CN109394796A - 卷曲乳杆菌制剂及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种微生态制剂及其应用,具体涉及主要活性成分包含卷曲乳杆菌的微生态制剂,及该制剂在预防或治疗相关疾病中的应用。
Description
技术领域
本发明涉及一种微生态制剂及其应用,具体涉及主要活性成分包含卷曲乳杆菌的微生态制剂,及该制剂在预防或治疗相关疾病中的应用。
背景技术
卷曲乳杆菌是女性***常见有益菌,对于维护女性***健康发挥了重要作用,但由于滥用抗生素等原因,导致女性***卷曲乳杆菌大量减少,***菌群失调,发生大肠杆菌、金黄色葡萄球菌或白色念珠菌感染,导致各种***疾病发生。分离卷曲乳杆菌开发微生态制剂成为目前研究的热点,但生长活性高、抑制致病菌效果好的卷曲乳杆菌的筛选是目前的难点。
本发明人经过研究发现,卷曲乳杆菌DH200具有高的生物活性,主要活性成分包含卷曲乳杆菌DH200的微生态制剂可以有效调节机体微生态平衡,预防或治疗相关疾病,安全没有任何毒副作用,具有巨大的经济价值和社会价值,且未见相关研究报道,特申请此发明专利。
发明内容
本发明的目的是提供一种微生态制剂,该制剂的主要活性成分包含DH200,保藏编号CGMCC No.16193,并提供该制剂在预防或治疗相关疾病中的应用。
根据菌种细胞形态、生理生化特征、16S rRNA序列对比分析等结果来确认菌株在分类学地位,发现编号DH200的菌株为卷曲乳杆菌;该株菌在形态学及一般性质上的特征如下:
细胞形态和理化实验结果:
本发明所述卷曲乳杆菌DH200,抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌或白色念珠菌的作用显著,具有预防或治疗大肠杆菌、金黄色葡萄球菌或白色念珠菌感染的应用,具有预防或治疗***炎的应用,***炎包括细菌性***病、霉菌性、老年性***炎,霉菌性***炎进一步包括念珠菌性***炎。
本发明的微生态制剂也可作为有效组成成分应用在相关组合物中用来预防或治疗上述疾病。
本发明人经多次筛选和培育,分离得到一株卷曲乳杆菌菌株DH200,该菌株较其他菌株具有更高的活性,更优异的调节机体微生态平衡能力和益生作用。本发明所述卷曲乳杆菌还包括衍生自卷曲乳杆菌DH200的菌株,尤其是具有高活性,或具有优异的调节机体微生态平衡能力和益生作用的衍生菌株。主要活性成分包含卷曲乳杆菌DH200及其衍生菌株的微生态制剂均落入本发明的保护范围。
本发明所述微生态制剂,主要活性成分包括但不限于卷曲乳杆菌DH200,保藏编号CGMCC No.16193,也可加入其他活菌、水苏糖、低聚果糖等低聚糖或其他活性成分。
本发明的微生态制剂,是以所述卷曲乳杆菌作为主要活性成分或主要活性成分之一,按照一定的制剂工艺,加入常规的赋形剂、调味剂、崩解剂、防腐剂、润滑剂、湿润剂、黏合剂、溶剂、增稠剂、增溶剂等辅料,制成的任何一种适合于使用的剂型,如片剂、栓剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、液体制剂、粉剂等剂型。
本发明所述微生态制剂包括但不限于药品组合物、保健品、食品或消毒产品,消毒产品进一步包括抑菌制剂。
本微生态制剂所述卷曲乳杆菌指活的生物个体。
本微生态制剂所述卷曲乳杆菌具有高的生物活性。
本微生态制剂,固体制剂包含的卷曲乳杆菌总活菌数不低于1×106CFU/g,一般在1×107CFU/g以上,最高可达到1×1012CFU/g或1×1012CFU/g以上;或液体制剂包含的卷曲乳杆菌总活菌数不低于1×106CFU/mL,一般在1×107CFU/mL 以上,最高可达到1×1012CFU/mL或1×1012CFU/mL以上。
具体实施方式
制备例说明:上述已经对卷曲乳杆菌制剂的制备进行说明,这里通过卷曲乳杆菌DH200为例进行具体说明,其他卷曲乳杆菌菌种制剂的制备方法本领域技术人员通过本实施例很容易掌握,其他剂型的制备方法本领域技术人员通过本实施很容易掌握,在此不再一一叙述说明。制备方法并不局限于本发明实施例所述,公知的能够达到制备目的的方法均可以,实施例的制备说明只是对本发明的说明,并不是对本发明保护范围的限制。
制备实施例1卷曲乳杆菌粉剂的制备
1菌粉的制备和菌种的鉴定
采取女性***分泌物等样品,然后将样品置于灭菌瓶内,从中取2克样品加入18mL灭菌的稀释液中,充分混匀,在无菌操作台内,进行10-1、10-2、10-3、 10-4,10-5,10-6,10-7梯度稀释,取10-5,10-6,10-7三个稀释梯度,涂布于MRS 固体培养基上,置于培养箱,37℃下培养48小时,选择长势良好的单菌落接种到MRS液体培养基中,37℃下扩增培养48小时。将所得培养液离心(12000rpm) 分离出菌体后,将菌体冷冻真空干燥,调制出干燥菌粉,活菌数均为1×1010CFU/g 以上,然后进行菌种鉴定。经生理生化和16S rRNA序列对比分析鉴定为卷曲乳杆菌,为卷曲乳杆菌DH200,保藏编号CGMCC No.16193。
2毒性试验
2.1动物及分组取20只SPF级别小鼠,6-8周龄,体重14-18g,随机分为卷曲乳杆菌组和未给药组,每组10只。
2.2制备菌液将上述卷曲乳杆菌菌粉用纯化水调制为含菌数均为1× 109CFU/mL的菌液。
2.3方法卷曲乳杆菌组和未给药组均给予相同的基础饲料,且饲养条件均一致,卷曲乳杆菌组每天灌服卷曲乳杆菌菌液0.5mL,未给药组每天灌服纯化水 0.5mL,饲喂14天,观察体重及毒性反应。
2.4结果
各组小鼠均未出现异常情况,未发生振颤、痉挛、运动失调、姿态异常,无眼球突出,排尿正常,皮肤、呼吸正常,无死亡情况,未见中毒反应。
3制备成片剂等剂型
根据上述步骤和方法分离鉴定后,经实验检验无毒性,就可将卷曲乳杆菌菌种制成菌粉,然后按照需要添加相关辅料制成各种剂型,优选根据卷曲乳杆菌菌粉的活菌数,按比例添加微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁等制成片剂,使活菌数不低于1×107CFU/g,然后装瓶。
本发明人使用上述分离和制备方法,同时还分离获得了卷曲乳杆菌DH144 和卷曲乳杆菌DH134。
应用效果实施例说明:
本发明以卷曲乳杆菌DH200,保藏编号CGMCC No.16193制成的微生态制剂为代表说明卷曲乳杆菌制剂的应用效果。应理解,这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。为更好的说明本发明的应用效果,本发明人还使用卷曲乳杆菌DH144、卷曲乳杆菌DH134和市售卷曲乳杆菌制成的微生态制剂来进行对比说明。本发明中使用的市售卷曲乳杆菌来自于市场销售的活性卷曲乳杆菌产品。下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。
应用效果实施例1:卷曲乳杆菌的生物活性
1菌粉的制备采用上述菌粉的制备方法,制备获得了卷曲乳杆菌DH200、卷曲乳杆菌DH144、卷曲乳杆菌DH134和市售卷曲乳杆菌菌粉。
2发酵培养将上述菌粉稀释成含菌数为1×106CFU/mL的菌液,使用液体扩增培养基,在37℃下扩增培养48小时(3个平行)。检测培养液中的卷曲乳杆菌活菌数。
3结果经48h扩增培养,卷曲乳杆菌DH200培养液中活菌数显著高于卷曲乳杆菌DH144、卷曲乳杆菌DH134和市售卷曲乳杆菌培养液中活菌数(P<0.05),见表1。
表1卷曲乳杆菌活菌数(Log10CFU·mL-1,n=3)
4讨论上述实验结果表明同等条件下卷曲乳杆菌DH200明显较其他菌株以及市售菌株生长旺盛。益生菌活性高、繁殖快是其发挥益生作用的基础和保障。实验结果表明卷曲乳杆菌DH200较其他卷曲乳杆菌菌株具有更高的生物活性,具有很高的益生价值。
应用效果实施例2:卷曲乳杆菌对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌或白色念珠菌的抑制作用
1材料与方法
融化MH培养基,待融化的培养基冷却至50℃左右时,每200mL加入敏感指示菌菌液0.5mL,混匀后倒入9cm培养皿中,凝固后用镊子夹取牛津杯放置平皿中,在每个牛津杯中加入250μL卷曲乳杆菌培养液(1×107CFU/mL),恒温箱培养24h,测量抑菌圈直径(mm)。
2结果
卷曲乳杆菌DH200的抑菌圈直径显著大于卷曲乳杆菌DH144、卷曲乳杆菌DH134和市售卷曲乳杆菌培养液中活菌数(P<0.05),见表2。
表2卷曲乳杆菌抑菌情况
3讨论
本实验结果表明卷曲乳杆菌DH200抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌或白色念珠菌的效果优于其他卷曲乳杆菌,表明卷曲乳杆菌DH200在治疗***炎等疾病方面的效果也显著优于其他卷曲乳杆菌。
本发明在实施过程中所使用的微生物菌种卷曲乳杆菌DH200已于2018年08 月01日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所邮编100101)保藏。分类命名:卷曲乳杆菌Lactobacilluscrispatus,保藏编号CGMCC No.16193。上述菌种经该微生物中心检测,检测结果为存活。
Claims (10)
1.一种微生态制剂,其特征在于该制剂主要活性成分包括卷曲乳杆菌,所述卷曲乳杆菌包括卷曲乳杆菌DH200,保藏编号CGMCC No.16193。
2.按权利要求1所述的微生态制剂,其特征在于卷曲乳杆菌指活的生物个体。
3.按权利要求1所述的微生态制剂,其特征在于所述制剂包括药品组合物、保健品、食品或消毒产品,消毒产品进一步包括抑菌制剂。
4.按权利要求1所述的微生态制剂,其特征在于卷曲乳杆菌具有高的生物活性。
5.权利要求1所述的微生态制剂在制备预防或治疗大肠杆菌、金黄色葡萄球菌或白色念珠菌感染制剂中的应用。
6.按权利要求5所述应用,其特征在于所述微生态制剂在制备抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌或白色念珠菌制剂中的应用。
7.权利要求1所述的微生态制剂在制备预防或治疗***炎制剂中的应用。
8.按权利要求7所述应用,其特征在于所述***炎包括细菌性***病、霉菌性、老年性***炎,霉菌性***炎进一步包括念珠菌性***炎。
9.按权利要求1所述的微生态制剂,其特征在于所述卷曲乳杆菌包括卷曲乳杆菌DH200及其衍生菌株。
10.按权利要求1所述的微生态制剂,其特征在于固体制剂包含的卷曲乳杆菌总活菌数不低于1×106CFU/g,一般在1×107CFU/g以上,最高可达到1×1012CFU/g或1×1012CFU/g以上;或液体制剂包含的卷曲乳杆菌总活菌数不低于1×106CFU/mL,一般在1×107CFU/mL以上,最高可达到1×1012CFU/mL或1×1012CFU/mL以上。
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