CN109401982A - 一株高效防治蚧壳虫的爪哇棒束孢 - Google Patents

一株高效防治蚧壳虫的爪哇棒束孢 Download PDF

Info

Publication number
CN109401982A
CN109401982A CN201811348365.8A CN201811348365A CN109401982A CN 109401982 A CN109401982 A CN 109401982A CN 201811348365 A CN201811348365 A CN 201811348365A CN 109401982 A CN109401982 A CN 109401982A
Authority
CN
China
Prior art keywords
ijid003
insect
bacterial strain
isaria
java
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201811348365.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109401982B (zh
Inventor
邓嘉茹
黄华枝
毕可可
孙龙华
张劲蔼
唐立鸿
吴超
候亚会
霍立志
阮琳
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangzhou Institute Of Forestry And Landscape Architecture
Original Assignee
Guangzhou Institute Of Forestry And Landscape Architecture
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangzhou Institute Of Forestry And Landscape Architecture filed Critical Guangzhou Institute Of Forestry And Landscape Architecture
Priority to CN201811348365.8A priority Critical patent/CN109401982B/zh
Publication of CN109401982A publication Critical patent/CN109401982A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109401982B publication Critical patent/CN109401982B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/145Fungal isolates
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12RINDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645Fungi ; Processes using fungi
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01NPRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/30Microbial fungi; Substances produced thereby or obtained therefrom

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

本发明公开了一株高效防治蚧壳虫的爪哇棒束孢。本发明首次研究发现爪哇棒束孢对埃及吹绵蚧和扶桑绵粉蚧等蚧壳虫类昆虫具有很好的致病防治效果,并筛选了一株高致病力的爪哇棒束孢菌株IJID003,可作为一种对蚧壳虫具有高致病力的活体生物农药,在蚧壳虫类昆虫的生物防治方面具有很好的广阔应用前景。而且爪哇棒束孢是一种昆虫病原真菌,其分生孢子悬浮液可直接作用于虫体,较目前的化学防治药剂相比,具有高效、绿色、对环境友好、环保、持效性强和不易产生抗药性的优点,对环境无污染、无残留,在被开发为生防制剂用于蚧壳虫类昆虫的生物防治上,具有良好的市场应用前景。

Description

一株高效防治蚧壳虫的爪哇棒束孢
技术领域
本发明属于害虫生物防治技术领域。更具体地,涉及一株高效防治蚧壳虫类同翅目昆虫的爪哇棒束孢。
背景技术
同翅目是常见的林业害虫之一,如埃及吹绵蚧(Icerya aegyptiaca(Douglas))、扶桑绵粉蚧(Phenacoccus solenopsis Tinsley)等蚧壳虫类害虫。埃及吹绵蚧(Iceryaaegyptiaca(Douglas))是一种危害林业和园林植物的重要害虫,在我国主要分布于广东、福建、浙江和台湾等地,主要危害白兰、荷花玉兰、大叶木莲等林业和园林植物。早在20世纪80年代,该虫就被列入广州地区危险性林业和园林害虫之一。埃及吹绵蚧主要以雌成虫和若虫危害植物的叶芽、嫩枝及枝条,成群聚集在叶背面或嫩枝上吸取植物汁液,少则数头,多则上百头,同时,***的蜜露诱发的煤污病,影响植物的光合作用,严重影响受害树木生长长势。近年来,埃及吹绵蚧的种群数量逐年增长,给林业和园林产业带来了严重损失。
针对埃及吹绵蚧等蚧壳虫的防治,目前还是以化学防治为主,常用的化学药剂有24%灭多威可溶性液剂2500倍液、480g/L毒死蜱乳油1000倍液等。但该虫从一龄若虫到成虫虫体表面都密被蜡质,同时化学药剂的过度使用导致害虫产生的抗药性,两者使得化学防治的效果并不理想。大量使用广谱性的农药不仅污染环境,而且大量杀死天敌,使天敌的种群和数量急剧下降,降低其自然控制效果。面对这样的被动局面,研究与应用非化学防治埃及吹绵蚧是亟待解决的问题。因此,生物防治是解决埃及吹绵蚧危害的关键之一。
生物防治最常见的是利用自然天敌来控制害虫的种群数量,埃及吹绵蚧主要自然天敌有小红瓢虫、澳洲瓢虫、草蛉等。除了天敌昆虫,昆虫病原真菌的应用也是具广阔前景的生物防治方法,具有对害虫高效、对环境友好、不易产生抗药性等优点病原真菌的选择,成为国内外生物防治研究的热点。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有埃及吹绵蚧和扶桑绵粉蚧等蚧壳虫防治技术的缺陷和不足,提供一种重要的埃及吹绵蚧昆虫病原真菌,即爪哇棒束孢(Isariajavanica),其对埃及吹绵蚧具有高致病力,可作为一种对埃及吹绵蚧和扶桑绵粉蚧等同翅目昆虫具有高致病力的活体生物农药,具有高效、对环境友好、不易产生抗药性等优点,在防治埃及吹绵蚧方面具有很好的应用前景。
本发明的目的是提供一株对同翅目昆虫具有高致病力的爪哇棒束孢菌株IJID003。
本发明另一目的是提供爪哇棒束孢菌株IJID003在防治同翅目昆虫方面的应用。
本发明上述目的通过以下技术方案实现:
本发明通过致病力研究试验表明,爪哇棒束孢对埃及吹绵蚧和扶桑绵粉蚧等同翅目昆虫具有较强的致病率。同时还筛选得到一株具有高致病力、产孢量高的爪哇棒束孢(Isaria javanica)菌株IJID003,该菌株于2018年10月15日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号CCTCC NO:M2018680。
爪哇棒束孢菌株IJID003是从广东省广州市越秀公园的白兰上被侵染的埃及吹绵蚧虫体(自然感病)上分离获得的,与分离自其它基物的爪哇棒束孢(Isaria javanica)菌株IJID003相比,本发明所述的爪哇棒束孢(Isaria javanica)菌株IJID003具有更高的致病力,且产孢量高。
爪哇棒束孢菌株IJID003分类地位属于丝孢纲(Hyphomycetes)、丝孢目(Hyphomycetales)、丝孢科(Hyphomyceteaceae)、棒束孢属(Isaria)。形态特征为:在PDA平板上,菌落圆形,直径在49mm~55mm之间,有同心轮纹,且在培养基上形成沟壑,质地为厚绒毛状。菌落背面淡黄色。孢子层颜色淡紫灰。显微镜下菌丝透明,无色。分子孢子梗上着生2-4个瓶梗形成的轮生体,瓶梗基部椭圆形膨大,向上逐渐变细。分生孢子在瓶梗上生长,并形成孢子链。分生孢子透明光滑,长椭圆形。分生孢子大小4.5μm(3.1μm~6.5μm)×1.8(1.5~2μm)。
因此,基于上述研究结果,以下应用均应在本发明的保护范围之内:
爪哇棒束孢在防治同翅目昆虫方面的应用。
爪哇棒束孢在制备同翅目昆虫生防制剂方面的应用。
爪哇棒束孢菌株IJID003在防治同翅目昆虫方面的应用。
爪哇棒束孢菌株IJID003在制备同翅目昆虫生防制剂方面的应用。
另外,一种含有爪哇棒束孢菌的同翅目昆虫生防制剂,以及该生防制剂在防治同翅目昆虫方面的应用,也都在本发明的保护范围之内。
其中优选地,所述同翅目昆虫为粉蚧科或珠蚧科昆虫。
更优选地,所述同翅目昆虫为绵粉蚧属或吹绵蚧属昆虫。
更优选地,所述同翅目昆虫为蚧壳虫类昆虫。
更优选地,所述蚧壳虫为吹绵蚧或绵粉蚧。
更优选地,所述蚧壳虫为埃及吹绵蚧或扶桑绵粉蚧。
优选地,爪哇棒束孢的孢子浓度范围106~108孢子/mL。
优选地,所述爪哇棒束孢为爪哇棒束孢菌株IJID003。
本发明具有以下有益效果:
本发明首次研究发现爪哇棒束孢(Isaria javanica)对埃及吹绵蚧和扶桑绵粉蚧等同翅目害虫具有很好的致病防治效果,可作为一种对同翅目害虫具有高致病力的活体生物农药,在埃及吹绵蚧的生物防治方面具有很好的广阔应用前景。
爪哇棒束孢是一种昆虫病原真菌,其分生孢子悬浮液可直接作用于虫体,较目前的化学防治药剂相比,具有高效、绿色、对环境友好、环保、持效性强和不易产生抗药性的优点,对环境无污染、无残留。
同时,本发明还筛选到了一株对埃及吹绵蚧和扶桑绵粉蚧等同翅目害虫具有高致病力的爪哇棒束孢(Isaria javanica)菌株IJID003,生长速度快,产孢量大,易于制备,菌株IJID003在被开发为生防制剂用于埃及吹绵蚧和扶桑绵粉蚧等同翅目害虫的生物防治上,具有良好的市场应用前景。
附图说明
图1是菌株IJID003在PDA培养基上生长10天的形态图(菌落正面观)。
图2是菌株IJID003的产孢结构图;分生孢子(A)和产孢子结构图(B)。
图3是菌株IJID003***发育树。
图4是菌株IJID003在埃及吹绵蚧上的侵染状。
图5是菌株IJID003在扶桑绵粉蚧上的侵染状。
图6是菌株IJID003对扶桑绵粉蚧雌成虫致病力测定结果。
具体实施方式
以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明,但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明,本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
除非特别说明,本发明所用试剂和材料均为市购。
实施例1爪哇棒束孢菌株IJID003的分离
从广东省广州市越秀公园的白兰上采集自然感病的埃及吹绵蚧分离获得高致病力真菌,方法如下:
(1)真菌的分离
从感病的埃及吹绵蚧上挑取菌丝,接种到PDA培养基上培养,27±1℃条件下培7天。在形成菌落中心挑取菌丝,在PDA培养基上纯化培养,纯化培养重复3次,置于4℃冰箱待用。
(2)真菌回接实验
将分离的真菌在PDA平板上培养7~15天,待形成菌落后加入0.02%吐温-80的无菌水洗下孢子,在磁力搅拌器上搅拌15分钟,用血球计数板调整孢子浓度为1×107个/mL制得孢子悬浮液,用小型手动喷雾器将均匀喷于带有埃及吹绵蚧的白兰叶片上,取出晾干后置于湿度90%培养皿中,然后放于光照培养箱27±1℃光照培养箱中(L:D=14:10,RH>90%)培养,同时设立含0.02%吐温-80无菌水处理组,作为对照。待虫体表面长出明显菌丝后,挑取菌丝转至新的PDA平板上培养,得到对埃及吹绵蚧高致病力的昆虫病原真菌。
(3)昆虫病原真菌的纯化
对分离株在PDA培养基上培养10d,待其形成孢子后,用无菌水洗脱分生孢子制备成1×103个/mL的孢子悬浮液,将悬液滴于放有盖玻片的载玻片上,在生物显微镜下观察,将一个液滴中只有一个分生孢子的载玻片***培养基上,放在培养箱中培养,获得IJID001、IJID002、IJID003、IJID004、IJID005、IJID006、IJID007、IJID008共8个分离株。
实施例2爪哇棒束孢菌株IJID003的筛选
昆虫病原真菌在遗传、生态及生物学等方面具有多样性,其中真菌的不同菌株对靶标害虫的致病力会表现出显著的差异性。高产优质菌株的筛选与获得是取得较好防治效果的首要前提。优良菌株筛选主要考虑3个指标,分别是产孢量、菌落生长速率、致病力。本发明以这3个指标作为主要依据,筛选优良的高致病菌株。
(1)材料准备
经纯化的IJID001、IJID002、IJID003、IJID004、IJID005、IJID006、IJID007、IJID008共8个分离株,在PDA平板上于27±1℃的恒温培养箱中培养。
(2)供试昆虫与寄主植物
埃及吹绵蚧,来自广州市林业和园林科学研究院植物保护研究所温室白兰上的继代繁殖种群。在芳村购买大量白兰幼苗(1.5m高),种植于广州市林业和园林科学研究院植物保护研究所温室内。
(3)菌落生长速率和产孢量的测定
将转接到PDA平板培养基上培养10d的爪哇棒束孢菌株8个分离株分别用无菌水洗脱孢子,配制成1×107个/mL浓度的分生孢子悬浮液,分别取10μL滴入直径为9cm的PDA平板上的中央,待10d长出菌丝后,隔日定时定向测量菌落直径,每个菌株3次重复。在第5次测量菌落直径后,用灭菌的打孔器在菌落中心至边缘1/2处打孔,用0.02%的吐温-80打散,放在磁力搅拌器上搅拌15min,用纱布过滤,用血球计数板计数,所得数据通过SPSS 22.0软件进行统计分析,计算平均值和标准误,均值的差异显著性通过LSD法进行多重比较。回归方程用SPSS线性回归分析得出,回归方程斜率即为菌落生长速率。
结果显示,8个分离株的菌落生长速率和产孢量见表1,8株的生长速率基本相同,20d后菌落直径扩展在49mm~55mm之间。其中以IJID003菌株的产孢量最多,为0.85×107个/mL,其次是IJID006菌株为0.6×107个/mL,菌株IJID001、IJID004、IJID005、IJID007和IJID008基本上相同,分别是0.125×107个/mL、0.175×107个/mL、0.15×107个/mL、0.125×107个/mL、0.075×107个/mL。
表1爪哇棒束孢菌株8个分离株菌落生长速率和产孢量(20d)
注:表内同数列中具有相同字母,表示在0.05水平上差异不显著。
(4)分离株对埃及吹绵蚧若虫的致病力
将8个分离株转接于PDA平板上培养10d后,待形成菌落后加入0.02%吐温-80的无菌水洗下孢子,在磁力搅拌器上搅拌15分钟,用血球计数板调整孢子浓度为1×107个/mL制得孢子悬浮液,用小型手动喷雾器将均匀喷于带有40头埃及吹绵蚧的白兰叶片上,取出自然晾干,对照为0.02%的吐温-80无菌水中,每个菌株设置3次重复。将处理过的白兰叶片***花泥中,置于带有滤纸的方形培养皿内,然后放于光照培养箱27±1℃光照培养箱中(L:D=14:10,RH>90%)培养,每天记录埃及吹绵蚧侵染死亡数(虫体表面有明显菌丝覆盖),所有死亡率都已进行校正后的死亡率(校正死亡率=(处理死亡率-对照死亡率)/(1-对照死亡率)×100%)。
结合表2结果表明,8株菌株第4d对埃及吹绵蚧的致病力差异明显,其中IJID002、IJID003、IJID006致病力最强,埃及吹绵蚧低龄若虫的死亡率分别是96.6%、95.4%、97.75%,其次是IJID001、IJID004、IJID005、IJID007、IJID008,埃及吹绵蚧低龄若虫的死亡率分别是79.2%、81.8%、87.3%、87.5%、88%。
表2爪哇棒束孢菌株8个分离株对埃及吹绵蚧2龄若虫的致病力
分离株 第4d死亡率M±SE(%)
IJID001 79.2±0.8c
IJID002 96.6±0.4a
IJID003 95.4±0.8a
IJID004 81.8±1.1c
IJID005 87.3±2.7bc
IJID006 97.75±0.55a
IJID007 87.5±2.5bc
IJID008 88±2b
CK 10.25±2.75d
注:表内同数列中具有相同字母,表示在0.05水平上差异不显著。
(5)爪哇棒束孢菌株优良菌株的筛选结果
在筛选优良菌株时,以菌株的产孢量、致病力、菌落生长速率为重要的参考指标。在本发明中,通过这三个指标作为评判标准,比较分析粉得出,就产孢量和致病力而言,分离株IJID003和IJID006较为优良,具有高致病力、高产孢量的特点(表1、表2),而菌落生长速率8个菌株差异不显著。综合比较各方面的因素,IJID003为最佳菌株。
实施例3菌株IJID003的鉴定
(1)菌株IJID003的形态特征
将菌株IJID003接种到PDA培养基平板中央,置于27±1℃恒温培养,每天观察菌落的生长情况并记录菌落颜色和形态。将菌株IJID003接种到另一PDA培养基平板中央,同时将灭菌后的盖玻片(1cm×1cm)斜***距接种点约1cm左右处的培养基内,置于27±1℃恒温培养5d左右待菌丝伸至盖玻片上,取出盖玻片置于光学显微镜下观察菌丝和孢子形态。
菌株IJID003的形态特征(图1和图2):在PDA平板上,菌落圆形,直径在49mm~55mm之间,有同心轮纹,且在培养基上形成沟壑,质地为厚绒毛状。菌落背面淡黄色。孢子层颜色淡紫灰。显微镜下菌丝透明,无色。分子孢子梗上着生2-4个瓶梗形成的轮生体,瓶梗基部椭圆形膨大,向上逐渐变细。分生孢子在瓶梗上生长,并形成孢子链。分生孢子透明光滑,长椭圆形。分生孢子大小4.5μm(3.1μm~6.5μm)×1.8(1.5~2μm)。
(2)菌株IJID003的序列分析
将菌株IJID003接种到PDA培养基平板中央,置于27±1℃恒温培养,待菌落长满整个培养皿后,以无菌药匙、刮取PDA平板上生长的菌丝于无菌研钵中,加入液氮研磨至粉末状,采用SDS法提取菌株IJID003的基因组DNA,以纯化的DNA为模板,采用真菌通用引物ITS4、ITS5,进行PCR扩增,PCR产物回收纯化、连接转化并进行DNA测序。与GenBank中所有已测定的真核生物的ITS1-5.8S-ITS2比较同源性,构建菌株IJID003***发育树(如图3),结果表明菌株IJID003与爪哇棒束孢(Isaria javanica)都聚为一类,并且其形态特征符合爪哇棒束孢(Isaria javanica)的特征,所以可以鉴定菌株IJID003为爪哇棒束孢。
综上所述,菌株IJID003鉴定为爪哇棒束孢(Isaria javanica),并于2018年10月15日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号CCTCC NO:M2018680。
实施例4爪哇棒束孢IJID003对埃及吹绵蚧低龄若虫和高龄若虫的致病力测定
通过测定昆虫病原真菌对靶标害虫致病力,为综合评价该昆虫病原真菌生物防治潜力提供重要的参考依据。本研究将爪哇棒束孢IJID003菌株对埃及吹绵蚧2龄若虫、3龄若虫和雌成虫进行致病力测定,以期筛选出该菌株对埃及吹绵蚧三种虫态致死的最佳龄期和浓度。
(1)供试昆虫与寄主植物
埃及吹绵蚧,广州市林业和园林科学研究院植物保护所温室扩繁稳定的室内埃及吹绵蚧虫源。白兰种植于广州市林业和园林科学研究院植物保护所温室内,盆栽苗高100~120cm,用于扩繁靶标昆虫。
(2)供试菌株的处理
将爪哇棒束孢IJID003菌株转接于PDA平板上培养10d后,待形成菌落后加入0.02%吐温-80的无菌水洗下孢子,在磁力搅拌器上搅拌15分钟,待孢子完全搅拌均匀后,用两层医用纱布过滤,用血球计数板调整孢子浓度为1×108个/mL制得孢子悬浮液,再稀释成1×107、1×106、1×105、1×104个/mL等4个供试浓度10mL,待用。
(3)IJID003菌株对埃及吹绵蚧2龄若虫、3龄若虫和雌成虫的致病力测定
用小型手动喷雾器将上述5个浓度的孢子悬浮液分别均匀喷于带有40头2龄若虫、3龄若虫和雌成虫的白兰叶片上,取出自然晾干,对照为0.02%的吐温-80无菌水中,每个菌株设置3次重复。将处理过的白兰叶片***花泥中,置于带有滤纸的方形培养皿内,然后放于光照培养箱27±1℃光照培养箱中(L:D=14:10,RH>90%)培养,每天记录埃及吹绵蚧侵染死亡数(虫体表面有明显菌丝覆盖)(图4),连续观察5天。
结合表3结果表明,经不同浓度爪哇棒束孢IJID003菌株处理后,2龄若虫、3龄若虫和雌成虫第5天的累计校正死亡率。接种后第2天,各处理各龄龄若虫均开始发病死亡,表明爪哇棒束孢IJID003菌株对埃及吹绵蚧有较强的致死作用。在所测的浓度范围1×104个/mL~1×108个/mL内,随浓度的提高其致病力明显增强。在最高浓度1×108个/mL,2龄若虫、3龄若虫和雌成虫第5d的累计校正死亡率分别为100%、98.5%、100%。在浓度1×107个/mL,2龄若虫、3龄若虫和雌成虫累计校正死亡率分别为96.25%、82%、50%。在浓度1×106个/mL,2龄若虫、3龄若虫和雌成虫累计校正死亡率分别为83.75%、61.5%、8%。在浓度1×105个/mL,2龄若虫、3龄若虫和雌成虫累计校正死亡率分别为48.75%、13.5%、4%。在浓度1×104个/mL,2龄若虫、3龄若虫和雌成虫累计校正死亡率分别为46.25%、5.5%、3%。在孢子浓度为1×108个/mL时,IJID003菌株对2龄若虫、3龄若虫和雌成虫都具有较强的致病力,在第5d时,2龄若虫、3龄若虫和雌成虫的累计校正死亡率都接近100%。而当孢子浓度为1×107个/mL时,埃及吹绵蚧2龄若虫、3龄若虫和雌成虫的累计校正死亡率开始出现差异。
结合表3可知,在孢子浓度在1×108孢子/mL时,2龄、3龄若虫和雌成虫的LT50分别为1.89、2.29、2.31。,在孢子浓度在1×107孢子/mL时,2龄、3龄若虫和雌成虫的LT50分别为2.24、2.77、4.69。综合实验结果表明,IJID003菌株对不同龄期埃及吹绵蚧致病力比较:2龄若虫>3龄若虫>雌成虫,因此,IJID003菌株对2龄的侵染效果好,2龄~3龄若虫是防治的最佳时期。
表3不同浓度的IJID003菌株对2龄若虫、3龄若虫和雌成虫第5d的累计校正死亡率
注:表内同数列中具有相同字母,表示在0.05水平上差异不显著。
表4 IJID003菌株处理不同龄期埃及吹绵蚧的LT50和回归方程
实施例5爪哇棒束孢IJID003对埃及吹绵蚧雌成虫室外侵染实验
1、温室准备长势健康、高度120cm并已自然繁殖埃及吹绵蚧的白兰盆栽2盆,选取个头均匀的埃及吹绵蚧雌成虫,保证每两片叶片有15头雌成虫,共5个处理组(1×104孢子/mL、1×105孢子/mL、1×106孢子/mL、1×107孢子/mL、1×108孢子/mL)和1个对照组(0.02%吐温-80无菌水),叶片用带有75%酒精的医用纱布消毒,用小型喷雾器将2mL不同浓度的孢子悬浮液喷至叶背面,确保埃及吹绵蚧雌成虫与孢子悬浮液充分接触,然后用保鲜袋套住已处理的白兰叶片,湿度保持RH(80±10)%,各个处理设3次重复。在昆虫病原真菌侵染第2天开始观察侵染症状,计数并拍照。统计埃及吹绵蚧各龄期的校正死亡率,利用SPSS22.0,采用单因素方差分析,LSD法对数据进行多重分析,当p值<0.05时,分析结果被认为具有统计学意义。同时应用SPSS22.0软件的probit分析,统计出LT50值,分析IJID003菌株对室外盆栽上的埃及吹绵蚧雌成虫的致病力。
2、由表5可知,用1×106孢子/mL、1×107孢子/mL、1×108孢子/mL孢子浓度处理雌成虫时,雌成虫LT50的依次为2.98、4.98、6.18。而当孢子浓度为1×104孢子/mL和1×105孢子/mL时,IJID003菌株对雌成虫无侵染效果。
表5 IJID003菌株室外处理埃及吹绵蚧雌成虫的LT50和回归方程
结果表明,IJID003菌株在一定的孢子浓度范围(106~108孢子/mL),对埃及吹绵蚧雌成虫具有较强的致病力,其致病率与孢子悬浮液浓度具有剂量效应关系;随着孢子浓度的增加,埃及吹绵蚧雌成虫的累计校正死亡率也增加,致病速率加快,从而缩短LT50
实施例6爪哇棒束孢IJID003对对扶桑绵粉蚧雌成虫致病力测定
用小型手动喷雾器将2mL的1×107孢子/mL的菌株IJID003孢子悬浮液均匀喷于带有30头扶桑绵粉蚧雌成虫的扶桑叶片上,取出自然晾干,对照为0.02%的吐温-80无菌水中,每个菌株设置3次重复。将处理过的扶桑叶片***花泥中,置于带有滤纸的方形培养皿内,然后放于光照培养箱27±1℃光照培养箱中(L:D=14:10,RH>90%)培养,每天记录扶桑绵粉蚧侵染死亡数(虫体表面有明显菌丝覆盖)(图5),连续观察6天。
结合图6结果表明,经1×107孢子/mL爪哇棒束孢IJID003菌株处理后,随着接种天数的增加,扶桑绵粉蚧的累计校正死亡率也增加。在接种第2天时,扶桑绵粉蚧的累计校正死亡率为10.4%。在接种第3天时,扶桑绵粉蚧的累计校正死亡率为19.7%。在接种第4天时,扶桑绵粉蚧的累计校正死亡率为33.9%。在接种第5天时,扶桑绵粉蚧的累计校正死亡率为46.3%。在接种第6天时,扶桑绵粉蚧的累计校正死亡率为59.3%。因此,爪哇棒束孢IJID003菌株对扶桑绵粉蚧也有较高的致病力。
上述实施例为本发明较佳的实施方式,但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制,其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化,均应为等效的置换方式,都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种对同翅目昆虫具有高致病力的爪哇棒束孢(Isaria javanica)菌株IJID003,其特征在于,于2018年10月15日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号CCTCC NO:M2018680。
2.权利要求1所述爪哇棒束孢菌株IJID003在防治同翅目昆虫方面的应用。
3.权利要求1所述爪哇棒束孢菌株IJID003在制备同翅目昆虫生防制剂方面的应用。
4.根据权利要求2或3所述应用,其特征在于,所述同翅目昆虫为粉蚧科或珠蚧科昆虫。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,所述同翅目昆虫为绵粉蚧属或吹绵蚧属昆虫。
6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述同翅目昆虫为蚧壳虫类昆虫。
7.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,所述蚧壳虫为吹绵蚧或绵粉蚧。
8.一种同翅目昆虫的生防制剂,其特征在于,含有权利要求1所述爪哇棒束孢菌株IJID003。
9.根据权利要求8所述生防制剂,其特征在于,爪哇棒束孢菌株IJID003的孢子浓度范围106~108孢子/mL。
10.权利要求8或9所述生防制剂在防治同翅目昆虫方面的应用。
CN201811348365.8A 2018-11-13 2018-11-13 一株高效防治蚧壳虫的爪哇棒束孢 Active CN109401982B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811348365.8A CN109401982B (zh) 2018-11-13 2018-11-13 一株高效防治蚧壳虫的爪哇棒束孢

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811348365.8A CN109401982B (zh) 2018-11-13 2018-11-13 一株高效防治蚧壳虫的爪哇棒束孢

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109401982A true CN109401982A (zh) 2019-03-01
CN109401982B CN109401982B (zh) 2021-08-24

Family

ID=65473069

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811348365.8A Active CN109401982B (zh) 2018-11-13 2018-11-13 一株高效防治蚧壳虫的爪哇棒束孢

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109401982B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110804555A (zh) * 2019-11-15 2020-02-18 华南农业大学 一种抗紫外线和耐高温的高毒力爪哇棒束孢菌诱变株ijuv-6及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106497831A (zh) * 2016-10-21 2017-03-15 广州市林业和园林科学研究院 一种防治烟草疫霉病复合菌剂及其制备方法和应用
KR101785098B1 (ko) * 2015-11-07 2017-10-12 대한민국 이사리아 자바니카 Pf185 균주 또는 이를 이용한 진딧물 및 잘록병균의 동시방제용 조성물
CN109275667A (zh) * 2018-11-13 2019-01-29 广州市林业和园林科学研究院 爪哇棒束孢防治蚧壳虫的应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101785098B1 (ko) * 2015-11-07 2017-10-12 대한민국 이사리아 자바니카 Pf185 균주 또는 이를 이용한 진딧물 및 잘록병균의 동시방제용 조성물
CN106497831A (zh) * 2016-10-21 2017-03-15 广州市林业和园林科学研究院 一种防治烟草疫霉病复合菌剂及其制备方法和应用
CN109275667A (zh) * 2018-11-13 2019-01-29 广州市林业和园林科学研究院 爪哇棒束孢防治蚧壳虫的应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
邓嘉茹 等: "埃及吹绵蚧昆虫病原真菌的筛选、鉴定及其致病性测定", 《植物保护学报》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110804555A (zh) * 2019-11-15 2020-02-18 华南农业大学 一种抗紫外线和耐高温的高毒力爪哇棒束孢菌诱变株ijuv-6及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN109401982B (zh) 2021-08-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105176828B (zh) 球孢白僵菌XNBb-04菌株及其培养方法
CN101955886B (zh) 一种球孢白僵菌Bb-N1菌株及其制备方法和应用
CN107988087B (zh) 一株有促生作用的蓝莓内生真菌及其应用
CN109207412A (zh) 一种抗青枯病生防菌株及其应用
CN107460133A (zh) 深色有隔内生真菌hs40及其在铁皮石斛生产上的应用
CN102021122A (zh) 一种高效杀虫真菌及其用途
CN109355208A (zh) 一种高致病力生防菌爪哇虫草及其应用
CN106010987B (zh) 一种对突背蔗犀金龟具有致病力的白僵菌菌株及其应用
CN106065392B (zh) 一种柑橘木虱高致病力玫烟色棒束孢菌株及其应用
CN113862160B (zh) 一株具有生防及诱导抗病作用的拟康宁木霉Tk905菌株及其应用
CN110042064A (zh) 一种香菇菌株及其应用和源于该菌株的杀虫剂及其制备方法
CN101451108B (zh) 一种防治蝇类害虫的蜡蚧轮枝菌及其应用
CN103756913B (zh) 一种玫烟色棒束孢菌株
CN109401982A (zh) 一株高效防治蚧壳虫的爪哇棒束孢
CN109275667A (zh) 爪哇棒束孢防治蚧壳虫的应用
CN101597574A (zh) 一株高产孢环链拟青霉菌株及其筛选与应用方法
CN107058154A (zh) 一种东方红菌菌株、生防菌剂、生防发酵液及其制备方法和应用
CN108203695B (zh) 一株杜鹃花类菌根真菌功能菌株及其应用
CN108102992B (zh) 一株金橙黄微小杆菌及其在防治番茄根结线虫中的应用
CN109750080A (zh) 一种快速筛选花生抗果腐病种质资源的方法
Juma et al. Enumeration and identification of rhizospheric microorganisms of sugarcane variety CO 421 in kibos, Kisumu County, Kenya
CN104920066B (zh) 提高冬虫夏草寄主感染率的方法
CN110468056A (zh) 一种防治西瓜枯萎病的木霉菌及其应用
CN110235662A (zh) 一种桨角蚜小蜂协同爪哇虫草防治烟粉虱的方法
CN104304328A (zh) 一种核盘菌的重寄生真菌菌剂制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant