CN109142587A - 检测去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非的方法 - Google Patents
检测去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109142587A CN109142587A CN201811171665.3A CN201811171665A CN109142587A CN 109142587 A CN109142587 A CN 109142587A CN 201811171665 A CN201811171665 A CN 201811171665A CN 109142587 A CN109142587 A CN 109142587A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- demethyl
- sulphur
- rolling land
- card rolling
- solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000005096 rolling process Methods 0.000 title claims abstract description 93
- 239000005864 Sulphur Substances 0.000 title claims abstract description 60
- SWWQQSDRUYSMAR-UHFFFAOYSA-N 1-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-6,7-diol;hydrochloride Chemical group Cl.C1=CC(O)=CC=C1CC1C2=CC(O)=C(O)C=C2CCN1 SWWQQSDRUYSMAR-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 31
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 123
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 15
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 12
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 36
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 34
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 26
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 claims description 20
- 239000012085 test solution Substances 0.000 claims description 18
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 17
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 16
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 12
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 11
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 11
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 9
- 238000007689 inspection Methods 0.000 claims description 8
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 claims description 8
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 claims description 8
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 7
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 6
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 6
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 6
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims description 6
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 claims description 6
- 239000012490 blank solution Substances 0.000 claims description 5
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 5
- DBJUEJCZPKMDPA-UHFFFAOYSA-N acetic acid;zinc Chemical compound [Zn].CC(O)=O DBJUEJCZPKMDPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000000589 high-performance liquid chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 claims description 4
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 claims description 4
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 claims description 4
- 238000000132 electrospray ionisation Methods 0.000 claims description 3
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 3
- 235000004213 low-fat Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims description 3
- 239000007921 spray Substances 0.000 claims description 3
- 238000013517 stratification Methods 0.000 claims description 3
- 238000011003 system suitability test Methods 0.000 claims description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 2
- CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N Fe2+ Chemical compound [Fe+2] CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- JMANVNJQNLATNU-UHFFFAOYSA-N glycolonitrile Natural products N#CC#N JMANVNJQNLATNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims 1
- 230000002929 anti-fatigue Effects 0.000 abstract description 15
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 abstract description 15
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 abstract description 15
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 11
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 abstract description 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 10
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 10
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 abstract description 9
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 abstract description 7
- 238000012216 screening Methods 0.000 abstract description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 41
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000000276 potassium ferrocyanide Substances 0.000 description 9
- XOGGUFAVLNCTRS-UHFFFAOYSA-N tetrapotassium;iron(2+);hexacyanide Chemical compound [K+].[K+].[K+].[K+].[Fe+2].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-] XOGGUFAVLNCTRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 7
- 241000237502 Ostreidae Species 0.000 description 6
- 235000020636 oyster Nutrition 0.000 description 6
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 4
- ZOIORXHNWRGPMV-UHFFFAOYSA-N acetic acid;zinc Chemical compound [Zn].CC(O)=O.CC(O)=O ZOIORXHNWRGPMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 4
- 239000004246 zinc acetate Substances 0.000 description 4
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 3
- 240000000759 Lepidium meyenii Species 0.000 description 2
- 235000000421 Lepidium meyenii Nutrition 0.000 description 2
- GLUUGHFHXGJENI-UHFFFAOYSA-N Piperazine Chemical compound C1CNCCN1 GLUUGHFHXGJENI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000012902 lepidium meyenii Nutrition 0.000 description 2
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000005464 sample preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 2
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 2
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 2
- -1 3,5- Dimethylpiperazinyl dithio-desmethylcarbodenafil Chemical compound 0.000 description 1
- RIFGMSHSTNMHMS-UHFFFAOYSA-N 5-[2-ethoxy-5-(4-methylpiperazine-1-carbonyl)phenyl]-1-methyl-3-propyl-4h-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-7-one Chemical compound CCCC1=NN(C)C(C(N2)=O)=C1N=C2C(C(=CC=1)OCC)=CC=1C(=O)N1CCN(C)CC1 RIFGMSHSTNMHMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000208340 Araliaceae Species 0.000 description 1
- HGBHSRKRWPQIHK-UHFFFAOYSA-N CCCC1=NN(C)C(C(N2)=S)=C1N=C2C(C(=CC=1)OCC)=CC=1C(=S)N1CCN(C)CC1 Chemical compound CCCC1=NN(C)C(C(N2)=S)=C1N=C2C(C(=CC=1)OCC)=CC=1C(=S)N1CCN(C)CC1 HGBHSRKRWPQIHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 235000005035 Panax pseudoginseng ssp. pseudoginseng Nutrition 0.000 description 1
- 235000003140 Panax quinquefolius Nutrition 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 238000009510 drug design Methods 0.000 description 1
- 235000008434 ginseng Nutrition 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- REFMEZARFCPESH-UHFFFAOYSA-M sodium;heptane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].CCCCCCCS([O-])(=O)=O REFMEZARFCPESH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000000153 supplemental effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
Abstract
本发明涉及食品药品检测方法，具体是用于补肾壮阳类中成药和抗疲劳类保健食品，或者非法宣称补肾壮阳和抗疲劳类食品中非法添加去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非化学品的定性筛选和确证方法。该方法的原理为：将供试品去除蛋白质或者脂肪后用乙腈提取和稀释，C18色谱柱分离，根据高效液相色谱DAD检测器定性检测，质谱一级及二级质谱图确认。该方法的实验结果均满足要求，表明本法可专属、灵敏、快速地初筛和确证补肾壮阳类中成药和抗疲劳类保健食品，或者非法宣称补肾壮阳和抗疲劳类食品中非法添加去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非。
Description
技术领域
本发明涉及食品（含保健食品）、药品检测方法，具体是用于补肾壮阳类中成药和抗疲劳类保健食品，或者非法宣称补肾壮阳和抗疲劳类食品中非法添加去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非化学品的筛查方法和确证方法。
背景技术
去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非为三种卡波地那非类似物，其化学结构为：
1、去甲基卡波地那非（结构式见下），英文名为：Desmethyl carbodenafil，分子式为C23H30N6O3，分子量为438.2。
2、二硫去甲基卡波地那非（结构式见下），英文名为：Dithio-desmethylcarbodenafil，分子式为C23H30N6OS2，分子量为470。
3、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非（结构式见下），英文名为：3,5-dimethylpiperazinyl dithio-desmethylcarbodenafil ，分子式为C25H34ON6S2，分子量为498。
目前，在国内市场销售产品中发现有非法添加上述物质，但还没有此物质的筛查、定量和确证方法，且此化合物国内外未批准药用，未见其毒理学研究数据，毒性危害未知。为了保障人民群众的饮食用药安全，经过多次试验，并考虑一测多评，一种条件下尽可能筛选多个类似物，在前期方法学验证的基础上，建立去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非3种物质的快速检验方法，供监督应用。
发明内容
本发明目的是提供一种针对补肾壮阳类中成药和抗疲劳类保健食品，或者非法宣称补肾壮阳和抗疲劳类食品中非法添加去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非补充检验方法，该方法的原理为：简单基质样品乙腈超声处理，复杂基质样品去除蛋白和脂肪后用乙腈提取和稀释，C18色谱柱分离，根据高效液相色谱DAD检测器定性定量检测，液质联用仪一级及二级质谱图确认。该方法中高效液相色谱法用于定性筛查；经定性筛查结果为阳性的样品，经液-质联用方法确证后可出具检验报告。
本发明是采用如下技术方案实现的：
一种检测非法添加去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非的方法，包括如下步骤：
（1）、高效液相色谱法
1.1、色谱条件与***适应性试验
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的液相色谱柱（规格为250mm×4.6mm，内径5μm）；二极管阵列（DAD）检测器，检测波长为230nm，扫描波长：200~400nm；柱温：35℃；流速：1.0mL/min；以0.1%甲酸溶液（取甲酸1mL用水稀释至1000mL）为流动相A，以乙腈为流动相B，按下表程序梯度洗脱。理论塔板数以去甲基卡波地那非峰计算，应不低于2000。
流动相梯度洗脱表
1.2、对照品溶液的制备
精密称取去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非对照品10mg，置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1mL含0.4~0.5mg的储备液，临用时，取1mL用甲醇稀释定容至10mL，即得（置于8℃以下冰箱保存）。
1.3、供试品溶液的制备
简单基质样品（低蛋白低脂肪）：若供试品为固体制剂，研细，精密称取一次服用量，置50mL容量瓶中，加乙腈40mL，超声处理15分钟，放至室温，用乙腈稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过备用；若供试品为液体制剂，摇匀，精密量取一次服用量，置50mL容量瓶中，加乙腈至40mL，振摇3分钟，加乙腈稀释至刻度，摇匀后用微孔滤膜（0.45μm）滤过备用。
复杂基质样品：蛋白质含量高的样品（蛋白质含量≥3%）：精密称取一次服用量固体样品（吸取2~5mL液体样品），置于100mL三角瓶中，加25mL水，超声处理15分钟，放至室温。边摇边慢慢加入5mL乙酸锌溶液及5mL亚铁***溶液，加水至刻度，混匀。静置30min，用干燥滤纸过滤到50mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过备用。（乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌，加3mL冰乙酸，加水溶解并稀释至100mL；亚铁***溶液：称取10.6g亚铁***，用水溶解并稀释至100mL）。
脂肪含量高的样品（脂肪含量≥2%）：精密称取一次服用量固体样品，先用20mL***或石油醚淋洗3次，一边淋洗一边振摇，去除醚层，固体部分精密加乙腈50mL，称重，超声处理15分钟，放至室温，用乙腈补重，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过备用；液体样品精密吸取5~10mL，加入20mL***或石油醚，振摇，静置分层，水层到50mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过备用。
1.4、测定法
分别取以上制备好的供试品溶液和对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图及DAD光谱图。
1.5、结果判断
供试品色谱图中，应不得检出与对照品色谱保留时间及DAD光谱一致的色谱峰。若检出相应的色谱峰，则采用液相色谱-质谱联用法确证。
（2）、高效液相色谱-质谱联用法
2.1、色谱条件与***适用性试验
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱（规格为150mm×2.1mm，内径3μm），流动相同上；流速：0.2mL/min，柱温35℃。
2.2、质谱条件
电喷雾离子化源（ESI），ESI+扫描，雾化器流速：3L/min；
加热器温度：400℃；
干燥气流速：10L/min；
加热气流速：10L/min；
接口温度：300℃；
喷雾电压：4.5kv。
扫描方式：一级质谱全扫描、二级质谱全扫描，扫描范围：50~600m/z。
2.3、对照品溶液的制备
取上述储备液，临用时，取适量储备液用50%乙腈稀成浓度为10μg/mL的溶液，即得（置于8℃以下冰箱保存）。
2.4、供试品溶液的制备
取高效液相色谱法检查呈阳性的供试品溶液作为检查用的供试品溶液，用50%乙腈稀释为与对照品浓度相近的溶液。同时制备空白溶液。
2.5、测定法
分别取空白溶液、供试品溶液和对照品溶液各10μL，注入液质联用仪，记录总离子流图及一、二级质谱图。
2.6、结果判断
供试品色谱图中，应不得检出与对照品色谱保留时间、一级质谱图及二级质谱图均一致的色谱峰。若检出相应的色谱峰，则确定非法添加了相应的化学物质。
本发明建立了一种补肾壮阳类中成药和抗疲劳类保健食品，或者非法宣称补肾壮阳和抗疲劳类食品中非法添加去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非的检验方法。使用基层基本普及的高效液相色谱仪快速定性筛查和定量，液质联用仪准确确认，既能适用于基层大批量筛选，又能避免假阳性结果。
经验证，本方法灵敏度高、选择性好、确证性强、操作简便快捷，可用于补肾壮阳类中成药和抗疲劳类保健食品，或者非法宣称补肾壮阳和抗疲劳类食品中非法添加去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非的定性筛查和准确确认。
本发明设计合理，具体很好的实际应用及推广价值。
附图说明
图1表示实施例中三种对照品色谱图。
图2表示实施例中去甲基卡波地那非对照品色谱峰的光谱扫描图。
图3表示实施例中二硫去甲基卡波地那非对照品色谱峰的光谱扫描图。
图4表示实施例中二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非对照品色谱峰的光谱扫描图。
图5表示实施例中某咖啡粉中去甲基卡波地那非的色谱峰。
图6表示实施例中某咖啡粉中去甲基卡波地那非的光谱扫描图。
图7表示实施例中某保健酒中二硫去甲基卡波地那非的色谱峰。
图8表示实施例中某保健酒中二硫去甲基卡波地那非的光谱扫描图。
图9表示实施例中某牡蛎压片糖果中二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非的色谱峰。
图10表示实施例中某牡蛎压片糖果中二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非的光谱扫描图。
图11表示实施例中咖啡粉样品中去甲基卡波地那非的一级质谱图。
图12表示实施例中咖啡粉样品中去甲基卡波地那非的二级质谱图。
图13表示实施例中保健酒样品中二硫去甲基卡波地那非的一级质谱图。
图14表示实施例中保健酒样品中二硫去甲基卡波地那非的二级质谱图。
图15表示实施例中某牡蛎压片糖果中样品中二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非的一级质谱图。
图16表示实施例中某牡蛎压片糖果中样品中二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非的二级质谱图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明的具体实施例进行详细说明。
一种检测补肾壮阳类中成药和抗疲劳类保健食品，或者非法宣称补肾壮阳和抗疲劳类食品中非法添加去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非的方法，其中内容包括：高效液相色谱法及高效液相色谱质谱联用法。该方法的原理为：将供试品去除蛋白质或者脂肪后用乙腈提取和稀释，C18色谱柱分离，根据高效液相色谱DAD检测器定性检测，质谱一级及二级质谱图确认。
具体方法包括如下步骤：
（一）、高效液相色谱法
（1）试验材料：
1.1、供试品：阳性样品：购买自市场某品牌咖啡粉、某品牌玛咖压片糖果、某品牌保健酒。阴性样品：咖啡、玛咖片、保健酒。
1.2、对照品：去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非，含量分别为99.7%、98.5%、99.5%，规格10mg，购自加拿大TLCpharmachem公司，2~8℃储存。
1.3、试剂：
甲醇、乙腈色谱纯；乙酸锌、亚铁***、甲酸、冰乙酸、***、石油醚分析纯。
乙酸锌溶液：称取乙酸锌21.9g，加冰乙酸3mL，加水溶解并定容于100mL。
亚铁***溶液（106g/L）：称取亚铁***10.6g，加水溶解并定容至100mL。
1.4、仪器：
岛津LC-20AT高效液相色谱仪；戴安Ultimate3000高效液相色谱仪；MS-204S电子天平，瑞士梅特勒-托利多公司。
1.5、色谱柱：液相色谱法Symmetry，C18，5μm，4.6×250mm，柱温：35℃。液质联用法Dikma Spursil C18色谱柱（150mm×2.1mm，3μm）柱。
（2）色谱条件及样品制备方法
2.1、色谱条件与***适应性试验
试验四种流动相：A、庚烷磺酸钠-0.1%磷酸水溶液-乙腈梯度洗脱，B、庚烷磺酸钠-0.1%磷酸水溶液-甲醇梯度洗脱，C、pH3.2的磷酸水溶液-乙腈梯度洗脱，D、0.1%甲酸溶液-乙腈梯度洗脱，经反复调整流动相比例，前三种流动相不能完全分离，D流动相经调整后能够完全分离，最终选择D流动相如下。
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的液相色谱柱（规格为250mm×4.6mm，内径5μm）；二极管阵列（DAD）检测器，检测波长为230nm，扫描波长：200~400nm；柱温：35℃；流速：1.0mL/min；以0.1%甲酸溶液（取甲酸1mL用水稀释至1000mL）为流动相A，以乙腈为流动相B，按下表程序梯度洗脱。理论塔板数以去甲基卡波地那非峰计算，应不低于2000。
流动相梯度洗脱表
2.2、对照品溶液的制备
精密称取去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非对照品约10mg，置25mL量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1mL约含0.4~0.5mg的储备液，临用时，取1mL用甲醇稀释定容至10mL，即得（置于8℃以下冰箱保存）。
2.3、供试品溶液的制备
简单基质（低蛋白低脂肪）样品：若供试品为固体制剂，研细，精密称取一次服用量，置50mL容量瓶中，加乙腈40mL，超声处理15分钟，放至室温，用乙腈稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过备用；若供试品为液体制剂，摇匀，精密量取一次服用量，置50mL容量瓶中，加乙腈至40mL，振摇3分钟，加乙腈稀释至刻度，摇匀后用微孔滤膜（0.45μm）滤过备用。
复杂基质样品：蛋白质含量高的样品：固体样品精密称取一次服用量（液体样品吸取5mL），置于100ml三角瓶中，加25mL水，超声处理15分钟，放至室温。边摇边慢慢加入5mL乙酸锌溶液及5mL亚铁***溶液，加水至刻度，混匀。静置30min，用干燥滤纸过滤到50mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过备用。（乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌，加3mL冰乙酸，加水溶解并稀释至100mL；亚铁***溶液：称取10.6g亚铁***，用水溶解并稀释至100mL。）
脂肪含量高的样品：固体样品精密称取一次服用量，先用20mL***或石油醚淋洗3次，一边淋洗一边振摇，去除醚层，固体部分精密加乙腈50mL，称重，超声处理15分钟，放至室温，用乙腈补重，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过备用；液体样品精密吸取10mL，加入20mL***或石油醚，振摇，静置分层，水层收集到50mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过备用。
（3）检测结果
样品溶液中目标峰与对照品溶液色谱、光谱图均一致。
3.1、浓度为40~50μg/mL的对照品溶液进样10μL，色谱图及光谱图如图1~4所示：图1中12.3min色谱峰为去甲基卡波地那非对照品的色谱峰，20.0min色谱峰为二硫去甲基卡波地那非对照品的色谱峰，20.6min色谱峰为二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非对照品的色谱峰；图2为去甲基卡波地那非对照品色谱峰的光谱扫描图，图3为二硫去甲基卡波地那非对照品色谱峰的光谱扫描图，图4为二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非对照品色谱峰的光谱扫描图。
3.2、将按上述制备方法制备的三种供试品溶液分别进样10μL，色谱图及光谱图如图5~10所示：图5中12.4min色谱峰为某咖啡粉中去甲基卡波地那非的色谱峰，图6为其光谱扫描图；图7中20.7min色谱峰为某保健酒中二硫去甲基卡波地那非的色谱峰，图8为其光谱扫描图；图9中21.5min色谱峰为某牡蛎压片糖果中二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非的色谱峰，图10为其光谱扫描图。
（二）、液相色谱-质谱联用法
（1）试验材料
Thermo LTQ-XL液质联用仪；Dikma Spursil C18色谱柱（150mm×2.1mm，3μm）柱，其余同上。
（2）色谱条件及样品制备方法
2.1、色谱条件与***适用性试验
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱（规格为150mm×2.1mm，内径3μm），流动相同上；流速：0.2mL/min，柱温35℃。
2.2、质谱条件
电喷雾离子化源（ESI），ESI+扫描，雾化器流速：3L/min；
加热器温度：400℃；
干燥气流速：10L/min；加热气流速：10L/min；
接口温度：300℃；
喷雾电压：4.5kv。
扫描方式：一级质谱全扫描、二级质谱全扫描，扫描范围：50~600m/z。
2.3、对照品溶液的制备
取上述储备液，临用时，取适量储备液用50%乙腈稀成浓度为10μg/mL的溶液，即得（置于8℃以下冰箱保存）。
2.4、供试品溶液的制备
取高效液相色谱法检查呈阳性的供试品溶液作为本项目检查用的供试品溶液，用50%乙腈稀释为与对照品浓度相近的溶液。
2.5、测定法
分别取空白溶液、供试品溶液和对照品溶液各10μL，注入液质联用仪，记录液相色谱图及一、二级质谱图。
（3）检测结果
供试品色谱图中，出现与对照品色谱保留时间相同的色谱峰，且其一级质谱及二级质谱均与对照品一致，如图11~16所示。
图11为咖啡粉样品中去甲基卡波地那非的一级质谱图，准分子离子峰为439；图12为其二级质谱图，主要离子碎片为m/z 339、311。图13为保健酒样品中二硫去甲基卡波地那非的一级质谱图，准分子离子峰为471；图14为其二级质谱图，主要离子碎片为m/z 440、414、385、371；图15为某牡蛎压片糖果中样品中二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非的一级质谱图，准分子离子峰为499；图16为其二级质谱图，主要离子碎片为m/z 468、442、428、385、371、343。
（三）、结论如下：
综上，实验结果均满足要求，表明本方法可专属、灵敏、快速地初筛和确证补肾壮阳类中成药和抗疲劳类保健食品，或者非法宣称补肾壮阳和抗疲劳类食品中非法添加去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非。
最后所应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照本发明实施例进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，都不脱离本发明的技术方案的精神和范围，其均应涵盖本发明的权利要求保护范围中。
Claims (1)
1.一种检测去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非的方法，其特征在于：包括如下步骤：
（1）、高效液相色谱法
1.1、色谱条件与***适应性试验
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的液相色谱柱；二极管阵列检测器，检测波长为230nm，扫描波长：200~400nm；柱温：35℃；流速：1.0mL/min；以0.1%甲酸溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，按下表程序梯度洗脱，其中，理论塔板数以去甲基卡波地那非峰计算，应不低于2000；
流动相梯度洗脱：时间段0~5min，流动相A 80%，流动相B 20%；时间段5.1~15min，流动相A 80~60%，流动相B 20~40%；时间段15.1~26min，流动相A 60~25%，流动相B 40~75%；时间段26.1~28min，流动相A 25%，流动相B 75%；时间段28.1~29min，流动相A 25~80%，流动相B75~20%；时间段29.1~39min，流动相A 80%，流动相B 20%；
1.2、对照品溶液的制备
称取去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非对照品10mg，置25mL量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1mL含0.4~0.5mg的储备液，临用时，取1mL用甲醇稀释定容至10mL，即得；
1.3、供试品溶液的制备
Ⅰ、低蛋白低脂肪样品：若供试品为固体制剂，研细，称取一次服用量，置50mL容量瓶中，加乙腈40mL，超声处理15分钟，放至室温，用乙腈稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过备用；若供试品为液体制剂，摇匀，量取一次服用量，置50mL容量瓶中，加乙腈至40mL，振摇3分钟，加乙腈稀释至刻度，摇匀后用微孔滤膜滤过备用；
Ⅱ、蛋白质含量高的样品：固体样品称取一次服用量，如果是液体样品吸取5mL，置于容器中，加25mL水，超声处理15分钟，放至室温，边摇边慢慢加入5mL乙酸锌溶液及5mL亚铁***溶液，加水至刻度，混匀，静置30min，用干燥滤纸过滤到50mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过备用；
Ⅲ、脂肪含量高的样品：固体样品称取一次服用量，先用20mL***或石油醚淋洗3次，一边淋洗一边振摇，去除醚层，固体部分精密加乙腈50mL，称重，超声处理15分钟，放至室温，用乙腈补重，摇匀，用微孔滤膜滤过备用；液体样品吸取10mL，加入20mL***或石油醚，振摇，静置分层，水层收集到50mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过备用；
1.4、测定法
分别取供试品溶液和对照品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图及DAD光谱图；
1.5、结果判断
供试品色谱图中，应不得检出与对照品色谱保留时间及DAD光谱一致的色谱峰，若检出相应的色谱峰，则采用高效液相色谱-质谱联用法确证；
（2）、高效液相色谱-质谱联用法
2.1、色谱条件与***适用性试验
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，流动相同上；流速：0.2mL/min，柱温35℃；
2.2、质谱条件
电喷雾离子化源ESI，ESI+扫描，雾化器流速：3L/min；
加热器温度：400℃；
干燥气流速：10L/min；
加热气流速：10L/min；
接口温度：300℃；
喷雾电压：4.5kv；
扫描方式：一级质谱全扫描、二级质谱全扫描，扫描范围：50~600m/z；
2.3、对照品溶液的制备
取去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非对照品，置量瓶中，加乙腈稀释定容至刻度，摇匀，制成每1mL含0.4~0.5mg的储备液；临用时，取适量储备液用50%乙腈稀成浓度为10μg/mL的溶液，即得；
2.4、供试品溶液的制备
取高效液相色谱法检查呈阳性的供试品溶液作为检查用的供试品溶液，用50%乙腈稀释为与对照品浓度相近的溶液；同时制备空白溶液；
2.5、测定法
分别取空白溶液、供试品溶液和对照品溶液，注入液质联用仪，记录液相色谱图及一、二级质谱图；
2.6、结果判断
供试品色谱图中，应不得检出与对照品色谱保留时间、一级质谱图及二级质谱图一致的色谱峰；若检出相应的色谱峰，则确定非法添加了去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非或二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811171665.3A CN109142587B (zh) | 2018-10-09 | 2018-10-09 | 检测去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811171665.3A CN109142587B (zh) | 2018-10-09 | 2018-10-09 | 检测去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN109142587A true CN109142587A (zh) | 2019-01-04 |
| CN109142587B CN109142587B (zh) | 2021-12-07 |
Family
ID=64810983
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201811171665.3A Active CN109142587B (zh) | 2018-10-09 | 2018-10-09 | 检测去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN109142587B (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110940755A (zh) * | 2019-12-18 | 2020-03-31 | 山西省食品药品检验所(山西省药品包装材料监测中心) | 一种食品中4种他达拉非类物质的检测方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103926336A (zh) * | 2013-12-18 | 2014-07-16 | 重庆市食品药品检验所 | 一种非法添加壮阳类化学成分的液-质多指标快速检测方法 |
| CN105158358A (zh) * | 2015-08-18 | 2015-12-16 | 江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心 | 同时检测中成药和保健品中非法添加的42种化学药品的方法 |
| CN105651884A (zh) * | 2015-12-31 | 2016-06-08 | 无限极（中国）有限公司 | 一种改善阳虚和/或缓解疲劳类化学物质的检测方法 |
-
2018
- 2018-10-09 CN CN201811171665.3A patent/CN109142587B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103926336A (zh) * | 2013-12-18 | 2014-07-16 | 重庆市食品药品检验所 | 一种非法添加壮阳类化学成分的液-质多指标快速检测方法 |
| CN105158358A (zh) * | 2015-08-18 | 2015-12-16 | 江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心 | 同时检测中成药和保健品中非法添加的42种化学药品的方法 |
| CN105651884A (zh) * | 2015-12-31 | 2016-06-08 | 无限极（中国）有限公司 | 一种改善阳虚和/或缓解疲劳类化学物质的检测方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 曾伟明: "BJS201805食品中那非类物质的测定", 《道客巴巴》 * |
| 食品药品监管总局: "BJS201601食品中那非类物质的测定", 《BJS201601食品中那非类物质的测定》 * |
| 黄朝辉等: "保健食品中新型二硫代卡地那非类似物的分析鉴定", 《中国现代应用药学》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110940755A (zh) * | 2019-12-18 | 2020-03-31 | 山西省食品药品检验所(山西省药品包装材料监测中心) | 一种食品中4种他达拉非类物质的检测方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN109142587B (zh) | 2021-12-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103760269B (zh) | 一种兽药残留的检测方法 | |
| Vu et al. | Clinical screening of paraquat in plasma samples using capillary electrophoresis with contactless conductivity detection: towards rapid diagnosis and therapeutic treatment of acute paraquat poisoning in Vietnam | |
| Wen et al. | Simultaneous determination of four aflatoxins and ochratoxin A in ginger and related products by HPLC with fluorescence detection after immunoaffinity column clean‐up and postcolumn photochemical derivatization | |
| CN104297026B (zh) | 一种提取中药陈皮中的黄酮类有效成分的方法 | |
| Gao et al. | Simultaneous analysis of seven alkaloids in Coptis‐Evodia herb couple and Zuojin pill by UPLC with accelerated solvent extraction | |
| CN107748212B (zh) | 一种羊奶及其制品中检测药物的方法 | |
| CN106018586A (zh) | 同时检测7种睡眠类化学药品的检测方法 | |
| Ge et al. | Trace residue analysis of dicyandiamide, cyromazine, and melamine in animal tissue foods by ultra-performance liquid chromatography | |
| CN107449846B (zh) | Hplc-ms测定小儿安神补脑颗粒中有效成分的方法 | |
| Chen et al. | Determination of cobalamin in nutritive supplements and chlorella foods by capillary electrophoresis− inductively coupled plasma mass spectrometry | |
| CN113514584A (zh) | 一种对食品中非法添加的托拉塞米进行定性、定量检测的方法及应用 | |
| Kim et al. | Ultra‐performance convergence chromatography method for the determination of four chromones and quality control of Saposhnikovia divaricata (Turcz.) Schischk. | |
| Jeong et al. | A sensitive UPLC–ESI–MS/MS method for the quantification of cinnamic acid in vivo and in vitro: Application to pharmacokinetic and protein binding study in human plasma | |
| Guo et al. | Analysis of aristolochic acid I in mouse serum and tissues by using magnetic solid-phase extraction and UHPLC-MS/MS | |
| Weng et al. | Determination of licochalcone A in rat plasma by UPLC–MS/MS and its pharmacokinetics | |
| CN109142587A (zh) | 检测去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非的方法 | |
| CN105699510B (zh) | 一种绵马贯众药材中山柰苷的含量测定方法 | |
| KR20190087900A (ko) | 도네페질 및 메만틴의 동시 분석방법 | |
| CN106706835A (zh) | 一种金莲花泡腾片的质量检测方法 | |
| CN101816753B (zh) | 一种治疗感冒的复方制剂的质量检测方法 | |
| CN115201354B (zh) | 中成药和保健品中42种非法添加安神类和抗抑郁类药物的检测方法 | |
| CN108414666B (zh) | 一种姜药材挥发油提取物中姜辣素含量的测定方法 | |
| CN103512979B (zh) | 一种药物组合物坐珠达西的检测方法 | |
| CN111948331B (zh) | 一种无糖型清肝颗粒的质量检测方法 | |
| CN106153795A (zh) | 测定鹅去氧胆酸原料药含量及其有关物质的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20240513 Address after: 030012 No. 106, Changzhi Road, Taiyuan, Shanxi Patentee after: Shanxi inspection and Testing Center (Shanxi Institute of standard measurement technology) Country or region after: China Address before: 030001 No. 12 Taoyuan South Road, Shanxi, Taiyuan Patentee before: SHANXI INSTITUTE OF FOOD AND DRUG INSPECTION (SHANXI PHARMACEUTICAL PACKAGING MATERIAL MONITORING CENTER) Country or region before: China |
|
| TR01 | Transfer of patent right |