CN109475508A - 具有增强的热稳定性的含有生物活性材料的速溶薄膜的制备方法 - Google Patents

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Abstract

能够包住并且保存生物活性剂的聚合物膜的制备方法。具体而言，本发明涉及含有生物活性蛋白质或病毒的口服薄膜的制备。例如，本文公开了用于将轮状病毒和抗体保存于薄干燥膜中的方法和组合物。

Description

具有增强的热稳定性的含有生物活性材料的速溶薄膜的制备 方法
发明领域
具体而言，本发明涉及口服薄膜的制备。本发明涉及用于制备通过口腔路径递送生物活性材料的薄膜的方法和组合物。该薄膜能够为各种生物活性材料提供过程稳定性、热稳定性和储存稳定性。使例如溶液或干燥粉末形态的所述生物活性剂(例如疫苗或抗体)与聚合物基质混合，随后干燥成具有优良的长时间稳定性的薄膜。
发明背景
口服薄膜(OTF)已被认定为广泛使用的片剂和滴液剂的替代性给药方式。这种递送形式的优势包括精确的剂量、较小的包装尺寸、易于处理和给药、患者的依从性和/或接受度以及与当前行业实践形成互补的简单、具有成本效益的制造工艺。口服递送薄膜条被设计成潮湿的，且能够一与唾液和颊组织接触就快速溶解，释放出所含有的药物产物。口服薄膜的主要成分通常是一种或更多种亲水聚合物，其中的一些具有良好的粘膜粘附性。在这种情况下，聚合物薄膜能够牢固地粘附至颊组织直至完全溶解。对于患者依从性以及改善治疗剂的给药而言，快速溶解性和粘膜粘附性是重要的关键性质。
已将诸如这样的口气清新剂包封于口服薄膜中并用于商业销售，然而最近，除了诸如或这样的几种处方小分子药物以外，还已经成功地将诸如非处方药物这样的更复杂的产品(包括牙齿护理和流感药物)包封于口服薄膜中。然而，用于制造这些口服薄膜的工艺通常并非设计用于包封较大的更倾向于热不稳定的生物活性剂，例如蛋白质、减活病毒和细菌疫苗。商业上的膜制造工艺通常需要高温、潜在的灭活溶剂或者能够使潜在的生物治疗剂变性的其它极端条件，这导致效能进而其生物活性的显著损失。
经由胃肠道(GI)递送的药物会在胃腔中经受低pH(高酸度)和严苛的酶环境。蛋白质药物、核酸和疫苗不耐受这些条件，且会发生变性和降解，导致其生物活性的显著损失。
当将生物活性成分结合入薄膜中时，必须注意开发能够保存生物活性的方法。此外，为了使产品在保质期内保持生物活性，在开发薄膜制剂中需要使用关键的赋形剂，以确保蛋白质在预期储存条件下能够随时间保持效力。
鉴于以上原因，需要能够更有效地递送生物活性材料的组合物。我们认为，期望具有适用于例如以有效方式递送多种生物活性剂的OTF。如果将OTF设计成能够提供与其它递送***和组合物相当的保质期，则也能实现益处。本发明提供了通过回顾以下内容而显而易见的这些或其它特征。
发明概述
本发明涉及用于制备速溶薄膜组合物的方法，所述速溶薄膜组合物含有生物活性材料，且同时能够提供在制造过程和储存中增强的稳定性。该组合物含有生物活性剂、赋形剂和基质聚合物，它们共同工作以提供稳定的有效递送***。该方法包括对生物活性剂、赋形剂和聚合物进行掺混以形成潮湿掺混物的步骤。将潮湿掺混物施涂于平坦表面，以使用热量和/或真空条件进行干燥，从而形成薄膜。如本文所述的那样对赋形剂和聚合物进行选择，以提供高工艺回收率、长保质期和良好的溶解时间。作为一般规则，平衡制剂组分以提供低分子运动、约10％至1.5％的残留水分以及具有保护性但能够溶于水中的聚合物基质。
为了在严苛的薄膜制造条件下保护生物活性剂，开发了药物赋形剂和干燥处理技术的独特组合。维持储存稳定性和简化分配和给药程序对于实施大规模治疗和预防性治疗而言至关重要。因此，本发明的方法包括制造包含生物活性材料的聚合物膜，所述生物活性材料包括利用独特的药物赋形剂组合而稳定化了的蛋白质和疫苗。提出了在各种溶剂***中的具有各种赋形剂和聚合物组合物的一系列制剂，以制备能够在制造和升高的温度储存下保持生物活性的膜。还为了形成这些膜而开发了不同的溶剂蒸发技术。本发明的优选实施方式教导了口服薄膜、以及在存在缓冲剂的条件下组合使用聚合物和经药物赋形剂稳定化了的生物活性剂的制造方法。
在所述膜的一种实施方式中，生物剂是轮状病毒(例如减弱的轮状病毒疫苗)。干燥薄膜的组合物包含稳定化赋形剂和聚合物基质。稳定化赋形剂可包含缓冲剂、聚合物、增塑剂、二价阳离子、表面活性剂、糖和/或溶剂，其有助于加工，并且能够增强轮状病毒在加工和储存过程中的生存能力。在某些实施方式中，组合物包含配制成F1至F8(参见以下实施例2的表1)赋形剂溶液制剂中的任一种及其近似等价形态(每一种成分以识别值的25％以内存在)的轮状病毒。将生物活性材料的储备溶液和赋形剂溶液与基质聚合物(例如聚乙烯醇(PVA)和/或聚环氧乙烷(PEO))混合，以提供例如按照本文所述的方法准备加工成干燥膜的潮湿膜掺混物。在一种更优选的实施方式中，利用F1至F3赋形溶液中的任一种来配制轮状病毒，并与PVA掺混成潮湿的膜掺混物。我们发现能够使用F1赋形剂制剂(磷酸钾、柠檬酸、蔗糖、山梨糖醇、氯化钙、氯化锌和明胶)使用PVA作为基质聚合物来制备具有优异稳定性和加工特征的特定轮状病毒组合物，例如在对流炉中在60℃下经过1～2小时而干燥成平坦膜。
轮状病毒薄膜可具有某些令人满意的特征。例如，组合物可形成具有2％至7％残留水分的薄膜；轮状病毒可以4log ffu/100mg至7log ffu/100mg或约6log ffu/100mg的(以每毫克(mg)干燥膜的荧光焦点单元(ffu)表示的)滴度存在。可通过将膜在45℃至80℃(或50℃至65℃)下暴露0.5至3小时来使其干燥。膜可具有厚度(穿过垂直于平面的维度)在20微米至400微米范围内的主平面。基质聚合物可以是制剂中的任意增塑剂的至少4倍。可有益地由含有至少1重量％的山梨糖醇的赋形剂制剂来制备组合物。组合物可包含任意轮状病毒株，特别是株G1、G2、G3和/或G4。
薄膜还可结合有生物活性蛋白质，例如抗体。例如，具有蛋白质活性剂(例如单克隆抗体)的薄膜组合物可将蛋白质包含于与基质聚合物掺混的赋形剂溶液制剂中，干燥成薄膜。在某些实施方式中，组合物包含配制成M3、M5、M6或M7(参见以下实施例21的表20)稳定剂制剂中的任一种及其近似等价形态(每一种成分以识别值的25％以内存在)的抗体。例如，按照本文所述的方法，将这些实施方式与聚合物(例如泊洛沙姆(poloxamer)、聚乙烯醇(PVA)和/或聚环氧乙烷(PEO))掺混成用于加工成干燥膜潮湿的膜掺混物。
生产薄膜的方法可包括对生物活性剂、赋形剂和聚合物的溶液或悬浮液进行掺混，以提供潮湿掺混物。可在环境条件下，通过添加热量，或者在“真空”条件下(例如冷冻干燥或真空干燥)，在表面上干燥潮湿掺混物。例如，可将潮湿掺混物分散在平面表面上，并暴露在气流和/或热量下(例如在30℃至70℃下暴露15分钟至4小时)，直至薄膜产品的残留水分在约1.5％至10％的范围内。薄膜通常具有约50微米至约500微米的垂直于主平面的厚度。
定义
在详细描述本发明之前，应当理解的是，本发明不限于具体的装置或生物***，其当然可以发生变化。还应当理解的是，本文所使用的术语仅用于描述具体实施方式，而非旨在进行限制。如本说明书以及所附权利要求书中所用，单数形式“一个”、“一种”和“该/所述”包括复数形式，除非上下文中另有明确规定。因此，例如，提及“一个/种表面”可包括两个/种或更多个/种表面的组合；提及“细菌”可包括细菌的混合物等。
除非另有限定，在此使用的所有技术和科学术语的含义均与本发明所属领域的普通技术人员的通常理解相一致。在详细描述本发明之前，应当理解的是，本发明不限于所公开的实施例，例如，不限于所公开的生物活性剂、聚合物、赋形剂、疫苗或浓度范围等。还应当理解的是，本文所使用的术语仅用于描述具体实施方式，而非旨在进行限制。
尽管可在本发明的实践中使用与本文所描述的那些相似、改动或等价的许多方法和材料而不会过度实验，本文描述了优选的材料和方法。在本发明的描述和权利要求中，将会按照以下所设定的定义来使用以下术语。
如本文所用，术语“约”是指给定量的数值可包括范围在所述数值10％以内、或任选地在该数值5％以内、或在一些实施方式中在该数值1％以内的量。
“药物上可接受的”是指那些在合理的医学判断范围内适合用于与组织或人以及低等动物接触而没有过度毒性、刺激、过敏反应等且与合理的利益/风险比相称并且对其预期用途有效的活性剂、盐和赋形剂。药物上可接受的赋形剂(载剂、添加剂)是那些能够合理地给药至目标哺乳动物以提供有效剂量的所采用的活性成分的赋形剂。优选是迄今为止被联邦药物管理局(FDA)指定为“通常被认为是安全的”(GRAS)赋形剂。
“多元醇”是本领域已知的，例如具有多个羟基的分子，并且包括例如糖(还原糖和非还原糖)、糖醇和糖酸。本文中优选的多元醇具有小于约600kDa(例如在约120至约400kDa)的分子量。“还原糖”是含有能够还原金属离子或与赖氨酸以及蛋白质中的其它氨基发生共价反应的半缩醛基的多元醇。“非还原糖”是不具有还原糖的这些性质的糖。还原糖的例子是果糖、甘露糖、麦芽糖、乳糖、***糖、木糖、核糖、鼠李糖、半乳糖和葡萄糖。非还原糖包括蔗糖、海藻糖、山梨糖、松三糖和棉子糖。甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、苏糖醇、山梨糖醇和甘油是糖醇的例子。关于糖酸，其包括L-葡糖酸盐及其金属盐。
术语“薄膜”将会以一般用法理解，以及如本领域技术人员阅读本说明书时所理解的那样。例如，薄膜可以是材料的薄片材，其具有显著小于横跨片材主平面的维度的厚度维度(例如，干燥结束时的厚度小于片材长度或宽度的1％)。例如，在作为生物活性剂的速溶载剂的一种典型实施方式中，薄膜通常是厚度小于约1mm、0.25mm、0.1mm、0.05mm或更小的片材。
术语“潮湿(的)掺混物”是指如本文所述的生物活性剂、赋形剂溶液以及基质聚合物的混合物。配制潮湿掺混物，以将其供料至在表面上进行的干燥处理中，例如，除去大部分水，从而得到干燥薄膜。
如本文所用，术语“基质聚合物”是指潮湿掺混物中(或基质聚合物储料中)向干燥后的薄膜提供聚合物基质的主要的一种或更多种聚合物。该术语并不旨在表示所有聚合物，而通常是指那些溶解或悬浮于与生物活性储料溶液混合以提供潮湿掺混物的基质聚合物储料中的聚合物。被特别排除的作为本发明薄膜的基质聚合物的聚合物是天然蛋白质、核酸和淀粉。薄膜中的示例性基质聚合物包括例如聚环氧乙烷(PEO)、聚乙烯醇(PVA)和聚乙烯吡咯烷酮。
术语“增塑剂”是指能够降低固化玻璃状基质的玻璃化转变温度的赋形剂化合物。这里，增塑剂作为溶解的固体包含于潮湿掺混物中，并且起到改变干燥后薄膜的物理性质并且使其在合适浓度下具有令人满意的功能的作用。薄膜中的示例性增塑剂包括例如甘油和山梨糖醇。
附图的简要说明
图1显示了制备生物活性干燥薄膜的一种典型工艺的流程图。
图2显示了四价OTF制剂F2在a)4℃、b)25℃和c)40℃下的储存稳定性。
图3显示了四价OTF制剂F3在a)4℃、b)25℃和c)40℃下的储存稳定性。
图4显示了含有CaCO3分散固体的各种OTF制剂的稳定性。图4A—含有CaCO3分散固体的各种5％蔗糖OTF制剂的稳定性。注：在t0柱顶部标注了水分含量水平。图4A—含有CaCO3分散固体的各种10％蔗糖/50mM KPO4OTF制剂的稳定性。注：在t0柱顶部标注了水分含量水平。图4C—含有CaCO3分散固体的各种20％蔗糖OTF制剂的稳定性。注：在t0柱顶部标注了水分含量水平。
图5显示暴露于不同剂型RRV下的7日龄小鼠幼崽中的粪便抗RRV IgA应答。对于第2组，未能在第2周取回粪便样本。
图6显示暴露于不同剂型RRV下的7日龄小鼠幼崽中的血清抗RRV IgG应答。在第4周前未能收集血清试样。
发明详述
本发明涉及薄膜组合物，所述薄膜组合物结合有生物活性剂并被配置成提供所述活性剂的有效递送和长时间稳定性。薄膜聚合物组合物具有较低的残留水分，且能够减少生物制剂在诸如热、光、氧化和水分这样的减稳现象下的暴露。本发明包括制备结合有生物活性材料的薄干燥膜的方法。
初步研究(参见例如实施例26)已经表明，利用干燥薄膜口服给药能够提供与液体剂型相当的功效。(例如，以下实施例2～25中的)进一步工作已经确定了将各种生物活性剂结合入膜中的制剂和方法，所述制剂和方法具有较高的工艺回收率、延长的保质期以及良好的给药剂量生物利用度。
在一种实施方式中，在含有糖、缓冲剂和二价阳离子的溶液中使活病毒疫苗形态的生物活性材料稳定化，随后将其添加至聚合物基质中，然后进行干燥以形成薄的稳定膜。在另一种实施方式中，将疫苗稳定在糖、缓冲剂和二价阳离子中作为干燥粉末，随后将其添加至聚合物混合物中以形成薄膜。液体和干燥粉末制剂都可进一步含有附加成分，包括表面活性剂、聚合物、氨基酸和抗酸剂。
还可使用制造薄膜的组合物和方法来使诸如核酸和蛋白质这样的其它生物活性剂稳定化。例如，可将抗体配入专门的赋形剂溶液中，随后与基质聚合物进行掺混，以将其干燥成膜。包封在具有高工艺回收率的基质中的抗体在储存和给药剂量生物利用度上显示出卓越的稳定性。
I.用于制备生物活性薄膜的制剂和产品中间体
为了制备包含一种或更多种生物活性剂的干燥薄膜，通常将生物活性材料试样与赋形剂溶液混合，以制备生物活性储料溶液或悬浮液(生物活性储料溶液)。将生物活性储料溶液与基质聚合物(或基质聚合物的混合物)掺混，以制备用于干燥在表面上的潮湿掺混物，以形成结合有生物活性剂的干燥薄膜。
生物活性剂的储料溶液或悬浮液
储料溶液包含水溶液中(例如抗体)或悬浮液中(例如病毒)的生物活性剂和赋形剂，所述赋形剂能够提供处理过程中的稳定环境。储料溶液中的许多赋形剂还起到了延长干燥后的薄膜中生物活性剂的保质期的作用。
用于结合入薄膜中的生物活性剂可包括例如细菌、病毒、蛋白质、核酸和小分子药物。例如，生物活性剂可包括病毒疫苗、细菌疫苗、核酸、蛋白质、抗体、酶、生长因子、细胞因子、佐剂或病毒样颗粒。
生物活性剂常常最初在相对纯化的溶液或悬浮液中获得。例如，生物活性剂可以是纯化或浓缩处理的最终产物。将该生物活性产物与赋形剂溶液混合，以制备要与聚合物掺混的储料溶液。可将生物活性剂透析入赋形剂溶液中，但常常将该活性剂简单地掺混入赋形剂溶液(例如一份纯化的活性剂溶液与4份薄膜赋形剂溶液)以形成生物活性储料溶液。或者，例如在生物活性剂是以冷冻干燥或喷雾干燥形式得到的情况下，可在赋形剂溶液中简单地重构该活性剂，以制造生物活性储料溶液。
随后，将生物活性剂储料溶液与基质聚合物或基质聚合物的混合物掺混，以提供用于薄膜干燥的潮湿掺混物。或者，可在添加生物活性剂溶液或悬浮液之前使赋形剂溶液和基质聚合物混合，形成潮湿掺混物。
赋形剂溶液
将生物活性剂与赋形剂溶液混合，以使生物活性剂在处理过程中稳定化，并且提供稳定的环境，以延长活性薄膜的储存。示例性的赋形剂溶液示于以下实施例2的表1、实施例21的表20以及实施例22的细菌赋形剂制剂中。
已发现表1的制剂F1至F24可用于处理和稳定化本发明薄膜中的病毒。病毒赋形剂溶液可包含例如缓冲剂、多元醇(例如糖)、增塑剂、糖和/或明胶。
在用于病毒的优选制剂中，赋形剂溶液包含磷酸钾、柠檬酸盐、蔗糖、山梨糖醇、钙离子、锌离子和明胶。在更优选的实施方式中，制剂包含约1.6重量％的山梨糖醇。这些制剂与PVA基质聚合物组合时特别有效。这些制剂十分适用于处理和储存薄膜中的轮状病毒。
已发现表20的制剂M1至M7可用于处理和稳定化本发明薄膜中的蛋白质生物活性剂。蛋白质试剂赋形剂溶液可包含例如缓冲剂、糖、多元醇和/或聚合物。需要注意的是，未将储料溶液中的聚合物考虑为薄膜的“基质聚合物”，除非它们满足以下基质聚合物栏中所列出的要求。例如，未将抗体蛋白质考虑为膜中配置成保护抗体的基质聚合物。
在用于蛋白质的优选制剂中，赋形剂溶液包含组氨酸、蔗糖、山梨糖醇和聚山梨酯。三嵌段共聚物泊洛沙姆188可提供附加益处。这些制剂与PVA基质聚合物组合时特别有效。这些制剂十分适用于生物活性剂蛋白质是抗体的例子中。
对于细菌，功能良好的赋形剂溶液可包含例如磷酸钾缓冲剂、海藻糖、蛋氨酸和明胶。例如，T2制剂包含25％的海藻糖、1％的蛋氨酸、5％的明胶以及pH 8下的25mM磷酸钾。或者，细菌赋形剂储料可简单地包含缓冲剂，例如用于耐寒细菌，例如许多肠杆菌科细菌。
赋形剂溶液的总固体百分比一般是相当高的，以例如将潮湿掺混物处理中间产物的干燥时间降至最短。例如，赋形剂溶液中的总固含可以是小于约5重量％至多于50重量％、10％至35％、15％至30％或约25％。大部分赋形剂固体通常是一些形态的糖和/或其它多元醇，例如用作快速溶解填充剂和稳定剂。
可在本发明的赋形剂溶液中包含缓冲剂，以提供制剂成分溶解度的有利环境，并且增强生物活性剂的稳定性。本发明的典型的缓冲剂为例如磷酸钾、磷酸钠、乙酸钠、柠檬酸盐、琥珀酸钠、组氨酸、咪唑、碳酸氢铵、碳酸盐、羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)、三羟甲基氨基甲烷(tris)、酒石酸盐、马来酸盐、乳酸盐、氧化镁、氧化铝、氢氧化铝和氢氧化镁、碳酸铝凝胶、碳酸氢钠、水滑石、硫糖铝和次水杨酸铋(bismuth subsalicylate)。可将本发明的制剂、组合物以及重构产物中的pH水平调整至约pH 4至约pH 10、约pH 6至约pH 8范围内的pH，更典型的是调整至接近中性或约pH 7.2。
对于轮状病毒，希望将pH保持在pH 5至7的范围内。对于活轮状病毒的稳定性，6.0至6.5的pH范围是令人满意的。用以增强轮状病毒衣壳稳定性的优选pH是约pH 6.3。
病毒和蛋白质通常在存在大量多元醇(例如基本上溶于水的糖)的条件下更加稳定。在优选的实施方式中，制剂糖是单糖或二糖。在一个方面中，糖以小于约5重量％至60重量％、10重量％至35重量％、15重量％至25重量％或约20重量％的量存在于赋形剂溶液中。在优选的实施方式中，糖以约20重量％至约30重量％范围内的浓度存在于赋形剂溶液中。更优选的糖包括例如蔗糖、甘露醇、乳糖、葡萄糖、岩藻糖、海藻糖、聚天冬氨酸、肌醇六磷酸(植酸)、唾液酸和N-乙酰神经氨酸-乳糖。在一种典型的实施方式中，糖是海藻糖或蔗糖。赋形剂溶液的多元醇可包括例如非还原糖、还原糖、糖醇和糖酸。多元醇可包括例如蔗糖、海藻糖、山梨糖、松三糖、水苏糖、棉子糖、果糖、甘露糖、麦芽糖、乳糖、***糖、木糖、核糖、鼠李糖、半乳糖和葡萄糖、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、苏糖醇、L-葡糖酸盐和/或类似的物质。
两性离子能够帮助稳定蛋白质结构，且有助于pH缓冲。在本发明的一些实施方式中，赋形剂溶液中存在约0mM至20mM、或约10mM的量的氨基酸。用于结合入本发明制剂中的优选氨基酸为例如组氨酸、精氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、丝氨酸、谷氨酸和/或类似的物质。在最优选的实施方式中，氨基酸是约10mM的组氨酸。
赋形剂溶液中可存在表面活性剂，以例如稳定化且增强其它成分的溶解度。制剂和组合物的表面活性剂可包括例如聚乙二醇、聚丙二醇、聚乙二醇/聚丙二醇嵌段共聚物、聚乙二醇烷基醚、聚丙二醇烷基醚、聚乙二醇/聚丙二醇醚嵌段共聚物、烷基芳基磺酸盐、苯磺酸盐、烷基硫酸盐、烷基磺酸盐、烷基醚硫酸盐、烷基芳基醚硫酸盐、烷基聚乙二醇醚磷酸盐、聚芳基苯基醚磷酸盐、烷基磺基琥珀酸盐、烯烃磺酸盐、石蜡磺酸盐、石油磺酸盐、牛磺酸盐、肌氨酸、脂肪酸，烷基萘磺酸、萘磺酸、木质素磺酸、磺化萘与甲醛的缩合物、或磺化萘与甲醛和苯酚的缩合物、木质素-亚硫酸盐废液、烷基磷酸盐、季铵化合物、氧化胺、甜菜碱和/或类似的物质。和表面活性剂，例如聚乙二醇脱水山梨糖醇单月桂酸酯、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯、或聚乙二醇和聚丙二醇的嵌段共聚物是本发明中特别优选的表面活性剂。在优选的实施方式中，表面活性剂是非离子型表面活性剂，例如聚山梨酯、聚氧乙烯烷基醚、九甘醇辛基苯基醚、庚二醇辛基苯基醚、脱水山梨糖醇三油酸酯、以及聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物。表面活性剂(如果存在)可以例如约0.01重量％至约1重量％的量存在于本发明的制剂中。
二价阳离子可帮助稳定溶液以及干燥薄膜中的蛋白质和病毒。具体而言，对于轮状病毒实施方式，可希望Zn2+和/或Ca2+以至少0.5mM的浓度存在于赋形剂溶液中。优选Zn2+以约1mM至约20mM、约2mM至约10mM、约3mM至约6mM锌离子范围内的浓度或约4mM锌离子的浓度存在。对于一些制剂，特别是对于某些储存条件而言，在赋形剂溶液中同时具有Zn2+和Ca2 +离子可能是有益的。
在某些情况下，一些增塑剂成分可有助于生物活性剂的储存稳定性，并允许干燥膜在加工和给药的操作时具有更低的脆性。此外，一些增塑剂能够允许保留更少的水，以在膜不损失挠性的条件下获得更好的稳定性。能够与膜的玻璃状基质良好地相互作用的增塑剂可以是山梨糖醇。可希望增塑剂以小于25重量％的浓度存在于用于轮状病毒的赋形剂溶液中。优选山梨糖醇以约0至约10重量％、约0至5重量％范围内、或约1.6重量％的量存在。
可任选地将香料成分或条形码识别物结合入过程材料中。香料可使得产品闻起来或口服时具有更加吸引人的风味。条形码(例如纳米颗粒或可读核酸序列)可识别产品批次的来源。
基质聚合物
本发明的薄膜采用聚合物基质来保护生物活性剂并且促进加工。膜的基质聚合物通常不是天然聚合物。即，基质聚合物不是天然核酸、蛋白质或淀粉。本发明的基质聚合物不考虑少于4个重复单元的聚合物(四聚物)。未考虑明胶作为膜的基质聚合物，但其可以是赋形剂成分。优选的基质聚合物为聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮、聚环氧乙烷、泊洛沙姆和/或类似的物质。优选的基质聚合物通常被认为是安全且可摄取的。优选的基质聚合物在亲水性和疏水性之间通常更倾向于亲水性，并且可溶于水。
基质聚合物通常以约25重量％存在于基质聚合物储料溶液中。基质聚合物储料溶液可在少于约1重量％至多于约30重量％、4重量％至25重量％的范围内，或约为25重量％。基质聚合物储料中的总固含可低于赋形剂溶液中的总固含，因为经常更难以使高浓度的基质聚合物悬浮或溶解，这是因为例如溶解度、粘度以及温度敏感度问题。
通常以少于约1:2(聚合物基质:生物活性储料溶液)至多于约4:1、1:1至3:1范围内的比例，或者对于轮状病毒制剂为约1:1的比例，对于抗体制剂为2:1的比例将基质聚合物储料与生物活性储料溶液掺混，以制备潮湿掺混物。在这些比例下，潮湿掺混物以及最终的薄膜可包含(以总溶解固体的重量百分比计)少于约10重量％至多于80重量％、30重量％至70重量％、40重量％至50重量％范围内或约45重量％的基质聚合物。然而，对于高浓度分散抗酸剂(例如范围最高至总固含的50％的碳酸钙或氧化镁粉末)的膜制剂而言，本文所指出的基质聚合物含量可以减半。
II.生物活性干燥薄膜的制备方法
干燥薄膜的制造方法通常包括制备过程溶液，混合这些溶液，将混合物施涂至表面，干燥混合物，从干燥的表面上移除膜，以及储存薄膜产品。参见例如图1的流程图。
用于制造膜的过程溶液如上文以及以下实施例中所述。通常，希望为生物活性溶液、赋形剂溶液和基质聚合物储料提供充足的溶剂(典型的是水)以进行加工，但使溶剂的量最少，以例如减少干燥步骤过程中的干燥时间和热应力。在处理过程中的各个时间点，可能有用的是对产品中间体进行脱气，以减少表面变性和最终产物的孔隙率的问题，并且保持最终干燥膜的表面平滑度和外观。
在混合生物活性溶液与赋形剂溶液以制备生物活性储料溶液上通常没有什么困难。虽然赋形剂溶液可能因高固含成分(例如糖块)而具有一些粘性，温和的搅拌通常即可提供均匀分散的储料溶液。或者，可首先将生物活性溶液与基质聚合物储料混合。然而，这可能经常不太令人满意，因为基质聚合物储料的较高的粘度(即使总固含通常较低)以及缺乏保护性赋形剂。这些问题可广泛变化，例如取决于所要保护的生物活性剂的性质。
在一些情况下，能够得到冷冻干燥料饼或粉末形态或者喷雾干燥粉末形态的生物活性剂。在这些情况下，经常能够在赋形剂溶液中直接重构生物活性剂。任选地，当已经利用赋形剂稳定剂配制出干燥的生物活性剂时，可使其直接悬浮于含有溶解的基质聚合物的有机溶剂中，以生成膜潮湿掺混物。
通过使生物活性剂与赋形剂和基质聚合物完全混合，“潮湿掺混物”已经准备好被施涂至表面以进行干燥。表面通常是平面表面。可施涂潮湿掺混物并使其分散，以设法利用重力在水平的干燥表面上实现最低的液面高度。可例如均匀地将潮湿掺混物喷涂或刷涂在干燥表面上。或者，表面也可以不是平面的和/或水平的。例如，干燥表面可以是鼓状物(drum)，或者，潮湿掺混物可例如作为条带被垂直挤出以进行干燥。在任意情况下，通常都希望相对于体积具有较大的表面，以进行快速干燥，或者允许实现更低应力的干燥条件。
在一种实施方式中，将潮湿掺混物施涂至宽阔的平面表面上，并使其暴露于来自上方和/或来自下方的热量(例如温暖的气流和/或IR光线)之下，对平面表面本身进行加热。在优选的实施方式中，在低于20℃至高于约80℃、30℃至60℃范围内的温度或者约50℃下对潮湿掺混物进行干燥。干燥时间可持续短于约0.5小时至长于约6小时、0.75小时至4小时、或1至2小时。
在暴露于加热干燥之后，可通过真空干燥将额外的水分从潮湿掺混物中除去。对于许多生物活性剂，可通过更低温度的干燥来减少处理过程中的活性损失。可能会由于真空干燥而引入一些孔隙率，但这是相对次要的，因为经过加热干燥后的潮湿掺混物在开始进行真空干燥时只含有相对较少的水。真空干燥的附带益处可以为患者给药带来更快速的溶解。例如，可将潮湿掺混物施涂至表面，并使其在50℃下暴露于加热干燥1至2小时。随后，可在低压(例如100毫托)和更低的温度(例如4℃)下使用充足的时间来完成残留水分的最终减少。
潮湿掺混物通常施涂得相当薄，但仍然需要一些时间来进行干燥，这是因为例如制剂组分的亲水性质所致。可通过在潮湿掺混物中包含挥发性(例如有机)溶剂来稍微缓解这种现象。例如可在制剂处理过程中引入氯仿、乙醇、庚烷、异丙醇(IPA)、甲基异丁基酮、四氢呋喃、乙酸乙酯、二氯甲烷、二氯甲烷:乙醇:异丙醇(5:6:4)和/或类似的物质。特别有用的溶剂包括乙醇和IPA。
可将膜制备成层叠系列。例如，可连续铺设一系列薄膜层以制造更厚的膜或具有不同功能的交替层的膜。在一种实施方式中，膜是结合有多个单独层的多层层叠物，所述多个单独层包含抗酸剂或粘膜粘附剂。第一生物活性层可被第二膜层覆盖，所述第二膜层含有足量的抗酸剂以缓冲哺乳动物的胃酸。任选地，生物活性层可被夹在两个抗酸剂层之间，以帮助通过胃而进入肠道，且不会发生显著的降解。用于结合入的抗酸剂可包括例如碱性乙酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、乳酸盐、碳酸氢铵、磷酸盐、氧化镁、氧化铝、氢氧化铝和氢氧化镁、碳酸铝凝胶、碳酸钙、碳酸氢钠、水滑石、硫糖铝、次水杨酸铋和/或类似的物质。
可以足以提供所需最终厚度的最初厚度来施涂潮湿掺混物，这取决于例如潮湿掺混物的总固含以及所需的最终残留水分。例如，可将潮湿掺混物施涂至干燥表面直至以下范围内的厚度：小于约5微米至大于约1厘米、50微米至5毫米、250微米至2500微米、或约500微米。干燥后的产品厚度通常可以是小于约5％的初始潮湿掺混物厚度至大于50％初始厚度、10％至30％或约15％的初始厚度。
可通过调整膜制剂、对干燥表面材料的选择和/或在干燥表面上采用剥离涂层来帮助将干燥后的膜从干燥表面上除去。例如，制剂可包含表面活性剂(例如吐温(Tween80)，干燥表面可以是聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)或氟聚合物，或者，表面可以涂覆有轻质润滑剂，例如硅油、植物油或矿物油。
组分和工艺参数的优选组合
配方组分的某些组合能够更有效地稳定过程中的生物活性剂和本发明的干燥后的薄膜。通常，干燥后的膜将包含生物活性剂、糖、缓冲剂和基质聚合物。对于各种生物活性剂，我们确定了用于生产、储存和给药的合适制剂。这些制剂可具有某些共有的元素和某些替代性的元素。已发现几种制剂组分、浓度和比例在干燥后的生物活性膜的环境下具有预料不到的益处。
本领域技术人员理解，基于本文的教导，可以各种功能性组合的方式使用本文所描述的材料、制剂和方法，并且预期能够取得成功。例如，可将所公开的生物活性剂与所公开的赋形剂溶液和基质聚合物相组合，以进行薄膜的干燥。当然，一些组合会比其它组合具有更好的效果，但大部分会保持活性，且每一种实施方式都在需要但相互冲突的参数之间进行了不同的权衡。即，预计所公开元素的大部分组合都能够(在不进行过度实验的条件下)发挥作用，能够提供所需特征(活性、可挠性、溶解速率、回收率、稳定性等)的不同组合。
可通过以下方式制备速溶(即，在舌下或本领域已知的标准溶解设备中在短于约2分钟的时间内溶解)薄膜组合物：提供一种或更多种生物活性剂(例如病毒疫苗、细菌疫苗、核酸、蛋白质、抗体、酶、生长因子、细胞因子、佐剂或病毒样颗粒)；提供一种或更多种药物上可接受的赋形剂溶液(例如所列制剂F1至F24、M1至M7、T1和T2中的任一种)；提供基质聚合物储料(例如聚乙烯醇(PVA)、海藻酸盐、聚环氧乙烷、聚乙烯吡咯烷酮和/或泊洛沙姆)；在溶液或悬浮液中使生物活性剂与赋形剂混合；使溶液或悬浮液与一种或更多种基质聚合物混合，以形成潮湿掺混物；将潮湿掺混物施涂至平坦表面；以及干燥潮湿掺混物以形成干燥薄膜。干燥步骤可在20℃至60℃的温度下进行1至4小时(例如直至残留水分在2％至5％之间)。
在本详细讨论和实施例部分对一些方法和组合物进行了讨论。本领域技术人员容易理解的是，这些公开内容可组合阅读。
实施例
提供以下实施例以进行例示，而非限制要求保护的本发明。以下是本节中各种实施例的索引列举。
实施例1—利用荧光聚焦试验(FFA)进行的OTF的滴度测试。
实施例2—用于制备生物活性储料溶液的赋形剂溶液。
实施例3—各种聚合物比例下的环境薄膜干燥。
实施例4—改变基质聚合物混合物与环境干燥。
实施例5—改变基质聚合物混合物与加热干燥。
实施例6—改变基质聚合物混合物与真空干燥。
实施例7—在存在非水性溶剂的条件下进行对流干燥。
实施例8—在存在非水性溶剂的条件下进行真空干燥。
实施例9—潮湿掺混物的稳定性。
实施例10—基质聚合物对赋形剂的比例。
实施例11—替代性的基质聚合物。
实施例12—干燥程度与机械性质。
实施例13—45℃下的加速稳定性。
实施例14—较短的加热时间：残留水分和稳定性。
实施例15—较长的干燥时间对残留水分和稳定性的影响。
实施例16—对流加热与真空干燥的组合。
实施例17—测试其它轮状病毒株。
实施例18—在OTF上包封多种疫苗类型。
实施例19—残留水分含量对膜中分子流动性的影响。
实施例20A：具有分散的固体抗酸剂的膜的赋形剂筛选。实施例20B：具有分散的固体抗酸剂的膜。
实施例21—具有单克隆抗体生物活性剂的OTF。
实施例22—具有细菌的OTF。
实施例23—具有流感病毒生物活性剂的OTF。
实施例24—喷雾干燥后的粉末生物活性剂的生产。
实施例25—使用有机溶剂和喷雾干燥后的生物活性剂的OTF。
实施例26—OTF制剂在小鼠体内的免疫原性研究。
实施例1—利用荧光聚焦试验(FFA)进行的OTF的滴度测试
在96孔板中，使(来源于从美国标准菌库(马纳萨斯、弗吉尼亚州)得到的恒河猴肾脏细胞组织的)单层融合的MA-104细胞在补充有10％的牛胎儿血清(FBS)的培养基中生长3～4天，并保存于37℃、5％CO2的加湿培养箱中。在被病毒感染前，用新鲜的培养基替换旧培养基。将无菌口服薄膜病毒样品转移至10mL的无菌血清玻璃小瓶中，在其中利用试验培养基MEM/EBBS(含有厄尔平衡盐的最低必需培养基并补充有L-谷氨酰胺和非必需氨基酸)通过打旋直至其为均匀溶液来将其重构至其目标效力浓度。随后，将样品的等分试样在稀释于试验培养基中的5μg/mL胰蛋白酶中在37℃、5％CO2的加湿培养箱中活化一小时，然后在试验培养基中连续稀释四倍。在将病毒试样铺至96孔MA-104试验板上时，进一步将病毒试样稀释四倍，留下一些孔作为(无病毒的)细胞对照。
在36℃、5％CO2的加湿培养箱中对感染的板进行18小时的培养，以允许病毒复制。培养后，用新鲜的培养基清洗细胞单层，随后在-20℃下用80％的丙酮进行固定。固定后对板进行一小时的空气干燥。在具有1％BSA的PBS中制备具有预定浓度的用于检测轮状病毒株的特异性单克隆初级抗血清。向试验板的每一个孔添加五十微升的稀释后的抗血清，并在37℃的加湿培养箱中保持一小时。在用初级抗体培养后，用PBST(含有吐温的磷酸盐缓冲的生理盐水)对板进行清洗。向板的每一个孔添加稀释于含有1％BSA的PBS中的五十微升的标记有Alexa的第二抗体(赛默飞科技有限公司(Thermo Fisher Scientific))，并且在37℃的培养箱中保持一小时。
最后用PBST清洗板，并且避光保存。使用配备有适当灯的倒置徕卡(Leica)显微镜在10倍放大倍数下对荧光细胞进行计数。使用每个视野含有约20至150个荧光焦点的病毒稀释液来进行计数。基于荧光细胞的数量、病毒稀释情况、放大倍数和所计数视野的表面积来计算荧光形成单位(FFU/mL)。
实施例2—用于制备生物活性储料溶液的赋形剂溶液
在接下来的几个试样中，使用替代性的工艺条件、成膜剂组合物以及赋形剂特征来制造OTF，以研究对活轮状病毒疫苗的生物效力的过程损失和储存稳定性的影响。表1提供了所测试的各种赋形剂特征中所使用的化学成分的列表。
表1.与聚合物储料溶液掺混之前的轮状病毒储料溶液制剂的赋形剂的特征。
在该实施例中，对在存在选定药物赋形剂作为稳定剂的条件下的含有活轮状病毒的OTF相对于具有受限赋形剂(仅为蔗糖和缓冲剂)的制剂在处理过程中保持效力的能力进行评估。所使用的方法如下文所述。
将活的单价轮状病毒疫苗无菌配制在以下受限的药物稳定剂中：7.5％的蔗糖和pH 6.3的50mM的磷酸钾(制剂“F18”)，滴度为6.5log ffu/mL。将第二种制剂无菌配制在以下全套药物稳定剂中：20％的蔗糖、pH 6.3的50mM的磷酸钾、2％的明胶(VacciPro(由嘉利达有限公司制造))、4mM的氯化锌、4mM的氯化钙以及0.8％的柠檬酸(制剂“F19”)，滴度为6.5log ffu/mL。在另一个容器中，对12份4％固含的海藻酸钠(西格玛-奥德里奇公司(Sigma-Aldrich)，水中1％时的粘度为15～20cP)、1份4％固含的柠檬酸钠、4份1％固含的聚环氧乙烷(“PEO”，西格玛-奥德里奇公司，Mv约为100000)以及2份4％固含的聚乙烯醇(PVA，西格玛-奥德里奇公司，Mw约为146000～186000)进行无菌混合，以生成固含为3.37％的成膜剂聚合物混合物(“P10”)。然后，将8份配制好的轮状病毒溶液(F18或F19)添加至19份聚合物混合物P10中。将该OTF“潮湿掺混物”分配入圆盘中，在室温下在无菌组织培养层流罩中干燥3小时。进行FFA试验(实施例1)以确定疫苗的滴度。
表2中的结果显示了更完整的赋形剂特征(F19)在处理过程中保护病毒以及降低过程损失上的益处。
实施例3—各种聚合物比例下的环境薄膜干燥
按照与实施例2类似的方法，对在存在不同总浓度的药物稳定剂但具有相同相对量的含有活轮状病毒的OTF在处理过程中保持效力的能力进行评价。所使用的制备方法如下文所述。
将活的单价轮状病毒疫苗以6.5log ffu/mL的滴度无菌配制在以下药物稳定剂中：4mM的氯化锌、4mM的氯化钙、0.8％固含的柠檬酸、2％固含的明胶、pH 6.3下的50mM的磷酸钾、以及6％固含的蔗糖(制剂“F20”)。在另一个容器中，按照实施例2所述的方式制备聚合物混合物P10。然后，将1至8份的配制好的轮状病毒溶液添加至19份聚合物混合物中，以提供表3中所示的数值。将该OTF潮湿掺混物分配入圆盘中，在环境条件下在无菌组织培养层流罩中干燥3小时。进行FFA试验(实施例1)以确定疫苗的滴度。
结果证明，相对于聚合物成膜剂的含量，最终膜中更高负载量的赋形剂具有稳定作用。
实施例4—改变基质聚合物混合物与环境干燥
在该实施例中，对在存在特征固定的药物稳定剂但聚合物组合物发生变化的情况下，含有活轮状病毒的OTF在处理过程中保持其效力的能力进行评价。所使用的制备方法如下文所述。
将活的单价轮状病毒疫苗以6.4log ffu/mL的滴度无菌配制在制剂F20中。如表4所示，对海藻酸钠、柠檬酸钠、聚环氧乙烷(PEO)以及聚乙烯醇(PVA)进行无菌混合。然后，将配制好的轮状病毒溶液添加至聚合物混合物中，以实现5.87log ffu/mL的滴度。将该OTF潮湿掺混物分配入圆盘中，在环境条件下在层流罩中干燥18小时。表4中所示的固含代表干燥膜中的最终重量百分比，这些数值加上来自配制好的疫苗的固含构成了干燥膜中100％的固含。进行FFA试验(实施例1)以确定疫苗的滴度。
虽然不同的聚合物制剂在过程损失上存在一些差异，但结果并未显示在所评价的范围上具有显著效果。
实施例5—改变基质聚合物混合物与加热干燥
类似于实施例4，但对膜采用对流热干燥，对在存在特征固定的药物稳定剂但聚合物组合物发生变化的情况下，含有活轮状病毒的OTF在处理过程中保持其效力的能力进行评价。所使用的制备方法如下文所述。
将活的单价轮状病毒疫苗以6.4log ffu/mL的滴度无菌配制在制剂F20中。如表5所示，对海藻酸钠、柠檬酸钠、聚环氧乙烷(PEO)、聚乙烯醇(PVA)以及聚乙烯吡咯烷酮(PVP，Kollidon 90F，Mv约为1100000)进行无菌混合。将配制好的轮状病毒溶液添加至聚合物混合物中，以实现5.87log ffu/mL的滴度。将所得到的OTF潮湿掺混物分配入圆盘中，利用Duracraft陶瓷加热器通过50℃对流干燥3小时。表5中所示的固含代表干燥膜中的最终重量百分比，这些数值加上来自配制好的疫苗的固含构成了干燥膜中100％的固含。进行FFA试验(实施例1)以确定疫苗的滴度。
结果证明，对于某些聚合物组合物(即，P30和P31)，可在保持效力的同时，通过更高温度且更短时间的干燥来生产膜。
实施例6—改变基质聚合物混合物与真空干燥
这里，用真空干燥替代加热对流干燥，重复实施例5。所使用的制备方法如下文所述。
利用药物稳定剂无菌配制活的单价轮状病毒疫苗，并将其与聚合物成分混合，如实施例5所述。将该膜潮湿掺混物分配入圆盘中，在将试样温度维持在25℃的同时，在真空下进行1小时的干燥(100托下真空干燥20分钟，随后在50托下真空干燥20分钟，接着在25托下真空干燥20分钟)。然后，每分钟升温一度，经过12分钟，升温至37℃。在37℃下保温2小时。表6中所示的固含代表干燥膜中的最终重量百分比，这些数值加上来自配制好的疫苗的固含构成了干燥膜中100％的固含。进行FFA试验(实施例1)以确定疫苗的滴度。
相对于先前实施例的结果，使用真空干燥未显著改变处理损失，因此提供了一种不在较高温度下进行的快速干燥的可行的替代方式。
实施例7—在存在非水性溶剂的条件下进行对流干燥
在该实施例中，在浇铸和干燥前，将两种非水性溶剂(乙醇和异丙醇)添加至膜浇铸溶液中以增强干燥动力学。此外，制备方法与实施例5类似。
将活的单价轮状病毒疫苗无菌配制在药物稳定剂中，如实施例4所述。如表7所示，对海藻酸钠、柠檬酸钠、聚环氧乙烷(PEO)以及聚乙烯醇(PVA)进行无菌混合。向聚合物混合物添加表7中所示的溶剂，以使溶剂占最终体积(包含轮状病毒混合物)的百分之十五。将配制好的轮状病毒混合物添加至聚合物混合物中，以实现5.87log ffu/mL的轮状病毒滴度。将该膜潮湿掺混物分配入圆盘中，使用Duracraft陶瓷加热炉利用50℃下的对流干燥3小时。表7中所示的固含代表干燥膜中的最终重量百分比，这些数值加上来自配制好的疫苗的固含构成了干燥膜中100％的固含。进行FFA试验(实施例1)以确定疫苗的滴度。
结果表明，添加诸如乙醇或异丙醇这样的非水性的挥发性更强的溶剂可能通过改善干燥动力学而潜在地降低过程损失。
实施例8—在存在非水溶液的条件下进行真空干燥
这里，用真空干燥替代加热对流干燥，重复实施例7。所使用的方法在其它方面类似。
将活的单价轮状病毒疫苗无菌配制在药物稳定剂中，并将其与聚合物混合物和溶剂混合，如实施例7所述。将该膜潮湿掺混物分配入圆盘中，在将试样温度维持在25℃的同时，在真空下进行2.5小时的干燥(100托下真空干燥45分钟，随后在50托下真空干燥45分钟，接着在25托下真空干燥1小时)。表8中所示的固含代表干燥膜中的最终重量百分比，这些数值加上来自配制好的疫苗的固含构成了干燥膜中100％的固含。进行FFA试验(实施例1)以确定疫苗的滴度。
这些数据证明，无论是否使用溶剂，真空干燥条件都得到的最小的过程损失。
实施例9—潮湿掺混物的稳定性
在该实施例中，活的单价轮状病毒疫苗G3株与多种药物稳定剂和成膜聚合物一起配制成水性潮湿掺混物。在各种温度下评价短期潮湿掺混物稳定性。还使用不同的干燥温度将潮湿掺混物制成薄膜，并且评价其滴度的过程损失。膜的生产和测试方法如下文所述。
用1N的KOH将pH调整至6.2～6.5，利用药物稳定剂的水性赋形剂储料溶液将活的单价轮状病毒疫苗无菌配制成7.0log ffu/mL的滴度，以使所得到的病毒储料溶液组合物(“F9”)为：4mM的氯化钙、4mM的氯化锌、0.8％的柠檬酸、4％的明胶(VacciPro)、20％的蔗糖、6％的甘油以及50mM的磷酸钾。以1:1的比例，将该轮状病毒储料溶液与包含25重量％的聚乙烯醇(西格玛-奥德里奇公司，Mw约为67000)水溶液的聚合物混合物“P1”混合。通过以1000rcf(相对离心力)的速度离心2分钟，来对膜潮湿掺混物进行脱气。
将所得到的轮状病毒膜的一部分分配入4个单独的小瓶中。将各个小瓶置于具有以下不同温度的不同的水浴中保持最长达1小时：4℃、40℃、45℃和50℃。将小瓶从水浴中移出，利用实施例1中所述的FFA试验来测量潮湿掺混物储料的滴度。表9A中所提供的试验结果表明，相对于在更低温度(4℃至45℃)下储存了一小时的相同潮湿掺混物，潮湿掺混物在50℃下很不稳定，仅在15分钟内就损失了将近1log的滴度。
表9A.在储存于不同温度的水浴中之后测得的膜潮湿掺混物滴度
使用手动涂布器(德国毕克-加特纳(BYK-Gardner))将剩余的潮湿掺混物在聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)背衬(Kinmar PET，K-Mac塑料有限公司)上浇铸成三个深度为20密耳的单独的膜。在对流炉(VWR，型号1350FM)中，在50℃、60℃或70℃下对潮湿膜进行0.5至4小时的干燥。
膜轻易地从背衬上脱层，并且是具有挠性且光滑的，不存在凹陷。将干燥后的膜分割成约100mg的份。按照实施例1中所述的方式，确定轮状病毒的滴度。表9中提供了膜厚度(利用QUALITEST厚度计(信号：FM 101)测量，取三次测量的平均值)、水分含量(使用Aquacounter AQ-200库仑滴定仪，分别使用Hydranal Coulomat AG和Hydranal CoulomatCG作为阳极和阴极溶液，通过卡尔·费歇尔滴定法测量，前者还用作膜萃取溶剂)、以及从潮湿膜至干燥膜的过程中所观察到的轮状病毒滴度损失。
表9.在不同温度下干燥的含有轮状病毒疫苗的OTF制剂的物理性质和过程损失
这些结果表明，虽然所配制的水性液体膜潮湿掺混物在50℃下很不稳定(仅15分钟)，在该温度或者甚至是在更高的60℃下对膜进行4小时的干燥不会由于过程损失而对滴度产生任何显著损失。干燥处理允许进行蒸发冷却，以在这些温度下保护病毒，直至水分含量足够低以显著降低膜的分子流动性，并且向病毒提供进一步的保护。这些结果还证明，膜制剂相对于液体制剂具有优异的热稳定性，尽管两者含有相同的赋形剂稳定剂。然而，通过70℃下的膜干燥，轮状病毒疫苗在半小时内部分失活，这似乎是这种干燥处理在满足低病毒效力过程损失上的大致的温度上限。
实施例10—基质聚合物对赋形剂的比例
将含有G3株的活的单价轮状病毒疫苗结合入具有不同浓度的药物赋形剂的OTF中，以评价较宽范围的聚合物对赋形剂比例下的过程损失。制备流程如下文所述。
利用制剂F9、F21(4mM的氯化钙、4mM的氯化锌、0.8％的柠檬酸、4％的明胶(VacciPro)、20％的蔗糖、25％的甘油以及50mM的磷酸钾)、F22(4mM的氯化钙、4mM的氯化锌、0.8％的柠檬酸、4％的明胶、30％的蔗糖、25％的甘油以及50mM的磷酸钾)和F23(4mM的氯化钙、4mM的氯化锌、0.8％的柠檬酸、4％的明胶、10％的蔗糖、6％的甘油以及50mM的磷酸钾)(参见表1)将活的单价轮状病毒疫苗(G3株)无菌配制成7.0log ffu/mL的滴度，按照实施例9的方式制备膜潮湿掺混物。
按照实施例9中的方式，将轮状病毒膜潮湿掺混物浇铸在PET背衬上。在对流炉(VWR，型号1350FM)中，在50℃下对潮湿膜进行30分钟的干燥。利用实施例1中所述的FFA试验方法确定滴度。所生产的膜具有挠性并且是光滑的，没有凹陷。表10中提供了膜厚度以及所观察到的从潮湿膜至干燥膜的处理过程中的滴度损失。
表10.不同赋形剂负载量下含有OTF制剂的轮状病毒疫苗的物理性质和过程损失
这些结果表明，相对于聚合物成膜剂，轮状病毒疫苗在高固含的增塑稳定剂(特别是甘油)的存在下因膜处理/干燥而失活。
实施例11—替代性的基质聚合物
在该实施例中，制造了含有多种药物稳定剂和替代性的成膜聚合物的OTF制剂，以对它们在机械性质上的适用性进行评价。其生产方法如下文所述。
无菌配制了药物稳定剂的水性赋形剂储料溶液，并且利用1N的KOH将pH调整至6.2～6.5，所得到的组合物为F3(4mM的氯化钙、4mM的氯化锌、0.8％的柠檬酸、4％的明胶(VacciPro)、5％的山梨糖醇、20％的蔗糖以及50mM的磷酸钾)或F24(4mM的氯化钙、4mM的氯化锌、0.8％的柠檬酸、4％的明胶、5％的山梨糖醇、20％的蔗糖、0.1％的吐温80以及50mM的磷酸钾)(参见表1)。以1:1的比例，将F3储料溶液与包含24重量％羟丙基甲基纤维素水溶液(HPMC，羟丙基含量约为9％，西格玛-奥德里奇公司，产品号：09963)的聚合物混合物“P2”无菌混合；类似地，将F24储料溶液与包含30％聚乙烯吡咯烷酮(PVP，90F，巴斯夫有限公司(BASF))的聚合物混合物“P3”混合。通过以1000rcf(相对离心力)的速度离心2分钟，来对所得到的这两个膜潮湿掺混物进行脱气。
使用手动涂布器(德国毕克-加特纳)将膜潮湿掺混物在聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)背衬(Kinmar PET，K-Mac塑料有限公司)上浇铸成两个深度为20密耳的单独的膜。在对流炉(VWR，型号1350FM)中，在60℃下对潮湿膜进行60分钟的干燥。
由HPMC(P2)制成的膜产生了明显的相分离和浑浊。由PVP(P3)制成的膜具有脆性而难以从背衬上脱层。
实施例12—干燥程度与机械性质
在该实施例中，利用不同的干燥条件制造了含有多种药物稳定剂(F3)和成膜聚合物(P1)的OTF制剂，以对干燥动力学以及它们在机械性质上的适用性进行评价。其生产方法如下文所述。
这里，无菌配制了药物稳定剂的水性赋形剂储料溶液，并且利用1N的KOH将pH调整至6.2～6.5(参见表1)。以1:1的比例，将F3储料溶液与聚合物混合物“P1”无菌混合，以按照实施例9中所述的方式制备膜潮湿掺混物。
使用手动涂布器(德国毕克-加特纳)将膜潮湿掺混物在聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)背衬(Kinmar PET，K-Mac塑料有限公司)上浇铸成数个深度为20密耳的单独的膜。按照表11中所述的方式，在对流炉(VWR，型号1350FM)中，在60℃下对潮湿膜进行干燥。使一些膜(如表11中所示)暴露于100毫托、4℃的附加真空干燥中。表11描述了所得到的干燥膜的机械性质。
表11.由F3制剂和P1聚合物制成的OTF的对流炉干燥动力学和机械性质
这些研究结果表明，就该制剂而言，在60℃下干燥2小时或更长时间导致了小于3％的水分含量，并且导致了难以脱层的脆性膜。
实施例13—45℃下的加速稳定性
将含有G3株的活的单价轮状病毒疫苗结合入具有不同浓度的药物赋形剂的OTF中，以评价45℃下的过程损失和储存稳定性。制备流程如下文所述。
利用制剂F1(4mM的氯化钙、4mM的氯化锌、0.8％的柠檬酸、4％的明胶(VacciPro)、20％的蔗糖、1.6％山梨糖醇以及50mM的磷酸钾)、F2(4mM的氯化钙、4mM的氯化锌、0.8％的柠檬酸、4％的明胶、20％的蔗糖以及50mM的磷酸钾)、F3(4mM的氯化钙、4mM的氯化锌、0.8％的柠檬酸、4％的明胶、5％山梨糖醇、20％的蔗糖以及50mM的磷酸钾)、F4(4mM的氯化钙、4mM的氯化锌、0.8％的柠檬酸、4％的明胶、5％的蔗糖以及50mM的磷酸钾)、F5(4mM的氯化钙、4mM的氯化锌、0.8％的柠檬酸、20％的蔗糖、5％山梨糖醇以及50mM的磷酸钾)、F6(0.8％的柠檬酸、4％的明胶、5％山梨糖醇、20％的蔗糖以及50mM的磷酸钾)、F7(4mM的氯化锌、4mM的氯化钙、0.8％的柠檬酸、4％的明胶、5％山梨糖醇、5％的蔗糖以及50mM的磷酸钾)、以及制剂F8(4mM的氯化钙、4mM的氯化锌、0.8％的柠檬酸、4％的明胶、20％的蔗糖、13％山梨糖醇以及50mM的磷酸钾)(参见表1)来将活的单价轮状病毒疫苗(G3株)无菌配制成7.0log ffu/mL的滴度，按照实施例9中所述的方式制备膜潮湿掺混物。
按照实施例9中所述的方式将轮状病毒膜潮湿掺混物浇铸在PET背衬上，F1、F3、F6和F8的深度为20密耳，F2和F5的深度为25密耳，F4和F7的深度为30密耳。在对流炉(VWR，型号1350FM)中，在60℃下对潮湿膜进行1小时的干燥。
将干燥后的膜分割成约100mg的份，用于45℃下8至20周的加速稳定性研究。利用实施例1中所述的FFA试验方法确定滴度。所生产的膜具有挠性并且是光滑的，没有凹陷。表12提供了水分含量(利用卡尔·费歇尔滴定法测量)、膜厚度、从潮湿膜至干燥膜的过程中所观察到的滴度损失、以及轮状病毒稳定性。由log ffu对时间曲线的最佳线的斜率来测量储存稳定性。
表12.在对流炉中在60℃下干燥1小时后的含有G3轮状病毒疫苗的OTF制剂的物理性质和稳定性
尽管所有制剂的膜制造都具有可忽略不计的过程损失，但储存稳定性结果不太清晰，表明从制剂中除去明胶(F5)或者高山梨糖醇含量(F8)可能具有负面影响。
实施例14—较短的加热时间：残留水分和稳定性。
在该实施例中，使用较短的干燥时间(在对流炉中进行30分钟或更短时间的干燥)来制造OTF，以探索更有利于商业制造的可能的生产方法。评价了各种活的轮状病毒G3株疫苗制剂的物理外观和挠性。还记录了一些制剂的水分含量、过程损失和储存稳定性。所使用的方法如下文所述。
利用制剂F3、F9、F10(4mM的氯化钙、4mM的氯化锌、0.8％的柠檬酸、20％的蔗糖、6％的甘油以及50mM的磷酸钾)、F11(4mM的氯化钙、4mM的氯化锌、0.8％的柠檬酸、4％的明胶、5％的蔗糖、6％的甘油以及50mM的磷酸钾)、F12(4mM的氯化钙、4mM的氯化锌、0.8％的柠檬酸、4％的明胶、20％的蔗糖、4％的甘油以及50mM的磷酸钾)、F13(4mM的氯化钙、4mM的氯化锌、0.8％的柠檬酸、4％的明胶、20％的蔗糖、12％的甘油以及50mM的磷酸钾)、F14(4mM的氯化钙、4mM的氯化锌、0.8％的柠檬酸、10％的蔗糖、6％的甘油以及50mM的磷酸钾)、以及F15(4mM的氯化钙、4mM的氯化锌、0.8％的柠檬酸、5％的蔗糖、6％的甘油以及50mM的磷酸钾)(参见表1)来将活的单价轮状病毒疫苗(G3株)无菌配制成7.0log ffu/mL的滴度，按照实施例9中所述的方式制备膜潮湿掺混物。
按照实施例9中的方式，将轮状病毒膜潮湿掺混物浇铸在PET背衬上。在对流炉(VWR，型号1350FM)中，在50℃或60℃下对潮湿膜进行15或30分钟的干燥。
将干燥后的膜分割成约100mg的份，其中的一些参与45℃下4～5周的加速稳定性研究。利用实施例1中所述的FFA试验方法确定滴度。所生产的膜具有挠性并且是光滑的，没有凹陷。表13提供了水分含量(利用卡尔·费歇尔滴定法测量)、膜厚度、从潮湿膜至干燥膜的过程中所观察到的滴度损失、以及轮状病毒稳定性。
表13.在对流炉中进行短期干燥后的含有G3轮状病毒疫苗的OTF制剂的物理性质和稳定性
同样，所有制成的膜在这些干燥条件下都具有最小的过程损失。然而，少数测量试样的储存稳定性表明稳定性有所降低，这可能与水分含量的增加和/或缺乏明胶有关。具体而言，就制剂F3而言，当由于干燥时间缩短而使水分含量从7.3％增加至11％时，储存稳定性显著降低。
实施例15—较长的干燥时间对残留水分和稳定性的影响
在该实施例中，使用较长的干燥时间(在对流炉中干燥2小时)来进行制造，以探索利用较低干燥温度和/或提供降低的水分含量的生产方法。评价了多个含有活的轮状病毒G3株疫苗的膜制剂。还记录了一些制剂的水分含量、过程损失和储存稳定性。所使用的方法如下文所述。
利用制剂F3、F5、F16(4mM的氯化钙、4mM的氯化锌、0.8％的柠檬酸、5％的蔗糖、5％的山梨糖醇以及50mM的磷酸钾)、以及F17(4mM的氯化钙、4mM的氯化锌、0.8％的柠檬酸、5％的蔗糖、10％的山梨糖醇以及50mM的磷酸钾)将活的单价轮状病毒疫苗(G3株)无菌配制成7.0log ffu/mL的滴度，按照实施例9的方式制备膜潮湿掺混物。
按照实施例9中的方式，将轮状病毒膜潮湿掺混物浇铸在PET背衬上。在对流炉(VWR，型号1350FM)中，在50℃或60℃下对单个潮湿膜进行120分钟的干燥。
将干燥后的膜分割成约100mg的份，其中的F3制剂参与45℃下的4周加速稳定性研究。利用实施例1中所述的FFA试验方法确定滴度。生产得到的膜具有挠性并且是光滑的，没有凹陷，除了在60℃下生产的膜，其具有些许脆性。表14提供了水分含量(利用卡尔·费歇尔滴定法测量)、膜厚度、从潮湿膜至干燥膜的过程中所观察到的滴度损失、以及轮状病毒稳定性。
表14.在对流炉中进行长时间干燥后的含有G3轮状病毒疫苗的OTF制剂的物理性质和稳定性
该较长的干燥时间下，所有这些膜都具有最小的过程损失。然而，由于2.9％的较低的水分含量，F3制剂的储存稳定性未得到明显改善。在其余制剂的水分含量方面，相对于60℃下干燥1小时，2小时的较长时间的干燥似乎能够平衡50℃的较低的对流炉温度。
实施例16—对流加热与真空干燥的组合
在该实施例中，除了在真空下进行干燥以外，还使用较长的干燥时间(在对流炉中干燥2小时)来制造OTF，以研究在保持病毒效力的同时进一步降低水分含量的益处。评价了多个含有活的轮状病毒G3株疫苗的膜制剂。还记录了水分含量、过程损失和储存稳定性。所使用的方法如下文所述。
利用制剂F1、F2、F3和F8来将活的单价轮状病毒疫苗(G3株)无菌配制成7.0logsffu/mL的滴度，按照实施例9中的方式制备膜潮湿掺混物。
按照实施例9中的方式，将轮状病毒膜潮湿掺混物浇铸在PET背衬上。在对流炉(VWR，型号：1350FM)中在60℃下对潮湿膜进行2小时的干燥，然后在100毫托的真空下在4℃下进行24小时的附加干燥。
将干燥后的膜分割成约100mg的份，用于45℃下8至14周的加速稳定性研究。利用实施例1中所述的FFA试验方法确定病毒滴度。所生产的膜是光滑且无凹陷的，但具有些许脆性。表15提供了水分含量(利用卡尔·费歇尔滴定法测量)、从潮湿膜至干燥膜的过程中所观察到的滴度损失、以及轮状病毒稳定性。
表15.在对流炉中进行长时间干燥并且暴露于真空中后的含有G3轮状病毒疫苗的OTF制剂的物理性质和稳定性
增强的干燥条件得到了水分含量更低且无明显过程损失的膜。大多数制剂也在储存稳定性上展现出益处。就制剂F3而言，相比于先前的实施例，向处理过程增加该真空干燥步骤似乎不会提供可测量的水分含量的降低。由于除了山梨糖醇的量有所不同以外，所有这些制剂都具有相同的赋形剂特征，其确实表明，F1可能具有在中间水平的该赋形剂的最佳量。
实施例17—测试其它轮状病毒株
利用轮状病毒疫苗的两种其它株G1和G2来制造OTF，以测试多于一种株下给定制剂的稳定性。将F3赋形剂特征应用至这两种株中的每一种上，对所得到的膜的物理外观和挠性进行评价。还记录了水分含量、过程损失和储存稳定性。所使用的方法如下文所述。
利用制剂F3来分别将活的单价轮状病毒疫苗G1株和G2株无菌配制成7.0logsffu/mL的滴度，按照实施例9中的方式制备膜潮湿掺混物。
按照实施例9中的方式，将轮状病毒膜潮湿掺混物浇铸在PET背衬上。在对流炉(VWR，型号1350FM)中，在60℃下对潮湿膜进行1小时的干燥。
将干燥后的膜分割成约100mg的份，用于进行45℃下15周的加速稳定性研究。利用实施例1中所述的FFA试验方法确定滴度。所生产的膜具有挠性并且是光滑的，没有凹陷。表16提供了水分含量(利用卡尔·费歇尔滴定法测量)、从潮湿膜至干燥膜的过程中所观察到的滴度损失、以及轮状病毒稳定性。
表16.在对流炉中干燥后的含有轮状病毒疫苗G1株和G2株的OTF制剂的物理性质和稳定性
结果表明，制剂F3向G3株提供的低过程损失和储存稳定性(参见实施例13)与其向两种其它轮状病毒株G1和G2所提供的相似。
实施例18—在OTF上包封多种疫苗类型
利用含有G1、G2、G3和G4株的四价轮状病毒疫苗来制造两种OTF批料，以证明多价疫苗下给定制剂的稳定性。采用F2和F3赋形剂特征，并且对所得到的膜的物理外观和挠性进行评价。还记录了水分含量、过程损失和储存稳定性。所使用的方法如下文所述。
按照实施例9所述的方式，利用F2以及单独利用F3制剂组合物(参见表1)来将含有G1、G2、G3和G4株的活的四价轮状病毒疫苗无菌配制成6.6log ffu/mL/株的滴度。还按照实施例9中所述的方式制备了单独的膜潮湿掺混物。
按照实施例9中的方式浇铸轮状病毒潮湿膜制剂，但深度为25密耳。在对流炉(VWR，型号1350FM)中，在60℃下对潮湿膜F1进行1小时的干燥，对潮湿膜F2进行2小时的干燥。
将干燥后的膜分割成约100mg的份，以进行4℃、25℃和40℃下24小时的储存稳定性研究。按照实施例1中所述的方式，确定轮状病毒的滴度。膜具有挠性并且是光滑的，没有凹陷。利用卡尔·费歇尔滴定法测得的F2的水分含量为5.8％，F3的为4.3％。表17中提供了湿膜至干燥膜的过程中以及在储存过程中所观察到的轮状病毒滴度损失，其显示相对较低的数值。
24个月储存稳定性的结果表明，两种制剂在所有温度下都具有优异的储存稳定性(图2和图3)。经过24个月后，两种制剂在4℃下的滴度损失都是忽略不计的。在25℃下，24个月后的损失小于1log，在0.2至0.7log的范围内，G4株最不稳定。在40℃下，两种制剂6个月后的损失也都小于1log，在0.5至0.9的范围内，其证明了超出预期的高温稳定性。与该研究相关的损失速率列于表17中。
表17.在对流炉中干燥后的含有轮状病毒疫苗四价株的OTF制剂的24个月稳定性结果
实施例19—残留水分含量对膜中分子流动性的影响
使用高通量反向散射光谱仪(HFBS)(在位于马里兰州盖瑟斯堡的美国国家标准技术研究所进行)测试(利用聚合物混合物“P1”按照实施例13～16中所述的方式制成的)基于PVA的膜，以对膜基质的分子流动性进行评价，聚焦于局部运动(或快速动态)。这里，量度是原子运动的均方幅值<μ2>。表18中给出了这些结果。
表18.含有轮状病毒疫苗的OTF中分离流动性的评价。
结果表明，与局部运动相关联的分子流动性受到了水分含量的影响，除了制剂F1以外，较高的水分含量提供了较高的局部流动性。通常而言，局部运动的大小还与膜储存稳定性相关。制剂F1凭借其中间水平的山梨糖醇，在提供最佳总储存稳定性的同时，其分子流动性受到水分含量的影响较小。
实施例20A—具有分散的固体抗酸剂的膜的赋形剂筛选
在该实施例中，对上文所开发的用于轮状病毒的膜制造方法进行修改，以使其包括结合固体分散的抗酸剂。利用表19A中所提供的限定的赋形剂含量来制造含有固体抗酸剂的膜，以对几种单独的缓冲剂***和稳定剂对于过程损失和储存稳定性的影响进行评价。
利用表19A中所列的赋形剂特征，按照实施例9中所述的方式来无菌配制水性赋形剂储料溶液，用10N的KOH将pH调整至6.5，但暂时不添加散装的轮状病毒疫苗，还制备了等体积的聚合物混合物P1。首先，以最终膜潮湿掺混物中为25.0重量％的负载量为目标，将这些赋形剂储料溶液与CaCO3粉末(Scoralite LL250，Scora有限公司，平均粒径为25微米)进行无菌混合，在磁力搅拌板上，以约100rpm的速度搅拌10分钟，使粉末均匀分散。然后，无菌添加聚合物混合物P1，并且再继续混合5分钟，直至均匀。最后，将散装轮状病毒疫苗无菌添加至混合物中，并以80rpm的速度再额外进行5分钟的温和搅拌。通过将膜潮湿掺混物置于室温下5～10分钟来对其进行脱气。
使用手动涂布器(德国毕克-加特纳)将所得到的轮状病毒膜潮湿掺混物浇铸在聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)背衬(Kinmar PET，K-Mac塑料有限公司)上，深度为30密耳。在对流炉(VWR，型号1350FM)中，在60℃下对潮湿膜进行90至120分钟的干燥。
将干燥后的膜分割成约160mg的份，用于45℃下8周的加速稳定性研究。利用实施例1中所述的FFA试验方法确定滴度。所生产的膜具有挠性并且是光滑的，没有凹陷。表19B中提供了水分含量(利用卡尔·费歇尔滴定法测得，以不含CaCO3的基准表示)、膜厚度、制造干燥膜的滴度的过程损失、以及经过处理后的OTF稳定性试样在45℃下经过一周后的轮状病毒滴度。初始赋形剂储料溶液中不同蔗糖含量水平的储存稳定性数据示于图4A/B/C中。
表19A.含有抗酸剂的膜的赋形剂特征
*pH为7.5而不是6.5
表19B.在对流炉中干燥后的含有轮状病毒疫苗和CaCO3粉末的OTF制剂的物理性质和稳定性。注意滴度以每克OTF基准表示，且滴度化验试验的定量限制为5.1～5.2logffu/g。
结果表明，经过组氨酸缓冲的制剂(T3f9和T3f15：0.2～0.6log ffu/g损失)和经过KPO4/0.8％柠檬酸盐缓冲的制剂(T3f16-T3f22：0.2～0.7log ffu/g损失)中的过程损失最低；经过NaPO4缓冲的制剂具有中等的损失(T3f4-T3f7：0.4-0.7log ffu/g)；只经过KPO4缓冲以及经过KPO4/0.08％柠檬酸盐缓冲的制剂具有最高的损失(T3f8、T3f10-T3f14：0.7～1.2log ffu/g)，这证明0.8％的柠檬酸有助于降低过程损失。就KPO4/0.8％柠檬酸盐、NaPO4和组氨酸制剂而言，较大的过程损失可能与那些含有20％蔗糖的制剂相关，可能是因为较长的干燥时间(2小时对1.5小时)。相比之下，尽管干燥时间较长，只经过KPO4缓冲的制剂具有较低的过程损失和较高的蔗糖含量，
考虑到已经确定的过程损失差异，图4A中的结果显示了缓冲剂在其增强储存稳定性上的排名，从最佳至最差为：KPO4/柠檬酸盐、KPO4＞组氨酸＞NaPO4。图4B中所示的结果表明，储存稳定性在锌和钙离子的组合存在下得以改善，且尽管添加山梨糖醇也可能有稳定化作用，但T3f21的高水分含量是导致降低该制剂稳定性的混杂因素。图4C的结果显示了与图4A的排名类似的缓冲剂排名，但在该水平的蔗糖下，柠檬酸能够提供更清晰的储存稳定性增强。
因此，这些结果表明，KPO4/0.8％的柠檬酸盐缓冲剂能够为含有CaCO3分散固体抗酸剂的OTF制剂中的轮状病毒提供低过程损失与良好储存稳定性的最佳平衡。锌、钙和山梨糖醇还能够在这些制剂中起到稳定剂的作用，较低的水分含量进一步增强了储存稳定性。
实施例20B：具有分散的固体抗酸剂的膜
在实施例20A(其显示了具有所限定的赋形剂含量的含有固体抗酸剂的膜的稳定性)的基础上，后续用包含明胶和实施例20A中确定的缓冲剂***的全套赋形剂来制造膜。对这些膜在不同水分水平下的储存稳定性和过程损失进行评价。具体方法如下文所述。
按照实施例9中所述的方式，利用含有明胶的制剂F1和F3(参见表1)无菌配制水性赋形剂储料溶液，但暂时不添加散装的轮状病毒疫苗。在磁力搅拌板上，以100rpm的速度，按照1:1的比例(如同已添加散装病毒)将这些赋形剂储料溶液与聚合物混合物P1进行10分钟的无菌混合。然后，以最终膜潮湿掺混物中为21.1重量％的负载量为目标，无菌添加CaCO3粉末(特种矿物1500PCC)，并且再继续混合5分钟，直至均匀。最后，将散装轮状病毒疫苗无菌添加至混合物中，并以80rpm的速度再额外进行5分钟的温和搅拌。通过将膜潮湿掺混物置于室温下5～10分钟来对其进行脱气。
使用手动涂布器(德国毕克-加特纳)将所得到的轮状病毒膜潮湿掺混物浇铸在聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)背衬(Kinmar PET，K-Mac塑料有限公司)上，深度为50密耳。在对流炉(VWR，型号1350FM)中，在60℃下对潮湿膜进行120至180分钟的干燥。
将干燥后的膜分割成约160mg的份，用于45℃下12周的加速稳定性研究。利用实施例1中所述的FFA试验方法确定滴度。所生产的膜具有挠性并且是光滑的，没有凹陷。表19C提供了水分含量(利用卡尔·费歇尔滴定法测量)、膜厚度、生产干燥膜的过程中所观察到的滴度损失、以及轮状病毒稳定性。
表19C.在对流炉中干燥后的含有轮状病毒疫苗和CaCO3粉末的OTF制剂的物理性质和稳定性
*参见表1。
*以不含CaCO3的基准表示
***以每克OTF基准表示
相对于实施例20A中生产的OTF(制剂)，此处的结果显示通过添加明胶显著增强了储存稳定性，且对于具有高负载量的CaCO3粉末而言，储存稳定性对水分含量敏感，7％时稳定性显著受损。
实施例21—具有单克隆抗体生物活性剂的OTF
按照与上文所述的用于轮状病毒疫苗的工艺流程相似的工艺流程，使用加热对流干燥来制备含有单克隆抗体的OTF，并且对单体含量损失进行评价。对具有不同药物赋形剂稳定剂和成膜聚合物的制剂在使得抗体稳定以通过膜处理以及在37℃下储存方面的能力进行测试。所使用的制备方法如下文所述。
利用表20中所列的不同的药物稳定剂特征并且将pH调整至6.5来无菌配制人IgG1单克隆抗体(mAb)的水溶液。在另一个容器中，利用组合物P1或P3来制备聚合物混合物。然后，以表20A中所示的比例，将配制好的mAb添加至聚合物混合物中。通过以1000rcf的速度离心2分钟，来对膜潮湿掺混物进行脱气。
使用手动涂布器(德国毕克-加特纳)将膜潮湿掺混物以不同的深度浇铸在聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)背衬(Kinmar PET，K-Mac塑料有限公司)上。在对流炉(VWR，型号1350FM)中，在60℃下对潮湿膜进行干燥。
重构干燥后的膜，并且进行温和搅拌，以使膜完全均匀。然后，利用HPLC-SEC(高效液相色谱-尺寸排阻色谱)对重构的mAb薄膜制剂的单体含量进行评价。表20A中提供了水分含量、从潮湿掺混物至膜制造过程中的过程损失、以及37℃下的12～16周储存稳定性。这里，利用％单体含量对时间的曲线的(利用标准最小二乘统计分析确定的)最佳拟合线的斜率来测量储存稳定性。
表20.配制好的抗体的组成
表20A.抗体膜性质和稳定性结果
这些研究结果表明，利用该膜制备方法，含有山梨糖醇的制剂和P1聚合物能够提供低过程损失与储存稳定性的最佳平衡。这些制剂都不含明胶。
实施例22—具有细菌生物活性剂的OTF
在该实施例中，使用加热对流干燥来制备含有活细菌疫苗的含有或不含赋形剂稳定剂的OTF，以对效力过程损失的影响进行评价。所使用的方法的具体内容如下文所述。
将减活的伤寒沙门氏菌“Ty21a”疫苗无菌配制在表21中所示的制剂中，滴度为7.4log ffu/mL。T1制剂包含pH 8下的25mM的磷酸钾。T2制剂包含25％的海藻糖、1％的蛋氨酸、5％的明胶以及pH 8下的25mM磷酸钾。在另一个容器中，按照实施例2中所述的方式制备固含为3.37％的聚合物混合物。然后，将8份配制好的Ty21a疫苗(T1或T2)添加至19份聚合物混合物中。将该溶液分配入圆盘中，使用Duracraft陶瓷加热炉利用50℃下的对流空气流干燥3小时。
利用无菌且经过过滤的水将干燥后的膜重构成合适的体积，温和搅拌以使膜完全均匀。将重构的Ty21疫苗的稀释液析出至温热至室温的胰蛋白酶大豆琼脂板上。在37℃下对这些板进行20小时的培养，对菌落的数量进行计数。
这些结果显示，药物稳定剂的完整赋形剂特征对于减少含有活细菌疫苗的OTF的膜制造的过程损失大有益处。
实施例23—具有流感病毒的OTF
按照与上述膜制造方法相似的方法，使用加热对流干燥来生产含有减活流感的OTF。所使用的方法的具体内容如下文所述。
将减活的H1N1流感疫苗无菌配制在含有7％蔗糖和50mM磷酸钾的pH为7.2的Z1制剂中，滴度为6.0log ffu/mL。类似地，将该疫苗配制在含有6％蔗糖、2％明胶、4mM氯化锌、4mM氯化钙、0.8％柠檬酸和50mM磷酸钾的pH为7.2的第二制剂Z2中。在一个单独容器中，按照实施例2中所述的方式无菌制备固含为3.37％的聚合物混合物。然后，将8份配制好的流感疫苗(Z1或Z2)添加至19份聚合物混合物中。将该溶液分配入圆盘中，使用Duracraft陶瓷加热炉利用50℃下的对流空气流干燥3小时。
利用无菌且经过过滤的水将干燥后的膜重构成合适的体积，温和搅拌以使膜完全均匀。进行50％组织培养感染剂量(TCID50)试验，以检测滴度。
实施例24—喷雾干燥后的粉末生物活性剂的生产
开发了用于将配制好的液态轮状病毒疫苗转化成固态粉末的喷雾干燥方法。用于生产四种制剂的方法和工艺条件的具体情况如下文所述。
将活的单价轮状病毒疫苗在含有药物稳定剂的水性潮湿掺混物中无菌配制至7.82log ffu/mL的滴度，以使所得到的赋形剂含量如表22中所给出的那样，并且利用1N的KOH将最终pH调整至6.2～6.5。
使用被环境控制室(ECC)包围且配备有声波振动、低压、双流体喷嘴的Buchi迷你喷雾干燥器B-290，以2.0mL/min向一个喷嘴端口给料，并且以3L/min向另一个喷嘴端口供给干燥氮气。将喷嘴的入口气体温度控制在86℃，将离开干燥室出口气体温度控制在60℃。通过向ECC直接供给液氮将ECC内部的温度保持在27.5℃至29.5℃。通过将疫苗粉末转移至20ml无菌血清玻璃小瓶将疫苗粉末收集到ECC内部。将干燥后的粉末分成约10mg的份，用于进行45℃下的12周加速稳定性研究。在不含胰蛋白酶的培养基中重构粉末试样，以利用实施例1的FFA来确定滴度。表22提供了利用卡尔·费歇尔滴定法测得的经过喷雾干燥(SD)的粉末的水分含量、从潮湿掺混物至SD粉末的过程中所观察到的滴度损失、以及轮状病毒稳定性。
结果证明，喷雾干燥处理能够在提供最小的过程损失和优异的高温储存稳定性的同时，生产水分含量为2％～3％的粉末。
实施例25—使用有机溶剂和喷雾干燥后的生物活性剂的OTF
在该实施例中，开发了含有实施例24中生产的经过喷雾干燥的活轮状病毒疫苗粉末的OTF的制备方法。使用了两种不同的有机溶剂，并且评价了所得到的膜的储存稳定性。具体发方法如下文所述。
将实施例24的SD粉末与含有溶解的水溶性聚合物的有机溶剂无菌混合，以使所得液态混合物(膜潮湿掺混物)的组成为：4重量％的SD粉末、15％的PVP(Kollidon 90F)、1.7％的PEG 400(聚乙二醇，Mw约为400)和79.3％的有机溶剂，如表23中所示。在浇铸前，在搅拌板上以100rpm对膜潮湿掺混物进行约2分钟的混合直至均匀。
使用手动涂布器(德国毕克-加特纳)将这些膜浇铸在涂覆有氟聚合物的聚酯背衬(3M公司的Scotchpak 1022)上，深度为30密耳。在对流炉(VWR，型号1350FM)中，在40℃下对潮湿膜进行3小时的干燥。利用卡尔·费歇尔滴定法确定干燥后的膜的水分含量(表23)。将干燥后的膜分割成约100mg的份，用于进行45℃下的加速稳定性研究。在不含胰蛋白酶的培养基中重构膜试样，以利用实施例1的FFA来确定滴度。这些膜具有挠性并且是光滑的，没有凹陷。表23中显示了在经过喷雾干燥和膜浇铸和干燥过程中所观察到的轮状病毒的过程损失的结果和储存稳定性。
这些结果表明，溶剂与最终水分含量有一定关联(乙醇制剂比使用异丙醇的制剂更干燥)，虽然1.1％至2.3％范围内的水分似乎并不会对稳定性产生可感知的影响。所测量的一个批次具有较低的过程损失。含有一种经过喷雾干燥的粉末制剂(SD1)在45℃下的储存稳定性超出预期。
表23.制备的含有经过喷雾干燥的含有轮状病毒疫苗的粉末的膜制剂
实施例26—OTF制剂在小鼠体内的免疫原性研究
使用和液体和OTF制剂进行恒河猴轮状病毒疫苗(RRV)口服剂量表现在7日龄BALB/c小鼠幼崽中的免疫原性研究，以比较它们引发免疫应答的能力。使用了RRV疫苗(从斯坦福大学的Harry Greenberg教授的实验室获得)，因为已知其在小鼠中比在先前实施例中所使用的人-牛轮状病毒疫苗具有高得多的免疫原性。所使用的方法如下文所述。
利用F1制剂组合物(参见表1)按照实施例13中所描述的方式将活RRV OTF无菌配制成6.3log pfu/剂的滴度。此处，一剂由两个3mm直径的膜盘组成，并将其置于小鼠幼崽的脸颊内。液态制剂由重构膜和散装未配制的RRV组成，也为6.3log pfu/剂量，且通过口服灌胃递送的剂量体积为100μL/剂量。还向小鼠组递送生理盐水以作为对照。
对于四组小鼠中的每一组(5只小鼠/组)，以2周为间隔进行三次给药。还以2周为间隔收集粪便和血清样本，以利用ELISA试验分别测定抗RRV IgA和IgG抗体应答。第一次给药时，小鼠幼崽7天大。
图5和图6中提供了粪便IgA和血清IgG应答的结果。尽管OTF和重构OTF的粪便IgA应答最大，而散装RRV的血清IgG应答最大，所有样本都显著大于生理盐水组，这表明OTF和散装RRV的免疫应答相当好，这证明免疫原性不会受到OTF制备方法或制剂成分的影响。
应当理解的是，本文所描述的实施例和实施方式只用于说明目的，本领域技术人员可受到暗示而在上述内容的启发下进行的各种改动或改变，上述改动或改变包含在本申请的精神和范围内以及所附权利要求的范围内。
尽管为了清楚和便于理解而在一定程度上详细描述了上述发明，但本领域技术人员通过阅读本公开会清楚知晓，可在不偏离本发明实际范围的前提下对形式和细节进行各种改变。例如，上文所述的所有技术和设备都可以各种组合的方式使用。本申请中所引用的所有出版物、专利、专利申请和/或其它文件都出于所有目的通过引用全文纳入本文，其程度如同每篇单独的出版物、专利、专利申请和/或其它文件单独出于所有目的而通过引用而纳入本文。

Claims (78)

1.一种速溶薄膜组合物，其包含：
一种或更多种基质聚合物；
生物活性剂；
一种或更多种药物上可接受的赋形剂；以及
缓冲剂。
2.如权利要求1所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，所述一种或更多种聚合物选自由以下物质所组成的组：羟丙基纤维素、聚乙二醇、聚环氧乙烷、海藻酸钠、羧甲基纤维素、聚丙烯酸、甲基丙烯酸甲酯共聚物、聚乙烯吡咯烷酮、羧乙烯聚合物、聚乙烯醇(PVA)、羟丙基化高淀粉酶、糊精、聚(丙烯酸)、聚(甲基丙烯酸)、聚(甲基丙烯酸2-羟乙酯)、聚(L-赖氨酸)、聚(乙烯亚胺)以及它们的衍生物或共聚物。
3.如权利要求2所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，所述一种或更多种聚合物由聚乙烯醇(PVA)组成。
4.如权利要求2所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，所述一种或更多种聚合物包含双聚合物组合物，所述双聚合物组合物包括聚乙烯吡咯烷酮和聚环氧乙烷，或者聚乙烯吡咯烷酮和聚乙二醇。
5.如权利要求2所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，所述一种或更多种聚合物包含海藻酸钠和聚环氧乙烷和/或PVA的两种或更多种聚合物组合物。
6.如权利要求1所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，所述生物活性剂选自由以下物质所组成的组：蛋白质、抗体、酶、病毒疫苗、细菌疫苗、佐剂、病毒样颗粒、生长因子、细胞因子、核酸以及它们的组合。
7.如权利要求6所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，所述生物活性剂是蛋白质、抗体或疫苗。
8.如权利要求7所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，所述生物活性剂是疫苗。
9.如权利要求8所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，所述生物活性剂是轮状病毒疫苗。
10.如权利要求8所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，所述生物活性剂是伤寒疫苗。
11.如权利要求8所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，所述生物活性剂是流感疫苗。
12.如权利要求7所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，所述生物活性剂是抗体。
13.如权利要求12所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，所述生物活性剂是单克隆抗体。
14.如权利要求1所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，所述药物上可接受的赋形剂选自由以下物质所组成的组：多元醇、金属离子、抗酸剂、氨基酸、蛋白质、糖、羧酸盐、表面活性剂、明胶以及它们的组合。
15.如权利要求1所述的薄膜，其特征在于，所述赋形剂包含Zn2+和Ca2+。
16.如权利要求15所述的薄膜，其特征在于，所述赋形剂包含2％至4％的山梨糖醇。
17.如权利要求14所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，所述羧酸盐选自由以下物质所组成的组：琥珀酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、马来酸盐和乳酸盐。
18.如权利要求14所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，所述多元醇选自由以下物质所组成的组：蔗糖、甘露醇、乳糖、右旋糖、岩藻糖、海藻糖、聚天冬氨酸、肌醇六磷酸酯(植酸)、唾液酸、N-乙酰神经氨酸-乳糖以及它们的组合。
19.如权利要求14所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，所述表面活性剂是选自由以下物质所组成的组的非离子型表面活性剂：聚山梨酯、聚氧乙烯烷基醚、九甘醇辛基苯基醚、庚二醇辛基苯基醚、脱水山梨糖醇三油酸酯、以及聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物。
20.如权利要求1所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，所述缓冲剂选自由以下物质所组成的组：组氨酸、羟乙基哌嗪乙磺酸、三羟甲基氨基甲烷、乙酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、乳酸盐、碳酸氢铵、磷酸盐、氧化镁、氧化铝、氢氧化铝和氢氧化镁、碳酸铝凝胶、碳酸钙、碳酸氢钠、水滑石、硫糖铝、次水杨酸铋以及它们的组合。
21.如权利要求20所述的制剂，其特征在于，所述磷酸盐选自由以下物质所组成的组：单磷酸盐、多磷酸盐和磷酸化化合物。
22.如权利要求20所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，添加了足量的所述缓冲剂以缓冲哺乳动物的胃酸。
23.如权利要求14所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，所述膜中的所述药物上可接受的赋形剂包含：浓度在5％至约70％(w/w)范围内的多元醇；浓度在约0.02mmol/g至约1mmol/g范围内的羧酸盐；浓度在约0.0015mmol/g至0.075mmol/g范围内的Zn2+；且其中，所述缓冲剂为浓度在约0.01mmol/g至约3mmol/g范围内的磷酸盐缓冲剂。
24.如权利要求14所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，所述药物上可接受的赋形剂包含：浓度在约10％至约50％之间的多元醇；浓度在约0.02mmol/g与约0.3mmol/g之间的至少一种羧酸盐；且其中，所述磷酸盐缓冲剂是浓度在约0.04至约0.25mmol/g之间的磷酸盐。
25.如权利要求14所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，还包含浓度在约0.0015mmol/g至0.075mmol/g范围内的Ca2+。
26.如权利要求14所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，还包含约2％至约20％的明胶或约0.001％至约2％的非离子型表面活性剂。
27.如权利要求14所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，所述表面活性剂的浓度在约0.005％至约0.1％的范围内。
28.如权利要求14所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，所述药物上可接受的赋形剂包含：浓度在约35％至约45％之间的多元醇；浓度在约0.05mmol/g至约0.1mmol/g之间的至少一种羧酸盐；浓度在约0.005mmol/g至0.01mmol/g范围内的Ca2+；浓度在约0.005mmol/g至0.01mmol/g范围内的Zn2+；浓度在约5％至约10％范围内的明胶；且其中，所述磷酸盐缓冲剂为浓度在约0.05至约0.15mmol/g之间的磷酸盐。
29.如权利要求4所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，所述组合物是通过以下方式形成的：首先将聚乙烯吡咯烷酮和聚环氧乙烷或聚乙二醇聚合物溶解于有机溶剂中，随后与包含一种或更多种药物上可接受的赋形剂和缓冲剂的经过干燥的生物活性剂混合。
30.如权利要求29所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，所述有机溶剂是氯仿、乙醇、庚烷、异丙醇、甲基异丁基酮、四氢呋喃、乙酸乙酯、二氯甲烷或二氯甲烷:乙醇:异丙醇(5:6:4)。
31.如权利要求29所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，所述生物活性剂、一种或更多种药物上可接受的赋形剂和缓冲剂通过以下方式进行干燥：喷雾干燥、冷冻干燥、泡沫干燥、真空干燥或空气干燥。
32.如权利要求31所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，所述生物活性剂是病毒疫苗、细菌疫苗、核酸、蛋白质、抗体、酶、抗原、生长因子、细胞因子、佐剂或病毒样颗粒。
33.如权利要求29所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，所述生物活性剂未包封在所述聚合物基质内的膜状物中。
34.如权利要求29所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，所述药物上可接受的赋形剂包含：浓度在约5％至约50％(w/w)范围内的多元醇；浓度在约0.01mmol/g至约1mmol/g范围内的羧酸盐；浓度在约0.0015至0.075mmol/g范围内的Zn2+；以及浓度在约0.01mmol/g至约3mmol/g范围内的磷酸盐缓冲剂。
35.如权利要求34所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，还包含浓度在约0.0015至0.075mmol/g范围内的Ca2+。
36.如权利要求34所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，还包含约0.5％至约5％的明胶和/或约0.001％至约2％的非离子型表面活性剂和/或约5至约100mM的氨基酸。
37.如权利要求34所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，所述羧酸盐选自由以下物质所组成的组：琥珀酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、马来酸盐和乳酸盐。
38.如权利要求34所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，所述多元醇选自由以下物质所组成的组：蔗糖、甘露醇、乳糖、右旋糖、岩藻糖、海藻糖、聚天冬氨酸、肌醇六磷酸酯(植酸)、唾液酸、N-乙酰神经氨酸-乳糖以及它们的组合。
39.如权利要求34所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，多元醇的浓度在约5％至约30％之间；至少一种羧酸盐是浓度在约0.01至0.1mmol/g之间的柠檬酸盐或琥珀酸盐；且磷酸盐的浓度在约0.01至约0.1mmol/g之间。
40.如权利要求29所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，所述缓冲剂是选自由以下物质所组成的组的磷酸盐：单磷酸盐、多磷酸盐和磷酸化化合物。
41.如权利要求36所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，所述非离子型表面活性剂选自由以下物质所组成的组：聚山梨酯、聚氧乙烯烷基醚、九甘醇辛基苯基醚、庚二醇辛基苯基醚、脱水山梨糖醇三油酸酯、以及聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物。
42.如权利要求36所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，所述表面活性剂的浓度在约0.001％至约0.1％的范围内。
43.如权利要求1所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，所述膜是多层层叠物，所述多层层叠物结合有包含抗酸剂或粘膜粘附剂的单独的层。
44.如权利要求43所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，包含第二膜层，所述第二膜层含有足量的抗酸剂以缓冲哺乳动物的胃酸。
45.如权利要求43所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，所述抗酸剂选自由以下物质所组成的组：乙酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、乳酸盐、碳酸氢铵、磷酸盐、氧化镁、氧化铝、氢氧化铝和氢氧化镁、碳酸铝凝胶、碳酸钙、碳酸氢钠、水滑石、硫糖铝和次水杨酸铋。
46.如权利要求43所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，包含足量的分散抗酸剂粉末以缓冲哺乳动物的胃酸，其中，所述抗酸剂选自由以下物质所组成的组：乙酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、乳酸盐、碳酸氢铵、磷酸盐、氧化镁、氧化铝、氢氧化铝和氢氧化镁、碳酸铝凝胶、碳酸钙、碳酸氢钠、水滑石、硫糖铝和次水杨酸铋。
47.如权利要求46所述的速溶薄膜组合物，其特征在于，所述抗酸剂是碳酸钙或氧化镁。
48.一种制备速溶薄膜组合物的方法，所述方法包括：
提供一种或更多种聚合物；
提供生物活性剂；
提供一种或更多种药物上可接受的赋形剂；
在溶液或悬浮液中使所述生物活性剂与所述赋形剂混合；
使所述溶液或悬浮液与所述一种或更多种聚合物混合，以形成潮湿掺混物；
将所述潮湿掺混物施涂至平坦表面；以及
干燥所述潮湿掺混物，以形成干燥薄膜；
其中，所述干燥薄膜包含小于5％的残留水分。
49.如权利要求48所述的方法，其特征在于，通过将所述膜挤出或浇铸在平坦表面上，并且在层流、加热、真空或它们的组合的条件下使所述膜干燥来形成所述膜。
50.如权利要求48所述的方法，其特征在于，使生物活性剂与至少一种药物上可接受的赋形剂和缓冲剂的水溶液与一种或更多种聚合物的水溶液混合，随后进行挤出或浇铸以及膜的干燥。
51.如权利要求50所述的方法，其特征在于，在进行挤出或浇铸之前，将合适的挥发性有机溶剂添加至所述膜的潮湿掺混物以增强干燥效率。
52.如权利要求50所述的方法，其特征在于，使一种或更多种药物上可接受的赋形剂和缓冲剂的溶液与一种或更多种聚合物的溶液混合，随后添加抗酸剂粉末，通过混合使所述抗酸剂粉末分散开，接着添加所述生物活性剂，通过混合使所述生物活性剂分散开，其中，通过将所述膜挤出或浇铸至平坦表面上，并且在层流、加热、真空或它们的干燥组合的条件下使所述膜干燥来形成所述膜。
53.如权利要求50所述的方法，其特征在于，所述干燥方法是利用加热对流干燥来进行的。
54.如权利要求50所述的方法，其特征在于，所述一种或更多种聚合物选自由以下物质所组成的组：羟丙基纤维素、聚乙二醇、聚环氧乙烷、海藻酸钠、羧甲基纤维素、黄原胶、瓜尔胶、黄蓍胶、***树胶、聚丙烯酸、支链淀粉、甲基丙烯酸甲酯共聚物、聚乙烯吡咯烷酮、羧乙烯基聚合物、淀粉酶、聚乙烯醇、高淀粉酶淀粉、羟丙基化高淀粉酶淀粉、甲壳素、糊精、壳聚糖、果聚糖、果胶、爱生兰、明胶、玉米醇溶蛋白、谷蛋白、胶原蛋白、大豆蛋白分离物、乳清蛋白分离物、酪蛋白、聚(丙烯酸)、聚(甲基丙烯酸)、聚(2-甲基丙烯酸羟乙酯)、聚(L-赖氨酸)、透明质酸盐、聚(乙烯亚胺)、它们的组合物以及它们的共聚物。
55.如权利要求54所述的方法，其特征在于，所述一种或更多种聚合物由聚乙烯醇组成。
56.如权利要求50所述的方法，其特征在于，所述生物活性剂选自由以下物质所组成的组：蛋白质、抗体、酶、病毒疫苗、细菌疫苗、佐剂、病毒样颗粒、生长因子、细胞因子、核酸以及它们的组合。
57.如权利要求50所述的方法，其特征在于，所述药物上可接受的赋形剂选自由以下物质所组成的组：多元醇、金属离子、抗酸剂、氨基酸、蛋白质、增塑剂、羧酸盐、表面活性剂和明胶。
58.如权利要求50所述的方法，其特征在于，所述缓冲剂选自由以下物质所组成的组：组氨酸、羟乙基哌嗪乙磺酸、三羟甲基氨基甲烷、乙酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、乳酸盐、碳酸氢铵、磷酸盐、氧化镁、氧化铝、氢氧化铝和氢氧化镁、碳酸铝凝胶、碳酸钙、碳酸氢钠、水滑石、硫糖铝、次水杨酸铋以及它们的组合。
59.一种轮状病毒薄膜组合物，所述组合物包含：稳定剂赋形剂，所述稳定剂赋形剂包含磷酸钾、柠檬酸、蔗糖、山梨糖醇、氯化钙、氯化锌和明胶；聚乙烯醇；以及轮状病毒。
60.如权利要求59所述的薄膜，其特征在于，所述组合物形成具有2％至7％残留水分的薄膜。
61.如权利要求59所述的薄膜，其特征在于，所述轮状病毒以每100mg为6log ffu的滴度存在。
62.如权利要求59所述的薄膜，其特征在于，所述赋形剂以每种赋形剂相对于F1制剂的相对比例在25％以内的量存在。
63.如权利要求59所述的薄膜，其特征在于，所述薄膜通过在45℃至80℃下暴露0.5至3小时来形成。
64.如权利要求59所述的薄膜，其特征在于，所述膜具有厚度在50微米至300微米范围内的主平面。
65.如权利要求59所述的薄膜，其特征在于，以重量百分比(重量％)计，增塑剂的比例不超过所述基质聚合物重量百分比的25％。
66.如权利要求59所述的薄膜，其特征在于，山梨糖醇以至少1.2重量％的量存在，且残留水分不超过7重量％。
67.如权利要求59所述的薄膜，其特征在于，所述轮状病毒选自由以下物质所组成的组：轮状病毒株G1、G2、G3和G4。
68.如权利要求59所述的薄膜，其特征在于，所述膜具有厚度在50微米至200微米范围内的主平面。
69.如权利要求59所述的薄膜，其特征在于，所述组合物基本上不含明胶。
70.一种抗体薄膜组合物，所述组合物包含：
赋形剂，所述赋形剂包含山梨糖醇、泊洛沙姆、蔗糖、组氨酸和聚山梨酯；
聚乙烯醇基质聚合物；以及
抗体。
71.如权利要求70所述的薄膜，其特征在于，所述组合物以具有3％至7％残留水分的薄膜形态提供。
72.如权利要求70所述的薄膜，其特征在于，所述赋形剂以每种赋形剂相对于M5制剂的相对比例在25％以内的量存在。
73.如权利要求70所述的薄膜，其特征在于，所述薄膜通过在45℃至80℃下暴露0.5至3小时来形成。
74.一种在薄干燥膜中提供生物活性剂的方法，所述方法包括：
将生物活性剂、一种或更多种基质聚合物和赋形剂水溶液掺混在一起，以形成潮湿掺混物；
将所述潮湿掺混物施涂至平坦表面；
干燥所述潮湿掺混物，以形成所述薄干燥膜组合物；
其中，所述生物活性剂包含轮状病毒，所述一种或更多种基质聚合物包含PVA，且所述赋形剂溶液包含山梨糖醇、锌阳离子、钙阳离子；且
其中，所述干燥膜组合物包含小于7％的残留水分。
75.如权利要求74所述的方法，其特征在于，所述干燥方法是通过加热对流干燥和/或在真空室中进行干燥来进行的。
76.一种在薄干燥膜中提供抗体试剂的方法，所述方法包括：
将抗体、一种或更多种基质聚合物和赋形剂水溶液掺混在一起，以形成潮湿掺混物；
将所述潮湿掺混物施涂至平坦表面；以及
干燥所述潮湿掺混物，以形成所述薄干燥膜组合物；
其中，所述基质聚合物包含PVA，且所述赋形剂溶液包含组氨酸；且
其中，所述干燥膜组合物包含小于7％的残留水分。
77.如权利要求76所述的方法，其特征在于，所述干燥方法是通过加热对流干燥或在真空室中进行干燥来进行的。
78.如权利要求76所述的方法，其特征在于，所述赋形剂还包含山梨糖醇、泊洛沙姆、蔗糖和聚山梨酯。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021039645A1 (ja) * 2019-08-26 2021-03-04 シンバイオシス株式会社 生体導入補助剤及びその利用方法
CN116940639A (zh) * 2021-02-26 2023-10-24 株式会社爱可瞳 彩色隐形眼镜用涂布液、其制备方法以及使用其制造的彩色隐形眼镜

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018085495A2 (en) * 2016-11-02 2018-05-11 Board Of Regents, The University Of Texas System Dissolvable films and methods of their use
CN109251450A (zh) * 2018-07-17 2019-01-22 王晚秀 一种高阻隔性pva基复合膜及其制备方法
MA55033A (fr) 2019-02-18 2021-12-29 Lilly Co Eli Formulation d'anticorps thérapeutique
US20220183993A1 (en) 2019-03-19 2022-06-16 Glaxosmithkline Biologicals Sa Thermostable quick-disolving thin film
EP4013821A1 (en) 2019-08-12 2022-06-22 Solutum Technologies Ltd Composites and uses thereof
DE102021100780A1 (de) 2021-01-15 2022-07-21 Lts Lohmann Therapie-Systeme Ag. Oraler dünnfilm mit pva-tris-pufferschicht
US11548192B1 (en) 2022-04-19 2023-01-10 King Abdulaziz University System, apparatus, and methods for manufacturing biodegradable biopolymeric materials
CN114854217B (zh) * 2022-06-16 2023-05-09 陕西科技大学 一种生物可降解拒水抗紫外明胶基生物塑料薄膜及其制备方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005009386A2 (en) * 2003-07-24 2005-02-03 Smithkline Beecham Corporation Orally dissolving films
US20070281003A1 (en) * 2001-10-12 2007-12-06 Fuisz Richard C Polymer-Based Films and Drug Delivery Systems Made Therefrom
US20100226939A1 (en) * 2007-09-25 2010-09-09 Vu Truong-Le Formulations for preservation of rotavirus
US20110243988A1 (en) * 2009-10-01 2011-10-06 Aridis Pharmaceuticals Methods and Compositions for Stabilization of a Virus Vaccine
US20110305768A1 (en) * 2008-07-01 2011-12-15 The Johns Hopkins University Quick-dissolving oral thin film for targeted delivery of therapeutic agents

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PL3254676T3 (pl) * 2009-10-30 2019-06-28 Ix Biopharma Ltd Szybko rozpuszczająca się stała postać dawkowana
WO2012103464A2 (en) * 2011-01-28 2012-08-02 Brian Pulliam Oral thin film vaccine preparation
AU2012245198B2 (en) * 2011-04-21 2017-07-13 Trustees Of Tufts College Compositions and methods for stabilization of active agents
EP2821066B1 (en) * 2012-02-28 2018-04-25 Seoul Pharma. Co. Ltd. High-content fast dissolving film with masking of bitter taste comprising sildenafil as active ingredient

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20070281003A1 (en) * 2001-10-12 2007-12-06 Fuisz Richard C Polymer-Based Films and Drug Delivery Systems Made Therefrom
WO2005009386A2 (en) * 2003-07-24 2005-02-03 Smithkline Beecham Corporation Orally dissolving films
US20100226939A1 (en) * 2007-09-25 2010-09-09 Vu Truong-Le Formulations for preservation of rotavirus
US20110305768A1 (en) * 2008-07-01 2011-12-15 The Johns Hopkins University Quick-dissolving oral thin film for targeted delivery of therapeutic agents
US20110243988A1 (en) * 2009-10-01 2011-10-06 Aridis Pharmaceuticals Methods and Compositions for Stabilization of a Virus Vaccine

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021039645A1 (ja) * 2019-08-26 2021-03-04 シンバイオシス株式会社 生体導入補助剤及びその利用方法
CN116940639A (zh) * 2021-02-26 2023-10-24 株式会社爱可瞳 彩色隐形眼镜用涂布液、其制备方法以及使用其制造的彩色隐形眼镜

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