CN108866170A - 一种基于pcr-dgge技术的沙门氏菌分型方法 - Google Patents

一种基于pcr-dgge技术的沙门氏菌分型方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108866170A
CN108866170A CN201810767361.7A CN201810767361A CN108866170A CN 108866170 A CN108866170 A CN 108866170A CN 201810767361 A CN201810767361 A CN 201810767361A CN 108866170 A CN108866170 A CN 108866170A
Authority
CN
China
Prior art keywords
dgge
pcr
sample
dna
sequencing
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201810767361.7A
Other languages
English (en)
Inventor
杨向莹
张捷
谢雪钦
张琦慧
石嵩
畅晓晖
陈广全
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Inspection and Quarantine Technology Center Beijing Entry-Exit Inspection and Q
Original Assignee
Inspection and Quarantine Technology Center Beijing Entry-Exit Inspection and Q
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Inspection and Quarantine Technology Center Beijing Entry-Exit Inspection and Q filed Critical Inspection and Quarantine Technology Center Beijing Entry-Exit Inspection and Q
Priority to CN201810767361.7A priority Critical patent/CN108866170A/zh
Publication of CN108866170A publication Critical patent/CN108866170A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及一种基于PCR‑DGGE技术的沙门氏菌分型方法，⑴提取供试样品的DNA，并进行样品编号；⑵以样品基因组DNA为模板，采用引物GC‑rpoB1/rpoB3R扩增样品；⑶PCR产物的变性梯度凝胶电泳分析；⑷DGGE图谱中优势条带的回收与测序；⑸DGGE凝胶条带回收后，筛选阳性克隆测序；⑹采用MEGA5软件，Neighbor‑joining法构建***发育树。PCR‑DGGE技术具有分离快速简便、重复性好等优点，避免了分离纯化和培养所造成的分析上的误差，通过指纹图谱直接再现菌群结构，并且通过序列分析切下的带或者通过独特的探针杂交鉴定其种类，是一种快速高效的病原微生物分型检测方法。

Description

一种基于PCR-DGGE技术的沙门氏菌分型方法
技术领域
本发明属于基因领域，尤其是一种基于PCR-DGGE技术的沙门氏菌分型方法。
背景技术
食品种类繁多,富含丰富的营养物质。它是微生物生长繁殖的天然培养基。因此对食品中复杂的混合微生物群落进行及时监测和准确鉴定变得越来越重要。传统微生物检测方法主要是依赖于富集培养、选择性分离、菌落计数和生化鉴定等方法，检测步骤繁琐、培养时间长、工作量大、检出率及灵敏度不高，容易出现假阴性。而以PCR(polymerase chainreaction)技术为主的一些分子生物学检测技术因具有快速、灵敏的特点，正逐渐取代传统检测方法成为食品安全监督的有力工具。如变性梯度凝胶电泳(denatured gradient gelelectrophoresis,DGGE)技术是根据DNA在不同浓度的变性剂中解链行为的不同而导致电泳迁移率发生变化，从而将片段大小相同但碱基排列不同的DNA片段分开，从而了解微生物的分布情况。它是研究微生物群落组成及亲缘关系的主要分子生物学检测技术之一，是研究微生物群落组成分析的重要技术，DGGE技术不依赖于培养过程，缩短了样品分析时间，能显示环境样品中不可培养微生物的遗传信息。
近年来，食源性病原菌污染食品引起的食源性疾病逐年呈上升趋势，引起了人们的广泛关注。由于食源性致病菌的广泛空间性、时间性复杂因子的存在，一直难以得到及时有效的监控。不仅对食品安全卫生和人民健康构成严重威胁，也对食品工业和国民经济造成很大的影响。因此迫切需要深入了解主要食源性致病菌的生物学特性和致病机理，控制致病菌的危害，切断其感染途径，对食品安全实行全程监测。
近年来，随着分子生物学技术的发展，对食源性致病菌的检测方法不断改进，检测技术日趋完善.目前用于微生物溯源的分型方法包括表型分型和基因分型。如血清型、碳源利用及抗生素抗性等，均可以进行表型分型；利用现代分子生物学方法，如脉冲场凝胶电泳、限制性片段多态性、重复序列分型等方法进行基因分型。然而，这些都需要分离培养的方法来进行分型。由于食源性致病菌有些很难分离培养，很多容易发生变异，需要直接利用分子生物学方法进行分型鉴定，变性梯度凝胶电泳(Denaturing Gradient GelElectrophoresis,DGGE)以特异性基因的差异来表征菌株之间的差异，可以达到不经分离培养致病菌进行检测分型的目的。细菌DNA序列的变化是所有基因分型的依据,所以理论上只要完成对种内多株细菌的全基因组测序就可得到精确分型。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一中具有分离快速简便、重复性好PCR-DGGE技术的沙门氏菌分型方法。
本发明实现目的的技术方案如下：
一种基于PCR-DGGE技术的沙门氏菌分型方法，步骤如下
⑴提取供试样品的DNA，并进行样品编号；
⑵以样品基因组DNA为模板，采用引物GC-rpoB1/rpoB3R扩增样品；
⑶PCR产物的变性梯度凝胶电泳分析；
取10μL PCR的产物进行变形梯度凝胶电泳分析，采用变形梯度为35％～55％、浓度为8％的聚丙烯酰胺凝胶在1×TAE缓冲液中100V 60℃下电泳15小时；然后染色；
⑷DGGE图谱中优势条带的回收与测序
用灭菌的手术刀切下待回收DGGE条带，采用OMEGA公司Poly-Gel DNA ExtractionKit回收目的条带；
⑸DGGE凝胶条带回收后，以rpoB1F/rpoB3R为引物进行PCR扩增。PCR产物纯化后连接到pMD18-T载体上，转化至DH5α感受态细胞中，筛选阳性克隆测序。
⑹采用MEGA5软件，Neighbor-joining法构建***发育树，自展数(bootstrap)为1000，根据测序结果进行比对，鉴定样品分型。
而且，变形梯度凝胶电泳完毕后、采用银染法染色、步骤如下：
⑴固定液(乙醇50mL、冰醋酸2.5mL、定容500mL)固定15min；
⑵Milli-Q纯水清洗、20s和2min各一次；
⑶银染液(硝酸银1g、37％甲醛0.75mL、定容500mL)染色15min；
⑷Milli-Q纯水清洗、20s和2min各一次；
⑸显色液(氢氧化钠7.5g、37％甲醛2.5mL、定容500mL)显色5-7min；
⑹最后用终止液(乙醇50mL、冰醋酸2.5mL、定容500mL)终止反应。
本发明的优点和积极效果是：
变性梯度凝胶电泳(Denaturing Gradient Gel Electrophoresis,DGGE)以特异性基因的差异来表征菌毒株之间的差异，可以达到不经分离培养致病菌进行检测分型的目的。细菌DNA序列的变化是所有基因分型的依据,所以，只要完成对种内多株细菌的全基因组测序就可得到精确分型。
PCR-DGGE技术具有分离快速简便、重复性好等优点，避免了分离纯化和培养所造成的分析上的误差，通过指纹图谱直接再现菌群结构，并且通过序列分析切下的带或者通过独特的探针杂交鉴定其种类，是一种快速高效的病原微生物分型检测方法。
附图说明
图1 GC-PCR检测(M：DL2000)扩增产物大小为250bp左右；
图2 DGGE电泳图；
图3标记差异条带克隆测序；
图4量化分析胶图；
图5依据样品间的相似系数构建的聚类图(UPGMA)；
图6采用MEGA5软件，Neighbor-joining法构建***发育树图。
具体实施方式
下面通过具体的实施方案叙述本发明方法。除非特别说明，本发明中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的范围，本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也属于本发明的保护范围。
一种基于PCR-DGGE技术的沙门氏菌分型方法，步骤如下：
1、材料和样品
由甲方提供5个样品。样品编号为：1,2,3,4,5,M(M为商用marker:DL2000)
表1样本来源信息
1.2 DNA提取
1.2.1挑取纯化后的样本接种于10mLBHI肉汤中，36℃±1℃过夜摇床培养，吸取1.5mL培养液于灭菌eppendorf管中，将培养液离心收集细菌(12000r/min，1min)，用灭菌0.85％生理盐水洗涤两次后离心(12000r/min，1min)将上清液吸取干净。使用DNA提取试剂盒进行提取。
1.2.2向离心管内加入200μL的细胞悬浮液，涡旋混匀，至菌体彻底悬浮。
1.2.3向eppendorf管中加入20μL蛋白酶K溶液，混匀。再向离心管内加入220μL的裂解液，于涡旋混匀仪上震荡15sec，在70℃水浴锅中放置10min。
1.2.4向水浴后的离心管内加入220μL无水乙醇，充分震荡混匀15sec。将离心管内所有液体转移至专用吸附柱中，离心(12000r/min，30sec)，弃掉废液。
1.2.5将吸附柱放入至收集管中，向吸附柱中央滴加500μL去蛋白漂洗液，离心(12000r/min，30sec)，弃掉废液。
1.2.6再向吸附柱内加入600μLPW漂洗液，离心(12000r/min，30sec)，弃掉废液。共漂洗两次。
1.2.7将吸附柱于生物安全柜内放置数分钟，以彻底晾干管内残余液体。将吸附柱重新转移至另一个无菌eppendorf管中，向吸附柱中央悬滴TE洗脱液150μL，于室温放置2-5min后，离心(12000r/min，2min)，将溶液收集到eppendorf管中。-20℃冷冻保存备用。
1.3 PCR扩增
以样品基因组DNA为模板，采用引物GC-rpoB1/rpoB3R扩增样品
表2引物信息
PCR扩增体系(50μL)为：10×PCRbuffer 5μL；dNTP(2.5mM)3.2μL；rTaq(5U/μL)0.4μL；GC-rpoB1(20μM)1μL；rpoB3R(20μM)1μL；模板DNA 50ng；补ddH2O至50μL。
PCR扩增程序为：94℃预变性5min；94℃变性1min，53℃(-0.5℃)30s，72℃延伸1min，10个循环后进入第二个循环程序：94℃变性1min，48℃30s,72℃1min，25个循环后，72℃持续7min。
PCR产物采用OMEGA公司DNAGel Extraction Kit纯化回收。
PCR仪为Biometra公司生产的T-gradient，凝胶成像仪为Bio-Rad公司的Gel-Doc2000凝胶成像***。
1.4 PCR产物的变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析
取10μLPCR的产物进行变形梯度凝胶电泳(DGGE)分析。采用变形梯度为35％～55％、浓度为8％的聚丙烯酰胺凝胶在1×TAE缓冲液中100V 60℃下电泳15小时。
变形梯度凝胶电泳(DGGE)完毕后、采用银染法染色、步骤如下：
a)固定液(乙醇50mL、冰醋酸2.5mL、定容500mL)固定15min
b)Milli-Q纯水清洗、20s和2min各一次
c)银染液(硝酸银1g、37％甲醛0.75mL、定容500mL)染色15min
d)Milli-Q纯水清洗、20s和2min各一次
e)显色液(氢氧化钠7.5g、37％甲醛2.5mL、定容500mL)显色5-7min
最后用终止液(乙醇50mL、冰醋酸2.5mL、定容500mL)终止反应
1.5 DGGE图谱中优势条带的回收与测序
用灭菌的手术刀切下待回收DGGE条带，采用OMEGA公司Poly-Gel DNA ExtractionKit回收目的条带。
以2μL回收产物为模板，rpoB1F/rpoB3R为引物进行PCR扩增。
PCR扩增体系(50μL)为：10×PCRbuffer 5μL；dNTP(2.5mM)3.2μL；rTaq(5U/μL)0.4μL；rpoB1F(20mM)1μL；rpoB3R(20mM)1μL；模板DNA 1μL；补ddH2O至50μL。
PCR扩增程序为：94℃预变性5min；94℃变性1min，53℃(-0.5℃)30s，72℃延伸1min，10个循环后进入第二个循环程序：94℃变性1min，48℃30s,72℃1min，25个循环后，72℃持续7min。
将重新扩增的DNA片段切胶回收、纯化后，连接到Pmd18-T载体上，并转化至DH5α感受态细胞中，筛选阳性克隆，进行序列测定。
2结果与分析
2.1 PCR扩增
以GC-rpoB1/rpoB3为引物扩增，得到目的DNA片段(图1)用于DGGE分析。样本排序为:1-2-3-4-5-M。
2.2 PCR产物的变性梯度凝胶电泳(DGGE)
变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析结果如图2..标记菌带如图3
表3每个样本含有菌带
样本编号 含有菌带
1 S2,S4
2 S1,S5
3 S1,S4
4 S1,S3
5 S1,S4
根据实验胶图,用Quantity One软件生成数字量化图,以样本1为参照,设置100％,进行排序.同一个水平线,视为菌带为一致,随机选择一个菌带进行回收测序.
表4戴斯系数比较PCR-DGGE图谱的相似性(％)
聚类是依据戴斯相似系数UPGMA形成，以说明样本的关系,分析得出,样本3和样本5含有的菌的种类最为相似，1号样本与其他样本菌群差的比较多。
2.3主要电泳条带的序列测定
DGGE凝胶条带回收后，以rpoB1F/rpoB3R为引物进行PCR扩增。PCR产物纯化后连接到pMD18-T载体上，转化至DH5α感受态细胞中，筛选阳性克隆测序。
测序结果与GenBank中的序列进行比对，得到条带所代表的细菌类型。每个回收条带选取3个克隆子进行了序列测定，如下表。
表5序列比对分析结果
采用MEGA5软件，Neighbor-joining法构建***发育树，自展数(bootstrap)为1000，***发育树如图6。
序列表
<110> 北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心
<120> 一种基于PCR-DGGE技术的沙门氏菌分型方法
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 58
<212> DNA
<213> 引物GC-rpoB1(Unknown)
<400> 1
cgcccgccgc gcgcggcggg cggggcgggg gcacgggggg aacatcggtt tgatcaac 58
<210> 2
<211> 18
<212> DNA
<213> 引物rpoB1F(Unknown)
<400> 2
aacatcggtt tgatcaac 18
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 引物rpoB3R(Unknown)
<400> 3
cgttgcatgt tggtacccat 20

Claims (2)

1.一种基于PCR-DGGE技术的沙门氏菌分型方法，其特征在于：步骤如下
⑴提取供试样品的DNA，并进行样品编号；
⑵以样品基因组DNA为模板，采用引物GC-rpoB1/rpoB3R扩增样品；
⑶PCR产物的变性梯度凝胶电泳分析；
取10μL PCR的产物进行变形梯度凝胶电泳分析，采用变形梯度为35％～55％、浓度为8％的聚丙烯酰胺凝胶在1×TAE缓冲液中100V 60℃下电泳15小时；然后染色；
⑷DGGE图谱中优势条带的回收与测序
用灭菌的手术刀切下待回收DGGE条带，采用OMEGA公司Poly-Gel DNA Extraction Kit回收目的条带；
⑸DGGE凝胶条带回收后，以rpoB1F/rpoB3R为引物进行PCR扩增。PCR产物纯化后连接到pMD18-T载体上，转化至DH5α感受态细胞中，筛选阳性克隆测序。
⑹采用MEGA5软件，Neighbor-joining法构建***发育树，自展数(bootstrap)为1000，根据测序结果进行比对，鉴定样品分型。
2.根据权利要求1所述的基于PCR-DGGE技术的沙门氏菌分型方法，其特征在于：变形梯度凝胶电泳完毕后、采用银染法染色、步骤如下：
⑴固定液(乙醇50mL、冰醋酸2.5mL、定容500mL)固定15min；
⑵Milli-Q纯水清洗、20s和2min各一次；
⑶银染液(硝酸银1g、37％甲醛0.75mL、定容500mL)染色15min；
⑷Milli-Q纯水清洗、20s和2min各一次；
⑸显色液(氢氧化钠7.5g、37％甲醛2.5mL、定容500mL)显色5-7min；
⑹最后用终止液(乙醇50mL、冰醋酸2.5mL、定容500mL)终止反应。
CN201810767361.7A 2018-07-13 2018-07-13 一种基于pcr-dgge技术的沙门氏菌分型方法 Pending CN108866170A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810767361.7A CN108866170A (zh) 2018-07-13 2018-07-13 一种基于pcr-dgge技术的沙门氏菌分型方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810767361.7A CN108866170A (zh) 2018-07-13 2018-07-13 一种基于pcr-dgge技术的沙门氏菌分型方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN108866170A true CN108866170A (zh) 2018-11-23

Family

ID=64301509

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810767361.7A Pending CN108866170A (zh) 2018-07-13 2018-07-13 一种基于pcr-dgge技术的沙门氏菌分型方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108866170A (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112481400A (zh) * 2020-12-24 2021-03-12 山西大学 一种食品病原菌致泻大肠埃希氏菌快速检测试剂盒及方法
CN112575098A (zh) * 2020-12-24 2021-03-30 山西大学 一种食品病原菌志贺氏菌快速检测的试剂盒及方法
CN112921108A (zh) * 2020-12-24 2021-06-08 山西医科大学 一种食品病原菌沙门氏菌快速检测的试剂盒及方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6673616B1 (en) * 1992-12-07 2004-01-06 Third Wave Technologies, Inc. Methods and compositions for characterizing nucleic acids
CN101665836A (zh) * 2009-09-24 2010-03-10 上海交通大学 异养小球藻中污染细菌动态的分子检测方法
CN102226142A (zh) * 2011-05-06 2011-10-26 江南大学 一种用于固态酿造食醋发酵过程的生物强化技术
CN102676684A (zh) * 2012-06-01 2012-09-19 南昌大学 同时快速检测食品中活的鼠伤寒沙门氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌、伤寒沙门氏菌的方法
US20140011692A1 (en) * 2000-04-10 2014-01-09 Taxon Biosciences, Inc. Methods for the survey and genetic analysis of populations
CN107502672A (zh) * 2017-10-12 2017-12-22 山东艾克韦生物技术有限公司 同时检测多种食源性致病菌的试剂盒及其应用

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6673616B1 (en) * 1992-12-07 2004-01-06 Third Wave Technologies, Inc. Methods and compositions for characterizing nucleic acids
US20140011692A1 (en) * 2000-04-10 2014-01-09 Taxon Biosciences, Inc. Methods for the survey and genetic analysis of populations
CN101665836A (zh) * 2009-09-24 2010-03-10 上海交通大学 异养小球藻中污染细菌动态的分子检测方法
CN102226142A (zh) * 2011-05-06 2011-10-26 江南大学 一种用于固态酿造食醋发酵过程的生物强化技术
CN102676684A (zh) * 2012-06-01 2012-09-19 南昌大学 同时快速检测食品中活的鼠伤寒沙门氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌、伤寒沙门氏菌的方法
CN107502672A (zh) * 2017-10-12 2017-12-22 山东艾克韦生物技术有限公司 同时检测多种食源性致病菌的试剂盒及其应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SANG IN LEE等: ""Assessment of cecal microbiota, integron occurrence, fermentation responses, and Salmonella frequency in conventionally raised broilers fed a commercial yeast-based prebiotic compound"", 《POULTRY SCIENCE》 *
廖超等: "GC 夹对三种食源性致病菌的 rpoB-PCR-DGGE图谱的影响", 《生物技术通报》 *
杨向莹等: "变性梯度凝胶电泳技术在食品微生物多样性", 《食品安全质量检测学报》 *
那冬晨等: "《环境分子生物学研究技术与方法》", 31 August 2012, 哈尔滨工业大学出版社 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112481400A (zh) * 2020-12-24 2021-03-12 山西大学 一种食品病原菌致泻大肠埃希氏菌快速检测试剂盒及方法
CN112575098A (zh) * 2020-12-24 2021-03-30 山西大学 一种食品病原菌志贺氏菌快速检测的试剂盒及方法
CN112921108A (zh) * 2020-12-24 2021-06-08 山西医科大学 一种食品病原菌沙门氏菌快速检测的试剂盒及方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Dubois et al. Identification of a variety of Staphylococcus species by matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry
Cocolin et al. Molecular detection and identification of Brettanomyces/Dekkera bruxellensis and Brettanomyces/Dekkera anomalus in spoiled wines
CN108866170A (zh) 一种基于pcr-dgge技术的沙门氏菌分型方法
CN109468395A (zh) 一种检测支原体的引物、试剂盒、检测方法和应用
CN105936935B (zh) 一种快速鉴定特定血清型沙门菌的pcr检测试剂盒
CN104059975B (zh) 对普罗威登斯菌o3，o4，o8，o12，o13和o20特异的核苷酸及其应用
CN105506153A (zh) 一种检测维氏气单胞菌的试剂盒和方法
Cafaro et al. Assessment of the genetic polymorphism and physiological characterization of indigenous Oenococcus oeni strains isolated from Aglianico del Vulture red wine
CN104673936A (zh) 猪传染性胃肠炎病毒N基因RT-qPCR检测方法及其引物和TaqMan探针
CN104342496B (zh) 一种快速检测、鉴定李斯特属细菌的方法
CN113151567B (zh) 用于鉴别花脸香蘑n006#菌株的ssr分子标记及方法
CN112176080B (zh) 特异性检测剑麻紫色卷叶病植原体的巢式pcr引物组、试剂盒及检测方法
CN102181518A (zh) 用大肠杆菌基因指纹图谱识别海洋水体粪便污染源的方法
WO2016065982A1 (zh) 一种家蚕蚕卵微孢子虫的lamp检测引物及其应用
CN103103182A (zh) 皱纹盘鲍微卫星分子标记及制备方法
CN106544436A (zh) 一种快速检测纺织品中沙门氏菌的方法
Kamusoko et al. Purification and Amplification of DNA from cellulolytic Bacteria: Application for Biogas production from crop residues
Wang et al. Studying safe storage time of orange peel (Citrus reticulata) using high‐throughput sequencing and conventional pure culture
CN103361418B (zh) 细菌核酸指纹特征质谱试剂盒
CN106521038B (zh) 一种高灵敏度的bhv‑2实时荧光定量pcr检测方法及试剂盒
CN116121408A (zh) 一种基于CRISPR/Cas12a检测单增李斯特菌的现场可视化试剂盒及应用
Zaccardelli et al. Amplified fragment length polymorphism fingerprinting of Xanthomonas arboricola pv. pruni
CN106676176A (zh) 一种利用多重pcr对四倍体紫花苜蓿进行ssr分析的方法
CN104404132B (zh) 一种猪链球菌2型的ss2-lamp检测试剂盒及应用
CN103740839B (zh) 荧光定量pcr检测肉毒杆菌的通用型试剂盒及非诊断性检测方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20181123

RJ01 Rejection of invention patent application after publication