CN109270064B - 一种基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂及其制备方法与应用 - Google Patents
一种基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂及其制备方法与应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂及其制备方法与应用，属于生物医学技术领域。本发明提供的基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂的制备方法，使用粒径均匀的葡聚糖颗粒，取材方便、微球的制备过程简单、可以大规模的生产、价格便宜；通过简单的过程，能大量快速的制备实验效果较佳的免疫沉淀试剂；将制备的基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂在实验中进行应用，将出结果准确可靠，具有较好的推广应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及生物医学技术领域，具体而言，涉及一种基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂及其制备方法与应用。
背景技术
免疫沉淀(Immunoprecipitation)是生命科学研究过程中用于研究蛋白质与蛋白质、蛋白质与DNA和蛋白质与RNA相互作用的经典方法，也是确定目标蛋白与靶分子在生理条件下相互作用的有效方法。其原理是利用抗体与靶分子的特异性结合，然后加入特异性吸附IgG的Fc结构域的protein A/G，而protein A/G偶联在固相载体的表面，通过离心或者磁性分离器进行免疫复合物的分离。因此，该方法为阐述生命过程中的相互调节网络提供技术支撑。
免疫沉淀技术也是目前抗体纯化不可或缺的方法之一。在这一方法中，proteinA/G共价偶联到固相介质上，如Agarose beads或Magnetic beads，当腹水或者杂交瘤细胞上清从固相介质富集流过时，抗体与protein A/G结合，进而达到富集抗体的目的，该方法操作简便、纯化效率较高。
当前，protein A/G主要以Agarose beads或Magnetic beads为固相介质，它们的制备过程相对复杂、粒径不均一、分离时压力变化大导致分离效果较差，并且价格昂贵。
发明内容
本发明的目的在于提供了一种基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂的制备方法，该制备方法通过简单的制备过程，能快速制备粒径均匀的固相介质，原料便宜。
本发明的第二目的在于提供一种基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂，该试剂粒径均一，避免分离时压力变化大导致粒径不一致。
本发明的第三目的在于提供上述的基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂在免疫沉淀试验中的应用。
为了实现本发明的上述目的，采用以下技术方案：
一种基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂的制备方法，包括以下步骤：
取葡聚糖洗涤并加水溶解、超声分散，得到葡聚糖悬液；
将葡聚糖悬液与碳二亚胺混合，调节pH至4.3-4.6值并进行第一孵育、离心并洗涤得到葡聚糖微球沉淀；
重悬葡聚糖微球沉淀并与重组蛋白混合，调节pH值至4.3-4.6并进行第二孵育、离心得到葡聚糖微球-重组蛋白沉淀；
用PBS缓冲液洗涤葡聚糖微球-重组蛋白沉淀后重悬，得到葡聚糖微球-重组蛋白复合物，并制备基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂。
一种基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂，基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂由上述的基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂的制备方法制备得到。
上述的基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂在免疫沉淀试验中的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果包括：本发明提供的基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂的制备方法，使用粒径均匀的葡聚糖颗粒，取材方便、微球的制备过程简单、可以大规模的生产、价格便宜；通过简单的过程，能大量快速的制备实验效果较佳的免疫沉淀试剂；将制备的基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂在实验中进行应用，将出结果准确可靠，具有较好的推广应用价值。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为本发明实施例提供葡聚糖微球和proteinA/G耦联前后对比图；
图2为本发明实验例提供的样品纯化前后western blot实验结果图；
图3为本发明实验例提供的葡聚糖微球-重组蛋白复合物免疫沉淀实验结果图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。因此，以下对在附图中提供的本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
下面对本发明实施例的一种基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂及其制备方法与应用进行具体说明。
一种基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂的制备方法，包括以下步骤：
取葡聚糖洗涤并加水溶解、超声分散，得到葡聚糖悬液；
将葡聚糖悬液与碳二亚胺混合，调节pH至4.3-4.6值并进行第一孵育、离心并洗涤得到葡聚糖微球沉淀；
重悬葡聚糖微球沉淀并与重组蛋白混合，调节pH值至4.3-4.6并进行第二孵育、离心得到葡聚糖微球-重组蛋白沉淀；
用PBS缓冲液洗涤葡聚糖微球-重组蛋白沉淀后重悬，得到葡聚糖微球-重组蛋白复合物，并制备基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂。
实验中的葡聚糖可以是购买或者自制；本实验中选用酵母葡聚糖并通过自制得到。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，重组蛋白包为protein A/G、protein A/G-荧光基团或二抗中的一种。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，荧光基团为FITC、FAM、MGB、VIC、TET、JOE、HEX、CY3、CY5、ROX、RED610、TEXASRED、RED670或NED中一种。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，超声分散的时间为27-36min。
通过超声分散，能将凝聚成团的葡聚糖颗粒分散形成均匀的葡聚糖溶液，有利于后续实验的进行。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，调节pH至4.3-4.6值并进行第一孵育时选用HCl进行调节；第一孵育在室温孵育15-20h。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，调节pH值至4.3-4.6并进行第二孵育选用NaOH进行调节，第二孵育在室温下孵育4-8h。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，第二震荡培养的温度为20-35℃，培养时间为68-75h。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，进行离心并洗涤得到葡聚糖微球沉淀的转速为4700-5200rpm，时间为100-150s。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，洗涤葡聚糖微球-重组蛋白沉淀后，选用含0.02％的叠氮化钠的PBS缓冲液进行重悬。
利用含有叠氮化钠的PBS缓冲液进行重悬，能使得制备得到的基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂稳定的保存。
一种基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂，基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂由上述的基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂的制备方法制备得到。
上述的基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂在免疫沉淀试验中的应用。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
本实施例提供一种基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂的制备方法，包括以下步骤：
酵母葡聚糖的制备：
1.1将100g高活性酵母加入到1L的NaOH(1M/L)中，磁力搅拌器90℃加热搅拌1h；
1.2在3000rpm的转速下离心5min，弃上清加入900mL去离子水，并用HCl调节pH至4.5，定容至1L，磁力搅拌器70℃加热搅拌1h；
1.3在3000rpm的转速下离心5min，收集沉淀，去离子水洗涤3次；
1.4离心收集沉淀，异丙醇洗涤4次；离心收集沉淀，丙酮洗涤2次；
1.5收集沉淀并自然干燥后将，于干燥箱中干燥24h除去丙酮，得到葡聚糖粉末。
葡聚糖微球-重组蛋白复合物的制备
2.1称取葡聚糖粉末于离心管中，去离子水洗涤3次；
2.2将2.1中的沉淀加入去离子水并超声分散27min，得到葡聚糖悬液；
2.3将葡聚糖悬液与碳二亚胺混合，完全连接后，用HCl调节pH至4.3，室温搅拌15h；
2.4在5200rpm离心100s，收集沉淀，去离子水洗涤3次；
2.5用去离子水重悬沉淀后，加入重组蛋白proteinA/G混匀后，用NaOH调节pH值至4.6后，室温搅拌孵育8h；
2.6离心收集沉淀后用无菌的PBS缓冲液洗涤3次；
2.7加入含0.02％叠氮化钠PBS溶液进行重悬，得到葡聚糖微球-重组蛋白复合物。
可以将葡聚糖微球-重组蛋白复合物制备得到基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂。
上述的基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂在免疫沉淀试验中的应用。
实施例2
本实施例提供一种基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂的制备方法，包括以下步骤：
酵母葡聚糖的制备：
1.1将100g高活性酵母加入到1的LNaOH(1M/L)中，磁力搅拌器90℃加热搅拌1h；
1.2在3000rpm的转速下离心5min，弃上清加入900mL去离子水，并用HCl调节pH至4.5，定容至1L，磁力搅拌器70℃加热搅拌1h；
1.3在3000rpm的转速下离心5min，收集沉淀，去离子水洗涤3次；
1.4离心收集沉淀，异丙醇洗涤4次；离心收集沉淀，丙酮洗涤2次；
1.5收集沉淀并自然干燥后将，于干燥箱中干燥24h除去丙酮，得到葡聚糖粉末。
葡聚糖微球-重组蛋白复合物的制备
2.1称取葡聚糖粉末于离心管中，去离子水洗涤3次；
2.2将2.1中的沉淀加入去离子水并超声分散36min，得到葡聚糖悬液；
2.3将葡聚糖悬液与碳二亚胺混合，完全连接后，用HCl调节pH至4.6，室温搅拌孵育20h；
2.4在4700rpm离心150s，收集沉淀，去离子水洗涤3次；
2.5用去离子水重悬沉淀后，加入重组蛋白proteinA/G-荧光基团(其中荧光基团可以选自：FITC、FAM、MGB、VIC、TET、JOE、HEX、CY3、CY5、ROX、RED610、TEXASRED、RED670或NED中一种)混匀后，用NaOH调节pH值至4.3后，室温搅拌孵育4h；
2.6离心收集沉淀后用无菌的PBS缓冲液洗涤3次；
2.7加入含0.02％叠氮化钠PBS溶液进行重悬，得到葡聚糖微球-重组蛋白复合物。
可以将葡聚糖微球-重组蛋白复合物制备得到基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂。
上述的基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂在免疫沉淀试验中的应用。
实施例3
本实施例提供一种基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂的制备方法，包括以下步骤：
酵母葡聚糖的制备：
1.1将100g高活性酵母加入到1L的NaOH(1M/L)中，磁力搅拌器90℃加热搅拌1h；
1.2在3000rpm的转速下离心5min，弃上清加入900mL去离子水，并用HCl调节pH至4.5，定容至1L，磁力搅拌器70℃加热搅拌1h；
1.3在3000rpm的转速下离心5min，收集沉淀，去离子水洗涤3次；
1.4离心收集沉淀，异丙醇洗涤4次；离心收集沉淀，丙酮洗涤2次；
1.5收集沉淀并自然干燥后将，于干燥箱中干燥24h除去丙酮，得到葡聚糖粉末。
葡聚糖微球-重组蛋白复合物的制备
2.1称取葡聚糖粉末于离心管中，去离子水洗涤3次；
2.2将2.1中的沉淀加入去离子水并超声分散30min，得到葡聚糖悬液；
2.3将葡聚糖悬液与碳二亚胺混合，完全连接后，用HCl调节pH至4.5，室温搅拌孵育16h；
2.4在5000rpm离心120s，收集沉淀，去离子水洗涤3次；
2.5用去离子水重悬沉淀后，加入重组蛋白proteinA/G-荧光基团(其中荧光基团可以选自：FITC、FAM、MGB、VIC、TET、JOE、HEX、CY3、CY5、ROX、RED610、TEXASRED、RED670或NED中一种)混匀后，用NaOH调节pH值至4.5后，室温搅拌孵育6h；
2.6离心收集沉淀后用无菌的PBS缓冲液洗涤3次；
2.7加入含0.02％叠氮化钠PBS溶液进行重悬，得到葡聚糖微球-重组蛋白复合物，并制备基于葡聚糖微球的免疫沉淀。
可以将葡聚糖微球-重组蛋白复合物制备得到基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂。
上述的基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂在免疫沉淀试验中的应用。
实施例4
本实施例提供一种基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂的制备方法，包括以下步骤：
酵母葡聚糖的制备：
1.1将100g高活性酵母加入到1L的NaOH(1M/L)中，磁力搅拌器90℃加热搅拌1h；
1.2在3000rpm的转速下离心5min，弃上清加入900mL去离子水，并用HCl调节pH至4.5，定容至1L，磁力搅拌器70℃加热搅拌1h；
1.3在3000rpm的转速下离心5min，收集沉淀，去离子水洗涤3次；
1.4离心收集沉淀，异丙醇洗涤4次；离心收集沉淀，丙酮洗涤2次；
1.5收集沉淀并自然干燥后将，于干燥箱中干燥24h除去丙酮，得到葡聚糖粉末。
葡聚糖微球-重组蛋白复合物的制备
2.1称取葡聚糖粉末于离心管中，去离子水洗涤3次；
2.2将2.1中的沉淀加入去离子水并超声分散32min，得到葡聚糖悬液；
2.3将葡聚糖悬液与碳二亚胺混合，完全连接后，用HCl调节pH至4.4，室温搅拌孵育17h；
2.4在5100rpm离心140s，收集沉淀，去离子水洗涤3次；
2.5用去离子水重悬沉淀后，加入重组蛋白proteinA/G-荧光基团(其中荧光基团可以选自：FITC、FAM、MGB、VIC、TET、JOE、HEX、CY3、CY5、ROX、RED610、TEXASRED、RED670或NED中一种)混匀后，用NaOH调节pH值至4.5后，室温搅拌孵育8h；
2.6离心收集沉淀后用无菌的PBS缓冲液洗涤3次；
2.7加入含0.02％叠氮化钠PBS溶液进行重悬，得到葡聚糖微球-重组蛋白复合物，并制备基于葡聚糖微球的免疫沉淀。
可以将葡聚糖微球-重组蛋白复合物制备得到基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂。
上述的基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂在免疫沉淀试验中的应用。
实验例
本实验例以实施例3的制备方法具体制备葡聚糖微球-重组蛋白复合物和基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂。并进行抗体纯化实验和免疫沉淀，检验基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂的效果。
葡聚糖微球-重组蛋白复合物的制备
2.1称取葡聚糖粉末30mg于离心管中，去离子水洗涤3次；
2.2将2.1中的沉淀加入去离子水6mL并超声分散30min，使微球完全分散，得到葡聚糖悬液；
2.3将葡聚糖悬液与120mg碳二亚胺混合，完全连接后，用HCl调节pH至4.5，室温搅拌孵育16h；
2.4在5000rpm离心120s，收集沉淀，去离子水洗涤3次；
2.5用15mL去离子水重悬沉淀后，加入1mL重组蛋白proteinA/G-FITC(2mg/mL)混匀后，用NaOH调节pH值至4.5后，室温搅拌孵育6h；
2.6离心收集沉淀后用无菌的PBS缓冲液洗涤3次；
2.7加入5mL含0.02％叠氮化钠PBS溶液进行重悬，得到葡聚糖微球-重组蛋白复合物。
通过葡聚糖微球与重组蛋白进行耦联，制备得到葡聚糖微球-重组蛋白复合物，从图1可以看出，耦联前后的变化。
将制备的葡聚糖微球-重组蛋白复合物在抗体纯化中的应用
3.1分别取4μg小鼠、兔子和山羊IgG加入到800μL的PBS溶液中稀释；
3.2分别向装有小鼠、兔子和山羊IgG的试管中加入80μL葡聚糖微球-重组蛋白复合物(10mg/mL)，4℃孵育4h；
3.3在3000rpm条件下离心5min，收集沉淀，并PBS洗涤3次；
3.4将纯化前的小鼠、兔子和山羊IgG样品和纯化后的小鼠、兔子和山羊IgG样品分别进行SDS-PAGE凝胶电泳检测。
SDS-PAGE凝胶电泳检测结果如图2所示，可以看出，通过纯化后的小鼠、兔子和山羊IgG样品调到更清晰，浓度明显提高。
葡聚糖微球-重组蛋白复合物在免疫沉淀中的应用
4.1培养HEK293T细胞，利用lipofectamine 2000转染pCMV6-mANKIB1质粒(表达myc-ANKIB1-FLAG融合蛋白)；
4.2转染24h后，加入500μL的RIPA裂解液裂解细胞，裂解15min，12000rpm离心10mn，收集上清；
4.3向上清中加入4μg的myc抗体孵育和80μL的葡聚糖微球-重组蛋白复合物(10mg/mL)，孵育4h；
4.4将沉淀前和沉淀后的样品分别进行western blot检测沉淀效果。
western blot检测结果如图3所示，Input：pCMV6-mANKIB1转染HEK293T细胞的裂解上清，FLAG抗体检测泳道；IgG：兔子的IgG沉淀，FLAG抗体检测泳道，该泳道为阴性对照。IP:为myc抗体沉淀，FLAG抗体检测myc-ANKIB1-FLAG融合蛋白。可以看出，通过抗体沉淀后，浓度面提高，检测条带清晰可见。
综上所述，本发明实施例提供的基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂的制备方法，使用的酵母菌体为日常生活中使用的发酵粉，价格便宜。该方法的制备过程简单，过程中使用的试剂和设备均在实验室常见，不需要任何高端精密设备。且使用前不需要任何操作，可直接使用，简单快捷，减少实验时间。酵母菌体大小均一。因而制备的GPs粒径在3-4μm左右，该技术避免了传统搅拌乳化制备agarose beads粒径不均一，压力不均造成分离效果较差的现象。GPs不仅可以作为一种载体，而且还是FDA批准的一种膳食营养品。酸碱法是一种快速、高效，并能够得到纯度较高的GPs，适用于大规模的葡聚糖的提取纯化。适用于多种靶蛋白的偶联，如生物素、链霉卵白素。另外，该方法使用的碳二亚胺是一种生物兼容性较好，常常作为多肽和载体蛋白或者抗体标记中偶联剂。实验反应条件温和，步骤简单，对靶蛋白的活性影响较小。不仅适用于常规的免疫沉淀技术，而且可以应用于免疫共沉淀研究蛋白质之间的相互作用，并能够使用于抗体的纯化。
以上所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
Claims (10)
1.一种基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
取葡聚糖洗涤并加水溶解、超声分散，得到葡聚糖悬液；
将所述葡聚糖悬液与碳二亚胺混合，调节pH值至4.3-4.6并进行第一孵育、离心并洗涤得到葡聚糖微球沉淀；
重悬所述葡聚糖微球沉淀并与重组蛋白混合，调节pH值至4.3-4.6并进行第二孵育、离心得到葡聚糖微球-重组蛋白沉淀；
用PBS缓冲液洗涤所述葡聚糖微球-重组蛋白沉淀后重悬，得到葡聚糖微球-重组蛋白复合物，并制备基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂。
2.根据权利要求1所述的基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂的制备方法，其特征在于，所述重组蛋白为protein A/G、protein A/G-荧光基团或二抗中的一种。
3.根据权利要求2所述的基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂的制备方法，其特征在于，所述荧光基团为FITC、FAM、MGB、VIC、TET、JOE、HEX、CY3、CY5、ROX、RED610、TEXASRED、RED670或NED中一种。
4.根据权利要求1所述的基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂的制备方法，其特征在于，所述超声分散的时间为27-36min。
5.根据权利要求1所述的基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂的制备方法，其特征在于，调节pH值至4.3-4.6并进行所述第一孵育时选用HCl进行调节；所述第一孵育在室温孵育15-20h。
6.根据权利要求1所述的基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂的制备方法，其特征在于，调节pH值至4.3-4.6并进行所述第二孵育选用NaOH进行调节，所述第二孵育在室温下孵育4-8h。
7.根据权利要求1所述的基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂的制备方法，其特征在于，进行所述离心并洗涤得到所述葡聚糖微球沉淀的转速为4700-5200rpm，时间为100-150s。
8.根据权利要求1所述的基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂的制备方法，其特征在于，洗涤所述葡聚糖微球-重组蛋白沉淀后，选用含0.02％的叠氮化钠的PBS缓冲液进行所述重悬。
9.一种基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂，其特征在于，所述基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂由权利要求1-8任一项所述的基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂的制备方法制备得到。
10.如权利要求9所述的基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂在免疫沉淀试验中的应用。
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| CN201811336159.5A Active CN109270064B (zh) | 2018-11-12 | 2018-11-12 | 一种基于葡聚糖微球的免疫沉淀试剂及其制备方法与应用 |
Country Status (1)
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|---|---|
| CN (1) | CN109270064B (zh) |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1041825A (zh) * | 1988-10-11 | 1990-05-02 | 库尔特公司 | 生物可容的中介覆盖的免疫反应剂载体及其制备方法 |
| CN1142775A (zh) * | 1993-12-08 | 1997-02-12 | 免疫医学股份有限公司 | 免疫结合物的制备和使用 |
| CN101143888A (zh) * | 2007-10-23 | 2008-03-19 | 北京博迈世纪生物技术有限公司 | 一种免疫纳米磁性葡聚糖微球的制备方法 |
| CN102144161A (zh) * | 2008-09-04 | 2011-08-03 | 贝克曼考尔特公司 | 泛激酶活化与信号通路的评估 |
| CN102942627A (zh) * | 2012-03-05 | 2013-02-27 | 北京北方生物技术研究所 | 免疫亲和沉淀法纯化抗体 |
| CN103926398A (zh) * | 2014-04-30 | 2014-07-16 | 洛阳惠尔纳米科技有限公司 | 一种免疫磁珠的制备方法 |
-
2018
- 2018-11-12 CN CN201811336159.5A patent/CN109270064B/zh active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 阿尔采末病淀粉样前体蛋白(APP)和早老素-1(PS-1)双重基因稳定转染细胞系的建立;梁平 等;《中国药理学通报》;20040531;第20卷(第5期);第509页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN109270064A (zh) | 2019-01-25 |
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