将关于阳性标记物的表达量的结果示于图8。予以说明，阴性标记物的表达量全部确认为低值。由基因表达量的结果确认，使用实施例1制备的膜长期培养后，也能维持干细胞特性。
实施例8
使用聚酰亚胺多孔质膜的人皮肤成纤维细胞的长期培养
继续进行实施例1中实施的实验，实施约1年的长期培养。继续每周2次更换培养基，适当使用CCK8进行生长细胞数的测定。结果示于图9。即使在长期培养的情况下，也观察到人皮肤成纤维细胞的稳定的增殖和生长。
实施例9
由使用聚酰亚胺多孔质膜培养的人皮肤成纤维细胞的物质产生
使用人纤连蛋白测定用ELISA试剂盒(タカラバイオ制，Cat#MK115)测定由实施例8的培养开始后第397天的部件培养细胞样品产生的纤连蛋白。结果示于图10。予以说明，作为对照样品，不使用聚酰亚胺多孔质膜，除此以外，在与实施例8同样的条件下，使用在细胞培养用培养皿(住友ベークライト制)中培养了8天的人皮肤成纤维细胞，测定该细胞的纤连蛋白产生(图中的培养皿1和2)。即使在长期培养后，也确认稳定的纤连蛋白产生，确认维持人皮肤成纤维细胞的特性。确认由用聚酰亚胺多孔质膜培养的细胞的物质产生的效率与由通常培养所培养的细胞的物质产生的效率相比，非常高。
产业实用性
本发明的方法可适用于简便、高效且稳定地培养细胞。特别是在能够目测确认细胞的接种和生长附着行为等的方面来说是有用的。另外，由于所使用的聚酰亚胺多孔质膜的着色度低，因此外观性优异，从这方面来说也是有用的。

Claims (25)

1.细胞的制备方法，其包括将细胞应用于聚酰亚胺多孔质膜来进行培养的工序，
其中，所述聚酰亚胺多孔质膜是包括具有多个孔的表面层A和表面层B、及夹在所述表面层A和表面层B之间的大孔层的三层结构的聚酰亚胺多孔质膜，
其中，所述表面层A中存在的孔的平均孔径小于所述表面层B中存在的孔的平均孔径，
所述大孔层具有与所述表面层A和B结合的隔壁、以及被该隔壁及所述表面层A和B包围的多个大孔，
所述表面层A和B中的孔与所述大孔连通，而且
大孔层中的至少1个隔壁具有连通大孔彼此的1个或多个孔，
所述聚酰亚胺多孔质膜通过包括以下工序的方法制造：
(1)将包含由四羧酸单元和二胺单元形成的极限粘度数为1.0～3.0的聚酰胺酸3～60质量％和有机极性溶剂40～97质量％的聚酰胺酸溶液流延成膜状，浸渍或接触在以水为必须成分的凝固溶剂中，制作聚酰胺酸的多孔质膜的工序，和
(2)对所述工序(1)得到的聚酰胺酸的多孔质膜进行热处理而酰亚胺化的工序，其中，将热处理后的膜的纵向和横向的收缩率分别控制在8％以下，且在所述热处理中，200℃以上的温度区域的升温速度为25℃/分钟以上。
2.权利要求1所述的细胞的制备方法，其中，所述聚酰亚胺多孔质膜通过包括以下工序的方法制造：
(1)将含有聚酰胺酸和有机极性溶剂的聚酰胺酸溶液流延成膜状，浸渍或接触在凝固溶剂中，制作聚酰胺酸的多孔质膜的工序，
(2)对所述工序(1)得到的聚酰胺酸的多孔质膜进行热处理而酰亚胺化的工序，和
(3)对所述工序(2)得到的聚酰亚胺多孔质膜的至少单面实施等离子体处理的工序。
3.权利要求1或2所述的细胞的制备方法，其中，所述聚酰胺酸由选自联苯四羧酸二酐和均苯四甲酸二酐中的至少1种四羧酸二酐和选自苯二胺、二氨基二苯基醚和双(氨基苯氧基)苯中的至少1种二胺获得。
4.权利要求1或2所述的方法，其包括将细胞接种在所述聚酰亚胺多孔质膜的表面的工序。
5.权利要求1或2所述的方法，其包括以下工序：
在所述聚酰亚胺多孔质膜的干燥的表面上载置细胞悬浮液，
使所述聚酰亚胺多孔质膜静置，或移动所述聚酰亚胺多孔质膜以促进液体的流出，或者刺激部分表面，使细胞悬浮液被吸入所述膜中，和
使细胞悬浮液中的细胞保留在所述聚酰亚胺多孔质膜内，使水分流出，此处，所述细胞是动物细胞。
6.权利要求1或2所述的方法，其包括以下工序：
用细胞培养基或灭菌的液体润湿所述聚酰亚胺多孔质膜的单面或两面，
向所述润湿的聚酰亚胺多孔质膜中装填细胞悬浮液，和
使细胞悬浮液中的细胞保留在所述聚酰亚胺多孔质膜内，使水分流出，此处，所述细胞是动物细胞。
7.权利要求6所述的方法，其中，所述灭菌的液体为灭菌水或灭菌的缓冲液。
8.权利要求1或2所述的方法，其包括在细胞培养容器中装入细胞培养基、细胞和1片或多片的所述聚酰亚胺多孔质膜，其中，聚酰亚胺多孔质膜处于悬浮在细胞培养基中的状态。
9.权利要求8所述的方法，其特征在于，使用2片以上的所述聚酰亚胺多孔质膜的小片。
10.权利要求8所述的方法，其中，细胞与所述聚酰亚胺多孔质膜自发地粘接。
11.权利要求1或2所述的方法，其中，所述聚酰亚胺多孔质膜以如下方式在细胞培养容器中的细胞培养基中悬浮或固定：
i)折叠，
ii)卷成卷状，
iii)将片或小片用线状结构体连接，或
iv)系成绳状。
12.权利要求11所述的方法，其中，细胞与所述聚酰亚胺多孔质膜自发地粘接。
13.权利要求1或2所述的方法，其包括将2片以上的聚酰亚胺多孔质膜上下地层叠或左右地排列在细胞培养基中使用。
14.权利要求1或2所述的方法，其中，组合使用权利要求4～13任一项所述的方法中的2种或更多种的方法。
15.权利要求1或2所述的方法，其中，细胞在聚酰亚胺多孔质膜的表面和内部生长增殖。
16.权利要求1或2所述的方法，其中，细胞是动物细胞。
17.权利要求16所述的方法，其中，动物细胞为来源于昆虫或属于脊椎动物门的动物的细胞。
18.权利要求1或2所述的方法，其中，细胞是多能干细胞。
19.权利要求1或2所述的方法，其中，细胞是组织干细胞。
20.权利要求1或2所述的方法，其中，细胞是体细胞。
21.权利要求1或2所述的方法，其中，细胞是生殖细胞。
22.权利要求1或2所述的方法，其中，细胞选自肉瘤细胞、株化细胞和转化细胞。
23.用于权利要求1～22任一项所述的细胞制备方法的细胞培养装置，其包括权利要求1中限定的方法制造的聚酰亚胺多孔质膜。
24.权利要求23所述的细胞培养装置，其中，2片以上的所述聚酰亚胺多孔质膜上下地层叠或左右地排列。
25.用于权利要求1～22任一项所述的细胞制备方法的试剂盒，其包括权利要求1中限定的方法制造的聚酰亚胺多孔质膜。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010038873A1 (ja) * 2008-10-02 2010-04-08 宇部興産株式会社 多孔質ポリイミド膜及びその製造方法
WO2011043467A1 (ja) * 2009-10-09 2011-04-14 宇部興産株式会社 着色ポリイミド成形体及びその製造方法
WO2011125988A1 (ja) * 2010-04-07 2011-10-13 宇部興産株式会社 多孔質ポリイミド膜及びその製造方法
JP2011219585A (ja) * 2010-04-07 2011-11-04 Ube Industries Ltd 多孔質ポリイミド膜及びその製造方法
JP2011219586A (ja) * 2010-04-07 2011-11-04 Ube Industries Ltd 多孔質ポリイミド膜及びその製造方法
JP2014180787A (ja) * 2013-03-18 2014-09-29 Ube Ind Ltd 積層体および積層体の製造方法
WO2015012415A1 (ja) * 2013-07-26 2015-01-29 宇部興産株式会社 細胞の培養方法、細胞培養装置及びキット

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6262455B2 (ja) 2013-06-28 2018-01-17 株式会社メガチップス 係数テーブルの作成方法および画像の拡大縮小処理装置
CN109563464B (zh) * 2016-07-25 2022-05-24 宇部兴产株式会社 细胞培养模块

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010038873A1 (ja) * 2008-10-02 2010-04-08 宇部興産株式会社 多孔質ポリイミド膜及びその製造方法
WO2011043467A1 (ja) * 2009-10-09 2011-04-14 宇部興産株式会社 着色ポリイミド成形体及びその製造方法
WO2011125988A1 (ja) * 2010-04-07 2011-10-13 宇部興産株式会社 多孔質ポリイミド膜及びその製造方法
JP2011219585A (ja) * 2010-04-07 2011-11-04 Ube Industries Ltd 多孔質ポリイミド膜及びその製造方法
JP2011219586A (ja) * 2010-04-07 2011-11-04 Ube Industries Ltd 多孔質ポリイミド膜及びその製造方法
JP2014180787A (ja) * 2013-03-18 2014-09-29 Ube Ind Ltd 積層体および積層体の製造方法
WO2015012415A1 (ja) * 2013-07-26 2015-01-29 宇部興産株式会社 細胞の培養方法、細胞培養装置及びキット

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