CN108929332A - Ido抑制剂 - Google Patents

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CN108929332A CN201810497159.7A CN201810497159A CN108929332A CN 108929332 A CN108929332 A CN 108929332A CN 201810497159 A CN201810497159 A CN 201810497159A CN 108929332 A CN108929332 A CN 108929332A
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李刚
王才林
陆剑宇
周明
丁照中
胡利红
胡国平
黎健
陈曙辉
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NANJING MINGDE NEW DRUG RESEARCH AND DEVELOPMENT Co Ltd
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D495/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D495/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D495/04—Ortho-condensed systems

Abstract

本发明公开了一类新的作为IDO抑制剂的化合物，具体公开了式(I)所示化合物及其药学上可接受的盐。本发明还公开了式(I)所示化合物及其药学上可接受的盐在制备***药物中的应用。

Description

IDO抑制剂
技术领域
本发明涉及新的作为IDO抑制剂的化合物，具体公开了式(I)所示化合物及其药学上可接受的盐。本发明还涉及式(I)所示化合物及其药学上可接受的盐在制备***药物中的应用。
背景技术
恶性肿瘤是现如今危害人类生命安全的主要疾病之一。近百年来，人类为了对抗恶性肿瘤，发展出了多种包括最常用的化疗，手术，放疗以及靶向疗法在内的诊疗手段与治疗方法。这些疗法在一定程度上延缓的肿瘤的发展，延长了患者生命。但是由于恶性肿瘤的无限制生长，浸润与转移的特性，以上疗法依旧无法达到理想的抑制效果。同时，以上的疗法的毒副作用也是限制其应用的关键因素。
近年来，免疫疗法作为恶性肿瘤治疗的新兴疗法被发展起来，其特点是通过调动宿主的天然防御机制来抵抗肿瘤的生长。其主要途径主要通过激活宿主原有的免疫***，增强宿主集体对肿瘤细胞的免疫反应，利用免疫***能力达到精准有效的杀伤肿瘤，遏制其发展。
吲哚胺-吡咯-2,3-双加氧酶(Indoleeamine-pyrrole-2,3-dioxygenase，IDO)是一种含铁红素的单体蛋白，其功能在于催化了色氨酸向犬尿酸转变的决速步骤。IDO在多种肿瘤细胞内有过表达。过度表达的IDO可以迅速消耗肿瘤微环境内色氨酸，使得浸润至肿瘤内部的T细胞由于缺乏色氨酸而停滞于G1期中期，从而抑制了T细胞增殖并使T细胞信号传导受阻，功能丧失。因此，抑制肿瘤内部过表达的IDO功能有助于激活集体免疫***，抵制肿瘤生长。
IDO抑制剂作为药物在医药行业具有良好的应用前景，但是目前尚无IDO抑制剂上市。处于临床的IDO抑制剂只有NewLink Genetics公司开发的NLG-0919与Incyte公司的INCB-24360。但是，现有临床IDO抑制剂存在诸如CYP抑制(NLG 0919)、给药剂量大、半衰期短、给药次数多(INCB-24360)等问题。因此，无上述缺点的IDO抑制剂依旧是未被满足的医疗需求。
发明内容
本发明提供式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐，
其中，
环A选自：5～6元杂芳基、苯基、C5～6环烷基或5～6元杂环烷基；
m选自：1或2；
X选自：O、S；
L选自：单键、-(C＝O)-；
R1选自任选被1、2或3个R取代的：C1-3烷基；
R2分别独立地选自H、卤素、OH、NH2、CN，或者选自任选被1、2或3个R取代的：C1-3烷基；
R3选自H、卤素、OH、NH2，或者选自任选被1、2或3个R取代的：C1-6烷基、C1-6杂烷基、C3-6环烷基、苯基、5～6元杂芳基；
R4选自：H、卤素；
R选自F、Cl、Br、CN、OH、氨基、羧基，或者选自任选被1、2或3个R’取代的：C1-3烷基、C1-3杂烷基、C3-6环烷基；
R’选自：F、Cl、Br、CN、OH、NH2、CH3、
所述5～6元杂芳基、5～6元杂环烷基、C1-6杂烷基之“杂”分别独立地选自：N、-O-、-S-、-(C＝O)-、-NH-、-(S＝O)-、-S(＝O)2-；
以上任何一种情况下，杂原子或杂原子团的数目分别独立地选自1、2、3或4。
在本发明的一些方案中，上述R选自：F、Cl、Br、CN、OH、NH2、CH3、CF3、CHF2、CH2F、
在本发明的一些方案中，上述R1选自任选被1、2或3个R取代的：CH3。
在本发明的一些方案中，上述R1选自：CH2OH、CH3、CF3。
在本发明的一些方案中，上述R2分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN，或者选自任选被1、2或3个R取代的：CH3。
在本发明的一些方案中，上述R2分别独立地选自：H、Cl、Br、CN。
在本发明的一些方案中，上述R3选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2，或者选自任选被1、2或3个R取代的：CH3、
在本发明的一些方案中，上述R3选自：H、F、CH3、
在本发明的一些方案中，上述R4选自H。
在本发明的一些方案中，上述环A选自：苯基、5～6元杂环烷基。
在本发明的一些方案中，上述环A选自：苯基或哌啶基。
在本发明的一些方案中，上述结构单元选自：
在本发明的一些方案中，上述结构单元选自：
在本发明的一些方案中，上述结构单元选自：
在本发明的一些方案中，上述结构单元选自：
在本发明的一些方案中，上述结构单元选自：
在本发明的一些方案中，上述结构单元选自：
在本发明的一些方案中，上述R选自：F、Cl、Br、CN、OH、NH2、CH3、CF3、CHF2、CH2F、其他变量如上述所定义。
在本发明的一些方案中，上述R1选自任选被1、2或3个R取代的：CH3，其他变量如上述所定义。
在本发明的一些方案中，上述R1选自：CH2OH、CH3、CF3，其他变量如上述所定义。
在本发明的一些方案中，上述R2分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN，或者选自任选被1、2或3个R取代的：CH3，其他变量如上述所定义。
在本发明的一些方案中，上述R2分别独立地选自：H、Cl、Br、CN，其他变量如上述所定义。
在本发明的一些方案中，上述R3选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2，或者选自任选被1、2或3个R取代的：CH3、其他变量如上述所定义。
在本发明的一些方案中，上述R3选自：H、F、CH3、其他变量如上述所定义。
在本发明的一些方案中，上述R4选自H，其他变量如上述所定义。
在本发明的一些方案中，上述环A选自：苯基、5～6元杂环烷基，其他变量如上述所定义。
在本发明的一些方案中，上述环A选自：苯基或哌啶基，其他变量如上述所定义。
在本发明的一些方案中，上述结构单元选自：其他变量如上述所定义。
在本发明的一些方案中，上述结构单元选自：其他变量如上述所定义。
在本发明的一些方案中，上述结构单元选自：其他变量如上述所定义。
在本发明的一些方案中，上述结构单元选自： 其他变量如上述所定义。
在本发明的一些方案中，上述结构单元选自： 其他变量如上述所定义。
在本发明的一些方案中，上述结构单元选自： 其他变量如上述所定义。在本发明的一些方案中，上述化合物或其药学上可接受的盐，选自：
其中，R1、R2、R3、R4、X、L如上述所定义。
本发明还提供化合物或其药学上可接受的盐，其中，化合物选自：
在本发明的一些方案中，上述化合物或其药学上可接受的盐，其中，化合物选自：
本发明还提供一种药物组合物，其含有治疗有效量的上述的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。
本发明还提供上述的化合物或其药学上可接受的盐或上述的药物组合物在制备***药物中的应用。
本发明还有一些方案是由上述各变量任意组合而来。
技术效果
本发明提供一种新型结构的选择性IDO抑制剂，具有此优异的体外细胞活性；同时该系列的化合物具有良好渗透性质，预计将会有很好成药性质；同时，对CYP酶的低抑制使得该系列化合物的药物相互作用风险大大降低。
定义和说明
除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。这里所采用的术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物的中性形式接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括钠、钾、钙、铵、有机氨或镁盐或类似的盐。当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的酸与这类化合物的中性形式接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括无机酸盐，所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸，碳酸氢根，磷酸、磷酸一氢根、磷酸二氢根、硫酸、硫酸氢根、氢碘酸、亚磷酸等；以及有机酸盐，所述有机酸包括如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸和甲磺酸等类似的酸；还包括氨基酸(如精氨酸等)的盐，以及如葡糖醛酸等有机酸的盐(参见Berge et al.,"PharmaceuticalSalts",Journal of Pharmaceutical Science 66:1-19(1977))。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸性的官能团，从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。
优选地，以常规方式使盐与碱或酸接触，再分离母体化合物，由此再生化合物的中性形式。化合物的母体形式与其各种盐的形式的不同之处在于某些物理性质，例如在极性溶剂中的溶解度不同。
本文所用的“药学上可接受的盐”属于本发明化合物的衍生物，其中，通过与酸成盐或与碱成盐的方式修饰所述母体化合物。药学上可接受的盐的实例包括但不限于：碱基比如胺的无机酸或有机酸盐、酸根比如羧酸的碱金属或有机盐等等。药学上可接受的盐包括常规的无毒性的盐或母体化合物的季铵盐，例如无毒的无机酸或有机酸所形成的盐。常规的无毒性的盐包括但不限于那些衍生自无机酸和有机酸的盐，所述的无机酸或有机酸选自2-乙酰氧基苯甲酸、2-羟基乙磺酸、乙酸、抗坏血酸、苯磺酸、苯甲酸、碳酸氢根、碳酸、柠檬酸、依地酸、乙烷二磺酸、乙烷磺酸、富马酸、葡庚糖、葡糖酸、谷氨酸、乙醇酸、氢溴酸、盐酸、氢碘酸盐、羟基、羟萘、羟乙磺酸、乳酸、乳糖、十二烷基磺酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲烷磺酸、硝酸、草酸、双羟萘酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、多聚半乳糖醛、丙酸、水杨酸、硬脂酸、亚乙酸、琥珀酸、氨基磺酸、对氨基苯磺酸、硫酸、单宁、酒石酸和对甲苯磺酸。
本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。一般地，优选醚、EA、乙醇、异丙醇或乙腈等非水介质。
除了盐的形式，本发明所提供的化合物还存在前药形式。本文所描述的化合物的前药容易地在生理条件下发生化学变化从而转化成本发明的化合物。此外，前体药物可以在体内环境中通过化学或生化方法被转换到本发明的化合物。
本发明的某些化合物可以以非溶剂化形式或者溶剂化形式存在，包括水合物形式。一般而言，溶剂化形式与非溶剂化的形式相当，都包含在本发明的范围之内。
本发明的某些化合物可以具有不对称碳原子(光学中心)或双键。外消旋体、非对映异构体、几何异构体和单个的异构体都包括在本发明的范围之内。
除非另有说明，用楔形实线键和楔形虚线键表示一个立体中心的绝对构型，用波浪线表示楔形实线键或楔形虚线键用直形实线键和直形虚线键表示立体中心的相对构型。当本文所述化合物含有烯属双键或其它几何不对称中心，除非另有规定，它们包括E、Z几何异构体。同样地，所有的互变异构形式均包括在本发明的范围之内。
本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对对映体、(R)-和(S)-对映体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本发明的范围之内。
可以通过的手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(R)-和(S)-异构体以及D和L异构体。如果想得到本发明某化合物的一种对映体，可以通过不对称合成或者具有手性助剂的衍生作用来制备，其中将所得非对映体混合物分离，并且辅助基团裂开以提供纯的所需对映异构体。或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常规方法进行非对映异构体拆分，然后回收得到纯的对映体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过使用色谱法完成的，所述色谱法采用手性固定相，并任选地与化学衍生法相结合(例如由胺生成氨基甲酸盐)。
本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氚(3H)，碘-125(125I)或C-14(14C)。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。
术语“药学上可接受的载体”是指能够递送本发明有效量活性物质、不干扰活性物质的生物活性并且对宿主或者患者无毒副作用的任何制剂或载体介质代表性的载体包括水、油、蔬菜和矿物质、膏基、洗剂基质、软膏基质等。这些基质包括悬浮剂、增粘剂、透皮促进剂等。它们的制剂为化妆品领域或局部药物领域的技术人员所周知。关于载体的其他信息，可以参考Remington:The Science and Practice of Pharmacy,21st Ed.,Lippincott,Williams&Wilkins(2005)，该文献的内容通过引用的方式并入本文。
术语“赋形剂”通常是指配制有效的药物组合物所需要载体、稀释剂和/或介质。
针对药物或药理学活性剂而言，术语“有效量”或“治疗有效量”是指无毒的但能达到预期效果的药物或药剂的足够用量。对于本发明中的口服剂型，组合物中一种活性物质的“有效量”是指与该组合物中另一种活性物质联用时为了达到预期效果所需要的用量。有效量的确定因人而异，取决于受体的年龄和一般情况，也取决于具体的活性物质，个案中合适的有效量可以由本领域技术人员根据常规试验确定。
术语“活性成分”、“治疗剂”，“活性物质”或“活性剂”是指一种化学实体，它可以有效地治疗目标紊乱、疾病或病症。
“任选”或“任选地”指的是随后描述的事件或状况可能但不是必需出现的，并且该描述包括其中所述事件或状况发生的情况以及所述事件或状况不发生的情况。
术语“被取代的”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，可以包括重氢和氢的变体，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为酮基(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代。酮取代不会发生在芳香基上。术语“任选被取代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和数目在化学上可以实现的基础上可以是任意的。
当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被0-2个R所取代，则所述基团可以任选地至多被两个R所取代，并且每种情况下的R都有独立的选项。此外，取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
当一个连接基团的数量为0时，比如-(CRR)0-，表示该连接基团为单键。
当其中一个变量选自单键时，表示其连接的两个基团直接相连，比如A-L-Z中L代表单键时表示该结构实际上是A-Z。
当一个取代基为空缺时，表示该取代基是不存在的，比如A-X中X为空缺时表示该结构实际上是A。当一个取代基可以连接到一个环上的一个以上原子时，这种取代基可以与这个环上的任意原子相键合，例如，结构单元表示取代基R可在环己基或者环己二烯上的任意一个位置发生取代。当所列举的取代基中没有指明其通过哪一个原子连接到被取代的基团上时，这种取代基可以通过其任何原子相键合，例如，吡啶基作为取代基可以通过吡啶环上任意一个碳原子连接到被取代的基团上。当所列举的连接基团没有指明其连接方向，其连接方向是任意的，例如，中连接基团L为-M-W-，此时-M-W-既可以按与从左往右的读取顺序相同的方向连接环A和环B构成也可以按照与从左往右的读取顺序相反的方向连接环A和环B构成所述连接基团、取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
除非另有规定，术语“杂”表示杂原子或杂原子团(即含有杂原子的原子团)，包括碳(C)和氢(H)以外的原子以及含有这些杂原子的原子团，例如包括氧(O)、氮(N)、硫(S)、硅(Si)、锗(Ge)、铝(Al)、硼(B)、-O-、-S-、＝O、＝S、-C(＝O)O-、-C(＝O)-、-C(＝S)-、-S(＝O)、-S(＝O)2-，以及任选被取代的-C(＝O)N(H)-、-N(H)-、-C(＝NH)-、-S(＝O)2N(H)-或-S(＝O)N(H)-。
除非另有规定，“环”表示被取代或未被取代的环烷基、杂环烷基、环烯基、杂环烯基、环炔基、杂环炔基、芳基或杂芳基。所谓的环包括单环、联环、螺环、并环或桥环。环上原子的数目通常被定义为环的元数，例如，“5～7元环”是指环绕排列5～7个原子。除非另有规定，该环任选地包含1～3个杂原子。因此，“5～7元环”包括例如苯基、吡啶和哌啶基；另一方面，术语“5～7元杂环烷基环”包括吡啶基和哌啶基，但不包括苯基。术语“环”还包括含有至少一个环的环系，其中的每一个“环”均独立地符合上述定义。
除非另有规定，术语“杂环”或“杂环基”意指稳定的含杂原子或杂原子团的单环、双环或三环，它们可以是饱和的、部分不饱和的或不饱和的(芳族的)，它们包含碳原子和1、2、3或4个独立地选自N、O和S的环杂原子，其中上述任意杂环可以稠合到一个苯环上形成双环。氮和硫杂原子可任选被氧化(即NO和S(O)p，p是1或2)。氮原子可以是被取代的或未取代的(即N或NR，其中R是H或本文已经定义过的其他取代基)。该杂环可以附着到任何杂原子或碳原子的侧基上从而形成稳定的结构。如果产生的化合物是稳定的，本文所述的杂环可以发生碳位或氮位上的取代。杂环中的氮原子任选地被季铵化。一个优选方案是，当杂环中S及O原子的总数超过1时，这些杂原子彼此不相邻。另一个优选方案是，杂环中S及O原子的总数不超过1。如本文所用，术语“芳族杂环基团”或“杂芳基”意指稳定的5、6、7元单环或双环或7、8、9或10元双环杂环基的芳香环，它包含碳原子和1、2、3或4个独立地选自N、O和S的环杂原子。氮原子可以是被取代的或未取代的(即N或NR，其中R是H或本文已经定义过的其他取代基)。氮和硫杂原子可任选被氧化(即NO和S(O)p，p是1或2)。值得注意的是，芳香杂环上S和O原子的总数不超过1。桥环也包含在杂环的定义中。当一个或多个原子(即C、O、N或S)连接两个不相邻的碳原子或氮原子时形成桥环。优选的桥环包括但不限于：一个碳原子、两个碳原子、一个氮原子、两个氮原子和一个碳-氮基。值得注意的是，一个桥总是将单环转换成三环。桥环中，环上的取代基也可以出现在桥上。
杂环化合物的实例包括但不限于：吖啶基、吖辛因基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并巯基呋喃基、苯并巯基苯基、苯并恶唑基、苯并恶唑啉基、苯并噻唑基、苯并***基、苯并四唑基、苯并异恶唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑啉基、咔唑基、4aH-咔唑基、咔啉基、苯并二氢吡喃基、色烯、噌啉基十氢喹啉基、2H,6H-1,5,2-二噻嗪基、二氢呋喃并[2,3-b]四氢呋喃基、呋喃基、呋咱基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、吲哚烯基、二氢吲哚基、中氮茚基、吲哚基、3H-吲哚基、异苯并呋喃基、异吲哚基、异二氢吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异恶唑基、亚甲二氧基苯基、吗啉基、萘啶基，八氢异喹啉基、恶二唑基、1,2,3-恶二唑基、1,2,4-恶二唑基、1,2,5-恶二唑基、1,3,4-恶二唑基、恶唑烷基、恶唑基、羟吲哚基、嘧啶基、菲啶基、菲咯啉基、吩嗪、吩噻嗪、苯并黄嘌呤基、酚恶嗪基、酞嗪基、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、胡椒基、蝶啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并恶唑、吡啶并咪唑、吡啶并噻唑、吡啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2H-吡咯基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹嗪基、喹喔啉基、奎宁环基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、四唑基，6H-1,2,5-噻二嗪基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、异噻唑基噻吩基、噻吩并恶唑基、噻吩并噻唑基、噻吩并咪唑基、噻吩基、三嗪基、1H-1,2,3-***基、2H-1,2,3-***基、1H-1,2,4-***基、4H-1,2,4-***基和呫吨基。还包括稠环和螺环化合物。
除非另有规定，术语“烃基”或者其下位概念(比如烷基、烯基、炔基、芳基等等)本身或者作为另一取代基的一部分表示直链的、支链的或环状的烃原子团或其组合，可以是完全饱和的(如烷基)、单元或多元不饱和的(如烯基、炔基、芳基)，可以是单取代或多取代的，可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)，可以包括二价或多价原子团，具有指定数量的碳原子(如C1-C12表示1至12个碳，C1-12选自C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、C10、C11和C12；C3-12选自C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、C10、C11和C12。)。“烃基”包括但不限于脂肪烃基和芳香烃基，所述脂肪烃基包括链状和环状，具体包括但不限于烷基、烯基、炔基，所述芳香烃基包括但不限于6-12元的芳香烃基，例如苯、萘等。在一些实施例中，术语“烃基”表示直链的或支链的原子团或它们的组合，可以是完全饱和的、单元或多元不饱和的，可以包括二价和多价原子团。饱和烃原子团的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、异丁基、环己基、(环己基)甲基、环丙基甲基，以及正戊基、正己基、正庚基、正辛基等原子团的同系物或异构体。不饱和烃基具有一个或多个双键或三键，其实例包括但不限于乙烯基、2-丙烯基、丁烯基、巴豆基、2-异戊烯基、2-(丁二烯基)、2,4-戊二烯基、3-(1,4-戊二烯基)、乙炔基、1-和3-丙炔基，3-丁炔基，以及更高级的同系物和异构体。
除非另有规定，术语“杂烃基”或者其下位概念(比如杂烷基、杂烯基、杂炔基、杂芳基等等)本身或者与另一术语联合表示稳定的直链的、支链的或环状的烃原子团或其组合，有一定数目的碳原子和至少一个杂原子组成。在一些实施例中，术语“杂烷基”本身或者与另一术语联合表示稳定的直链的、支链的烃原子团或其组合物，有一定数目的碳原子和至少一个杂原子组成。在一个典型实施例中，杂原子选自B、O、N和S，其中氮和硫原子任选地被氧化，氮杂原子任选地被季铵化。杂原子或杂原子团可以位于杂烃基的任何内部位置，包括该烃基附着于分子其余部分的位置，但术语“烷氧基”、“烷氨基”和“烷硫基”(或硫代烷氧基)属于惯用表达，是指分别通过一个氧原子、氨基或硫原子连接到分子的其余部分的那些烷基基团。实例包括但不限于-CH2-CH2-O-CH3、-CH2-CH2-NH-CH3、-CH2-CH2-N(CH3)-CH3、-CH2-S-CH2-CH3、-CH2-CH2、-S(O)-CH3、-CH2-CH2-S(O)2-CH3、-CH＝CH-O-CH3、-CH2-CH＝N-OCH3和–CH＝CH-N(CH3)-CH3。至多两个杂原子可以是连续的，例如-CH2-NH-OCH3。
除非另有规定，术语“环烃基”、“杂环烃基”或者其下位概念(比如芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、环烯基、杂环烯基、环炔基、杂环炔基等等)本身或与其他术语联合分别表示环化的“烃基”、“杂烃基”。此外，就杂烃基或杂环烃基(比如杂烷基、杂环烷基)而言，杂原子可以占据该杂环附着于分子其余部分的位置。环烃基的实例包括但不限于环戊基、环己基、1-环己烯基、3-环己烯基、环庚基等。杂环基的非限制性实例包括1-(1,2,5,6-四氢吡啶基)、1-哌啶基、2-哌啶基，3-哌啶基、4-吗啉基、3-吗啉基、四氢呋喃-2-基、四氢呋喃吲哚-3-基、四氢噻吩-2-基、四氢噻吩-3-基，1-哌嗪基和2-哌嗪基。
除非另有规定，术语“烷基”用于表示直链或支链的饱和烃基,可以是单取代(如-CH2F)或多取代的(如-CF3)，可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)。烷基的例子包括甲基(Me)，乙基(Et)，丙基(如，n-丙基和异丙基)，丁基(如，n-丁基，异丁基，s-丁基，t-丁基)，戊基(如，n-戊基，异戊基，新戊基)等。
除非另有规定，“烯基”指在链的任何位点上具有一个或多个碳碳双键的烷基,可以是单取代或多取代的，可以是一价、二价或者多价。烯基的例子包括乙烯基，丙烯基，丁烯基，戊烯基，己烯基，丁间二烯基，戊间二烯基，己间二烯基等。
除非另有规定，“炔基”指在链的任何位点上具有一个或多个碳碳三键的烷基，可以是单取代或多取代的，可以是一价、二价或者多价。炔基的例子包括乙炔基，丙炔基，丁炔基，戊炔基等。
除非另有规定，环烷基包括任何稳定的环状或多环烃基，任何碳原子都是饱和的，可以是单取代或多取代的，可以是一价、二价或者多价。这些环烷基的实例包括，但不限于，环丙基、降冰片烷基、[2.2.2]二环辛烷、[4.4.0]二环癸烷等。
除非另有规定，环烯基包括任何稳定的环状或多环烃基，该烃基在环的任何位点含有一个或多个不饱和的碳-碳双键，可以是单取代或多取代的，可以是一价、二价或者多价。这些环烯基的实例包括，但不限于，环戊烯基、环己烯基等。
除非另有规定，环炔基包括任何稳定的环状或多环烃基，该烃基在环的任何位点含有一个或多个碳-碳三键，可以是单取代或多取代的，可以是一价、二价或者多价。
除非另有规定，术语“卤代素”或“卤素”本身或作为另一取代基的一部分表示氟、氯、溴或碘原子。此外，术语“卤代烷基”意在包括单卤代烷基和多卤代烷基。例如，术语“卤代(C1-C4)烷基”意在包括但不仅限于三氟甲基、2,2,2-三氟乙基、4-氯丁基和3-溴丙基等等。除非另有规定，卤代烷基的实例包括但不仅限于：三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基，和五氯乙基。
“烷氧基”代表通过氧桥连接的具有特定数目碳原子的上述烷基，除非另有规定，C1-6烷氧基包括C1、C2、C3、C4、C5和C6的烷氧基。烷氧基的例子包括但不限于：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基和S-戊氧基。
除非另有规定，术语“芳基”表示多不饱和的芳族烃取代基，可以是单取代或多取代的，可以是一价、二价或者多价，它可以是单环或多环(比如1至3个环；其中至少一个环是芳族的)，它们稠合在一起或共价连接。术语“杂芳基”是指含有一至四个杂原子的芳基(或环)。在一个示范性实例中，杂原子选自B、N、O和S，其中氮和硫原子任选地被氧化，氮原子任选地被季铵化。杂芳基可通过杂原子连接到分子的其余部分。芳基或杂芳基的非限制性实施例包括苯基、萘基、联苯基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、吡嗪基、恶唑基、苯基-恶唑基、异恶唑基、噻唑基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、嘧啶基、苯并噻唑基、嘌呤基、苯并咪唑基、吲哚基、异喹啉基、喹喔啉基、喹啉基、1-萘基、2-萘基、4-联苯基、1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、3-吡唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、吡嗪基、2-恶唑基、4-恶唑基、2-苯基-4-恶唑基、5-恶唑基、3-异恶唑基、4-异恶唑基、5-异恶唑基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-苯并噻唑基、嘌呤基、2-苯并咪唑基、5-吲哚基、1-异喹啉基、5-异喹啉基、2-喹喔啉基、5-喹喔啉基、3-喹啉基和6-喹啉基。上述任意一个芳基和杂芳基环系的取代基选自下文所述的可接受的取代基。
除非另有规定，芳基在与其他术语联合使用时(例如芳氧基、芳硫基、芳烷基)包括如上定义的芳基和杂芳基环。因此，术语“芳烷基”意在包括芳基附着于烷基的那些原子团(例如苄基、苯乙基、吡啶基甲基等)，包括其中碳原子(如亚甲基)已经被例如氧原子代替的那些烷基，例如苯氧基甲基、2-吡啶氧甲基3-(1-萘氧基)丙基等。
术语“离去基团”是指可以被另一种官能团或原子通过取代反应(例如亲和取代反应)所取代的官能团或原子。例如，代表性的离去基团包括三氟甲磺酸酯；氯、溴、碘；磺酸酯基，如甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、对溴苯磺酸酯、对甲苯磺酸酯等；酰氧基，如乙酰氧基、三氟乙酰氧基等等。
术语“保护基”包括但不限于“氨基保护基”、“羟基保护基”或“巯基保护基”。术语“氨基保护基”是指适合用于阻止氨基氮位上副反应的保护基团。代表性的氨基保护基包括但不限于：甲酰基；酰基，例如链烷酰基(如乙酰基、三氯乙酰基或三氟乙酰基)；烷氧基羰基，如叔丁氧基羰基(Boc)；芳基甲氧羰基，如苄氧羰基(Cbz)和9-芴甲氧羰基(Fmoc)；芳基甲基，如苄基(Bn)、三苯甲基(Tr)、1,1-二-(4'-甲氧基苯基)甲基；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等等。术语“羟基保护基”是指适合用于阻止羟基副反应的保护基。代表性羟基保护基包括但不限于：烷基，如甲基、乙基和叔丁基；酰基，例如链烷酰基(如乙酰基)；芳基甲基，如苄基(Bn)，对甲氧基苄基(PMB)、9-芴基甲基(Fm)和二苯基甲基(二苯甲基，DPM)；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等等。
本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。
本发明所使用的溶剂可经市售获得。本发明采用下述缩略词：NaOH代表氢氧化钠；dioxane代表二氧六环；NaHCO3代表碳酸氢钠；NH4Cl代表氯化铵；CHCl3代表三氯甲烷；TLC代表薄层色谱分析；TBTU代表O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸；LC-MS代表液相色谱；HOBt代表1-羟基苯并***；Na2SO4代表硫酸钠；SiO2代表二氧化硅；HCl代表盐酸；NMM代表4-甲基吗啉；CuSO4代表硫酸铜；HATU代表O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐；DPPF代表1,1'-双(二苯基膦)二茂铁；prep-HPLC代表制备液相色谱；EDCI代表N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐；TMSCF3代表三甲基三氟甲基硅；eq代表当量、等量；DCM代表二氯甲烷；PE代表石油醚；EA代表乙酸乙酯；DMF代表N,N-二甲基甲酰胺；DMSO代表二甲亚砜；EtOAc代表乙酸乙酯；EtOH代表乙醇；MeOH代表甲醇；BOC代表叔丁氧羰基是一种胺保护基团；HOAc代表乙酸；THF代表四氢呋喃；TFA代表三氟乙酸；DIPEA代表二异丙基乙基胺；NCS代表1-氯吡咯烷-2,5-二酮；Pd2(dba)3代表三(二亚苄基丙酮)二钯；AcOH代表乙酸；TBAT代表丁基三溴化铵；TMSOTf代表三氟甲磺酸三甲基硅酯；Fmoc代表9-芴甲氧羰基。
化合物经手工或者软件命名，市售化合物采用供应商目录名称。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明进行详细描述，但并不意味着对本发明任何不利限制。本文已经详细地描述了本发明，其中也公开了其具体实施例方式，对本领域的技术人员而言，在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本发明具体实施方式进行各种变化和改进将是显而易见的。
实施例1
化合物1-b的合成
将化合物1-a(280.00mg,1.43mmol,1.00eq)溶解在CHCl3(2.00mL)和AcOH(2.00mL)中，并在0℃下分批加入NCS(200.50mg,1.50mmol,1.05eq).所得混合物在20℃下搅拌15小时。通过TLC(PE/EA＝3/1)和LC-MS检测显示大量目标产物形成并伴有少量的原料。将反应物减压浓缩后，加入1N NaOH(20mL)调节pH＝8-9随后用EA(50mL*2)萃取。合并有机相用饱和食盐水洗(50mL*2),Na2SO4干燥，过滤浓缩后得到粗品。将粗品通过柱层析(SiO2,100-200mesh,PE/EA＝10/1to 4:1)。得到1-b.1H-NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm1.37-1.43(m,3H)4.34-4.40(m,2H)6.91-7.01(m,2H)9.36(br s,1H)。
化合物1-c的合成
将化合物1-b(290.00mg,969.44umol,1.00eq)溶解于MeOH(6.00mL)、THF(3.00mL)和水(3.00mL)中，并在20℃下往溶液中加入NaOH(155.11mg,3.88mmol,4.00eq).所得混合物在65℃下搅拌15小时。通过TLC(PE/EA＝3/1)和LC-MS检测至反应完成。将反应液浓缩后加入水(25mL)并用EA(30mL*2)萃取除去有机杂质。将所得水相用2N HCl调节pH至2～3，随后用EA(30mL*2)萃取,将所得有机相混合并用饱和食盐水(50mL*2)，洗涤Na2SO4干燥，过滤旋干后得到粗品产物。将所得黄色固体粗品1-c直接用于下一步反应。
化合物1的合成
将化合物1-c(250.00mg,1.24mmol,1.00eq)(粗品)溶于DMF(5.00mL)中。并在0℃下，依次加入1-d(180.32mg,1.49mmol,189.81uL,1.20eq)。DIPEA(320.52mg,2.48mmol,433.13uL,2.00eq)和TBTU(477.77mg,1.49mmol,1.20eq)。所得混合物在25℃下搅拌15小时.通过TLC(PE/EA＝4/1)和LC-MS检测至反应完成.向反应液中加入水(50mL)淬灭反应并用EA(50mL*3)萃取。合并有机相用饱和食盐水(100mL*2)洗涤，Na2SO4干燥，过滤后减压浓缩得到粗品。粗品通过prep-HPLC(column:Boston Green ODS 150*30 5u；mobile phase:[water(0.225％FA)-ACN]；B％:50％-80％,10min)纯化得到化合物1。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.47(d,J＝7.03Hz,3H)5.15(quin,J＝7.18Hz,1H)7.15(d,J＝13.55Hz,2H)7.17-7.24(m,1H)7.30-7.39(m,4H)8.46-8.59(m,1H)11.80-12.84(m,1H).
实施例2
化合物2-c的合成
将2-a(1.00g,3.77mmol,1.00eq)溶于THF(10.00mL)后，在0℃和氮气氛围下加入NMM(419.38mg,4.15mmol,455.85uL,1.10eq)和2-b(514.79mg,3.77mmol,494.99uL,1.00eq)。搅拌30分钟后,将NaBH4(185.36mg,4.90mmol,1.30eq)的MeOH(2.00mL)溶液在-78℃条件下加入。将所得混合物在-78℃下搅拌3小时。LC-MS检测反应至反应完成。将反应用水(20mL)淬灭并用EA(20mL*2)萃取。合并有机相并用饱和食盐水(40mL)洗涤，Na2SO4干燥,过滤并减压浓缩得到化合物2-c。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.32(s,9H)2.54-2.61(m,1H)2.82(dd,J＝13.68,5.27Hz,1H)3.28(br t,J＝5.77Hz,1H)3.58(br d,J＝5.90Hz,1H)3.66-3.87(m,1H)4.69(s,1H)6.48-6.62(m,1H)7.19(br d,J＝7.03Hz,3H)7.25(br d,J＝7.28Hz,2H)。
化合物2-d的合成
将2-c(1.00g,3.98mmol,1.00eq)溶于MeOH(9.00mL)中后，在25℃下加入4M HCl/MeOH(3.98mmol,3.00mL,1.00eq)。所得混合物在25℃下搅拌1小时。LC-MS检测至反应完成。将反应液旋干得到黄色固体化合物2-d。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.65-3.00(m,3H)3.45-3.56(m,2H)5.34(br s,1H)7.29(br d,J＝19.70Hz,5H)8.17(br s,3H).
化合物2的合成
将1-c(100.00mg,419.23umol,1.00eq)和2-d(127.86mg,628.85umol,1.50eq,HCl)(92.3％purity)溶于DMF(10.00mL)中，并在25℃加入DIPEA(270.91mg,2.10mmol,366.09uL,5.00eq)和TBTU(201.91mg,628.85umol,1.50eq)。所得混合物在25℃下搅拌2小时。LC-MS和TLC(DCM:MeOH＝5:1)检测至反应完成。反应液用用EA(20mL)稀释并用饱和NH4Cl(30mL*3)溶液，食盐水(30mL*3)洗涤，Na2SO4干燥，过滤后减压浓缩得到粗品。将粗品用prep-HPLC(column:Venusil XBP C8150*25*10um；mobile phase:[water(0.225％FA)-ACN]；B％:35％-65％,11min and column:Luna C18 150*255u；mobile phase:[water(0.225％FA)-ACN]；B％:34％-64％,10min)纯化得到化合物2.SFC(100％ee).1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.75(dd,J＝13.87,9.22Hz,1H)2.94(dd,J＝13.68,4.89Hz,1H)3.38(br d,J＝8.03Hz,2H)4.06-4.17(m,1H)4.94(br s,1H)7.01(s,1H)7.10-7.18(m,2H)7.22-7.26(m,3H)8.00(br d,J＝8.78Hz,1H)8.42(br s,1H)11.80(br s,1H)。
实施例3
化合物3-c的合成
将3-a(10.00g,46.89mmol,1.00eq),3-b(5.97g,49.23mmol,1.05eq)和CuSO4(18.71g,117.23mmol，17.99mL,2.50eq)溶于DCM(100.00mL)中并在30℃下搅拌12小时。TLC(PE:EtOAc＝3:1)和LC-MS检测至反应完全。将混合物过滤,所得滤液用Na2SO4干燥，减压浓缩得到黄色油状液体3-c。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm 1.11-1.20(m,9H)1.44(brd,J＝4.39Hz,9H)1.49-1.58(m,2H)1.87(br d,J＝11.17Hz,2H)2.55-2.67(m,1H)2.85(brd,J＝11.29Hz,2H)4.04(br s,2H)5.21-5.34(m,1H)7.86-8.15(m,1H)。
化合物3-d的合成
将3-c(15.00g,43.81mmol,1.00eq)溶于DCM(200.00mL)中。在0℃和N2氛围下缓慢滴加MeMgBr(3M,29.20mL,2.00eq)，将所得混合物在30℃下搅拌3小时。TLC(PE:EtOAc＝3:1)和LC-MS检测至反应完全。将反应液倒入饱和NH4Cl(100mL)溶液并用DCM(3*150mL)萃取，将有机相合并后用饱和食盐水(150mL*2)洗涤，Na2SO4干燥，减压浓缩后通过柱层析(silicagel,100～200mesh,PE:EtOAc＝20:1to 1:1)得到黄色油状液体3-d。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm 1.20(s,9H)1.24(s,2H)1.26(s,2H)1.44(s,9H)1.59(br d,J＝12.80Hz,1H)1.74(br d,J＝13.05Hz,1H)2.63(br s,2H)2.85(d,J＝7.65Hz,1H)3.16-3.23(m,1H)3.76-4.31(m,3H)。
化合物3-e的合成
在0℃下，将3-d(6.50g,19.00mmol,1.00eq)溶于MeOH(70.00mL)中并缓慢滴加HCl/dioxane(4M,7.00mL,1.47eq)，所得混合溶液在30℃下搅拌1小时。LC-MS检测至反应完成，待反应完成加入饱和NaHCO3(150mL)后用DCM(150mL*3)萃取，合并有机相并用饱和食盐水(150mL*2)洗涤,Na2SO4干燥后浓缩得到黄色油状液体3-e。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm 1.06(d,J＝6.53Hz,3H)1.11-1.20(m,2H)1.24-1.32(m,1H)1.37-1.53(m,9H)1.56-1.67(m,1H)1.72(dt,J＝12.64,2.34Hz,1H)1.96(br s,2H)2.46-2.81(m,3H)3.94-4.42(m,2H)。
化合物3-f的合成
将1-c(440.00mg,2.18mmol,1.00eq)溶于DCM(10mL)后在0℃加入(COCl)2(553.98mg,4.36mmol,382.05uL,2.00eq)和DMF(1.59mg,21.82umol,1.68uL,0.01eq)，所得混合物在20℃下搅拌1小时，将反应液浓缩后溶于DCM(5mL)中并在0℃加入3-e(500.00mg,2.19mmol,1.00eq)和DIPEA(1.41g,10.91mmol,1.91mL,5.00eq)的DCM(5mL)溶液。将所得反应液在20℃下搅拌0.5小时。TLC(PE:EtOAc＝1:1)和LC-MS检测至反应完成。反应完成后用EA(50mL)稀释并用饱和食盐水(50mL*2)洗涤，有机相用Na2SO4干燥后减压浓缩得到粗品，粗品通过柱层析(silica gel,100～200mesh,PE:EtOAc＝10:1to 1:1)得到黄色固体3-f。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.03-1.06(m,1H)1.12(d,J＝6.78Hz,3H)1.20(s,1H)1.38(s,9H)1.50-1.59(m,1H)1.67(br d,J＝12.67Hz,2H)1.99(s,1H)2.54-2.76(m,2H)3.79-3.91(m,1H)3.95-4.08(m,2H)7.05(d,J＝2.01Hz,1H)7.14-7.20(m,1H)7.92(d,J＝8.78Hz,1H)11.81(s,1H)。
化合物3-g的合成
在0℃下，将3-f(350.00mg,750.15umol,1.00eq)溶于DCM(5.00mL)后缓慢滴加HCl/dioxane(4M,4.41mL,23.54eq)，所得混合物在20℃下搅拌1小时。LC-MS检测至反应完成。将反应液浓缩得到黄色固体化合物3-g。
化合物3的合成
将3-g(300.00mg,861.35umol,1.00eq,HCl)和Py(272.53mg,3.45mmol,278.09uL,4.00eq)溶于DMF(10.00mL)中后在0℃下滴加Ac2O(175.87mg,1.72mmol,161.35uL,2.00eq)。所得混合物在20℃下搅拌2小时。LC-MS检测反应至完成。将反应液用水(50mL)稀释后用EtOAc(50mL*2)萃取，合并有机相用Na2SO4干燥后减压浓缩。所得粗品用prep-HPLC(column:Luna C18 150*25 5u；mobile phase:[water(0.225％FA)-ACN]；B％:40％-61％,10min)纯化得到化合物3。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 0.95-1.06(m,1H)1.07-1.17(m,4H)1.59-1.76(m,3H)1.97(d,J＝2.64Hz,3H)2.35-2.47(m,1H)2.82-3.05(m,1H)3.41(brs,9H)3.73-3.98(m,2H)4.40(br d,J＝12.42Hz,1H)6.98-7.08(m,1H)7.15(s,1H)7.91(brt,J＝8.22Hz,1H)8.28(s,1H)11.82(br s,1H)。
实施例4
化合物4-b的合成
在25℃下将4-a(1.00g,5.74mmol,781.25uL,1.00eq)溶于EtOH(8.00mL)和水(4.00mL)中后加入盐酸羟胺(598.31mg,8.61mmol,1.50eq)和乙酸钠(941.70mg,11.48mmol,2.00eq).所得混合物在80℃下搅拌15小时。通过TLC(PE/EA＝10/1)检测至反应完成。将反应液浓缩除去乙醇。所得粗品加入水(50mL)并在0℃下搅拌30分钟，过滤后浓缩得到白色固体化合物4-b。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.22-7.75(m,5H)12.73(br s,1H)。
化合物4-c的合成
将4-b(870.00mg,4.59mmol,1.00eq)溶于EtOH(20.00mL)和HOAc(2.00mL)中后在氮气氛围下加入10％Pd/C(87.00mg)。所得悬浊液用H2置换三次.并在H2(50Psi)存在下在25℃搅拌15小时。TLC(PE/EA＝3/1)检测反应至完成。将反应液过滤后减压浓缩，所得粗品加入1N NaOH(10mL)并用EA(25mL*2)萃取。合并有机相并用饱和食盐水(50mL*2)洗涤,Na2SO4干燥，过滤浓缩后得到无色油状液体4-c。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 4.48(q,J＝7.91Hz,1H)7.26-7.62(m,5H)。
化合物4的合成
在25℃下将4-c(324.99mg,691.74umol,1.10eq)和1-c(150.00mg,628.85umol,1.00eq)溶于DMF(10.00mL)中后加入TBTU(302.87mg,943.27umol,1.50eq)和DIPEA(243.82mg,1.89mmol,329.48uL，3.00eq)。所得混合物在25℃下搅拌12小时。通过TLC(PE/EA＝3/1)和LC-MS检测至反应完成。向反应液中加入水(20mL)并用EA(50mL*3)萃取。合并有机相并用饱和食盐水(30mL*2)洗涤，Na2SO4干燥，过滤浓缩后得到粗品。粗品通过prep-HPL(Column:Boston Green ODS 150*30 5u；mobile phase:[water(0.225％FA)-ACN]；B％:55％-82％,10min).纯化得到化合物4。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 6.02(quin,J＝8.91Hz,1H)7.20(s,1H)7.36(s,1H)7.39-7.50(m,3H)7.68(br d,J＝6.40Hz,2H)8.43(s,1H)9.17(br d,J＝9.29Hz,1H)11.60-12.49(m,1H)。
实施例5
化合物5-c的合成
在0℃下将金属钠(1.44g,62.81mmol,1.49mL,4.00eq)缓慢加入EtOH(150.00mL)中并缓慢滴加5-b(8.11g,62.81mmol,8.82mL,4.00eq)和5-a(3.00g,15.70mmol,1.00eq)，所得混合物在0℃下搅拌1小时随后在25℃下搅拌1小时。TLC(PE:EtOAc＝10:1)和LC-MS检测至反应结束。将反应液用水(150mL)稀释后用EtOAc(3*150mL)萃取，有机相用Na2SO4干燥减压浓缩得到粗品。粗品产物通过柱层析(silica gel,100～200mesh,PE:EtOAc＝20:1to10:1)得到亮黄色固体5-c。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm 1.43(t,J＝7.09Hz,3H)4.41(q,J＝7.15Hz,2H)7.01-7.07(m,1H)7.31(d,J＝3.51Hz,1H)8.20-8.47(m,1H)。
化合物5-d的合成
将5-c(2.50g,8.19mmol,1.00eq)溶于二甲苯(30.00mL)并在145℃搅拌0.5小时。LC-MS检测至反应结束。将反应物减压浓缩得到白色固体产物5-d。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.31(t,J＝7.09Hz,3H)4.30(q,J＝7.15Hz,2H)6.88(d,J＝2.01Hz,1H)7.11-7.47(m,1H)12.49(br s,1H)。
化合物5-e的合成
将5-d(1.70g,6.20mmol,1.00eq)和NaOH(992.23mg,24.80mmol,4.00eq)溶于水(3.00mL)，MeOH(9.00mL)和THF(3.00mL)中并在60℃下搅拌12小时。TLC(PE:EtOAc＝3:1)和LC-MS检测至反应完成。将所得反应液减压浓缩后加入水(50mL)并用EA(50mL*3)萃取有机杂质。将所得水相用1N HCl调节pH至6后用EA(50mL*3)萃取，合并有机相用水(50mL*2)和饱和食盐水(50mL*2)洗涤，Na2SO4干燥后减压浓缩得到亮黄色固5-e。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 6.83(d,J＝2.13Hz,1H)7.09-7.43(m,1H)11.90-12.47(m,1H)12.78(br s,1H)。
化合物5的合成
将5-e(1.30g,5.28mmol,1.00eq)，1-d(768.21mg,6.34mmol,817.24uL,1.20eq)，TBTU(2.54g,7.92mmol,1.50eq)和DIPEA(2.05g,15.85mmol,2.77mL,3.00eq)溶于DMF(20.00mL)并在25℃下搅拌1小时。TLC(PE:EtOAc＝3:1)和LC-MS检测反应至反应完成。将反应液用EtOAc(100mL)稀释后用饱和食盐水(100mL*2)洗涤，所得有机相用Na2SO4干燥后减压浓缩得到粗品。粗品产物通过柱层析(silica gel,100～200mesh,PE:EtOAc＝20:1to 5:1)和prep-HPLC(column:Luna C18 150*25 5u；mobile phase:[water(0.225％FA)-ACN]；B％:60％-90％,10min)纯化得到化合物5。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm 1.19(t,J＝7.15Hz,1H)1.56(d,J＝6.90Hz,3H)4.05(q,J＝7.15Hz,1H)5.28(quin,J＝7.12Hz,1H)6.20(br d,J＝7.78Hz,1H)6.64(d,J＝2.01Hz,1H)6.73(s,1H)7.27-7.35(m,5H)10.77(brs,1H)。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm 1.65(s,3H)5.31-5.40(m,1H)6.22(br d,J＝7.91Hz,1H)6.73(s,1H)6.84(s,1H)7.32-7.45(m,5H)10.02(br s,1H)。
实施例6
将5-e(600.00mg,2.44mmol,1.00eq)，3-e(668.07mg,2.93mmol,1.20eq)，EDCI(701.11mg,3.66mmol,1.50eq)，HOBt(494.18mg,3.66mmol,1.50eq)和DIPEA(945.35mg,7.32mmol,1.28mL,3.00eq)溶于DMF(15.00mL)中并在25℃下搅拌1小时。TLC(PE:EtOAc＝2:1)和LC-MS检测至反应完全。将反应液用EA(200mL)稀释并用饱和食盐水(200mL*2)洗涤,所得有机相用Na2SO4干燥并减压浓缩。所得粗品用柱层析(column:PhenomenexSynergiC18150*25*10um；mobile phase:[water(0.225％FA)-ACN]；B％:45％-75％,10min)，得到粗品后进一步纯化得到化合物6。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 0.98-1.08(m,2H)1.12(d,J＝6.65Hz,3H)1.38(s,9H)1.51-1.59(m,1H)1.67(br d,J＝12.80Hz,2H)2.59-2.69(m,2H)3.82-3.89(m,1H)3.96(br d,J＝9.41Hz,2H)7.08(s,1H)7.17(s,1H)8.02(d,J＝8.78Hz,1H)8.42(br s,1H)11.06-12.91(m,1H)。
实施例7
将3-g(100.00mg,234.82umol,1.00eq,TFA)和吡啶(74.30mg,939.30umol,75.81uL,4.00eq)溶于DMF(10.00mL)中并在0℃下滴加氯甲酸甲酯(44.38mg,469.65umol,36.38uL,2.00eq)，所得混合溶液在25℃下搅拌2小时。LC-MS检测反应至反应完全。反应液用水(50mL)稀释后用EtOAc(50mL*2)萃取，合并有机相用Na2SO4干燥后减压浓缩得到粗品产物。粗品通过prep-HPLC(column:Phenomenex Synergi C18 150*25*10um；mobile phase:[water(0.225％FA)-ACN]；B％:36％-66％,10min)纯化得到化合物7。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.03-1.14(m,5H)1.54-1.62(m,1H)1.69(br d,J＝12.72Hz,2H)2.68(br d,J＝1.71Hz,2H)3.57(s,3H)3.85(dq,J＝14.90,7.22Hz,1H)3.98(br s,2H)7.04(s,1H)7.15(s,1H)7.96(d,J＝8.68Hz,1H)8.40(br s,1H)11.58-12.26(m,1H)。
实施例8
向2-氯-N-[(1R)-1-苯乙基]-6H-噻吩[2,3-b]吡咯-5-甲酸(50.00mg,139.29umol,1.00eq)的甲苯(5mL)溶液中加入劳森试剂(30.99mg,76.61umol,0.55eq)，该混合液加入到110℃搅拌12小时。LC-MS显示反应完成。将反应液减压浓缩，再加入水(50mL)和乙酸乙酯(50mL*2)萃取，合并有机相，并用无水Na2SO4干燥，然后浓缩有机相。残留物通过pre-HPLC制备分离纯化(column:Boston Green ODS 150*305u；mobile phase:[water(0.225％FA)-ACN]；B％:57％-87％,10min).得到化合物8。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm1.58(br d,J＝6.90Hz,3H)5.89(br s,1H)7.18(s,1H)7.15-7.44(m,1H)7.16-7.44(m,1H)7.32(br s,1H)7.35(br d,J＝7.28Hz,1H)7.39(br s,1H)7.41(br s,1H)8.08-8.64(m,1H)10.12(br s,1H)11.60(br s,1H)。
实施例9
向化合物1-c(100.00mg,422.75umol,1.00eq)的N,N-二甲基甲酰胺溶液(5.00mL)中加入化合物9-a(70.60mg,507.31umol,1.20eq)，二异丙基乙胺(163.91mg,1.27mmol,221.50uL,3.00eq)，EDCI(121.56mg,634.13umol,1.50eq)和HOBt(85.68mg,634.13umol,1.50eq)，于25℃下反应1小时后，反应液用30mLEA稀释，用饱和氯化铵溶液洗三次，每次30mL，用饱和食盐水洗三次，每次30mL，用无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩，然后通pre-HPLC得到化合物9。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.46(d,J＝7.03Hz,3H)5.15(t,J＝7.40Hz,1H)7.03-7.24(m,4H)7.41(dd,J＝8.28,5.65Hz,2H)8.57(brd,J＝8.16Hz,1H)11.90(brs,1H)。
实施例10
化合物10-a的制备
往三口瓶中加入化合物3-c(4.00g,11.68mmol)，无水四氢呋喃(40.00mL)，用N2置换反应体系中的空气，将反应体系降温至-50℃，加入TMSCF3(3.32g,23.36mmol)和TBAT(6.93g,12.85mmol)，然后在0℃下反应1小时，反应液加入饱和NH4Cl(50mL)淬灭,EA萃取，合并有机相并用无水Na2SO4干燥，减压除去溶剂，柱层析纯化(PE：EA＝3:1)，得到黄色液体10-a。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm 1.25(s,9H)1.46(s,9H)1.67-2.04(m,5H)2.69(br d,J＝12.17Hz,2H)3.39-3.69(m,2H)4.16-4.43(m,2H)。
化合物10-b的制备
在室温下加入化合物10-a(2.20g,5.69mmol)，TBDMS-OTf(1.65g,6.26mmol,1.44mL)，DCM(20.00mL)，室温搅拌1小时，反应液浓缩得到黄色液体10-b。
化合物10-c的制备
在室温下加入化合物10-b(1.60g,5.59mmol)，FmocOSu(2.26g,6.71mmol)，氢氧化钠(245.84mg,6.15mmol)，无水二氧六环(16.00mL)，蒸馏水(4.00mL)，室温搅拌2小时，反应液浓缩，加入蒸馏水(40mL)稀释，EA萃取，合并有机相并用无水Na2SO4干燥，减压除去溶剂，柱层析纯化(PE：EA＝1:1)，得到黄色液体10-c。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm 1.25(br s,9H)1.56-2.03(m,5H)2.76(br s,2H)3.34-3.78(m,2H)4.18-4.37(m,3H)4.40-4.47(m,2H)7.33(t,J＝7.09Hz,2H)7.38-7.44(m,2H)7.58(d,J＝7.28Hz,2H)7.76-7.80(m,2H)。
化合物10-d的制备
在室温下加入化合物10-c(3.10g,6.10mmol)，无水甲醇(30.00mL)，盐酸二氧六环(4M,10.00mL)，室温搅拌1小时，反应液浓缩，加入EA(20mL)和石油醚(20mL)，搅拌，过滤，滤饼浓缩除去溶剂，得到白色固体10-d。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.19-1.52(m,2H)1.61-1.86(m,2H)1.99-2.25(m,1H)2.61-2.96(m,2H)3.80-4.10(m,2H)4.10-4.45(m,4H)4.12-4.45(m,1H)7.25-7.50(m,4H)7.63(d,J＝7.40Hz,2H)7.90(d,J＝7.53Hz,2H)9.16(brd,J＝1.13Hz,3H)。
化合物10-e的制备
在室温下往圆底烧瓶中加入化合物10-d(200.00mg,991.92umol)，无水DCM(3mL)，草酰氯(209.84mg,1.65mmol,144.72uL)，无水N，N-二甲基甲酰胺(604.16ug,8.27umol,0.64uL)，室温搅拌1小时，反应液浓缩，加入无水DCM(3mL)稀释，在0℃下缓慢滴加到盛有化合物7(370.00mg,839.21umol)，无水DCM(4mL)，N，N-二异丙基乙基胺(534.15mg,4.13mmol,721.82uL)的反应体系中，在室温下反应0.5小时，反应液加入无水DCM(20mL)稀释，饱和食盐水60mL洗涤三次,无水Na2SO4干燥，减压除去溶剂，柱层析纯化(PE：EA＝2:1)，得到黄色固体10-e。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 0.89-1.22(m,2H)1.51-1.73(m,2H)1.94-2.14(m,1H)2.61-2.82(m,2H)3.75-4.02(m,2H)4.24-4.50(m,3H)4.53-4.79(m,1H)7.20-7.39(m,6H)7.61(br d,J＝7.15Hz,2H)7.86(dd,J＝6.84,5.83Hz,2H)8.47(br d,J＝9.16Hz,1H)12.06(d,J＝1.13Hz,1H)。
化合物10-f的合成
在室温下加入化合物10-e(130.00mg,221.07umol)，无水四氢呋喃(5.00mL)，二乙胺(710.00mg,9.71mmol,1.00mL)，室温搅拌过夜，反应液浓缩，得到黄色粗品10-f，直接用于下一步反应。
化合物10的合成
在室温下加入化合物10-f(80.00mg,218.70umol)，吡啶(69.20mg,874.79umol,70.61uL)，无水N，N-二甲基甲酰胺(5.00mL)，然后在0℃下缓慢滴加乙酸酐(44.65mg,437.40umol,40.97uL)，搅拌1小时，反应液加入蒸馏水(20mL)稀释，EA萃取，合并有机相，用饱和食盐水(60mL)洗涤三次，无水Na2SO4干燥，减压除去溶剂，反相色谱柱(column:Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4um；mobile phase:[water(0.225％FA)-ACN]；B％:40％-70％,10.5min)进行纯化，得到化合物10。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm1.11-1.42(m,2H)1.66-1.81(m,2H)1.97(s,3H)2.05-2.21(m,1H)2.53(d,J＝1.88Hz,1H)2.90-3.11(m,1H)3.77-3.91(m,1H)4.41(br d,J＝8.28Hz,1H)4.67(dq,J＝17.74,8.77Hz,1H)7.07-7.34(m,2H)8.32-8.65(m,1H)11.82-12.42(m,1H)。
实施例11
在室温下加入化合物3-g(150.00mg,481.03umol)，化合物11-a(62.12mg,721.55umol,56.99uL)，EDCI(138.32mg,721.55umol)，HOBt(97.50mg,721.55umol),N,N-二异丙基乙基胺(186.51mg,1.44mmol,252.03uL)，无水N，N-二甲基甲酰胺(5.00mL)，室温搅拌2小时，反应液加入EA(30mL)稀释,饱和氯化铵和饱和食盐水各60mL洗涤三次，无水Na2SO4干燥，减压除去溶剂，反相色谱柱(condition:Instrument:GX-B,Column:Luna C18150*25*5um,Condition:water(0.225％FA)-ACN,Begin B:41,End B:71,Gradient Time(min):10,100％B Hold Time(min):2,FlowRate(ml/min):28)进行纯化，得到化合物11。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 0.67(br d,J＝7.91Hz,4H)0.98-1.10(m,1H)1.13(d,J＝6.65Hz,4H)1.63-1.81(m,3H)1.91-1.98(m,1H)2.94-3.08(m,1H)3.68-4.00(m,2H)4.24-4.42(m,2H)7.06(s,1H)7.16(s,1H)7.90-7.99(m,1H)11.77-11.89(m,1H)。
实施例12
化合物12-b的合成
将化合物12-a(420.00mg,927.68umol,1.00eq)溶于MeOH(9.00mL)和水(3.00mL)后在25℃加入NaOH(148.43mg,3.71mmol,4.00eq)。所得混合物在60℃搅拌3小时。TLC LCMS检测反应至反应完成。将反应液浓缩后用水(20mL)稀释并用EA(30mL*3)萃取除去有机杂质。将水相加入HCl(1M,10mL)调节pH到3，随后用EA(30mL*3)萃取。合并的有机相用饱和食盐水(30mL*3)洗涤，Na2SO4干燥，过滤浓缩得到粗品12-b。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm0.08-0.04(m,9H)0.84-0.91(m,2H)3.44-3.54(m,2H)5.78-5.83(m,2H)7.06-7.09(m,1H)7.30(s,1H)12.64-12.93(m,1H))。
化合物12-c的合成
将化合物12-b(300.00mg,668.25umol,1.00eq)溶于DMF(5.00mL)，在25℃下加入HATU(381.13mg,1.00mmol,1.50eq),DIPEA(259.09mg,2.00mmol,350.13uL,3.00eq)和3-e，所得混合物在25℃搅拌2小时。LC和LCMS检测反应至反应完成。反应液用EA(30mL)稀释,饱和NH4Cl(30mL*3)和食盐水(30mL*3)洗涤，Na2SO4干燥，过滤浓缩得到粗品。将粗品用pre-TLC(petroleum ether:ethyl acetate＝3:1)纯化得到化合物12-c。
化合物12-d的合成
将化合物12-c(360.00mg,573.33umol,1.00eq)溶于DMF(10.00mL)，在25℃下加入乙二胺(1.03g,17.20mmol,1.15mL,30.00eq)和TBAF(1M,5.73mL,10.00eq).所得混合物在80℃搅拌2小时。TLC和LCMS检测反应至反应结束。将反应液用水(20mL)稀释后用EA(30mL*3)萃取。合并有机相用饱和食盐水(30mL*2)洗涤，Na2SO4干燥，过滤干燥后浓缩得到粗品。粗品通过制备TLC(petroleum ether:ethyl acetate＝2:1)纯化得到化合物12-d。
化合物12-e的合成
在25℃下，将化合物12-d(190.00mg,371.05umol,1.00eq)，氰化锌(87.14mg,742.10umol,47.11uL,2.00eq)，DPPF(41.14mg,74.21umol,0.20eq)，Pd2(dba)3(33.98mg,37.10umol,0.10eq)，Zn(2.43mg,37.10umol,0.10eq)和DIEA(95.91mg,742.10umol,129.61uL,2.00eq)溶于DMF(5.00mL)用氮气置换三次，所得混合物在氮气氛围和100℃下搅拌8小时。TLC和LCMS检测反应至反应完成。反应液用EA(30mL)稀释,饱和NH4Cl(30mL*3)和食盐水(30mL*3)洗涤，Na2SO4干燥，过滤浓缩后用pre-TLC(petroleum ether:ethylacetate＝2:1)纯化得到化合物12-e。
化合物12-f的合成
在25℃下，将化合物12-e(90.00mg,176.80umol,1.00eq)溶于MeOH(5.00mL)后加入HCl/MeOH(4M,442.00uL,10.00eq)。所得混合物在相同温度下搅拌2小时。TLC(petroleumether:ethyl acetate＝1:1)和LCMS检测反应至反应完成。将反应液浓缩得到粗品产物12-f。
化合物12的合成
在25℃下，将化合物12-f(60.00mg,198.42umol,1.00eq)溶于DMF(5.00mL)后加入吡啶(78.47mg,992.10umol,80.08uL,5.00eq)。随后在0℃下，将乙酸酐(40.51mg,396.84umol,2.00eq)滴加至反应液中。所得混合物在25℃下搅拌8小时。TLC(petroleumether:ethyl acetate＝1:1)和LCMS检测至反应完成。向反应液中加入水(20mL)后用EA(30mL*3)萃取。合并有机相用饱和食盐水(30mL*2)洗涤，Na2SO4干燥，过滤浓缩后用pre-HPLC(condition:Instrument:GX-B,Column:Phenomenex Synergi C18 150*25*10um,Condition:water(0.225％FA)-ACN,Begin B:17,End B:47,Gradient Time(min):10,100％B Hold Time(min):2,FlowRate(ml/min):28)纯化得到化合物12。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 0.98-1.20(m,5H)1.64-1.74(m,2H)1.97(d,J＝3.26Hz,3H)2.35-2.44(m,1H)2.53(d,J＝1.88Hz,2H)2.89-3.01(m,1H)3.78-3.93(m,2H)4.36-4.45(m,1H)7.22(s,1H)8.00(s,1H)8.12(br t,J＝8.34Hz,1H).
实施例13
化合物13-a的合成
在20℃下，往化合物5-d(0.997g,3.64mmol,1.00eq)的AcOH(10mL)和CHCl3(10mL)的溶液中加入NCS(510mg,3.82mmol,1.05eq)，所得混合溶液在100℃搅拌12小时。TLC(PE:EtOAc＝10:1)监测反应至反应结束。减压蒸馏除去CHCl3，所得残余物用4N NaOH调成碱性并用EtOAc(50mL*2)萃取。混合所得有机相用饱和NaHCO3(50mL*2)溶液洗涤，Na2SO4干燥后通过柱层析PE:EtOAc＝20:1to 1:1)得到化合物13-b(1.1g,3.39mmol,93.32％yield)。
化合物13-b的合成
将化合物13-a(1.1g,3.39mmol,1.00eq)和NaOH(552.24mg,13.81mmol,4.07eq)依次加入H2O(3.00mL)，MeOH(9.00mL)和THF(3.00mL)中，所得混合溶液在80℃下搅拌12小时.TLC(PE:EtOAc＝3:1)监测反应至反应结束.将反应液浓缩后加入water(50mL)，用EA(50mL*3)萃取有机杂质.所得水相用1N HCl调节PH到6后用EA(50mL*3)，所得有机相用水(50mL*2)和饱和食盐水(50mL*2)洗涤,Na2SO4干燥得到粗品产物13-b。
化合物13的合成
将13-b(0.4g,1.41mmol,1.00eq)，3-e(388mg,1.70mmol,1.20eq)，EDCI(406.87mg,2.12mmol,1.50eq)，HOBt(286.78mg,2.12mmol,1.50eq)和DIPEA(548.60mg,4.24mmol,739.35uL,3.00eq)依次加入DMF(10mL)后在20℃搅拌1小时。TLC(PE:EtOAc＝2:1)监测至反应结束.反应液用EA(200mL)稀释并用饱和食盐水洗涤(200mL*2),有机相用Na2SO4干燥后减压浓缩。所得粗品通过prep-HPLC(column:Phenomenex Synergi C18 150*25*10um；mobile phase:[water(0.225％FA)-ACN]；B％:53％-83％,10min)纯化得到化合物13。1H NMR(400MHz,CHLOROFORM-d)δppm 1.26(d,J＝6.90Hz,3H)1.47(s,9H)1.59(s,4H)1.77(br d,J＝13.30Hz,1H)2.69(br s,2H)4.05-4.34(m,3H)5.78(br d,J＝9.03Hz,1H)6.66-6.71(m,1H)10.25(br s,1H)。
实验例1：化合物对Hela细胞IDO1活性抑制的评价
实验目的：
检测化合物对Hela细胞IDO1活性的抑制效应。
实验材料：
RPMI 1640(无酚红)培养基(Invitrogen Cat.No.11835030),胎牛血清(Invitrogen Cat.No.10099141),青链霉素(Invitrogen Gibco Cat.No.15140-122),重组人源干扰素γ(R&D system,Cat.No.285-IF-100).5％(w/v)三氯乙酸(Alfa AesarCat.No.A11156),DMSO(Sigma,Cat.No.D2650),96孔板_化合物稀释板(Axygen,Cat.No.WIPP02280),96孔板_测试板(Greiner,Cat.No.655090)
实验方法：
化合物最终测试浓度：
受试化合物最终测试浓度从5M到0.76nM，3倍梯度稀释，9个浓度，两复孔。
细胞学检测：
将Hela细胞以每孔40,000个细胞的数目铺于96孔细胞培养板中，用含10％胎牛血清的RPMI 1640培养5-6小时，加入稀释好的待测化合物和终浓度为100ng/mL重组人源干扰素γ激活IDO1表达。细胞于富含5％二氧化碳的37℃细胞培养箱中培养20小时后，用5％三氯乙酸终止反应，并于50℃孵育30分钟。细胞培养液经沉淀后，上清液送LC/MS检测其中的犬尿氨酸含量。根据XLfit5软件进行数据分析及拟图。实验结果：如表1所示：
表1本发明化合物体外筛选试验结果
实施例编号 IC50(nM)
1 572.4
2 1786.9
3 272.4
4 310.2
5 479.9
6 178.2
7 930.5
8 433.5
9 537.2
10 149.0
11 1367.2
12 1580.5
结论：本发明的化合物对Hela细胞内的IDO蛋白酶活性具有明显的抑制作用。
实验例2：CYP抑制测试
准备待测化合物、标准抑制剂和混合底物工作溶液(100×最终浓度)；将冷冻于-80℃冰箱的微粒体拿出解冻。添加2μL的待测化合物和标准抑制剂溶液到相应孔位。添加2μL相应的溶剂到NIC孔位和Blank孔位。添加20μL混合底物溶液到相应孔位，Blank孔位除外。添加20μL PB到Blank孔位。准备人肝微粒体溶液，使用后标记日期立刻放回冰箱。添加158μL人肝微粒体溶液到所有孔位.样品板放入37℃水浴预孵育10分钟。准备NADPH(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸)溶液。添加20μL NADPH溶液到所有空位。样品板摇匀并放入37℃水浴孵育10分钟。在相应时间点，加入400μL冷的终止液(200ng/mL甲苯磺丁脲的乙腈溶液)来终止反应。样品板混合均匀后，4,000rpm离心20分钟，沉淀蛋白质。取200μL上清加入到100μL水中，摇匀后LC/MS/MS检测。
实验结果：见表2。
表2本发明化合物CYP抑制结果
结论：本发明的化合物对CYP的抑制较小。

Claims (22)

1.式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐，
其中，
环A选自：5～6元杂芳基、苯基、C5～6环烷基或5～6元杂环烷基；
m选自：1或2；
X选自：O、S；
L选自：单键、-(C＝O)-；
R1选自任选被1、2或3个R取代的：C1-3烷基；
R2分别独立地选自H、卤素、OH、NH2、CN，或者选自任选被1、2或3个R取代的：C1-3烷基；
R3选自H、卤素、OH、NH2，或者选自任选被1、2或3个R取代的：C1-6烷基、C1-6杂烷基、C3-6环烷基、苯基、5～6元杂芳基；
R4选自：H、卤素；
R选自F、Cl、Br、CN、OH、氨基、羧基，或者选自任选被1、2或3个R’取代的：C1-3烷基、C1-3杂烷基、C3-6环烷基；
R’选自：F、Cl、Br、CN、OH、NH2、CH3、
所述5～6元杂芳基、5～6元杂环烷基、C1-6杂烷基之“杂”分别独立地选自：N、-O-、-S-、-(C＝O)-、-NH-、-(S＝O)-、-S(＝O)2-；
以上任何一种情况下，杂原子或杂原子团的数目分别独立地选自1、2、3或4。
2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，R选自：F、Cl、Br、CN、OH、NH2、CH3、CF3、CHF2、CH2F、
3.根据权利要求1或2所述的化合物物或其药学上可接受的盐，其中，R1选自任选被1、2或3个R取代的：CH3。
4.根据权利要求3所述的化合物物或其药学上可接受的盐，其中，R1选自：CH2OH、CH3、CF3。
5.根据权利要求1或2所述的化合物物或其药学上可接受的盐，其中，R2分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2、CN，或者选自任选被1、2或3个R取代的：CH3。
6.根据权利要求5所述的化合物物或其药学上可接受的盐，其中，R2分别独立地选自：H、Cl、Br、CN。
7.根据权利要求1或2所述的化合物物或其药学上可接受的盐，其中，R3选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH2，或者选自任选被1、2或3个R取代的：CH3、
8.根据权利要求7所述的化合物物或其药学上可接受的盐，其中，R3选自：H、F、CH3、
9.根据权利要求1或2所述的化合物物或其药学上可接受的盐，其中，R4选自H。
10.根据权利要求1或2所述的化合物物或其药学上可接受的盐，其中，环A选自：苯基、5～6元杂环烷基。
11.根据权利要求1或2所述的化合物物或其药学上可接受的盐，其中，环A选自：苯基或哌啶基。
12.根据权利要求11所述的化合物物或其药学上可接受的盐，其中，结构单元选自：
13.根据权利要求12所述的化合物物或其药学上可接受的盐，其中，结构单元选自：
14.根据权利要求13所述的化合物物或其药学上可接受的盐，其中，结构单元选自：
15.根据权利要求14所述的化合物物或其药学上可接受的盐，其中，结构单元选自：
16.根据权利要求1或2所述的化合物物或其药学上可接受的盐，其中，结构单元选自：
17.根据权利要求16所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，结构单元选自：
18.根据权利要求1～17任意一项所述化合物或其药学上可接受的盐，选自：
其中，R1、R2、R3、R4、X、L如权利要求1～17所定义。
19.化合物或其药学上可接受的盐，其中，化合物选自：
20.根据权利要求19所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中，化合物选自：
21.一种药物组合物，其含有治疗有效量的根据权利要求1～20任意一项所述的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。
22.根据权利要求1～20任意一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据权利要求21所述的药物组合物在制备***药物中的应用。
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