CN109348953A - 一种猕猴桃生根培养和炼苗移栽方法 - Google Patents

一种猕猴桃生根培养和炼苗移栽方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种猕猴桃生根培养和炼苗移栽方法，步骤如下：(1)选择组培苗，将组培苗接种于生根培养基中，密封进行生根培养；(2)生根培养：于温度为25±2℃，光照强度为1500‑2000Lx，光照时间为11‑13h，光培养30‑35d的条件下进行生根培养；(3)开盖炼苗：打开培养瓶盖，炼苗4‑10d；(4)细沙移栽：将开盖炼苗后的生根组培苗栽种于细沙中，马上进行浇灌，一次性将沙浇透，待沙快干时再进行浇水，于常温、自然光照、阴凉、略微潮湿的环境中进行细沙炼苗，细沙炼苗时间为3‑4周，得到猕猴桃幼苗；(5)田园土栽种：将猕猴桃幼苗栽种于田园土中。本发明方法缩短了‘杨氏金红50号’猕猴桃育苗周期，提高组培苗生根质量，移栽成活率高。

Description

一种猕猴桃生根培养和炼苗移栽方法
技术领域
本发明属于组织培养技术领域，具体涉及一种猕猴桃生根培养和炼苗移栽方法。
背景技术
中华猕猴桃(Actinidia chinensis)是中国特有的猕猴桃果种，口感独特，经济价值高，近年来种植规模逐步扩大。‘杨氏金红50号’猕猴桃(Actinidia chinensis‘YangshiJinhong 50’)是2013年由江苏省杨氏猕猴桃科学研究所从中华猕猴桃中选育出来的优良品种，果实单果重量平均在100g以上，金肉红心，不仅好看，更是好吃，甜度高，果肉细腻，被认为是有望超越‘海沃德’的新品种，农户评价较高，市场前景广阔。植物组织培养技术属无性繁殖技术，可有效保证猕猴桃果实的品质，在短期内大量繁殖，对猕猴桃果实的良种化发展有极大的促进作用。我国的猕猴桃组织培养技术虽日趋成熟，但猕猴桃雌雄异株，基因高度杂合，而组织培养体系又受到基因型的影响，现有技术难以全面适用，加上猕猴桃种子小且有休眠特性，单靠实生嫁接法难以满足农业生产需求。生根和炼苗是组织培养技术的关键及难点，关于‘杨氏金红50号’猕猴桃的组培苗生根及炼苗方法尚未有报道。
发明内容
为了解决现有技术中存在的问题，本发明提供了一种‘杨氏金红50号’猕猴桃组培苗生根和炼苗移栽的方法，该方法可缩短‘杨氏金红50号’猕猴桃育苗周期，提高组培苗生根质量，移栽成活率高。
本发明提供一种猕猴桃生根培养和炼苗移栽方法，步骤如下：
(1)选择组培苗，将组培苗接种于生根培养基中，密封进行生根培养；所述生根培养基为含0.9mg/L IBA的1/2MS培养基；
(2)生根培养：于温度为25±2℃，光照强度为1500-2000Lx，每天光照时间为11-13h，光培养30-35d的条件下进行生根培养；
(3)开盖炼苗：生根培养后，于温度为25±2℃，光照强度为1500-2000Lx，每天光照时间为11-13h的条件下进行开盖炼苗，开盖炼苗时间为4-10d；
(4)细沙移栽：将步骤(3)炼苗后的生根组培苗栽种于细沙中，马上进行浇灌，一次性将沙浇透，待沙快干时再进行浇水，于常温、自然光照、阴凉、略微潮湿的环境中进行细沙炼苗，细沙移栽时间为3-4周，得到猕猴桃幼苗；
(5)田园土栽种：将经过步骤(4)细沙炼苗的猕猴桃幼苗栽种于田园土中。
作为优选，步骤(1)中，生根培养基中，还含有30g/L的蔗糖和6g/L琼脂。
作为优选，步骤(2)，生根培养时间为35d。
作为优选，步骤(3)中，开盖炼苗过程中出现叶片萎缩的现象时，向培养基内注入自来水，水面高度刚没过培养基表面即可。
作为优选，步骤(3)中，开盖炼苗的时间为7天。
作为优选，步骤(4)中，细沙的装填高度为培养瓶自身高度的3/4。
作为优选，步骤(4)中，细沙移栽的时间为3-4周。
作为优选，步骤(5)中，所述田园土为黑色腐殖土或黄土。
作为优选，步骤(5)中，所述田园土为黑色腐殖土。
作为优选，步骤(5)中，所述田园土为黄土时，需要注意浇水的方式，尽量少让黄土溅到猕猴桃幼苗的叶片上，溅上后需要清洗幼苗叶片。
本发明涉及一种‘杨氏金红50号’猕猴桃组培苗生根培养和炼苗移栽的方法，该方法包括组培苗的选择、生根培养、开盖炼苗以及移栽入土的步骤，组培苗在培养室内短期生根培养后，进行培养室内开盖炼苗，再移入细沙中锻炼幼苗的适应性，最后移入田园土中栽种。该方法将生根与炼苗移栽科学结合，可在短期内获得大量的优质‘杨氏金红50号’苗木，成活率高，较之传统的实生嫁接法育苗周期更短，果实品质稳定，可实现一边生根培养一边炼苗移栽，育苗效率更高，有助于建立‘杨氏金红50号’猕猴桃育苗基地，为农业生产、农民增收提供科学指导。
本发明方法揭示了***部形成的愈伤组织大小对猕猴桃组培苗生根培养的影响，并以沙为壮苗基质，增强了‘杨氏金红50号’猕猴桃苗根的适应性。沙作为自然界常见的物质，较易获取，比传统使用珍珠岩增加土壤通透性方法更合理，且珍珠岩的生产过程中易产生污染物质，沙与环境无害，还可反复利用。整个方法过程中，生根培养时间为30-35d，开盖炼苗时间为4-10d，在培养室培养及炼苗的时间为34-45d(开盖炼苗最优为7d，生根培养最优为35d)，细沙移栽时间为21-28d，总需55-73d左右便可获得根部适应性强的优质‘杨氏金红50号’猕猴桃苗木。本发明方法缩短了‘杨氏金红50号’猕猴桃育苗周期，提高组培苗生根质量，移栽成活率高。此方法应用于‘杨氏金红50号’猕猴桃的组培生产线中，可为‘杨氏金红50号’优质苗木的生产及组培生产线的推广，奠定良好的基础。
附图说明
附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：
图1为使用不同激素的猕猴桃生根培养结果。
图2为细沙移栽3-4周的‘杨氏金红50号’猕猴桃幼苗。
图3为移栽至黑色腐殖土中3周后的‘杨氏金红50号’猕猴桃幼苗。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为市售。
MS培养基配方如下表所示，1/2MS培养基是指母液各成分的用量为MS的一半，MS培养基母液配方见表1：
表1 MS培养基母液配方
本发明的一种猕猴桃生根培养和炼苗移栽方法步骤如下：
(1)选择组培苗：在组织培养室中选择苗株高度在3cm以上，长势良好的组培苗作为生根培养材料，在超净工作台上剪取顶梢往下长2.5cm-3cm的部分，接种于灭菌后的生根培养基，加盖密封(培养基配制好后，先分装至各培养瓶，再灭菌，灭菌后冷却凝固，最后将外植体接种在培养基)。
生根培养基为含30g/L的蔗糖、6g/L琼脂、0.9mg/L IBA(吲哚丁酸)的1/2MS培养基。
培养瓶为高约10.25cm，口径约为6.48cm的透明玻璃瓶。
(2)生根培养：组织培养室温度为25±2℃，光照强度为1500-2000Lx，，每天光照时间为11-13h，光培养30-35d。
(3)开盖炼苗：打开密封的瓶盖，使组培苗与外界环境接触，在培养室内炼苗，使每棵生根苗充分接触光照，温度为25±2℃，光照强度为1500-2000Lx，每天光照时间为11-13h，开盖炼苗4-10d，如炼苗过程中苗出现叶片萎缩的现象，可适当向培养基内注入自来水，水面高度刚没过培养基表面即可。
(4)细沙移栽：在干净的培养瓶内装入细沙(细沙粒径无要求)，高度为培养瓶自身高度的3/4即可，将已在培养室内炼苗4-10d的生根组培苗栽种于培养瓶的沙内，然后马上用自来水浇灌，一次性将沙浇透，但水不能过量(肉眼可观察到沙湿润，沙粒间有水印即可)，保证沙层之间有一定量的无水细孔。细沙炼苗的时间为3-4周，放置于常温、自然光照、阴凉、略微潮湿(无具体要求，不让沙干的太快就好了)的大棚内(大棚的透光性好，比如采用透光性好的塑料或者玻璃为保温材料)，或者放置于室外遮阴处，整个炼苗过程需先将沙浇透，待沙快干(沙不湿润，无水渍，肉眼可观测到)时再进行第二次浇水。
(5)田园土栽种：经过细沙移栽的‘杨氏金红50号’猕猴桃幼苗根系健壮，栽种于室外田地田园土中，栽种后浇水使苗附近的土保持湿润，田园土优选黑色腐殖土或黄土。
实施例1
本发明的一种猕猴桃生根培养和炼苗移栽方法步骤如下：
(1)选择组培苗：在组织培养室中选择苗株高度在3cm以上，长势良好的组培苗作为生根培养材料，在超净工作台上剪取顶梢往下长2.5cm-3cm的部分，接种于灭菌后的生根培养基，加盖密封。
生根培养基为含30g/L的蔗糖、6g/L琼脂、0.9mg/L IBA(吲哚丁酸)的1/2MS培养基。
培养瓶为高约10.25cm，口径约为6.48cm的透明玻璃瓶。
(2)生根培养：组织培养室温度为25℃，光照强度为1800Lx，，每天光照时间为12h，光培养35d。
(3)开盖炼苗：打开密封的瓶盖，在培养室内炼苗，使每棵生根苗充分接触光照，温度为25℃，光照强度为1800Lx，，每天光照时间为12h，开盖炼苗7d，如炼苗过程中苗出现叶片萎缩的现象，可适当向培养基内注入自来水，水面高度刚没过培养基表面即可。
(4)细沙移栽：在干净的培养瓶内装入细沙(细沙粒径无要求)，高度为培养瓶自身高度的3/4即可，将已在培养室内炼苗7d的生根组培苗栽种于培养瓶的沙内，然后马上用自来水浇灌，一次性将沙浇透，但水不能过量(肉眼可观察到沙湿润，沙粒间有水印即可)，保证沙层之间有一定量的无水细孔。细沙炼苗的时间为4周，放置于常温、自然光照、阴凉、略微潮湿(无具体要求，不让沙干的太快就好了)的大棚内(大棚透光性好)，或者放置于室外遮阴处，整个炼苗过程需先将沙浇透，待沙快干(沙不湿润，无水渍，肉眼可观测到)时再进行第二次浇水。
(5)田园土栽种：经过细沙移栽的‘杨氏金红50号’猕猴桃幼苗根系健壮，栽种于室外黑色腐殖土中，栽种后浇水使苗附近的土保持湿润。
以下为对上述培养方法的具体操作方法：
南阳师范学院组织培养实验室培养了约3000棵‘杨氏金红50号’猕猴桃组培苗，生根培养与炼苗使用1800棵。试验时间为2018年4月-8月。
(1)选择组培苗：2018年4月15日，选择株高超3cm的‘杨氏金红50号’猕猴桃组培苗1800棵，在超净工作台上剪取顶梢往下长2.5cm-3cm的部分，***已经配好的培养基中，每瓶接种1-2棵。
试验分为两组，分别使用不同激素，试验一组使用IBA(吲哚丁酸)，试验二组使用NAA(萘乙酸)，培养基其余组分均相同。
共设20个梯度，激素浓度分别为NAA：0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1mg/L，IBA：0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1mg/L。试验每个梯度接种30棵组培苗，重复3次。
(2)生根培养：在生根培养基生长的组培苗生根情况会受茎段基部形成的愈伤组织大小的影响。
试验一组：NAA梯度的愈伤组织更大，多高出培养基，致使组培苗的根多生长在培养基表面(见图1中的A图)，看似根毛旺盛，但在开盖炼苗过程中，苗的根不能扎进培养基内，导致无法很好的吸收培养基的养分，极易干枯，炼苗成功率低。
试验二组：IBA梯度的愈伤组织相对较小，根多处于培养基内部(见图1中的B图)，炼苗过程中根可充分吸收培养基养分，可使根更强壮，达到炼苗的效果。
NAA和IBA梯度中，两者的最佳梯度均为浓度为0.9mg/L的梯度，基本特点是愈伤组织相对较小，生根条数最多，根长最长。
图1为使用不同激素的猕猴桃生根培养结果；其中，A图为试验一组的生根培养结果，B图为试验二组的生根培养结果。
(3)开盖炼苗
试验一组：根长在培养基外的苗易干枯，炼苗时间不能超过4d，试验一组设0d、3d、4d，3种开盖炼苗时间，苗进入到细沙炼苗阶段的成活率分别为：20％、26.67％、40％。
试验二组：根长在培养基内部的苗，炼苗时间可长达11d，试验二组设4d、5d、6d、7d、8d、9d、10d、11d，8种开盖炼苗时间，苗进入到细沙炼苗阶段的成活率分别为：76.67％、81.67％、83.33％、100％、85％、76.67％、75％、40％，呈现先升高再下降的规律。可见，在培养室内开盖炼苗4-10d的效果均较好，6-8d的效果更好一些，而开盖炼苗7d的效果是最好的。
(4)细沙移栽
试验一组：由根长在培养基外的苗开盖炼苗得来，特点为愈伤组织大、根条数多、根短，在装了细沙的培养瓶中，经3-4周的自然适应锻炼后，根炼苗效果不明显，根只有略微伸长(见图2)。
试验二组：由根长在培养基内部的苗开盖炼苗得来，特点是愈伤小、根条数相对少些、根长、健壮、具有良好的吸收养分能力。在装了细沙的培养瓶中，经3-4周的自然适应锻炼后，根则有明显伸长，根系布满整个培养瓶，根的适应能力显著增强，更移栽入土(见图2)。
图2为细沙移栽3-4周的‘杨氏金红50号’猕猴桃幼苗；其中，左边为试验一组的移栽效果，右边为试验二组的移栽效果。
(5)田园土栽种：试验选择了两种土：黑色腐殖土和黄土。黑色腐殖土的移栽成活率基本达到100％，黄土的移栽成活率达到97.78％，成活率均较高，黑色腐殖土更优。
移栽至黄土时应注意浇水的方式，尽量少让黄土溅到猕猴桃幼苗的叶片上，溅上后可清洗一下叶子，因为黄土覆盖叶子表面后，由于其自身黏度较大，抑制了叶片的呼吸和光合作用，导致叶片枯黄，如果黏在芽尖上，则可能导致苗的死亡，而黑色的腐殖土不会出现这种情况。
图3为移栽至黑色腐殖土中3周后的‘杨氏金红50号’猕猴桃幼苗。
详细试验数据见表2。
表2
实施例2
本发明的一种猕猴桃生根培养和炼苗移栽方法步骤如下：
(1)选择组培苗：在组织培养室中选择苗株高度在3cm以上，长势良好的组培苗作为生根培养材料，在超净工作台上剪取顶梢往下长2.5cm-3cm的部分，接种于灭菌后的生根培养基，然后将生根培养基装于培养瓶中，加盖密封。
生根培养基为含30g/L的蔗糖、6g/L琼脂、0.9mg/L IBA(吲哚丁酸)的1/2MS培养基。
培养瓶为高约10.25cm，口径约为6.48cm的透明玻璃瓶。
(2)生根培养：组织培养室温度为27℃，光照强度为1500Lx，每天光照时间为11h，光培养33d。
(3)开盖炼苗：打开密封的瓶盖，在培养室内炼苗，使每棵生根苗充分接触光照，温度为27℃，光照强度为1500Lx，每天光照时间为13h，开盖炼苗4d，如炼苗过程中苗出现叶片萎缩的现象，可适当向培养基内注入自来水，水面高度刚没过培养基表面即可。
(4)细沙移栽：在干净的培养瓶内装入细沙(细沙粒径无要求)，高度为培养瓶自身高度的3/4即可，将已在培养室内炼苗4d的生根组培苗栽种于培养瓶的沙内，然后马上用自来水浇灌，一次性将沙浇透，但水不能过量(肉眼可观察到沙湿润，沙粒间有水印即可)，保证沙层之间有一定量的无水细孔。细沙炼苗的时间为3周，放置于常温、自然光照、阴凉、略微潮湿(无具体要求，不让沙干的太快就好了)的大棚内(大棚透光性好)，或者放置于室外遮阴处，整个炼苗过程需先将沙浇透，待沙快干时再进行第二次浇水。
(5)田园土栽种：经过细沙移栽的‘杨氏金红50号’猕猴桃幼苗根系健壮，栽种于室外田地黄土中，栽种后浇水使苗附近的土保持湿润。移栽至黄土时应注意浇水的方式，尽量少让黄土溅到猕猴桃幼苗的叶片上，溅上后可清洗一下叶子，因为黄土覆盖叶子表面后，由于其自身黏度较大，抑制了叶片的呼吸和光合作用，导致叶片枯黄，如果黏在芽尖上，则可能导致苗的死亡。
实施例3
本发明的一种猕猴桃生根培养和炼苗移栽方法步骤如下：
(1)选择组培苗：在组织培养室中选择苗株高度在3cm以上，长势良好的组培苗作为生根培养材料，在超净工作台上剪取顶梢往下长2.5cm-3cm的部分，接种于灭菌后的生根培养基，然后将生根培养基装于培养瓶中，加盖密封。
生根培养基为含30g/L的蔗糖、6g/L琼脂、0.9mg/L IBA(吲哚丁酸)的1/2MS培养基。
培养瓶为高约10.25cm，口径约为6.48cm的透明玻璃瓶。
(2)生根培养：组织培养室温度为23℃，光照强度为2000Lx，每天光照时间为13h，光培养30d。
(3)开盖炼苗：打开密封的瓶盖，在培养室内炼苗，使每棵生根苗充分接触光照，温度为24℃，光照强度为1600Lx，，每天光照时间为11h，开盖炼苗10d，如炼苗过程中苗出现叶片萎缩的现象，可适当向培养基内注入自来水，水面高度刚没过培养基表面即可。
(4)细沙移栽：在干净的培养瓶内装入细沙(细沙粒径无要求)，高度为培养瓶自身高度的3/4即可，将已在培养室内炼苗10d的生根组培苗栽种于培养瓶的沙内，然后马上用自来水浇灌，一次性将沙浇透，但水不能过量(肉眼可观察到沙湿润，沙粒间有水印即可)，保证沙层之间有一定量的无水细孔。细沙移栽的时间为3周，放置于常温、自然光照、阴凉、略微潮湿(无具体要求，不让沙干的太快就好了)的大棚内(大棚透光性好)，或者放置于室外遮阴处，整个移栽过程需先将沙浇透，待沙快干时再进行第二次浇水。
(5)田园土栽种：经过细沙移栽的‘杨氏金红50号’猕猴桃幼苗根系健壮，栽种于室外田地黑色腐殖土中，栽种后浇水使苗附近的土保持湿润。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种猕猴桃生根培养和炼苗移栽方法，其特征在于：步骤如下：
(1)选择组培苗，将组培苗接种于生根培养基中，密封进行生根培养；所述生根培养基为含0.9mg/L IBA的1/2MS培养基；
(2)生根培养：于温度为25±2℃，光照强度为1500-2000Lx，每天光照时间为11-13h，光培养30-35d的条件下进行生根培养；
(3)开盖炼苗：生根培养后，于温度为25±2℃，光照强度为1500-2000Lx，每天光照时间为11-13h的条件下进行开盖炼苗，开盖炼苗时间为4-10d；
(4)细沙移栽：将步骤(3)炼苗后的生根组培苗栽种于细沙中，马上进行浇灌，一次性将沙浇透，待沙快干时再进行浇水，于常温、自然光照、阴凉、略微潮湿的环境中进行细沙移栽，细沙移栽时间为3-4周，得到猕猴桃幼苗；
(5)田园土栽种：将经过步骤(4)细沙炼苗的猕猴桃幼苗栽种于田园土中。
2.根据权利要求1所述的一种猕猴桃生根培养和炼苗移栽方法，其特征在于：步骤(1)中，生根培养基中，还含有30g/L的蔗糖和6g/L琼脂。
3.根据权利要求1或2所述的一种猕猴桃生根培养和炼苗移栽方法，其特征在于：步骤(2)中，生根培养的时间为35d。
4.根据权利要求1或2所述的一种猕猴桃生根培养和炼苗移栽方法，其特征在于：步骤(3)中，开盖炼苗过程中出现叶片萎缩的现象时，向培养基内注入自来水，水面高度刚没过培养基表面即可。
5.根据权利要求1或2所述的一种猕猴桃生根培养和炼苗移栽方法，其特征在于：步骤(3)中，开盖炼苗的时间为7天。
6.根据权利要求1或2所述的一种猕猴桃生根培养和炼苗移栽方法，其特征在于：步骤(4)中，细沙的装填高度为培养瓶自身高度的3/4。
7.根据权利要求1或2所述的一种猕猴桃生根培养和炼苗移栽方法，其特征在于：步骤(4)中，细沙移栽的时间为3-4周。
8.根据权利要求1或2所述的一种猕猴桃生根培养和炼苗移栽方法，其特征在于：步骤(5)中，所述田园土为黑色腐殖土或黄土。
9.根据权利要求1或2所述的一种猕猴桃生根培养和炼苗移栽方法，其特征在于：步骤(5)中，所述移栽田园土为黑色腐殖土。
10.根据权利要求1或2所述的一种猕猴桃生根培养和炼苗移栽方法，其特征在于：步骤(5)中，所述田园土为黄土时，需要注意浇水的方式，尽量少让黄土溅到猕猴桃幼苗的叶片上，溅上后需要清洗幼苗叶片。
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