CN108938709A - 一种烟豆水提取物及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了烟豆Glycine tabacina(Labill.)Benth及其提取物在制备治疗肾病综合征的药物中的用途。本发明提供了烟豆水提取物(Glycine tabacina aqueous extract,GTE)在制备抗肾病综合征天然药物中的应用，为烟豆应用于临床治疗肾病综合征提供依据。

Description

一种烟豆水提取物及其用途
技术领域
本发明涉及烟豆水提取物及其用途，具体地，是在制备治疗肾病综合征的药物中的用途。
背景技术
肾病综合征(nephrotic syndrome)是由多种病因引起的肾小球病变而使肾小球基膜通透性增加，表现为大量蛋白尿、低蛋白血症、高度水肿、高脂血症、及其他代谢紊乱为特征的一组临床症候群。根据发病原因分为原发性肾病综合征和继发性肾病综合征，前者占90％，我国的发病率为2.1％～8.8％，可并发感染、蛋白质及脂肪代谢紊乱、栓塞、急性肾功能衰竭等严重并发症。临床上常用糖皮质激素、细胞毒性药物、及免疫抑制剂治疗，但长期使用这些药物可引起一系列副作用，如感染、糖尿病、高血压、骨质疏松、动脉硬化、骨髓抑制、肝脏损伤、诱发肿瘤等。因此，研究和开发新型高效低毒的治疗肾病综合征的新药具有重要的价值。
烟豆(Glycine tabacina(Labill.)Benth)是豆科(Leguminosae)大豆属(Glycine)多年生草植物(如图所示)，又称澎湖大豆、澎湖一条根、尖叶一条根、长叶银豆等，分布于澳大利亚、南太平洋诸岛、及中国东南沿海和台湾地区等。烟豆含丰富的异黄酮，包括异黄酮苷、染料木苷、大豆苷元、及染料木素。其根茎有祛风湿、壮筋骨、益脾肾的功效，民间用于治疗风湿骨痛、气虚气肿、腰膝酸软等疾患。但未见文献报导烟豆的药理活性。
发明内容
本发明的技术方案是提供了一种烟豆及其水提取物；本发明的另一技术方案是提供了该水提取物的用途。
本发明提供了一种烟豆Glycine tabacina(Labill.)Benth水提取物，它是烟豆的80-100℃水提取物。
其中，所述的烟豆来源于烟豆的根、茎、叶或全株。
其中，所述的提取物是由下述方法提取得到：取烟豆，按1:10料液比，加蒸馏水，于80-100℃下加热回流提取1h，布氏漏斗过滤得滤液，经浓缩后，冷冻干燥得水提物干粉。
进一步优选地，所述的提取温度为80℃。
本发明烟豆水提取物的HPLC谱图如图1所示，色谱条件为：色谱柱为Cosmosil5C18-MS-II(4.6mm I.D.×250mm)色谱柱，柱温25℃，检测波长254nm；流动相梯度洗脱条件为：0-25min，10-50％MeOH，90-50％H2O；25-30min，50-100％MeOH，50-0％H2O；30-40min，100％MeOH，0％H2O。
本发明提供了烟豆Glycine tabacina(Labill.)Benth或所述的烟豆水提取物在制备治疗肾病综合征的药物中的用途。
其中，所述的药物是治疗高蛋白尿症的药物。
其中，所述的药物是减少肾病综合征肾小球损伤的药物。
其中，所述的药物是改善肾病综合征肾功能的药物。
其中，所述的药物是治疗高脂血症的药物。
其中，所述的药物是提高抗氧化能力或抑制肾病综合征氧化应激反应的药物。
本发明提供了烟豆水提取物(Glycine tabacina aqueous extract,GTE)在制备抗肾病综合征天然药物中的应用，为烟豆应用于临床治疗肾病综合征提供依据。
实验结果表明GTE显著降低了阿霉素诱导的肾病综合征Balb/c小鼠尿总蛋白和尿白蛋白的排出量。肾小球PAS染色观察及评分结果显示GTE治疗组小鼠肾小球和肾血管系膜区域PAS阳性物质显著减少，系膜增生得到有效控制。同时，GTE治疗组小鼠的血浆尿素氮及血浆肌酐浓度在造模2周后相比于模型组明显降低。这些结果表明烟豆提取物具有显著治疗肾病综合征的功效。GTE还能明显降低阿霉素肾病综合征小鼠血浆胆固醇及甘油三酯的升高，提示烟豆提取物能显著改善肾病综合征高脂血症的发生。机制研究表明GTE治疗明显升高了肾病综合征小鼠血浆及组织中的超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)活力且降低了其丙二醛(malonaldehyde，MDA)含量，同时对阿霉素诱导的肾病综合征小鼠肾组织中ROS含量的增多也有明显的改善，提示GTE通过提高抗氧化能力及抑制氧化应激反应而达到抗肾病综合征的作用。本发明烟豆水提取物具有开发成为抗肾病综合征药物的潜力，具有广阔的开发应用前景。
附图说明
图1.不同温度提取条件下的提取物HPLC图谱(上：90℃提取物；中：100℃提取物；下：80℃提取物。流动相梯度洗脱条件为：0-25min，10-50％MeOH，90-50％H2O；25-30min，50-100％MeOH，50-0％H2O；30-40min，100％MeOH，0％H2O。检测波长254nm。)
图2.烟豆提取物显著减轻肾病综合征高蛋白尿症(阿霉素造模后第0，4，7，11，18，25天，收集各组小鼠24小时尿液并眼眶采血、分离出血浆，检测小鼠尿总蛋白(A)及尿白蛋白(B)的含量。实验结果用Mean±SEM表示，n＝6。*p<0.05，**p<0.01，与对照组相比；#p<0.05，##P<0.01，与模型组相比。)
图3.烟豆提取物显著减少肾病综合征肾小球损伤((A)各组小鼠肾脏组织切片的PAS染色。(B)各组小鼠PAS染色评分的结果。实验结果用Mean±SEM表示，n＝6。*p<0.05，**p<0.01，与对照组相比；#p<0.05，##P<0.01，与模型组相比。)
图4.烟豆提取物显著增强肾病综合征肾功能(实验结果用Mean±SEM表示，n＝6。*p<0.05，**p<0.01，与对照组相比；#p<0.05，##P<0.01，与模型组相比。)
图5.烟豆提取物显著降低肾病综合征高脂血症(实验结果用Mean±SEM表示，n＝6。*p<0.05，**p<0.01，与对照组相比；#p<0.05，##P<0.01，与模型组相比。)
图6.烟豆提取物显著提高抗氧化能力及抑制肾病综合征氧化应激反应(造模25天后处死小鼠，分离出肾脏及血浆，分别测定SOD活力，MDA含量及ROS含量。实验结果用Mean±SEM表示，n＝6。*p<0.05，**p<0.01，与对照组相比；#p<0.05，##P<0.01，与模型组相比。)
具体实施方式
以下将结合具体实施例和附图对本发明做进一步阐述，这些实例仅用于说明目的，而不用于限制本发明范围。
本发明具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。
本发明实验中所用烟豆根部购于福建省福清市，通过DNA条形码鉴定植物种属，由中国医学科学院药用植物研究所韩建萍博士实验室完成。
实施例1本发明烟豆提取物的制备及表征
烟豆根粉碎后置于提取瓶中，按1:10料液比，加蒸馏水，于80℃-100℃下加热回流提取1h，布氏漏斗过滤得滤液，经浓缩后，冷冻干燥，即得本发明烟豆提取物干粉。不同提取条件下的提取率见表1。
表1不同温度提取条件下提取物的提取率
提取温度 提取率(mg/g dw)
80℃ 135.0
90℃ 137.5
100℃ 145.5
采用HPLC检测上述9个提取物，HPLC条件：采用HPLC检测，流动相梯度洗脱条件为：0-25min，10-50％MeOH，90-50％H2O；25-30min，50-100％MeOH，50-0％H2O；30-40min，100％MeOH，0％H2O。检测波长254nm。如图1所示，在所提供的烟豆提取物制备的温度范围内，提取物的成分高度相似，表明在如前所述的提取温度内，均可制备得本发明烟豆提取物。
进一步地，烟豆根粉碎后置于提取瓶中，按1:10料液比，加蒸馏水，于80℃下加热回流提取1h，布氏漏斗过滤得滤液，经浓缩后，冷冻干燥，即得本发明烟豆提取物干粉。
将上述水提物分装，-80℃冰箱中保存。
以下通过药效实验证明本发明的有益效果。
实验例1烟豆提取物显著减轻肾病综合征高蛋白尿症
实验设计
实验前将小鼠随机分为5组：对照组、模型组、2.5g/kg GTE组、5g/kg GTE组和阳性药贝那普利组，6只/组，共30只。各组小鼠适应性饲养3天。模型组、2.5g/kg GTE组、5g/kgGTE组(由实施例1制备)及阳性药物贝那普利组(5mg/kg)小鼠经尾静脉单次注射12mg/kg阿霉素诱导肾病综合征。对照组小鼠经尾静脉单次注射等体积的生理盐水。小鼠经阿霉素造模后第0天开始灌胃给药，每天1次，每次每只小鼠250μl，直至实验结束。在造模后第0，4，7，11，18，25天收集各组小鼠24小时尿液，检测尿总蛋白、尿白蛋白及尿肌酐浓度。
实验方法
30只雌性SPF级Balb/c小鼠(20-25g)购于澳门大学健康科学学院实验动物中心(动物实验伦理许可证号：UMAEC-0211-2015)。动物实验严格按照澳门大学实验动物伦理委员会的要求进行。实验用烟豆茎叶购于福建省福清市，通过DNA条形码鉴定植物种属，由中国医学科学院药用植物研究所韩建萍博士实验室完成。烟豆茎叶粉碎后90℃热水提取30分钟，旋转蒸发仪浓缩，将水提物定容至每毫升含2g生药，分装，-80℃冰箱中保存。阳性药盐酸贝那普利购于美国Sigma-Aldrich，用0.9％的生理盐水配制2mg/ml的贝那普利储备液，分装，-80℃冰箱中保存。阿霉素购自阿拉丁试剂公司(中国上海)，用0.9％的生理盐水稀释成2mg/ml的溶液，分装，-80℃保存。BCA蛋白测定试剂盒购于美国Thermo公司。白蛋白及肌酐测定试剂盒购自上海复星长征医学科学有限公司。
尿总蛋白含量测定：各组小鼠24小时尿总蛋白浓度采用二喹啉甲酸(BCA)法检测。蛋白质分子中的肽键在碱性条件下能与Cu2+络合，并将Cu2+还原成Cu+。BCA及其钠盐是一种水溶性化合物，在碱性条件下能与Cu+结合生成深紫色化合物，化合物颜色的深浅与蛋白质的浓度呈正比，该化合物在562nm波长处具有强吸收峰，可用比色法确定蛋白质的含量。本实验中尿总蛋白含量测定结果以尿总蛋白浓度(mg/ml)与尿肌酐浓度(mg/ml)的比值表示。
尿白蛋白含量测定：小鼠24小时尿白蛋白浓度采用溴甲酚绿法检测。由于在酸性条件下，白蛋白与溴甲酚绿结合形成蓝绿色络合物。反应形成的该络合物与尿样中白蛋白浓度成正比。该络合物在630nm处具有强吸收峰，可用于检测尿样中白蛋白的浓度。本实验以牛血清白蛋白(2mg/ml)为标准品做标准曲线并定量。尿白蛋白含量测定结果以尿白蛋白浓度(mg/ml)与尿肌酐浓度(mg/ml)的比值表示。
尿肌酐浓度测定：小鼠24小时尿肌酐浓度采用苦味酸法检测。由于肌酐可与碱性的苦味酸反应生成红色的Janovski复合物。反应过程中形成的红色复合物与样本中肌酐浓度成正比。该复合物在510nm波长处具有强吸收峰，可用于检测尿液中肌酐的浓度。本实验以肌酐标准品(2mg/ml)做标准曲线并定量。
实验结果
高蛋白尿是肾病综合征的显著特征之一，其中主要是白蛋白。阿霉素模型组及不同浓度GTE治疗组小鼠尿总蛋白(图2A)及尿白蛋白(图2B)的排出量在造模1周后进行性升高，与对照组差异显著(p<0.05)，而阳性药组与对照组比却没有显著性差异(p>0.05)。在治疗11天后，GTE不同浓度组及阳性药组与模型组比较，小鼠尿总蛋白及尿白蛋白的排出量均有不同程度的降低，差异有统计学意义(p<0.05)。这些结果显示烟豆提取物能明显缓解阿霉素诱导的Balb/c小鼠肾病综合征的高蛋白尿症状。
实验例2烟豆提取物显著减少肾病综合征肾小球损伤
实验设计
实验前将小鼠随机分为5组：对照组、模型组、2.5g/kg GTE组、5g/kg GTE组(由实施例1制备)和阳性药贝那普利组，6只/组，共30只。各组小鼠适应性饲养3天。模型组、2.5g/kg GTE组、5g/kg GTE组及阳性药物贝那普利组(5mg/kg)小鼠经尾静脉单次注射12mg/kg阿霉素诱导肾病综合征。对照组小鼠经尾静脉单次注射等体积的生理盐水。小鼠经阿霉素造模后第0天开始灌胃给药，每天1次，每次每只小鼠250μl，直至实验结束。造模后第25天，处死小鼠并分离出肾脏，用福尔玛琳固定并过夜，做石蜡切片及PAS染色，观察肾小球和肾间质的结构改变并评分。
实验方法
高碘酸-希夫氏(Periodic acid-Schiff stain,PAS)染色法可充分显示组织内的糖蛋白成分，常用于特异性观察肾小球毛细血管基底膜及系膜基质。PAS染色后，肾小球及肾小管基底膜、胶原纤维、蛋白管型均呈***。实验用10％中性***固定液为南昌雨露实验器材有限公司生产。固体石蜡购于上海懿洋仪器有限公司。糖原PAS染色试剂盒购于北京里根生物技术有限公司。造模25天后，处死小鼠并分离出肾脏置于10％***溶液中固定过夜，随后，取0.3cm3大小的肾皮质组织，逐级酒精脱水、二甲苯透化，石蜡包埋。使用石蜡切片机将肾组织切成4μm厚的切片，然后脱蜡，做PAS染色，随机选择至少50个肾小球，观察肾小球和肾间质的结构改变并评分。肾小球损害评分(0-3)，0分：正常；1分：稍弱到弱的表现，表现出微弱的肾小球系膜细胞增殖及肾小球系膜基质的扩张；2分：较重的表现，明显的肾小球系膜细胞增殖及系膜基质的扩张；3分：肾小球出现明显小叶结构及肾小球黏着在肾小球囊内表面。
实验结果
为了进一步观察烟豆水提物是否减轻阿霉素诱导的肾病综合征对肾小球的损伤，对各组小鼠肾脏进行了PAS染色。结果显示(图3A)：正常对照组肾脏皮质区肾小球和肾小管结构清晰，肾小球及肾小管上皮细胞排列整齐，基底膜结构完整。模型组小鼠肾小球皮质区间质血管大量扩张，充血，毛细血管袢开放不良，可见明显的肾小球节段式小叶结构，肾小球毛细血管及上皮细胞基底膜不规则增厚，出现大量PAS染色阳性物质。GTE及阳性药贝那普利作用于阿霉素肾病综合征小鼠明显缓解了肾皮质区的病理改变，小鼠给予GTE治疗后，肾小球系膜扩张减少，肾小球毛细管上皮细胞增殖减少，肾小球基底膜基本恢复到正常水平，肾小球及小管PAS染色阳性物质明显减少。阳性药贝那普利治疗缓解了肾小球系膜区扩张且减少了毛细血管上皮细胞增殖，然而肾小球囊腔基底膜表现出不规则增厚，肾小球囊腔可见轻微的蛋白质样沉积，肾小球及肾小管系膜区PAS染色阳性物质明显减少。
实验例3烟豆提取物显著改善肾病综合征肾功能
实验设计
实验前将小鼠随机分为5组：对照组、模型组、2.5g/kg GTE组、5g/kg GTE组(由实施例1制备)和阳性药贝那普利组，6只/组，共30只。各组小鼠适应性饲养3天。模型组、2.5g/kg GTE组、5g/kg GTE组及阳性药物贝那普利组(5mg/kg)小鼠经尾静脉单次注射阿霉素(12mg/kg)诱导肾病综合征。对照组小鼠经尾静脉单次注射等体积的生理盐水。小鼠从造模后第0天开始每天连续灌胃给药，每次每只小鼠250μl，直至实验结束。在造模后第0，7，14，25天，各组小鼠经眼眶采血分离出血浆，同时检测血浆尿素氮及血肌酐浓度。
实验方法
尿素和肌酐测定试剂盒购于上海复星长征医学科学有限公司。小鼠在造模后第0，7，14，25天经眼眶采血分离出血浆，检测血浆尿素氮及血浆肌酐的浓度。
血浆尿素氮浓度测定：小鼠血浆尿素氮浓度采用尿素酶紫外速率法检测。尿素经尿素酶的作用生成谷氨酸和NAD+，NAD+的生成速率与样本中尿素氮的浓度成正比。通过在340nm处测定固定时间间隔内吸亮度的下降速率，测得样本中尿素氮的浓度。本实验使用中国食品药品检定研究院生产的尿素氮为尿素氮标准品。血浆尿素氮浓度计算公式为：
血肌酐浓度测定：小鼠血肌酐浓度测定方法同尿肌酐浓度测定。
实验结果
尿素氮和肌酐是蛋白质和含氮有机物的代谢产物。在肾功能正常情况下，这些小分子物质从肾小球滤出并排除体外，故可用作肾小球滤过功能的诊断指针。当肾小球滤过功能减低时，血肌酐及血尿素氮会因为潴留而增高。与对照组比较，模型组小鼠血浆尿素氮及血浆肌酐的浓度显著升高(p<0.05)，并于造模后第14天达到峰值，随后开始降低(图4A和图4B)。2.5g/kg及5g/kg GTE及阳性药贝那普利治疗7天后显著降低了阿霉素诱导的肾病综合征小鼠血浆尿素氮和血肌酐浓度(p<0.05)。这些结果表明烟豆提取物具有显著改善阿霉素肾病综合征Balb/c小鼠肾功能的作用。
实验例4烟豆提取物显著降低肾病综合征高脂血症
实验设计
实验前将小鼠随机分为5组：对照组、模型组、2.5g/kg GTE组、5g/kg GTE组(由实施例1制备)和阳性药贝那普利组，6只/组，共30只。模型组、2.5g/kg GTE组、5g/kg GTE组及阳性药物贝那普利组(5mg/kg)小鼠经尾静脉单次注射阿霉素(12mg/kg)诱导肾病综合征。对照组小鼠经尾静脉单次注射等体积的生理盐水。小鼠从造模后第0天开始每天连续灌胃给药，每次每只小鼠250μl，直至实验结束。在造模后第0，7，14，25天，小鼠经眼眶采血并分离出血浆，检测血浆中胆固醇及甘油三酯的浓度。
实验方法
胆固醇和甘油三酯测定试剂盒购自上海复星长征医学科学有限公司。各组小鼠在造模后第0，7，14，25天经眼眶采血分离出血浆，检测血浆胆固醇及甘油三酯的浓度。
血浆胆固醇浓度测定：小鼠血浆胆固醇浓度采用胆固醇氧化酶法检测。胆固醇可被胆固醇氧化酶氧化生成双氧水，后者与对羟基苯甲酸及氨基安替比林反应生成红色醌亚胺色素。亚胺色素的生成量与样本中胆固醇的浓度成正比，通过在500nm波长处测定吸亮度值可得到样本中胆固醇的浓度。本实验以胆固醇标准品(2mg/ml)做标准曲线并定量。
血浆甘油三酯浓度测定：小鼠血浆甘油三酯浓度采用酶法检测。甘油三酯可被甘油磷酸氧化酶氧化为磷酸二羟基丙酮及双氧水。后者与羟基苯磺酸盐及氨基安替比林反应生成红色醌亚胺色素。亚胺色素的生成量与样本中甘油三酯的浓度成正比，通过在520nm处测定吸亮度值可得到样本中甘油三酯的浓度。本实验以甘油三酯标准品(2mg/ml)做标准曲线并定量。
实验结果
高脂血症是肾病综合征的另一显著特征，其中胆固醇及甘油三酯升高最明显。如图5A所示，与对照组比较，模型组小鼠血浆甘油三酯及胆固醇浓度于造模7天及14天后显著升高(p<0.05)。与模型组比较，GTE及阳性药治疗组血浆甘油三酯及胆固醇浓度明显降低了(p<0.05)。这些结果表明烟豆提取物能够明显改善阿霉素肾病综合征小鼠高脂血症。
实验例5烟豆提取物显著提高抗氧化能力及抑制肾病综合征氧化应激反应
实验设计
实验前将小鼠随机分为5组：对照组、模型组、2.5g/kg GTE组、5g/kg GTE组(由实施例1制备)和阳性药贝那普利组，6只/组，共30只。模型组、2.5g/kg GTE组、5g/kg GTE组及阳性药物贝那普利组(5mg/kg)小鼠经尾静脉单次注射阿霉素(12mg/kg)诱导肾病综合征。对照组小鼠经尾静脉单次注射等体积的生理盐水。小鼠从造模后第0天开始每天连续灌胃给药，每次每只小鼠250μl，直至实验结束。在造模后第25天处死小鼠并分离出血浆和肾组织，使用南京建成公司的总超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒及丙二醛(MDA)测定试剂盒测定各组小鼠血浆及肾组织中的SOD活力及MDA含量。同时，使用GENMED动物组织氧化应启动性氧鲁米诺化学发光法定量检测试剂盒(GENMED Scientifics,USA)测定肾组织中的活性氧自由基(ROS)含量。
实验方法
总超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)测定试剂盒购于南京建成公司。GENMED动物组织氧化应激活性氧鲁米诺化学发光法定量检测试剂盒购于美国GENMED Scientifics公司。实验最后一天处死小鼠分离出血浆及肾组织，并测定血浆及组织中的SOD活力和MDA含量。同时检测小鼠组织中的ROS含量。
SOD活力测定各组小鼠血浆及肾组织中SOD活力采用黄嘌呤氧化酶法检测。黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应***产生超氧阴离子自由基，后者氧化羟胺形成亚硝酸盐，在显色剂作用下呈现***，亚硝酸盐的生成量与样本中SOD活力成正比，在550nm波长处具有强吸收峰。小鼠血浆及组织中SOD活力计算公式：
MDA含量测定小鼠血浆及组织中MDA含量采用丙二醛法检测。过氧化脂质降解产物中的丙二醛可与硫代巴比妥酸缩合，形成红色产物，红色产物的生成量与样本中MDA的含量成正比，在532nm波长处有最大吸收峰。小鼠血浆及组织中MDA含量计算公式为：
组织ROS含量测定小鼠肾组织ROS含量采用鲁米诺化学发光法并按产品说明书检测。鲁米诺又称氨基邻苯二甲酰肼，是一种脂溶性发光剂，氧化后生成鲁米诺自由基而化学发光，具有460nm左右峰值的带状广谱，肉眼可观察到鲜明的紫蓝色。鲁米诺以单价氧化形式与超氧自由基阴离子反应。它作为探针可检测组织细胞中过氧化氢、超氧阴离子和羟自由基。小鼠肾组织ROS计算公式为：
实验结果
SOD对机体的氧化及抗氧化平衡起着至关重要的作用，能清除超氧阴离子自由基，保护细胞免受损伤。而MDA则间接反应了机体细胞受氧自由基攻击的严重程度。如图6A和6C所示，造模25天后，模型组小鼠血浆及组织中的SOD活力显著低于对照组(p<0.05)，而其MDA含量(图6B和6D)则高于对照组(p<0.05)。给予2.5g/kg及5g/kg的GTE治疗明显升高了肾病综合征小鼠血浆及组织中的SOD活力(p<0.05)且降低了其MDA含量(p<0.05)，缓解了阿霉素诱导的肾病综合征过程中的肾脏氧化损伤。此外，GTE治疗组明显降低小鼠肾组织中ROS含量(图5E)。这些结果表明GTE显著增强了肾脏组织的抗氧化能力，抑制了阿霉素肾病综合征的氧化应激，提示烟豆提取物通过增强肾脏的抗氧化能力而达到治疗肾病综合征的目的。
统计学分析
实验资料用Mean±SEM表示。采用SPSS13.0统计软件进行数据分析，其中小鼠尿蛋白排出量、血浆肌酐及尿素氮浓度、血浆胆固醇及甘油三酯浓度等数据进行Two-way ANOVA方差分析，组间比较采用Bonferroni法。肾PAS染色评分，血浆及肾组织SOD活力与MDA含量，及肾组织ROS含量等数据用One-way ANOVA方差分析，组间比较采用Tukey法。P<0.05为差异有统计学意义。
小结
本发明首次发现烟豆提取物具有显著抗肾病综合征的作用，表现在：(1)显著减轻肾小球损伤；(2)降低尿总蛋白及尿白蛋白含量；(3)降低血浆肌酐及尿素氮含量；(4)降低血浆胆固醇和甘油三酯含量。并且，烟豆提取物通过提高抗氧化能力及抑制氧化应激反应而发挥抗肾病综合征的作用。本发明提示烟豆提取物具有潜在的开发为抗肾病综合征的高效低毒药物，有广泛的临床应用价值。

Claims (11)

1.一种烟豆Glycine tabacina(Labill.)Benth水提取物，其特征在于：它是烟豆的80-100℃水提取物。
2.根据权利要求1所述的烟豆水提取物，其特征在于：所述的烟豆来源于烟豆Glycinetabacina(Labill.)Benth的根、茎、叶或全株。
3.根据权利要求1或2所述的烟豆水提取物，其特征在于：所述的提取物是由下述方法提取得到：取烟豆，按1:10料液比，加蒸馏水，于80-100℃下加热回流提取1h，布氏漏斗过滤得滤液，经浓缩后，冷冻干燥得水提物干粉。
4.根据权利要求3所述的烟豆水提取物，其特征在于：所述的提取温度为80℃。
5.根据权利要求1－4任意一项所述的烟豆水提取物，其特征在于：所述的HPLC谱图如图1所示，色谱条件为：
色谱柱为Cosmosil 5C18-MS-II(4.6mm I.D.×250mm)色谱柱，柱温25℃，检测波长254nm；流动相梯度洗脱条件为：0-25min，10-50％MeOH，90-50％H2O；25-30min，50-100％MeOH，50-0％H2O；30-40min，100％MeOH，0％H2O。
6.烟豆Glycine tabacina(Labill.)Benth或权利要求1－5任意一项所述的烟豆水提取物在制备治疗肾病综合征的药物中的用途。
7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于：所述的药物是治疗高蛋白尿症的药物。
8.根据权利要求6所述的用途，其特征在于：所述的药物是减少肾病综合征肾小球损伤的药物。
9.根据权利要求6所述的用途，其特征在于：所述的药物是改善肾病综合征肾功能的药物。
10.根据权利要求6所述的用途，其特征在于：所述的药物是治疗高脂血症的药物。
11.根据权利要求6所述的用途，其特征在于：所述的药物是提高抗氧化能力或抑制肾病综合征氧化应激反应的药物。
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