CN109369766A

CN109369766A - 醋酸乌利司他相关手性杂质及其合成制备方法

Info

Publication number: CN109369766A
Application number: CN201811286599.4A
Authority: CN
Inventors: 李志裕; 卞金磊; 徐鹏飞; 栾红玉; 王举波; 屠永锐; 孙永强; 陈巍
Original assignee: Pharmaceutical Co Ltd Changzhou Pharmaceutical Factory No4; China Pharmaceutical University
Current assignee: Pharmaceutical Co Ltd Changzhou Pharmaceutical Factory No4; China Pharmaceutical University
Priority date: 2018-10-31
Filing date: 2018-10-31
Publication date: 2019-02-22

Abstract

本发明公开了醋酸乌利司他相关手性杂质及其合成制备方法，本发明公开的醋酸乌利司他相关手性杂质可以以3‑缩酮为起始原料，加成反应得到中间体II，再在酸性条件下脱保护得到中间体III，经过水解氧化作用得到中间体IV，上保护基团等步骤得到部分手性杂质，或者以3,20‑双缩酮氧化产物经经过格氏反应等得到部分手性杂质等，本发明所有杂质化合物的结构均经核磁氢谱，高分辨质谱以及高效液相色谱确证，本方法所制得的醋酸乌利司他相关手性杂质化合物的纯度均在95%以上，可作为对照品用于质量研究。

Description

醋酸乌利司他相关手性杂质及其合成制备方法

技术领域

本发明属于有机化学领域，尤其涉及药物合成化学领域。本发明提供醋酸乌利司他相关手性杂质及其合成制备方法，所述的手性杂质化合物应用于醋酸乌利司他原料药及其制剂的质量分析。

背景技术

醋酸乌利司他(Ulipristal Acetate；化合物XI；化学名：17α-乙酰氧基-11β-[4-(N,N-二甲基氨基)苯基]-19-去甲孕甾-4，9-二烯-3，20-二酮)是一种强效的抗孕激素和抗糖皮质激素药物。其结构式如下：

醋酸乌利司他作为紧急避孕药已在欧洲和美国批准上市，用于无防护性生活或已知或怀疑避孕失败后5天内使用，是一种有效且安全的紧急避孕药。紧急避孕被定义为防止无保护措施性行为导致的怀孕的治疗方法，是一种防止无保护措施的性行为导致的意外怀孕的重要方法。它是作为偶然、紧急时使用的一个备用措施。

醋酸乌利司他作为子宫肌瘤治疗药已在欧洲批准上市，用于术前治疗育龄妇女中度重度子宫肌瘤。子宫肌瘤(又称子宫平滑肌瘤)是良性的，单克隆的，激素-敏感的子宫平滑肌肿瘤。它是女性绝经前生殖道最常见肿瘤，据报道育龄女性20-40％患有这种肿瘤。子宫肌瘤经常无症状，但当出现症状时，最初的症状是严重的子宫出血，贫血，腹部受压，腹部疼痛，尿频加重和不育。尤其，严重的经血量减少是最常见的子宫肌瘤的症状。

现有技术CN102516345B公开了可工业化生产醋酸乌利司他的方法，是以易得的3,3-(亚乙二氧基-19-去甲孕甾-5(10),9(11)-二烯-3,17-二酮(化合物1)与氰基化试剂加成反应得到化合物2，然后将17α-羟基保护，得到式3化合物，接着与甲基锂或甲基格式试剂反应后经酸水解得到式4化合物，再经对甲苯磺酸等催化与乙二醇反应得到化合物5，然后环氧化反应得到环氧物6，接着与格氏试剂反应得到化合物7，再经酸性条件下水解得到化合物8，最后经乙酸化得到醋酸乌利司他(化合物XI)(Scheme 1)。该方法合成路线短，共8步反应，而且反应条件温和，更容易进行，总收率约25-27％左右，且操作更简便，宜于产业化。

任何影响药物纯度的物质统称为杂质。杂质的研究是药品研发的一项重要内容，它包括选择合适的分析方法，准确地分辨与测定杂质的含量并综合药学、毒理及临床研究的结果确定杂质的合理限度。这一研究贯穿于药品研发的整个过程。药品中的杂质按其理化性质一般分为三类：有机杂质、无机杂质及残留溶剂。按照其来源，杂质可以分为工艺杂质(包括合成中未反应完全的反应物及试剂、中间体、副产物等)、降解产物、从反应物及试剂中混入的杂质等。按照其毒性分类，杂质又可分为毒性杂质和普通杂质等。杂质还可按其化学结构分类，如甾体、生物碱、几何异构体、光学异构体和聚合物等。有机杂质包括工艺中引入的杂质和降解产物等，可能是已知的或未知的、挥发性的或不挥发性的。由于这类杂质的化学结构一般与活性成分类似或具渊源关系，故通常又可称之为有关物质。在这些杂质的研究过程中，有关物质、手性杂质以及遗传毒性杂质是开发过程中关注和研究的重点。醋酸乌利司他由于含有两个合成引入的手性中心，所以在后期的开发与研究中，手性杂质的研究成为了影响其研发进程中的关键。

三维结构的物体所具有的与其镜像平面形状完全一致，但在三维空间中不能完全重叠的性质，称之为手性，具有手性的药物即称为手性药物。而因为手性中心构像不同而产生的异构体杂质则称为手性杂质，由于目前有很多的上市药物以及在研药品都存在手性中心，所以研究手性杂质是一项十分重要的科研任务。虽然只是手性中心构型的差异，但有的手性杂质所带来的影响和后果则是灾难性的，例如最有名的的反应停事件。由于技术的落后性，当时并没有意识到明确手性构型的重要性，也没有检测手性中心构型的有效手段而导致这一惨剧的发生。S型的沙利度胺不仅没有抗妊娠反应作用，还会带来严重的胎儿致畸的后果，所以历史的教训告诉我们明确手性药物的构型与疗效的关系和控制手性杂质的含量对手性药物的研发起着至关重要的作用。

手性化合物的合成方法主要有四种，一是使用手性的底物：这种方法一般比较局限，基本都应用于存在手性中心的天然产物底物中，利用原有的手性中心，通过位阻效应或者构象效应等来引入新的手性中心以及固定的构型。二是使用手性助剂：手性助剂就是帮助反应构建完手性中心的构型再脱除的试剂，例如很多金属催化剂以及手性亚砜类试剂等，很多反应通过手性助剂中的金属离子与底物中已有手性的氮或者氧等原子络合后来形成固定的手性构型，这样便可以得到目标产物。三是使用手性试剂：这种方法是通过应用某种光学纯的试剂来诱导立体选择反应的发生，应用比较广泛的例如手性硼试剂、手性负氢试剂和手性金属络合物。四是使用不对称催化剂：催化不对称合成是最理想的手性化合物的合成方法，因为通过使用少量的不对称催化剂就可以获得大量的手性产物，但是与机遇并存的挑战便是过渡金属和手性配体价格昂贵无法满足大规模生产，所以目前筛选高活性，高立体选择性而价格低廉的不对称合成催化剂也是热门研究领域之一。随着科技的进步，生物催化不对称合成也是处于一个迅猛发展的阶段，相信在不久的将来，手性化合物的合成将不会成为影响手性药物发展的难题。

手性杂质的分离方法多种多样，在实验室比较容易实现的主要有三种，第一种方法是结晶法，这种是最方便，最简单的分离手性化合物的方法，同时所获得的产品纯度也较高，易于实现工业化生产。也发展了很多新的方法例如机械拆分外消旋混合物，优先结晶和优先富集等，但是适合并非所有的化合物都适合该方法，所以虽然操作简便但也存在底物不适用的局限性。第二种方法是薄层色谱法，利用对映异构体极性或者吸附能力的差异，通过薄层色谱法将对映异构体实现拆分，比较适合实验室操作，但是大多数对映异构体性质十分类似，极性或者吸附能力也十分相似，普通的薄层色谱无法分离，所以只能通过展开剂种类及配比的大量摸索尝试以达到分离的目的。第三种便是通过手性色谱柱分离，这种方法优点是高效并且可以获得纯度较高的产品，但是缺点也十分明显，不能够大量制备目标化合物，只适合实验室小试制备少量目标化合物。

手性化合物的鉴定总的分为两类，直接法与间接法。直接法是指通过单一的方法即可确证手性化合物的构型，例如单晶X射线衍射法(Single-crystal X-rayDiffraction，SXRD)。而间接法是指依靠对手性化合物进行分析，并综合其它各种数据，才能确定该手性化合物的构型。例如比旋度(Specific Rotation)、手性色谱(ChiralChromatography)、核磁共振(NMR)以及旋光光谱(Optical Rotatory Dispersion，ORD)、圆二色谱(Circular Dichroism，CD)等分析方法都属于间接法。

发明内容

为了更好地控制醋酸乌利司他原料药及其制剂的药物质量，本发明对原料药中的杂质进行研究，获得了相关手性杂质化合物，并提供其制备方法。本发明所制备的手性杂质化合物，作为杂质对照品，可用于该醋酸乌利司他原料药及其制剂的质量分析，同时也可以为工艺条件的选择提供参考，有利于生产过程中药品质量的控制。

本发明技术方案如下：

本发明提供醋酸乌利司他的相关手性杂质化合物或其盐，所述的化合物选自结构如下式化合物A-M所示：

本发明所述的化合物或其盐，其中所述盐可以为无机酸盐或有机酸盐，无机酸包括但不限于盐酸、氢溴酸、硝酸、磷酸、偏磷酸、硫酸、亚硫酸和高氯酸等，有机酸包括但不限于乙酸、三氟乙酸、丙酸、丙烯酸、己酸、环戊烷丙酸、羟乙酸、丙酮酸、草酸、(D)或(L)苹果酸、富马酸、马来酸、苯甲酸、羟基苯甲酸、γ-羟基丁酸、甲氧基苯甲酸、邻苯二甲酸、甲磺酸、乙磺酸、萘-1-磺酸、萘-2-磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸、酒石酸、柠檬酸、乳酸、肉桂酸、十二烷基硫酸、葡糖酸、谷氨酸、天冬氨酸、硬脂酸、扁桃酸、琥珀酸或丙二酸等。

作为本发明另一目的，还提供上述所述化合物或其盐的制备方法，其包括以下(1)、(2)或(3)：

(1)以3-缩酮(中间体I)为起始原料，加成反应得到中间体II，再在酸性条件下脱保护得到中间体III，经过水解氧化作用得到中间体IV，最后上保护基团得到杂质化合物A，经过氧化反应得到杂质化合物B与杂质化合物C，分别进行格氏化反应后得到杂质化合物D与杂质化合物E，在酸性条件下脱除保护基团得到杂质化合物G与杂质化合物H，最后经过乙酰化反应步骤得到杂质化合物J与杂质化合物K，其反应式如下：

(2)包括以3,20-双缩酮氧化产物(中间体V)为反应起始原料，经过格氏反应得到杂质化合物F，继而在酸性条件下脱除保护基团得到杂质化合物I，最后经过乙酰化反应步骤得到杂质化合物L，其反应式如下：

(3)包括以3,20-双缩酮氧化产物(中间体VI)为反应起始原料，经过格氏反应得到中间体VII，酸性条件下脱除保护基团得到中间体VIII，经过硝化反应得到中间体IX，通过乙酰化反应得到中间体X，最后经过还原反应得到杂质化合物M，其反应式如下：

进一步的，在一种实施方式中，上述所述的制备方法，其中：

(1)中所述的加成反应：

在一种具体实施方式中，例如，化合物I溶于溶剂中，碱性条件下通入乙炔气体室温反应；所述溶剂选自四氢呋喃，乙腈，丙酮，二氧六环中的一种或多种，但不限于此；碱选自氢氧化锂，氢氧化钠，氢氧化钾，乙醇钠，甲醇钠，叔丁醇钾，二异丙基氨基锂或正丁基锂等，但不限于此，优选叔丁醇钾；反应温度0-25℃，优选5-15℃，进一步优选10℃。

(1)中中间体II脱除保护基的反应为：

在一种具体实施方式中，例如，化合物II在稀酸的条件下进行脱除保护基的反应，稀酸选自甲酸，醋酸，盐酸，高氯酸，硫酸或硝酸等，但不限于此，优选醋酸；反应温度为0-25℃，优选5-15℃，进一步优选10℃，反应时间为1-4h。

(1)中的中间体III的水解氧化反应为：

在一种具体实施方式中，例如，化合物III溶于溶剂中，酸性条件下加入催化剂；其中，优选的，溶剂为四氢呋喃，乙腈，甲醇，乙醇，丙酮，二氯甲烷中的一种或多种；酸选自甲酸，乙酸，盐酸，硫酸，硝酸或高氯酸等，优选稀硫酸；所述催化剂为硫酸汞或者***；反应温度为30-60℃，反应时间为2-5h。

(1)中中间体IV上保护基团可以在路易斯酸作用下，反应为：

在一种具体实施方式中，例如，化合物IV溶于溶剂中，加入路易斯酸催化；优选的，所选溶剂为二氯甲烷，四氢呋喃，乙腈，二氧六环中的一种或多种；路易斯酸选自三氯化铝，三氯化铁，四氯化钛，三氟化硼，五氟化锑，三氯化铟，但不限于此，优选三氯化铟；优选的，反应温度为30-80℃，反应时间为2-6h。

(1)中杂质化合物A的氧化反应为：

在一种具体实施方式中，例如，化合物A溶于溶剂中，碱性条件下，加入氧化剂和催化剂室温下反应。优选的，溶剂为二氯甲烷，四氢呋喃，丙酮，乙腈中的一种或多种；碱选自吡啶，磷酸氢二钾，磷酸二氢钾，磷酸氢二钠或磷酸二氢钠等，但不限于此；氧化剂选自双氧水或间氯过氧苯甲酸等，优选双氧水；催化剂选自六氯丙酮或六氟丙酮等；反应温度-10-10℃。

(1)～(3)中的格氏化反应涉及的反应式如下：

在一种具体实施方式中，例如，反应原料是在溶剂，催化剂催化下与4-(N,N一二甲基氨基)苯基溴化镁格氏试剂或者苯基溴化镁格氏试剂进行加成；优选地，催化剂为氯化亚铁，溴化亚铁，氯化锌，溴化锌，氯化亚铜，溴化亚铜，但不限于此；所选溶剂为二氯甲烷，四氢呋喃，乙腈，丙酮中的一种或多种；反应原料与格氏试剂摩尔比优选为1:1.5-5，反应温度优选为-10-40℃，反应时间优选为2-8h。

(1)～(3)中的在酸性条件下脱除保护基团涉及的反应式如下：

在一种具体实施方式中，例如，反应原料是在水和稀酸中搅拌下进行水解反应；优选地，所述的酸选自无机酸，例如盐酸、硫酸、硫酸氢钠等，优选为0.2-4N HCl溶液；优选地，反应温度-10-50℃，反应时间1-5h。

(1)～(3)中的乙酰化反应涉及的反应式如下：

在一种具体实施方式中，例如，是用冰醋酸、乙酰氯、高氯酸或乙酸酐中任一种或者两种以上作为酰化剂进行酰化反应；优选高氯酸和乙酸酐中加入冰醋酸；优选地，反应温度-40-25℃，优选-10-25℃；优选地，冰醋酸的量占冰醋酸、高氯酸、乙酸酐构成的乙酰化试剂体积总量的1-50％V/V，优选10-15％V/V；酰化反应所用溶剂优选为二氯甲烷，四氢呋喃，丙酮，乙腈中的一种或多种。

(3)中所述的硝化反应为：

在一种具体实施方式中，例如，在硝酸试剂和硫酸的条件下进行硝化反应，优选浓硫酸，反应温度优选为-15-10℃，反应时间优选为1-5h，所述的硝化试剂优选为浓硝酸、发烟硝酸或硝酸钾等。

(3)中所述的还原反应为：

在一种具体实施方式中，例如，化合物X溶于溶剂中，加入催化剂进行还原反应；优选的，所选溶剂为二氯甲烷，四氢呋喃，甲醇，乙醇，乙腈，二氧六环中的一种或多种；所述催化剂包括但不限于钯碳，铁粉，雷尼镍，锌粉等，优选钯碳；还原剂包括但不限于氢气，稀盐酸，醋酸或稀硫酸等优选的，反应温度为25-40℃，反应时间为6-12h。

本发明中还提供的上述醋酸乌利司他的相关手性杂质化合物或其盐依照醋酸乌利司他制剂质量检测中作为杂质对照品的应用。

若无特别说明，本发明中所用名词说明如下：

“稀酸”是指浓度为2N-4N的酸。

“稀硫酸”是指溶质质量分数小于或等于70％的硫酸溶液。

“稀盐酸”是指溶质质量分数低于20％的盐酸溶液。

“浓硫酸”是指溶质质量分数大于70％的硫酸溶液。

“浓硝酸”是指溶质质量分数在68％～95％的硝酸溶液。

“发烟硝酸”是指溶质质量分数大于95％的硝酸溶液。

本发明具有以下优点：

本发明首次公开了上述醋酸乌利司他的相关手性杂质化合物或其盐，弥补了目前制备该杂质方法的空缺，并且该法操作简单，后处理简单，制备出的醋酸乌利司他的相关手性杂质纯度高、收率高。

附图说明

图1：醋酸乌利司他高效液相色谱图；

图2：杂质化合物K液相色谱图；

图3：杂质化合物K核磁氢谱图；

图4：杂质化合物L核磁氢谱图；

图5：杂质化合物G单晶衍射图；

图6：杂质化合物J单晶衍射图。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。

实施例1：中间体II的制备

称取叔丁醇钾75g(668.39mmol)，投入到1000mL的三颈瓶中，加入500mL的无水THF，持续通入乙炔气体，室温搅拌1个小时后冷却至0℃，加入原料I 100g(318.28mmol)，控制温度低于0℃，保持乙炔气体的通入，TLC监测，反应结束后加入饱和氯化铵溶液，分出有机层，THF萃取水层，合并有机层，水洗，浓缩，将浓缩液缓慢滴入到冰水中，析出固体，抽滤，水打浆，得产物中间体II 98g，收率91％。HRMS(ESI⁺):calcd for C₂₂H₃₀O₃[M+H]⁺341.2111,found 341.2109.

实施例2：中间体III的制备

称取中间体II 30g(88.18mmol)，投入到500mL的单颈瓶中，加入300mL的冰醋酸，室温搅拌，缓慢滴入2.5mL(44.09mmol)的高氯酸，控制反应温度低于25℃。TLC监测，反应结束后，将反应液缓慢滴入到冰水中，析出固体，抽滤，得产物中间体III 20g，收率：77％。HRMS(ESI⁺):calcd for C₂₀H₂₅O₂[M+H]⁺297.1849,found 297.1847.

实施例3：中间体IV的制备

称取中间体III 10g(33.76mmol)，溶于100mL的THF中，加入2.5g(8.44mmol)的硫酸汞，再加入30mL的30％的硫酸溶液，60℃下搅拌，TLC监测，反应结束后，饱和碳酸氢钠溶液调节pH，二氯甲烷萃取水层，合并有机层，水洗，干燥，柱层析。得产物中间体IV 4.8g，收率：45％。HRMS(ESI⁺):calcd for C₂₀H₂₇O₃[M+H]⁺315.1955,found 315.1957.¹H NMR(300MHz,CDCl₃):δ1.12(s,3H,–CH₃),2.30(s,3H,–CH₃),1.26-2.89(m,18H),5.70(s,1H,＝CH).

实施例4：杂质化合物A的制备

称取中间体IV 2g(6.37mmol)，四水合三氯化铟0.93g(3.18mmol)，投入到50mL的单颈瓶中，加入1.8mL(31.85mmol)的乙二醇，20mL的环己烷，升温至回流搅拌，TLC监测，反应结束后加入饱和碳酸氢钠溶液调节pH，水层使用二氯甲烷萃取，合并有机层，水洗，干燥，柱层析得产物杂质化合物A 0.98g，收率：38％。HRMS(ESI⁺):calcd for C₂₄H₃₅O₅[M+H]⁺403.2453,found 403.2450.¹H NMR(300MHz,CDCl₃):δ0.67(s,3H,–CH₃),0.91-2.68(m,19H),1.29(s,3H,–CH₃),3.69-4.03(m,8H,–OCH₂),5.58(d,J＝6.0Hz,1H,＝CH).

实施例5：杂质化合物B与杂质化合物C的制备

称取磷酸氢二钠35.29g(248.61mmol)，六氯丙酮2.1mL(13.67mmol)，30％双氧水90mL(745.8mmol)，加入到250mL的三颈瓶中。加入二氯甲烷100mL。氮气保护，降温至0℃,搅拌一个小时后加入杂质化合物A 10g(24.86mmol)。保温搅拌36个小时，加入硫代硫酸钠淬灭反应，水层使用二氯甲烷萃取，合并有机层，水洗，干燥。PE:EA＝3:1重结晶，得目标产物杂质化合物B 6.55g，收率：90％。HRMS(ESI⁺):calcd for C₂₄H₃₅O₆[M+H]⁺419.2357,found419.2358.¹H NMR(300MHz,CDCl₃):δ0.74(s,3H,–CH₃),0.86-2.66(m,19H),1.33(s,3H,–CH₃),3.83-3.93(m,8H,–OCH₂),6.12(t,J＝3.0Hz,1H,＝CH)。母液柱层析(PE:EA＝8:1)得杂质化合物C 1.4g，收率：45％。HRMS(ESI⁺):calcd for C₂₄H₃₅O₆[M+H]⁺419.2357,found419.2360.¹H NMR(300MHz,CDCl₃):δ0.88(s,3H,–CH₃),0.86-2.76(m,19H),1.07(s,3H,–CH₃),3.76-4.08(m,8H,–OCH₂),5.82(d,J＝6.00Hz,1H,＝CH)。

实施例6：杂质化合物D的制备

称取镁屑2.92g(121.67mmol)，二甲基对溴苯胺2g(10.05mmol)，加入到250mL的三颈瓶中，量取无水THF 20mL倒入反应瓶中，加入一粒单质碘，升温至50℃引发反应，反应引发完毕，撤去油浴，称取二甲基对溴苯胺20g(100.50mmol)溶于200mL的无水THF中，缓慢滴入反应液，控制反应温度低于35℃。滴毕，室温搅拌两个小时得灰黑色格氏试剂。称取杂质化合物B 15g(35.89mmol)，投入到500mL的三颈瓶中，加入1.5g(15.07mmol)的氯化亚铜，50mL的无水THF，氮气保护，降温至5℃，将制好的格氏试剂缓慢滴入反应瓶中，控制反应温度低于10℃。滴毕，保温搅拌10个小时。加入饱和氯化铵溶液淬灭反应，水层二氯甲烷萃取，合并有机层，水洗，干燥，柱层析，得杂质化合物D 5.6g，收率：29％。HRMS(ESI⁺):calcd forC₃₂H₄₆NO₆[M+H]⁺540.3320,found 540.3318.

实施例7：杂质化合物G的制备

称取杂质化合物D 5.00g(9.28mmol)，投入到100mL的单颈瓶中，加入10g(73.44mmol)的硫酸氢钾，降温至0℃后加入冰水60mL，保温搅拌2个小时，TLC监测，反应结束后加入饱和碳酸氢钠溶液调节pH至7-8，加入二氯甲烷萃取水层，合并有机层，水洗，干燥，柱层析，得杂质化合物G 2.5g，单晶衍射图如图5所示，收率：63％。HRMS(ESI⁺):calcdfor C₂₈H₃₆NO₃[M+H]⁺434.2690,found 434.2688.¹H NMR(300MHz,CDCl₃):δ0.64(s,3H,–CH₃),1.43-2.71(m,17H),2.31(s,3H,–COCH₃),2.92(s,6H,N–CH₃),4.25(d,J＝9.00Hz,1H,–CH).5.74(s,1H,＝CH),6.66(d,J＝9.00Hz,2H,Ar–H),6.99(d,J＝9.00Hz,2H,Ar–H).

实施例8：杂质化合物J的制备

量取乙酸酐4.7mL(46.08mmol)，加入到50mL的单颈瓶中，降温至-10℃，滴入高氯酸0.26mL(4.61mmol)，继续降温至-30℃搅拌一个小时后，缓慢滴入含有2.00g(4.61mmol)杂质化合物G的二氯甲烷溶液(20mL)，控制反应温度低于-20℃，滴毕，保持-20℃搅拌2个小时，TLC监测反应结束。将反应液倒入到饱和醋酸钠的溶液中调节pH，水层用二氯甲烷萃取，合并有机层，水洗，干燥，柱层析，得杂质化合物J 1.29g，单晶衍射图如图6，收率：59％。HRMS(ESI⁺):calcd for C₃₀H₃₈NO₄[M+H]⁺476.2795,found 476.2794.¹H NMR(300MHz,CDCl₃):δ0.69(s,3H,–CH₃),1.15-2.58(m,17H),2.08(s,3H,–COCH₃),2.12(s,3H,–COCH₃),2.93(s,6H,N–CH₃),4.27(d,J＝9.00Hz,1H,–CH).5.74(s,1H,＝CH),6.69(d,J＝9.00Hz,2H,Ar–H),7.02(d,J＝9.00Hz,2H,Ar–H).

实施例9：杂质化合物E的制备

称取镁屑9.19g(382.78mmol)，二甲基对溴苯胺3.81g(19.14mmol)，加入到500mL的三颈瓶中，量取无水THF 40mL倒入反应瓶中，加入一粒单质碘，升温至50℃引发反应，反应引发完毕，撤去油浴，称取二甲基对溴苯胺38.09g(191.39mmol)溶于400mL的无水THF中，缓慢滴入反应液，控制反应温度低于35℃。滴毕，室温搅拌两个小时得灰黑色格氏试剂。称取杂质化合物C 10g(23.92mmol)，投入到500mL的三颈瓶中，加入4.76g(47.84mmol)的氯化亚铜，20mL的无水THF，氮气保护，降温至5℃，将制好的格氏试剂缓慢滴入反应瓶中，控制反应温度低于10℃。滴毕，保温搅拌10个小时。加入饱和氯化铵溶液淬灭反应，水层二氯甲烷萃取，合并有机层，水洗，干燥，柱层析，得杂质化合物E 1.42g，收率：11％。HRMS(ESI⁺):calcd for C₃₂H₄₆NO₆[M+H]⁺540.3320,found 540.3319.

实施例10：杂质化合物H的制备

称取杂质化合物E 1.50g(2.78mmol)，投入到50mL的单颈瓶中，加入3.03g(22.26mmol)的硫酸氢钾，降温至0℃后加入冰水30mL，保温搅拌2个小时，TLC监测，反应结束后加入饱和碳酸氢钠溶液调节pH至7-8，加入二氯甲烷萃取水层，合并有机层，水洗，干燥，柱层析，得杂质化合物H 0.72g，收率：60％。HRMS(ESI⁺):calcd for C₂₈H₃₆NO₃[M+H]⁺434.2690,found 434.2688.¹H NMR(300MHz,CDCl₃):δ0.64(s,3H,–CH₃),1.43-2.74(m,17H),2.31(s,3H,–COCH₃),2.91(s,6H,N–CH₃),4.25(d,J＝9.00Hz,1H,–CH).5.74(s,1H,＝CH),6.65(d,J＝9.00Hz,2H,Ar–H),6.99(d,J＝6.00Hz,2H,Ar–H).

实施例11：杂质化合物K的制备

量取乙酸酐1.59mL(15.59mmol)，加入到25mL的单颈瓶中，降温至-10℃，滴入高氯酸0.09mL(1.56mmol)，继续降温至-30℃搅拌一个小时后，缓慢滴入含有0.45g(1.04mmol)杂质化合物H的二氯甲烷溶液(10mL)，控制反应温度低于-20℃，滴毕，保持-20℃搅拌2个小时，TLC监测反应结束。将反应液倒入到饱和醋酸钠的溶液中调节pH，水层用二氯甲烷萃取，合并有机层，水洗，干燥，柱层析，得杂质化合物K 0.21g，核磁氢谱图如图3所示，收率：43％。HRMS(ESI⁺):calcd for C₃₀H₃₈NO₄[M+H]⁺476.2795,found 476.2793.¹H NMR(300MHz,CDCl₃):δ0.69(s,3H,–CH₃),1.16-2.62(m,17H),2.09(s,3H,–COCH₃),2.12(s,3H,–COCH₃),2.94(s,6H,N–CH₃),4.28(d,J＝6.00Hz,1H,–CH).5.75(s,1H,＝CH),6.71(s,2H,Ar–H),7.04(d,J＝9.00Hz,2H,Ar–H).

实施例12：杂质化合物F的制备

称取镁屑34.45g(1.44mol)，二甲基对溴苯胺9.52g(47.85mmol)，加入到1000mL的三颈瓶中，量取无水THF 100mL倒入反应瓶中，加入一粒单质碘，升温至50℃引发反应，反应引发完毕，撤去油浴，称取二甲基对溴苯胺95.22g(478.47mmol)溶于600mL的无水THF中，缓慢滴入反应液，控制反应温度低于35℃。滴毕，室温搅拌两个小时得灰黑色格氏试剂。称取中间体V 20g(47.84mmol)，投入到1000mL的三颈瓶中，加入23.8g(239.23mmol)的氯化亚铜，100mL的无水THF，氮气保护，降温至15℃，将制好的格氏试剂缓慢滴入反应瓶中，控制反应温度低于30℃。滴毕，保温搅拌10个小时。加入饱和氯化铵溶液淬灭反应，水层二氯甲烷萃取，合并有机层，水洗，干燥，柱层析，得杂质化合物F 3.88g，收率：15％。HRMS(ESI⁺):calcd for C₃₂H₄₆NO₆[M+H]⁺540.3320,found 540.3320.

实施例13：杂质化合物I的制备

称取杂质化合物F 2.50g(4.64mmol)，投入到50mL的单颈瓶中，加入6.32g(46.40mmol)的硫酸氢钾，降温至0℃后加入冰水30mL，保温搅拌2个小时，TLC监测，反应结束后加入饱和碳酸氢钠溶液调节pH至7-8，加入二氯甲烷萃取水层，合并有机层，水洗，干燥，柱层析，得杂质化合物I 0.70g，收率：35％。HRMS(ESI⁺):calcd for C₂₈H₃₆NO₃[M+H]⁺434.2690,found 434.2691.¹H NMR(300MHz,CDCl₃):δ0.73(s,3H,–CH₃),1.16-2.58(m,17H),2.26(s,3H,–COCH₃),2.93(s,6H,N–CH₃),5.52(t,J＝3.00Hz,1H,＝CH),6.645(d,J＝9.00Hz,2H,Ar–H),7.345(d,J＝9.00Hz,2H,Ar–H).

实施例14：杂质化合物L的制备

量取乙酸酐1.2mL(11.78mmol)，加入到25mL的单颈瓶中，降温至-10℃，滴入高氯酸0.07mL(1.18mmol)，继续降温至-30℃搅拌一个小时后，缓慢滴入含有0.51g(1.18mmol)杂质化合物I的二氯甲烷溶液(20mL)，控制反应温度低于-20℃，滴毕，保持-20℃搅拌2个小时，TLC监测反应结束。将反应液倒入到饱和醋酸钠的溶液中调节pH，水层用二氯甲烷萃取，合并有机层，水洗，干燥，柱层析，得杂质化合物L 0.14g，收率：25％。HRMS(ESI⁺):calcdfor C₃₀H₃₈NO₄[M+H]⁺476.2795,found 476.2793.¹H NMR(300MHz,CDCl₃):δ0.71(s,3H,–CH₃),1.15-2.59(m,17H),2.09(s,3H,–COCH₃),2.13(s,3H,–COCH₃),2.94(s,6H,N–CH₃),4.28(d,J＝6.00Hz,1H,–CH).5.75(s,1H,＝CH),6.71(s,2H,Ar–H),7.03(d,J＝6.00Hz,2H,Ar–H)(核磁氢谱图如图4所示).

实施例15：中间体VII的制备

称取镁屑5.17g(215.31mmol)，溴苯1.68g(10.77mmol)，加入到250mL的三颈瓶中，量取无水THF 20mL倒入反应瓶中，加入一粒单质碘，升温至50℃引发反应，反应引发完毕，撤去油浴，称取溴苯16.79g(107.66mmol)溶于150mL的无水THF中，缓慢滴入反应液，控制反应温度低于35℃。滴毕，室温搅拌两个小时得灰黑色格氏试剂。称取中间体VI 15g(35.89mmol)，投入到500mL的三颈瓶中，加入1.79g(17.94mmol)的氯化亚铜，50mL的无水THF，氮气保护，降温至0℃，将制好的格氏试剂缓慢滴入反应瓶中，控制反应温度低于5℃。滴毕，保温搅拌8个小时。加入饱和氯化铵溶液淬灭反应，水层二氯甲烷萃取，合并有机层，水洗，干燥，柱层析，得中间体VII 11.58g，收率：65％。

实施例16：中间体VIII的制备

称取中间体VII 9.00g(18.13mmol)，投入到250mL的反应瓶中，加入乙醇90mL，8.5％的硫酸溶液10mL，室温反应，TLC监测，反应结束后，饱和碳酸氢钠溶液调节pH，二氯甲烷萃取水层，合并有机层，水洗，干燥，柱层析得中间体VIII 5.8g，收率82％。HRMS(ESI⁺):calcd for C₂₆H₃₁O₃[M+H]+391.2268,found 391.2270.

实施例17：中间体IX的制备

量取浓硫酸1.00mL(19.22mmol)，浓硝酸3.00mL(64.06mmol)加入到25mL的三颈瓶中，降温至10℃以下，搅拌10分钟后将中间体VIII 5.00g(12.81mmol)缓慢加入到反应瓶中，控制温度低于10℃。加毕，保温搅拌，TLC监测，反应结束后饱和碳酸氢钠溶液调节pH，二氯甲烷萃取水层，合并有机层，水洗，干燥，柱层析得产物中间体IX 2.5g，收率：45％。HRMS(ESI⁺):calcd for C₂₆H₃₀NO₅[M+H]⁺436.2118,found 436.2119.

实施例18：中间体X的制备

量取乙酸酐4.7mL(45.96mmol)，加入到50mL的单颈瓶中，降温至-10℃，滴入高氯酸0.3mL(4.60mmol)，继续降温至-30℃搅拌一个小时后，缓慢滴入含有2g(4.60mmol)中间体IX的二氯甲烷溶液(20mL)，控制反应温度低于-20℃，滴毕，保持-20℃搅拌2个小时，TLC监测反应结束。将反应液倒入到饱和醋酸钠的溶液中调节pH，水层用二氯甲烷萃取，合并有机层，水洗，干燥，柱层析，得中间体X 0.86g，收率：39％。HRMS(ESI⁺):calcd for C₂₈H₃₂NO₆[M+H]⁺478.2224,found 478.2225.¹H NMR(300MHz,CDCl₃):δ0.33(s,3H,–CH₃),1.16-2.67(m,19H),2.20(s,3H,–COCH₃),4.44(d,J＝9.00Hz,1H,–CH).5.75(s,1H,＝CH),7.28(d,J＝9.00Hz,2H,Ar–H),8.08(d,J＝9.00Hz,2H,Ar–H).

实施例19：杂质化合物M的制备

称取中间体X 0.8g(1.68mmol)，溶于10mL的二氯甲烷中，加入0.05g(0.84mmol)的锌粉，室温滴加0.5mL(8.40mmol)的冰醋酸，滴毕，室温搅拌，TLC监测，反应结束抽滤除去锌粉，滤液中加入饱和碳酸氢钠调节pH，水层使用二氯甲烷萃取，合并有机层，水洗，干燥，柱层析得杂质化合物M 0.45g，收率：60％。HRMS(ESI⁺):calcd for C₂₈H₃₄NO₄[M+H]⁺448.2482,found 448.2480；¹H NMR(300MHz,CDCl₃):δ0.28(s,3H,–CH₃),1.19-2.81(m,19H),2.02(s,3H,–COCH₃),2.06(s,3H,–COCH),4.30(d,J＝6.00Hz,1H,–CH).5.71(s,1H,＝CH),6.60(d,J＝9.00Hz,2H,Ar–H),6.86(d,J＝6.00Hz,2H,Ar–H).

本发明所述的醋酸乌利司他相关手性杂质可通过本领域常规检测方法进行检测，如图1为醋酸乌利司他的高效液相色谱图，图2为杂质化合物K的液相色谱图，其他杂质化合物也可按照常规方法进行同样的检测。

Claims

1.手性杂质化合物或其盐，所述的化合物结构如下式化合物A-M任一所示：

化合物A:

化合物B:

化合物C:

化合物D:

化合物E:

化合物F:

化合物G:

化合物H:

化合物I:

化合物J:

化合物K:

化合物L:

化合物M:

。

2.根据权利要求1所述的手性杂质化合物或其盐，其中盐为无机酸盐或有机酸盐；无机酸选自盐酸、氢溴酸、硝酸、磷酸、偏磷酸、硫酸、亚硫酸或高氯酸；有机酸选自乙酸、三氟乙酸、丙酸、丙烯酸、己酸、环戊烷丙酸、羟乙酸、丙酮酸、草酸、(D)或(L)苹果酸、富马酸、马来酸、苯甲酸、羟基苯甲酸、γ-羟基丁酸、甲氧基苯甲酸、邻苯二甲酸、甲磺酸、乙磺酸、萘-1-磺酸、萘-2-磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸、酒石酸、柠檬酸、乳酸、肉桂酸、十二烷基硫酸、葡糖酸、谷氨酸、天冬氨酸、硬脂酸、扁桃酸、琥珀酸或丙二酸。

3.权利要求1-2所述的化合物或其盐的制备方法，其包括以下(1)、(2)或(3)：

(1)以3-缩酮，即中间体I为起始原料，加成反应得到中间体II，再在酸性条件下脱保护得到中间体III，经过水解氧化作用得到中间体IV，最后上保护基团得到杂质化合物A，经过氧化反应得到杂质化合物B与杂质化合物C，分别进行格氏化反应后得到杂质化合物D与杂质化合物E，在酸性条件下脱除保护基团得到杂质化合物G与杂质化合物H，最后经过乙酰化反应步骤得到杂质化合物J与杂质化合物K，其反应式如下：

(2)以3,20-双缩酮氧化产物，即中间体V为反应起始原料，经过格氏反应得到杂质化合物F，继而在酸性条件下脱除保护基团得到杂质化合物I，最后经过乙酰化反应步骤得到杂质化合物L，其反应式如下：

(3)以3,20-双缩酮氧化产物，即中间体VI为反应起始原料，经过格氏反应得到中间体VII，酸性条件下脱除保护基团得到中间体VIII，经过硝化反应得到中间体IX，通过乙酰化反应得到中间体X，最后经过还原反应得到杂质化合物M，其反应式如下：

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，

(1)中所述的加成反应：

化合物I溶于溶剂中，碱性条件下通入乙炔气体室温反应；优选的，所述溶剂为四氢呋喃，乙腈，丙酮，二氧六环中的一种或多种；优选的，碱选自氢氧化锂，氢氧化钠，氢氧化钾，乙醇钠，甲醇钠，叔丁醇钾，二异丙基氨基锂或正丁基锂，更优选叔丁醇钾；优选反应温度0-25℃。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，(1)中中间体II脱除保护基的反应：

化合物II在稀酸的条件下进行脱除保护基的反应；稀酸选自甲酸，醋酸，盐酸，硫酸、高氯酸或稀硝酸等，优选醋酸；优选的，反应温度为0-25℃，反应时间为1-4h。

6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，(1)中的中间体III的水解氧化反应：

化合物III溶于溶剂中，酸性条件下加入催化剂；优选的，酸选自甲酸，乙酸，盐酸，硫酸，硝酸或高氯酸；所选催化剂为硫酸汞或***；所选溶剂为四氢呋喃，乙腈，甲醇，乙醇，丙酮，二氯甲烷中的一种或多种；优选的，反应温度为30-60℃，反应时间为2-5h。

7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，

(1)中中间体IV上保护基团：

化合物IV溶于溶剂中，加入路易斯酸催化；路易斯酸选自三氯化铝，三氯化铁，四氯化钛，三氟化硼，五氟化锑，三氯化铟，优选三氯化铟；所选溶剂为二氯甲烷，四氢呋喃，乙腈，二氧六环中的一种或多种；优选的反应温度为30-80℃，反应时间为2-6h。

8.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，(1)中杂质化合物A的氧化反应：

化合物A溶于溶剂中，碱性条件下，加入氧化剂和催化剂室温下反应；碱选自吡啶，磷酸氢二钾，磷酸二氢钾，磷酸氢二钠或磷酸二氢钠；氧化剂为双氧水或间氯过氧苯甲酸，优选双氧水；催化剂为六氯丙酮或六氟丙酮等；所选溶剂为二氯甲烷，四氢呋喃，丙酮，乙腈中的一种或多种；反应温度-10-10℃。

9.根据权利要3所述的制备方法，其特征在于，(1)～(3)中以下任一的格氏化反应：

反应原料是在溶剂，催化剂催化下与4-(N,N一二甲基氨基)苯基溴化镁格氏试剂或者苯基溴化镁格氏试剂进行加成；优选地，催化剂为氯化亚铁，溴化亚铁，氯化锌，溴化锌，氯化亚铜或溴化亚铜；溶剂为二氯甲烷，四氢呋喃，乙腈，丙酮中的一种或多种；反应原料与格氏试剂摩尔比优选为1:1.5-5，反应温度优选为-10-40℃，反应时间优选为2-8h。

10.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，(1)～(3)中以下任一的在酸性条件下脱除保护基团的反应：

反应原料是在水和稀酸中搅拌下进行水解反应；优选地，所述的酸选自盐酸、硫酸或硫酸氢钾，优选为0.2-4N HCl溶液；优选地，反应温度-10-50℃，反应时间1-5h。

11.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，(1)～(3)中以下任一乙酰化反应：

是用冰醋酸、乙酰氯、高氯酸或乙酸酐中任一种或者两种以上作为酰化剂进行酰化反应；优选高氯酸和乙酸酐中加入冰醋酸；优选地，反应温度-40-25℃，优选-10-25℃；优选地，冰醋酸的量占冰醋酸、高氯酸、乙酸酐构成的乙酰化试剂体积总量的1-50％V/V，优选10-15％V/V；反应溶剂优选为二氯甲烷，四氢呋喃，丙酮，乙腈中的一种或多种。

12.根据权利要3所述的制备方法，其特征在于，(3)中所述的硝化反应：

在硝酸试剂和硫酸的条件下进行硝化反应，优选浓硫酸，反应温度优选为-15-10℃，反应时间优选为1-5h，所述的硝化试剂优选为浓硝酸、发烟硝酸或硝酸钾。

13.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，(3)中所述的还原反应：

化合物X溶于溶剂中，加入催化剂，进行还原反应；优选反应温度为25-40℃，反应时间为6-12h；优选的，催化剂为钯碳，铁粉，雷尼镍或锌粉，优选钯碳；还原剂为氢气，稀盐酸，醋酸或稀硫酸；溶剂为二氯甲烷，四氢呋喃，甲醇，乙醇，乙腈，二氧六环中的一种或多种。

14.权利要求1或2所述的化合物或其盐依照醋酸乌利司他制剂质量检测中作为杂质对照品的应用。