CN109122723A - 含有沼液和芽孢杆菌的复配组合物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种含有沼液和芽孢杆菌的复配组合物及其应用。特征在于,有效成分包括组分Ⅰ和组分Ⅱ,所述的组分Ⅰ为沼液,所述的组分Ⅱ为枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌、短小芽孢杆菌中的一种。本发明的含有沼液和芽孢杆菌的复配组合物具有明显的增效作用,可显著提高防治效果;与化学合成农药相比,不易产生抗药性,且对人畜无毒、环境兼容性好,具有较好的应用前景,该复配组合物对苹果主要病害防治效果显著。

Description

含有沼液和芽孢杆菌的复配组合物及其应用
技术领域
本发明属于农作物病害生物防治技术领域,涉及含沼液和芽孢杆菌的复配组合物及应用,尤其是在防治苹果主要病害的方面。
背景技术
苹果是受众人群较多的水果,近年来,我国苹果种植面积不断扩大,但苹果种植正遭受各种病虫害的严重侵袭。苹果轮纹病、苹果炭疽病、苹果斑点落叶病、苹果褐斑病是我国苹果种植面临的主要病害,苹果斑点落叶病、褐斑病主要造成苹果早期大量落叶;苹果轮纹病、炭疽病主要危害枝干和果实,严重削弱树势,造成枝干枯死,若生长期防治不好,可导致大量烂果,造成巨大的经济损失。目前,苹果主要病害的防治仍以化学防治为主,但由于化学药剂的不科学使用,导致抗药性增加、防效降低、环境污染及果实农药残留超标等一系列严重问题。因此,寻求一种高效安全的防治方法显得尤为重要,对苹果产业的可持续发展意义重大。
生物防治因其对环境、生态及人类健康安全、无毒等优点得到了世界各国的广泛重视并发挥着越来越重要的作用。生防芽孢杆菌对多种植物病原菌有很强的拮抗作用,具有环境兼容性好、抗逆性强、对人畜安全、不易产生抗药性等优点,更符合现代社会对农业生产及有害生物综合防治的需求,因此备受国内外植物保护和环境保护专家的青睐。芽孢杆菌不但可以单独使用,还可以与化学农药或植物源杀菌剂复配,实现优势互补、减少用量、增强防效的目的,也可与其他拮抗菌混合使用,实现多种抗生菌功能互补、兼防多种病害、作用持久的协同防治效果。因此,芽孢杆菌作为生防菌剂,同其他微生物相比表现出更大的发展潜力和更广阔的应用前景。
沼液是沼气生产的重要副产品,是一种养分含量全面,速效养分丰富,肥效稳长的有机肥。将其有效利用,不仅可以带来可观的经济效益,而且还具有显著的社会效益。沼液除了有肥力的特性外,还具有抑菌、抗逆、杀死和抑制作物病虫的作用,是理想的化学农药代替品。
经过发明人研究发现,沼液和芽孢杆菌复配用于防治苹果轮纹病等苹果主要病害的防治还未见报道。
发明内容
针对现有技术中的问题,本发明提供一种含有沼液和芽孢杆菌的复配组合物及其应用,能够有效防控苹果主要病害,减少化学杀菌剂的田间用量,增效显著,有利于实现减少环境污染、控制致病菌抗性发生。
为实现上述目的,本发明是通过以下技术方案实现的:
含有沼液和芽孢杆菌的复配组合物,其特殊之处在于:
所述复配组合物的有效成分包括组分Ⅰ和组分Ⅱ,所述的组分Ⅰ为沼液,所述的组分Ⅱ为芽孢杆菌,所述芽孢杆菌选取枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌、短小芽孢杆菌中的任一种。
进一步地,所述沼液发酵原料为鸡粪、猪粪、牛粪中的一种或几种。
进一步地,所述芽孢杆菌中活孢子数为10亿/克~1000亿/克。
进一步地,所述组分Ⅰ和组分Ⅱ的重量配比为50:1-1:50。
进一步地,所述组分Ⅰ和组分Ⅱ的重量配比为20:1-1:1。
进一步地,所述组分Ⅰ和组分Ⅱ的重量配比为20:1-5:1。
本发明还提供一种含有沼液和芽孢杆菌的复配组合物应用,其特殊之处在于:
将任一项所述的复配组合物的组分Ⅰ稀释100~500倍,10~1000亿/克的组分Ⅱ稀释500-5000倍应用在防治苹果病害上。
进一步地,所述苹果病害为苹果轮纹病、苹果炭疽病、苹果斑点落叶病、苹果褐斑病中的一种或几种。
本发明与现有技术相比,其有益之处在于:
1、具有增效作用。沼液和芽孢杆菌两者以20:1至1:1的配比范围内均表现出增效作用,其中以5:1的配比增效最大。
2、在保证田间防效的前提下,沼液-芽孢杆菌复配组合物可以减少农药使用量16.67%~44.44%,有效节约了生产成本。
3、高安全性。沼液和芽孢杆菌均属于“生物农药”,不污染环境、对人无毒害、不产生抗药性。
4、沼液具有叶面肥的功效,能够提高苹果产量,增强树势,改善苹果品质,值得在农业生产上推广应用。
本发明将沼液与芽孢杆菌复配组合物在农业领域中进行应用,尤其是针对苹果轮纹病等苹果主要病害进行防治。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将结合室内试验测定、田间药效测定、安全性试验对本发明作进一步地详细描述。
实施例1
室内毒力测定与复配比例筛选
1.1供试药剂
在本实施例中有效成分组分Ⅰ和组分Ⅱ,其中组分Ⅰ为沼液,组分Ⅱ选取解淀粉芽孢杆菌(YTB1407)、100亿CFU/克枯草芽孢杆菌可湿性粉剂。其中沼液由山东民和生物科技股份有限公司提供,原料为鸡粪;解淀粉芽孢杆菌(YTB1407)由山东省烟台市农业科学研究院植物保护研究所提供;100亿CFU/克枯草芽孢杆菌可湿性粉剂为烟台绿云生物科技有限公司产品。。
1.2供试菌源及处理方法
苹果轮纹病菌Botryosphaeria dothidea自田间病果上分离获得,单孢培养纯化得到的第一代菌株,4℃冰箱内保存备用。
1.3仪器设备
仪器设备主要有电子天平、超净工作台、生物培养箱、培养皿、移液器等。
1.4实验方法
1.4.1采用FAO推荐的菌体生长速率法(Mycelium growth rate test)。
1.4.1.1含药平板的制备
试验设沼液单剂、解淀粉芽孢杆菌(YTB1407)单剂、沼液与YTB1407配比分别为50:1、20:1、10:1、5:1、1:1、1:5、1:10、1:20、1:50,对照为清水。将药剂加入定量溶化的PDA培养基中,制成含药平板,以不含药平板为空白对照,每浓度重复3次。
1.4.1.2接菌培养
用直径0.6cm打孔器沿培养好的菌落边缘打取菌盘,用消毒接种针将菌盘反转移植到平板上,置于25℃条件下恒温培养7天。
1.4.1.3结果调查
以直尺交叉测量法测量菌落扩展直径,与不施药对照菌盘扩展直径相比,计算出药剂对菌丝生长的抑制率。
1.4.2采用平板对峙法。
1.4.2.1药剂处理
将沼液300倍、400倍、500倍处理分别与灭菌的定量熔化的PDA培养基混合后,倒入培养皿内,制成平板,以无药平板为对照,每浓度重复3次。
1.4.2.2接菌培养
将已培养3d的病原真菌用6mm打孔器打孔,将菌饼移到PDA培养基中央,将芽孢杆菌在离病原菌等距离的4个对角上接种,25℃培养4d,测量抑菌带的平均宽度。
1.4.2.3测量计算
测定抑菌带(从病原菌菌落的边缘到芽孢杆菌菌落边缘最近距离)的大小。
1.5结果分析
通过菌体生长速率法测定了沼液与解淀粉芽孢杆菌YTB1407混用对苹果轮纹病菌的抑制作用。结果表明,两种单剂室内对苹果轮纹病菌均表现出较好的抑制效果,抑菌率分别为60.62%和23.70%。沼液和枯草芽孢杆菌YTB1407按照1:1、5:1、10:1、20:1混用对苹果白腐病菌抑菌率分别为63.21%、78.27%、75.56%、70.99%,增效十分显著,沼液与解淀粉芽孢杆菌5:1为最佳配比。沼液和解淀粉芽孢杆菌其他配比混用对苹果轮纹病菌抑菌率均低于沼液单剂、优于或相当于芽孢杆菌单剂(表1)。
表1沼液和解淀粉芽孢杆菌(YTB1407)混用对苹果轮纹病菌的抑制效果
处理 菌落直径(cm) 抑菌率(%)
(沼液:解淀粉芽孢杆菌YTB1407)50:1 3.98 50.86c C
20:1 2.35 70.99ab AB
10:1 1.98 75.56a A
5:1 1.76 78.27a A
1:1 2.98 63.21b B
1:5 4.75 41.36c CD
1:10 5.37 33.70d D
1:20 5.85 27.78e E
1:50 6.28 22.47e E
5%解淀粉芽孢杆菌YTB1407 6.18 23.70e E
1%沼液 3.19 60.62b B
清水对照 8.10 ——
当组分Ⅱ选取100亿CFU/克枯草芽孢杆菌可湿性粉剂时,室内试验结果表明,两种单剂室内对苹果轮纹病菌均表现出较好的抑制效果,抑菌率分别为60.62%和63.58%。沼液和枯草芽孢杆菌按照1:1、5:1、10:1、20:1混用对苹果轮纹病菌抑菌率分别为69.01%、83.09%、78.40%、74.94%,增效十分显著,沼液与枯草芽孢杆菌5:1为最佳配比。沼液和枯草芽孢杆菌其他配比混用对苹果轮纹病菌抑菌率均低于或相当于沼液单剂、枯草芽孢杆菌单剂(表2)。
表2沼液和枯草芽孢杆菌混用对苹果轮纹病菌的抑制效果
当组分Ⅱ选取侧孢芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌、短小芽孢杆菌中的任一种时,沼液和上述任何一种芽孢杆菌在1:1~50:1配比范围内,均具有显著的增效作用。
表3沼液和不同芽孢杆菌混用对苹果轮纹病菌的抑制效果
通过平板对峙法测定了沼液与解淀粉芽孢杆菌YTB1407混用对苹果轮纹病菌的抑制作用。由表4可以看出,解淀粉芽孢杆菌YTB1407对苹果轮纹病有一定的抑制效果,其抑菌带大小与浓度呈正相关,1010>108>106。解淀粉芽孢杆菌YTB1407与沼液混用后,其抑菌带明显提高,证明沼液对于解淀粉芽孢杆菌YTB1407的抑菌效果具有显著增效作用。
表4沼液和解淀粉芽孢杆菌(YTB1407)混用对苹果轮纹病菌的抑制作用
实施例2
田间药效评价试验
根据室内复配比例筛选实验筛选出沼液:芽孢杆菌=5:1为最佳配比,我们配制了沼液-芽孢杆菌杀菌组合物。按照农业部农药检定所主编的《农药田间药效试验准则(二)》设计沼液-芽孢杆菌杀菌组合物对苹果轮纹病的田间药效试验。
2.1供试药剂
沼液100倍,山东民和生物科技股份有限公司产品;
100亿CFU/克枯草芽孢杆菌可湿性粉剂500倍,烟台绿云生物科技有限公司产品;
沼液-芽孢杆菌杀菌组合物100倍、150倍、200倍,烟台农科院配制。
2.2小区设计
试验作物为苹果树,品种为富士。试验共设6个处理,每处理4个重复,共设24个小区,每小区4棵成株树。各小区随机排列。施药器械采用苏农3WDH-36型高压机动喷雾器,喷孔直径1.0mm,工作压力为3巴。将药剂按规定倍数兑水稀释,对苹果树进行全株喷雾,标准是使叶片反正面均匀着药,滴水为止。
2.3调查时间与方法
采收期每小区选中央2株,调查全部果实,记录总果数、病果数,以病果率计算防效;贮藏期,将采收后各处理果实剔除病、虫、伤果后,当日装筐置自然室温下,贮后15天、30天分别调查一次病果数,以累积病果率计算防效。
2.4药效计算方法
a、病果率(%)=(病果数/调查总果数)×100
b、防效(%)=(CK病果率-Pt病果率)/CK病果率×100
采用DPSv12.01数据处理软件的Duncan新复极差法对各防效进行多重比较。
2.5试验结果
采收期调查:沼液·芽孢杆菌复配组合物100、150倍对苹果轮纹病均表现出良好的防效,防效分别为83.69%、80.23%,二者防效无显著差异,均在1%水平上显著优于100亿CFU/克枯草芽孢杆菌可湿性粉剂500倍及沼液100倍两单剂的防效。沼液·芽孢杆菌复配组合物200倍对苹果轮纹病防效为69.29%,与100亿CFU/克枯草芽孢杆菌可湿性粉剂500倍防效相当,显著优于沼液100倍单剂。
储藏期调查:沼液·芽孢杆菌复配组合物100、150倍两处理对苹果轮纹病防效分别为80.00%、77.14%,二者防效无显著差异,均在5%水平上显著优于100亿CFU/克枯草芽孢杆菌可湿性粉剂500倍处理防效,1%水平上显著优于沼液100倍处理防效。沼液·芽孢杆菌复配组合物200倍对苹果轮纹病防效为71.43%,与100亿CFU/克枯草芽孢杆菌可湿性粉剂500倍防效相当,1%水平上显著优于沼液100倍单剂。充分说明,沼液·芽孢杆菌复配组合物对苹果轮纹病防治效果良好。(表5)。
表5沼液和解淀粉芽孢杆菌混用对苹果轮纹病的田间防效
注:表中数据均为各处理平均数据
当组分Ⅱ选取100亿CFU/克枯草芽孢杆菌可湿性粉剂时,田间试验结果表明,沼液-枯草芽孢杆菌复配组合物100倍、150倍、200倍对苹果轮纹病采收期防效分别为79.33%、74.86%、70.18%,其中沼液·枯草芽孢杆菌复配组合物100、150倍两处理防效无显著差异,均在5%水平上显著优于100亿CFU/克枯草芽孢杆菌可湿性粉剂500倍处理防效,1%水平上显著优于沼液100倍处理防效。沼液·枯草芽孢杆菌复配组合物200倍处理防效与100亿CFU/克枯草芽孢杆菌可湿性粉剂500倍防效相当,1%水平上显著优于沼液100倍单剂。沼液·枯草芽孢杆菌复配组合物对苹果轮纹病也具有良好的防治效果。
实施例3
安全性试验
复配组合物中沼液和芽孢杆菌含量小于市售产品的含量,因此其对人畜的毒性与作物的安全性是符合要求的。复配杀菌剂经认定机构毒性试验结果表明属于微毒类农药:
大鼠急性经口毒性LD50♂>5000mg/kg,♀>5000mg/kg;
大鼠急性经皮毒性LD50♂>5000mg/kg,♀>5000mg/kg;
兔眼刺激积分为0(1h),48h后为0(1:100)稀释,对眼无刺激性;
兔眼刺激积分为0(4h),对皮肤无刺激性。
本发明通过室内毒力测定和田间试验筛选出沼液和芽孢杆菌的最优配比,该复配组合物具有协同增效作用,与现有的单一制剂相比,杀菌效果明显提高,且对作物安全,值得在农业生产上推广应用,以达到减少农药环境污染、控制致病菌抗药性发生发展的目的。
本发明通过大量的生物测定筛选,发现沼液和枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌、短小芽孢杆菌中的一种以一定比例复配,有效防治苹果轮纹病等苹果主要病害。本发明对含沼液和芽孢杆菌的复配组合物在防治苹果主要病害上的应用,经过大量室内及田间试验进行验证其的效果。本发明有效成分包括组分Ⅰ和组分Ⅱ,组分Ⅰ和组分Ⅱ的制剂重量配比为50:1-1:50之间进行取值,本发明的取值不限于以上范围,因列举数值的局限,按照以上区间进行说明,但是对于落在50:1-1:50范围内的取值,均属于本发明的保护范围。
对于本领域技术人员而言,显然本发明不限于上述示范性实施例的细节,而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下,能够以其他的具体形式实现本发明。因此,无论从哪一点来看,均应将实施例看作是示范性的,而且是非限制性的,本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定,因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外,应当理解,虽然本说明书按照实施方式加以描述,但并非每个实施方式包含一个独立的技术方案,说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见,本领域技术人员应当将说明书作为一个整体,各实施例中的技术方案也可以经适当组合,形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (8)

1.含有沼液和芽孢杆菌的复配组合物,其特征在于:所述复配组合物的有效成分包括组分Ⅰ和组分Ⅱ,所述的组分Ⅰ为沼液,所述的组分Ⅱ为芽孢杆菌,所述芽孢杆菌选取枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌、短小芽孢杆菌中的一种。
2.如权利要求1所述的含有沼液和芽孢杆菌的复配组合物,其特征在于:所述沼液发酵原料为鸡粪、猪粪、牛粪中的一种或几种。
3.如权利要求1所述的含有沼液和芽孢杆菌的复配组合物,其特征在于:所述芽孢杆菌中活孢子数为10亿/克~1000亿/克。
4.如权利要求1所述的含有沼液和芽孢杆菌的复配组合物,其特征在于:所述组分Ⅰ和组分Ⅱ的重量配比为50:1-1:50。
5.如权利要求4所述的含有沼液和芽孢杆菌的复配组合物,其特征在于:所述组分Ⅰ和组分Ⅱ的重量配比为20:1-1:1。
6.如权利要求5所述的含有沼液和芽孢杆菌的复配组合物,其特征在于:所述组分Ⅰ和组分Ⅱ的重量配比为20:1-5:1。
7.含有沼液和芽孢杆菌的复配组合物应用,其特征在于:采用权利要求1-6中任一项复配组合物的组分Ⅰ稀释100~500倍,10~1000亿/克的组分Ⅱ稀释500-5000倍用于苹果病害的防治。
8.如权利要求7所述的含有沼液和芽孢杆菌的复配组合物应用,其特征在于:所述苹果病害为苹果轮纹病、苹果炭疽病、苹果斑点落叶病、苹果褐斑病中的一种或几种。
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