CN109007191B - 大鲵活性肽咖啡 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种大鲵活性肽咖啡，由大鲵活性肽粉与咖啡粉混合而成，所述大鲵活性肽粉与咖啡粉的质量比为0.5~1：100。在保证现有咖啡口感及有益效果的前提下，取得了可使绿原酸稳定、减轻咖啡因的副作用、提高抗氧化作用及提高蛋白质含量等预料不到的技术效果。

Description

大鲵活性肽咖啡

技术领域

本发明涉及一种咖啡，尤其是一种可使绿原酸稳定、减轻咖啡因的副作用、提高抗氧化作用及提高蛋白质含量的大鲵活性肽咖啡。

背景技术

咖啡（粉）是指用烘烤咖啡豆磨成的粉末，作为重要的功能饮料，备受人们的青睐。《中华本草》中记载，咖啡微苦，涩，平，具有醒神、利尿、健胃的功效。现代医学研究表明，每天喝3杯或3杯以上咖啡可以将患肝癌风险降低44%。目前，已发现咖啡中的化学成分超过1500个，其中的绿原酸、咖啡因、葫芦巴碱等主要活性成分成为人们关注的热点。绿原酸是咖啡中一种重要的生物活性物质，具有抗菌、抗病毒、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、降血脂以及清除自由基的作用，但是绿原酸稳定性较差，易被氧化水解。咖啡因是咖啡中另一种重要成分，过量摄入会导致头痛、疲劳、淡漠以及嗜睡等不良反应。另外，由于咖啡豆表面的胶质作用，阻碍咖啡中蛋白质溶出，故现有咖啡中的蛋白质含量极少。

中国专利申请号为201610314751.X的发明专利申请，公开了一种“大鲵活性肽及用途”，其大鲵活性肽是以大鲵肉为原料，通过海洋碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶组成的复合酶进行酶解，酶解产物通过胰蛋白酶固定超滤膜分离器进行分离，再通过Sephadex LH-20分子筛层析、高效液相色谱分离纯化后得到的大鲵活性肽，专利申请说明书中记载了制备大鲵活性肽具体的方法。所制备的大鲵活性肽即能够有效清除自由基、提高机体免疫力以及促进皮肤纤维原细胞增殖。

虽然咖啡、大鲵活性肽均具有营养价值，但是迄今为止还没有将大鲵活性肽和咖啡合理配比，制备可使绿原酸稳定、减轻咖啡因的副作用并提高抗氧化作用及蛋白质含量的大鲵活性肽咖啡的相关报道。

发明内容

本发明是为了解决现有技术所存在的上述技术问题，提供一种可使绿原酸稳定、减轻咖啡因的副作用、提高抗氧化作用及提高蛋白质含量的大鲵活性肽咖啡。

本发明的技术解决方案是：一种大鲵活性肽咖啡，其特征在于由大鲵活性肽粉与咖啡粉混合而成，所述大鲵活性肽粉与咖啡粉的质量比为0.5~1：100。

所述咖啡粉依次按照如下步骤制成：

a. 将大鲵内脏用蒸馏水洗净、吸去水分并捣碎，按1:5的体积比加入pH 7.4，0.01mol/l 的PBS缓冲液，浸泡4h；4℃、9000rpm离心15min，取上清液；加入质量百分比浓度为80%的硫酸铵，4℃过夜；再4℃、9000rpm离心15min，去除上清液，收集沉淀并用PBS缓冲液溶解沉淀，透析冻干，得大鲵内脏复合酶干粉；

b. 将新鲜咖啡豆浸入到20℃左右的发酵池水中，按发酵池水体积1%加入大鲵内脏复合酶干粉，发酵10~12h；

c. 将发酵后的咖啡豆洗净并烘烤，再将烘烤后的咖啡豆加水制成细度至少300目的咖啡浆液；

d. 将所述咖啡浆液温度调至30~55℃并用盐酸调pH至4，加入体积1%的大鲵内脏复合酶干粉，反应4~8h；

e. 将反应后的咖啡浆液喷雾干燥，得咖啡粉。

本发明是将大鲵活性肽粉与咖啡粉按比例混合制成大鲵活性肽咖啡，在保证现有咖啡口感及有益效果的前提下，取得了可使绿原酸稳定、减轻咖啡因的副作用、提高抗氧化作用及提高蛋白质含量等预料不到的技术效果。

具体实施方式

实施例1：

将大鲵活性肽粉与咖啡粉按照质量比为1：100混合均匀。

所用大鲵活性肽粉按照专利申请号为201610314751.X的发明专利申请所公开的大鲵活性肽的制备方法制备。

咖啡粉采用市售用烘烤咖啡豆磨成的粉末。

实施例2：

将大鲵活性肽粉与咖啡粉按照质量比为1：100混合均匀。

所用大鲵活性肽粉按照专利申请号为201610314751.X的发明专利申请所公开的大鲵活性肽的制备方法制备。

所用咖啡粉依次按照如下步骤制备：

a. 将大鲵内脏用蒸馏水洗净，滤纸吸去水分后称重，先用剪刀剪碎再用组织捣碎机捣碎，按1:5的体积比例加入PBS缓冲液（pH 7.4，0.01mol/l），浸泡4h；离心（9000rpm，4℃，15min）取上清液，去沉淀；加入质量百分比浓度为80%的硫酸铵，置于冰箱过夜（4℃）；再离心（9000 rpm，4℃，15min），去除上清液，收集沉淀，用PBS缓冲液溶解沉淀，透析冻干，得大鲵内脏复合酶干粉；

b. 采摘咖啡鲜果后，当天进行脱皮加工，然后浸入到20℃左右的发酵池水中，按发酵池水体积1%加入大鲵内脏复合酶干粉，发酵12h；

c. 将发酵后的咖啡豆洗净，在90℃中烘烤40min，将烘烤后的咖啡豆破碎，加水制咖啡浆液，细度达到300目；

d. 将上述咖啡浆液温度调至45℃，浆液pH用盐酸调至4，加入体积1%加入大鲵内脏复合酶干粉，反应6h。

e. 将反应后的咖啡浆液进行喷雾干燥，得咖啡粉。

实验：

一. 口感实验

取本发明实施例1大鲵活性肽咖啡、实施例2的大鲵活性肽咖啡以及市售咖啡粉，加水煮成等浓度咖啡饮品，直接（不加糖）饮用，其口感一致。

二. 稳定绿原酸实验

分别以按照实施例1、实施例2制备出大鲵活性肽咖啡为样品1、样品2，市售咖啡粉为样品3。分别准确称取1.000g样品，置于100mL容量瓶中，用70%甲醇溶液定容，室温下超声2h，冷却后过0.22μm滤膜，在Shiseido CAPCELL PAK MG II C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm,5.0μm），以甲醇-0.10%磷酸（12∶88）溶液为流动相进行等度洗脱，检测波长为320 nm。

配制不同浓度的绿原酸标准溶液按照上述方法进行检测，用以计算放置不同时间（天），各样品中的绿原酸含量（%），结果如表1。

表1

由表1可以看出，本发明实施例1及实施例2可以稳定绿原酸的含量，在咖啡样品放置40 d时，大鲵活性肽咖啡中绿原酸含量分别高达1.88%，而没有添加大鲵活性肽的市售咖啡粉中绿原酸含量只有0.41%。

三. 减轻咖啡因作用实验

取小白鼠50只，雌雄各半，随机分成5组，每组各10只，分别灌胃实施例1大鲵活性肽咖啡溶液（实施例1组）、实施例2大鲵活性肽咖啡溶液（实施例2组）、市售咖啡粉溶液（对比组1）、咖啡因溶液（对比组2）、生理盐水（对比组3）。经HPLC测定，实施例1大鲵活性肽咖啡溶液、实施例2大鲵活性肽咖啡溶液分别含有咖啡因3.33%、3.30%。给药前后20min内小鼠自发活动的次数以及自发活动的抑制率如表2所示。

表2

表2结果表明：本发明实施例1、实施例2的大鲵活性肽咖啡溶液组的自发活动抑制率显著高于对比组，表明本发明实施例1、实施例2的大鲵活性肽咖啡，减轻了咖啡因的作用。

四. 增强抗氧化作用实验

采用DPPH方法对本发明实施例1的大鲵活性肽咖啡溶液（样品1），实施例1的大鲵活性肽咖啡溶液（样品2）、市售咖啡粉溶液（样品3）及大鲵活性肽溶液（样品4）抗氧化活性进行测定。

DPPH 自由基清除能力测定：取0.04 g的DPPH溶于100 mL的无水乙醇中，配制DPPH溶液；取不同浓度的样品各2 mL，分别加入2 mL DPPH溶液，均匀混合，室温静置反应30min，在517 nm处测定其吸光度值，其值定义为Ai，在相同条件下，2 mL的大鲵黏液溶液加入同等体积的无水乙醇中，测出的吸光度值为Aj，同样2 mL的DPPH溶液加入2 mL的蒸馏水混匀后所测得吸光度值为A0。

计算DPPH自由基清除率公式：

DPPH自由基清除率（%）

表3为各样品组DPPH清除率。

表3

由表3可以看出，本实施例1、实施例2的大鲵活性肽咖啡清除DPPH自由基能力高于市售咖啡粉溶液和大鲵活性肽溶液。

五. 咖啡蛋白质溶出率比较

取实施例1制备出大鲵活性肽咖啡（样品1），实施例2制备出大鲵活性肽咖啡（样品2）以及市售咖啡粉（样品3）各1g，加入到200ml沸水中，5min后，离心（9000rpm，4℃，15min），取上清液，去沉淀。采用Folin-酚法测定其中的蛋白质含量。结果见表4。

表4

由表4可以看出，按实施例1制备出大鲵活性肽咖啡（样品1）以及实施例2制备的大鲵活性肽咖啡（样品2）溶出蛋白质的量均高于售咖啡粉（样品3）。表明本发明增加了咖啡中蛋白质的溶出量，便于人体吸收利用咖啡的全部营养。

Claims (1)

1.一种大鲵活性肽咖啡，其特征在于由大鲵活性肽粉与咖啡粉混合而成，所述大鲵活性肽粉与咖啡粉的质量比为0.5~1：100，所述咖啡粉依次按照如下步骤制成：

a. 将大鲵内脏用蒸馏水洗净、吸去水分并捣碎，按1:5的体积比加入pH 7.4，0.01mol/l 的PBS缓冲液，浸泡4h；4℃、9000rpm离心15min，取上清液；加入质量百分比浓度为80%的硫酸铵，4℃过夜；再4℃、9000rpm离心15min，去除上清液，收集沉淀并用PBS缓冲液溶解沉淀，透析冻干，得大鲵内脏复合酶干粉；

b. 将新鲜咖啡豆浸入到20℃左右的发酵池水中，按发酵池水体积1%加入大鲵内脏复合酶干粉，发酵10~12h；

c. 将发酵后的咖啡豆洗净并烘烤，再将烘烤后的咖啡豆加水制成细度至少300目的咖啡浆液；

d. 将所述咖啡浆液温度调至30~55℃并用盐酸调pH至4，加入体积1%的大鲵内脏复合酶干粉，反应4~8h；

e. 将反应后的咖啡浆液喷雾干燥，得咖啡粉。