CN109091266A - 一种兔心肌梗死动物模型的构建方法 - Google Patents
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Abstract
本发明具体涉及一种兔心肌梗死模型的构建方法。该方法首先使用指引导管从颈动脉进入主动脉根部的窦底，再将微导丝连同微导管送入指引导管的头端。在X线造影的指引下，调整指引导管及微导丝，将微导丝头端送入靶冠状动脉的远段。沿微导丝将微导管送入靶冠脉动脉的所需要到达部位(近段、中段或远段)。撤出微导丝，沿微导管向冠状动脉中注入混有明胶海绵栓塞剂、或微小的自身组织、或小血块的造影剂，或微小的弹簧圈，使靶冠状动脉闭塞，从而成功构建心肌梗死模型。本发明提供了一种全新的非开胸、微创、易行实用的兔心肌梗死模型制备方法，避免开胸操作，避免心包粘连，减少死亡。微创法对动物的损伤小，更有利于冠心病等心脏领域科学研究。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体地说，涉及一种兔心肌梗死模型的构建方法。
背景技术
冠心病是严重危害人类健康的常见疾病。急性心肌梗死作为冠心病中最严重的临床类型，是造成冠心病患者死亡的主要原因。虽然近年来随着介入治疗、冠状动脉旁路移植手术等在临床的应用，急性心肌梗死的急性期病死率有了一定程度的下降，但最终死于心力衰竭等远期死亡率并未下降。
在20世纪50-80年代，治疗心力衰竭主要使用药物来纠正其血流动力学的异常；而至90年代，阻断神经激素、阻断心肌重构的恶性循环已成为心力衰竭治疗的关键，但是心肌梗死所并发的心力衰竭，是由于梗死后所产生的疤痕组织无舒缩功能所致，应用药物仅能阻断心肌重塑的恶性循环，不能从根本上解决问题。故此，如何促进梗死区内心肌细胞再生，提高心肌细胞数目，防止心室重构，已成为防止梗死后心力衰竭发生及降低心肌梗死后远期死亡率的关键。许多科研工作者长期以来一直从事于研究心肌梗死的方法，包括药物治疗、溶栓、冠脉搭桥术、基因治疗以及现在的干细胞组织工程。然而所有这些方法，在应用于临床实验之前都必须先经动物实验证实，而良好动物模型的制作是决定这些实验能否顺利进行以及能否获得可靠结果的前提和基础。目前应用的制作心肌梗死动物模型的方法所制作的动物模型死亡率高，大大影响动物实验的顺利进行和影响实验结果的真实可靠。目前最常用的建立方法是通过左侧胸腔开胸手术永久结扎冠状动脉实现，这种方法能在直视下精确定位，简单、可靠，但是开胸手术会导致大小动物的高死亡率及其它与生理及临床并无关联的不良后果。
中国专利文献CN1472714A公开了一种制作心肌梗死动物模型的方法，包括以下几个步骤：(1)麻醉动物、(2)测心电图、(3)切开胸腔，暴露心脏、(4)用电凝烧灼法阻塞冠状动脉、(5)缝合胸腔、(6)术后护理，该方法动物模型制作时间短，能真实模拟心肌梗死自然发生过程，但开胸后创伤大，操作复杂，容易肺部损伤，易出现大出血、血气胸、呼吸衰竭、缺氧，因此容易死亡。由于开胸手术，术后心包等感染，会造成胸腔粘连，如需第二次开胸做相关研究，如注射干细胞等，手术时会因胸腔粘连而操作困难，后续实验步骤难以完成，动物更容易死亡。中国专利文献CN106806035A公开了一种建立心肌梗死模型的方法，该方法应用一根带线的细针以一种特殊的方式行小鼠胸腔穿刺，并在穿刺后以特殊的打结方法结扎冠状动脉，所有的操作均在超声引导下进行。该方法除了要求术者掌握心脏的解剖结构以及冠状动脉的走向外，还要求具备熟练而精湛的手术操作能力，难度较大，而且动脉结扎过程历时长，易出血，影响实验成功率。因此针对现有技术的缺点，有必要研发一种避免开胸、微创且简单易行的心肌梗死动物模型的制备方法。而关于本发明的兔心肌梗死动物模型的构建方法，目前还未见报道。
发明内容
本发明的目的是，针对现有技术中的不足，提供一种兔心肌梗死模型的构建方法。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：
一种兔心肌梗死模型的构建方法，所述的方法包括以下步骤：
(1)将麻醉后的兔固定，动物四肢与心电图仪和带有心电图软件的电脑相连，使动物的心电图可输入电脑；
(2)分离出左或右颈动脉，采用Seldinger技术穿刺颈动脉，将血管鞘送入颈动脉并固定，从血管鞘注射肝素；
(3)体外将三通管分别连接压力监测器、造影剂及生理盐水，用右冠状动脉指引导管与三通管连接；将右冠状动脉指引导管头端送入上述固定的血管鞘，从右冠状动脉指引导管内送入导丝，在X线的透视下，在导丝指引下，缓慢将右冠状动脉指引导管的头端至主动脉根部的窦底。后撤出导丝；
(4)将直径0.014英寸的冠状动脉介入微导丝头端塑型小弯曲，再送入Finecross微导管至其头端；连同微导丝将微导管送至指引导管的头端。
(5)在排完空气后，经三通管向右冠状动脉指引导管打少许造影剂，显示主动脉窦底及左冠状动脉；缓慢调整指引导管使其头端尽可能靠近冠状动脉开口。
(6)在血管造影的指引下，反复调整指引导管的头端，并旋转导丝，使导丝头端靠近并进入靶冠状动脉远段(如前降支，或回旋支，或右冠状动脉)。固定指引导管和导丝，沿导丝缓慢推送微导管头端至靶冠脉动脉的任何所需要到达部位(近段、中段或远段)。
(7)撤出导丝，利用微导管行冠脉造影，显示明显的靶血管；将明绞海绵栓塞剂、微小的自身组织或小血块掺入造影剂中，沿微导管注入混合后的造影剂；或者经微导管送入微小的弹簧圈至冠状动脉。
(8)最后利用微导管造影显示冠脉闭塞，无明显血流。
(9)相比术前，心电图显示显的缺血损伤性ST-T改变(图5)，心梗模型制作成功；
本发明优点在于：
1、该方法避免开胸的微创技术，经导管向冠状动脉中注入混有明绞海绵栓塞剂，或微小的自身组织，或小血块的造影剂，或微小的弹簧圈，对动物的损伤小。
2、建立了一种在兔动物上与人类急、慢性心肌梗死疾病高度相似的动物疾病模型。
3、该模型可用于用于急、慢性心肌梗死疾病以及急性、慢性心力衰竭的病因学，病理学和药理学，以及在对人类心肌梗死发病机制的研究、新药开发以及细胞生物医疗研究中具有极高的应用价值。
附图说明
图1：通过指引导管，先将导丝送入左前降支远段，能后沿导丝将微导管送入左前降支。
图2：是经微导管行心肌梗死前左前降支造影。
图3：经微导管注入明绞海绵栓塞剂、微小的自身组织，或小血块后，利用微导管造影显示冠脉闭塞，无明显血流。
图4：经微导管送弹簧圈至左前降支，使左前降支闭塞。
图5：冠脉闭塞后心电图显示较心梗前ST明显缺血性改变。
图6：冠脉闭塞术后1个月后病理检查示明确的心梗区。
具体实施方式
下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明公开的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例
(一)实验准备阶段：
(1)按1～1.5ml/Kg取3％戊巴比妥溶液，用注射器对兔进行多点肌肉注射，全麻后，固定四肢，用4个别针分别刺入四肢皮肤，别针与心电图仪的肢体导联相连，心电图仪与心电图软件的个人电脑相连，因此动物的体表心电图可输入电脑，以备分析；
(2)将颈部的兔毛剃干净后，常规消毒，沿正中切开皮肤，分离出左或右颈动脉；
(3)利用临床用的桡动脉穿刺针，采用Seldinger技术，穿刺颈动脉，并送入导丝至颈动脉，沿着导丝将5或6F血管鞘缓慢送入颈动脉并固定，按200单位/Kg从血管鞘注射肝素；
(4)体外将三通管分别连接压力监测器、造影剂及生理盐水。选用临床常用的5F右冠状动脉指引导管(Cordis,强生(上海)医疗器材有限公司)，并与三通管连接。
(二)送微导管至冠状动脉：
(5)将指引导管的头端送入血管鞘。从指引导管内送入导丝，在X线的透视下，在导丝指引下，缓慢将指引导管的头端至主动脉根部的窦底，其后撤出导丝；
(6)将直径0.014英寸的冠脉介入微导丝头端塑型成一小弯，再送入Finecross微导管至其头端；连同微导丝将微导管送至指引导管的头端。(Finecross微导管是泰尔茂(中国)投资有限公司(Terumo(China)Holding CO.,LTD)生产，长度分为130cm，其尾端外径为2.6F，整体呈锥形结构自尾端向头端逐渐缩小，头端外径仅为1.8F(0.6mm)，而内径为0.4572mm(0.018英寸)。
(7)在排完空气后，经三通管向用指引导管打少许造影剂，显示主动脉窦底及左冠状动脉，缓慢调整指引导管使其头端尽可能靠近左冠状动脉开口。
(8)在血管造影的指引下，反复调整指引导管的头端，并旋转导丝，使导丝头端靠近并进入左冠脉动脉的前降支远段。固定指引导管和导丝，沿导丝缓慢推送微导管头端至至左前降支近段或中段(视心梗程度的需求而定)(图1)。如微导丝进入回旋支，也同上操作；
(9)撤出导丝，利用微导管行冠脉造影，显示明显的靶血管(图2)。
(三)沿微导管送入栓塞内容物至冠状动脉：
(10)将明绞海绵栓塞剂，或微小的自身组织，或小血块，掺入1ml造影剂中，沿微导管注入这些混有明绞海绵栓塞剂，或微小的自身组织，或小血块的造影剂，最后利用微导管造影显示冠脉闭塞，无明显血流(图3)，也可经微导管送入微小的弹簧圈至冠状动脉(图4)；
(11)相比术前，心电图显示显的缺血损伤性ST-T改变(图5)，心梗模型制作成功；
(12)拨出指引导管，微导管及血管鞘，止血，缝合皮肤，手术结束。送动物回笼，常规抗感染3天；
(13)1个月后处于动物，获取心脏标本，病理检查显示明显的心梗区(图6)，再次证实心梗模型制作成功。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。
Claims (1)
1.一种兔心肌梗死动物模型的构建方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：
(1)将麻醉后的兔固定，动物四肢与心电图仪和带有心电图软件的电脑相连，使动物的心电图可输入电脑；
(2)分离出左或右颈动脉，采用Seldinger技术穿刺颈动脉，将血管鞘送入颈动脉并固定，从血管鞘注射肝素；
(3)体外将三通管分别连接压力监测器、造影剂及生理盐水，用大小为5F的右冠状动脉指引导管与三通管连接；将右冠状动脉指引导管头端送入上述固定的血管鞘，从右冠状动脉指引导管内送入导丝，在X线的透视下，在导丝指引下，缓慢将右冠状动脉指引导管的头端送至主动脉根部的窦底；撤出导丝，排完指引导管及连接***的空气；
(4)将冠脉介入治疗的微导丝头端塑型小弯曲，再送入2.6F的Finecross微导管(头端外径仅为1.8F(0.6mm))至其头端；将Finecross微导管头端送入指引导管，连同微导丝将微导管送至指引导管头端；
(5)经三通管向指引导管打造影剂，显示主动脉窦底及左冠状动脉；缓慢调整指引导管使其头端尽可能靠近冠状动脉开口；
(6)在血管造影的指引下，反复调整指引导管头端，并旋转导丝，使导丝头端靠近并进入靶冠状动脉(如前降支，或回旋支，或右冠状动脉)；将微导管中的导丝头端缓慢送入靶冠状动脉远段；固定指引导管和导丝，沿导丝缓慢推送微导管头端至靶冠脉动脉的任何所需要到达部位(近段、中段或远段)；
(7)撤出导丝，利用微导管行冠脉造影，显示明显的靶血管；将明绞海绵栓塞剂、微小的自身组织或小血块掺入造影剂中，沿微导管注入混合后的造影剂；或者经微导管送入微小的弹簧圈至冠状动脉。
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Family Applications (1)
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| CN201810970987.8A Pending CN109091266A (zh) | 2018-08-24 | 2018-08-24 | 一种兔心肌梗死动物模型的构建方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN109091266A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116525121A (zh) * | 2023-07-05 | 2023-08-01 | 昆明同心医联科技有限公司 | 栓塞动脉瘤的首发弹簧圈推荐模型建立方法及其应用 |
-
2018
- 2018-08-24 CN CN201810970987.8A patent/CN109091266A/zh active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| CN116525121A (zh) * | 2023-07-05 | 2023-08-01 | 昆明同心医联科技有限公司 | 栓塞动脉瘤的首发弹簧圈推荐模型建立方法及其应用 |
| CN116525121B (zh) * | 2023-07-05 | 2023-09-26 | 昆明同心医联科技有限公司 | 栓塞动脉瘤的首发弹簧圈推荐模型建立方法及其应用 |
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