CN109444284A - 一种同时测定花椒和/或藤椒及其油制品中风味物质的方法 - Google Patents
一种同时测定花椒和/或藤椒及其油制品中风味物质的方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种同时测定花椒和/或藤椒及其油制品中风味物质的方法,其特征在于:它是采用高效液相色谱法检测,其操作步骤如下:1)制备对照品溶液;2)制备供试品溶液;3)分别吸取对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪。本发明的同时测定花椒和/或藤椒及其油制品中风味物质的方法,可用于同时测定花椒和/或藤椒及其油制品中风味物质中“麻”的化学成分羟基‑α‑山椒素、羟基‑β‑山椒素、羟基‑γ‑山椒素,和“香”的化学成分柠檬烯、芳樟醇。方法简便、结果可靠,对花椒和/或藤椒及其相关产品的质量控制及科学评价具有重要意义,具有良好的应用前景。
Description
技术领域
本发明具体涉及一种同时测定花椒和/或藤椒及其油制品中风味物质的方法。
背景技术
市售花椒商品主要包括花椒(ZanthoxylumbungeanumMaxim.)和藤椒(Zanthoxylumarmatum DC.)两种,为一种特色的药食两用之品。作为食用之品,“麻、香”是其主要的风味特征,是以麻辣鲜香为特色的川菜中不可或缺的调味品;作为药用之品,体现“麻、香”的化学成分也是其主要的活性成分,研究发现花椒商品中的活性成分对消化***、神经***、循环***以及抗炎、镇痛、抗肿瘤、抗氧化、抗菌杀虫方面具有较强的药理活性作用。目前,花椒(藤椒)主以调味原料和加工品(花椒油/藤椒油)两种形式作为食品使用,花椒油(藤椒油)为直接用食用油浸泡花椒(藤椒)或应用有机溶剂浸提、超临界CO2萃取等方法制得的花椒(藤椒)精油与食用油适量混合所制成的具有麻香味的调味油。
花椒商品中的香味物质主要为挥发油,包括烯类、醇类、酮类、醛类、酯类等挥发性成分,花椒中挥发油以柠檬烯、芳樟醇含量较高,其中柠檬烯含量最高,藤椒以芳樟醇、柠檬烯含量较高,其中芳樟醇含量最高;麻味物质主要是以山椒素为代表的链状的不饱和脂肪酸酰胺类物质,主要包括羟基-α-山椒素、羟基-β-山椒素、羟基-γ-山椒素等,花椒和藤椒中皆以羟基-α-山椒素含量最高。目前,在花椒(藤椒)和花椒油(藤椒油)的质量评判标准中,多以感官评价为主要方法,并且各个标准的限度要求具有差异,这使得对花椒(藤椒)及花椒油(藤椒油)的麻香味判定缺乏科学性,不具有准确性和客观性,难以实现标准化和定量化。部分研究虽然对麻味物质或香味物质进行了定量分析,但花椒的风味物质包括了麻味物质和香味物质。单一的测定香味物质含量或者麻味物质的含量作为花椒或者花椒油的质量评判标准不具有代表性,不能全面真实的反映花椒(藤椒)及花椒油(藤椒油)的内在品质。
目前麻味物质含量检测方法主要有紫外分光光度法和高效液相色谱法(HPLC)等,其中分光光度法测定的是总麻味物质的含量,不能反映各麻味成分的情况。HPLC法具有易操作、灵敏度高和稳定性好等特点,已成为分析测定麻味物质的主要方法。然而在花椒油(藤椒油)麻味物质测定中,常采用甲醇萃取花椒油(藤椒油)中的麻味物质,对萃取后形成的互不相溶的两液体进行分液取甲醇液进行分析,其方法易造成花椒油(藤椒油)麻味物质萃取不完全,定量分析不够精确。目前,香味物质含量测定常采用气相色谱法测定柠檬烯和芳樟醇含量,而气相色谱法操作较复杂,危险系数较高,推广较困难,采用高效液相色谱法测定花椒(藤椒)及花椒油(藤椒油)香味物质很少涉及,更没有同时测定麻味物质和香味物质的报道。因此,建立一种简便、准确的分析测定花椒(藤椒)及花椒油(藤椒油)中的麻味物质和香味物质为共同指标的方法,对其建立一个科学客观的质量标准,对花椒(藤椒)及其相关产品的质量控制及科学评价具有重要意义。
发明内容
为解决上述问题,本发明提供了一种同时测定花椒和/或藤椒及其油制品中风味物质的方法,其特征在于:它是采用高效液相色谱法检测,其操作步骤如下:
1)对照品溶液的制备:取羟基-α-山椒素、羟基-β-山椒素、羟基-γ-山椒素、柠檬烯、芳樟醇对照品,加异丙醇溶解,冷冻保存,作为对照品溶液;
2)供试品溶液的制备:
a花椒或藤椒供试品:取供试品粉碎,过筛,加食用油提取,过滤,提取液加异丙醇溶解,过滤,取滤液作为供试品溶液;
b花椒油或藤椒油供试品:取供试品,加异丙醇溶解,过滤,取滤液作为供试品溶液;
3)分别吸取对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪,色谱条件如下:
色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相:以乙腈为流动相A,以水为流动相B梯度洗脱;梯度洗脱程序如下:
进一步地,步骤1)所述对照品溶液含羟基-α-山椒素、羟基-β-山椒素、羟基-γ-山椒素、柠檬烯、芳樟醇浓度分别为800ug/mL、90ug/mL、80ug/mL、2000ug/mL、1000ug/mL。
进一步地,步骤1)所述冷冻温度为-20℃。
进一步地,步骤a所述过筛的筛网为三号筛。
进一步地,步骤a所述花椒或藤椒待测样品与食用油的质量体积比为10g:60mL,所述食用油为玉米油。
进一步地,步骤a所述提取为恒温浸提,浸提时间为150min,浸提温度为80℃。
进一步地,步骤a所述提取液与异丙醇的体积比为1:50;和/或,步骤b所述花椒油或藤椒油待测样品与异丙醇的体积比为1:50。
进一步地,步骤3)所述的分别注入液相色谱仪的对照品溶液和供试品溶液量为5μl。
进一步地,步骤3)所述十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱为:资生堂CAPCELL PAK C18柱,250mm×4.6mm,5μm,MGII。
进一步地,步骤3)所述色谱条件中流速为1.00mL/min;柱温为30℃。
更进一步地,步骤3)所述色谱条件中波长分别为200nm、270nm。
本发明的同时测定花椒和/或藤椒及其油制品中风味物质的方法,可用于同时测定花椒和/或藤椒及其油制品中风味物质中“麻”的化学成分羟基-α-山椒素、羟基-β-山椒素、羟基-γ-山椒素,和“香”的化学成分柠檬烯、芳樟醇。方法简便、结果可靠,对花椒(藤椒)及其相关产品的质量控制及科学评价具有重要意义,具有良好的应用前景。
显然,根据本发明的上述内容,按照本领域的普通技术知识和惯用手段,在不脱离本发明上述基本技术思想前提下,还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式,对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1羟基-α-山椒素、羟基-β-山椒素、羟基-γ-山椒素在190-400nm波长范围内的吸收光谱图。
图2芳樟醇、柠檬烯在190-400nm波长范围内的吸收光谱图。
图3方案1梯度洗脱液相色谱图(A:波长270nm,B:波长200nm)。
图4方案2梯度洗脱液相色谱图(A:波长270nm,B:波长200nm)。
图5方案3梯度洗脱液相色谱图(A:波长270nm,B:波长200nm)。
图6花椒(油)高效液相色谱图(A:波长270nm,B:波长200nm)。
图7藤椒(油)高效液相色谱图(A:波长270nm,B:波长200nm)。
具体实施方式
1、材料、试剂与仪器
1.1实验仪器
岛津LC-2010A高效液相色谱仪,SIL-20A自动进样器,SPD-20A检测器,CTO-20A柱温箱,LC solution色谱工作站软件,日本岛津公司;TU-1901双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);DZKW恒温水浴锅(北京中兴伟业有限公司)。SartoriusBP211D电子天平(德国赛多利斯公司);HX-200型高速中药粉碎机(浙江省永康市溪岸五金药具厂);UPT-11-10T优普系列超纯水器。
1.2材料及试剂
麻味物质对照品:花椒麻味物质对照品:羟基-α-山椒素(自制,纯度98.35%);羟基-β-山椒素(自制,已申请成国家标准品,纯度98.27%);羟基-γ-山椒素(自制,纯度98.54%)。香味物质对照品:柠檬烯(纯度为96%,批号100472-201503)与芳樟醇(纯度为97.8%,批号111503-201603)对照品均购于中国食品药品检定研究院。异丙醇(分析纯,成都市科隆化学品有限公司)、甲醇(色谱纯,美国sigma公司)乙腈(色谱纯,美国sigma公司),水为实验室自制超纯水。
花椒样品采集于四川汉源、甘肃武都、陕西韩城;藤椒样品采集于四川三台、四川金阳、四川洪雅;花椒油与藤椒油样品购买于超市,包括牛市坡花椒油、九斗碗花椒油、永丰和花椒油;万弗藤椒油、幺麻子藤椒油、牛市坡藤椒油。
实施例1花椒(藤椒)风味物质测定
1)对照品溶液的制备:分别精密称取羟基-α-山椒素、羟基-β-山椒素、羟基-γ-山椒素、芳樟醇、柠檬烯对照品于5个容量瓶中,分别用异丙醇溶解并定容至刻度得到浓度为8mg/mL、0.9mg/mL、0.8mg/mL、20mg/mL、10mg/mL的对照品储备液,再各取1mL母液于10mL容量瓶,用异丙醇定容制成800μg/mL、90μg/mL、80μg/mL、2000μg/mL、1000μg/mL的混合对照品母液,将其于-20℃条件下储存供液相分析用。
2)供试品溶液的制备:
将花椒(藤椒)样品用粉碎机粉碎成粉末(过三号筛),称取10g样品于锥形瓶中,加入玉米油60mL,于80℃恒温水浴锅中恒温浸提150min,过滤取续滤液,用移液枪吸取1mL花椒浸提油(藤椒浸提油)于50mL容量瓶中,用异丙醇溶解并定容至刻度线,振荡摇匀,用0.45μm的微孔滤膜过滤,取续滤液,即得。
3)分别吸取5μL对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪,色谱条件如下:
色谱柱:资生堂CAPCELL PAK C18柱(250mm×4.6mm,5μm;MGII);柱温30℃;流动相:以乙腈为流动相A,以水为流动相B梯度洗脱;流动相流速1.00mL/min;梯度洗脱程序如下:
采用高效液相色谱法进行检测后,经计算获得花椒(藤椒)样品中羟基-α-山椒素、羟基-β-山椒素、羟基-γ-山椒素、芳樟醇、柠檬烯的含量见表1。
表1花椒(藤椒)风味物质含量
“—”表示超出检测限度
实施例2花椒油(藤椒油)风味物质测定
1)对照品溶液的制备:分别精密称取羟基-α-山椒素、羟基-β-山椒素、羟基-γ-山椒素、芳樟醇、柠檬烯对照品于5个容量瓶中,分别用异丙醇溶解并定容至刻度得到浓度为8mg/mL、0.9mg/mL、0.8mg/mL、20mg/mL、10mg/mL的对照品储备液,再各取1mL母液于10mL容量瓶,用异丙醇定容制成800μg/mL、90μg/mL、80μg/mL、2000μg/mL、1000μg/mL的混合对照品溶液,将其于-20℃条件下储存供液相分析用。
2)供试品溶液的制备:
用移液枪精密吸取1mL花椒油于50mL容量瓶中,用异丙醇定容至刻度线,振荡摇匀使花椒油(藤椒油)溶解,用0.45μm的微孔滤膜过滤,取续滤液,即得;
3)分别吸取5μL对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪,色谱条件如下:
色谱柱:资生堂CAPCELL PAK C18柱(250mm×4.6mm,5μm;MGII);柱温30℃;流动相:以乙腈为流动相A,以水为流动相B梯度洗脱;流动相流速1.00mL/min;梯度洗脱程序如下:
采用高效液相色谱法进行检测后,经计算获得花椒油样品中羟基-α-山椒素、羟基-β-山椒素、羟基-γ-山椒素、柠檬烯、芳樟醇的含量见表2。
表2花椒油(藤椒油)风味物质含量
以下通过试验例的方式说明本发明的有益效果:
试验例1色谱条件选择及方法学考察
1检测波长的选择
利用紫外可见分光光度计对3种麻味物质和2种香味物质标准品进行全波长(190-460nm范围内)扫描,以确定最大吸收波长,结果见图1、图2。由图1可以得出:羟基-α-山椒素、羟基-β-山椒素、羟基-γ-山椒素在270nm有最大吸收峰;由图2得出:芳樟醇、柠檬烯在200nm有最大吸收峰。
2洗脱梯度程序选择
设定不同的洗脱梯度程序,不同洗脱程序方案见表3、表4及表5、各不同方案下高效液相色谱图见图3(方案1)、图4(方案2)及图5(方案3)。各方案峰分离度情况见表6。
表3方案1梯度洗脱程序
表4方案2梯度洗脱程序
表5方案3梯度洗脱程序
表6不同方案梯度洗脱程序风味物质分离情况
根据各洗脱梯度程序下色谱峰的峰形及分离度,最终确定为方案1:流动相为乙腈-水,梯度洗脱条件:0~15min,乙腈-水(40:60~50:50);15~25min,乙腈-水(50:50~60:40);25~35min,乙腈-水(60:40~70:30);35~60min乙腈-水(70:30),柱温30℃,流速1.0mL/min,进样量5μL,检测波长200nm、270nm。:采用上述梯度洗脱程序,3种主要麻味物质和两种香味物质能够在60min内达到完全分离,其分离度均大于1.5,且峰形尖锐,对称性良好。
3方法学考察
3.1线性关系考察
用移液枪分别吸取100μL、200μL、400μL、600μL、800μL、1000μL混合对照品母液于6个2ml棕色容量瓶中,并用异丙醇定容至刻度线,配制成不同质量浓度的标准溶液。按“2”项条件下进样测定,其高效液相色谱图见图3。重复3次,分别以峰面积为纵坐标(Y),质量浓度(μg/mL)为横坐标(X)进行线性回归,结果表明各麻味成分和香味成分在各自范围内与峰面积呈良好的线性关系,回归方程详见线性范围及相关系数详见表7。
表7回归方程、线性范围及相关系数
3.2精密度实验
精密吸取5μL混合对照品溶液,按“2”项下条件进样分析,连续进样6次,测定峰面积,结果各成分峰面积的RSD分别是羟基-α-山椒素0.56%、羟基-β-山椒素0.27%、羟基-γ-山椒素0.38%、芳樟醇0.76%、柠檬烯0.68%表明仪器精密度良好。
3.3稳定性实验
精密吸取同一花椒油供试品溶液,按照“2”项下色谱条件,分别于0、4、8、12、18和24h进样测定,测得各成分峰面积RSD分别是羟基-α-山椒素1.21%、羟基-β-山椒素0.86%、羟基-γ-山椒素0.75%、芳樟醇0.98%、柠檬烯1.07%,表明提取液在24h内基本稳定。
3.4重复性试验
取同一品牌花椒油按实施例3项下方法制备6份供试品溶液,按照“2”项下色谱条件进行测定分析,结果各成分质量分数的RSD分别为羟基-α-山椒素0.77%、羟基-β-山椒素0.61%、羟基-γ-山椒素0.36%、芳樟醇0.86%、柠檬烯1.01%,表明该方法的重复性良好。
3.5加样回收率试验
精密吸取6份已知风味物质含量的同一品牌花椒油各0.5mL于50mL的容量瓶中1,分别加入适量的羟基-α-山椒素、羟基-β-山椒素、羟基-γ-山椒素、芳樟醇、柠檬烯标准品,再用异丙醇定容。并按照实施例2下方法同法处理进样6次,并分别测定峰面积,计算回收率及RSD值。结果见表8。
表8风味物质成分回收率试验结果
3.6花椒(藤椒)及花椒油(藤椒油)麻味物质和香味物质的含量测定验证
按照“2”项下色谱条件,对花椒(四川汉源花椒、陕西韩城花椒、甘肃武都花椒)、藤椒(四川三台藤椒、四川金阳青花椒、四川洪雅藤椒)、花椒油(牛市坡花椒油、九斗碗花椒油、永丰和花椒油)、藤椒油(幺麻子藤椒油、万弗藤椒油、牛市坡藤椒油)的12个样品中3种主要麻味成分和2种主要香味成分进行同时测定,花椒(油)高效液相色谱图见图6,藤椒(油)高效液相色谱图结果见图7,测定结果同实施例1中的表1和实施例2中的表2。
通过色谱条件选择及方法学考察的结果可见:该检测方法,可用于同时测定花椒(油)和/或藤椒(油)风味物质中“麻”的化学成分羟基-α-山椒素、羟基-β-山椒素、羟基-γ-山椒素,和“香”的化学成分柠檬烯、芳樟醇。结果可靠,对花椒(藤椒)及其相关产品的质量控制及科学评价具有重要意义,具有良好的应用前景。
Claims (10)
1.一种同时测定花椒和/或藤椒及其油制品中风味物质的方法,其特征在于:它是采用高效液相色谱法检测,其操作步骤如下:
1)对照品溶液的制备:取羟基-α-山椒素、羟基-β-山椒素、羟基-γ-山椒素、柠檬烯、芳樟醇对照品,加异丙醇溶解,冷冻保存,作为对照品溶液;
2)供试品溶液的制备:
a花椒或藤椒供试品:取供试品粉碎,过筛,加食用油提取,过滤,提取液加异丙醇溶解,过滤,取滤液作为供试品溶液;
b花椒油或藤椒油供试品:取供试品,加异丙醇溶解,过滤,取滤液作为供试品溶液;
3)分别吸取对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪,色谱条件如下:
色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相:以乙腈为流动相A,以水为流动相B梯度洗脱;梯度洗脱程序如下:
2.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:步骤1)所述对照品溶液含羟基-α-山椒素、羟基-β-山椒素、羟基-γ-山椒素、柠檬烯、芳樟醇浓度分别为800ug/mL、90ug/mL、80ug/mL、2000ug/mL、1000ug/mL。
3.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:步骤1)所述冷冻温度为-20℃。
4.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:步骤a所述过筛的筛网为三号筛。
5.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:步骤a所述花椒或藤椒待测样品与食用油的质量体积比为10g:60mL,所述食用油为玉米油。
6.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:步骤a所述提取为恒温浸提,浸提时间为150min,浸提温度为80℃。
7.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:步骤a所述提取液与异丙醇的体积比为1:50;步骤b所述花椒油或藤椒油待测样品与异丙醇的体积比为1:50。
8.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:步骤3)所述的分别注入液相色谱仪的对照品溶液和供试品溶液量为5μl。
9.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:步骤3)所述十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱为:资生堂CAPCELL PAK C18柱,250mm×4.6mm,5μm,MGII。
10.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于:步骤3)所述色谱条件中流速为1.00ml/min,柱温为30℃,波长为200nm、270nm。
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