CN109097426A - 一种大鲵蛋白肽的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及生物技术领域，具体公开了一种大鲵蛋白肽的制备方法，包括原料准备步骤、蒸煮步骤、粉碎步骤、高温杀菌步骤、脂肪酶酶解步骤、蛋白酶酶解步骤、灭酶步骤、过滤浓缩步骤、酶解液喷雾干燥步骤：将灭酶步骤中的酶解液通过喷雾干燥机进行干燥，喷雾干燥机的压力控制为0.05‑0.19Mpa，喷雾干燥机进口处温度为180‑230℃，出口处温度为80‑100℃，在出口处收集大鲵蛋白肽粉。本方案能对大鲵中的蛋白肽进行提取，同时降低大鲵蛋白肽的加工成本。

Description

一种大鲵蛋白肽的制备方法
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种大鲵蛋白肽的制备方法。
背景技术
大鲵俗称“娃娃鱼”，其机体中含有50多种天然生物活性物。这些生物活性物在食用、药物、化妆品、健康食品等方面具有独特的研发价值。大鲵肉中蛋白含量丰富，氨基酸组成全面，符合人体需要量模式，有研究证明，大鲵具有提高免疫力和抗疲劳作用。
酶解多肽因其高蛋白质转化率、高免疫调节能力、多种功能性作用，近年来深受医药、食品行业推崇。
目前生物活性肽的制备方法有多种，常见的是酶解法和微生物法，但是由于酶解法中外用酶成本较高，微生物法制备小肽酶解时间太长，成本较高，很难实现工业化大生产。现有大鲵蛋白肽的工艺的水解度普遍较低，制备过程中多采用微生物对大鲵进行降解形成大鲵蛋白肽，微生物对大鲵的降解速度慢，成本较高。
发明内容
本发明意在提供一种大鲵蛋白肽的制备方法，以对大鲵中的蛋白肽进行提取，同时降低大鲵蛋白肽的加工成本。
为了达到上述目的，本发明的基础方案如下：一种大鲵蛋白肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
原料准备步骤：准备若干大鲵，除去大鲵的内脏，获得大鲵骨肉，对大鲵骨肉清洗备用；
蒸煮步骤：通过蒸或煮的方式，对大鲵骨肉进行除去油脂；
粉碎步骤：将蒸煮后的大鲵骨肉的投入粉碎机中，按大鲵骨肉与水的重量比1：1-2向大鲵骨肉中加入水进行浸泡处理；启动粉碎机，将大鲵骨肉粉碎至5-15目，形成鱼浆备用；
高温杀菌步骤：将粉碎步骤中的鱼浆加热到80-110℃，保持20min；然后冷却至50-70℃，形成混合物A；
脂肪酶酶解步骤：将高温杀菌后的的混合物A转移至酶解罐，同时按1：1比例加水，按大鲵重量的0.05％-3％加入脂肪酶，进行酶解，酶解时间1-4h，酶解温度为45-60℃，酶解pH7.0，形成混合物B；
蛋白酶酶解步骤：按原料准备步骤中大鲵骨肉重量的0.1％-3％向混合物B中加入复合酶，复合酶包括中性蛋白酶、风味蛋白酶和木瓜蛋白酶，且中性蛋白酶、风味蛋白酶和木瓜蛋白酶在质量比例为2:1:3，酶解时间2-6h，酶解温度为45-60℃，酶解pH7.0；
灭酶步骤：将蛋白酶酶解步骤中的混合物B加热至90℃，保温5-15min灭酶，形成混合物C；
过滤浓缩步骤：对灭酶步骤中的混合物C进行过滤，滤网孔径为40～100目，形成初滤酶解液和固体物，对初滤酶解液和固体物进行分别收集；然后对初滤酶解液进行浓缩处理，使初滤酶解液的含水量为30-70％，收集酶解液；
酶解液喷雾干燥步骤：将灭酶步骤中的酶解液通过喷雾干燥机进行干燥，喷雾干燥机的压力控制为0.05-0.19Mpa，喷雾干燥机进口处温度为180-230℃，出口处温度为80-100℃，在出口处收集大鲵蛋白肽粉。
基础方案的原理及其优点：1、原料准备步骤中准备的原料大鲵，且对大鲵进行去除内脏和清洗的处理，最终获得大鲵蛋白肽产出量最高的大鲵骨肉，在对后续的步骤中会对大鲵骨肉进行各种加工形成大鲵蛋白肽；其中采用大鲵作为制作蛋白肽，是由于大鲵肉中蛋白含量丰富，氨基酸组成全面，加工形成的大鲵蛋白肽具有高营养价值。
2、蒸煮步骤中，能将大鲵骨肉中的大部分油脂去除，减少脂肪氧化产生的腥味物质，改善最终获得的大鲵蛋白肽的风味，能够提高在后续步骤中大鲵骨肉蛋白质提取效率。
3、将大鲵骨肉进行绞碎，形成鱼浆，该鱼浆便于使用到酶解步骤中进行酶解加工，能有效的让鱼肉减小，便于在酶解罐中快速且高效的酶解。
4、高温杀菌步骤中，能对鱼浆进行加热消毒，形成混合物A，保证了后续大鲵蛋白肽的加工品质。
5、脂肪酶酶解步骤中，在混合物A中加热水和脂肪酶，控制混合物B的温度和ph值，脂肪酶能够发挥效用，对大鲵中的脂肪进行酶解，便于在后续的蛋白酶酶解步骤中复合酶充分对大鲵的鱼肉进行酶解，通过脂肪酶的酶解作用，能够降低后续步骤中过滤浓缩步骤中的过滤难度，且能进一步的降低大鲵脂肪氧化产生的腥味。
6、蛋白酶酶解步骤中采用了中性蛋白酶、风味蛋白酶和木瓜蛋白酶对混合物B中的鱼肉进行酶解，复合酶降解大分子蛋白，增加小肽的含量；此过程中需要控制酶解的温度和混合物B的ph值，让复合酶在最佳的环境对大分子蛋白进行水解，使复合酶充分的发挥效用。
7、灭酶步骤中，为后续在微生物发酵步骤中进行进一步的发酵，同时能够避免在后续的加工过程中，无法控制内源酶对鱼浆的发酵进程。
8、当混合物B酶解完成后，需要进行灭酶处理，灭酶处理是为了让将混合物B中的复合酶和脂肪酶转化为蛋白质，便于对混合物B的酶解过程进行控制。
9、过滤浓缩步骤能对酶解步骤中的混合物C进行过滤，形成初滤酶解液和固体物，初滤酶解液能进一步浓缩为酶解液，实现了固液分离。
10、酶解液喷雾干燥步骤中，能将酶解液进行高压浓缩，将酶解液中有效浓缩至粉状，便于将其与后续的烘干料混合包装；对喷雾干燥机的进口和出口处进行控制，能够有效的将酶解液中的固体与液体分离，便于对出口处的酶解粉收集。
综上所述，本方法中采用了大鲵骨肉作为制备大鲵蛋白肽的原料，在对大鲵骨肉进行酶解时，依次采用了脂肪酶和复合酶对大鲵骨肉进行酶解，脂肪酶能对大鲵的脂肪进行进一步的酶解，减少脂肪氧化产生的腥味物质；而复合酶能对大鲵骨肉中的大分子蛋白质进行进一步的酶解，此过程中复合酶能充分的将大分子蛋白质转化为大鲵蛋白肽，提取的效率提高。
进一步，所述粉碎步骤中，所述粉碎步骤中，在对原料进行粉碎后，形成的鱼浆的目数小于等于10。
将鱼浆的目数控制在10以内，能够鱼浆内鱼肉的颗粒小，便于在后续步骤中进行快速的酶解和微生物降解，能够加快原料的分解为蛋白质的速度。
进一步，所述脂肪酶酶解步骤中，用浓度为1.0-2.0mol/L的盐酸溶液及浓度为1.0-2.0mol/L的氢氧化钠溶液调节pH，酶解的同时进行搅拌，搅拌速度为50～60r/min。
酶解的过程中，混合物B的ph值也会变化，此时可采用盐酸溶液或氢氧化钠溶液对，鱼浆的ph值进行调节，让脂肪酶一直保持活性；同时在此过程中对混合物B进行搅拌，能够增强脂肪酶与混合物B中脂肪的接触度，加快脂肪的酶解速度。
进一步，所述蛋白酶酶解步骤中，向酶解罐内的混合物B中加入粉状氯化钙并混合均匀，使混合物B中的氯化钙溶液的浓度为0.02～0.03mol/L。
使用氯化钙对混合物B进行ph值的调节，便于让酶解时的鱼浆的ph＝7.0，让鱼浆内的内源酶处于最佳的ph值中，便于蛋白酶对混合物B进行快速的酶解。
进一步，所述蛋白酶酶解步骤中，用浓度为1.0-2.0mol/L的盐酸溶液及浓度为1.0-2.0mol/L的氢氧化钠溶液调节pH，酶解的同时进行搅拌，搅拌速度为40～70r/min。
酶解的过程中，混合物B的ph值也会变化，此时可采用盐酸溶液或氢氧化钠溶液对，鱼浆的ph值进行调节，让蛋白酶一直保持活性；同时在此过程中对混合物B进行搅拌，能够增强蛋白酶与混合物B中鱼肉的接触度，加快大鲵的酶解速度。
进一步，所述酶解液喷雾干燥步骤中，喷雾干燥机的压力控制为0.1-0.13Mpa，喷雾干燥机进口处温度为210℃，出口处温度为90℃。
对喷雾干燥机进口处和出口处的温度进行进一步的控制，该温度与酶解液所需的温度相适应，便于使酶解液中的酶解粉与水分快速分离，使酶解粉能够快速干燥。
进一步，所述高温杀菌步骤中，将粉碎步骤中的鱼浆加热到90-100℃，保持20min；然后冷却至60℃，形成混合物A。
高温杀菌的步骤，其温度的选用区间与保持时长为最佳配合，保证了鱼浆的消毒杀菌，还实现了提高效率和节能的效果。
进一步，所述蛋白酶酶解步骤中，酶解时间3-5h，酶解温度为50-55℃。
是为了给蛋白酶提供一个适宜的温度，便于让蛋白酶充分的发挥作用。
进一步，所述过滤浓缩步骤中，板框压滤机或者精滤机的滤网孔径为60～80目。
采用60～80目的滤孔对混合物C进行过滤，能够充分的将混合物C中的固体物过滤出来，便于对初滤酶解液进行收集。
附图说明
图1为本发明一种大鲵蛋白肽的制备方法的实施流程图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式进一步详细的说明：
实施例1中的一种大鲵蛋白肽的制备方法基本如附图1所示，其具体步骤如下：
原料准备步骤：准备若干大鲵，除去大鲵的内脏，获得大鲵骨肉，对大鲵骨肉清洗备用；
蒸煮步骤：通过蒸或煮的方式，对大鲵骨肉进行除去油脂；
粉碎步骤：将蒸煮后的大鲵骨肉的投入粉碎机中，按大鲵骨肉与水的重量比1：1-2向大鲵骨肉中加入水进行浸泡处理；启动粉碎机，将大鲵骨肉粉碎至10目，形成鱼浆备用；
高温杀菌步骤：将粉碎步骤中的鱼浆加热到90-100℃，保持20min；然后冷却至60℃，形成混合物A；
脂肪酶酶解步骤：将高温杀菌后的的混合物A转移至酶解罐，同时按1：1比例加水，按大鲵重量的0.1％-2％加入脂肪酶，进行酶解，酶解时间2-3h，酶解温度为50-55℃，酶解pH7.0，形成混合物B；在此过程中，用浓度为1.0-2.0mol/L的盐酸溶液及浓度为1.0-2.0mol/L的氢氧化钠溶液调节pH，酶解的同时进行搅拌，搅拌速度为40～70r/min；
蛋白酶酶解步骤：按原料准备步骤中大鲵骨肉重量的0.2％-2％向混合物B中加入复合酶，复合酶包括中性蛋白酶、风味蛋白酶和木瓜蛋白酶，且中性蛋白酶、风味蛋白酶和木瓜蛋白酶在质量比例为2:1:3，酶解时间3-5h，酶解温度为50-55℃，酶解pH7.0；用浓度为1.0-2.0mol/L的盐酸溶液及浓度为1.0-2.0mol/L的氢氧化钠溶液调节pH，酶解的同时进行搅拌，搅拌速度为50～60r/min；
灭酶步骤：将蛋白酶酶解步骤中的混合物B加热至90℃，保温10min灭酶，形成混合物C；
过滤浓缩步骤：对灭酶步骤中的混合物C进行过滤，滤网孔径为60～80目，形成初滤酶解液和固体物，对初滤酶解液和固体物进行分别收集；然后对初滤酶解液进行浓缩处理，使初滤酶解液的含水量为40-60％，收集酶解液；
酶解液喷雾干燥步骤：将灭酶步骤中的酶解液通过喷雾干燥机进行干燥，喷雾干燥机的压力控制为0.1-0.13Mpa，喷雾干燥机进口处温度为210℃，出口处温度为90℃，在出口处收集大鲵蛋白肽粉。
实施例2
实施例2与实施例1的区别在于，脂肪酶酶解步骤中，需要对混合物A的pH进行调整，需要将加入到混合物A中的盐酸溶液或氢氧化钠溶液使用搅拌机进行搅拌混合，搅拌机中设有搅拌杆，搅拌杆内设中空的空腔，搅拌杆的下端设有与空腔连通的通孔，便于待加入的盐酸溶液或氢氧化钠溶液放置到空腔内，搅拌时，盐酸溶液或氢氧化钠溶液能从通孔处流出，且此时搅拌杆的搅拌速度为50～60r/min，此设置放置能够让盐酸溶液或氢氧化钠溶液依次从通孔处流出，便于实现充分搅拌，选用该搅拌速度即可对其进行充分搅拌。
以上所述的仅是本发明的实施例，方案中公知的具体结构和/或特性等常识在此未作过多描述。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明结构的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。本申请要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的具体实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。

Claims (9)

1.一种大鲵蛋白肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
原料准备步骤：准备若干大鲵，除去大鲵的内脏，获得大鲵骨肉，对大鲵骨肉清洗备用；
蒸煮步骤：通过蒸或煮的方式，对大鲵骨肉进行除去油脂；
粉碎步骤：将蒸煮后的大鲵骨肉的投入粉碎机中，按大鲵骨肉与水的重量比1：1-2向大鲵骨肉中加入水进行浸泡处理；启动粉碎机，将大鲵骨肉粉碎至5-15目，形成鱼浆备用；
高温杀菌步骤：将粉碎步骤中的鱼浆加热到80-110℃，保持20min；然后冷却至50-70℃，形成混合物A；
脂肪酶酶解步骤：将高温杀菌后的的混合物A转移至酶解罐，同时按1：1比例加水，按大鲵重量的0.05％-3％加入脂肪酶，进行酶解，酶解时间1-4h，酶解温度为45-60℃，酶解pH7.0，形成混合物B；
蛋白酶酶解步骤：按原料准备步骤中大鲵骨肉重量的0.1％-3％向混合物B中加入复合酶，复合酶包括中性蛋白酶、风味蛋白酶和木瓜蛋白酶，且中性蛋白酶、风味蛋白酶和木瓜蛋白酶在质量比例为2:1:3，酶解时间2-6h，酶解温度为45-60℃，酶解pH7.0；
灭酶步骤：将蛋白酶酶解步骤中的混合物B加热至90℃，保温5-15min灭酶，形成混合物C；
过滤浓缩步骤：对灭酶步骤中的混合物C进行过滤，滤网孔径为40～100目，形成初滤酶解液和固体物，对初滤酶解液和固体物进行分别收集；然后对初滤酶解液进行浓缩处理，使初滤酶解液的含水量为30-70％，收集酶解液；
酶解液喷雾干燥步骤：将灭酶步骤中的酶解液通过喷雾干燥机进行干燥，喷雾干燥机的压力控制为0.05-0.19Mpa，喷雾干燥机进口处温度为180-230℃，出口处温度为80-100℃，在出口处收集大鲵蛋白肽粉。
2.根据权利要求1所述的一种大鲵蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述粉碎步骤中，所述粉碎步骤中，在对原料进行粉碎后，形成的鱼浆的目数小于等于10。
3.根据权利要求2所述的一种大鲵蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述脂肪酶酶解步骤中，用浓度为1.0-2.0mol/L的盐酸溶液及浓度为1.0-2.0mol/L的氢氧化钠溶液调节pH，酶解的同时进行搅拌，搅拌速度为50～60r/min。
4.根据权利要求3所述的一种大鲵蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述蛋白酶酶解步骤中，向酶解罐内的混合物B中加入粉状氯化钙并混合均匀，使混合物B中的氯化钙溶液的浓度为0.02～0.03mol/L。
5.根据权利要求4所述的一种大鲵蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述蛋白酶酶解步骤中，用浓度为1.0-2.0mol/L的盐酸溶液及浓度为1.0-2.0mol/L的氢氧化钠溶液调节pH，酶解的同时进行搅拌，搅拌速度为40～70r/min。
6.根据权利要求5所述的一种大鲵蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述酶解液喷雾干燥步骤中，喷雾干燥机的压力控制为0.1-0.13Mpa，喷雾干燥机进口处温度为210℃，出口处温度为90℃。
7.根据权利要求6所述的一种大鲵蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述高温杀菌步骤中，将粉碎步骤中的鱼浆加热到90-100℃，保持20min；然后冷却至60℃，形成混合物A。
8.根据权利要求7所述的一种大鲵蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述蛋白酶酶解步骤中，酶解时间3-5h，酶解温度为50-55℃。
9.根据权利要求8所述的一种大鲵蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述过滤浓缩步骤中，板框压滤机或者精滤机的滤网孔径为60～80目。
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