CN109055358A - 一种可用于pcr的简易鱼鳍基因组dna提取方法 - Google Patents

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刘凯
谢楠
冯晓宇
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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor

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Abstract

本发明公开了一种可用于PCR的简易鱼鳍基因组DNA提取方法，包括如下步骤：S1、切取不多于30mg的用乙醇保存的鱼鳍组织，剪成小块，放入装有200ul Chelex、TE溶液的离心管中；S2、加入20ul蛋白酶K溶液，搅拌均匀并在55‑60℃环境下放置1‑2小时,以消化裂解蛋白；S3、在95‑100℃环境下放置10‑15分钟，以灭活蛋白酶K；S4、提取的基因组DNA。本发明具有提取时间短、提取步骤少，操作简单的特点，大大提高了基因组DNA提取的效率。本发明在96孔板上进行基因组DNA提取时，一次性可提取96个样品，且提取出的基因组DNA可应用于后续的PCR反应，大大提高了实验效率。

Description

一种可用于PCR的简易鱼鳍基因组DNA提取方法
技术领域
本发明涉及分子生物学技术领域，涉及一种简易DNA提取方法，尤其涉及一种从鱼类鳍条组织中提取基因组DNA的简易方法。
背景技术
现代分子生物学的研究基本都是建立在PCR技术之上的，而进行PCR反应的重要原料就是样品的基因组DNA。目前已建立了很多从动、植物中提取基因组DNA的方法，包括常规的酚-氯仿提取法以及DNA亲和膜吸附法等。然而这些方法，存在着提取时间长，提取步骤多、操作繁琐等问题，基因组DNA提取的效率不高，一个提取过程可能只能提取几个样品，消耗半天左右的时间。
因此，申请人提出一种可用于PCR的简易鱼鳍基因组DNA提取方法，其效率高，耗时短。
发明内容
有鉴于现有技术的上述缺陷，本发明所要解决的技术问题是提供一种可用于PCR的简易鱼鳍基因组DNA提取方法。
为实现上述目的，本发明提供了一种可用于PCR的简易鱼鳍基因组DNA提取方法，包括如下步骤：
S1、切取不多于30mg的用乙醇保存的鱼鳍组织，剪成小块，放入装有200ul Chelex（浓度为5% w/v）、TE溶液（TE缓冲液）的离心管中；提取所用样品越多，所需要的蛋白酶K则越多，20ul蛋白酶K能够保证30mg鱼鳍组织样品的消化；乙醇为无水乙醇，浓度95%以上的乙醇均可，其用于抑制内源核酸酶的活性，防止DNA被降解；
Chelex是一种是包含配对亚氨基二乙酸离子的苯乙烯二乙烯基苯共聚物，对金属离子具有鳌合作用，可以防止DNA在煮沸加热时被降解，同时在高温低离子强度下有催化DNA释放的作用。这样既可以减少DNA的损失，又可消除扩增中的一些抑制因素。
S2、加入20ul蛋白酶K（20mg/ml）溶液，搅拌均匀并在55-60℃水浴/金属浴/PCR仪等环境下放置1-2小时,以消化裂解蛋白；
S3、在95-100℃的水浴/金属浴/PCR仪等环境下放置10-15分钟，以灭活蛋白酶K；
S4、提取的基因组DNA。可以是在3000-5000rpm下离心5-10分钟后，吸取上清液即为提取的基因组DNA。
本发明的有益效果是：本发明具有提取时间短、提取步骤少，操作简单的特点，大大提高了基因组DNA提取的效率。
特别是在96孔板上进行基因组DNA提取时，一次性可提取96个样品，且提取出的基因组DNA可应用于后续的PCR反应，大大提高了实验效率。
附图说明
图1为利用1对微卫星引物对从鲂12尾个体提取的基因组DNA的PCR扩增产物的3%琼脂糖电泳图谱。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明：
实施例一
一种可用于PCR的简易鱼鳍基因组DNA提取方法，包括如下步骤：
S1、切取不多于30mg的用无水乙醇保存的鱼鳍组织，剪成小块，小块的尺寸不大于5*5cm，放入装有200ul Chelex-100（浓度为5%w/v）、TE溶液的离心管中；
S2、加入20ul蛋白酶K（20mg/ml）溶液，搅拌均匀并在56℃水浴环境下放置1小时,以消化裂解蛋白；
S3、在95℃水浴环境下放置10分钟，以灭活蛋白酶K；
S4、在3000rpm下离心5分钟后，吸取上清液即为提取的基因组DNA。
实施例二
一种可用于PCR的简易鱼鳍基因组DNA提取方法，包括如下步骤：
S1、切取不多于30mg的用95%乙醇保存的鱼鳍组织，剪成小块，放入装有200ul Chelex-100（浓度为5% w/v）、TE溶液（TE缓冲液）的离心管中；
S2、加入20ul蛋白酶K（20mg/ml）溶液，搅拌均匀并在58℃水浴环境下放置2小时,以消化裂解蛋白；
S3、在95℃水浴环境下放置10分钟，以灭活蛋白酶K；
S4、将S3的液体倒入96孔板中，在室温下静置10-15分钟，吸取上清液即为提取的基因组DNA，可一次获得96个样品。
实施例三
一种可用于PCR的简易鱼鳍基因组DNA提取方法，包括如下步骤：
S1、切取不多于30mg的用乙醇（无水乙醇，95%乙醇均可）保存的鱼鳍组织，剪成小块，放入装有200ul Chelex（浓度为5% w/v）、TE溶液（TE缓冲液）的离心管中，搅拌均匀，并放置10-15min；
S2、加入20ul蛋白酶K（20mg/ml）溶液，搅拌均匀并在55℃金属浴环境下放置1.5小时,以消化裂解蛋白；
S3、在95℃金属浴环境下放置15分钟，以灭活蛋白酶K；
S4、在4000rpm下离心6分钟后，吸取上清液即为提取的基因组DNA。
本发明未详述之处，均为本领域技术人员的公知技术。
以上详细描述了本发明的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术人员无需创造性劳动就可以根据本发明的构思作出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。

Claims (9)

1.一种可用于PCR的简易鱼鳍基因组DNA提取方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、切取不多于30mg的用乙醇保存的鱼鳍组织，剪成小块，放入装有200ul Chelex、TE溶液的离心管中；
S2、加入20ul蛋白酶K溶液，搅拌均匀并在55-60℃环境下放置1-2小时,以消化裂解蛋白；
S3、在95-100℃环境下放置10-15分钟，以灭活蛋白酶K；
S4、提取的基因组DNA。
2.如权利要求1所述的简易鱼鳍基因组DNA提取方法，其特征在于，Chelex为Chelex-100。
3.如权利要求1或2所述的简易鱼鳍基因组DNA提取方法，其特征在于，Chelex浓度为5%w/v。
4.如权利要求1所述的简易鱼鳍基因组DNA提取方法，其特征在于，蛋白酶K溶液浓度为20mg/ml。
5.如权利要求1所述的简易鱼鳍基因组DNA提取方法，其特征在于，S4包括如下步骤，在3000-5000rpm下离心5-10分钟后，吸取上清液即为提取的基因组DNA。
6.如权利要求1所述的简易鱼鳍基因组DNA提取方法，其特征在于，S4包括如下步骤，将S3的液体倒入96孔板中，在室温下静置10-15分钟，吸取上清液即为提取的基因组DNA。
7.如权利要求1所述的简易鱼鳍基因组DNA提取方法，其特征在于，S1中，乙醇为无水乙醇，浓度95%以上。
8.如权利要求1所述的简易鱼鳍基因组DNA提取方法，其特征在于，S2中，55-60℃环境为水浴、金属浴、PCR仪其中一种环境或其其任意组合。
9.如权利要求5所述的简易鱼鳍基因组DNA提取方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、切取不多于30mg的用乙醇保存的鱼鳍组织，剪成小块，小块的尺寸不大于5*5cm，放入装有200ul Chelex、TE溶液的离心管中；
S2、加入20ul蛋白酶K溶液，搅拌均匀并在56℃环境下放置1小时,以消化裂解蛋白；
S3、在95℃环境下放置10分钟，以灭活蛋白酶K；
S4、在3000rpm下离心5分钟后，吸取上清液即为提取的基因组DNA。
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