CN109400686A - 一种云芝β-葡聚糖肽的提取方法及其在肥胖或相关疾病中的应用 - Google Patents

一种云芝β-葡聚糖肽的提取方法及其在肥胖或相关疾病中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种云芝β‑葡聚糖肽的提取方法及其在肥胖或相关疾病中的应用。包括：将云芝子实体或者孢子粉清洗干燥；用水100℃提取3次，第一次加水是云芝的15倍，第二次加水10倍；合并两次提取液，浓缩加入乙醇进行醇沉；醇沉24小时，过滤收集沉淀；沉淀离心和冷冻干燥得云芝多糖粗品，将其于DEAE‑Sepharose‑fast‑flow柱，依次用水、氯化钠水溶液、氯化钠水溶液进行洗脱；使用硫酸‑苯酚法跟踪洗脱曲线，分别收集利用氯化钠水溶液和氯化钠水溶液进行洗脱的有效部位；将有效部位根据洗脱曲线收集洗脱的有效部位浓缩透析浓缩冻干后得到系列β‑葡聚糖肽。该多糖肽具有减轻或控制肥胖以及肥胖相关疾病的功效。

Description

一种云芝β-葡聚糖肽的提取方法及其在肥胖或相关疾病中的 应用
技术领域
本发明涉及植物提取技术领域，尤其涉及一种云芝β-葡聚糖肽的提取方法及其在肥胖或相关疾病中的应用。
背景技术
云芝是多孔菌科植物云芝的子实体或菌丝体，云芝是一种大型珍贵药用真菌，用于抗癌治疗。云芝性寒，味微甘，有清热、消炎功效。云芝多糖是云芝提取物中的主要活性成份：分子量在1.3×10 6以上，它是含有β—糖苷键的葡聚糖，并测出是β(1→4)，β(1→3)和β(1→6)糖苷键，云芝提取物的主要活性成分是云芝多糖。云芝多糖的药理作用：有去湿化痰效果，可治疗肺病和慢性支气管炎、迁延性或慢性肝炎。云芝的主要活性成分是云芝多糖。云芝多糖从云芝菌丝体和发酵液中提取的多糖均具有极强烈的抑制癌细胞活性。
云芝多糖肽的抗肿瘤作用、免疫增强作用和保护肝脏的作用已普遍用于临床。然如云芝多糖肽极性大，口服很难被吸收进入血液；因此，该多糖如何发挥上述功能的分子机制还不清楚。肠道和肝脏是密切相关的，在这两者之间有连续的双向沟通器官通过胆汁、激素、影响力等因子的消化吸收。因此，肠道菌群的数量、质量和组成对肥胖，糖尿病和脂肪肝疾病具有直接和间接的影响。
发明内容
有鉴于此，本发明实施例提供了一种云芝β-葡聚糖肽的提取方法及其在肥胖或相关疾病中的应用。
为达到上述目的，本发明主要提供了如下技术方案：
一方面，本发明实施例提供了一种云芝β-葡聚糖肽的提取方法，所述方法包括以下步骤：
a)将云芝子实体或者孢子粉进行清洗，干燥；
b)用水于100℃提取3次，第一次加水体积是云芝质量的15倍，第二次加水体积是云芝的10倍；合并两次提取液，浓缩，加入乙醇进行醇沉，控制醇沉体系中的乙醇浓度为80vol％；醇沉24小时后，过滤，收集沉淀；对沉淀进行离心和冷冻干燥，得云芝多糖粗品；
c)将步骤b)获得的云芝多糖粗品上样于DEAE-Sepharose-fast-flow柱，依次用水、0.2mol/L的氯化钠水溶液、0.5mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；使用硫酸-苯酚法跟踪洗脱曲线，分别收集利用0.2mol/L的氯化钠水溶液和0.5mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱的有效部位；
d)将步骤c)得到的有效部位根据洗脱曲线收集洗脱的有效部位，浓缩，10KDa透析袋透析24小时，浓缩，冻干后得到所述系列β-葡聚糖肽，标注为PBG1-5。
作为优选，所述药物的活性物质包括上述云芝β-葡聚糖肽。
另一方面，本发明实施例提供了上述β-葡聚糖肽在制备可减轻或控制肥胖药物中的应用。
再一方面，本发明实施例提供了上述β-葡聚糖肽在制备用于治疗肥胖相关疾病的药物中的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明通过上述提取方法从云芝子实体中分离纯化获得了均为1,4/1,6/1,3连接的β葡聚糖肽类，并首次采用肥胖小鼠模型进行活性测定，确定该多糖肽具有减轻或控制肥胖以及肥胖相关的疾病；本发明的上述发扩展了云芝子的药用价值。
附图说明
图1是本发明实施例1提供的小鼠总瘦肉含量图；
图2是本发明实施例1提供的小鼠总脂肪含量图；
图3是本发明实施例1提供的高性能核磁共振驰豫分析仪分析小鼠脂肪分布图。
具体实施方式
为更进一步阐述本发明为达成预定发明目的所采取的技术手段及功效,以下以较佳实施例，对依据本发明申请的具体实施方式、技术方案、特征及其功效，详细说明如后。下述说明中的多个实施例中的特定特征、结构、或特点可由任何合适形式组合。
实施例1(提取的β葡聚糖肽PBG活性验证)
云芝多糖的治疗脂肪肝的活性研究模型动物的建立：雌性C57BL/6小鼠进行高脂肪饲料造模，高性能核磁共振驰豫分析仪鉴定模型；
实验小鼠分组：小鼠48只，随机分组12只，空白对照组，高脂饲料组，高脂饲料+高剂量组(400mg/kg)，高脂饲料+低剂量组(200mg/kg)。对照组小鼠每天予以标准普通小鼠饲料喂养，造模组小鼠每天予以高脂饲料喂养，连续8w，自由饮水。
动物模型学观察：高性能核磁共振驰豫分析仪，高性能核磁共振驰豫分析仪测定小鼠净瘦肉含量，净脂肪含量，以及脂肪分布图。见图1,2,3。通过采用上述肥胖小鼠模型的活性测定，确定采用本发明方法提取的多糖肽具有减轻或控制肥胖以及肥胖相关的疾病。
通过本发明方法提取的β-葡聚糖肽为β-1,4-和1,3为主链,1,6链通过O-6键连接在主链上的一种葡聚糖肽。
通过本发明方法制备的均一云芝β-葡聚糖肽可用于制备减轻或控制肥胖的药物，该药物的活性物质包括本发明提取的β-葡聚糖肽。
通过本发明方法制备的均一云芝β-葡聚糖肽还可用于制备治疗肥胖相关疾病的药物，该药物的活性物质包括本发明提取的β-葡聚糖肽。
本发明实施例中未尽之处，本领域技术人员均可从现有技术中选用。
以上公开的仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以上述权利要求的保护范围为准。

Claims (5)

1.一种云芝β-葡聚糖肽的提取方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
a)将云芝子实体或者孢子粉进行清洗，干燥；
b)用水于100℃提取3次，第一次加水体积是云芝质量的15倍，第二次加水体积是云芝的10倍；合并两次提取液，浓缩，加入乙醇进行醇沉，控制醇沉体系中的乙醇浓度为80vol％；醇沉24小时后，过滤，收集沉淀；对沉淀进行离心和冷冻干燥，得云芝多糖粗品；
c)将步骤b)获得的云芝多糖粗品上样于DEAE-Sepharose-fast-flow柱，依次用水、0.2mol/L的氯化钠水溶液、0.5mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱；使用硫酸-苯酚法跟踪洗脱曲线，分别收集利用0.2mol/L的氯化钠水溶液和0.5mol/L的氯化钠水溶液进行洗脱的有效部位；
d)将步骤c)得到的有效部位根据洗脱曲线收集洗脱的有效部位，浓缩，10KDa透析袋透析24小时，浓缩，冻干后得到所述系列β-葡聚糖肽，标注为PBG1-5。
2.如权利要求1所述的一种云芝β-葡聚糖肽的提取方法，其特征在于，所述β-葡聚糖肽的平均分子量为1×104至10×104道尔顿之间。
3.一种用于减轻或控制肥胖或与肥胖相关疾病的药物，其特征在于，所述药物的活性物质包括权利要求1或2所述的β-葡聚糖肽。
4.一种如权利要求1或2所述的β-葡聚糖肽在制备可减轻或控制肥胖药物中的应用。
5.一种如权利要求1或2所述的β-葡聚糖肽在制备用于治疗肥胖相关疾病的药物中的应用。
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