CN109432020A - 多孔磷酸钙支架负载微球复合材料及其制备方法和应用 - Google Patents

多孔磷酸钙支架负载微球复合材料及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN109432020A
CN109432020A CN201910002515.8A CN201910002515A CN109432020A CN 109432020 A CN109432020 A CN 109432020A CN 201910002515 A CN201910002515 A CN 201910002515A CN 109432020 A CN109432020 A CN 109432020A
Authority
CN
China
Prior art keywords
calcium phosphate
microballoon
bracket
porous calcium
composite material
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201910002515.8A
Other languages
English (en)
Inventor
何晓乐
刘军
王晓明
甄诚
王燕
甄平
马永海
李旭升
杨巧巧
周胜虎
王伟
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Fourth Military Medical University FMMU
Original Assignee
Fourth Military Medical University FMMU
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Fourth Military Medical University FMMU filed Critical Fourth Military Medical University FMMU
Priority to CN201910002515.8A priority Critical patent/CN109432020A/zh
Publication of CN109432020A publication Critical patent/CN109432020A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4409—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof only substituted in position 4, e.g. isoniazid, iproniazid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/34—Macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamino acids, polysiloxanes, polyphosphazines, copolymers of polyalkylene glycol or poloxamers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A61P31/06—Antibacterial agents for tuberculosis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

本发明提供了一种多孔磷酸钙支架负载微球复合材料及其制备方法和应用，包括多孔磷酸钙支架，多孔磷酸钙支架的孔隙中负载有聚乳酸‑羟基乙酸共聚物微球；聚乳酸‑羟基乙酸共聚物微球包覆一种或多种抗结核药物。经过实验证实，该多孔磷酸钙支架负载微球复合材料既具有充填骨重建和骨诱导成骨作用，又具有局部持续、立体缓慢释放抗结核药物的作用，起到治疗骨关节结核并减少复发的效果。本发明还提供了多孔磷酸钙支架负载微球复合材料的制备方法和应用。

Description

多孔磷酸钙支架负载微球复合材料及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于医药技术领域，特别涉及一种多孔磷酸钙支架负载微球复合材料及其制备方法和应用。
背景技术
全球结核病患者约有2000万，发病率呈明显增高趋势，我国约有500万。在所有结核病人中，约有10-15％是肺外结核，骨关节结核占肺外结核的首位。联合用药可以提高抗结核的疗效，减少耐药菌的出现。三联以上抗结核药物全身化疗需要10个月以上，即使骨关节结核的超短程化疗也需至少6-8个月。但在骨结核的治疗中，由于病灶区域血运差、瘢痕形成等原因，全身用药难以在病灶区内达到有效杀菌浓度，很容易导致结核复燃，同时抗结核菌药物的毒副作用较为明显，联合、长期、大剂量地口服抗痨药，也容易损害肝肾功能导致全身不良反应的发生。多年来许多学者尝试应用局部化疗，以减轻不良反应、提高抗痨效果。
3D打印技术的开发始于上世纪80年代，由于其巨大的潜力，如今这一技术再度引起重视。许多国家正在试图打造3D打印产业并将其应用到包括商业，时尚，机械工程和医药等多个领域。在骨组织工程领域中，由于3D打印技术允许用户自行设计材料的宏观结构和贯通性而且粉末堆积密度的大小会影响材料的表面粗糙度和微观孔隙率，而这些特征将有利于骨组织工程支架材料的骨传导和骨整合。因此，3D打印技术在骨组织工程领域也广受追捧。
磷酸三钙(TCP)亦名磷酸钙(CP)，性状为白色晶体或不定形粉末，普遍存在于生物的骨骼中，在骨组织工程领域和医学领域中被视为优良的骨修复生物材料。磷酸三钙(TCP)具有卓越的物理化学性质、生物相容性和生物可降解性，这使得该陶瓷能够促进新骨形成并产生骨传导作用从而完成骨缺损的修复。因此，磷酸三钙(TCP)可以作为有效的骨移植材料而广泛应用于骨组织工程领域。β-磷酸三钙(β-TCP)作为人工骨支架材料具有以下特点：1)良好的生物相容性；2)生物可降解而且降解速率可控；3)β-TCP可加工成具有三维内联孔隙结构，有较高的比表面积，良好的骨传导性和诱导活性；4)材料表面有利于细胞的黏附生长，有利于细胞的分化；5)有一定的机械强度及韧性；6)易加工，易塑形，来源充足，充填成骨效果可靠。
PLGA(聚乳酸-羟基乙酸共聚物)具有良好的组织相容性，通过控制微球大小、延缓药物降解、延长药物释放时间、靶向释放、降低药物毒性和刺激性，是一种较好的缓释药物载体。PLGA的分解产物是乳酸和乙醇酸，乳酸进入三羧酸循环代谢，以CO2和H2O的形式排出体外。缓释微球是一种微米级尺寸的微粒药物载体递送***。将药物包封于微粒中，可以调节释药的速度，增加生物膜的通透性、改变在体内的分布、提高生物利用度等。
鉴于目前在骨结核清除术中局部用药的形式任然过于简单，多数手术医生将抗痨药物喷洒于清除术后的残腔中或者将抗痨药物喷洒于明胶海绵、异体骨快后再植入残腔，因抗结核药物极易溶解在局部的积血或渗液中，药物稀释且药物浓度难以控制，故这些局部用药方式并不能使抗结核药物在残腔维持一个长时间的、有效杀菌浓度，治疗效果有限。因此，许多研究者试图寻找一种能长时间稳定释放药物的缓释剂来增强局部化疗的效果。
发明内容
本发明的目的在于提供一种多孔磷酸钙支架负载微球复合材料，克服现有局部用药不能使抗结核药物在残腔维持一个长时间的、有效杀菌浓度的不足。
本发明的目的还在于提供多孔磷酸钙支架负载微球复合材料的制备方法和用途。
本发明是通过以下技术方案来实现：
一种多孔磷酸钙支架负载微球复合材料，包括多孔磷酸钙支架，多孔磷酸钙支架的孔隙中负载有聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球；聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球包覆一种或多种抗结核药物。
作为本发明的进一步改进，多孔磷酸钙支架的孔隙率为60～70％，孔径大小为300～500μm，最大强度大于2.0MPa。
作为本发明的进一步改进，所述抗结核药物为异烟肼和利福平。
作为本发明的进一步改进，聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球中，异烟肼的载药量为6％～10％；利福平的载药量为8％～12％；聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球的直径为多孔磷酸钙支架孔径大小的40％～60％。
作为本发明的进一步改进，所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物的平均分子量为70000，由摩尔比为3:1的乳酸和羟基乙酸聚合而成。
作为本发明的进一步改进，多孔磷酸钙支架由磷酸钙、柠檬酸、磷酸二氢钾、二氧化硅、氧化锌和石蜡微球制备而成，按质量百分比计，其配比为55：2.5：22.5：10：6.5：3.5。
一种多孔磷酸钙支架负载微球复合材料的制备方法，包括步骤：
1)将聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球的混悬液和多孔磷酸钙支架混合后，离心使得聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球进入多孔磷酸钙支架的孔隙中，分离多孔磷酸钙支架；
2)将步骤1)获得的多孔磷酸钙支架与5％～15％明胶溶液混合后，离心使得明胶分布在多孔磷酸钙支架的孔隙中，分离多孔磷酸钙支架；
3)将步骤2)所获得的多孔磷酸钙支架冷冻干燥，得到多孔磷酸钙支架负载微球复合材料。
作为本发明的进一步改进，聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球的制备方法为：
1)将水相和溶解有聚乳酸-羟基乙酸共聚物的二氯甲烷相混合，通过超声混合、匀质和乳化后得到混合相；
2)将混合相加入到聚乙烯醇溶液中，在搅拌下挥发除去二氯甲烷，得到微球混悬液；
3)微球混悬液过滤并干燥后得到聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球；
其中，在水相和/或二氯甲烷相中溶解有抗结核药物；水相与二氯甲烷相的体积比为(0.5～2)：1。
作为本发明的进一步改进，如果抗结核药物为异烟肼和利福平，则异烟肼溶解在水相中，利福平溶解在二氯甲烷相中；水相和二氯甲烷相均降温至2～6℃后再混合。
所述的多孔磷酸钙支架负载微球复合材料在制备治疗骨关节结核药物中的应用。
与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：
本发明提供的多孔磷酸钙支架负载微球复合材料，经过实验证实，其既具有充填骨重建和骨诱导成骨作用，又具有局部持续、立体缓慢释放抗结核药物的作用，起到治疗骨关节结核并减少复发的效果。
附图说明
图1-1为多孔β-TCP支架CAD设计图的俯视图。
图1-2为多孔β-TCP支架CAD设计图的立体视图。
图1-3为多孔β-TCP支架CAD设计图的剖视图。
图2-1为圆柱形多孔β-TCP支架的侧面测量照片。
图2-2为圆柱形多孔β-TCP支架的端面测量照片。
图3-1为电镜下的3D打印多孔β-TCP支架形态图，采用20kv扫描，放大倍数为35倍。
图3-2为电镜下的3D打印多孔β-TCP支架形态图，采用20kv扫描，放大倍数为10000倍。
图4为复乳溶剂挥发法制作微球的流程图。
图5-1为倒置显微镜下观察湿PLGA微球的结果图。
图5-2为倒置显微镜下观察干PLGA微球的结果图。
图5-3为PLGA微球的电镜结果图，放大倍数为50倍。
图5-4为PLGA微球的电镜结果图，放大倍数为500倍。
图6-1为PLGA微球粒径大小统计结果图。
图6-2为PLGA微球粒径大小分布结果图。
图7-1为PLGA微球中的INH体外累计释放曲线图。
图7-2为PLGA微球中的RFP体外累计释放曲线图。
图8-1为3D打印多孔β-TCP负载PLGA缓释微球复合材料图，为端面测量图。
图8-2为3D打印多孔β-TCP负载PLGA缓释微球复合材料图，为进一步放大的端面图。
图9-1为3D打印多孔β-TCP负载PLGA缓释微球复合材料的电镜图，放大倍数为40倍。
图9-2为3D打印多孔β-TCP负载PLGA缓释微球复合材料的电镜图，放大倍数为170倍。
图10为空白组的血浆上清的高效液相分析图。
图11为实验组的血浆上清的高效液相分析图。
图12为兔股骨髁骨缺损后1M，3M，5M各组钼靶软X射线照相结果图。
图13为兔股骨髁骨缺损后2W，4W，6W各组ECT检查结果图。
图14为Micro-CT显示复合材料组和支架组材料降解情况图。
图15为复合材料组和支架组材料体积分数变化图。
图16为Micro-CT显示复合材料组和支架组骨缺损内成骨情况图。
图17为复合材料组和支架组骨体积分数变化图。
图18为Micro-CT显示复合材料组和支架组骨缺损内材料降解和成骨情况图。
图19为Micro-CT显示复合材料组和支架组骨缺损修复情况图。
图20-1为术后3M复合材料组骨标本切片经HE染色后NP70生物显微镜下观察结果图，放大倍数为10倍。
图20-2为术后3M复合材料组骨标本切片经HE染色后NP70生物显微镜下观察结果图，放大倍数为20倍。
图20-3为术后3M复合材料组骨标本切片经HE染色后NP70生物显微镜下观察结果图，放大倍数为40倍。
图20-4为术后3M复合材料组骨标本切片经HE染色后NP70生物显微镜下观察结果图，放大倍数为20倍；。
图20-5为术后5M复合材料组骨标本切片经HE染色后NP70生物显微镜下观察结果图，放大倍数为40倍。
具体实施方式
为了克服现有局部用药不能使抗结核药物在残腔维持一个长时间的、有效杀菌浓度的不足，本发明提供一种3D打印多孔β-TCP负载抗结核药物的缓释微球复合材料，其既具有充填骨重建和骨诱导成骨作用，又具有局部持续、立体缓慢释放抗结核药物的新型药物缓释骨修复支架材料。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
1.多孔β-TCP支架的3D打印
通过计算机辅助设计(CAD)构建拟打印的多孔β-TCP模型，利用粒径为2μm的β-磷酸三钙粉末，稀柠檬酸，磷酸二氢钾、二氧化硅、氧化锌、直径2-8μm石蜡微球，制备出打印墨水。选用750μm喷头，行走速度为100mm/min，每层厚度为750μm，层与层之间在X、Y、Z轴上的间隔的均为400μm。由3D-Bioplotter打印机完成β-TCP溶浆的喷涂后，再将β-TCP支架在1100℃下恒温烧结2h，最终获得成品。经3D打印技术制备出的孔径大小为400μm、直径约5mm、高度约5mm的圆柱体支架，结构规则，孔隙均匀。
2.复乳化溶剂挥发法制备PLGA抗结核药物缓释微球
称取异烟肼20mg、利福平15mg、PLGA60mg和PVA600mg，将PVA600mg置入小烧杯中并加入30ml超纯水，热浴至PVA完全溶解，作为粘接剂备用；异烟肼加入2ml超纯水中，涡旋振荡器振荡3分钟混匀，作为水相备用；在利福平和PLGA中加入2ml二氯甲烷，作为油相备用。将以上植入4℃冰箱冷藏1h后，水相加入油相，经超声破碎仪混合、匀质、乳化、加速反应等，再将混合相迅速加入PVA溶液中，通过磁力搅拌(转速2000rpm)，加速二氯甲烷的挥发，促进成球。期间，0.5h后可取少量溶液在倒置显微镜下观察微球大致形状及大小均匀程度。4h后，停止搅拌，经过滤、干燥后得微球。复乳化溶剂挥发法制备PLGA抗结核药物缓释微球大小均匀，电镜下见微球直径200±30μm，球体规则。
3.PLGA抗结核药物缓释微球载入多孔β-TCP支架
震荡搅拌PLGA抗结核药物缓释微球双蒸水溶液，混匀微球后加至平底离心管中，每支离心管内底部置入1块3D打印多孔β-TCP。启动离心机，转速设置为4000rpm，处理时间15min，经离心处理，PLGA抗结核药物缓释微球能够进入多孔β-TCP支架的所有孔隙内，直至饱和。离心处理后，弃去液体和多余微球，再向管内加入10％明胶溶液，再次低速离心15min，明胶溶液在离心过程中会进入微球间及微球与孔壁之间的空隙内，从而能够将微球粘结于多孔β-TCP的孔隙内。冷冻干燥处理24h后终得3D打印多孔β-TCP负载PLGA抗结核药物缓释微球复合材料。
下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。
实施例1
多孔β-TCP支架的3D打印及其孔隙率的测定
1.1多孔β-TCP支架的3D打印
通过计算机辅助设计(CAD)构建拟打印的多孔β-TCP模型如图1-1～图1-3所示，利用粒径为2μm的β-磷酸三钙粉末，稀柠檬酸，磷酸二氢钾、二氧化硅、氧化锌、直径2-8μm石蜡微球(按质量百分比计，配比为55：2.5：22.5：10：6.5：3.5)，制备出打印墨水。选用750μm喷头，行走速度为100mm/min，每层厚度为750μm，层与层之间在X、Y、Z轴上的间隔的均为400μm。由3D-Bioplotter打印机完成β-TCP溶浆的喷涂后，再将β-TCP支架在1100℃下恒温烧结2h，最终获得成品如图2-1和图2-2所示。经3D打印技术制备出的孔径大小为400μm、直径约5mm、高度约5mm的圆柱体支架，结构规则，孔隙均匀，电镜形态如图3-1和图3-2所示。、
1.2多孔β-TCP支架的其孔隙率测定
取3D打印多孔β-TCP支架样品8个，利用重量体积法测量3D打印多孔β-TCP支架的孔隙率，支架总孔隙率Pt通过公式(1)计算而得出。
公式(1)：Pt＝(dβ-TCP-dmeasured)/dβ-TCP
式中Pt代表支架总孔隙率；dβ-TCP代表β-TCP的理论密度(3.07g/cm3)；dβ-TCP-dmeasured代表多孔β-TCP支架的表观密度，由公式(2)计算。
公式(2)：dβ-TCP-dmeasured＝Wβ-TCP支架/Vβ-TCP支架
式中Wβ-TCP代表多孔β-TCP支架的质量；Vβ-TCP代表多孔β-TCP支架的表观体积。经重量体积法测量3D打印多孔β-TCP支架的孔隙率为(67.39±2.81)％。
表1 3D打印多孔β-TCP支架的孔隙率测量结果(n＝8)
本实施例仅提供了一种多孔β-TCP支架的可行制备方式，实际上，本领域技术人员知晓可以通过改变制备过程和制备原理来调整多孔β-TCP支架的形状、孔隙、溶解速度、孔隙率、强度等参数，以便根据不用的应用部位获得相应的较优的材料。在应用中，多孔TCP支架的孔隙率可以在60～70％范围内进行调整，孔径大小可以在300～500μm范围内进行调整，支架的最大耐受强度应当高于2.0MPa，以便使得多孔磷酸钙支架负载微球复合材料的最大耐受强度高于2.0MPa，符合人类松质骨压缩强度2-45MPa的要求。在需要时，不必严格要求磷酸钙必须为β-TCP，可以采用其他晶型。本实施例制备的多孔β-TCP支架为圆柱形，在应用中，可以根据需要，通过3D打印制备出符合要求的形状。
实施例2
异烟肼、利福平缓释微球的制备方法及其体外释放
2.1异烟肼、利福平缓释微球的制备方法
称取异烟肼20mg、利福平15mg、PLGA60mg和PVA(聚乙烯醇)600mg，将PVA600mg置入小烧杯中并加入30ml超纯水，热浴至PVA完全溶解，作为粘接剂备用；复乳溶剂挥发法制作微球的流程如图4所示，异烟肼加入2ml超纯水中，涡旋振荡器振荡3分钟混匀，作为水相备用；在利福平和PLGA中加入2ml二氯甲烷，作为油相备用。将以上植入4℃冰箱冷藏1h后，水相加入油相，经超声破碎仪混合、匀质、乳化、加速反应等，再将混合相迅速加入PVA溶液中，通过磁力搅拌(转速2000rpm)，加速二氯甲烷的挥发，促进成球。期间，0.5h后可取少量溶液在倒置显微镜下观察微球大致形状及大小均匀程度如图5-1所示。4h后，停止搅拌，经过滤、干燥后得微球如图5-2所示。复乳化溶剂挥发法制备PLGA抗结核药物缓释微球大小均匀，电镜下见微球直径200±30μm，球体规则如图5-3和图5-4所示。
用Winner3003A激光粒径分析仪采用干法(紊流分散，全程米氏散射原理)测定微球粒径大小及分布，结果分别如图6-1和图6-2所示：纳米粒平均粒径234um，分布较集中。用高效液相色谱法(HPLC)最终测得INH载药量(％)为7.8±0.13，包封率(％)为13.71±0.89；RFP载药量(％)为9.87±0.23，包封率(％)为31.7±0.71。
2.2缓释微球的体外释放
精密称取载药微球15mg，装入一端扎好的透析袋中，再注入5ml PBS液，将另一端扎紧，置入装有100ml PBS液的锥形瓶中，在37℃下，以20r/min的水浴摇床中进行体外释药试验。于0.5h、1h、2h、4h、8h、12h、24h、36h、48h取样，第三天及第三天以后每天同一时间段取样，每次取上清液10ml溶液，同时补充10ml的PBS液。所取溶液与内标物溶液配制成体积比9:1的混合液后经膜过滤，用高效液相仪测定药物浓度，后计算出释放量，直至第24天。以上实验均平行实施3组。计算0.5h的平均药物释放量并根据不同时间的平均药物累积释放率绘制药物释放曲线。INH和RFP的累计释放曲线见如图7-1和图7-2所示，体外药物缓释实验显示，以该质量配比制备的抗结核药物缓释微球突释期(0.5h)内INR的释放度为10.31％、RFP的释放度为7.13％，24天INH的累计释放度为91.84％、RFP的累计释放度为78.35％。
本实施例制备了一种具有两种抗结核药物的PLGA微球，实际上，根据需要，可以制备含有三种或更多种药物的PLGA微球，也可以根据治疗策略调整抗结核药物的种类。本发明制备的PLGA微球采用常规方法制备，水相和油相的比例为1:1，但是本领域技术人员知晓可以对该比例进行相应的调整，以便适应不同原料和技术指标的要求。作为一种优选地方案，水相与二氯甲烷相的体积比为(0.5～2)：1。作为一种优选地方案，水相和二氯甲烷相均降温至2～6℃后再混合。本发明制备的PLGA微球中的异烟肼的载药量为6％～10％，利福平的载药量为8％～12％。事实上，很容易调整水相或油相(二氯甲烷相)中药物的浓度或体积比等，改变PLGA微球的载药量，以便适用不同治疗策略对药物量的需求；作为一种较优地选择，异烟肼的载药量可以在6％～10％范围内调整；利福平的载药量可以在8％～12％范围内调整。同时，也可以调整PLGA的用量，以便调整PLGA微球的缓释速率，适应不同的治疗目的。PLGA微球的直径不宜太大，起码不宜超过多孔磷酸钙支架的孔径，以便微球能够顺利进入多孔磷酸钙支架的孔隙中。微球的直径太小，容易使得微球从多孔磷酸钙支架中脱离出来。一般地，将微球的直径限定在多孔磷酸钙支架孔径的40％～60％可以达成最佳效果。PLGA可以选用常用的材料，作为最优的选择，PLGA为PLGA75/25，平均分子量为70000。
实施例3
PLGA抗结核药物缓释微球载入多孔β-TCP支架
震荡搅拌PLGA抗结核药物缓释微球双蒸水溶液，混匀微球后加至平底离心管中，每支离心管内底部置入1块3D打印多孔β-TCP。启动离心机，转速设置为4000rpm，处理时间15min，经离心处理，PLGA抗结核药物缓释微球能够进入多孔β-TCP支架的所有孔隙内，直至饱和。离心处理后，弃去液体和多余微球，再向管内加入10％明胶溶液，再次低速离心15min，明胶溶液在离心过程中会进入微球间及微球与孔壁之间的空隙内，从而能够将微球粘结于多孔β-TCP的孔隙内。冷冻干燥处理24h后终得3D打印多孔β-TCP负载PLGA抗结核药物缓释微球复合材料如图8-1和图8-2所示，电镜下如图9-1和图9-2所示。
本实施例提供了一种制备多孔磷酸钙支架负载微球复合材料的具体例子，其核心思路是将微球悬浮在水相中，通过离心的方式使得微球进入多孔磷酸钙支架，然后通过医学可接受的药用胶黏材料(如明胶)将微球胶黏在支架上，冻干。基于该方法，本领域技术人员知晓，可以根据治疗部位对药物用量的不同，来合理安排PLGA微球与多孔磷酸钙支架的质量比，并在制备过程中合理调节诸如时间、离心加速度。常规的，离心速率为3000～5000rpm，离心时间为10～20min。最为一种优选的方案，明胶溶液的浓度为5％～15％。
实施例4
3D打印多孔β-TCP负载PLGA抗结核药物缓释微球复合材料的生物力学检测
取宏孔为多孔β-TCP负载PLGA抗结核药物缓释微球复合材料8个，利用万能材料力学试验机对材料进行压缩力学检测。将多孔β-TCP负载PLGA抗结核药物缓释微球复合材料在万能材料力学试验机的活动平台中央垂直放置，以0.1mm/min的加载速度进行压缩分析。实验过程中对样品破损前的最大负荷(即材料样品所能够承受的最大外力)和最大强度(即最大负荷/接触面积)进行记录。
通过万能材料力学试验机测试，3D打印多孔β-TCP负载PLGA抗结核药物缓释微球复合材料的最大负荷和最大强度分别为117.2±14.9N和6.0±0.8MPa。材料符合人类松质骨压缩强度2-45MPa的要求。
实施例5
3D打印多孔β-TCP负载PLGA抗结核药物缓释微球复合材料的生物相容性评价
通过体外实验CCK-8检测法，利用复合材料的浸提液与成骨细胞共培养来评价材料的生物相容性，不仅可以检测复合材料的细胞毒性，而且能够在一定程度上说明复合材料对骨缺损修复过程中起关键作用的成骨细胞有无抑制作用。结果显示复合材料对成骨细胞的生长和增殖无明显负影响，由此可见，3D打印的多孔β-TCP支架并没有因为负载了抗结核药物缓释微球而阻碍其固有的骨修复能力。
体内实验：1)3D打印多孔β-TCP负载PLGA抗结核药物缓释微球复合材料的致敏实验对注射点局部皮肤的并无致敏作用；2)3D打印多孔β-TCP负载PLGA抗结核药物缓释微球复合材料的体内毒性实验显示动物生理功能未受影响，重要器官并无器质性改变，说明该材料不会对机体造成毒性损害；3)关于3D打印多孔β-TCP负载PLGA抗结核药物缓释微球复合材料体内组织相容性评价：a)利用发射型计算机断层扫描仪(ECT)检测复合材料的血管化情况，实验组复合材料最终完成了血管化，骨缺损内血运情况恢复到健侧状态，与空白组始终缺乏血运的状态形成鲜明的对比，说明3D打印多孔β-TCP负载PLGA抗结核药物缓释微球复合材料与血管组织能够保持较好的相容性，不会影响为骨组织生长提供重要物质基础的血管组织的生长；b)通过对实验动物骨标本的Micro-CT检测立体而形象地显示复合材料的骨长入情况，随着时间的增加复合材料逐渐降解至几乎完全消失，伴随复合材料的逐渐降解骨组织逐渐长入并替代已降解的材料，说明3D打印多孔β-TCP负载PLGA抗结核药物缓释微球复合材料能够与骨组织能够保持良好的相容性，间接提示该复合材料对和骨修复相关的成骨细胞、软骨细胞、骨细胞的生长和功能并无明显抑制作用。c)在组织学方面，骨组织切片在骨标本的各层切面上显示复合材料的骨长入情况同样反映出3D打印多孔β-TCP负载PLGA抗结核药物缓释微球复合材料与骨组织和与骨组织生长有关的细胞存在着卓越的组织相容性。
总而言之，3D打印多孔β-TCP负载PLGA抗结核药物缓释微球复合材料具备优良的生物相容性，评价合格，作为植入型医用生物材料达到安全性要求标准。
实施例6 3D打印多孔β-TCP负载PLGA抗结核药物缓释微球复合材料体内释放
6.1试验方法
新西兰大白兔15只，雌7只，雄8只，体重2.2-2.5kg，由***总医院动物中心提供，其中实验组12只，雌雄各半，体重2.2-2.5kg，平均分入第1周、第4W、第8W、第12W组，剩余3只作为空白对照组。
6.2实验步骤
用3％戊巴比妥钠耳缘静脉麻醉后，在双侧股骨下段外侧分别切一纵行切口，切开皮肤，分离皮下组织，显露股骨外髁。用电钻在髁部钻一深约10mm、直径约6mm的骨性缺损，冲洗伤口。植入灭菌后的3D打印多孔β-TCP负载PLGA缓释微球复合支架材料(两侧)；对照组不植入任何材料，做空白对照。缝合关节囊，皮肤。术后笼中饲养，术后1d抗生素治疗，分别于1周、4W、8W、12W测定试验动物血浆中两种药物的浓度含量。
6.3体内缓释情况
取1W、4W、8W、12W的实验组和对照组兔静脉血，肝素抗凝离心后，避光冷藏保存。各取血浆样品和空白血浆1ml分别置于10ml采血管中,加入200l甲醇提取溶，涡旋4min,离心5min(3000r/min)，取上清液9μl与1μl内标物溶液混匀，混匀液用高效液相分析，见图10(空白组)和图11(实验组)所示，①是空白血浆②INH③杂质峰④RFP⑤内标物，不同时间段血药浓度情况如表2所示。
表2不同时间段血药浓度情况
当β-TCP/PLGA微球载药支架植入动物体内，其表现出良好的释放速率。在12周的释药过程中，药物在血液中的浓度也相对恒定。早期，由于β-TCP粒子覆盖在微球表面，阻止了表层药物的快速释放，延长了突释的时间。在体液浸入支架孔隙后，载药微球逐渐溶胀。微球表面药物扩散较，曲线呈快速上升期；随着药物代谢，酸性代谢产物增加，β-TCP开始分解，体内的酶也进入支架。加速了微球的分解，使INH、RPF释放浓度达到高峰；随着载药微球逐渐减少，药物浓度出现下降趋势，最后为零。在整个释药过程中，支架内的微球没有表现出突释，在4-12W内，INH、RFP浓度分别在最低抑菌浓度(MIC)之上维持。
实施例7 3D打印多孔β-TCP负载PLGA抗结核药物缓释微球复合材料骨缺损修复能力的研究
7.1试验方法
新西兰大白兔96只，雌雄不限，体重2.0-2.5kg。将96只新西兰大白兔先按3个检测时间点(术后1，3，5月或术后2，4，6周)随机分成3组，每组32只，再将每一时间组按A组(阳性对照组或髂骨组)、B组(对照组或支架组)、C组(实验组或复合材料组)、D组(阴性对照组或空白对照组)随机分为4组，每组8只。A组(阳性对照组)、B组(对照组)、C组(实验组)分别植入自体髂骨、3D打印多孔β-TCP支架、3D打印多孔β-TCP负载PLGA抗结核药物缓释微球复合材料，D组(空白对照组)不植入任何材料。
7.2实验步骤
选择新西兰大白兔左下肢股骨髁外侧作为骨缺损造模位置，以10％***作为麻醉剂，按照3mL/kg腹腔注射，麻醉成功后，固定动物于实验台，剪毛备皮，碘伏消毒，铺手术巾，于股骨髁外侧软组织薄弱处作约3cm切口，切开皮肤皮下，适当剥离显露股骨髁外侧，采用钻头5mm低速钻从外侧髁中心钻入，制造出直径和高度均略大于5mm的圆柱形骨缺损。最后，用生理盐反复水冲洗、清除骨缺损内的骨屑，以防因骨缺损内残留较多骨屑而自行骨修复的可能，确保造模成功。将造模后的兔子按照阳性对照组、对照组和实验组分别植入自体髂骨、3D打印多孔β-TCP支架和3D打印多孔β-TCP负载PLGA抗结核药物缓释微球复合材料，空白对照组不植入任何材料。植入材料后，以上4组依次为髂骨组、支架组、复合材料组和空白组。生理盐水纱布蘸净切口，确定无活动性出血，逐层缝合，关闭切口。术后保证充分的饮食供给，及时清理***物，保持环境清洁，预防感染。术后当天开始给予青霉素80×104U/d肌注，连续3天。一周内每日观察精神状态、饮食情况、切口渗出情况及有无裂开，有无死亡，并按时碘伏消毒。按照预定时间(术后1，3，5月)完善活体动物相关检测后，耳缘静脉注射空气处死，取出标本拍照，***固定后再行标本的相关检测。
7.3兔股骨髁骨缺损后1M，3M，5M各组骨修复情况的钼靶软X射线照相
在25kV，115ms，86mAs的拍摄条件，1M取左膝关节正位将兔子左侧股骨髁进行钼靶X软线机曝光，观察材料的置入后的早期情况，3M和5M取左膝关节斜位将兔子左侧股骨髁进行钼靶X软线机曝光，大致观察材料的降解和骨修复情况。照相结果如图12所示，术后1M复合材料组和支架组：骨缺损轮廓无明显变化，植入材料密度介于周围皮质骨和松质骨之间，接近皮质骨密度，材料和邻近骨组织分界清晰，网状孔结构清晰可见；髂骨组：骨缺损轮廓无明显变化，植入髂骨密度接近周围松质骨，所植入髂骨与邻近骨组织分界清晰；空白组：骨缺损明显，未见明显骨组织长入。术后3M复合材料组：复合材料结构模糊，已经发生明显降解,材料密度接近皮质骨，材料与邻近骨组织界限模糊，明显骨组织长入复合材料内部；支架组：支架结构模糊，材料降解更为明显，材料密度接近皮质骨，材料与邻近骨组织界限更为模糊，骨组织长入复合材料内部更为明显；髂骨组：所植入髂骨密度接近皮质骨密度，与邻近骨组织分界不明显；空白组：骨缺损明显，仅见少量骨组织长入。术后5M复合材料组：复合材料结构模糊，材料进一步降解，密度接近于皮质骨，材料与邻近骨组织界限模糊，结合紧密；支架组：支架结构模糊，支架进一步降解，密度略高皮质骨，材料与邻近骨组织界限模糊，结合紧密；髂骨组：所植入髂骨密度与皮质骨密度一致，与邻近骨组织无明显分界；空白组：骨缺损依然存在，仅有少量骨组织长入。
7.4术后2W，4W，6W各组ECT检查
术后2，4，6周对实验兔进行ECT检查。ECT检查是一种利用放射性核素的检查方法，将99m锝标记的亚甲基双磷酸盐(99mTc-MDP)按5MBq/kg的剂量行兔耳缘静脉注射，4h后，固定兔子于固定板，行全身骨扫描，获取ECT图像，结果如图13所示。基于局部血液供应量与局部核素吸收量呈正比从而表现为局部显像的强弱者一基本原理。通过将术侧股骨髁与健侧股骨髁所呈现出的骨扫描图像进行对比可分析得出以下结果：1)2W，4W，6W所有动物术侧股骨髁较健侧股骨髁的显像未见明显核素吸收增多，从而排除术侧股骨髁感染、骨折(早期)等；2)2W，髂骨组术侧股骨髁与健侧股骨髁显像一致，而支架组、复合材料组和空白组术侧显像略弱健侧。3)4W，6W，髂骨组两侧显像依旧一致，支架组、复合材料组术侧股骨髁与健侧股骨髁显像一致，说明术后2W至4W两组材料完成了血管化并最终保持较佳的血运；而空白组术侧股骨髁显像始终较健侧稍差，说明其血供一直不佳，间接提示骨缺损始终存在，终未得到修复。
7.5术后1M，3M，5M复合材料组和支架组骨标本Micro-CT检查
将兔体内于术后1M、3M和5M取出骨标本，固定于***中，于股骨髁上0.5cm截取股骨髁标本，在非感兴趣区刻上标记，方便后期图像处理过程中标本的辨认。将标本置入样品杯中，确保兴趣区域与保持杯轴一致，以减少伪影；标本空间独立且固定不会产生微动，以便后期分割和重建。主机开机预热，探测器温度达到要求后，放入样品。使用过滤轫致辐射，将X射线源的电压设定为80千伏，200mA的束电流设定为200mA。扫描角旋转为180°，角增量为0.40°。在射线源使用1毫米厚的铝制X射线滤光器衰减软X射线，以此减少束硬化作用。每个断层的获得来自大约1600个1024像素的投影，这些投影在通过改进后的平行Feldkamp算法获得重建，转变成二值图像(8位的BMP图像)，因为骨缺损为直径约5mm、高度约5mm的圆柱体，所以将骨缺损作为感兴趣区(RegionofInterest，ROI)，ROI的体积即TV(TissueVolume)设定为与该圆柱型骨缺损体积(98.1250mm3)相当大小的值即101.1168mm3。用ScanControl软件进行标本扫描；通过ReconstructionUtility软件重建标本；采用MicroView软件观察标本三维表现，从而直观的了解材料的降解情况和骨缺损内新骨的生长情况，利用AdvancedBoneAnalysis软件进行测试与分析。以3000作为材料体素的阈值，1300作为骨组织体素的阈值，进行感兴趣区内材料和骨组织体素的获取和图像的呈现，并将所收集的图片保存，同时测定骨体积分数(BVF)即BV/TV(BoneVolume与感兴趣区总体积即TissueVolume的比值)和材料体积分数(MVF)，导出并保存数据。通过所得图像和数据对骨缺损内骨修复和材料降解情况进行定性和定量分析评价。结果如图14，15，16,17,18,19所示，其中，图14为Micro-CT显示复合材料组和支架组材料降解情况图，图15为复合材料组和支架组材料体积分数变化图，图16为Micro-CT显示复合材料组和支架组骨缺损内成骨情况图，图17为复合材料组和支架组骨体积分数变化图，图18为Micro-CT显示复合材料组和支架组骨缺损内材料降解和成骨情况图，图19为Micro-CT显示复合材料组和支架组骨缺损修复情况图。说明与钼靶X线相片一致，术后1M、3M和5M，无论是骨标本Micro-CT的定性分析(图像)还是定量分析(MVF和BVF)均显示复合材料组和支架组材料逐步降解同时新骨组织不断长入替代已降解的材料。材料的降解和新骨的形成在时间和空间上联系如此紧密，说明材料降解过程中产生的某种(或某些)物质如钙离子与骨形成过程存在密切联系。
7.6组织学观察结果
骨标本切片HE染色生物显微镜下观察如图20-1～图20-5显示：图20-1为术后3M复合材料组骨标本切片镜下观察结果图，放大倍数为10倍；图20-2为术后3M复合材料组骨标本切片镜下观察结果图，放大倍数为20倍；图20-3为术后3M复合材料组骨标本切片镜下观察结果图，放大倍数为40倍；图20-4为术后3M复合材料组骨标本切片镜下观察结果图，放大倍数为20倍；图20-5为术后5M复合材料组骨标本切片镜下观察结果图，放大倍数为40倍。结果显示，术后3M,新生骨从骨缺损周围的旧骨中长出，并长入至材料内部而将材料分割成大小不同的区域(图20-1)，各个区域中又有新骨的骨细胞从周围的新生骨组织中“发出”并长入材料中(图20-1)、(图20-2)；同时，各个区域中材料发生着“由颗粒到粉末”的降解(图20-3)，并逐渐被周围新生骨取代(图20-4)；最终(术后5M)材料降解殆尽，被新生骨替代(图20-5)。组织学观察结果显示多孔β-TCP支架的骨修复过程：新生骨在支架的引导作用下由骨缺损周围的骨组织长入支架内部，再在先前新骨的基础上产生新的骨组织并逐步取代不断降解的材料。可见在骨修复过程中材料的骨引导作用和生物降解性能至关重要。

Claims (10)

1.一种多孔磷酸钙支架负载微球复合材料，其特征在于，包括多孔磷酸钙支架，多孔磷酸钙支架的孔隙中负载有聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球；聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球包覆一种或多种抗结核药物。
2.如权利要求1所述的多孔磷酸钙支架负载微球复合材料，其特征在于，多孔磷酸钙支架的孔隙率为60～70％，孔径大小为300～500μm，最大强度大于2.0MPa。
3.如权利要求1所述的多孔磷酸钙支架负载微球复合材料，其特征在于，所述抗结核药物为异烟肼和利福平。
4.如权利要求3所述的多孔磷酸钙支架负载微球复合材料，其特征在于，聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球中，异烟肼的载药量为6％～10％；利福平的载药量为8％～12％；聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球的直径为多孔磷酸钙支架孔径大小的40％～60％。
5.如权利要求1所述的多孔磷酸钙支架负载微球复合材料，其特征在于，所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物的平均分子量为70000，由摩尔比为3:1的乳酸和羟基乙酸聚合而成。
6.如权利要求1所述的多孔磷酸钙支架负载微球复合材料，其特征在于，多孔磷酸钙支架由磷酸钙、柠檬酸、磷酸二氢钾、二氧化硅、氧化锌和石蜡微球制备而成，按质量百分比计，其配比为55：2.5：22.5：10：6.5：3.5。
7.权利要求1～6任一项所述的多孔磷酸钙支架负载微球复合材料的制备方法，其特征在于，包括步骤：
1)将聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球的混悬液和多孔磷酸钙支架混合后，离心使得聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球进入多孔磷酸钙支架的孔隙中，分离多孔磷酸钙支架；
2)将步骤1)获得的多孔磷酸钙支架与5％～15％明胶溶液混合后，离心使得明胶分布在多孔磷酸钙支架的孔隙中，分离多孔磷酸钙支架；
3)将步骤2)所获得的多孔磷酸钙支架冷冻干燥，得到多孔磷酸钙支架负载微球复合材料。
8.如权利要求7所述的多孔磷酸钙支架负载微球复合材料的制备方法，其特征在于，聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球的制备方法为：
1)将水相和溶解有聚乳酸-羟基乙酸共聚物的二氯甲烷相混合，通过超声混合、匀质和乳化后得到混合相；
2)将混合相加入到聚乙烯醇溶液中，在搅拌下挥发除去二氯甲烷，得到微球混悬液；
3)微球混悬液过滤并干燥后得到聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球；
其中，在水相和/或二氯甲烷相中溶解有抗结核药物；水相与二氯甲烷相的体积比为(0.5～2)：1。
9.如权利要求8所述的多孔磷酸钙支架负载微球复合材料的制备方法，其特征在于，如果抗结核药物为异烟肼和利福平，则异烟肼溶解在水相中，利福平溶解在二氯甲烷相中；水相和二氯甲烷相均降温至2～6℃后再混合。
10.权利要求1～6任一项所述的多孔磷酸钙支架负载微球复合材料在制备治疗骨关节结核药物中的应用。
CN201910002515.8A 2019-01-02 2019-01-02 多孔磷酸钙支架负载微球复合材料及其制备方法和应用 Pending CN109432020A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910002515.8A CN109432020A (zh) 2019-01-02 2019-01-02 多孔磷酸钙支架负载微球复合材料及其制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910002515.8A CN109432020A (zh) 2019-01-02 2019-01-02 多孔磷酸钙支架负载微球复合材料及其制备方法和应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN109432020A true CN109432020A (zh) 2019-03-08

Family

ID=65540049

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910002515.8A Pending CN109432020A (zh) 2019-01-02 2019-01-02 多孔磷酸钙支架负载微球复合材料及其制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109432020A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113694067A (zh) * 2021-09-30 2021-11-26 齐齐哈尔医学院 一种共载异烟肼和利福平的微球缓释制剂及其制备方法
WO2024109829A1 (zh) * 2022-11-23 2024-05-30 中国科学院深圳先进技术研究院 抑制交感神经的医疗器械及其制备方法

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113694067A (zh) * 2021-09-30 2021-11-26 齐齐哈尔医学院 一种共载异烟肼和利福平的微球缓释制剂及其制备方法
CN113694067B (zh) * 2021-09-30 2023-12-01 齐齐哈尔医学院 一种共载异烟肼和利福平的微球缓释制剂及其制备方法
WO2024109829A1 (zh) * 2022-11-23 2024-05-30 中国科学院深圳先进技术研究院 抑制交感神经的医疗器械及其制备方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Wu et al. Experimental study of PLLA/INH slow release implant fabricated by three dimensional printing technique and drug release characteristics in vitro
Adhikari et al. Embedding magnesium metallic particles in polycaprolactone nanofiber mesh improves applicability for biomedical applications
Youssef et al. Additive manufacturing of polymer melts for implantable medical devices and scaffolds
CN101163512B (zh) 包含多层结构的软骨样和骨软骨的替代物
US9138483B2 (en) Collagen/hydroxyapatite composite scaffold, and process for the production thereof
BR112019013403A2 (pt) Método e matriz produzida por eletrofiação
Ruiz-Cantu et al. Characterisation of the surface structure of 3D printed scaffolds for cell infiltration and surgical suturing
JP6116484B2 (ja) 脊椎固定術用の組成物および方法
CN109432020A (zh) 多孔磷酸钙支架负载微球复合材料及其制备方法和应用
CN110279896A (zh) 一种具有药物缓释功能的多孔pcl-tcp人工骨支架及其制备方法
Tabernero et al. Supercritical carbon dioxide and biomedicine: Opening the doors towards biocompatibility
Tayton et al. The scale‐up of a tissue engineered porous hydroxyapatite polymer composite scaffold for use in bone repair: An ovine femoral condyle defect study
Keller et al. Nanoengineered implant as a new platform for regenerative nanomedicine using 3D well-organized human cell spheroids
Wang et al. Application of a New Type of Natural Calcined Bone Repair Material Combined with Concentrated Growth Factors in Bone Regeneration in Rabbit Critical‐Sized Calvarial Defect
Jokanović et al. In Vivo Investigation of ALBO‐OS Scaffold Based on Hydroxyapatite and PLGA
EP4178634B1 (en) Integrated core-shell bioactive structure for the regeneration of bone and osteochondral tissues
Xu et al. In Vitro and In Vivo Analysis of the Effects of 3D‐Printed Porous Titanium Alloy Scaffold Structure on Osteogenic Activity
Guo et al. Effect of Pore Size of Porous‐Structured Titanium Implants on Tendon Ingrowth
Loai et al. Three‐Dimensional Bioprinted MR‐Trackable Regenerative Scaffold for Postimplantation Monitoring on T1‐Weighted MRI
Liu et al. The effect of enhanced bone marrow in conjunction with 3D-printed PLA-HA in the repair of critical-sized bone defects in a rabbit model
Qiu et al. High-strength mineralized collagen artificial bone
Xie et al. A bioactive implant combining isoniazid with nanohydroxyapatite/polyamide 66 for the treatment of osteoarticular tuberculosis
CN104984413A (zh) 一种含钙化层仿生组织工程骨软骨一体化支架的制备方法
Senthamaraikannan et al. Overview of Polylactic acid and its derivatives in medicinal applications
Gadomska‐Gajadhur et al. Original method of imprinting pores in scaffolds for tissue engineering

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20190308