CN109161578A - 一种汉麻杆芯纤维膜的环保功能检测方法 - Google Patents

一种汉麻杆芯纤维膜的环保功能检测方法 Download PDF

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CN109161578A CN201810947162.4A CN201810947162A CN109161578A CN 109161578 A CN109161578 A CN 109161578A CN 201810947162 A CN201810947162 A CN 201810947162A CN 109161578 A CN109161578 A CN 109161578A
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贾士杰
王艳华
蔡光明
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    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
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Abstract

本发明公开了属于空间环境净化的环保技术领域的一种汉麻杆芯纤维膜的环保功能检测方法。包括受试药物汉麻杆芯纤维膜的制备和汉麻杆芯提取物的体外抗菌活性的检测，***杆芯黏胶纤维对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌和白色念珠菌有较明显抑制和杀灭作用，对厌氧菌和需氧菌都有抑制和灭杀作用。本发明采用汉麻杆芯纤维制成天然纤维膜对室外空气中因雾霾有害微粒Pm2.5、甲醛等产生的室内异味，具有的特殊吸附滤除效果，且具有明显的除菌抑菌作用，从而达到净化环境、保护人类健康、预防疾病的目的。设计中所用到的各种材料均为环保材料。可广泛应用于空气与居住环境净化以及相关隔离净化。

Description

一种汉麻杆芯纤维膜的环保功能检测方法
技术领域
本发明属于空间环境净化的环保技术领域，特别涉及一种汉麻杆芯纤维 膜的环保功能检测方法。
背景技术
雾霾来源是工业排放污染，城市建设装修、道路扬尘，生活取暖排烟以及汽 车尾气等。雾霾中包含了细微尘土、挥发性酸雾如硝酸硫酸雾、有机碳氢化合物、 重金属等，这些是重工业空气污染物、扬尘、汽车尾气的主要成分。特别是以燃 煤为主的火力发电、冶金、化工和粉尘集中的木器加工、建材工业，是空气悬浮 微颗粒和硫化物的主要来源之一。而汽车尾气多数是氮氧化物和碳氧化物，特别 是柴油汽车排放中微颗粒含量更大。
素有“雾都”之称的英国伦敦，英国人反思空气污染造成的苦果，这个海岛 国家的首都有海风吹拂，按理不该有雾霾。因雾霾造成的“伦敦烟雾事件”像一 记重锤，催生了世界上第一部空气污染防治法案《清洁空气法》的出台。通过一 系列措施，到1975年，伦敦的雾霾日由每年几十天减少到了15天，1980年降到 5天。80年代后，伦敦的汽车数量激增，当时机动车保有量达到了244万辆， 交通堵塞情况严重。自1981年以来，伦敦乘汽车外出的数量增长了20％，占所有 上班行程的43％，交通污染取代工业污染成为伦敦空气质量的首要威胁。英国政 府不得不采取一系列措施来对抗这种由汽车带来的空气污染。这种机动车尾气造 成的空气污染，不仅在英国，在欧盟国家的德国、法国，意大利以及美国、日本 等经济发达的国家也都由于机动车保有量激增，机动车尾气造成的交通空气污染 超过现代工业污染，人们饱受雾霾之苦，各国采取不同的对策，如：
欧盟要求其成员国年空气不达标的天数不能超过35天，不然将面临4.5亿美 元的巨额罚款；
德国对某类车辆实施禁行，或者在污染严重区域禁止所有车辆行驶。2013 年，德国大力鼓励机动车安装尾气清洁装置，安装过滤器的车主可获得国家补贴。
法国在近几年也陷入雾霾的困扰中，埃菲尔铁塔等建筑物在雾霾中几近消 失。法国首都巴黎实施汽车单双号轮流行驶等多种措施；
意大利米兰市对污染最严重的汽车征税，工作日7时至19时，污染严重的 汽车必须缴纳2至10欧元税才能进入市区。
日本在工业化初期也曾饱受空气污染之苦。1999年东京600多位国道沿线呼 吸道疾病患者就以汽车尾气伤害身体为由状告地方政府和八家汽车企业，经专家 鉴定，汽车尾气造成的PM2.5确有强烈的致癌作用。正是这一诉讼案推动了日本 政府对PM2.5的重视和地方政府着手管控交通的决心。东京立法要求汽车加装过 滤器，并禁止柴油发动机汽车驶入该市。东京所有出租车使用的都是天然气。城 市绿化是日本治理污染的重要措施。东京规定，新建大楼必须有绿地，必须搞楼 顶绿化。
统计分析，室内装修带来的有机溶剂，甲苯、甲醛等以及豪华装修，大量的使 用大理石装修，这样的室内会含有较高的放射性氡，加拿大已经证明，除了吸烟 以外，这是第二位引起肺癌的原因。室内的污染对呼吸***疾病的发病影响非常 大。，不仅是引起室内孩子的白血病的诱因，对人体呼吸***的刺激也是比较大 的。此外还有室内大量的毯子，地毯、家具等，这些就是过敏源，特别是螨类， 容易引起哮喘；据统计，15％的气管炎、支气管炎、肺癌由空气污染所致、22％的 慢性肺病是由空气污染所致；35.75％的呼吸道疾病是由空气污染所致；72.2％的 儿童住房中甲醛超标；这是一组反映国人因室外或室内空气污染严重影响身体健 康的数据。由此而言，治理大气污染、净化室内空气势在必行！！
针对雾霾微小颗粒(俗称Pm2.5)的机戒性的滤过处理，到目前为止，尚缺 乏一种由天然材料制成的既可以滤除Pm2.5微小颗粒，又能对由二氧化碳大气层 的浮尘中可能伴随的有害病菌有抑制与杀灭效果的器戒与相关技术。本发明技术 与器诫的研制就是针对解决这一实际难题的。
发明内容
本发明的目的是提供一种汉麻杆芯纤维膜的环保功能检测方法，其 特征在于，具体步骤如下：
步骤1，受试药物汉麻杆芯纤粉的制备：将经过干燥、超超粉碎处理的汉麻 杆芯粉2000克，加80％的乙醇回流提取3次；乙醇加量分别是第一次为汉麻杆 芯粉5倍的80％乙醇；第二次4倍的80％乙醇、第三次3倍的80％乙醇；将三次 提取液浓缩，回收溶剂至无乙醇味，静置24h以上，除去沉于下层的叶绿素，保 留上清液；将溶液稀释5倍，分别转入D101大孔树脂、AB-8大孔树脂、SP-70 大孔树脂柱，并分别以水、30％乙醇、70％乙醇、80％乙醇洗脱，收集各不同浓 度乙醇洗脱液与纯水洗脱液，分别减压浓缩除去溶剂，回收后残留固状物即为汉 麻杆芯纤维粉受试样品；
步骤2，汉麻杆芯提取物的体外抗菌活性的检测，***杆芯黏胶纤维对金黄 色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌和白色念珠菌有明显抑制和杀灭作用，对厌氧 菌和需氧菌都有抑制和灭杀作用；具体包括：
(1)材料：
1.1,受试菌株包括：大肠埃希菌Escherichia coli[CMCC(B)44103]，金黄色 葡萄球菌Staphyloccocus aureus(ATCC29213)，单核增生李氏特菌Listeria monocytogenes[LM CMCC(B)54002]，枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis [CMCC(B)63501]，蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus[CMCC(B)63301]，普通 变形杆菌Proteus vulgaris[CMCC(B)49027]，伤寒沙门氏菌Salmonella typhi(ATCC 14028)均由首都师范大学微生物系提供；红色毛癣菌Trichophyton rubrum(BMU01672)，须癣毛癣菌Trichophyton mentagrophytes (ATCC28185)，犬小孢子菌Microsporum canis(ATCC 22019)，白色念珠菌 Candida albicans[CMCC(B)98001]由北京大学真菌和真菌病研究中心提供包 藏菌株。
1.2试验用药物、器材D101树脂(天津海光树脂有限公司)；AB-8、SP-70 树脂(日本三菱化学，日本)，二甲基亚砜(amresco公司，美国)，0.22μm微 孔滤膜，牛肉膏蛋白胨培养基、葡萄糖酚红牛肉膏蛋白胨培养液(含葡萄糖 1％、酚红0.002％)；马铃薯葡萄糖培养基(PDA)，燕麦培养基，沙氏葡萄糖 蛋白胨琼脂(SDA)以上材料来自北京科昊泽生物技术有限公司；
(2)，检测过程
2.1指示菌菌悬液制备，称取9个样品各8.0mg溶于2mL二甲基亚砜中， 其质量浓度为4 000μg/mL；经0.22μm的过滤器除菌后保存在4℃的冰箱内备 用；将配制好的供试药物原液用的牛肉膏蛋白胨体培养基从第1管至第9管进 行1：2n倍稀释，其中n为1，2…..，9；置于35℃、120r/min摇床培养18～ 24h后取出；得到指示菌菌悬液；
2.2，分别将浓度为1×106CFU/mL的指示菌菌悬液各100μL涂在制备好的牛 肉膏蛋白胨平板上，在涂好的平板上放入内径6mm、外径8mm、高10mm的 4只牛津杯，轻轻加压使其与培养基接触无空隙，在牛津杯中加入上述步骤2中 1.1所述的待检样品，其中，在前3只牛津杯中加同浓度、同种样品各200μL， 在第4只牛津杯中加入200μL的二甲基亚砜，然后将有牛津杯的涂好的平板放 入35℃培养箱中培养18～24h后取出，观察平板中牛津杯周围是否有抑菌圈， 并对有抑菌圈的牛津杯用游标卡尺测定、记录抑菌圈的大小，抑菌圈的大小表明 药物对细菌的抑制作用的强弱；取φ13mm×100mm的无菌试管12支，排成 一排，每管加入葡萄糖酚红牛肉膏蛋白胨培养液1mL，在第1管中加入浓度为 4000μg/mL的药物原液1.0mL，混匀，然后吸取1mL放入第2管内，混匀后再 吸取1mL至第3管内，如此连续配比稀释，直至第10管，并从第10管中吸取 1mL弃去；第11管内只加1mL溶剂作为溶剂对照组，第12管为不加药物的生 长对照；
2.3，抑菌检测，在每管内加入上述已制备好的接种物各1mL，使每管最终 菌液浓度为1×106CFU/mL；第1管至第10管中药物质量浓度分别为2 000、1 000、 500、250、125、62.5、31.2、15.6、7.8、3.9μg/mL。将接种好的稀释管塞好 塞子，置于35℃的普通空气孵箱中孵育18～24h，细菌生长使葡萄糖发酵产酸， 与酚红指示剂反映变黄，阳性管为黄色；无细菌生长，试管中液体仍为澄清透明 红色者阴性管；以肉眼观察不到菌落生长的最高药物稀释浓度为该样品对该种细 菌的最小抑菌浓度MIC；取观察仍为澄清透明红色者测定管的MIC阴性管中培 养液涂布于牛肉膏蛋白胨培养基平板，35℃恒温培养18～24h；观察记录菌落 数，菌落数＜3或无菌生长的最低浓度即为汉麻样品的最低杀菌浓度MBC；
2.4，药物对真菌的最小抑菌浓度测定，称取以上9个样本各6.4mg溶于2 mL二甲基亚砜中，其质量浓度为3200μg/mL；经0.22μm的过滤器除菌后保 存在4℃冰箱备用；取3200μg/mL的各样本，用RPMI-1640培养基先稀释50 倍后得到64μg/mL的样品，然后再进行两倍稀释，得到稀释终质量浓度μg/mL 分别为32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125和0.06，共10个质量浓度； 分别将各质量浓度的药物加入到96孔细胞培养板中，每孔100μL；1～10列为 药物各质量浓度，11列为生长对照，12列为空白对照以及溶媒对照；
2.5，针对具体菌种的检测，将皮肤癣菌在PDA上培养7～10d；红色毛癣菌 在燕麦培养基上培养7～10d；白色念珠菌在SDA上培养24～48h；用0.9％的 生理盐水冲洗皮肤癣菌落表面，取菌悬液于试管中，沉降10min，取上清比浊 仪计数为0.5麦氏浊度，相当于1×105～5×105CFU/mL；用RPMI-1640培养基 稀释100倍的最终菌悬液浓度为1×103～5×103CFU/mL；白色念珠菌比浊仪计数 为0.麦氏浊度相当于1×103～5×103CFU/mL；用RPMI-1640培养基稀释2000 倍的最终菌悬液浓度为0.5×103～2.5×103CFU/mL，取100μL菌悬液加入配制好 的药敏板1～11列中；35℃温箱培养，其中，皮肤癣菌培养4～6d，观察结果， 白色念珠菌培养24～48h，观察结果；
(3)结果
3.1，药物对细菌的抑菌圈将放有牛津杯的牛肉膏蛋白胨平板取出，观察牛 津杯周围是否有抑菌圈，然后用游标卡尺量抑菌圈的直径；从抑菌圈结果上看出， 在70％乙醇洗脱的3种树脂上的脱物有好的抗细菌活性，其中以AB-8树脂下洗 脱物抗菌谱广；
3.2，最小抑菌质量浓度MIC结果中可以看出C1的抑制真菌生长的效果 是最好的，除A1、A2、A3对犬小孢子菌不敏感外，而其余的抑菌作用均明显， 以C1的抑制作用最强；
3.3，最低杀菌质量浓度(MBC)；A1对大肠杆菌杀菌效果最好，C1对 腊状芽胞杆菌具有杀菌作用，但是作用不明显，而B1对变形杆菌和沙门氏菌 杀菌作用较明显。
所述步骤2的(2)-2,1中进行1：2n倍稀释的n为1，2…..，9；即稀释倍数 分别为1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256、1∶512。
本发明的有益效果是，，采用汉麻杆芯纤维制成天然纤维膜对室外空气中因 雾霾有害微粒Pm2.5、室内异味(甲醛等)具有的特殊吸附滤除效果，且具有明 显的除菌抑菌作用，从而达到净化环境、保护人类健康、预防疾病的目的。设计 中所用到的各种材料均为环保材料。可广泛应用于空气与居住环境净化以及相关 隔离净化。
具体实施方式
本发明提供一种汉麻杆芯纤维膜的环保功能检测方法，下面结合实 施例予以说明。
所述汉麻杆芯纤维膜的环保功能的检测方法的具体步骤如下：
步骤1，受试药物汉麻杆芯纤粉的制备：将经过干燥经超超粉碎处理的汉 麻杆芯粉2000克，加80％的乙醇回流提取3次；乙醇加量分别为第一次为汉麻 杆芯粉5倍的80％乙醇；第二次4倍的80％乙醇、第三次3倍的80％乙醇；将 三次提取液浓缩，回收溶剂至无乙醇味，静置24h以上，除去沉于下层的叶绿素， 保留上清液；将溶液稀释5倍，分别转入D101大孔树脂、AB-8大孔树脂、SP-70 大孔树脂柱，并分别以水、30％乙醇、70％乙醇、80％乙醇洗脱，收集各不同 浓度乙醇洗脱液与纯水洗脱液，分别减压浓缩除去溶剂，回收后残留固状物即的 汉麻杆芯纤维粉受试样品；
步骤2，汉麻杆芯提取物的体外抗菌活性的检测，***杆芯黏胶纤维对金 黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌和白色念珠菌有较明显抑制和杀灭作用， 对厌氧菌和需氧菌都有抑制和灭杀作用；具体包括：
(1)材料：
1.1受试菌株包括：大肠埃希菌Escherichia coli[CMCC(B)44103]，金 黄色葡萄球菌Staphyloccocus aureus(ATCC29213)，单核增生李氏特菌Listeria monocytogenes[LM CMCC(B)54002]，枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis [CMCC(B)63501]，蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus[CMCC(B)63301]，普通 变形杆菌Proteus vulgaris[CMCC(B)49027]，伤寒沙门氏菌Salmonella typhi(ATCC 14028)均由首都师范大学微生物系提供；红色毛癣菌Trichophyton rubrum(BMU01672)，须癣毛癣菌Trichophyton mentagrophytes(ATCC28185)，犬小孢子菌Microsporum canis(ATCC 22019)，白色念珠菌Candida albicans[CMCC(B)98001]由北京大学真菌和 真菌病研究中心提供包藏菌株。
1.2试验用药物、器材D101树脂(天津海光树脂有限公司)；AB-8、 SP-70树脂(日本三菱化学，日本)，二甲基亚砜(amresco公司，美国)，0.22 μm微孔滤膜，牛肉膏蛋白胨培养基、葡萄糖酚红牛肉膏蛋白胨培养液(含葡 萄糖1％、酚红0.002％)；马铃薯葡萄糖培养基(PDA)，燕麦培养基，沙 氏葡萄糖蛋白胨琼脂(SDA)以上材料来自北京科昊泽生物技术有限公司；
(2)，检测过程
2.1指示菌菌悬液制备，称取9个样品各8.0mg溶于2mL二甲基亚砜 中，其质量浓度为4 000μg/mL；经0.22μm的过滤器除菌后保存在4℃的冰箱 内备用；将配制好的供试药物原液用的牛肉膏蛋白胨体培养基从第1管至第9管 进行1：2n倍稀释，其中n为1，2…..，9；(即稀释倍数分别为1∶2、1∶4、1∶ 8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256、1∶512)。置于35℃、120r/min摇 床培养18～24h后取出；得到指示菌菌悬液；
2.2，分别将浓度为1×106CFU/mL的指示菌菌悬液各100μL涂在制备好的牛 肉膏蛋白胨平板上，在涂好的平板上放入内径6mm、外径8mm、高10mm的 4只牛津杯，轻轻加压使其与培养基接触无空隙，在牛津杯中加入上述步骤2中 1.1所述的待检样品，其中，在前3只牛津杯中加同浓度、同种样品各200μL， 在第4只牛津杯中加入200μL的二甲基亚砜，然后将有牛津杯的涂好的平板放 入35℃培养箱中培养18～24h后取出，观察平板中牛津杯周围是否有抑菌圈， 并对有抑菌圈的牛津杯用游标卡尺测定、记录抑菌圈的大小，抑菌圈的大小表明 药物对细菌的抑制作用的强弱；取φ13mm×100mm的无菌试管12支，排成一 排，每管加入葡萄糖酚红牛肉膏蛋白胨培养液1mL，在第1管中加入浓度为4 000 μg/mL的药物原液1.0mL，混匀，然后吸取1mL放入第2管内，混匀后再吸取1mL至第3管内，如此连续配比稀释，直至第10管，并从第10管中吸取1mL 弃去；第11管内只加1mL溶剂作为溶剂对照组，第12管为不加药物的生长对 照；
2.3，抑菌检测，在每管内加入上述制备好的接种物各1mL，使每管最终菌 液浓度约为1×106CFU/mL；第1管至第10管中药物质量浓度分别为2 000、1 000、 500、250、125、62.5、31.2、15.6、7.8、3.9μg/mL。将接种好的稀释管塞好 塞子，置于35℃的普通空气孵箱中孵育18～24h，细菌生长使葡萄糖发酵产酸， 与酚红指示剂反映变黄，阳性管为黄色；无细菌生长，试管中液体仍为澄清透明 红色者阴性管；以肉眼观察不到菌落生长的最高药物稀释浓度为该样品对该种细 菌的最小抑菌浓度MIC；取观察仍为澄清透明红色者测定管的MIC阴性管中培 养液涂布于牛肉膏蛋白胨培养基平板，35℃恒温培养18～24h；观察记录菌落 数，菌落数＜3或无菌生长的最低浓度即为汉麻样品的最低杀菌浓度MBC；
2.4，药物对真菌的最小抑菌浓度测定，称取以上9个样本各6.4mg溶于2 mL二甲基亚砜二甲基亚砜中，其质量浓度为3200μg/mL；经0.22μm的过滤 器除菌后保存在4℃冰箱备用。取3 200μg/mL的各样本，用RPMI-1640培养 基先稀释50倍后得到64μg/mL的样品，然后再进行两倍稀释，得到稀释终 质量浓度μg/mL分别为32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125和0.06，共 10个质量浓度；分别将各质量浓度的药物加入到96孔细胞培养板中，每孔100 μL；1～10列为药物各质量浓度，11列为生长对照，12列为空白对照以及溶媒 对照；
2.5，针对具体菌种的检测，将皮肤癣菌在PDA上培养7～10d；红色毛癣菌 在燕麦培养基上培养7～10d；白色念珠菌在SDA上培养24～48h；用0.9％的生理盐水冲洗皮肤癣菌落表面，取菌悬液于试管中，沉降10min，取上 清比浊仪计数为0.5麦氏浊度，相当于1×105～5×105CFU/mL；用RPMI-1640 培养基稀释100倍的最终菌悬液浓度为1×103～5×103CFU/mL；白色念珠菌比 浊仪计数为0.麦氏浊度相当于1×103～5×103CFU/mL；用RPMI-1640培养基稀 释2000倍的最终菌悬液浓度为0.5×103～2.5×103CFU/mL；白色念珠菌比浊仪计 数为0.5麦氏浊度，相当于1×103～5×103CFU/mL；用RPMI-1640培养基稀释 2000倍的最终菌悬液浓度为0.5×103～2.5×103CFU/mL，取100μL菌悬液加入 配制好的药敏板1～11列中；35℃温箱培养，其中，皮肤癣菌培养4～6d观察 结果，白色念珠菌培养24～48h观察结果；
(3)结果
3.1，药物对细菌的抑菌圈将放有牛津杯的牛肉膏蛋白胨平板取出，观察 牛津杯周围是否有抑菌圈，然后用游标卡尺量抑菌圈的直径；从抑菌圈结果上看 出，在70％乙醇洗脱的3种树脂上的脱物有较好的抗细菌活性，如表1所示的 不同树脂不同体积分数乙醇洗脱物标记、表2所示的样品对各细菌抑菌圈直径的 大小，其中以AB-8树脂下洗脱物抗菌谱广。
表1不同树脂不同体积分数乙醇洗脱物标记
表2样品对各细菌抑菌圈直径的大小(n＝3)
注：“-”代表无抑菌圈。与阴性对照比较，**p<0.001
*在实验结果上发现，样品A2、A3、C2C3并没有明显的抑菌圈，故在表格中省 略。
3.2，最小抑菌质量浓度(MIC)结果见表3、表4所示，从表3、表4中可以 看出C1的抑制真菌生长的效果是最好的，除A1、A2、A3对犬小孢子菌不敏 感外，其余的抑菌作用均明显，以C1的抑制作用最强。
表3样品对G-和G+的最小抑菌浓度(MIC)
注：“-”表示最高浓度时试管中的液体仍为红色，即无菌效果。
表4样品对真菌的最小抑菌浓度(MIC)
注：*临床常用药物氟康唑(FCZ)实验中一般剂量依赖耐药为16-32μg/ml,但6 μg/ml即为耐药。依据1992年，美国临床和实验室标准协会起草的《酵母菌的 液体稀释法抗真菌药物敏感试验参考方案》文件名称为M＝27P，即≥32μg/ml 可认为不敏感。
3.3，最低杀菌质量浓度(MBC)结果见表5所示。从表5可以看出，A1对 大肠杆菌杀菌效果最好，C1对腊状芽胞杆菌具有杀菌作用，但是作用不明显， 而B1对变形杆菌和沙门氏菌杀菌作用较明显。
表5样品对G-和G+的最小杀菌浓度(MBC)
注：“-”代表无法测得其MBC值，其菌落数>3
本实验中采用了4种革兰氏阳性菌和3种革兰氏阴性菌做抗细菌筛选实验， 抗真菌部位的筛选采用了浅表部皮肤真菌感染致病菌的红毛癣菌和须毛癣菌以 及犬小孢子菌，这3种真菌均在皮肤真菌感染中占有很大比例，深部感染的采用 白色念珠菌作为筛选菌株的代表，这些常见菌株作为活性筛选载体，能更好的 评价该提取物的抗菌活性。汉麻杆芯处理过程中，为了富集成分，除去鞣质叶 绿素等物质，采用醇沉、大孔吸附树脂吸附等方法。筛选乙醇洗脱浓度的过程 中采用化学手段检测发现30％乙醇洗脱和70％洗脱明显不同，其黄酮或者皂苷 量也有差别；70％乙醇洗脱物中黄酮量高于50％乙醇洗脱物，但两者所含有的 黄酮类化合物或者苯丙素类化合物类别相接近；在80％或80％以上乙醇洗脱时，其洗脱物中皂苷量高于70％乙醇洗脱，洗脱物中的化学成分具有明显差别。 故本实验中采用30％、70％、80％乙醇洗脱来研究不同极性部位的活性物质。本 研究显示，30％乙醇洗脱物对大肠杆菌有较强的抑制作用，推测可能与其中所 含的酚类、有机酸物质有关。前期化学实验研究结果显示70％乙醇洗脱其总 黄酮的量高达50％，预示着可能跟其中所含的黄酮类、苯丙素类的成分、含有 量相关。同样，80％乙醇洗脱物中化学测定其总皂苷量较高，对浅表部真菌感 染菌株的抑制作用较强。3种树脂在70％乙醇洗脱下，其洗脱液对所测的大部 分细菌均有抑制作用，显示出该部位的抗菌谱广，也证实了70％乙醇洗脱为抗 细菌活性部位有效洗脱体积分数。对皮肤癣菌的抗真菌活性部位集中在80％ 洗脱液中，这为下一步研究不同部位活性物质提供了一个重要参考依据。
实际上，本发明采用汉麻杆芯纤维制成天然纤维膜对室外空气中因雾霾有 害微粒Pm2.5、甲醛等产生的室内异味，具有的特殊吸附滤除效果，其汉麻杆芯 纤维膜的制备是比较容易的：首先准备材料：经超微粉碎<80—200目的汉麻杆 芯纤维粉、，羧甲基纤维素(CMC)和医用无纺布；具体制法：0.2-1.0％CMC水溶 液与汉麻杆芯纤维粉混合搅拌(加热)均匀，溶液中应无颗粒状物，按厚度<0.2 —0.8Cm均匀涂于无纺布(宽50-80cm、长100cm～，自然晾干或热风干燥即得， 然后用紫外灯照射灭菌，备用。
经过上述测试，***杆芯黏胶纤维对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌和白色念珠菌有较明显抑制和杀灭作用，如表3样品对G-和G+的最小抑菌浓度(MIC) 所示；对厌氧菌和需氧菌都有抑制和灭杀作用，具有优异的抗菌特性。***黏胶 纤维有抗菌性是因为***酚类及其衍生物存在于残留在黏胶纤维的木质素中或 与纤维结合所致。不同于其它纤维中木质素结构，***杆芯中木质素结构是一种 网状结构，沿径向形成“纤维束”群体，其横截面是不规则的三角形、多边形和 扁圆形等，表面粗糙，有许多裂纹和孔洞，纤维有中腔，中腔体积常占纤维细胞 总体积的l/3一l/2，***纤维比表面积大，孔洞大，多缝隙，空隙率高，且 与纤维表面纵向分布着的许多缝隙和孔洞相连，“纤维束”内部和“纤维束”群体之 间也同样分布着的许多缝隙和孔洞。这种特殊的结构使其富含氧气，具有卓越 的吸湿性和透气性。这就使在潮湿情况下，生存繁殖的厌氧霉菌类代谢作用和 生理活动受到抑制，难以生存，有效地抑制微生物的氧化磷酸化，影响有丝分 裂，阻碍微生物呼吸。在***杆芯黏胶纤维中，存在木质素.纤维素碳水化合 物复合体。纤维素葡萄糖环与木质素等分子均呈三维立体结构，可以想象在纤 维素为主体的成分中，分布着极微量木质素分子，改变了纤维素的原有结构， 使***杆芯黏胶纤维的无定形区结构松散，可及度较大，同样富含氧气，具有 卓越的吸湿性和透气性，厌氧霉菌类代谢作用和生理活动受到抑制。

Claims (2)

1.一种汉麻杆芯纤维膜的环保功能检测方法，其特征在于，具体步骤如下：
步骤1，受试药物汉麻杆芯纤粉的制备：将经过干燥、超超粉碎处理的汉麻杆芯粉2000克，加80％的乙醇回流提取3次；乙醇加量分别是第一次为汉麻杆芯粉5倍的80％乙醇；第二次4倍的80％乙醇、第三次3倍的80％乙醇；将三次提取液浓缩，回收溶剂至无乙醇味，静置24h以上，除去沉于下层的叶绿素，保留上清液；将溶液稀释5倍，分别转入D101大孔树脂、AB-8大孔树脂、SP-70大孔树脂柱，并分别以水、30％乙醇、70％乙醇、80％乙醇洗脱，收集各不同浓度乙醇洗脱液与纯水洗脱液，分别减压浓缩除去溶剂，回收后残留固状物即为汉麻杆芯纤维粉受试样品；
步骤2，汉麻杆芯提取物的体外抗菌活性的检测，***杆芯黏胶纤维对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌和白色念珠菌有明显抑制和杀灭作用，对厌氧菌和需氧菌都有抑制和灭杀作用；具体包括：
(1)材料：
1.1,受试菌株包括：大肠埃希菌Escherichia coli[CMCC(B)44103]，金黄色葡萄球菌Staphyloccocus aureus(ATCC29213)，单核增生李氏特菌Listeria monocytogenes[LMCMCC(B)54002]，枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis[CMCC(B)63501]，蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus[CMCC(B)63301]，普通变形杆菌Proteus vulgaris[CMCC(B)49027]，伤寒沙门氏菌Salmonella typhi(ATCC 14028)均由首都师范大学微生物系提供；红色毛癣菌Trichophyton rubrum(BMU01672)，须癣毛癣菌Trichophyton mentagrophytes(ATCC28185)，犬小孢子菌Microsporum canis(ATCC 22019)，白色念珠菌Candida albicans[CMCC(B)98001]由北京大学真菌和真菌病研究中心提供包藏菌株；
1.2试验用药物、器材D101树脂(天津海光树脂有限公司)；AB-8、SP-70树脂(日本三菱化学，日本)，二甲基亚砜(amresco公司，美国)，0.22μm微孔滤膜，牛肉膏蛋白胨培养基、葡萄糖酚红牛肉膏蛋白胨培养液(含葡萄糖1％、酚红0.002％)；马铃薯葡萄糖培养基(PDA)，燕麦培养基，沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂(SDA)以上材料来自北京科昊泽生物技术有限公司；
(2)，检测过程
2.1指示菌菌悬液制备，称取9个样品各8.0mg溶于2mL二甲基亚砜中，其质量浓度为4000μg/mL；经0.22μm的过滤器除菌后保存在4℃的冰箱内备用；将配制好的供试药物原液用的牛肉膏蛋白胨体培养基从第1管至第9管进行1：2n倍稀释，其中n为1，2…..，9；置于35℃、120r/min摇床培养18～24h后取出；得到指示菌菌悬液；
2.2，分别将浓度为1×106CFU/mL的指示菌菌悬液各100μL涂在制备好的牛肉膏蛋白胨平板上，在涂好的平板上放入内径6mm、外径8mm、高10mm的4只牛津杯，轻轻加压使其与培养基接触无空隙，在牛津杯中加入上述步骤2中1.1所述的待检样品，其中，在前3只牛津杯中加同浓度、同种样品各200μL，在第4只牛津杯中加入200μL的二甲基亚砜，然后将有牛津杯的涂好的平板放入35℃培养箱中培养18～24h后取出，观察平板中牛津杯周围是否有抑菌圈，并对有抑菌圈的牛津杯用游标卡尺测定、记录抑菌圈的大小，抑菌圈的大小表明药物对细菌的抑制作用的强弱；取φ13mm×100mm的无菌试管12支，排成一排，每管加入葡萄糖酚红牛肉膏蛋白胨培养液1mL，在第1管中加入浓度为4 000μg/mL的药物原液1.0mL，混匀，然后吸取1mL放入第2管内，混匀后再吸取1mL至第3管内，如此连续配比稀释，直至第10管，并从第10管中吸取1mL弃去；第11管内只加1mL溶剂作为溶剂对照组，第12管为不加药物的生长对照；
2.3，抑菌检测，在每管内加入上述已制备好的接种物各1mL，使每管最终菌液浓度为1×106CFU/mL；第1管至第10管中药物质量浓度分别为2 000、1 000、500、250、125、62.5、31.2、15.6、7.8、3.9μg/mL，将接种好的稀释管塞好塞子，置于35℃的普通空气孵箱中孵育18～24h，细菌生长使葡萄糖发酵产酸，与酚红指示剂反映变黄，阳性管为黄色；无细菌生长，试管中液体仍为澄清透明红色者阴性管；以肉眼观察不到菌落生长的最高药物稀释浓度为该样品对该种细菌的最小抑菌浓度MIC；取观察仍为澄清透明红色者测定管的MIC阴性管中培养液涂布于牛肉膏蛋白胨培养基平板，35℃恒温培养18～24h；观察记录菌落数，菌落数＜3或无菌生长的最低浓度即为汉麻样品的最低杀菌浓度MBC；
2.4，药物对真菌的最小抑菌浓度测定，称取以上9个样本各6.4mg溶于2mL二甲基亚砜中，其质量浓度为3200μg/mL；经0.22μm的过滤器除菌后保存在4℃冰箱备用；取3200μg/mL的各样本，用RPMI-1640培养基先稀释50倍后得到64μg/mL的样品，然后再进行两倍稀释，得到稀释终质量浓度μg/mL分别为32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125和0.06，共10个质量浓度；分别将各质量浓度的药物加入到96孔细胞培养板中，每孔100μL；1～10列为药物各质量浓度，11列为生长对照，12列为空白对照以及溶媒对照；
2.5，针对具体菌种的检测，将皮肤癣菌在PDA上培养7～10d；红色毛癣菌在燕麦培养基上培养7～10d；白色念珠菌在SDA上培养24～48h；用0.9％的生理盐水冲洗皮肤癣菌落表面，取菌悬液于试管中，沉降10min，取上清比浊仪计数为0.5麦氏浊度，相当于1×105～5×105CFU/mL；用RPMI-1640培养基稀释100倍的最终菌悬液浓度为1×103～5×103CFU/mL；白色念珠菌比浊仪计数为0.麦氏浊度相当于1×103～5×103CFU/mL；用RPMI-1640培养基稀释2000倍的最终菌悬液浓度为0.5×103～2.5×103CFU/mL，取100μL菌悬液加入配制好的药敏板1～11列中；35℃温箱培养，其中，皮肤癣菌培养4～6d观察结果，白色念珠菌培养24～48h观察结果；
(3)结果
3.1，药物对细菌的抑菌圈将放有牛津杯的牛肉膏蛋白胨平板取出，观察牛津杯周围是否有抑菌圈，然后用游标卡尺量抑菌圈的直径；从抑菌圈结果上看出，在70％乙醇洗脱的3种树脂上的脱物有好的抗细菌活性，其中以AB-8树脂下洗脱物抗菌谱广；
3.2，最小抑菌质量浓度MIC结果中可以看出C1的抑制真菌生长的效果是最好的，除A1、A2、A3对犬小孢子菌不敏感外，而其余的抑菌作用均明显，以C1的抑制作用最强；
3.3，最低杀菌质量浓度(MBC)；A1对大肠杆菌杀菌效果最好，C1对腊状芽胞杆菌具有杀菌作用，但是作用不明显，而B1对变形杆菌和沙门氏菌杀菌作用较明显。
2.根据权利要求1所述一种汉麻杆芯纤维膜的环保功能检测方法，其特征在于，所述步骤2的(2)-2,1中进行1：2n倍稀释的n为1，2…..，9；即稀释倍数分别为1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256、1∶512。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110438198A (zh) * 2019-09-05 2019-11-12 湖南农业大学 基于草粉提取物制备抗生素的苎麻品种及器官筛选方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101104958A (zh) * 2007-07-10 2008-01-16 中国人民解放军总后勤部军需装备研究所 一种粘胶纤维及其制备方法
CN104018343A (zh) * 2014-06-06 2014-09-03 保琦蓓 一种具有抗菌活性的汉麻韧皮纤维提取物、制备方法及其用途
CN105998195A (zh) * 2016-07-12 2016-10-12 朋派食品（大连）有限公司 一种具有抗敏感保湿作用的汉麻提取物及其应用
WO2017071198A1 (zh) * 2015-10-26 2017-05-04 江苏悦达纺织集团有限公司 一种针织仿毛保暖面料的制备方法
CN106834417A (zh) * 2017-02-16 2017-06-13 雅戈尔服装控股有限公司 汉麻韧皮纤维提取物抗菌能力的快速测定方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101104958A (zh) * 2007-07-10 2008-01-16 中国人民解放军总后勤部军需装备研究所 一种粘胶纤维及其制备方法
CN104018343A (zh) * 2014-06-06 2014-09-03 保琦蓓 一种具有抗菌活性的汉麻韧皮纤维提取物、制备方法及其用途
WO2017071198A1 (zh) * 2015-10-26 2017-05-04 江苏悦达纺织集团有限公司 一种针织仿毛保暖面料的制备方法
CN105998195A (zh) * 2016-07-12 2016-10-12 朋派食品（大连）有限公司 一种具有抗敏感保湿作用的汉麻提取物及其应用
CN106834417A (zh) * 2017-02-16 2017-06-13 雅戈尔服装控股有限公司 汉麻韧皮纤维提取物抗菌能力的快速测定方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
陈本超等: "汉麻果胶不同提取物的体外抗菌活性研究", 《中成药》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110438198A (zh) * 2019-09-05 2019-11-12 湖南农业大学 基于草粉提取物制备抗生素的苎麻品种及器官筛选方法
CN110438198B (zh) * 2019-09-05 2023-07-21 湖南农业大学 基于草粉提取物制备抗生素的苎麻品种及器官筛选方法

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