CN108553640A - 一种鸡球虫病弱毒活疫苗及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种鸡球虫病弱毒活疫苗及其制备方法和应用，所述疫苗包括：布氏艾美耳球虫100～500个/头份，和缓艾美耳球虫100～500个/头份，该疫苗通过将布氏艾美耳球虫的早熟致弱虫株与和缓艾美耳球虫的早熟致弱虫株混合均匀，保存在保存液中制备；所述疫苗组成科学合理，成本低，使用后无药物残留，不产生耐药性，不会对环境造成污染，免疫原性好，使用安全，可应用于制备预防鸡球虫病的药物制剂。
Description
技术领域
本发明涉及球虫疫苗及其应用领域，特别涉及一种鸡球虫病弱毒活疫苗及其制备方法和应用。
背景技术
鸡球虫病是由一种或多种艾美耳球虫寄生于鸡肠道黏膜上皮细胞而引起的以肠炎、腹泻、生长迟缓、饲料转化率下降和死亡为特征的流行性疾病。在世界公认的7种鸡艾美耳球虫中，布氏艾美耳球虫属于中等致病力的虫种，和缓艾美耳球虫是致病力相对较弱的虫种。从流行状况调查可知，7种球虫在较大的区域范围内均有发现，但各种球虫的流行率存在较大的差异。布氏艾美耳球虫在世界各地都能发现，但是有关流行率的报道世界各国各地区不尽相同，其流行具有一定的区域性，多数文献报道布氏艾美耳球虫的致病主要表现为发病和减重而非死亡，在鸡只增重、饲料转化率方面对养鸡业造成的经济损失较大。和缓艾美耳球虫在部分地区存在较高的流行，单独感染或与其他球虫混合感染都会使肉鸡体重下降，饲料转化率降低。
目前预防鸡球虫病主要依靠抗球虫药物和球虫活卵囊疫苗。抗球虫药物的滥用导致球虫耐药性加剧和食品药物残留，危害人类健康，污染环境。使用疫苗进行鸡球虫病的防治是一大趋势，现在上市的鸡球虫病疫苗主要针对引起严重血便或死亡的柔嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、巨形艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫进行免疫预防，而暂无有效针对引起鸡只生长缓慢、增重差的球虫疫苗。可见，开发针对引起鸡只生长缓慢、增重差的球虫疫苗很有必要。
可见，现有技术还有待改进和提高。
发明内容
鉴于上述现有技术的不足之处，本发明的目的在于提供一种鸡球虫病弱毒活疫苗及其制备方法和应用，旨在解决现有技术中没有针对由布氏艾美耳球虫与和缓艾美耳球虫引起的鸡只生长缓慢、增重差的球虫疫苗的问题。
为了达到上述目的，本发明采取了以下技术方案：
一种鸡球虫病弱毒活疫苗，包括：布氏艾美耳球虫100～500个/头份，和缓艾美耳球虫100～500个/头份。
所述鸡球虫病弱毒活疫苗中，包括：布氏艾美耳球虫250个/头份，和缓艾美耳球虫250个/头份。
所述鸡球虫病弱毒活疫苗中，所述布氏艾美耳球虫为布氏艾美耳球虫的早熟致弱虫株，所述和缓艾美耳球虫为和缓艾美耳球虫的早熟致弱虫株。
所述鸡球虫病弱毒活疫苗中，所述疫苗的免疫方式包括口服免疫和滴眼。
一种鸡球虫病弱毒活疫苗的制备方法，包括：将布氏艾美耳球虫的早熟致弱虫株与和缓艾美耳球虫的早熟致弱虫株混合均匀，保存在保存液中。
一种鸡球虫病弱毒活疫苗的应用，所述疫苗应用于制备预防鸡球虫病的药物制剂中。
有益效果：
本发明提供了一种鸡球虫病弱毒活疫苗及其制备方法和应用，所述疫苗组成科学合理，成本低，使用后无药物残留，不产生耐药性，不会对环境造成污染，免疫原性好，使用安全，鸡只免疫后能有效抵抗1×105个布氏艾美耳球虫和1×105个和缓艾美耳球虫的感染，可应用于制备预防鸡球虫病的药物制剂，填补了现有技术中缺乏针对引起鸡只生长缓慢、增重差的球虫疫苗的缺陷，提高了鸡养殖业的经济效益。
具体实施方式
本发明提供一种鸡球虫病弱毒活疫苗及其制备方法和应用，为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下举实施例对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明提供一种鸡球虫病弱毒活疫苗，包括：布氏艾美耳球虫100～500个/头份，和缓艾美耳球虫100～500个/头份；布氏艾美耳球虫和和缓艾美耳球虫主要引起鸡只发病、增重率降低，从而降低饲料的转化率，降低鸡养殖业的经济效益；上述组成的疫苗免疫原性好，使用安全，在该剂量范围内能够有效地抵抗1×105个布氏艾美耳球虫和1×105个和缓艾美耳球虫的感染，预防由布氏艾美耳球虫、和缓艾美耳球虫引起的鸡只生长缓慢、增重率下降的现象。当布氏艾美耳球虫、和缓艾美耳球虫的免疫剂量少于上述范围时，无法产生有效的免疫效果；当布氏艾美耳球虫、和缓艾美耳球虫的免疫剂量大于上述范围时，免疫反应过于强烈，可能会影响鸡只的生长状况。
优选地，所述疫苗包括：布氏艾美耳球虫250个/头份，和缓艾美耳球虫250个/头份；所述剂量下，鸡只得到的免疫效果最好，对鸡只的生长状况的影响最小，增重率最高。
优选地，所述布氏艾美耳球虫为布氏艾美耳球虫的早熟致弱虫株，所述和缓艾美耳球虫为和缓艾美耳球虫的早熟致弱虫株。早熟虫株相对于原始虫株致病力较弱，但是能够保持其免疫原性，因此疫苗免疫效果得到了充分保证，同时使用上更加的安全，避免疫苗使用过程中引起潜在的散毒威胁及对鸡只的肠道造成过大的损害，以致提高养殖成本。
具体地，所述疫苗的免疫方式包括口服免疫和滴眼；更具体地，所述口服免疫包括拌料免疫、饮水免疫、灌服等。
一种鸡球虫病弱毒活疫苗的制备方法，包括：将布氏艾美耳球虫的早熟致弱虫株与和缓艾美耳球虫的早熟致弱虫株混合均匀，保存在保存液中，于2～8℃的环境中保存；具体地，所述保存液包括1%氯胺T溶液。
一种鸡球虫病弱毒活疫苗的应用，所述疫苗应用于制备预防鸡球虫病的药物制剂中。
实施例 1 鸡球虫病弱毒活疫苗的配制
用血球计数板将布氏艾美耳球虫、和缓艾美耳球虫孢子化卵囊分别计数，获得其浓度，按照表1的配比计算出各组分球虫卵囊所需要的数量，分别放入不同的洁净容器中，加入保存液并进行搅拌，得到对应组分数量的混合虫株卵囊溶液，置于2～8℃的环境中保存备用。
表1 鸡球虫病弱毒活疫苗的成分组成
| 布氏艾美耳球虫（个/头份） | 和缓艾美耳球虫（个/头份） | |
| 配比1 | 100 | 100 |
| 配比2 | 250 | 250 |
| 配比3 | 500 | 100 |
| 配比4 | 100 | 500 |
实施例 2
取3～7日龄SPF鸡（指生长在屏障***或隔离器中，无国际、尤其国内流行的主要鸡传染病病原的鸡群）110只，分成11组，每组10只，称重。其中，第1、2组为配比1所述疫苗的免疫攻虫组，第3、4组为配比2所述疫苗的免疫攻虫组，第5、6组为配比3所述疫苗的免疫攻虫组，第7、8组为配比4所述疫苗的免疫攻虫组，第9、10组为不免疫攻虫组；第11组为不免疫不攻虫组。
将11组SPF鸡分别在相同条件下隔离饲养，经口灌服免疫21日后，各组鸡称重并攻虫，第1、3、5、7、9组经口攻布氏艾美耳球虫强毒孢子化卵囊1×105个/只；第2、4、6、8、10组经口攻和缓艾美耳球虫强毒孢子化卵囊1×105个/只，观察7日，记录各组临床症状。分别收取第2、4、6、8、10组攻虫120～144小时后的粪便和第1、3、5、7、9组攻虫144～168小时后的粪便，分别计算OPG（克粪便卵囊数）和卵囊减少率。攻虫7日后称量各组鸡只的体重并计算相对增重率，并以相对增重率、卵囊减少率和存活率作为试验指标。
其中，
OPG=a×100，a为麦氏计数板显微镜下计算得到的卵囊数；
卵囊减少率（%）=（不免疫攻虫组OPG -免疫攻虫组OPG）÷不免疫攻虫组OPG×100%；
攻虫前均重=攻虫前的重量÷试验鸡只的数量；
攻虫后均重=攻虫后的重量÷试验鸡只的数量；
平均增重=攻虫后增重-攻虫前增重；
平均相对增重率=各免疫组攻虫组或不免疫攻虫组的平均增重÷不免疫不攻虫组的平均增重×100%。
表2 各组别鸡只攻虫前后的增重结果
其中，表2中“a”表示免疫21日后的增重数据，“b”表示攻虫7日后的增重数据；“布”表示布氏艾美耳球虫，“和”表示和缓艾美耳球虫。
如表2所示，攻虫前，采用配比1～4的疫苗免疫的各组别的平均相对增重率为95.7%、94.6%、92.9%、93.4%，各免疫组SPF鸡均未出现死亡。攻虫后，采用配比1的疫苗免疫的分别攻布氏艾美耳球虫、和缓艾美耳球虫的两组别的相对增重率为64.0%、77.2%；同样的，采用配比2的疫苗免疫的两组别的相对增重率分别为85.4%、91.0%；采用配比3的疫苗免疫的两组别的相对增重率分别为87.3%、79.1%；采用配比4的疫苗免疫的两组别的相对增重率分别为66.5%、94.6%。
攻虫后，采用配比1的疫苗免疫的攻布氏艾美耳球虫、和缓艾美耳球虫两组别的卵囊减少率分别为89.3%、85.2%；采用配比2免疫的两组别的卵囊减少率分别为95.4%、94.1%；采用配比3免疫的两组别的卵囊减少率分别为97.5%、87.7%；采用配比4的疫苗免疫的两组别的卵囊减少率分别为88.2%、97.6%。
表3 各组别鸡只攻虫后OPG值和卵囊产量结果
其中，表3中“布”表示布氏艾美耳球虫，“和”表示和缓艾美耳球虫。
结合表2和3的检测结果，显而易见的，配比1～4中，攻虫后，攻布氏艾美耳球虫的不免疫攻虫组的相对增重率仅为42.8%，攻和缓艾美耳球虫的不免疫攻虫组的相对增重率仅为66.2%，说明这两种球虫的高剂量感染均使得鸡只生长缓慢，增重差，而各免疫组鸡的相对增重率明显高于相对应的不免疫攻虫组。具体为，采用配比1的疫苗免疫的组别的相对增重率比相对应的不免疫攻虫组高21.2%（攻布氏艾美耳球虫）和11.0%（攻和缓艾美耳球虫）；采用配比2的疫苗免疫的组别的相对增重率比相对应的不免疫攻虫组高42.6%（攻布氏艾美耳球虫）和24.8%（攻和缓艾美耳球虫）；采用配比3的疫苗免疫的组别的相对增重率比相对应的不免疫攻虫组高44.5%（攻布氏艾美耳球虫）和12.9%（攻和缓艾美耳球虫）；采用配比4的疫苗免疫的组别的相对增重率比相对应的不免疫攻虫组高23.7%（攻布氏艾美耳球虫）和28.4%（攻和缓艾美耳球虫）；而且各免疫攻虫组攻击布氏艾美耳球虫、和缓艾美耳球虫后的卵囊减少率均高于85.2%，证明配比1～4达到了很好的免疫的效果，而且对鸡只的增重的影响低，能有效抵抗布氏艾美耳球虫、和缓艾美耳球虫这两种球虫高剂量的攻击。
进一步地，免疫后攻虫前，采用配比1和配比2的疫苗免疫的组别相对增重率明显优于其他2种配比的疫苗免疫的组别；攻虫后，采用配比2的疫苗免疫的组别的相对增重率和卵囊减少率优于采用配比1、3、4的疫苗免疫的组别；因此，综合免疫期间和攻虫后的疫苗对鸡只的增重率的影响以及攻虫后的卵囊减少率，申请人得出所述疫苗的最佳配比为配比2的方案，即每头份疫苗中含有布氏艾美耳球虫早熟株孢子化卵囊250个、和缓艾美耳球虫早熟株孢子化卵囊250个时，在疫苗反应期间对鸡只的影响最轻微，攻虫后又可以提供较强的免疫保护效果。
可以理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，而所有这些改变或替换都应属于本发明所附的权利要求的保护范围。
Claims (6)
1.一种鸡球虫病弱毒活疫苗，其特征在于，包括：布氏艾美耳球虫100～500个/头份，和缓艾美耳球虫100～500个/头份。
2.根据权利要求1所述的鸡球虫病弱毒活疫苗，其特征在于，包括：布氏艾美耳球虫250个/头份，和缓艾美耳球虫250个/头份。
3.根据权利要求1所述的鸡球虫病弱毒活疫苗，其特征在于，所述布氏艾美耳球虫为布氏艾美耳球虫的早熟致弱虫株，所述和缓艾美耳球虫为和缓艾美耳球虫的早熟致弱虫株。
4.根据权利要求1所述的鸡球虫病弱毒活疫苗，其特征在于，所述疫苗的免疫方式包括口服免疫和滴眼。
5.一种权利要求1-4中任一项所述的鸡球虫病弱毒活疫苗的制备方法，其特征在于，包括：将布氏艾美耳球虫的早熟致弱虫株与和缓艾美耳球虫的早熟致弱虫株混合均匀，保存在保存液中。
6.一种如权利要求1-4任一项所述的鸡球虫病弱毒活疫苗的应用，其特征在于，所述疫苗应用于制备预防鸡球虫病的药物制剂中。
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