CN108752417A - 一种松花粉活性多肽 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种松花粉活性多肽，属于功能食品技术领域，本发明的松花粉活性多肽的制备方法包括松花粉的制取、蛋白粗提取液的制备、松花粉活性多肽的制备，松花粉的制取步骤中将原料松花粉除杂，冷冻处理，用破碎机破碎至5μm以下，本发明可有效提高松花粉多肽得率，并提升松花粉营养保健价值，松花粉的延缓衰老、抗氧化效果优异。

Description

一种松花粉活性多肽
技术领域
本发明属于功能食品技术领域，具体涉及一种松花粉活性多肽。
背景技术
松花粉是一种营养十分丰富的天然资源，近年来对其中的脂肪酸和多糖类物质进行了大量研究，但对超过 10%含量的蛋白研究甚少。蛋白质是生命中的基本物质，而多肽是蛋白质的分解产物。活性多肽具有降低血压、延缓衰老、抗氧化、保肝、美体养颜、抗疲劳、改善睡眠、增强记忆、抑制肿瘤、增强免疫、促进人体对蛋白质及各种有益微量元素的吸收等多种功效，但是现有工艺对松花粉多肽提取率并不高。
发明内容
本发明的目的在于提供一种有效提高松花粉多肽得率，并提升松花粉营养保健价值，松花粉的延缓衰老、抗氧化效果优异的一种松花粉活性多肽。
本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：一种松花粉活性多肽的制备方法，包括松花粉的制取、蛋白粗提取液的制备、松花粉活性多肽的制备，松花粉的制取步骤中将原料松花粉除杂，冷冻处理，用破碎机破碎至5μm以下，采用电磁棒搅拌，得纯松花粉，通过对松花粉进行破壁处理，使松花粉原来流体特性丧失，增大破壁后的松花粉粘附性，大大提高松花粉中某些营养物质的释放，提高松花粉的保健价值，对松花粉具有的延缓衰老和抗氧化效果显著提升。
作为优选，松花粉制取步骤中冷冻处理为将松花粉置于-35℃至-28℃温度下冷冻4-5h，破碎后采用磁感强度为0.015-0.21T的电磁棒进行搅拌处理得纯松花粉，将松花粉冷冻处理后可有效提高松花粉细胞壁的破碎率，利于松花粉中总脂、淀粉含量得到提高，破壁后的松花粉粗蛋白液中的多肽含量同时有效提升，再利用电磁棒对破壁后的松花粉进行搅拌处理，电磁棒上的电流对破壁的松花粉的细胞壁可产生击碎效果，特别是对细胞壁中的多糖和蛋白质的空间结构产生改变，暴露酶切点位置，同时可使结构紧密的细胞壁疏松便于后续松花粉活性多肽制备使松花粉细胞壁进一步的破碎效果，提升多肽得率，实现松花粉功效的提升。
作为优选，蛋白粗提取液的制备步骤为：将纯松花粉置入pH值为7.5-8.5的缓冲液中，料液比为2-4:20，浸提时间为2-3h，浸提次数为2-3次，浸提温度为2-5℃，分别将各浸提液离心处理取上清液进行合并，得蛋白粗提取液，通过对松花粉进行蛋白粗提取液为松花粉活性多肽提取做准备。
作为优选，缓冲液由以下成分及重量份组成：三羟甲基氨基甲烷50-60份、0.1-0.15mol/L盐酸4-6份和水60-80份，通过缓冲液对松花粉溶液的pH值进行调节，而且利于提取松花粉蛋白粗提取液。
作为优选，松花粉活性多肽的制备步骤在蛋白粗提取液中置入3-5wt%的复合蛋白酶，搅拌并调pH值至8.0-9.0，于56-65℃条件下恒温静置2-4h，灭酶处理，离心取上清液，透析，得松花粉活性多肽，利用复合蛋白酶释放松花粉中的活性多肽，并且通过优化酶解条件提高酶解效果。
作为优选，复合蛋白酶中含有0.02-0.05wt%的乙二胺四乙酸钠，可实现协助复合蛋白酶破坏松花粉细胞壁，加速细胞壁水解从而加速细胞壁和胞内结构解体，打破细胞壁的阻碍作用，使松花粉中的营养物质得到释放，还可降低酶解液粘度，改变酶解液的渗透压，缩短酶解时间，提高酶解效果，实现松花粉的多肽的得率提高，营养含量的提升。
作为优选，复合蛋白酶由质量比为1-1.5:2的碱性蛋白酶和中性蛋白酶组成，选用复合蛋白酶可有效提升酶解效果，利用酶的专一性，避免酶解过程中受内切酶专一性作用位点的限制，水解不充分导致松花粉多肽得率降低。
作为优选，透析过程中，截留分子量为5000-10000Da，可去除得到的多肽溶液中的盐、有机溶剂、生物小分子杂质等提高多肽的品质和效果。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明通过对松花粉进行破壁处理，使松花粉原来流体特性丧失，增大破壁后的松花粉粘附性，大大提高松花粉中某些营养物质的释放，提高松花粉的保健价值，对松花粉具有的延缓衰老和抗氧化效果显著提升。通过本发明的提取工艺可有效提高松花粉多肽得率，并提升松花粉营养保健价值，松花粉的延缓衰老、抗氧化效果优异。
本发明采用上述技术方案提供一种松花粉活性多肽，弥补了现有技术的不足，操作简单，易于实现。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的技术方案作进一步详细描述：
实施例1：
一种松花粉活性多肽的制备方法，包括松花粉的制取、蛋白粗提取液的制备、松花粉活性多肽的制备，具体操作如下：
1）松花粉的制取步骤中将原料松花粉除杂，将松花粉置于-32℃温度下冷冻4h，用破碎机破碎至5μm以下，采用磁感强度为0.017T的电磁棒搅拌，得纯松花粉；
2）蛋白粗提取液的制备：将纯松花粉置入pH值为7.7的缓冲液中，料液比为3:20，浸提时间为2h，浸提次数为2次，浸提温度为3℃，分别将各浸提液离心处理取上清液进行合并，缓冲液由以下成分及重量份组成：三羟甲基氨基甲烷54份、0.12mol/L盐酸5份和水72份；
3）松花粉活性多肽的制备：在蛋白粗提取液中置入4wt%的复合蛋白酶，复合蛋白酶中含有0.03wt%的乙二胺四乙酸钠，搅拌并调pH值至8.4，于58℃条件下恒温静置3h，灭酶处理，离心取上清液，透析，透析过程中，截留分子量为6000Da，得松花粉活性多肽；
复合蛋白酶由质量比为1.2:2的碱性蛋白酶和中性蛋白酶组成。
实施例2：
一种松花粉活性多肽的制备方法，包括松花粉的制取、蛋白粗提取液的制备、松花粉活性多肽的制备，具体操作如下：
1）松花粉的制取步骤中将原料松花粉除杂，将松花粉置于-30℃温度下冷冻5h，用破碎机破碎至5μm以下，采用磁感强度为0.015T的电磁棒搅拌，得纯松花粉；
2）蛋白粗提取液的制备：将纯松花粉置入pH值为8.0的缓冲液中，料液比为1:10，浸提时间为2h，浸提次数为3次，浸提温度为5℃，分别将各浸提液离心处理取上清液进行合并，缓冲液由以下成分及重量份组成：三羟甲基氨基甲烷55份、0.14mol/L盐酸5份和水74份；
3）松花粉活性多肽的制备：在蛋白粗提取液中置入3wt%的复合蛋白酶，复合蛋白酶中含有0.03wt%的乙二胺四乙酸钠，搅拌并调pH值至8.6，于59℃条件下恒温静置3h，灭酶处理，离心取上清液，透析，透析过程中，截留分子量为8000Da，得松花粉活性多肽；
复合蛋白酶由质量比为1.1:2的碱性蛋白酶和中性蛋白酶组成。
实施例3：
一种松花粉活性多肽的制备方法，包括松花粉的制取、蛋白粗提取液的制备、松花粉活性多肽的制备，具体操作如下：
1）松花粉的制取步骤中将原料松花粉除杂，将松花粉置于-29℃温度下冷冻5h，用破碎机破碎至5μm以下，采用磁感强度为0.21T的电磁棒搅拌，得纯松花粉；
2）蛋白粗提取液的制备：将纯松花粉置入pH值为8.4的缓冲液中，料液比为1:5，浸提时间为3h，浸提次数为3次，浸提温度为3℃，分别将各浸提液离心处理取上清液进行合并，缓冲液由以下成分及重量份组成：三羟甲基氨基甲烷54份、0.12mol/L盐酸5份和水74份；
3）松花粉活性多肽的制备：在蛋白粗提取液中置入4wt%的复合蛋白酶，复合蛋白酶中含有0.04wt%的乙二胺四乙酸钠，搅拌并调pH值至8.4，于62℃条件下恒温静置3h，灭酶处理，离心取上清液，透析，透析过程中，截留分子量为7000Da，得松花粉活性多肽；
复合蛋白酶由质量比为1.3:2的碱性蛋白酶和中性蛋白酶组成。
药理试验：
抗衰老试验：将实施例2制备得到的松花粉活性多肽给健康的小白鼠连续服用一个月（实验组），去其肝脏、脑和心，测量肝脏中SOD（超氧化物歧化酶）的活性（如表1），以及脑、心和肝脏中脂褐质的量（如表2），并与为服用本发明实施例2的松花粉活性多肽的小白鼠（对照组）进行对比，情况如下所示：
表1
组别 松花粉活性多肽剂量（mg/kg） 小白鼠数量（只） SOD（μg/mg）
对照组 0 10 1.51±0.26
实验组1 300 10 2.24±0.32
实验组2 600 10 2.53±0.38
表2
由表1可见服用本发明提取的松花粉活性多肽后的小白鼠肝脏中的SOD的活性明显高于对照组，且服用量越多SOD的活性越高，可见本发明提取的松花粉活性多肽的抗衰老效果优异；由表2可见小白鼠服用本发明的松花粉活性多肽后脑、肝、心中的脂褐质明显降低。
本发明的操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。
以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种松花粉活性多肽的制备方法，包括松花粉的制取、蛋白粗提取液的制备、松花粉活性多肽的制备，其特征在于：松花粉的制取步骤中将原料松花粉除杂，冷冻处理，用破碎机破碎至5μm以下，采用电磁棒搅拌，得纯松花粉。
2.根据权利要1所述的一种松花粉活性多肽的制备方法，其特征在于：所述松花粉的制取步骤中冷冻处理为将松花粉置于-35℃至-28℃温度下冷冻4-5h，破碎后采用磁感强度为0.015-0.21T的电磁棒进行搅拌处理得纯松花粉。
3.根据权利要1所述的一种松花粉活性多肽的制备方法，其特征在于：所述蛋白粗提取液的制备步骤为：将纯松花粉置入pH值为7.5-8.5的缓冲液中，料液比为2-4:20，浸提时间为2-3h，浸提次数为2-3次，浸提温度为2-5℃，分别将各浸提液离心处理取上清液进行合并，得蛋白粗提取液。
4.根据权利要3所述的一种松花粉活性多肽的制备方法，其特征在于：所述缓冲液由以下成分及重量份组成：三羟甲基氨基甲烷50-60份、0.1-0.15mol/L盐酸4-6份和水60-80份。
5.根据权利要1所述的一种松花粉活性多肽的制备方法，其特征在于：所述松花粉活性多肽的制备步骤在蛋白粗提取液中置入3-5wt%的复合蛋白酶，搅拌并调pH值至8.0-9.0，于56-65℃条件下恒温静置2-4h，灭酶处理，离心取上清液，透析，得松花粉活性多肽。
6.根据权利要5所述的一种松花粉活性多肽的制备方法，其特征在于：所述复合蛋白酶中含有0.02-0.05wt%的乙二胺四乙酸钠。
7.根据权利要5所述的一种松花粉活性多肽的制备方法，其特征在于：所述复合蛋白酶由质量比为1-1.5:2的碱性蛋白酶和中性蛋白酶组成。
8.根据权利要5所述的一种松花粉活性多肽的制备方法，其特征在于：所述透析过程中，截留分子量为5000-10000Da。
9.一种松花粉活性多肽，根据权利要求1-8制备所得。
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