CN108802223A - 一种测定瓜果中9种植物生长调节剂残留量的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种测定瓜果中9种植物生长调节剂残留量的方法，具体涉及药残检测领域，该方法包括如下步骤：在待测样品中加入提取剂，匀浆处理，得到样品浆液。将所述样品浆液进行离心处理，得到上清液和残渣。上清液经旋蒸至干后，采用纯净水复溶，得到样本溶液。在样本溶液中加入磁性吸附剂，离心振荡后，采用磁性物质对磁性吸附剂进行分离，得到磁性吸附剂和余液。附着有吸附质的磁性吸附剂经洗脱剂洗脱，得到洗脱液和脱附的磁性吸附剂。所述洗脱液经氮吹至干，并采用乙腈‑甲酸水溶液复溶，过滤膜，得到上机分析液。上机分析液经高效液相色谱串联质谱法分析测定，得到各植物生长调节剂的回收率。本发明具有准确性高以及操作简单的优点。

Description

一种测定瓜果中9种植物生长调节剂残留量的方法
技术领域
本发明涉及药残检测领域，具体为一种测定瓜果中9种植物生长调节剂残留量的方法。
背景技术
植物生长调节剂是一种人工合成、具有和天然植物激素相似生理和生物学效应的活性物质，对植物的生长和发育有重要的调节和控制作用。因其效用高、用量小、残毒少的特点而被广泛使用，已经成为农业生产中不可缺少的重要措施。然而，随着PGRs使用的日益增多以及使用范围的逐渐扩大，其安全性也越来越受到重视。研究表明，残留在植物中的PGRs会随着食物链进入人体内，过量食用会导致人体免疫功能下降,骨骼疏松，甚至致畸、致癌、致基因突变等后果。
近年来，国内外关于PGRs残留的检测方法主要有毛细管电泳-质谱法(CE-MS)、酶联免疫法(ELISA)、气相色谱法(GC)、气相色谱-质谱法(GC-MS)、高效液相色谱法(HPLC)和液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)。植物中PGRs多残留测定的难点在于其种类多、性质相差较大、浓度低和基质干扰严重等，对于前处理方法的要求较高。因此，建立一套高效、精确高的植物生长调节剂残留量的测定方法是亟待解决的问题。
发明内容
本发明提供了一种测定瓜果中9种植物生长调节剂残留量的方法，该方法具有准确性高以及操作简单的优点。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种测定瓜果中9种植物生长调节剂残留量的方法，该方法包括如下步骤：
S01、在待测样品中加入提取剂，匀浆处理，得到样品浆液；
S02、将所述样品浆液进行离心处理，得到上清液和残渣；
S03、所述上清液经旋蒸至干后，采用纯净水复溶，得到样本溶液；
S04、在所述样本溶液中加入磁性吸附剂，离心振荡后，采用磁性物质将样本溶液中附着有植物生长调节剂的磁性吸附剂分离，得到附着有吸附质的磁性吸附剂和余液；
S05、附着有吸附质的磁性吸附剂经洗脱剂洗脱，得到洗脱液和脱附的磁性吸附剂；
余液弃去；
S06、所述洗脱液经氮吹至干，并采用乙腈-甲酸水溶液复溶，过滤膜，得到上机分析液；
S07、上机分析液经高效液相色谱串联质谱法分析测定，得到各植物生长调节剂的回收率。
作为优选，所述提取剂选自：甲酸和乙腈的混合溶液、乙腈、氢氧化钠和乙腈的混合溶液中的任意一种。其中，在甲酸和乙腈的混合溶液中，甲酸的质量分数为1％～3％；氢氧化钠和乙腈的混合溶液中，氢氧化钠的质量分数为1％。
作为优选，在步骤S01和步骤S02之间，还包括步骤S01.1，所述步骤S01.1包括：
(1)样品浆液经过滤，得到一次滤液以及滤渣；
(2)在滤渣中加入碘-碘化钾溶液，并不断搅拌，30～50min后，用清水漂洗有色滤渣上残留的碘-碘化钾溶液，得到染色完成的有色滤渣；
(3)将有色滤渣采用提取剂复溶，并加入硫酸钙或硫酸铝，搅拌至溶解，并采用甲酸调节pH至2.5～3.5，反应30～50min后，离心过滤，得到二次滤液以及残渣；
(4)将一次滤液和二次滤液混合，得到混合滤液；
(5)在得到的混合滤液中加入壳聚糖，搅拌5～10min后，静置直至混合溶液澄清，过滤，得到三次滤液以及滤出渣；
(6)重复步骤(3)～(5)直至滤出渣颜色变浅至无色，并合并每次过滤得到的滤液，在合并后的滤液中加入稀氨水调节pH至6.8～7.2，即得到步骤S02中的上清液。
作为优选，在步骤(3)中，pH值为2.8。
作为进一步优选，在步骤(6)中，pH值为7.0。
作为优选，在步骤S04中，所述磁性吸附剂选自磁性石墨烯与β-环糊精制成的复合材料、壳聚糖和四氧化三铁制成的复合材料、Fe3O4-多巴胺、Fe3O4-SiO2-壳聚糖氧化石墨烯、Fe3O4-氮掺杂石墨烯、Fe3O4-β环糊精-羧甲基纤维素中的至少一种。
作为优选，上述磁性石墨烯与β-环糊精制成的复合材料的制备方法包括如下步骤：
(a)将磁性石墨烯均匀加入到水中，超声处理，并加入浓氨水，混合均匀后加入β-环糊精，在55～68℃的水浴条件下反应230～260min，反应完成后，得到固液混合物；
(b)所述固液混合物冷却至室温后，采用磁性物质将固相分离，即得到磁性石墨烯与β-环糊精制成的复合材料。
作为优选，上述壳聚糖和四氧化三铁制成的复合材料的制备方法包括如下步骤：
(i)取四氧化三铁、壳聚糖充分均匀混合，在油浴90～100℃条件下加热，并不断搅拌10～15小时，即得到壳聚糖和四氧化三铁制成的复合材料。
作为优选，在步骤S05中，洗脱剂选自甲醇、乙酸乙酯、乙腈以及二氯甲烷中的任意一种。
作为优选，在步骤S05中，附着有吸附质的磁性吸附剂经洗脱剂重复三次，并合并三次得到的溶液，即是步骤S05中的洗脱液。
本发明的有益效果为：
基于磁性石墨烯的磁性固相萃取技术是近年来发展起来的一种新型样品处理技术，它结合了磁性萃取操作简单、省时快速和石墨烯具有超大的比表面积、较好的化学稳定性和对有机化合物产生强大的π-π相互作用的特性，在样品前处理方面取得了一定的进展。并且，利用β-环糊精修饰磁性石墨烯制备纳米修饰材料，不但保留了β-环糊精与磁性石墨烯两者的固有性能，也起到了增强磁性石墨烯水溶性，防止其自聚集的作用。因此，本发明所提供的方案通过上述磁性石墨烯与β-环糊精制成的复合材料吸附目标待测物，不仅操作更加简单，精确度也非常高。
具体实施方式
实施例1
本实施例提供一种技术方案：
一种测定瓜果中9种植物生长调节剂残留量的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S01、在待测样品中加入提取剂，匀浆处理，得到样品浆液。
S02、样品浆液经过滤，得到一次滤液以及滤渣。
S03、在上述得到的滤渣中加入碘-碘化钾溶液，并不断搅拌，45min后，用清水漂洗有色滤渣上残留的碘-碘化钾溶液，得到染色完成的有色滤渣。由于瓜果每个细胞之间都是有果胶紧紧粘接着的，因此，通过机械式的匀浆很难将待测样品的细胞分开。因此，在本步骤中，将瓜果的细胞进行染色，以方便实验人员判断后续处理中，瓜果细胞是否分开。
S04、将有色滤渣采用提取剂复溶，并加入硫酸钙或硫酸铝，搅拌至溶解，并采用甲酸调节pH至2.8，反应40min后，离心过滤，得到二次滤液以及残渣。在本步骤中，由于体系呈酸性，且在体系中加入了硫酸钙或硫酸铝，相当于溶液体系中生成了脱水剂硫酸。果胶在脱水剂的作用下，失去了水合膜，并且，酸性条件下，抑制了果胶中羧基的解离。同时，甲氧基之间形成了氢键，因此越来越多的果胶分子胶连成网状的结构，从而絮凝成凝胶。当果胶被除去后，瓜果细胞之间呈松散状态，从而使得细胞内残留有的植物生长调节剂可快速析出，且析出地更加完全。
S05、将一次滤液和二次滤液混合，得到混合滤液。
S06、在得到的混合滤液中加入壳聚糖，搅拌8min后，静置直至混合溶液澄清，过滤，得到三次滤液以及滤出渣。
S07、重复步骤S04～S06直至滤出渣颜色变浅至无色，并合并每次过滤得到的滤液，在合并后的滤液中加入稀氨水调节pH至7，即得到步骤S02中的上清液。
由于壳聚糖可吸附滤液中的重金属成分、色素成分，因此，当多个细胞通过果胶粘连在一起时，细胞中的碘不易被壳聚糖吸附，从而使得滤渣呈***。通过重复操作步骤S04～S06可使得果胶被完全除去，使得瓜果细胞呈完全分散状态，从而更加有利于残留的植物生长剂析出。
S08、将所述样品浆液进行离心处理，得到上清液和残渣。
S09、所述上清液经旋蒸至干后，采用纯净水复溶，得到样本溶液。
S10、在所述样本溶液中加入磁性石墨烯与β-环糊精制成的复合材料，离心振荡后，采用磁性物质将样本溶液中附着有植物生长调节剂的磁性石墨烯与β-环糊精制成的复合材料分离，得到附着有吸附质的磁性石墨烯与β-环糊精制成的复合材料和余液。
S11、附着有吸附质的磁性石墨烯与β-环糊精制成的复合材料经甲醇洗脱，得到洗脱液和脱附的磁性石墨烯与β-环糊精制成的复合材料。得到的余液弃去。同时，可采用甲醛对上述步骤中过滤出来的壳聚糖进行洗脱，将其吸附的少量植物生长调节剂洗脱下来。
S12、所述洗脱液经氮吹至干，并采用乙腈-甲酸水溶液复溶，过滤膜，得到上机分析液；
S13、上机分析液经高效液相色谱串联质谱法分析测定，得到各植物生长调节剂的回收率。
实施例2
本实施例提供一种磁性石墨烯与β-环糊精制成的复合材料的制备方法，该制备方法包括如下步骤：
(a)将磁性石墨烯均匀加入到水中，超声处理，并加入浓氨水，混合均匀后加入β-环糊精，在60℃的水浴条件下反应240min，反应完成后，得到固液混合物；
(b)所述固液混合物冷却至室温后，采用磁性物质将固相分离，即得到磁性石墨烯与β-环糊精制成的复合材料。
实施例3
本实施例提供一种壳聚糖和四氧化三铁制成的复合材料的制备方法，该制备方法包括如下步骤：
(i)取四氧化三铁、壳聚糖充分均匀混合，在油浴95℃条件下加热，并不断搅拌12小时，即得到壳聚糖和四氧化三铁制成的复合材料。
实施例4
选用番茄、西瓜和草莓等空白样品进行添加回收实验，每个添加水平做6个平行，结果见表4。9种PGRs的平均回收率为71.7％～101％，相对标准偏差(RSD)为0.9％～10.9％，具有良好的准确度和精密度，符合多残留分析要求。具体结果如下：

Claims (10)

1.一种测定瓜果中9种植物生长调节剂残留量的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S01、在待测样品中加入提取剂，匀浆处理，得到样品浆液；
S02、将所述样品浆液进行离心处理，得到上清液和残渣；
S03、所述上清液经旋蒸至干后，采用纯净水复溶，得到样本溶液；
S04、在所述样本溶液中加入磁性吸附剂，离心振荡后，采用磁性物质将样本溶液中附着有植物生长调节剂的磁性吸附剂分离，得到附着有吸附质的磁性吸附剂和余液；
S05、附着有吸附质的磁性吸附剂经洗脱剂洗脱，得到洗脱液和脱附的磁性吸附剂；
余液弃去；
S06、所述洗脱液经氮吹至干，并采用乙腈-甲酸水溶液复溶，过滤膜，得到上机分析液；
S07、上机分析液经高效液相色谱串联质谱法分析测定，得到各植物生长调节剂的回收率。
2.根据权利要求1所述的一种测定瓜果中9种植物生长调节剂残留量的方法，其特征在于，所述提取剂选自：甲酸和乙腈的混合溶液、乙腈、氢氧化钠和乙腈的混合溶液中的任意一种；
其中，在甲酸和乙腈的混合溶液中，甲酸的质量分数为1％～3％；氢氧化钠和乙腈的混合溶液中，氢氧化钠的质量分数为1％。
3.根据权利要求1所述的一种测定瓜果中9种植物生长调节剂残留量的方法，其特征在于，在步骤S01和步骤S02之间，还包括步骤S01.1，所述步骤S01.1包括：
(1)样品浆液经过滤，得到一次滤液以及滤渣；
(2)在滤渣中加入碘-碘化钾溶液，并不断搅拌，30～50min后，用清水漂洗有色滤渣上残留的碘-碘化钾溶液，得到染色完成的有色滤渣；
(3)将有色滤渣采用提取剂复溶，并加入硫酸钙或硫酸铝，搅拌至溶解，并采用甲酸调节pH至2.5～3.5，反应30～50min后，离心过滤，得到二次滤液以及残渣；
(4)将一次滤液和二次滤液混合，得到混合滤液；
(5)在得到的混合滤液中加入壳聚糖，搅拌5～10min后，静置直至混合溶液澄清，过滤，得到三次滤液以及滤出渣；
(6)重复步骤(3)～(5)直至滤出渣颜色变浅至无色，并合并每次过滤得到的滤液，在合并后的滤液中加入稀氨水调节pH至6.8～7.2，即得到步骤S02中的上清液。
4.根据权利要求3所述的一种测定瓜果中9种植物生长调节剂残留量的方法，其特征在于，在步骤(3)中，pH值为2.8。
5.根据权利要求3所述的一种测定瓜果中9种植物生长调节剂残留量的方法，其特征在于，在步骤(6)中，pH值为7.0。
6.根据权利要求1所述的一种测定瓜果中9种植物生长调节剂残留量的方法，其特征在于，在步骤S04中，所述磁性吸附剂选自磁性石墨烯与β-环糊精制成的复合材料、壳聚糖和四氧化三铁制成的复合材料、Fe3O4-多巴胺、Fe3O4-SiO2-壳聚糖氧化石墨烯、Fe3O4-氮掺杂石墨烯、Fe3O4-β环糊精-羧甲基纤维素中的至少一种。
7.根据权利要求6所述的一种测定瓜果中9种植物生长调节剂残留量的方法，其特征在于，磁性石墨烯与β-环糊精制成的复合材料的制备方法包括如下步骤：
(a)将磁性石墨烯均匀加入到水中，超声处理，并加入浓氨水，混合均匀后加入β-环糊精，在55～68℃的水浴条件下反应230～260min，反应完成后，得到固液混合物；
(b)所述固液混合物冷却至室温后，采用磁性物质将固相分离，即得到磁性石墨烯与β-环糊精制成的复合材料。
8.根据权利要求6所述的一种测定瓜果中9种植物生长调节剂残留量的方法，其特征在于，壳聚糖和四氧化三铁制成的复合材料的制备方法包括如下步骤：
(i)取四氧化三铁、壳聚糖充分均匀混合，在油浴90～100℃条件下加热，并不断搅拌10～15小时，即得到壳聚糖和四氧化三铁制成的复合材料。
9.根据权利要求1所述的一种测定瓜果中9种植物生长调节剂残留量的方法，其特征在于，在步骤S05中，洗脱剂选自甲醇、乙酸乙酯、乙腈以及二氯甲烷中的任意一种。
10.根据权利要求1所述的一种测定瓜果中9种植物生长调节剂残留量的方法，其特征在于，在步骤S05中，附着有吸附质的磁性吸附剂经洗脱剂重复三次，并合并三次得到的溶液，即是步骤S05中的洗脱液。
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