CN109394826B - 一种蜜炙红芪饮片的制备方法 - Google Patents
一种蜜炙红芪饮片的制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种蜜炙红芪饮片的制备方法,是将新鲜红芪药材,抢水冲去泥土后直接切3~6mm厚片,加入25%的炼蜜,拌匀,放入蒸锅中蒸制30min,取出后在电热鼓风烘箱中90℃干燥,晾凉即得。本发明的有益效果为:本发明提供的制备方法得到的蜜炙红芪饮片,与传统饮片相比,总多糖、总黄酮、芒柄花素等指标性成分的含量均较高。从对比结果可以得知,蜜炙红芪饮片产地加工与炮制一体化结合的加工工艺简单可行,加工参数全程可控,总体成分组和指标性成分含量相比传统饮片均有显著提升,有利于制备出高品质的蜜炙红芪饮片,更容易实现自动化和全产业链加工。
Description
技术领域
本发明涉及中药材饮片技术领域,具体涉及一种蜜炙红芪饮片的制备方法。
背景技术
红芪,也称“独根”,为豆科植物多序岩黄芪Hedysarum poilybotrys Hand.-Mazz.的干燥根,因其皮色红润,故称“红芪”,是甘肃省重要的道地药材之一。红芪作为传统中药,临床需炮制后入药,目前常见的红芪炮制品有生品及蜜炙品两种规格,蜜炙红芪主要用于补中益气,可治疗气虚乏力,食少便溏等症。
蜜炙红芪饮片的传统炮制方法为:先将红芪干药材洗净、润透、切厚片、干燥,制得红芪生饮片。然后将炼蜜加适量沸水稀释后,加入红芪生饮片中拌匀,闷透,至炒制容器内,用文火炒至不沾手,晾凉,即得。该方法存在以下问题:第一,蜜炙红芪饮片传统炮制过程从干药材或生切饮片开始,需要“二次润药”,会导致有效成分流失。第二,蜜拌后需要炒制,需要说明的是炒制过程的火候难以掌握,且不同的加工场所和不同的加工者都有可能因火候、炒制时间不一致导致蜜炙红芪饮片的品质不一致。第三,蜜炙红芪饮片存在大量民间散在加工,饮片无法溯源,质量无法保证。
优质的蜜炙红芪饮片首先应满足片形整洁,厚度均一,指标性成分含量高的特点。红芪的化学成分主要有黄酮类、多糖类等。其中红芪总黄酮具有抑制大鼠肺间质纤维化和抗氧化等作用。红芪多糖具有心肌细胞保护作用、抗补体活性、抗氧化作用等。芒柄花素作为红芪中重要的黄酮类成分,具有***样作用、降低脑缺血再灌注损伤中的血脑屏障通透性和抑制神经炎症的作用等。除了指标成分外,特征指纹图谱中各色谱峰的峰面积大小以及指纹图谱的整体特征也可反映红芪药材及饮片的品质。
发明内容
本发明的目的就是针对上述现有技术中的缺陷,即为了改善红芪饮片传统加工炮制过程繁琐且“二次润药”导致红芪饮片有效成分流失的现状,提供了一种蜜炙红芪饮片的制备方法。
为了实现上述目的,本发明提供的技术方案为:一种蜜炙红芪饮片的制备方法,包括以下步骤:
1)制备炼蜜:
取生蜂蜜置锅内,加入蜂蜜量1/3的沸水,中火加热至沸后,改小火加热至116~118℃,出现浅黄色有光泽的均匀小气泡,用手捻有黏性,手指分开无白丝出现时迅速出锅,即得到炼蜜;
2)红芪药材处理:
取新鲜红芪药材,抢水冲去泥土后直接切3~6mm厚片;
3)炼蜜闷润:
将步骤2)得到红芪切片中加入红芪切片重量百分比25%-45%的步骤1)得到的炼蜜,拌匀后闷润;
4)蒸制:
将步骤3)得到的闷润后红芪片置于蒸锅中蒸制30min-50min;
5)干燥:
将步骤4)得到的蒸制后红芪片置于电热鼓风烘箱中70℃-90℃干燥3h,晾凉后即得到蜜炙红芪饮片。
进一步的,上述的一种蜜炙红芪饮片的制备方法,所述步骤3)中,炼蜜加入量为红芪切片重量百分比的25%。
进一步的,上述的一种蜜炙红芪饮片的制备方法,所述步骤4)中,蒸制时间为30min。
进一步的,上述的一种蜜炙红芪饮片的制备方法,所述步骤5)中,干燥温度为90℃。
本发明的有益效果为:本发明提供的一种蜜炙红芪饮片的制备方法,制备得到蜜炙红芪饮片与与传统饮片相比,总多糖、总黄酮、芒柄花素等指标性成分的含量均较高。采用分时段双波长融合指纹图谱法选出的25个共有峰中,20个峰的峰面积与称样量的比值相对于传统饮片的变化率均为正值,且变化率均值达到了2.29。从对比可以得知,蜜炙红芪饮片产地加工与炮制一体化结合的加工工艺简单可行,加工参数全程可控,总体成分组和指标性成分含量相比传统饮片均有显著提升,有利于制备出高品质的蜜炙红芪饮片,更容易实现自动化和全产业链加工。
附图说明
图1显示为样品共有峰图。
图2显示为各样品指纹图谱。
具体实施方式
实施例1:
1仪器与材料
1.1实验药材
红芪药材采自甘肃省宕昌县临江堡安家沟村,经过兰州大学药学院周印锁教授鉴定为多序岩黄芪Hedysarum polybotrys Hand.-Mazz.的干燥根。
1.2实验仪器
Waters e2695系列高效液相色谱仪,配备Waters 2998二极管阵列检测器及Empower 3色谱管理软件;紫外分光光度计(UV-1700,Shimadzu);电热鼓风干燥箱(DHG9070A,上海一恒科学仪器有限公司);多功能粉碎机(750T,上海市浦恒信息科技有限公司);恒温水浴锅(HH-2,常州国华电器有限公司);分析天平(CPA225D,赛多利斯科学仪器);旋转蒸发仪(Eyela OSB-2100,日本);超声波清洗仪(KQ-400KDE,常州诺基仪器有限公司);蒸锅(苏泊尔智多蒸电蒸锅)。
1.3实验试剂
芒柄花素(批号HF012465198),毛蕊异黄酮(批号HC012084198)对照品来自宝鸡市辰光生物科技有限公司,葡萄糖为分析纯、芦丁自制。甲醇、乙腈为色谱纯,乙醇为分析纯,水为重蒸馏去离子。
2实验方法与结果
2.1因素水平设计
以加蜜量,蒸制时间和干燥温度为影响因素,每个因素设计三个水平,选用L9(34)正交表进行优选实验。因素、水平设计见表1。
表1
水平 | 加蜜量/% | 蒸制时间/min | 干燥温度/℃ |
1 | 25 | 30 | 70 |
2 | 35 | 40 | 80 |
3 | 45 | 50 | 90 |
2.2炼蜜的制备
取生蜂蜜置锅内,加约为蜂蜜量1/3的沸水,中火加热至沸后,改小火加热至116~118℃,出现浅黄色有光泽的均匀小气泡,用手捻有黏性,手指分开无白丝出现时迅速出锅。
2.3蜜炙红芪饮片的制备
2.3.1新工艺取同一批大小均匀的新鲜红芪药材,均分为9份,每份2.0kg,切厚片(3~6mm)。将红芪片与炼蜜按照一定比例拌匀,闷润至炼蜜被红芪饮片充分吸收。置蒸锅内,蒸至规定时间后取出,置于控温电热鼓风烘箱中,不同温度干燥,制得9个饮片样品,分别编号为S1~S9。每个样品平行3份。
2.3.2传统工艺取同一批大小均匀的新鲜红芪自然晾干后,闷润,切厚片,加入一定量沸水稀释后的炼蜜,拌匀,待蜜水吸尽后,投入热锅内,文火翻炒至不沾手为度,制得传统饮片样品,编号为S10,平行3份。
2.4指标性成分的测定
2.4.1多糖含量的测定
2.4.1.1供试品溶液的制备精密取各样品2.0g,置250mL圆底烧瓶中,加入10倍量95%的乙醇,回流脱脂2次,每次1h,过滤,滤渣干燥后加入12,10,8倍量的水提取三次,每次40min,合并滤液并浓缩至20mL,加入4倍体积的95%乙醇将多糖沉淀,3000rpm离心,弃去上清,将多糖部分溶解并定容至25mL容量瓶中,摇匀后用于作为多糖含量测定的供试品溶液。
2.4.1.2葡萄糖标准溶液的配制取经105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品2.50mg,精密称定,置25mL量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,即得(每1mL中含无水葡萄糖0.01mg)。
2.4.1.3标准曲线的建立精密移取0.00,0.20,0.40,0.60,0.80,1.00,1.20mL葡萄糖对照品储备液于试管中,加蒸馏水补足至2mL,加5%苯酚溶液1mL,摇匀,迅速加入5mL浓硫酸,摇匀,放置10min。于90℃水浴中保温30min,取出,冷却至室温。于波长490nm处测吸光度A。平行测定3次,以平均吸光度A为纵坐标(Y),葡萄糖浓度(mg/mL)为横坐标(X)绘制标准曲线,得回归方程为:Y=13.868X-0.0055(R2=0.999)。
2.4.1.4供试品含量测定精密量取“2.4.1.1”项下多糖供试品溶液200μL,加水稀释至10mL,精密量取该稀释液500μl,按照标准曲线项下的方法自“加入蒸馏水至2mL”起,测定吸光度,计算水溶性总多糖的含量。
2.4.2总黄酮的测定
2.4.2.1供试品溶液的制备精密取各样品2.0g,置250mL圆底烧瓶中,加入10,8,8倍量甲醇回流提取,每次40min,过滤,合并滤液并浓缩,定容至10mL容量瓶中即为供试品溶液。
2.4.2.2芦丁标准溶液的配制称取芦丁对照品7.84mg,置25mL容量瓶中,加入甲醇溶解并定容至刻度,摇匀,即得(每1mL中含芦丁0.314mg)。
2.4.2.3标准曲线的建立精密量取芦丁对照品溶液0,0.4,0.8,1.2,1.6,2.0,2.4mL分别置于10mL量瓶中,各加水至2.4mL,加5%亚硝酸钠溶0.4mL,摇匀,放置6min,加10%的硝酸铝0.4mL,摇匀,再放置6min,加4%氢氧化钠溶液4mL,再加水至刻度,摇匀,放置15min。以无芦丁对照品溶液的阴性试剂为空白,于波长505nm处测定吸光度A,平行测定3次。以平均吸光度值A为纵坐标(Y),芦丁浓度(mg/mL)为横坐标(X),绘制标准曲线,得回归方程为Y=11.209X-0.0144(R2=0.9959)。
2.4.2.4供试品含量测定精密量取“2.4.2.1”项下供试品溶液0.4mL,按照标准曲线项下的方法自“加水至2.4mL”起,测定吸光度,计算供试品溶液中总黄酮的含量。
2.4.3芒柄花素含量的测定
2.4.3.1色谱条件色谱柱Diamonsil C18(250mm×4.6mm,5μm)。以乙腈为流动相A,以0.01%磷酸水溶液为流动相B,线性梯度洗脱程序为:0~25min,30%→33%A;25~45min,33%→36%A;流速:1mL·min-1,柱温30℃,检测波长248nm。
2.4.3.2标准曲线的建立精密称取芒柄花素对照品3.96mg,置于10mL量瓶,加甲醇超声溶解并定容至刻度,配成浓度为0.396mg·mL-1的芒柄花素对照品储备液。按上述色谱条件进样5.0,10.0,15.0,20.0,25.0,30.0μL。以峰面积为纵坐标(Y),浓度为横坐标(X)绘制标准曲线,得到回归方程为Y=1057674458.87X-30588.00,R2=1.00。
2.4.3.3供试品含量测定精密称取各样品3.0g,加入50mL甲醇,超声30min,过滤,滤液蒸干后用甲醇定容至10mL,摇匀,用0.45μm微孔滤膜过滤后,取续滤液进样,计算芒柄花素的量。
2.5指纹图谱研究
2.5.1色谱条件色谱柱Diamonsil C18(250mm×4.6mm,5μm)。以乙腈为流动相A,以0.05%磷酸水溶液为流动相B,线性梯度洗脱程序为:0~5min,2%→3%A;5~10min,3%→7%A;10~27min,7%→27%A;27~42min,27%→45%A;42~47min,54%→85%A;47~60min,85%→100%。流速:1mL·min-1,柱温30℃,进样量20μL。
2.5.2对照品的制备取对照品芒柄花素、毛蕊异黄酮适量,加甲醇制成浓度分别为0.192,0.200mg/mL的对照品溶液,以0.45μm微孔滤膜滤过,摇匀,即得。
2.5.3供试品的制备精密称取3.0g不同加工工艺的饮片,置具塞锥形瓶中,加50mL甲醇,称定重量,超声提取30min,补足减失的重量,浓缩滤液,定容至10mL的容量瓶中,摇匀,再以0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液进样20μL。
2.5.4检测波长的选择由指纹图谱结合紫外谱图可知,蜜炙红芪饮片与红芪饮片相比,产生了新的成分,其最大紫外吸收波长是284nm,与5-羟甲基糠醛吻合。因此蜜炙红芪饮片的指纹图谱选择分时段多波长融合指纹图谱的方法,在0~15min选择284nm提取指纹图谱,15~60min选择254nm提取指纹图谱。
2.5.5共有峰的选择在10批样品测定的基础上,选出出峰时间基本一致、峰面积较大的峰作为共有峰,红芪饮片的指纹图谱中共有25(P1~P25)个共有峰,共有峰面积和占总面积的93%,可以较全面的反映样品内在质量。其中P13、P18通过与标准品的保留时间和紫外光谱图比对鉴定分别为毛蕊异黄酮和芒柄花素。各样品共有峰如图1所示,各样品指纹图谱如图2所示。
2.5.6共有峰峰面积与称样量的比值相对于传统饮片的变化率
变化率=(新型蜜炙红芪饮片峰面积与称样量比值-传统蜜炙红芪饮片峰面积与称样量比值)/传统蜜炙红芪饮片峰面积与称样量比值。共有峰峰面积与称样量的比值相对于传统工艺的变化率如表2所示。
表2
由表2中25个共有峰峰面积与称样量比值相对于传统工艺的变化率可知,正交工艺制得的9个新型蜜炙红芪饮片中,P5,P9,P20,P21和P25号5个峰的变化率大多呈现负变化率,这5个峰的峰面积总和占总共有峰面积比值的平均值为3.5%,其余20个峰的峰面积与称样量(g)的比值相对于传统工艺的变化率均呈正变化率,且9个新型蜜炙红芪饮片共有峰面积与称样量比值的平均值相对于传统饮片的变化率均为正值,说明与传统红芪蜜炙工艺相比,新工艺均可以较大程度的保留红芪药材中的有效成分。
2.6综合评分法分析正交实验结果
以综合评分的方法对各炮制品进行评价,峰面积/称样量的平均值加权系数为0.6,多糖含量的加权系数为0.20,总黄酮含量的加权系数为0.15,芒柄花素含量的加权系数为0.05。
峰面积/称样量的平均值评分=峰面积/称样量的平均值/最大峰面积/称样量的平均值×100×0.60
多糖含量评分=多糖含量/最大多糖含量×100×0.20
总黄酮含量评分=总黄酮含量/最大总黄酮含量×100×0.15
芒柄花素含量评分=芒柄花素含量/最大芒柄花素含量×100×0.05
指标数据进行加权评分方法,综合评分=峰面积/称样量的平均值评分+多糖含量评分+总黄酮含量评分+芒柄花素含量评分。
表3显示为L9(34)正交试验结果和直观分析。表4显示为方差分析结果。
表3
表4
因素 | 偏差平方和 | 自由度 | 均方 | F值 | Sig. | P |
加蜜量 | 32.398 | 2 | 16.199 | .547 | .647 | |
蒸制时间 | 72.589 | 2 | 36.294 | 1.225 | .449 | |
干燥温度 | 1245.532 | 2 | 622.766 | 21.017 | .045 | P<0.05 |
误差 | 59.264 | 2 | 29.632 | |||
总计 | 42468.701 | 9 | ||||
校正的总计 | 1409.784 | 8 |
直观分析结果(见表3)可知,各因素作用主次为C>B>A;即三种因素蜜蒸红芪饮片质量的影响大小依次为干燥温度>蒸制时间>加蜜量,各因素的最优组合为A2B2C3。
由方差分析结果(见表4)可知,干燥温度对试验结果有显著影响。综合直观分析结果和方差分析结果,从降低能源消耗和最大提升饮片质量综合考虑,最终优选工艺为A1B1C3,即加蜜量为25%,蒸制时间为30min。干燥温度为90℃。
2.7工艺验证:
取同一批大小均匀的新鲜红芪,按照所选取的最佳工艺,即:新鲜红芪药材,抢水冲去泥土后直接切厚片,加入25%的炼蜜,拌匀,在蒸锅中蒸制30min,取出后在电热鼓风烘箱中90℃干燥即得,平行制备3份。按照“2.4”项下的方法测得各指标性成分的含量,并且与传统方法制得的饮片进行比较,新型蜜炙红芪饮片和传统蜜炙红芪饮片的比较如表5所示。
表5
3结果:
本发明优选的新型蜜炙红芪饮片的最佳加工工艺为:新鲜红芪药材,抢水冲去泥土后直接切厚片(3~6mm),加入25%的炼蜜,拌匀,在蒸锅中蒸制30min,取出后在电热鼓风烘箱中90℃干燥,晾凉即得。
新工艺制得的新型蜜炙红芪饮片断面整齐,呈红棕色,表皮有光泽,闻之有蜜香气,嚼之有豆腥味,切制过程无掉渣现象,符合2015版《中国药典》要求。优选出的最佳工艺制得的蜜炙红芪饮片的总多糖、总黄酮和芒柄花素等指标性成分的含量与传统蜜炙红芪饮片相比均有所提高。由于蜂蜜在炮制过程中会发生美拉德反应,产生5-羟甲基糠醛等活性成分,具有滋阴补血的作用,最大吸收波长为284nm。在红芪指纹图谱建立常见的芒柄花素和毛蕊异黄酮的检测波长254nm下,5-HMF几乎没有吸收。因此,本研究采用分时段双波长融合指纹图谱法,选择蜜炙红芪饮片指纹图谱的检测波长为284nm和254nm,选出25个共有峰。指纹图谱中25个共有峰的峰面积面积与称样量比值相对于传统蜜炙红芪饮片的变化率的平均值达2.29,说明最佳工艺制得的红芪饮片极大程度的保留了红芪药材的有效成分,全面提升了饮片质量。
优选的蜜炙红芪饮片制备的新工艺从新鲜红芪药材入手,避免了药材闷润过程中药材有效成分的损失,从源头保证了饮片质量,提高了饮片加工效率,对于规范蜜炙红芪饮片的炮制工艺,实现工业化、自动化生产提供了技术支持。
最后应说明的是:以上所述仅为本发明的优选实施例而已,并不用于限制本发明,尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明,对于本领域的技术人员来说,其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (3)
1.一种蜜炙红芪饮片的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)制备炼蜜:
取生蜂蜜置锅内,加入蜂蜜量1/3的沸水,中火加热至沸后,改小火加热至116~118℃,出现浅黄色有光泽的均匀小气泡,用手捻有黏性,手指分开无白丝出现时迅速出锅,即得到炼蜜;
2)红芪药材处理:
取新鲜红芪药材,抢水冲去泥土后直接切3~6mm厚片;
3)炼蜜闷润:
将步骤2)得到红芪切片中,加入红芪切片重量百分比25%-45%的步骤1)得到的炼蜜,拌匀后闷润;
4)蒸制:
将步骤3)得到的闷润后红芪片置于蒸锅中蒸制30min;
5)干燥:
将步骤4)得到的蒸制后红芪片置于电热鼓风烘箱中70℃-90℃干燥3h,晾凉后即得到蜜炙红芪饮片。
2.根据权利要求1所述的一种蜜炙红芪饮片的制备方法,其特征在于,所述步骤3)中,炼蜜加入量为红芪切片重量百分比的25%。
3.根据权利要求1所述的一种蜜炙红芪饮片的制备方法,其特征在于,所述步骤5)中,干燥温度为90℃。
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