CN108552235A - 一种预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥及其制备与应用 - Google Patents

一种预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥及其制备与应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥及其制备与应用。该生物菌肥主要由以下原料制成：生物菌肥种子菌发酵液(哈茨木霉5～20％、巨大芽孢杆菌5～20％、枯草芽孢杆菌5～20％、短小芽孢杆菌5～20％、绿色木霉5～20％、嗜酸乳杆菌5～20％)、花生麸；且两者质量比为1：3～8。所述生物菌肥中哈茨木霉、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、绿色木霉对根腐病病原物具有很好的拮抗与竞争作用，能够有效抑制根腐病病原物的生命活动，同时诱导植物抗性抵御，提高烤烟抗根腐病能力；嗜酸乳杆菌可有效改良土壤，减少杂草的生长；同时对环境安全，无公害，无残留，专一性强，活性高，对非靶标生物安全无副作用。

Description

一种预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥及其制备与应用
技术领域
本发明涉及一种预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥制备方法，特别涉及一种预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥及其制备方法与应用。
背景技术
根腐病作为烤烟大田生长过程中常见的病害之一，由腐霉、镰刀菌、疫霉等多种病原侵染引起，是一种真菌性土传病害，由于我国烟田轮作率低，烤烟连年种植现象严重，近几年来在我国主要烤烟产区根腐病发病率越来越高。在旱地连年发病的烟田，根腐病发病率可达50％以上，造成大片烟田烟株枯死甚至绝收，严重影响了烟草的产量和品质，造成巨大经济损。
目前，国内外对辣椒疫病的防治措施主要是改良栽培技术、采用抗病品种、轮作、喷施化学药剂等手段。轮作倒茬虽然能够起到减轻病害的发生，但由于我国优质植烟土地缺乏以及农户对经济利益的追求很难实现。高垄移栽、浅灌控水等栽培措施可在一定程度上控制烤烟根腐病的发生，但都不能从根本上消除烤烟根腐病的发生；使用抗病品种可以最大限度地减轻病害发生和流行，但是烟叶作为特殊的经济作物，烤烟的内在质量重要性大于抗病性，很难找到既能高抗根腐病同时内在质量达到要求的烤烟新品种；化学杀菌剂以其快捷、见效快而成为防治烤烟根腐病的主要措施，但化学农药容易的大量使用，会污染水体及农药的生物富集，对人体健康和生态环境造成极大危害。同时化学杀菌剂的长期使用，使得腐霉、镰刀菌、疫霉等多种病原对其产生抗药性，甚至发生变异，导致防治效果下降，甚至对根腐病不起作用。
本发明选择采用对腐霉、镰刀菌、疫霉等多种病原有拮抗作用的微生物制备成生物菌肥，进行生物防治，不仅可以有效防治根腐病，改良土壤，并且不易产生抗性对环境安全，无公害，无残留，专一性强，活性高，对非靶标生物安全无副作用。
发明内容
为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥。该生物菌肥能够减少有效抑制烤烟大田生长发育过程中根腐病的发生，改良烟田土壤，促进烤烟前期的根系生长发育，提高烤烟的产质量。
本发明的另一目的在于提供上述预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥的制备方法。
本发明的再一目的在于提供上述预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
一种预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥，主要由以下原料制成：
生物菌肥种子菌发酵液、花生麸；其中，生物菌肥种子菌发酵液与花生麸的质量比为1：3～8；优选为1：4；
所述的生物菌肥种子菌发酵液包括如下体积百分比：哈茨木霉5～20％、巨大芽孢杆菌5～20％、枯草芽孢杆菌5～20％、短小芽孢杆菌5～20％、绿色木霉5～20％、嗜酸乳杆菌5～20％。
优选的，所述的生物菌肥种子菌发酵液包括如下体积百分比：哈茨木霉10～20％、巨大芽孢杆菌15～20％、枯草芽孢杆菌20％、短小芽孢杆菌15～20％、绿色木霉15％、嗜酸乳杆菌10～15％。
所述的预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥，优选主要由原料制成：生物菌肥种子菌发酵液(哈茨木霉20％、巨大芽孢杆菌15％、枯草芽孢杆菌20％、短小芽孢杆菌15％、绿色木霉15％、嗜酸乳杆菌15％)，花生麸；其中，生物菌肥种子菌发酵液与花生麸的质量比为1：4；
所述的预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥，优选主要由原料制成：生物菌肥种子菌发酵液(哈茨木霉15％、巨大芽孢杆菌20％、枯草芽孢杆菌20％、短小芽孢杆菌20％、绿色木霉15％、嗜酸乳杆菌10％)，花生麸；其中，生物菌肥种子菌发酵液与花生麸的质量比为1：4；
所述的预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥，最优选主要由原料制成：生物菌肥种子菌发酵液(哈茨木霉10％、巨大芽孢杆菌20％、枯草芽孢杆菌20％、短小芽孢杆菌20％、绿色木霉15％、嗜酸乳杆菌15％)，花生麸；其中，生物菌肥种子菌发酵液与花生麸的质量比为1：4；
所述的预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥的制备方法，包括如下步骤：
A、将所得的哈茨木霉、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、绿色木霉、嗜酸乳杆菌的种子菌发酵液按照一定的比例配比，制成所需生物菌肥种子菌发酵液；
B、将花生麸粉碎为颗粒大小小于3mm的颗粒，干热灭菌，得到完全灭菌的花生麸，将生物菌肥种子菌发酵液和花生麸，按照质量比1：3～8(优选1：4)的比例无菌条件下进行均匀混合，转移到生化培养箱内进一步进行培养发酵；
C、培养发酵完成后，将发酵物取出，置于38℃的鼓风干燥条件中或置于避光自然条件下风干，到含水率≤12％时，制得所述的预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥。
步骤(A)中所述的种子菌发酵液有效菌含量在5×108cfu/mL以上。
步骤(A)中所述的种子菌发酵液，通过如下步骤制备得到：
(1)、将保存在砂土管、冷冻干燥管中处于休眠状态的哈茨木霉接入于察氏固体培养基中，巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌与短小芽孢杆菌接入于牛肉膏蛋白胨固体培养基中、绿色木霉与嗜酸乳酸菌接入于MRS固体培养基中，每种菌种单独使用一个培养基避免污染，置入28℃进行培养48小时，至斜面培养基长满菌体；
(2)、将斜面菌体用接种环接种两环至制成的LB(肉汤培养基)中，每种菌种单独使用一个LB(肉汤培养基)中，避免菌种污染，在28℃的恒温摇床，以110r/min中培养48小时，制成菌含量在5×108cfu/mL的菌悬液；
(3)、将制成的菌悬液按照5％的接种量接入到LB(肉汤培养基)，在28℃的恒温摇床，以110r/min中培养48小时，得到种子菌发酵液。
所述的察氏固体培养基为(g/L)：硝酸钠2.8、磷酸氢二钾1.2、氯化钾0.5、七水硫酸镁0.5、硫酸亚铁0.02、蔗糖30、琼脂20，pH7.5；
所述的牛肉膏蛋白胨固体培养基为(g/L)：牛肉膏3.0、蛋白胨10.0、氯化钠5.0、琼脂15～25，pH7.5；
所述的MRS固体培养基为：蛋白胨10.0g/L、牛肉膏10.0g/L、酵母膏5.0g/L、柠檬酸氢二铵2.0g/L、葡萄糖20.0g/L、吐温801.0mL/L、乙酸钠5.0g/L、磷酸氢二钾2.0g/L、七水硫酸镁0.58g/L、一水硫酸锰0.25g/L、琼脂18.0g/L，pH6.4；
所述的LB(肉汤培养基)：胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化钠(NaCl)10g/L，pH7.4；
步骤(B)中所述的干热灭菌的条件为在121℃灭菌锅内进行干热灭菌3个小时。
步骤(C)中所述的生物菌肥中有效菌含量在2×108cfu/g以上。
所述的生物菌肥可以适用于烟叶种植的各种土壤。
所述的预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥在预防烤烟根腐病与改良土壤中的应用。
所述的预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥的应用方法，包括如下步骤：
(1)对植烟田块进行翻耕、平整，碎土，做到垄沟平直，垄体饱满，垄面细碎；
(2)将生物菌肥与有机肥以按质量比1：3～7(优选为1：4)比例混合均匀，采取双条式施肥方法，在确定种植烟草的土地两边开垦两条深度为8～12cm(优选9cm)的小沟，撒入烟草专用复合肥肥料作为下层肥料，然后将沟进行平整起垄；接着在垄线的位置上开辟一条深度为8～12cm(优选9cm)的小沟，撒入生物菌肥与有机肥的混合物作为上层肥料，这样上层肥料与下层肥料的双双联合，构成了双条式施肥方法；
(3)由于环境的温湿度、土壤对生物菌肥的效果影响较大，生物菌肥最佳温度是25℃～37℃，低于5℃，高于45℃，施用效果较差；因此在底肥施肥完成时，要及时起垄盖膜待栽。
本发明的原理是：
哈茨木霉作为生防真菌常见的木霉属真菌能寄生多种病原真菌，增加土壤中木霉菌数量能防治某些病害的发生，哈茨木霉能分泌产生细胞壁降解酶，如纤维素酶、蛋白酶使病原菌菌丝的细胞壁局部变薄、消解，最终导致病原菌细胞壁破裂，菌丝断裂，病原菌死亡，对多种植物的根腐病病原菌有拮抗能力，哈茨木霉不仅能防治植物病害，还能促进植物生长、增强抗逆性和修复污染环境等功能。枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌作为常见的芽孢杆菌，具有极快繁殖能力、较强的环境适应能力和代谢产物多样性，在生物防治研究中被广泛应用，芽孢杆菌定殖于植物根际，与根腐病病原菌形成竞争关系，同时分泌代谢物抑制根腐病病原菌生长，并且诱导植物抗性抵御，提高烤烟抗根腐病能力。乳酸菌是土壤中的有益微生物，嗜酸乳杆菌可以增强土壤松软性，缓解土地板结现象，提升土壤透气透光透水性能，同时乳酸菌能生成乳酸和生理活性物质，乳酸可使杂草的种皮***，使其容易吸收水份，并受生理活性物质的影响而打破休眠。
腐霉、镰刀菌、疫霉等多种病原的侵染与烤烟抗病能力差是烤烟根腐病发生的根本原因。哈茨木霉、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、绿色木霉、嗜酸乳杆菌这几种有益菌按一定的比例配成的生物菌肥种子菌发酵液与花生麸共同发酵成的生物菌肥对土壤中的根腐病的腐霉、镰刀菌、疫霉等多种病原物具有很好的抑制作用，可以有效较少土壤中的病原物数量，同时而已改良土壤质地，促进烤烟生长发育，提高烤烟抗病能力，减少烤烟根腐病的发生，提高烤烟的产量与质量。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
本发明的生物菌肥中的哈茨木霉、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、绿色木霉对根腐病病原物具有很好的拮抗与竞争作用，能够有效抑制根腐病病原物的生命活动，同时诱导植物抗性抵御，提高烤烟抗根腐病能力；嗜酸乳杆菌可以有效改良土壤，减少杂草的生长；同时本发明的生物菌肥对环境安全，无公害，无残留，专一性强，活性高，对非靶标生物安全无副作用。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。
实施例中所用的哈茨木霉(Trichoderma harzianum)，购于中国普通微生物菌种保藏管理中心，CGMCC:5.1213；巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)，购于中国普通微生物菌种保藏管理中心，CGMCC:1.9072；枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，购于中国普通微生物菌种保藏管理中心，CGMCC:1.15792；短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)，购于中国普通微生物菌种保藏管理中心，CGMCC:1.8714；绿色木霉(Trichoderma viride)，购于中国普通微生物菌种保藏管理中心，CGMCC:3.11450；嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)，购于中国普通微生物菌种保藏管理中心，CGMCC:1.12735。
实施例1
一种预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥，该生物菌肥中的各组分按以下配比制成：
生物菌肥种子菌发酵液(体积百分比计：哈茨木霉20％、巨大芽孢杆菌15％、枯草芽孢杆菌20％、短小芽孢杆菌15％、绿色木霉15％、嗜酸乳杆菌15％)，花生麸；
所述的预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥的制备方法，包括如下步骤：
A、将保存在砂土管、冷冻干燥管中处于休眠状态的哈茨木霉接入于察氏固体培养基中，巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌与短小芽孢杆菌接入于牛肉膏蛋白胨固体培养基中、绿色木霉与乳酸菌接入于MRS固体培养基中，每种菌种单独使用一个培养基避免污染，置入28℃人工气候箱内进行培养48小时，至斜面培养基长满菌体；
B、将斜面菌体用接种环接种两环至制成的LB(肉汤培养基)中，每种菌种单独使用一个LB(肉汤培养基)中，避免菌种污染，在28℃的恒温摇床，以110r/min中培养48小时，制成菌含量在5×108cfu/mL的菌悬液；
C、将制成的菌悬液按照5％的接种量接入到LB(肉汤培养基)，在28℃的恒温摇床，以110r/min中培养48小时，得到种子菌发酵液。
D、将所得的不同种子菌发酵液按照哈茨木霉20％、巨大芽孢杆菌15％、枯草芽孢杆菌20％、短小芽孢杆菌15％、绿色木霉15％、嗜酸乳酸菌15％的比例配比，制成所需生物菌肥种子菌发酵液；
E、将花生麸粉碎为颗粒大小小于3mm的颗粒，在121℃灭菌锅内进行干热灭菌3个小时，得到完全灭菌的花生麸，将生物菌肥种子菌发酵液和花生麸，按照质量比1：4的比例无菌条件下进行均匀混合，转移到生化培养箱内进一步进行培养发酵；
F、培养发酵完成后，将发酵物取出，置于38℃的鼓风干燥箱中或置于避光自然条件下风干，到含水率≤12％时，制得所述的预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥。
所述的预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥的应用方法，包括如下步骤：
(1)对植烟田块进行翻耕、平整，碎土，做到垄沟平直，垄体饱满，垄面细碎；
(2)将生物菌肥与有机肥以按质量比1：4比例混合均匀，采取双条式施肥方法，在确定种植烟草的土地两边开垦两条深度为9cm左右的小沟，撒入烟草专用复合肥肥料(购自湖北喜来***业有限公司的复合肥料，15-15-15)作为下层肥料，然后将沟进行平整起垄。接着在垄线的位置上开辟一条深度为9cm左右的小沟，撒入生物菌肥与有机肥的混合物作为上层肥料，这样上层肥料与下层肥料的双双联合，构成了双条式施肥方法；
(3)由于环境的温含水率、土壤对生物菌肥的效果影响较大，生物菌肥最佳温度是25℃～37℃，低于5℃，高于45℃，施用效果较差。因此在底肥施肥完成时，要及时起垄盖膜待栽；
实施例2
一种预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥，该生物菌肥中的各组分按以下配比制成：
生物菌肥种子菌发酵液(体积百分比计：哈茨木霉15％、巨大芽孢杆菌20％、枯草芽孢杆菌20％、短小芽孢杆菌20％、绿色木霉15％、嗜酸乳杆菌10％)，花生麸；
所述的预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥的制备方法，包括如下步骤：
A、将保存在砂土管、冷冻干燥管中处于休眠状态的哈茨木霉接入于察氏固体培养基中，巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌与短小芽孢杆菌接入于牛肉膏蛋白胨固体培养基中、绿色木霉与乳酸菌接入于MRS固体培养基中，每种菌种单独使用一个培养基避免污染，置入28℃人工气候箱内进行培养48小时，至斜面培养基长满菌体；
B、将斜面菌体用接种环接种两环至制成的LB(肉汤培养基)中，每种菌种单独使用一个LB(肉汤培养基)中，避免菌种污染，在28℃的恒温摇床，以110r/min中培养48小时，制成菌含量在5×108cfu/mL的菌悬液；
C、将制成的菌悬液按照5％的接种量接入到LB(肉汤培养基)，在28℃的恒温摇床，以110r/min中培养48小时，得到种子菌发酵液。
D、将所得的不同种子菌发酵液按照哈茨木霉15％、巨大芽孢杆菌20％、枯草芽孢杆菌20％、短小芽孢杆菌20％、绿色木霉15％、嗜酸乳酸菌10％的比例配比，制成所需生物菌肥种子菌发酵液
E、将花生麸粉碎为颗粒大小小于3mm的颗粒，在121℃灭菌锅内进行干热灭菌3个小时，得到完全灭菌的花生麸，将生物菌肥种子菌发酵液和花生麸，按照质量比1：4的比例无菌条件下进行均匀混合，转移到生化培养箱内进一步进行培养发酵；
F、培养发酵完成后，将发酵物取出，置于38℃的鼓风干燥箱中或置于避光自然条件下风干，到含水率≤12％时，制得所述的预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥。
所述的预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥的应用方法，包括如下步骤：
(1)对植烟田块进行翻耕、平整，碎土，做到垄沟平直，垄体饱满，垄面细碎；
(2)将生物菌肥与有机肥以按质量比1：4比例混合均匀，采取双条式施肥方法，在确定种植烟草的土地两边开垦两条深度为9cm左右的小沟，撒入烟草专用复合肥肥料(购自湖北喜来***业有限公司的复合肥料，15-15-15)作为下层肥料，然后将沟进行平整起垄。接着在垄线的位置上开辟一条深度为9cm左右的小沟，撒入生物菌肥与有机肥的混合物作为上层肥料，这样上层肥料与下层肥料的双双联合，构成了双条式施肥方法；
(3)由于环境的温含水率、土壤对生物菌肥的效果影响较大，生物菌肥最佳温度是25℃～37℃，低于5℃，高于45℃，施用效果较差。因此在底肥施肥完成时，要及时起垄盖膜待栽；
实施例3
一种预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥，该生物菌肥中的各组分按以下配比制成：
生物菌肥种子菌发酵液(体积百分比计：哈茨木霉10％、巨大芽孢杆菌20％、枯草芽孢杆菌20％、短小芽孢杆菌20％、绿色木霉15％、嗜酸乳杆菌15％)，花生麸；
所述的预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥的制备方法，包括如下步骤：
A、将保存在砂土管、冷冻干燥管中处于休眠状态的哈茨木霉接入于察氏固体培养基中，巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌与短小芽孢杆菌接入于牛肉膏蛋白胨固体培养基中、绿色木霉与乳酸菌接入于MRS固体培养基中，每种菌种单独使用一个培养基避免污染，置入28℃人工气候箱内进行培养48小时，至斜面培养基长满菌体；
B、将斜面菌体用接种环接种两环至制成的LB(肉汤培养基)中，每种菌种单独使用一个LB(肉汤培养基)中，避免菌种污染，在28℃的恒温摇床，以110r/min中培养48小时，制成菌含量在5×108cfu/mL的菌悬液；
C、将制成的菌悬液按照5％的接种量接入到LB(肉汤培养基)，在28℃的恒温摇床，以110r/min中培养48小时，得到种子菌发酵液。
D、将所得的不同种子菌发酵液按照哈茨木霉10％、巨大芽孢杆菌20％、枯草芽孢杆菌20％、短小芽孢杆菌20％、绿色木霉15％、嗜酸乳酸菌15％的比例配比，制成所需生物菌肥种子菌发酵液
E、将花生麸粉碎为颗粒大小小于3mm的颗粒，在121℃灭菌锅内进行干热灭菌3个小时，得到完全灭菌的花生麸，将生物菌肥种子菌发酵液和花生麸，按照质量比1：4的比例无菌条件下进行均匀混合，转移到生化培养箱内进一步进行培养发酵；
F、培养发酵完成后，将发酵物取出，置于38℃的鼓风干燥箱中或置于避光自然条件下风干，到含水率≤12％时，制得所述的预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥。
所述的预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥的应用方法，包括如下步骤：
(1)对植烟田块进行翻耕、平整，碎土，做到垄沟平直，垄体饱满，垄面细碎；
(2)将生物菌肥与有机肥以按质量比1：4比例混合均匀，采取双条式施肥方法，在确定种植烟草的土地两边开垦两条深度为9cm左右的小沟，撒入烟草专用复合肥肥料(购自湖北喜来***业有限公司的复合肥料，15-15-15)作为下层肥料，然后将沟进行平整起垄。接着在垄线的位置上开辟一条深度为9cm左右的小沟，撒入生物菌肥与有机肥的混合物作为上层肥料，这样上层肥料与下层肥料的双双联合，构成了双条式施肥方法；
(3)由于环境的温含水率、土壤对生物菌肥的效果影响较大，生物菌肥最佳温度是25℃～37℃，低于5℃，高于45℃，施用效果较差。因此在底肥施肥完成时，要及时起垄盖膜待栽；
实施例4
烟田翻耕、平整，碎土完毕，在基肥施肥阶段，以实施例1中的方法进行基肥施肥，其余栽培措施按照生产标准(烤烟生产技术规程，DB51/T 1212-2011)进行，在移栽后70天、移栽后80天、移栽后90天调查根腐病发病率与病情指数，同时调查烤后烟叶的经济性状以及中上等烟比例，此为处理1。烟田翻耕、平整，碎土完毕，在基肥施肥阶段，按照生产标准(烤烟生产技术规程，DB51/T1212-2011)进行基肥施肥，其余栽培措施按照生产标准进行，在移栽后70天、移栽后80天、移栽后90天调查根腐病发病率与病情指数，同时调查烤后烟叶的经济性状以及中上等烟比例，此为处理2。试验在2017年在广东梅州市梅县、云南曲靖市罗平县进行，选择历年根腐病发病情况严重的田块作为试验田块，供试品种云烟87。
表1梅州梅县各处理根腐病发病情况
表2云南曲靖罗平各处理根腐病发病情况
由表1、2可知在使用实施例1的生物菌肥后，烤烟移栽后70天梅州梅县、云南罗平两地的发病率与不用生物菌肥相比，发病率分别下降了8.00、10.80个百分点，病情指数分别下降了1.7、2.4。在烤烟移栽后80天后，梅州梅县、云南罗平两地的发病率与不用生物菌肥相比，发病率分别下降了16.40、14.01个百分点，病情指数分别下降了6.74、6.15。在烤烟移栽后90天后，梅州梅县、云南罗平两地的发病率与不用生物菌肥相比，发病率分别下降了25.08、22.45个百分点，病情指数分别下降了8.96、8.81。说明，在使用实施例1生物菌肥后能够显著降低烤烟根腐病的发病率，降低烤烟根腐病的病情指数，可以有效缓解烤烟根腐病的发生，防治发病植株发病情况的进一步恶化。
表3梅州梅县不同处理烤后烟叶经济状况
处理 上等烟比例(％) 上中等烟比例(％) 产量(kg·hm-2) 产值(元·hm-2)
生物菌肥 54.48±1.33 95.96±0.99 2132.8±5.68 54156.7±98.5
不用生物菌肥 52.85±0.49 93.50±0.43 1923.3±4.11 48368.4±114.6
表4云南曲靖罗平不同处理烤后烟叶经济状况
处理 上等烟比例(％) 上中等烟比例(％) 产量(kg·hm-2) 产值(元·hm-2)
生物菌肥 57.26±1.35 96.96±0.89 2032.8±5.86 58406.7±102.5
不用生物菌肥 53.34±0.67 92.50±0.56 1823.3±5.32 52248.4±135.6
由表3、4可知在使用实施例1的生物菌肥后，梅州梅县的中上等烟比例上升了2.46个百分点，产量提高了209.5kg·hm-2，产值提高了5788.3元·hm-2，云南曲靖罗平的中上等烟比例上述了4.46个百分点，产量提高了209.5kg·hm-2，产值提高了6158.3元·hm-2，说明，在使用实施例1生物菌肥后能够显著显著提高烤后烟叶的中上等烟比例，提高烤烟的产量与产值，有效提高烟农的收入。
实施例5
烟田翻耕、平整，碎土完毕，在基肥施肥阶段，以实施例2中的方法进行基肥施肥，其余栽培措施按照生产标准进行，在移栽后70天、移栽后80天、移栽后90天调查根腐病发病率与病情指数，同时调查烤后烟叶的经济性状以及中上等烟比例，此为处理1。烟田翻耕、平整，碎土完毕，在基肥施肥阶段，按照生产标准进行基肥施肥，其余栽培措施按照生产标准进行，在移栽后70天、移栽后80天、移栽后90天调查根腐病发病率与病情指数，同时调查烤后烟叶的经济性状以及中上等烟比例，此为处理2。试验在2017年在广东梅州市梅县、云南曲靖市罗平县进行，选择历年根腐病发病情况严重的田块作为试验田块，供试品种云烟87。
表5梅州梅县各处理根腐病发病情况
表6云南曲靖罗平各处理根腐病发病情况
由表5、6可知在使用实施例2的生物菌肥后，烤烟移栽后70天梅州梅县、云南罗平两地的发病率与不用生物菌肥相比，发病率分别下降了6.00、5.81个百分点，病情指数分别下降了1.23、2.15。在烤烟移栽后80天后，梅州梅县、云南罗平两地的发病率与不用生物菌肥相比，发病率分别下降了15.66、11.09个百分点，病情指数分别下降了6.04、4.89。在烤烟移栽后90天后，梅州梅县、云南罗平两地的发病率与不用生物菌肥相比，发病率分别下降了25.08、18.79个百分点，病情指数分别下降了8.13、8.33。说明，在使用实施例2生物菌肥后能够显著降低烤烟根腐病的发病率，降低烤烟根腐病的病情指数，可以有效缓解烤烟根腐病的发生，防治发病植株发病情况的进一步恶化。
表7梅州梅县不同处理烤后烟叶经济状况
处理 上等烟比例(％) 上中等烟比例(％) 产量(kg·hm-2) 产值(元·hm-2)
生物菌肥 55.29±1.52 95.21±0.87 2090.8±6.24 53723.7±87.5
不用生物菌肥 52.85±0.49 93.50±0.43 1923.3±4.11 48368.4±114.6
表8云南曲靖罗平不同处理烤后烟叶经济状况
处理 上等烟比例(％) 上中等烟比例(％) 产量(kg·hm-2) 产值(元·hm-2)
生物菌肥 58.42±1.46 97.28±1.13 2044.9±6.11 58711.7±93.6
不用生物菌肥 53.34±0.67 92.50±0.56 1823.3±5.32 52248.4±135.6
由表7、8可知在使用实施例2的生物菌肥后，梅州梅县的中上等烟比例上升了1.71个百分点，产量提高了167.5kg·hm-2，产值提高了5355.3元·hm-2，云南曲靖罗平的中上等烟比例上述了4.78个百分点，产量提高了221.6kg·hm-2，产值提高了6463.3元·hm-2，说明，在使用实施例2生物菌肥后能够显著显著提高烤后烟叶的中上等烟比例，提高烤烟的产量与产值，有效提高烟农的收入。
实施例6
烟田翻耕、平整，碎土完毕，在基肥施肥阶段，以实施例3中的方法进行基肥施肥，其余栽培措施按照生产标准进行，在移栽后70天、移栽后80天、移栽后90天调查根腐病发病率与病情指数，同时调查烤后烟叶的经济性状以及中上等烟比例，此为处理1。烟田翻耕、平整，碎土完毕，在基肥施肥阶段，按照生产标准进行基肥施肥，其余栽培措施按照生产标准进行，在移栽后70天、移栽后80天、移栽后90天调查根腐病发病率与病情指数，同时调查烤后烟叶的经济性状以及中上等烟比例，此为处理2。试验在2017年在广东梅州市梅县、云南曲靖市罗平县进行，供试品种云烟87。
表9梅州梅县各处理根腐病发病情况
表10云南曲靖罗平各处理根腐病发病情况
由表9、10可知在使用实施例3的生物菌肥后，烤烟移栽后70天梅州梅县、云南罗平两地的发病率与不用生物菌肥相比，发病率分别下降了10.13、10.86个百分点，病情指数分别下降了1.53、2.95。在烤烟移栽后80天后，梅州梅县、云南罗平两地的发病率与不用生物菌肥相比，发病率分别下降了19.46、17.09个百分点，病情指数分别下降了7.54、6.69。在烤烟移栽后90天后，梅州梅县、云南罗平两地的发病率与不用生物菌肥相比，发病率分别下降了28.95、24.79个百分点，病情指数分别下降了9.93、9.53。说明，在使用实施例3生物菌肥后能够显著降低烤烟根腐病的发病率，降低烤烟根腐病的病情指数，可以有效缓解烤烟根腐病的发生，防治发病植株发病情况的进一步恶化。
表11梅州梅县不同处理烤后烟叶经济状况
处理 上等烟比例(％) 上中等烟比例(％) 产量(kg·hm-2) 产值(元·hm-2)
生物菌肥 57.28±1.38 96.79±0.93 2112.8±5.46 54451.1±101.3
不用生物菌肥 52.85±0.49 93.50±0.43 1923.3±4.11 48368.4±114.6
表12云南曲靖罗平不同处理烤后烟叶经济状况
处理 上等烟比例(％) 上中等烟比例(％) 产量(kg·hm-2) 产值(元·hm-2)
生物菌肥 60.42±1.48 97.88±1.46 2089.7±6.34 60612.2±956
不用生物菌肥 53.34±0.67 92.50±0.56 1823.3±5.32 52248.4±135.6
由表11、12可知在实施例3的生物菌肥后，梅州梅县的中上等烟比例上升了3.29个百分点，产量提高了189.5kg·hm-2，产值提高了6082.7元·hm-2，云南曲靖罗平的中上等烟比例上述了5.38个百分点，产量提高了266.4kg·hm-2，产值提高了8363.8·hm-2，说明，在使用实施例3生物菌肥后能够显著显著提高烤后烟叶的中上等烟比例，提高烤烟的产量与产值，有效提高烟农的收入。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥，其特征在于：主要由以下原料制成：
生物菌肥种子菌发酵液、花生麸；其中，生物菌肥种子菌发酵液与花生麸的质量比为1：3～8；
所述的生物菌肥种子菌发酵液包括如下体积百分比：哈茨木霉5～20％、巨大芽孢杆菌5～20％、枯草芽孢杆菌5～20％、短小芽孢杆菌5～20％、绿色木霉5～20％、嗜酸乳杆菌5～20％。
2.根据权利要求1所述的预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥，其特征在于：
所述的生物菌肥种子菌发酵液与花生麸的质量比为1：4。
3.根据权利要求1或2所述的预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥，其特征在于：
所述的生物菌肥种子菌发酵液包括如下体积百分比：哈茨木霉10～20％、巨大芽孢杆菌15～20％、枯草芽孢杆菌20％、短小芽孢杆菌15～20％、绿色木霉15％、嗜酸乳杆菌10～15％。
4.根据权利要求1或2所述的预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥，其特征在于：
所述的生物菌肥种子菌发酵液包括如下体积百分比：哈茨木霉20％、巨大芽孢杆菌15％、枯草芽孢杆菌20％、短小芽孢杆菌15％、绿色木霉15％、嗜酸乳杆菌15％。
5.根据权利要求1或2所述的预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥，其特征在于：
所述的生物菌肥种子菌发酵液包括如下体积百分比：哈茨木霉15％、巨大芽孢杆菌20％、枯草芽孢杆菌20％、短小芽孢杆菌20％、绿色木霉15％、嗜酸乳杆菌10％。
6.根据权利要求1或2所述的预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥，其特征在于：
所述的生物菌肥种子菌发酵液包括如下体积百分比：哈茨木霉10％、巨大芽孢杆菌20％、枯草芽孢杆菌20％、短小芽孢杆菌20％、绿色木霉15％、嗜酸乳杆菌15％。
7.权利要求1～6任一项所述的预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
A、将所得的哈茨木霉、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、绿色木霉、嗜酸乳杆菌的种子菌发酵液按照一定的比例配比，制成所需生物菌肥种子菌发酵液；
B、将花生麸粉碎为颗粒大小小于3mm的颗粒，干热灭菌，得到完全灭菌的花生麸，将生物菌肥种子菌发酵液和花生麸，按照一定质量比的比例无菌条件下进行均匀混合，转移到生化培养箱内进一步进行培养发酵；
C、培养发酵完成后，将发酵物取出，置于38℃的鼓风干燥条件中或置于避光自然条件下风干，到含水率≤12％时，制得所述的预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥。
8.根据权利要求7所述的预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥的制备方法，其特征在于：
步骤(A)中所述的种子菌发酵液有效菌含量在5×108cfu/mL以上；
步骤(B)中所述的干热灭菌的条件为在121℃灭菌锅内进行干热灭菌3个小时；
步骤(C)中所述的生物菌肥中有效菌含量在2×108cfu/g以上。
9.权利要求1～6任一项所述的预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥在预防烤烟根腐病与改良土壤中的应用。
10.权利要求1～6任一项所述的预防烤烟根腐病与改良土壤的生物菌肥的应用方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)对植烟田块进行翻耕、平整，碎土，做到垄沟平直，垄体饱满，垄面细碎；
(2)将生物菌肥与有机肥以按质量比1：3～7比例混合均匀，采取双条式施肥方法，在确定种植烟草的土地两边开垦两条深度为8～12cm的小沟，撒入烟草专用复合肥肥料作为下层肥料，然后将沟进行平整起垄；接着在垄线的位置上开辟一条深度为8～12cm的小沟，撒入生物菌肥与有机肥的混合物作为上层肥料，这样上层肥料与下层肥料的双双联合，构成了双条式施肥方法；
(3)由于环境的温湿度、土壤对生物菌肥的效果影响较大，生物菌肥最佳温度是25℃～37℃，低于5℃，高于45℃，施用效果较差；因此在底肥施肥完成时，要及时起垄盖膜待栽。
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