CN108948212B

CN108948212B - 长效化胃泌酸调节素(oxm)杂合肽及其制备方法与应用

Info

Publication number: CN108948212B
Application number: CN201810851507.6A
Authority: CN
Inventors: 钱海; 黄文龙; 蔡星光; 刘春霞; 李久辉; 戴雨轩; 李承业
Original assignee: China Pharmaceutical University
Current assignee: China Pharmaceutical University
Priority date: 2018-07-25
Filing date: 2018-07-25
Publication date: 2021-08-06
Anticipated expiration: 2038-07-25
Also published as: CN108948212A

Abstract

本发明涉及一类长效化胃泌酸调节素(OXM)杂合肽及其应用及其合成方法。通过对OXM进行改造，与Exenatide的肽序杂合，并缀合脂肪酸链得到具有更长药理作用时间和更好的减肥效果的OXM杂合肽。目标多肽的合成是是通过正交保护策略固相合成方法快速实现，粗品经纯化，冻干得到目标化合物。

Description

长效化胃泌酸调节素(OXM)杂合肽及其制备方法与应用

技术领域

本发明涉及药物化学领域，具体涉及长效化胃泌酸调节素(OXM)杂合肽及其应用。

背景技术

代谢综合征的病因是蛋白质、脂肪及碳水化合物等多种物质的代谢异常。营养过剩、体力活动减少等会导致肥胖以及肥胖相关疾病，如糖尿病等。近年来，2型糖尿病、血脂代谢异常的发病率日益增高。

胃泌素调节素(Oxyntomodulin，OXM)是小肠L细胞分泌的37个氨基酸组成的多肽，包含胰高血糖素的全部29个氨基酸序列和C端延伸的8个氨基酸部分，与胰高血糖素样肽-1(GLP-1)具有50％的同源性，肽序为：HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNTKRNRNNIA。OXM能够同时激活胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)和胰高血糖素受体(GCGR)，具有一定的减缓体重增加和降糖效果。OXM激活GCGR后，能促进肝糖原分解和糖异生作用，促进脂肪分解和脂肪酸氧化；加速氨基酸进入肝细胞，发挥产热作用，具有较好的体重减轻和食欲抑制作用。与单纯的GLP-1R激动剂相比，OXM干预体重、调节脂质代谢、改善糖耐量的效果较好，但降血糖活性相对较弱，且半衰期较短。

GLP-1是一种葡萄糖依赖性肠促胰岛素激素。它可以激动GLP-1R，发挥降糖作用。最显著的功能是促进β细胞的再生和修复，增加胰岛β细胞的数量，同时还能避免糖尿病治疗中经常发生的低血糖风险，在糖尿病治疗领域有广阔的应用前景。艾塞那肽是减少DPP-IV酶代谢的典型短效GLP-1受体激动剂，在OXM中引入艾塞那肽的部分肽序，可以提高化合物对GLP-1R的受体激动活性。

本发明涉及的一类降糖多肽，杂合了OXM与艾塞那肽(Exenatide)的部分肽序结构，增强肽链对GLP-1R亲合力，提高对GLP-1R的激动活性，并保持适度的GCGR激动活性。同时，此类降糖多肽缀合了具有高血清白蛋白结合率的脂肪酸小分子，将小分子与OXM类似物缀合，大大地延长了降糖作用维持时间，超过现有上市药物利拉鲁肽与艾塞那肽。综上所述，此类降糖多肽是一种降糖活性和降低体重效果俱佳的长效化多肽药物。

发明内容

在第一方面，本发明提供了一类降糖多肽及其药学上可接受的盐，其多肽氨基酸序列为：

His-Gly-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Met-Asp-Xaa-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-NH₂；或

His-Gly-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Glu-Xaa-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-NH₂；或

His-Gly-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Xaa-Glu-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-NH₂；或

His-Gly-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Xaa-Arg-Arg-Val-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-NH₂；或

His-Gly-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Xaa-Arg-Arg-Ala-Gln-Leu-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-NH₂；或

His-Gly-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Xaa-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-NH₂；

其中

Xaa为

本发明提供的降糖多肽或其药学上可接受的盐也可以表示为：

所述盐为化合物与盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、焦硫酸、磷酸、硝酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、甲酸、乙酸、乙酰乙酸、丙酮酸、三氟乙酸、丙酸、丁酸、己酸、庚酸、十一烷酸、月桂酸、苯甲酸、水杨酸、2-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、樟脑酸、肉桂酸、环戊烷丙酸、二葡糖酸、3-羟基-2-萘甲酸、烟酸、扑酸、果胶酯酸、过硫酸、3-苯基丙酸、苦味酸、特戊酸、2-羟基乙磺酸、衣康酸、氨基磺酸、三氟甲磺酸、十二烷基硫酸、2-萘磺酸、萘二磺酸、樟脑磺酸、柠檬酸、酒石酸、硬脂酸、乳酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、肥酸、藻酸、马来酸、富马酸、D-葡糖酸、扁桃酸、抗坏血酸、葡庚酸、甘油磷酸、天冬氨酸、磺基水杨酸、半硫酸或硫氰酸所成的盐。

在第二方面，本发明提供了一种药物组合物，包括治疗有效量的至少一种上述降糖多肽和其药学上可接受的盐，或药学上可接受的载体或稀释剂。同时，本发明进一步提供了上述化合物和其药学上可接受的盐，或药学上可接受的载体或稀释剂在制备用于治疗和预防糖尿病的药物中的运用。

在上述第二方面的实施方案中，与OXM原型相比，此类降糖多肽对GLP-1R的激动活性有所提高，并保持适度的GCGR激动活性，具有出色的降血糖效果。在糖尿病模型小鼠体内，一次给药后，稳定血糖时间超过60小时。同时，此类降糖肽还具有良好的减缓体重增加活性。

在第三方面，本发明还提供了此类降糖多肽的制备方法及其中间体，本发明提供的此类降糖多肽的制备方法以式I作为中间体，采用固相合成法逐步偶联此类降糖多肽主链的各个氨基酸，得到连有主链的肽树脂，将式I与肽树脂缀合，得到降糖多肽，此法有效降低了副产物的生成，提高了此类降糖多肽的收率。

在上述第三方面中，本发明采用如下的技术方案：

本发明提供了一种降糖多肽的制备方法，其包括以下步骤：

步骤1：获得具有式I所示结构的化合物；

步骤2：取树脂，活化后，逐步偶联主链氨基酸，得到第一肽树脂；

步骤3：取所述第一肽树脂，脱除16位赖氨酸的保护基，缀合具有式I的化合物，得到第二肽树脂；

步骤4：取所述第二肽树脂，经裂解、纯化，即得；

其中，所述R¹选自甲基、乙基、叔丁基和二苯甲基；

所述R²选自甲基、乙基、叔丁基和二苯甲基。

在本发明的一些实施例中，R₁为tBu。

在本发明的一些实施例中，R₂为tBu。

在本发明的一些实施例中，16位Lys的侧链保护基为Dde。

在本发明中，以具有式I所示结构的化合物作为中间体，

在固相载体上逐步偶联多肽主链各个氨基酸，即获得第一肽树脂，第一肽树脂上所带有的肽序信息与此类降糖多肽的肽序列信息相一致；在此基础上将式I缀合到第一肽树脂上，即获得第二肽树脂；最后经过裂解、纯化，即得到此类降糖多肽。本发明利用具有式I所示结构的化合物作为中间体，采用固相合成法逐步偶联此类降糖多肽主链的各个氨基酸，再将式I引入肽树脂，即获得了此类降糖多肽，有效避免了副产物的生成，提高了此类降糖多肽的收率，更适合此类降糖多肽的工业化大生产。

优选地，本发明提供的制备方法中，步骤2中的树脂为Rink Amide AM Resin或Fmoc-Rink amide-MBHA。在本发明的一些实施例中，本发明提供的制备方法中，步骤2中的树脂具体为Fmoc-Rink amide-MBHA。

优选地，本发明提供的制备方法中，步骤4中裂解所用裂解试剂为TFA、苯甲硫醚、苯甲醚和EDT的混合物。在本发明的一些实施例中，本发明提供的制备方法中，步骤4中裂解所用试剂中TFA、苯甲硫醚、苯甲醚和EDT的体积之比为(85～92)∶(4～6)∶(2～3)∶(2～6)。在本发明的另外一些实施例中，本发明提供的制备方法中，步骤4中裂解所用裂解试剂中TFA、苯甲硫醚、苯甲醚和EDT的体积之比为90∶5∶3∶2。

在本发明的另外一些实施例中，本发明提供的制备方法中，步骤4中纯化所用方法为色谱分离法。在本发明的另外一些实施例中，本发明提供的制备方法中，步骤4中纯化所用色谱柱为C18柱。

本发明的有益效果：

1.本发明提供的化合物具有显著的降糖、减缓体重增加效果，化学性质稳定。

2.本发明提供的部分化合物降血糖作用可维持60h以上，较内源性GLP-1(半衰期2～3min)或上市药物艾塞那肽(半衰期2.4h)有显著的提高。

3.采用正交保护策略的固相合成OXM杂合肽得到肽链的粗品的纯度大于85％，与常规合成方法相比大大提高，方便后续的纯化工作。

4.本法采用固相方法合成OXM杂合肽的成本低。由于偶合效率较高，所需要保护氨基酸平均只需要2倍过量，而常规合成方法中需要4到5倍过量的氨基酸，极大的节约了成本。

5.采用Fmoc/tBu正交保护固相合成策略合成OXM杂合肽的方法易于实现自动化、大规模化，这使其更适合工业化生产。

因此用本发明提供的通过固相合成技术制备的OXM杂合肽，降糖活性好，减缓体重增加效果明显，药效时间长，收率高、合成周期短、粗品纯化容易，生产成本低、易于工业自动化生产。制备得到的OXM杂合肽，适合作为治疗糖尿病、肥胖药物的活性成分。

以下是本发明中涉及的OXM杂合肽的相关药理实验方法以及结果：

1、OXM类似物的GLP-1R和GCGR受体激动活性筛选

HEK293细胞分别共转染编码GLP-1R或GCGR的cDNA，细胞系表达并利用WesternBlot检测已构建的HEK293细胞中GLP-1R或GCGR的蛋白水平，确认是否已建立了稳定高表达细胞株HEK293。测定化合物的试验中，提前2h将细胞种于96孔板中，化合物用DMSO溶解，使用含有0.1％牛血清蛋白的培养基稀释至不同倍数，加入共转染的细胞中。细胞孵化20min后，使用Cisbo公司的ELISA试剂盒，使用酶标仪测定荧光读数，建立标准曲线将荧光读数转化为相应的cAMP数值，使用Graphpad Prism 5.0软件的非线性回归计算化合物的EC₅₀数值。

表1 OXM类似物对GLP-1R和GCGR的激动活性

Results are expressed as mean±SD，*P＜0.05，**P＜0.01 vs OXM，#P＜0.05，##P＜0.01 vs Exenatide.

2、OXM杂合肽的腹腔葡萄糖耐量实验

正常昆明小鼠，随机分组，每组8只，小鼠饲养在标准化动物房中。实验前12小时禁食，只给予饮水。每组小鼠在给药OXM杂合肽之前，测初始血糖值，定为-30min，然后腹腔注射50nmol/kg的OXM杂合肽。30min后，腹腔注射18mmol/kg的葡萄糖溶液，定为0min，对照组注射同体积的生理盐水或50nmol/kg的艾塞那肽。在0，15，30，45，60，120min用血糖仪测定血糖水平，检测OXM杂合肽的降糖活性。

如图1所示，降血糖实验结果表明，本发明中涉及的OXM杂合肽给药浓度为50nmol/kg时，降血糖效果与艾塞那肽、利拉鲁肽的降糖效果相当。

3、OXM杂合肽的稳定血糖实验

测定STZ诱导的糖尿病模型小鼠的血糖，选择数值高于20mmol/L的小鼠进行随机分组，每组六只，实验期间小鼠自由采食。阳性对照组腹腔注射艾塞那肽或利拉鲁肽，剂量为50nmol/kg，阴性对照组腹腔注射生理盐水，给药组分别注射50nmol/kg的OXM杂合肽。0h给予化合物，分别在0、0.5、1、2、3、4、6、8、10、12、16、24、36、48、60、72和84h使用血糖仪测定血糖水平。评价指标为腹腔注射化合物后，小鼠血糖数值低于8.35mmol/L的时间。

由图2和图3可见，艾塞那肽的稳定血糖的时间仅为4.0h，利拉鲁肽的稳定血糖时间为12.3h，本发明中涉及的长效化降糖多肽的稳定血糖时间可达到60h以上。稳定血糖实验表明，OXM杂合肽具有良好的长效化降糖效果，可以达到更优的长效化降糖效果，具有开发成为每两天给药一次的降糖药物的潜力。

4、OXM杂合肽的减缓体重增加实验

雄性C57bl/6小鼠，高脂饲料喂养4周，选体重大于30g的小鼠进行实验。小鼠随机分组，8只为一组，共8组，连续56天每日给药OXM杂合肽(50nmol/kg，10mL/kg)，阴性对照组每日给药生理盐水，阳性对照组给药OXM。测试第1天和第56天各组小鼠的空腹体重，考察各组小鼠的平均体重变化。

表2 OXM杂合肽的减重效应

Results are expressed as mean±SD.

从表2可以得出，长期给药后，所有的化合物都表现出了较好的体重控制效果，控制体重效果明显优于OXM。

5、OXM杂合肽的降低血脂实验

雄性C57bl/6小鼠，高脂饲料喂养4周，选体重大于30g的小鼠进行实验。小鼠随机分组，8只为一组，共8组，连续56天每日给药OXM杂合肽(50nmol/kg，10mL/kg)，阴性对照组每日给药生理盐水，阳性对照组给药OXM。给药结束后，取小鼠血清，检测总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)含量。

从图4-图5可以看出，生理盐水组小鼠的各项脂质参数含量均有所增加，而给药组小鼠的脂质参数含量有所降低，表明OXM类似物具有高血脂治疗效果。

6、OXM杂合肽的非酒精性脂肪肝病治疗实验

雄性C57bl/6小鼠，高脂饲料喂养8周，建立非酒精性脂肪肝病模型。小鼠随机分组，8只为一组，共8组，连续56天每日给药OXM杂合肽(50nmol/kg，10mL/kg)，阴性对照组每日给药生理盐水，阳性对照组给药OXM。给药结束后，取小鼠血清，检测谷丙转氨酶(ALT)含量。

从图6可以看出，生理盐水组小鼠的ALT含量增加，符合非酒精性脂肪肝病的病理特征，而给药组小鼠的谷丙转氨酶含量降低，表明OXM类似物具有非酒精性脂肪肝病治疗效果。

附图说明

图1为OXM杂合肽SEQ.ID NO：1～6的腹腔糖耐量实验结果。

图2为OXM杂合肽SEQ.ID NO：1～3的稳定血糖实验结果。

图3为OXM杂合肽SEQ.ID NO：4～6的稳定血糖实验结果。

图4为OXM杂合肽SEQ.ID NO：1～6的TC检测结果。

图5为OXM杂合肽SEQ.ID NO：1～6的TG检测结果。

图6为OXM杂合肽SEQ.ID NO：1～6的ALT检测结果。

具体实施方式

在本说明书全文中采用以下缩写：

英文缩写	中文
		2-CTC树脂	2-三苯甲基氯树脂
DCM	二氯甲烷
		NMP	N-甲基吡咯烷酮
Fmoc-AEEA	[2-[2-(芴甲氧羰基氨基)乙氧基]乙氧基]乙酸
		HBTU	苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯
HOBt	1-羟基-苯并三氮唑
		DIEA/DIPEA	N，N′-二异丙基乙胺
Fmoc	N-9-芴甲氧羰基
		OtBu	氧叔丁基
ESI-MS	电喷雾质谱
		Dde	1-(4，4-二甲基-2，6-二氧杂亚环己基亚甲基)-乙基
EDT	乙二硫醇
		HPLC	高效液相色谱
TFA	三氟乙酸
		tBu	叔丁基

本发明是通过下列实施例来进行说明的，但这些实施例不做任何限制本发明的解释。

实施例1

的固相合成

1、式I的合成

称取2-CTC树脂100mg(取代度0.8mmol/g)，经DCM溶胀30min，再用NMP 10mL溶胀30min，分别用NMP，DCM 7mL冲洗干净。将Fmoc-AEEA(61.6mg，0.16mmol)，HBTU(60.6mg，0.16mmol)，DIEA(55.6μL，0.32mmol)，HOBt(21.6mg，0.16mmol)溶于NMP 10mL中，将此溶液加入树脂中反应2小时，结束后滤去反应液，将DCM∶甲醇∶DIEA为5∶4∶1的10mL溶液加入树脂封闭反应1小时，滤去反应液，用DCM和NMP各7mL洗涤树脂3次。

向树脂中加入含0.1M HOBt的25％哌啶/NMP(V/V)溶液脱除Fmoc，反应结束后用NMP洗涤干净。同样方法再次偶联Fmoc-AEEA，反应结束后，用DCM和NMP各7mL洗涤树脂3次。向树脂中加入含0.1M HOBt的25％哌啶/NMP(V/V)溶液脱除Fmoc，反应结束后用NMP洗涤干净。将Fmoc-Glu-OtBu(68.0mg，0.16mmol)，HBTU(60.6mg，0.16mmol)，DIEA(55.6μL，0.32mmol)，HOBt(21.6mg，0.16mmol)溶于NMP 10mL中，将此溶液加入树脂中反应2小时，结束后滤去反应液，用DCM和NMP各7mL洗涤树脂3次。向树脂中加入含0.1M HOBt的25％哌啶/NMP(V/V)溶液脱除Fmoc，反应结束后用NMP洗涤干净。将十八烷二酸单叔丁酯(59.2mg，0.16mmol)，HBTU(60.6mg，0.16mmol)，DIEA(55.6μL，0.32mmol)，HOBt(21.6mg，0.16mmol)溶于NMP 10mL中，将此溶液加入树脂中反应2小时，结束后滤去反应液，用DCM和NMP各7mL洗涤树脂3次。

将上述得到的连有式I的树脂放入反应瓶中，加入裂解剂20％三氟乙醇/DCM10ml，常温振摇30分钟，反应结束后抽滤，蒸干溶剂得到式I粗品42.4mg。理论相对分子质量为846.1，ESI-MS m/z：845.4[M-H⁺]。

2、多肽主链的合成

2.1树脂的溶胀

称取Fmoc-Rink amide-MBHA Resin 50mg(取代度0.4mmol/g)，经DCM 7mL溶胀30min，抽滤去DCM，再用NMP 10mL溶胀30min，最后分别用NMP，DCM 7mL冲洗干净。

2.2 Fmoc保护基的脱除

将溶胀好的树脂放入反应器中，向树脂中加入含0.1M HOBt的25％哌啶/NMP(V/V)溶液脱除Fmoc，反应结束后用NMP洗涤干净。得到脱去初始连接的Fmoc保护基的树脂。

2.3 Fmoc-Ser(tBu)-Rink amide-MBHA Resin的合成

将Fmoc-Ser(tBu)-OH(15.4mg，0.04mmol)，HBTU(15.1mg，0.04mmol)，HOBt(5.4mg，0.04mmol)和DIPEA(13.9μL，0.08mmol)溶于NMP 10mL中，再将此溶液加入上一步得到的树脂中反应2小时，结束后滤去反应液，用DCM和NMP各7mL洗涤树脂3次。

2.4肽链的延长

按照肽链的序列，重复上述脱保护和偶合的步骤依次连接上相应的氨基酸，依次连接上相应的氨基酸直至肽链合成完毕，得到连有主链肽序的树脂。

3、式I与多肽主链的缀合

向连有主链肽序的树脂加入2％水合肼溶液脱除16位Lys的侧链保护基Dde，反应结束后用NMP洗涤干净。将式I(33.8mg，0.04mmol)，HBTU(15.1mg，0.04mmol)，HOBt(5.4mg，0.04mmol)和DIPEA(13.9μL，0.08mmol)溶于NMP 10mL中，将此溶液加入树脂中反应2小时，结束后滤去反应液，用DCM和NMP各7mL洗涤树脂3次，得到连有SEQ.ID NO：1的肽树脂。

4、树脂上多肽的裂解

将上述连有SEQ.ID NO：1的树脂放入反应瓶中，各加入裂解剂Reagent K(TFA/苯甲硫醚/水/苯酚/EDT，82.5∶5∶5∶5∶2.5，V/V)10mL，先在0℃下振摇30min，再在常温下反应3h。反应结束后抽滤，加少量TFA和DCM洗涤三次，合并滤液。将滤液加入大量的冰***中析出白色絮状沉淀，冷冻离心得到目标多肽的粗品。最终得到粗品92.5mg，收率为92.1％。使用HPLC监测反应，色谱条件为：C18柱(150mm×4.6mm，5μm)；流动相A：0.1％TFA/水(V/V)，流动相B：0.1％TFA/乙腈(V/V)；流动相梯度；流动相B 35％～85％，20min；流速1mL/min；柱温40℃；检测波长214nm。反应结束后，采用制备液相色谱进行纯化，色谱条件为：C18柱(320mm×28mm，5μm)；流动相A：0.1％TFA/水(V/V)，流动相B：0.1％TFA/乙腈(V/V)；流动相梯度：流动相B 40％～90％，20min；流速为6mL/min；检测波长为214nm。将收集的溶液冻干得纯品24.1mg。理论相对分子质量为5014.6。ESI-MS m/z：Calcd.[M+3H]³⁺1672.5，[M+4H]⁴⁺1254.7；Found[M+3H]³⁺1672.9，[M+4H]⁴⁺1254.1。

实施例2

合成方法同实施例1，将收集的溶液冻干得纯品26.4mg。理论相对分子质量为5010.6。ESI-MS m/z：Calcd.[M+3H]³⁺1671.2，[M+4H]⁴⁺1253.7；Found[M+3H]³⁺1671.8，[M+4H]⁴⁺1253.1。

实施例3

合成方法同实施例1，将收集的溶液冻干得纯品24.2mg。理论相对分子质量为4969.5。ESI-MS m/z：Calcd.[M+3H]³⁺1657.5，[M+4H]⁴⁺1243.4；Found[M+3H]³⁺1657.3，[M+4H]⁴⁺1243.7。

实施例4

合成方法同实施例1，将收集的溶液冻干得纯品22.2mg。理论相对分子质量为5024.6。ESI-MS m/z：Calcd.[M+3H]³⁺1675.9，[M+4H]⁴⁺1257.2；Found[M+3H]³⁺1675.7，[M+4H]⁴⁺1257.4。

实施例5

合成方法同实施例1，将收集的溶液冻干得纯品22.4mg。理论相对分子质量为4994.7。ESI-MS m/z：Calcd.[M+3H]³⁺1665.9，[M+4H]⁴⁺1249.7；Found[M+3H]³⁺1665.4，[M+4H]⁴⁺1249.5。

实施例6

合成方法同实施例1，将收集的溶液冻干得纯品21.8mg。理论相对分子质量为4997.6。ESI-MS m/z：Calcd.[M+3H]³⁺1666.9，[M+4H]⁴⁺1250.4；Found[M+3H]³⁺1666.8，[M+4H]⁴⁺1249.7。

Claims

1.一种化合物，其特征是，多肽氨基酸序列为：

其中

Xaa为

2.根据权利要求1所述的化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：获得具有式I所示结构的化合物；

步骤2：取树脂，活化后，逐步偶联氨基酸或氨基酸衍生物，得到第一肽树脂；

步骤4：取所述第二肽树脂，经裂解、纯化，即得权利要求1中所述化合物；

其中，所述R¹选自甲基、乙基、叔丁基和二苯甲基；

所述R²选自甲基、乙基、叔丁基和二苯甲基。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤2中所述树脂为Fmoc-Rinkamide-MBHA树脂。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤4中所述裂解所用裂解试剂为TFA、苯甲硫醚、苯甲醚和EDT的混合物。

5.根据权利要求1中任意一项的化合物所制备一种药学上可接受的盐，所说的药学上可以接受的盐是盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、焦硫酸、磷酸、硝酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、甲酸、乙酸、乙酰乙酸、丙酮酸、三氟乙酸、丙酸、丁酸、己酸、庚酸、十一烷酸、月桂酸、苯甲酸、水杨酸、2-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、樟脑酸、肉桂酸、环戊烷丙酸、二葡糖酸、3-羟基-2-萘甲酸、烟酸、扑酸、果胶酯酸、过硫酸、3-苯基丙酸、苦味酸、特戊酸、2-羟基乙磺酸、衣康酸、氨基磺酸、三氟甲磺酸、十二烷基硫酸、2-萘磺酸、萘二磺酸、樟脑磺酸、柠檬酸、酒石酸、硬脂酸、乳酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、肥酸、藻酸、马来酸、富马酸、D-葡糖酸、扁桃酸、抗坏血酸、葡庚酸、甘油磷酸、天冬氨酸、磺基水杨酸、半硫酸或硫氰酸所成的盐。

6.如权利要求1中任意一项的化合物所制备的药剂，所说的药剂是药剂学上所说的片剂、胶囊、酏剂、糖浆、锭剂、吸入剂、喷雾剂、注射剂、膜剂、贴剂、散剂、颗粒剂、块剂、乳剂、栓剂、复方制剂。

7.如权利要求1中任意一项的化合物在制备治疗和/或预防糖尿病、肥胖症、高血脂症、非酒精性脂肪肝的药物中的应用。

8.如权利要求1中任意一项的化合物所制备的一种药学上可接受的盐在制备治疗和/或预防糖尿病、肥胖症、高血脂症、非酒精性脂肪肝的药物中的应用。

9.如权利要求1中任意一项的化合物所制备的药剂在制备治疗和/或预防糖尿病、肥胖症、高血脂症、非酒精性脂肪肝的药物中的应用。

10.如权利要求1中所述的化合物的制备方法，包括液相合成和固相合成制备方法。